專利名稱：自組裝短肽在治療燒傷創(chuàng)面的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及自組裝短肽RADA16-1的用途，特別是在制備治療燒傷創(chuàng)面的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在工程建設(shè)、工業(yè)生產(chǎn)和日常生活中，火災(zāi)時(shí)有發(fā)生，因此不可避免地存在火對人體的傷害，即使未產(chǎn)生火災(zāi)，在某些情況下(例如電焊工、爐前工操作不當(dāng)，家用電器使用不當(dāng)?shù)?也會導(dǎo)致人體的燒傷。嚴(yán)重?zé)齻∪说闹委煏r(shí)間長、并發(fā)癥多、殘廢率高，特別是深度燒傷往往導(dǎo)致痊愈后遺留有不同程度瘢痕，甚至毀容影響到美觀，嚴(yán)重的情況可以造成組織活動受限，功能喪失，即使后期手術(shù)整形糾正功能障礙和/或美容，不幸的是不少病人最終仍不免遺留一定程度的殘廢和/或畸形，尤其是顏面深度燒傷，由于毀容使病人精神和肉體承受極大痛苦。臨床一直在尋找一種理想敷料能盡快覆蓋創(chuàng)面，避免感染，從而促進(jìn)創(chuàng)面表皮細(xì)胞生長，恢復(fù)皮膚功能，減少創(chuàng)面瘢痕，進(jìn)一步避免多臟器功能衰竭如呼吸窘迫綜合征，腸道功能障礙，彌漫性血管內(nèi)凝血。
現(xiàn)有創(chuàng)面敷料有傳統(tǒng)敷料、天然生物敷料、合成敷料。傳統(tǒng)敷料包括紗布、棉墊，缺點(diǎn)是粘連傷口，不隔菌，保濕能力差，止血性不好。天然生物敷料包括自體皮、同種異體皮、羊膜、輻照豬皮、無細(xì)胞真皮和膠原類，具有來源有限，免疫源性強(qiáng)，攜帶病原體等弊端。合成敷料以高分子材料為原料，存在生物相容性差，難以降解，毒性強(qiáng)等問題。
自組裝短肽(Self-assembly of peptides，簡稱SAP)RADA16-1是一種含16個(gè)氨基酸殘基的小分子多肽，其氨基酸序列為AcN-RADARADARADARADA-CONH2(見國際公開號為WO 2005/014615 A2、國際
公開日為2005年2月17日的專利申請)，在公開號WO 2005/014615 A2的專利申請中，僅簡要描述了該短肽對切割創(chuàng)傷創(chuàng)面具有修復(fù)功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于證明自組裝短肽RADA16-1在制藥中的新用途，為治療燒傷創(chuàng)面提供一種療效好的藥物。
以往的研究表明(Leila Cuttle，Margit Kempf，Gael E，Phillips，Julie Mill，Mark T.Hayes，JohnF.Fraser，Xue-Qing Wang，Roy M.Kimble..A porcine deep dermal partial thickness burn model withhypertrophic scarring.Burn 2006；32806-820..)，燒傷創(chuàng)面修復(fù)不同于切割傷創(chuàng)面修復(fù)。因?yàn)樯領(lǐng)I度及III度燒傷及燒傷后伴隨的炎癥反應(yīng)、創(chuàng)面感染水腫等并發(fā)癥可對有機(jī)體的表皮、真皮造成毀滅性的損害，在嚴(yán)重?zé)齻髣?chuàng)面會有一定程度的擴(kuò)大，燒傷深度會有一定程度進(jìn)展，這種惡化會延緩創(chuàng)面修復(fù)的上皮化進(jìn)程，而切割傷則不會發(fā)生這種現(xiàn)象。燒傷后通過抑制嚴(yán)重的炎癥損傷來抑制燒傷深度的進(jìn)展是十分重要的。
