專利名稱：：一種紅景天多糖鐵復方制劑的制備及應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
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，具體涉及紅景天多糖鐵復方制劑的制備及其在抗缺鐵性貧血疾病中的應用，背棄技術(shù)缺鐵性貧血(IDA)是全世界發(fā)病率最高的營養(yǎng)缺乏性疾病之一。從全球范圍來看，50億人口中約有1/3的人貧血，而IDA或鐵營養(yǎng)不良的人群約占5億，在發(fā)展中國家鐵缺乏(ID)發(fā)生率是發(fā)達國家的4倍，在我國大約有20%的人口存在IDA或鐵營養(yǎng)不良?，F(xiàn)有的補鐵制劑通常分為兩類一類為無機鐵，主要指硫酸亞鐵，如CN94108819.7專利申請報道的在硫酸亞鐵中加入維生素制成復方控釋制劑；另一類為有機鐵，主要包括有機酸鐵絡合物，如CN02146594.0專利申請報道的乙二胺四乙酸鐵鈉(EDTA鐵)新制劑，以及鐵與貧基酸、蛋白質(zhì)等的絡合物，如CN00113615.1專利申請報道的利用羥基蛋氨酸與鐵制成螯合物作為飼料添加劑，近年來也出現(xiàn)了植物或菌類多糖與鐵形成的絡合物，如突國專利號為3,821,192公開報道了一種用葡萄糖、麥芽糖、低分子右旋糖酐與FeCl3反應形成糖-鐵絡合物，又如CN96102440.2專利申請報道的利用海藻多糖與微量元素離子絡合反應成海藻多糖鐵等金屬絡合物，可用于動物飼料添加劑，比較而言，無機鐵劑結(jié)構(gòu)簡單、制備容易、成本低有機鐵劑則易吸收、對胃腸道刺激作用小，不易發(fā)生食欲減低、惡心、嘔吐以及腹瀉等胃腸道反應。作為一種新型的有機鐵，多糖鐵類化合物是以多糖為載體與鐵合成有機鐵配合物，性質(zhì)穩(wěn)定，能以分子狀態(tài)在腸道被吸收，可以充分發(fā)揮多糖和鐵的協(xié)同作用；同時，由于無游離鐵離子存在，能夠明顯降低對胃腸道的刺激性。蒹醫(yī)常用藥大花紅景天是生長在西藏海拔3500—5000米冰山雪域之中的天然植物，據(jù)《四部醫(yī)典》記載，本品用于胂虛證，能健脾益氣，擅治脾氣虛衰，倦怠乏力等癥，單用即有一定的療效本品用于血虛證，能益氣生血，可單用或與補血藥配伍使用。2005年版《中華人民共和國藥典》記載，紅景天具有益氣活血、通脈平喘、用于氣虛血淤，胸痹心痛，中風偏癱，倦怠氣喘等多方面的功效。近代研究表明，紅景天中所含的紅景天苷和苷元酪醇具有抗疲勞、抗缺氧、抗微波輻射、抗毒以及對神經(jīng)系統(tǒng)和新陳代謝的雙向調(diào)節(jié)作用，在環(huán)境適應、在軍事醫(yī)學、航天醫(yī)學、運動醫(yī)學和保健醫(yī)學等方面都具有十分重要的作用。其中的多糖類成分作為藥材的主要有效部位，也具有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗病毒等多種生物活性，本實驗以大花紅錄天藥材為原料，經(jīng)過提取、分離、純化獲得紅景天多糖，在此基礎上合成紅景天多糖鐵，再配合紅景天醇提物浸裔，制成紅景天多糖鐵復方制劑，希望通過補鐵、健脾益氣、益氣生血、免疫調(diào)節(jié)等途徑治療缺鐵性貧血。