專利名稱：：一種治療肝癌、白血病的藥物制劑與其生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療肝癌、白血病等惡性腫瘤的藥物新制劑與其生產(chǎn)工藝。技術(shù)背景肝癌、白血病均是常見的惡性腫瘤，在我國發(fā)病率有逐年上升的趨勢，死亡率亦高，據(jù)統(tǒng)計，每年死于肝癌人數(shù)在IO萬以上。白血病發(fā)病率約為2.76/10萬，以兒童和青年患者居多，嚴重影響人們的健康和生存質(zhì)量。目前治療肝癌的方法很多，但無論國內(nèi)國外，均還沒有找到最好的治愈方法。除早期診斷發(fā)現(xiàn)小肝癌(小于5cm)行手術(shù)切除輔以藥物療法效果較好以外，中晚期肝癌采用化療、放療及手術(shù)治療均不理想。西藥阿霉素、順鉑等對肝癌細胞有很強的殺傷作用，但臨床使用毒副作用較多，利用現(xiàn)代科學(xué)從天然動植物中提取分離的斑蝥素、喜樹堿、紫杉醇等，亦有較強的抗惡性腫瘤作用，但同樣具有西藥一樣的骨髓抑制，胃腸道刺激等毒副反應(yīng)。通過文獻、光盤檢索以及網(wǎng)頁査詢，目前臨床治療肝癌較好的藥物，是90年代從中藥中開發(fā)研制上市的莪術(shù)油、薏苡仁油(康菜特)注射劑。這兩種注射劑抗癌效果雖然未能超過前述所有藥物，但毒副作用少，在改善患者臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，延長生存時間等方面，卻明顯優(yōu)于前者。白血病的治療，目前除骨髓移植可以延長患者生存時間以外，化療、放療均不理想，多數(shù)患者靠中藥保守治療以提高其生存質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于為臨床提供一種治療肝癌、白血病等惡性腫瘤療效確切，毒副作用小，質(zhì)量穩(wěn)定可控，對腫瘤細胞具有靶向性，既能抑制癌細胞增殖生長，又能起誘導(dǎo)分化作用的藥物新制劑。本發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明精選青蒿油、甘草酸鹽、維A酸三種主藥或單味青蒿油或三種中的任意兩種組合，與適當(dāng)?shù)乃幱幂o料配方，制備成注射劑與口服制劑。無論單味、二味及三味主藥組合配方，其用量均分別為青蒿油l15g,甘草酸鹽l15g，維A酸0.52.0g，制成1000ml或1000g。藥用輔料包括卵磷脂、豆磷脂、膽固醇、大豆油、維生素E、聚山梨酯80、葡萄糖、甘油、山梨醇、PVP等。因輔料品種及用量的不同，本發(fā)明制劑可以是乳劑、脂質(zhì)體(多相脂質(zhì)體)液體或固體制劑。制劑成品的命名復(fù)爾康+劑型名稱，如復(fù)爾康注射液、復(fù)爾康口服液、復(fù)爾康凍干制劑等。本發(fā)明主藥青蒿油及甘草酸鹽的提取制備方法1、青蒿油的提取取青蒿切碎，裝入蒸餾鍋中，加68倍量水，浸泡2h，加熱蒸餾23h，收集蒸餾液，重蒸餾，分離揮發(fā)油，即得。亦可采用超臨界提取方法制備青蒿油。2、甘草酸鹽的提取制備甘草碎成粗粉，加稀氨水濕潤，用IO倍量水滲漉，滲漉液加稀H2S04酸化，濾取沉淀物，加4倍量乙醇，回流3h，濾過，濾液加氨水或20%KOH、10%NaOH乙醇液至弱堿性，放置析晶，濾取結(jié)晶，加冰醋酸加熱溶解，放冷析晶，濾取晶體，干燥得甘草酸鹽。具體實施例方式實施例1:a.取維生素Elg，大豆油(注射用)5g，膽固醇4g，維A酸0.5g，大豆磷脂16g，聚山梨酯8010g，加熱至熔融，稍冷，加青蒿油5g，攪勻。b.取甘草酸銨2g，放入400ml沸水中攪溶，調(diào)pH57，于組織搗碎機內(nèi)，以3000~6000轉(zhuǎn)/分攪拌下，緩緩加入a熔融液，加完后，以8000轉(zhuǎn)/分攪拌3次，每次3min，制備成稠乳液。c.取注射用葡萄糖50g，溶于500ml水中，加熱至406(TC，在攪拌下加入b乳液，添水至1000ml，攪勻，于高壓均質(zhì)機中，以300400kg/cr^壓力反復(fù)勻化3次。放出，減壓濾過脫氣，再用4號濾球或微孔濾膜過濾，在氮氣流下灌裝密封或冷凍干燥后密封，IO(TC滅菌30min即得。