本發(fā)明采用調(diào)溫式電燙儀及火焰燒傷制造大鼠皮膚燒傷模型，以自組裝短肽RADA16-1形成的水凝膠及常用的燒傷治療藥物殼聚糖、膠原、聚乳酸為敷料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自組裝短肽RADA16-1可抑制燒傷創(chuàng)面的擴(kuò)大和水腫、促進(jìn)燒傷創(chuàng)面膠原的有序重排、促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合及皮膚和皮膚組織附屬物的再生和修復(fù)，能夠協(xié)調(diào)創(chuàng)面表皮細(xì)胞生長因子(EGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)的分泌，與殼聚糖、膠原、聚乳酸相比，對燒傷的療效更好。
所述水凝膠形態(tài)的自組裝短肽RADA16-1是由自組裝短肽RADA16-1和純凈水制備而成，自組裝短肽RADA16-1的質(zhì)量體積百分比為0.05％～10％，純凈水包括雙蒸水、超純水(電阻18.2KΩ/cm2)。
發(fā)明具有以下有益效果1、本發(fā)明所制造的燒傷動物模型的優(yōu)勢在于，燒傷創(chuàng)面條件均衡，有利于實(shí)驗(yàn)的量化分析及比較，便于在不同時(shí)間窗觀察受損組織的恢復(fù)及再生，通過詳盡的病理觀察，可清晰顯示受損創(chuàng)面炎癥滲出(受損創(chuàng)面未切除，這是此模型區(qū)別于全層皮膚切除模型的有益效果之一)，炎癥細(xì)胞聚集，創(chuàng)面膠原修復(fù)，再生，重排，以及創(chuàng)周健康上皮細(xì)胞爬行生長的動態(tài)過程，可評價(jià)各種材料對燒傷創(chuàng)面的修復(fù)功能。
2、本發(fā)明對自組裝短肽RADA16-1發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。
3、本發(fā)明對燒傷的治療提供了一種有效的新藥品，有利于解除燒傷病人的痛苦，使其早日康復(fù)。


圖1是自組裝短肽RADA16-1組、殼聚糖組、膠原組、聚乳酸組、空白對照組的創(chuàng)面收縮率曲線。
圖2是蘇木素染色病理照片，其中，A圖是正常對照、自組裝短肽RADA16-1組和空白對照組在燒傷創(chuàng)面處理后三小時(shí)的蘇木素染色病理照片，B圖中的上部是自組裝短肽RADA16-1組第70天的蘇木素染色病理照片，B圖中的下部是殼聚糖組第70天的蘇木素染色病理照片。
圖3是用偏振光顯微鏡觀察的深I(lǐng)I度燒傷修復(fù)各時(shí)期I型、III型膠原顯示圖，圖中，(a)為自組裝短肽RADA16-1組，(b)為空白對照組，空白對照組和自組裝短肽RADA16-1組比較，苦味酸天青石藍(lán)特殊染色I(xiàn)型膠原為紅色或桔黃色，強(qiáng)折光性，III型膠原綠色，弱折光性。
圖4是燒傷后再生皮膚創(chuàng)面的膠原排列圖，圖中，(a)為自組裝短肽RADA16-1組，(b)為殼聚糖組，(c)為正常對照組，(d)為空白對照組，自組裝短肽RADA16-1組創(chuàng)面膠原排列接近正常皮膚，空白對照組和殼聚糖組顯示膠原排列無序，有瘢痕化傾向，呈現(xiàn)“純一化”玻璃樣變，缺乏汗腺等皮膚附屬物。
圖5是堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)和表皮細(xì)胞生長因子(EGF)修復(fù)燒傷創(chuàng)面的表達(dá)圖，圖中，(a)和(c)為自組裝短肽RADA16-1組FGF表達(dá)，(a)為第7天，(c)為第10天，(b)為陰性對照，(d)和(f)分別為空白對照組第7天和第10天FGF表達(dá)，(e)為正常皮膚FGF表達(dá)，(ghi)是EGF表達(dá)，(g)為自組裝短肽RADA16-1組第7天，(i)為自組裝短肽RADA16-1組第14天，(h)為空白對照組第7天。