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的問題是提供一種抗缺鐵性貧血的有效部位一紅景天多糖鐵，可適用于臨床。本發(fā)明提供了一種含紅景天多糖鐵和紅景天醇提物浸裔的中藥制劑，該制劑是由重量百分比為10%33.3%的紅景天多糖鐵、10%~33.3°/。紅景天醇提物浸裔和80%33.3%藥用輔料組成的口服固體制劑及由重量百分比為1.5%的紅景天多糖鐵、1.5%紅景天醇提物浸裔、20%的藥用輔料和水組成的口服液體制劑。本發(fā)明所述的口服固體制劑為膠囊劑、顆粒劑本發(fā)明所述的口服液體制劑為口服液本發(fā)明所要解決的另一問題是公開紅景天多糖鐵及上述含紅景天多糖鐵中藥制劑的制備方法。具體內(nèi)容1紅聚天提取物的制備取大花紅景天藥材，用乙醇回流提取，過濾，濾液減壓濃縮成稠裔，然后烘干，得到醇提物。藥渣揮干，加入蒸餾水，加熱回流，過濾，減壓濃縮提取液，然后加入乙醇，析出沉淀，靜置，過夜，離心，得到紅棕色不溶物，真空干燥，得到粗多糖。將粗多糖復溶于適量蒸餾水中，加入木瓜蛋白酶進行酶水解除蛋白，濃縮水辨液，醇沉，沉淀溶于適量蒸餾水，用sevage法再次除蛋白，濃縮提取液，醉沉，離心收集沉淀，依次用95%乙醉，無水乙醇，無水乙醚洗滌，真空干燥得精制多糖。2紅條天多糖鐵的制備及一般性質(zhì)2.1紅景天多糖鐵的制備取干燥精制多糖、檸樣酸三鈉加入到三頸瓶中，用適當蒸餾水溶解。在熱水浴中不停攪拌，同時緩緩滴加三叛化鐵溶液和氨氧化鈉溶液，控制溶液的pH值在一定范圍內(nèi)。當反應液中出現(xiàn)棕紅色不溶性沉淀時，立即停止滴加三拔化鐵和氛氧化鈉溶液，繼續(xù)在熱水浴中攪拌lh。待反應液冷卻后，離心。取上層深紅棕色液體，減壓濃縮，醇沉，分別用95%乙醇、無水乙醇、無水乙醚各2次洗滌沉淀，真空干燥得粗多糖鐵，將粗多糖鐵溶于適量蒸餾水，裝入透析袋中，分別用流動水沖洗和蒸餾水透析各24h,醇沉，離心取沉淀，沉淀依次用95%乙醇、無水乙醇、無水乙醚各洗2次，真空干燥，得多糖鐵(精品)，2.2紅景天多糖鐵含量測定按李玉賢等在《中成藥》2006;28(5)中報道的含量測定方法操作，得到標準曲線為八=0.2036€+0.0104(1=0.9996，11=3)。得出紅景天多糖鐵中鐵含量為23.05%。2.3紅景天多糖鐵的一般性質(zhì)紅景天多糖鐵為無定形棕褐色粉末，無嗅，易溶于水，不溶于甲醉，乙醉，乙醚等有機試劑，K4[Fe(CN6)]試驗證明紅景天多糖鐵水溶液中不含游離的Fh，說明生成了較為穩(wěn)定的配合物。2.4紅景天多糖鐵紅外光譜圖據(jù)報道，紅外光譜可以鑒別多糖鐵(m)配合物中FeOOH核的類型。為此我們做了紅景天多糖鐵的紅外光譜(結(jié)果見圖l)。由圖1可知，它在850cnT1與680cm"特征吸收與MarshallPR在JColloidInterlaceSci，1971(37)所報道的卩-FeOOH的紅外光譜相二致，提示圖l中鐵核是P-FeOOH核。2.5紅景天多糖鐵制劑的制備2.5.1膠囊劑的制備.紅景天醇提物，多糖鐵、藥用淀粉混合均勻，過篩,去除雜質(zhì)，大顆粒用粉碎機粉碎后再過篩。