實施例2:a.取維生素E0.5g,注射用大豆油10g，膽固醇5g，維A酸lg，大豆磷脂20g，聚山梨酯10g，加熱攪拌熔融后，稍冷，加青蒿油10g，攪勻。b.取注射用甘油25g，加入400ml水中，攪勻，預(yù)熱至約60°C，于組織搗碎機內(nèi)，以3000-6000轉(zhuǎn)/分攪拌下，緩緩加入a液，加完后以8000轉(zhuǎn)/分攪拌3次，每次3min，制備成乳液。取出，添水至1000ml，以下照實施例l高壓勻化，過濾，灌裝滅菌即得。實施例3:a.取大豆磷脂10g，聚山梨酯10g，溶于400ml沸水中，稍冷，于組織搗碎機內(nèi)，以3000~6000轉(zhuǎn)/分攪拌下，先后緩緩加入維生素Elg，青蒿油15g，加完后以8000轉(zhuǎn)/分攪拌10min。b.取葡萄糖或山梨醇50g或甘油25g，溶于500ml水中，預(yù)熱至6(TC，加入a液，添水至1000ml，攪勻，以下照實施例l高壓勻化，過濾，灌裝滅菌即得。本發(fā)明復(fù)爾康注射液藥效學(xué)試驗如下實驗例一復(fù)爾康對荷肝癌(H22)小鼠腫瘤的試驗報告1試驗?zāi)康挠^察復(fù)爾康對荷H22(S型)小鼠有無體內(nèi)抗腫瘤作用，為開發(fā)復(fù)爾康提供實驗依據(jù)。2試驗材料2.1受試物復(fù)爾康注射液，由瀘州醫(yī)學(xué)院馮文宇教授提供，批號050629。2.2實驗動物昆明小鼠、SPF級動物，由重慶市中藥研究院實驗動物研究室提供。合格證號SCXK(渝)20020004。3實驗環(huán)境在一級標準動物實驗室進行，設(shè)施合格證號SYXK(渝)200200024試驗方法無菌條件下，取接種1012天之實體瘤，按l:5勻漿，調(diào)整瘤細胞數(shù)為107個/ml，接種于小舉右腋皮下，0.2ml/只，每只小鼠接種瘤細胞數(shù)量為2X106，次日隨機分7組，即復(fù)爾康25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg三個劑量組，輔料25ml/kg組，康萊特25ml/kg組，環(huán)磷酰胺25mg/kg組及對照組。用藥組及輔料組每組10只，每天尾靜脈給藥一次，連續(xù)給藥10天，對照組給予相應(yīng)體積生理鹽水。末次給藥后停藥一天。脫頸處死動物、稱體重、剖瘤稱重，按公式計算腫瘤抑制率。加生n^(對照組平均瘤重一藥物組平均瘤重)inn抑制率=-對照組平均瘤重-"00療效判斷標準腫瘤抑制率大于30%，連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有明顯差異者為有抗腫瘤作用。5試驗結(jié)果見表l表l復(fù)爾康對H22(S型)小鼠腫瘤生長的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表l可見復(fù)爾康注射液各劑量組靜脈注射(iv)對荷H22小鼠實體瘤有明顯的抑制作用。連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，結(jié)果基本相似。6結(jié)論試驗結(jié)果表明，在本試驗條件下，復(fù)爾康注射液對荷H22小鼠實體瘤有明顯的抑制作用。實驗例二復(fù)爾康對荷肝癌(H22)腹水瘤小鼠的試驗報告1試驗?zāi)康挠^察復(fù)爾康對荷H22(A型)小鼠有無體內(nèi)抗腫瘤作用，為開發(fā)復(fù)爾康提供實驗依據(jù)。2實驗材料2.1受試物復(fù)爾康注射液，由瀘州醫(yī)學(xué)院馮文宇教授提供，批號050629。2.2實驗動物昆明小鼠、SPF級動物，由重慶市中藥研究院實驗動物研究室提供。合格證號SCXK(渝)20020004。2.3陽性對照藥環(huán)磷酰胺注射劑，批號05090721。3實驗環(huán)境在一級標準動物實驗室進行，設(shè)施合格證號SYXK(渝)20020002。