圖6是原子力顯微鏡形貌圖，(a)自組裝短肽RADA16-I 0.5％(5mg/ml)，(b)I型膠原0.5％(5mg/ml)，(c)殼聚糖生物流體敷料(5mg/ml)圖7是火焰燒傷形態(tài)學(xué)照片，左邊是空白對照組，右邊是自組裝短肽RADA16-1組，四張照片均顯示燒傷后第四天的創(chuàng)面。
圖8是燒傷創(chuàng)面恢復(fù)的形態(tài)學(xué)照片，圖中各照片下方為自組裝短肽RADA16-1組，上方為殼聚糖組。
圖9是燒傷創(chuàng)面上皮化進(jìn)程動態(tài)圖，圖中，(a)為傷口左端，(b)為傷口右端。
圖10是第7天自組裝短肽RADA16-I組和空白對照組創(chuàng)面組織HE染色照片，圖中，大鼠全層皮膚組織肌肉層下水腫帶厚度見黃色箭頭所示。
具體實(shí)施例方式
1、材料與方法1.1材料1.1.1動物實(shí)驗(yàn)動物(SD大鼠)來自華西實(shí)驗(yàn)動物中心，體重在200克-290克，實(shí)驗(yàn)前讓動物在清潔恒溫(20℃±2℃)恒濕(濕度50％)飼養(yǎng)室適應(yīng)一周。共92只動物，其中，80只用于燙傷儀制備燒傷模型，12只采用火焰燒傷制備燒傷模型。
用燙傷儀制備燒傷模型時(shí)，按照隨機(jī)化原則，每種材料每個(gè)時(shí)間窗3只動物，自組裝短肽RADA16-I、殼聚糖、膠原、空白對照組、聚乳酸共5種材料共15只。設(shè)計(jì)3個(gè)時(shí)間窗，分別為第7，10，14天，每個(gè)時(shí)間窗以10％水合氯醛過量麻醉處死。取創(chuàng)面皮膚及創(chuàng)周正常皮膚做HE，mallory(膠原染色)，天狼猩紅染色，免疫組織化學(xué)染色。另15只動物做創(chuàng)面描記分別記錄第4，7，10，14，18，21天的創(chuàng)面收縮。剩下20只動物做第23，28，60，70，80天的空白對照組和自組裝短肽RADA16-I組的病理組織觀察。
1.1.2實(shí)驗(yàn)材料自組裝短肽RADA16-1RADA16-1干粉購自3DM Inc(Cambridge，MA)，溶于雙蒸水中配制成質(zhì)量體積百分比1％(10mg/ml)的RADA16-1溶液。
膠原使用I型膠原，I型膠原購自serologicalscompany(Lake Placid，NY)。100mg膠原溶于28.65ml乙酸(0.02N)中，pH調(diào)至4.41，使用濃度3.49mg/ml。
殼聚糖使用的是市售商品殼聚糖生物流體敷料(購自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院科技開發(fā)公司)。
聚乳酸使用PLGA 9010(DL-乳酸(90％)-乙交酯(10％)共聚物，[特性粘數(shù)]＝1.66，購自Sigma公司)1.2方法實(shí)驗(yàn)動物模型以調(diào)溫式電燙儀、火焰燒傷制造大鼠皮膚燒傷模型。
1.2.1動物實(shí)驗(yàn)過程(1)對動物的處理過程包括10％水合氯醛腹腔注射麻醉、備皮、消毒、燙傷制備。以恒溫式電燙儀在每只大鼠背部脊柱兩側(cè)對稱部位制造兩個(gè)大小、燒傷深度一致的燒傷創(chuàng)面(92℃，8秒，深I(lǐng)I度燒傷)。燒傷形成后，分別于燒傷處涂敷上述1.1.2所述的自組裝短肽RADA16-1溶液，膠原溶液、殼聚糖生物流體敷料和聚乳酸，每個(gè)創(chuàng)面50μl，空白對照組用生理鹽水涂敷。之后，薄層凡士林油紗覆蓋。術(shù)后復(fù)蘇，抗感染。