填充，制粒，包裝，2.52顆粒劑的制備紅景天醇提物，多糖鐵，羧甲基淀粉鈉，微粉纖維素，庶糖混合均勻，用淀粉槳制成軟材，過篩，烘干，過篩整粒，干燥，全部通過一號篩和四號篩。密封包裝，干燥儲存。2.5.3口服液的制備將等量紅景天醇提物浸裔和紅景天多糖鐵溶于水，加入蔗糖漿做矯味劑，加入苯甲酸作為防腐劑，拔拌均勻，裝瓶，滅菌。3藥效學實驗3.1材料將按實施例1得到的多糖鐵2.1088與按實施例2得到的紅景天醇提物浸裔2.1088混合均勻，溶于200ml水，制成復方制劑(鐵含量為243mg'ml勺。陽性對照采用復方三維亞鐵口服溶液，每10ml含硫酸亞鐵120mg,成都某藥品有限公司產(chǎn)品，批號H51023375。按體表面積比例計算試驗動物用藥劑量。3.2實驗動物昆明種小鼠80支，1822g,雌雄各半，由四川大學華西實驗動物中心提供。3.3飼料一般動物飼料由四川大學華西實驗動物中心提供。低鐵詞料按低鐵飼料配方配制,其中紅薯淀粉54%，全脂奶粉40%,豆油5%,食鹽1%。3.4儀器BECKMANATC血細胞分類計數(shù)儀，UV-2201紫外可見分光光度計。3.5方法取78只小鼠隨機分為空白組、復方制劑低劑量組(20111&1^|)、中劑量組(40mgAg")、高劑量組(6011^紐-1)、陽性組(39.78mgAg")和模型組。除空白組外按上述方法分組給藥，連續(xù)灌胃給藥20d(空白組按0.2mH()g"灌生理鹽水)，空白組喂常規(guī)飼料，飲用自來水，其余各組喂低鐵飼料，飲用去離子水。除空白組外，其余各組輔助放血，5d—次，每次采用眼眶靜脈叢放血0.51111,—共放血4次，第20天稱重，摘眼球取血，采用BECKMANATC血細胞分類計數(shù)儀測血紅蛋白(Hb)、紅細胞(RBC)，分離血清(SI),按張秀明等主編的《現(xiàn)代臨床生化檢驗學》(人民軍醫(yī)出版社，2001)中報道的鉻天青S法，采用UV-2201紫外可見分光光度計測血清鐵含量，解剖小鼠稱脾重，計算脾臟系數(shù),結(jié)果釆用t檢驗法進行分析。3.6試驗結(jié)果表l紅景天多糖鐵復方制劑對缺鐵性貧血小鼠Hb、RBC的影響(5:ts)組別劑量(以鐵計算mg/kg)RBC(xlOl2/L)Hb(g/L)離劑量組606.0610±1.150**98.808±15.7335**中劑量組407.8509±0.549**129,727±6.9191**低劑雖組207.6736±0.4邪**123:500±9.0211**陽性組39.787.7880±0.458**122.532±8.6217**模型組-5.2177±0.65784.677±11.7907空白組—8.2438±0.454林140.031±9.5364**與模型組比較"P〈0.01由表l可見，模型組小鼠Hb、RBC分別84.677士11.790g/L，5.2177±0.657xlOl2/L，與空白組140.031士9.5364g/L、8.2438士0.454xl0…L比較，有極顯著差異，同時動物出現(xiàn)精神萎靡，皮毛蓬松、不活躍等癥狀,證明建模成功，給藥組在建模的同時，每天灌胃紅景天多糖鐵復方制劑，經(jīng)過20天的治療，小鼠的Hb、RBC值接近空白組小鼠，與模型組相比較，有極顯著差異。