4試驗方法無菌條件下，取接種7-8天之腹水瘤按1:IO稀釋，調(diào)整瘤細胞數(shù)為1(f個/ml，接種于小鼠腹腔，0.2ml/只，每只小鼠接種腫瘤細胞數(shù)量為2X106，次日隨機分為六個組，即復(fù)爾康25ml、12.5ml、6.25ml/kg三個劑量組，輔料25ml/kg組，環(huán)磷酰胺50mg/kg組及對照組；對照組20只動物，其余各組10只。用藥組及輔料組每天腹腔給藥一次，連續(xù)給藥10天，對照組給予相同體積生理鹽水。停藥后觀察記錄動物死亡情況，超過4周者按4周計算，按公式計算生命延長率f^WK，—(藥物組平均生存天數(shù)一對照組平均生存天數(shù))謹對照組平均生存天數(shù)x1UU療效判斷標準生命延長率大于50%，連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有明顯差異者為有抗腫瘤作用。5試驗結(jié)果見表l表1對荷H22(A型)小鼠生命延長率的影響組另lj體重(g)動物數(shù)平均存活天數(shù)士SD生命延長率(％)P值對照組20.902012.35土2.35復(fù)爾康25ml/kg20.701022.50±5.8282.19PO.01復(fù)爾康12.5ml/kg20.701020.40±5.6465.18P<0.01復(fù)爾康6.25ml/kg20.601018.60±3.7550.61PO.01輔料25ml/kg20.701012.10±0.99環(huán)磷酰胺50mg/kg20.801022.60±4.3583.00PO.01由表1可見，復(fù)爾康注射液各劑量組腹腔注射(ip)對荷H22(A型)腫瘤小鼠生命有明顯延長作用。連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，結(jié)果基本相似。6結(jié)論試驗結(jié)果表明，復(fù)爾康注射液各劑量組腹腔注射對荷H22(A型)腫瘤小鼠生命有明顯延長作用。實驗例三復(fù)爾康注射液對肺癌A549和白血病CEM-C7細胞株的體外抑制作用1材料1.1藥物復(fù)爾康注射液，由瀘州醫(yī)學(xué)院藥物研究所提供，批號060313。阿霉素，批號051019，生產(chǎn)廠浙江海正藥業(yè)股份有限公司。1.2細胞株A549(肺癌)和CEM-C7(T細胞白血病)細胞株(購于上海細胞所)，由本實驗室保存。1.3試劑RPMI-1640培養(yǎng)基，美國Gibco公司產(chǎn)品；青霉素、鏈霉素，華北制藥有限公司產(chǎn)品；小牛血清，蘭州中美合資民海生物公司產(chǎn)品；胰蛋白酶，美國Gibco公司產(chǎn)品；臺盼藍，美國Sigma公司產(chǎn)品；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。1.4儀器及設(shè)備C02培養(yǎng)箱，日本SANYO公司產(chǎn)品；倒置相差顯微鏡，德國Olympus公司產(chǎn)品；超凈工作臺,蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；全自動酶標儀，BIO—RAD產(chǎn)品，Modd550(microplatereader);2方法試驗分為空白對照組(不含細胞的完全培養(yǎng)基)，陰性對照組(未經(jīng)藥物處理的A549及CEM-C7細胞)，實驗組(共12個濃度梯度)，每組3個復(fù)孔。陽性對照組阿霉素，與實驗組對應(yīng)分為2個濃度梯度。取對數(shù)生長期細胞，RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮并調(diào)整濃度為lxl()S個/ml，每孔lOOpl。即每孔1"04個細胞接種在96孔板中，5%C02、飽和濕度37'C培養(yǎng)。待24小時后細胞完全貼壁，實驗組加入RPMI-1640完全培養(yǎng)基稀釋的復(fù)爾康注射液至終濃度分別為0.00037、0.000735、0.00147、0.00294、0.0059、0.0117、0.0235、0.047、0.094、0.1875、0.375、0.75(jg/ml，陽性對照組加入RPMI-1640完全培養(yǎng)基稀釋的阿霉素，濃度與實驗組對應(yīng)。