(2)火焰燒傷用酒精燈，95％酒精點(diǎn)火，固定大鼠，背部朝下，固定酒精燈和火焰距離，火焰在大鼠背部持續(xù)8秒，每只大鼠背部制造一個(gè)創(chuàng)面，燒傷形成后，分別于燒傷處涂敷上述1.1.2所述的自組裝短肽RADA16-1溶液、生理鹽水，形成短肽RADA16-1組和空白對照組，后續(xù)處理方法同上。
1.2.2創(chuàng)面描記與結(jié)痂、溶痂時(shí)間記錄于調(diào)溫式電燙儀燒傷制備當(dāng)時(shí)描記創(chuàng)面原始大小，于第4、7、10、14、18、21天描記當(dāng)天的創(chuàng)面大小。以透明膠片沿規(guī)則的創(chuàng)面邊緣描記，用掃描儀掃描膠片，圖像處理軟件計(jì)算創(chuàng)面面積，按照公式“100％×(原始創(chuàng)面面積-實(shí)測創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積”計(jì)算創(chuàng)面收縮率。各時(shí)間窗組間創(chuàng)面收縮率采用多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較q檢驗(yàn)。
火焰燒傷后1-7天(急性水腫期)進(jìn)行創(chuàng)面觀察。
每天照像，分別記錄每只動物燒傷創(chuàng)面的開始結(jié)痂時(shí)間和溶痂時(shí)間。
1.2.3組織學(xué)觀察組織學(xué)觀察時(shí)間窗調(diào)溫式電燙儀傷后第7、8、10、14、21、23、28、60、70、80天，動物分別被過量麻醉處死，取創(chuàng)面皮膚制備組織切片。
1.2.3.1創(chuàng)面I型、III型膠原比例檢測(1)分別于各時(shí)間窗取燒傷創(chuàng)面皮膚組織，每組各取6個(gè)創(chuàng)面；(2)梯度脫水，石蠟包埋，切片，梯度二甲苯脫臘，梯度酒精脫二甲苯；(3)切片于蒸餾水洗3遍；(4)浸入苦味酸天青石蘭溶液(濃度0.5％，w/v)；(5)蘇木素染色顯示細(xì)胞核；(6)二甲苯梯度浸泡；(7)樹膠封片；(8)Olympus偏振光顯微鏡觀察，顯微照相，圖像處理軟件處理圖像，膠原含量以色差對比，I型膠原染成黃色或橘紅色，呈強(qiáng)折光性；III型膠原呈綠色呈弱折光性，Image-pro plus圖像處理軟件處理分析綠色弱折光膠原含量，III型膠原含量為x％，I型膠原含量為(100-x)％，SPSS軟件處理。各時(shí)間段組間數(shù)據(jù)處理以獨(dú)立樣本均數(shù)單因素方差分析。
1.2.3.2HE病理染色(1)燒傷部位全層皮膚組織切除后脫水，于4％多聚甲醛固定，石蠟包埋；(2)脫臘，浸入脫臘液二甲苯兩次，每次各10分鐘；(3)100％純酒精去二甲苯5分鐘；(4)95％酒精去二甲苯2分鐘；
(5)90％酒精去二甲苯2分鐘；(6)80％酒精去二甲苯2分鐘；(7)水洗去酒精至無味；(8)蒸餾水洗一次；(9)0.5％蘇木素染色，室溫5-10分鐘；(10)水洗；(11)鹽酸酒精分色；(12)氨水促藍(lán)；(13)1％伊紅室溫染色5分鐘；(14)80％酒精分色；(15)90％酒精脫水；(16)95％酒精脫水；(17)100％酒精脫水5分鐘；(18)二甲苯透明10分鐘；(19)加拿大樹膠封片。
1.2.4免疫組織化學(xué)染色調(diào)溫式電燙儀燒傷后第7、8、10、14、21、23、28、60天，動物分別被過量麻醉處死，取創(chuàng)面皮膚制備組織切片。