表2紅景天多糖鐵復方制劑對缺鐵性貧血小鼠體重的影響(^±5)tl(g)t2(g)增￡(g)高劑組20.4±2.2321.9±4.121.45±4.03中劑豕組21.09±0.8825.14±1,67*4.03±1.82*低劑量組20.39±1.肪24.11±2.993.84±3.幼*陽性組20.93±0.9224.31±1.983.35±1.95模型組20.53±1.4722.09±2.411.11±1.53空白組20.76±2.6126.22±3.02神5.31±3.57**與模型組比較，P〈0.05,**P<0.01,tl為實驗丌始時小鼠的體重，t2為實驗結(jié)束時小鼠的體重。由表2可知，經(jīng)過20d的實驗，各組小鼠體重均升高，空白組、中劑量組、低劑量組、陽性組小鼠體重髙于模型組，其中空白組小鼠體重與模型組比較有極顯著差異，中劑量組小鼠體重與模型組比較有顯著差異。三個實驗組、陽性組、空白組小鼠體重增值均大于模型組，其中，空白組小鼠體重增值與模型組比較有極顯著差異，中劑量組、低劑量組小鼠體重增值與模型組比較有顯著差異。表3紅錄天多糖鐵復方制劑對缺鐵性貧血小鼠血清鐵、脾臟系數(shù)的影響(；")<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與模型組比較嚇<0.05，**P<0.01由表3可知，實驗組、陽性組、空白組小鼠的血淸鐵含量均髙于模型組，其中髙劑量組、中劑量組、陽性組和空白組小鼠的血淸鐵含量與模型組比較有極顯著差異，低劑量組小鼠的血清鐵含量與模型組比較有顯著差異。實驗組、陽性組、空白組小鼠的脾重及脾臟系數(shù)均高于模型組，其中，中劑量組、低劑量組和空白組小鼠的脾重于空白組比較有顯著差異，高劑量組、中劑量組、低劑量組和空白組小鼠的脾臟系數(shù)與模型組比較有極顯著差異，陽性組小鼠的脾臟系數(shù)與模型組比較有顯著差異，圖1為紅錄天多糖鐵的紅外光譜圖具體實施方案實施例l紅景天多糖提取物的制備取大花紅景天藥材2000g,用3倍量80%乙酵在75匸下回流提取3h,過濾，濾液減壓濃縮成稠裔，然后烘干，得到醇提物浸裔520g。藥渣揮干(1466g)，分別加入12、10、8倍量蒸餾水，80'C下回流提取3次，每次2h,過濾，減壓濃縮濾液至粘稠狀液體，然后加入95%乙醇至溶液醉濃度為80%,析出沉淀，靜置，過夜，離心，得到紅棕色不溶物，40"C下真空干燥，得到粗多糖480g。將粗多糖復溶于5000ml蒸餾水中，按照重量體積濃度1。/。的比例加入木瓜蛋白酶(w/v)，在pH6.4、60"條件下水解3h,水解液減壓濃縮至l/5后，再加入等體積95%乙醉醇沉，沉淀烘干后加入2500ml蒸餾水使其溶解，用Sevage法除蛋白2次,即多糖溶液中加入等體積三諷甲烷-正丁醇混合溶液(4:l)，振蕩30min,離心，取上層溶液，濃縮至1/5,加入3倍量95°/。乙醇醇沉，離心收集沉淀，依次用95%乙醉，無水乙醇，無水乙醚洗滌，真空干燥得精制多糖102.6g。實施例2紅景天多糖鐵的制備取干燥精制多糖2g、檸檬酸三鈉0.58加入到2501111三頸瓶中，用100ml蒸餾水溶解。