陰性對照組再加入完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)48小時，于實驗終止前4小時加入MTT貯存液20川/L，繼續(xù)于5%C02、飽和濕度37'C孵箱中孵育至實驗終止，吸棄上清，每孔加入二甲基亞砜(DMSO)10(^1。于10分鐘內(nèi)在全自動酶標儀上室溫避光振蕩混勻并于490nm波長測定各孔的OD值，按公式:GI(生長抑制率)=1-(藥物組OD值/對照組OD值)xlOO。/。計算各組的生長抑制率。用Bliss法計算IC50值。3結(jié)果共做了三次MTT，結(jié)果見表l-6表1第一次實驗復(fù)爾康對腫瘤細胞A549和CEM-C7的作用(5土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2第二次實驗復(fù)爾康對腫瘤細胞A549和CEM-C7的作用(5Z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3第三次實驗復(fù)爾康對腫瘤細胞A549和CEM-C7的作用(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4第一次實驗阿霉素對腫瘤細胞A549和CEM-C7的作用(5土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表6第三次實驗阿霉素對腫瘤細胞A549和CEM-C7的作用(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>4結(jié)論在本實驗條件下，復(fù)爾康注射液對腫瘤細胞A549的抑制作用實驗的三次IC50分別為0.1446±0.0187〃g/ml，0.1431±0.466/<g/ml，0.1644±0.0221〃g/ml。而對腫瘤細胞CEM-C7的IC50則為0.0391士0.0057pg/ml，0.0239±0.0201//g/ml，0.0499士0.0072z/g/ml。表明復(fù)爾康注射液對腫瘤細胞A549(肺癌)及CEM-C7細胞(白血病)均有顯著性的抑制作用。實驗例四復(fù)爾康對小鼠白血病P388的治療作用1試驗?zāi)康挠^察復(fù)爾康對荷白血病P388小鼠有無體內(nèi)抗腫瘤作用，為開發(fā)復(fù)爾康提供實驗依據(jù)。2實驗材料2.1受試物復(fù)爾康注射液，由瀘州醫(yī)學(xué)院馮文宇教授提供，批號061017。復(fù)爾康注射液輔料溶液，由瀘州醫(yī)學(xué)院馮文宇教授提供，批號061025。2.2實驗動物昆明種小鼠、SPF級動物，由重慶市中藥研究院實驗動物研究室提供。合格證號SCXK(渝)20020004。2.3陽性對照藥順鉑注射液,規(guī)格6ml:30mg，批號060701。生產(chǎn)廠云南個舊生物藥業(yè)有限公司2.4瘤株小鼠白血病P388，引種于重慶醫(yī)科大學(xué)(由華西醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所建株)。3實驗環(huán)境在一級標準動物實驗室進行，設(shè)施合格證號SYXK(渝)200200024試驗方法無菌條件下，取接種于小鼠7天的P388白血病腹水，按l:15稀釋，調(diào)整白血病細胞數(shù)為107個/1111,接種于小鼠腹腔，0.2ml/只、每只小鼠接種白血病細胞數(shù)量為2X106，次日隨機分6組復(fù)爾康40ml、20ml、10ml/kg三個劑量組，輔料40ml/kg組、順鉑組及對照組。復(fù)爾康各劑量組、輔料組及順鉑組每組IO只小鼠，對照組20只。復(fù)爾康各劑量組、輔料組每天腹腔給藥一次，連續(xù)給藥10天，順鉑組隔日給藥一次(共5次)，對照組給予相同體積生理鹽水。停藥后觀察記錄動物死亡情況，超過30天按30天計算，按公式計算生命延長率小az工j^糸—(藥物組平均生存天數(shù)一對照組平均生存天數(shù)),生命延長率--對照組平均生存天數(shù)-Xl00療效判斷標準生命延長率大于50%，連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有明顯差異者為有抗腫瘤作用。