(1)皮膚組織梯度脫水，石蠟包埋固定；(2)切片，片厚5um；(3)載玻片防脫片處理，5um厚的石蠟組織切片裱于經(jīng)3-氨基丙基三乙氧硅烷(APES，購自Sigma公司)硅化的切片上，置37℃恒溫箱48小時(shí)；(4)切片常規(guī)脫臘；(5)梯度二甲苯脫臘，梯度酒精脫二甲苯；(6)熱修復(fù)抗原將切片浸入枸櫞酸鹽緩沖液，電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，反復(fù)1-2次，冷卻后PBS洗滌2次；(7)滴加5％BSA封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體，不洗；(8)滴加1∶100稀釋的一抗(小鼠或兔IgG)，4℃過夜，PBS洗2分鐘×3次；(9)滴加生物素化山羊抗小鼠IgG.PBS(pH7.2)洗2分鐘×3次；(10)滴加試劑SABC，20-37℃20分鐘，PBS洗4次；
(11)DAB顯色，使用DAB顯色試劑盒；(12)蘇木素輕度復(fù)染，脫水、透明、封片，顯微鏡觀察，照相，圖像處理軟件分析創(chuàng)面生長因子表達(dá)，以吸光值衡量陽性顆粒在創(chuàng)面組織細(xì)胞中的表達(dá)。
1.2.5水腫定量測量(1)選取燙傷后3小時(shí)及第7天空白對照組和自組裝短肽RADA16-I組皮膚標(biāo)本各6個(gè)，制備24張病理切片，HE染色病理切片制備方法同上述；(2)Olympus光學(xué)顯微鏡采取圖像，照片放大10倍；(3)采用Image-pro plus圖像分析軟件計(jì)算圖像中規(guī)定指標(biāo)長度值，3小時(shí)創(chuàng)面標(biāo)本計(jì)算表皮至肌肉層上厚度(見圖2)，7天標(biāo)本計(jì)算肌肉層下疏松結(jié)締組織厚度(見圖10)；(4)3小時(shí)標(biāo)本分別采集空白對照組和自組裝短肽RADA16-I組樣本45和57個(gè)，7天標(biāo)本分別采集空白對照組和自組裝短肽RADA16-I組樣本167和154個(gè)；(5)組間對照采用兩大樣本均數(shù)比較的u檢驗(yàn)。
1.2.6原子力顯微鏡觀察(1)在新鮮的云母片上涂布5μl，材料，分別為膠原、殼聚糖、自組裝短肽RADA16-I；(2)以純水洗凈未黏附的材料；(3)自然晾干一小時(shí)；(4)常溫下以SPI4000 Probe Station and SPA-400 SPM Unit(Seiko Instruments Inc.，Chiba，Japan)以敲擊模式進(jìn)行。
2、結(jié)果2.1創(chuàng)面形態(tài)觀察結(jié)果2.1.1創(chuàng)面描記結(jié)果調(diào)溫式電燙儀制備的動物燒傷模型的創(chuàng)面收縮率計(jì)算結(jié)果見圖1，創(chuàng)面恢復(fù)見圖8，從圖1可以看出，自組裝短肽RADA16-1組的創(chuàng)面收縮率高于其它各組，在急性水腫期的第4天、第7天，膠原，殼聚糖，空白對照組由于燒傷創(chuàng)面水腫而呈現(xiàn)創(chuàng)面擴(kuò)大趨勢(創(chuàng)面收縮率平均值呈負(fù)值)，自組裝短肽RADA16-1組創(chuàng)面在這兩個(gè)觀察窗仍表現(xiàn)為正收縮。21天時(shí)，自組裝短肽RADA16-1組的創(chuàng)面收縮率高達(dá)80％，其它幾組的創(chuàng)面收縮率為45％-60％。從圖8可以看出自組裝短肽RADA16-1組創(chuàng)面收縮、結(jié)痂、溶痂情況較殼聚糖組好。
火焰燒傷制備的動物燒傷模型的創(chuàng)面收縮見圖7，圖7中四張照片顯示，自組裝短肽RADA16-1組創(chuàng)面收縮較空白對照組顯著增快，尤其在燒傷早期收縮顯著，在急性水腫期(傷后第4天)，短肽治療組創(chuàng)面無擴(kuò)大趨勢，而空白對照組創(chuàng)面較原始創(chuàng)面擴(kuò)大35％～50％(P＜0.05)。