5試驗結(jié)果見表l表1、復(fù)爾康對荷白血病P388小鼠生命延長率的影響組別體重(g)動物數(shù)平均存活天數(shù)土SD生命延長率(％)P值對照組18.552012.75±0.79復(fù)爾康40ml/kg18.501020.60±2.0161.57P<0.01復(fù)爾康20ml/kg18.401019.20±3.7050.59P<0.01復(fù)爾康10ml/kg18.501014.20±0.9211.37P<0.01輔料40ml/kg18.601012.50±0.97順鉑2mg/kg18,501021.10±2.0865.49P<0.01注P值為各組與對照組相比表1結(jié)果表明，復(fù)爾康注射液40ml/kg、20ml/kg組對荷白血病P388小鼠具有明顯的生命延長作用。連續(xù)重復(fù)2次(共3次)，結(jié)果基本相似。6結(jié)論試驗結(jié)果表明，腹腔注射復(fù)爾康注射液40ml/kg、20ml/kg組對荷白血病P388小鼠具有明顯的生命延長作用。權(quán)利要求1、一種治療肝癌、白血病的藥物制劑與其生產(chǎn)工藝，其特征在于它是由青蒿油、甘草酸鹽、維A酸三種主藥或單味青蒿油或三種中的任意兩種組合，與適當(dāng)?shù)乃幱幂o料配方，制成的注射劑與口服制劑。無論單味、二味及三味主藥組合配方，其用量均分別為青蒿油l~15g，甘草酸鹽l15g，維A酸0.52.0g，制成1000ml或1000g。2、權(quán)利要求1所述的甘草酸鹽，可以是甘草酸的銨、鉀、鈉鹽；權(quán)利要求1所述的藥用輔料包括卵磷脂、豆磷脂、膽固醇、大豆油、維生素E、聚山梨酯80、葡萄糖、甘油、山梨醇、PVP等。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝癌、白血病的藥物制劑，因輔料品種及用量的不同，制劑成品可以是乳劑、脂質(zhì)體液體或固體制劑。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝癌、白血病藥物制劑的生產(chǎn)工藝-a.取維生素Elg，注射用大豆油5g，膽固醇4g，維A酸0.5g，大豆磷脂或卵磷脂16g，聚山梨酯8010g,混合加熱攪拌熔融，稍冷，加入青蒿油5g，攪勻。b.取甘草酸銨5g，放入400ml沸水中攪溶，調(diào)pH57，于組織搗碎機內(nèi)，以3000-6000轉(zhuǎn)/min攪拌下，緩緩加入a熔融液，加完后以8000轉(zhuǎn)/min攪拌3次，每次3min，制備成稠乳液。c.取注射用葡萄糖50g或甘油25g,溶于500ml水中，加熱至30~60°C，在攪拌下加入b稠乳液，添水至1000ml，攪勻，于高壓均質(zhì)機內(nèi)，以30(K400kg/cmS壓力勻化3次，放出，減壓濾過脫氣，再用4號濾球或微孔濾膜過濾，在氮氣流下灌注密封或冷凍干燥后密封，100。C滅菌30min即得。以上生產(chǎn)工藝采用的是熔融法加二歩勻乳法，本發(fā)明制備工藝尚可采用薄膜分散法、超聲波分散法等。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療肝癌、白血病的藥物制劑與其生產(chǎn)工藝。其特點是這種藥物制劑是用青蒿油、甘草酸鹽、維A酸三種主藥或單味青蒿油或其中的任意兩種組合，與適當(dāng)?shù)乃幱幂o料配方，制備成可供臨床使用的藥物劑型。本發(fā)明藥物制劑，經(jīng)藥效學(xué)試驗證明對腫瘤細胞具有靶向性，能明顯抑制肝癌、肺癌及白血病細胞的增殖生長，顯著延長荷肝癌、白血病小鼠生存期的作用。本發(fā)明藥物制劑，尚具有質(zhì)量穩(wěn)定可控，毒副作用小，療效可靠的特點。制劑成品名為復(fù)爾康+劑型名，如復(fù)爾康注射液，復(fù)爾康口服液等。文檔編號A61K31/704GK101120958SQ200710048608公開日2008年2月13日申請日期2007年3月13日優(yōu)先權(quán)日2007年3月13日發(fā)明者馮文宇申請人:瀘州醫(yī)學(xué)院