2.1.2結(jié)痂、溶痂時(shí)間結(jié)痂、溶痂時(shí)間見表1。
表1結(jié)痂、溶痂時(shí)間

P＜0.01，*P＞0.05從表1可以看出，自組裝短肽RADA16-1組的結(jié)痂時(shí)間和溶痂時(shí)間均短于其它各組。提示短肽處理組燒傷創(chuàng)面皮膚再生速度加快，愈合時(shí)間縮短。
2.2組織學(xué)觀察結(jié)果2.2.1創(chuàng)面I型、III型膠原比例檢測結(jié)果創(chuàng)面III型膠原比例檢測結(jié)果見表2，創(chuàng)面I型膠原比例則為(100-x)％。創(chuàng)面I型、III型膠原的顯示見圖3。
表2各時(shí)間段修復(fù)創(chuàng)面III型膠原含量比例(短肽和空白對照組)

從表2、圖3可以看出，自組裝短肽RADA16-1組的創(chuàng)面III型膠原比例遠(yuǎn)大于空白對照組。提示短肽處理組創(chuàng)面增生活躍，修復(fù)后期形成增生性瘢痕風(fēng)險(xiǎn)較空白對照組小。
2.2.2HE病理染色結(jié)果HE病理染色結(jié)果見圖2、圖4、圖9，從圖2B上部可以看出，第70天，自組裝短肽RADA16-1組可見真皮層皮膚附屬物、腺體，毛囊再生豐富；從圖2B下部可以看出，第70天，殼聚糖組可見真皮層皮膚附屬物，但毛囊缺乏。發(fā)明人比較了空白對照組和自組裝短肽RADA16-I組燒傷創(chuàng)面的毛囊數(shù)，空白對照組新生表皮毛囊數(shù)每低倍鏡視野0～10個(gè)，短肽治療組每低倍鏡視野毛囊數(shù)22～44個(gè)，P＜0.01。此結(jié)果提示短肽使用可促進(jìn)燒傷創(chuàng)面皮膚組織附屬物的再生和修復(fù)。
從圖4可以看出，第70天，自組裝短肽RADA16-1組(a)創(chuàng)面膠原排列接近正常皮膚(c)，空白對照組(d)和殼聚糖組(b)創(chuàng)面膠原排列無序，有瘢痕化傾向，呈現(xiàn)“純一化”玻璃樣變，缺乏汗腺等皮膚附屬物。此結(jié)果提示短肽使用對促進(jìn)創(chuàng)面膠原有序重排和皮膚附屬組織分化有明顯作用。
從圖9可以看出，燒傷后壞死表皮脫落，新生的上皮組織沿白細(xì)胞浸潤帶爬行覆蓋。清晰地顯示燒傷后表皮細(xì)胞從皮膚深層分化的上皮化進(jìn)程。此結(jié)果提示，本實(shí)驗(yàn)采用的燒傷模型可清楚顯示燒傷壞死組織脫落，新生表皮組織分化爬行的各個(gè)時(shí)期的動態(tài)過程。有利于實(shí)驗(yàn)的量化分析及比較，并且在不同時(shí)間段觀察受損組織的恢復(fù)及再生，通過詳盡的病理觀察，可清晰顯示受損創(chuàng)面炎癥滲出(受損創(chuàng)面未切除，這是此模型區(qū)別于全層皮膚切除模型的有益效果之一)。
2.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果免疫組織化學(xué)染色結(jié)果見圖5，從圖5可以看出，自組裝短肽RADA16-1組棕色濃染陽性顆粒沉積在表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及腺體上，空白對照組陽性表達(dá)率明顯低于RADA16-1短肽組(吸光度值)，(P＜0.05)。
發(fā)明人應(yīng)用鏈霉素過氧化物酶復(fù)合免疫組織化學(xué)方法檢測了創(chuàng)面組織中的堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)和表皮細(xì)胞生長因子(EGF)的分泌。發(fā)現(xiàn)在炎癥水腫期及膠原修復(fù)期自組裝短肽RADA16-1組FGF和EGF這兩種生長因子在血管和腺體上的表達(dá)明顯有所增高(較空白對照)，但FGF沒有持續(xù)增高的趨勢(FGF持續(xù)高表達(dá)有瘢痕化形成趨勢)。提示短肽處理組生長因子表達(dá)對創(chuàng)面修復(fù)具有良好的調(diào)節(jié)作用。
2.4水腫檢測結(jié)果水腫檢測結(jié)果見圖2A和圖10，從圖2A可以看出，計(jì)算燙傷創(chuàng)面處理3小時(shí)的創(chuàng)面標(biāo)本表皮至肌肉層上厚度，發(fā)現(xiàn)自組裝短肽RADA16-1組幾乎與正常對照無差異，而空白對照組與正常對照差異很大，此結(jié)果提示自組裝短肽RADA16-1可明顯抑制燒傷皮膚創(chuàng)面的水腫程度。從圖10可以看出，第7天，自組裝短肽RADA16-1組的大鼠全層皮膚組織肌肉層下水腫帶厚度(黃色箭頭所示)明顯較空白組減少(P＜0.01，空白對照組皮膚組織呈過渡炎癥反應(yīng)。此結(jié)果提示，自組裝短肽RADA16-1可明顯抑制燒傷皮膚創(chuàng)面修復(fù)炎癥期的水腫程度。
2.5原子力顯微鏡觀察結(jié)果原子力顯微鏡觀察結(jié)果如圖6、表3所示。
從圖6可以看出，自組裝短肽RADA16-1(a)可形成均勻粗大的纖維并且保持良好的表面孔隙率，而I型膠原(b)、殼聚糖生物流體敷料(c)則形成不規(guī)則的球片狀聚集(P＝0.01)。提示短肽RADA16-1作為藥物敷料具有良好的透氣性能。
從表3可以看出，隨著濃度逐漸降低，短肽RADA16-1仍保持良好的纖維狀態(tài)，且表面孔隙率逐漸下降，而I型膠原、殼聚糖生物流體敷料在濃度逐漸降低的時(shí)候不能形成良好的纖維狀態(tài)，且其表面孔隙率沒有隨濃度梯度逐漸下降而呈現(xiàn)有規(guī)律的變化趨勢。提示短肽RADA16-1作為藥物敷料在吸收滲液后逐漸被稀釋且越接近創(chuàng)面的敷料稀釋度越大，形成創(chuàng)面表面由淺入深逐漸減少的濃度梯度變化。
表3隨濃度梯度變化納米級三維支架材料的纖維形態(tài)表征(孔隙率)

權(quán)利要求
1.自組裝短肽RADA16-1在制備治療燒傷創(chuàng)面的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于自組裝短肽RADA16-1為水凝膠形態(tài)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于水凝膠形態(tài)的自組裝短肽RADA16-1是由自組裝短肽RADA16-1和純凈水制備而成，自組裝短肽RADA16-1的質(zhì)量體積百分比為0.05％～10％。
全文摘要
本發(fā)明公開了自組裝短肽RADA16－1在制備治療燒傷創(chuàng)面的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用調(diào)溫式電燙儀與火焰燒傷制造大鼠皮膚燒傷模型，以自組裝短肽RADA16－1形成的水凝膠及常用的燒傷治療藥物殼聚糖、膠原、聚乳酸為敷料進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自組裝短肽RADA16－1可抑制燒傷創(chuàng)面的擴(kuò)大和水腫、促進(jìn)燒傷創(chuàng)面膠原的有序重排、促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合及皮膚和皮膚組織附屬物的再生和修復(fù)，與殼聚糖、膠原、聚乳酸相比，對燒傷的療效更好。
文檔編號A61P17/02GK101036780SQ20071004897
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月27日
發(fā)明者趙曉軍, 孟輝, 陳麗艷, 王松濤, 葉朝陽 申請人:四川大學(xué)