在70"C下不停攪拌，同時滴加三氣化鐵溶液(2mol/L)和20。/oNaOH溶液，控制溶液的pH值在8.08.5。當反應液中出現(xiàn)棕紅色不溶性沉淀時，停止滴加三氮化鐵和氡氧化鈉溶液，繼續(xù)在熱水浴中攪拌1h。待反應液冷卻后，離心。取上層深紅棕色液體，減壓濃縮至原體積1/3，加入95%乙醇至溶液醉濃度為80%,靜置過夜，離心收集沉淀，分別用95%乙醇、無水乙醇、無水乙醚各2次洗滌沉淀，4050"真空干燥得粗多糖鐵，將粗多糖鐵溶于適量蒸餾水，裝入透析袋中，分別用流動水沖洗和蒸餾水透析各24h,醉沉，離心取沉淀，沉淀依次用95S^乙醇、無水乙醇、無水乙醚各洗2次，4050"真空干燥，得多糖鐵0.56g。實施例3膠囊劑的制備將按實施例l得到的紅景天醉提物浸裔，按實施例2得到的多糖鐵、藥用淀粉各100g,混合均勻，過篩(40目)，去除雜質(zhì)，大顆粒用粉碎機粉碎后再過篩。然后用2號膠襄填充，共制成1000粒，每粒0,285g,控制水分在9.0°/。之內(nèi)，塑料密封包裝?？诜蝗杖?，一次三粒。實施例4顆粒劑的制備lOOg按實施例l得到的紅景天醉提物浸裔，100g按實施例2得到的多糖鐵，200g羧甲基淀粉鈉(過100目篩)，350g微粉纖維素(過IOO目篩)，50g蔗糖(選用白砂糖，用前于60"C下干燥12小時，粉碎，過四號篩的糖粉，密封儲藏)混合均勻，用200g淀粉漿制成軟材，過20目篩，烘干，過20目篩整粒，干燥，控制水分在2%以內(nèi)，全部通過一號篩，再過四號篩除去細小顆粒和細粉。裝袋，每袋10g，密封包裝，干燥儲存?？诜蝗?0g。實施例5口服液的制備將15g按實施例1得到的紅景天醇提物浸裔，15g按實施例2得到的紅景天多糖鐵混合，溶于500ml水，另取蔗糖200g制成糖漿，與上述藥液合并，加入0.5ml苯甲酸作防腐劑，調(diào)整重量至1000ml，攪拌均勻，濾過，裝瓶，滅菌。口服一日三次，一次20ml。權(quán)利要求1.一種紅景天多糖鐵復方制劑的制備及應用，其特征在于多糖鐵中鐵的含量為23.05％，鐵核以β-FeOOH形式存在。2.—種制備權(quán)利要求1所述的紅景天多糖鐵復方制劑的方法，其特征在于①取大花紅景天藥材，用3倍量80%乙醇在75'C下回流提取3h，過濾，濾液減壓濃縮成稠膏，烘干，得到醇提物浸膏。②藥渣揮干，分別加入12、10、8倍量蒸餾水，8(TC下回流提取3次，每次2h，過濾，減壓濃縮提取液至粘稠狀液體，然后加入95%乙醇至溶液醇濃度為80%，析出沉淀，靜置，過夜，離心，得到紅棕色不溶物，4(TC下真空干燥，得到粗多糖。將粗多糖復溶于蒸餾水中，按照重量體積濃度"/。的比例加入木瓜蛋白酶(w/v)，在pH6.4、6(TC條件下酶水解3h，濃縮水解液至l/5后，再加入等體積95%乙醇醇沉，沉淀烘干后加入蒸餾水使其溶解，用Sevage法除蛋白2次，即多糖溶液中加入等體積三氯甲垸-正丁醇混合溶液(4:1)，振蕩30min，離心，取上層溶液，濃縮至1/5，醇沉，離心收集沉淀，依次用95%乙醇，無水乙醇，無水乙醚洗滌，真空干燥得精制多糖。③按比例取干燥精制多糖2g、擰檬酸三鈉0.5g加入到250ml三頸瓶中，用100ml蒸餾水溶解。在70。C下不停攪拌，同時緩緩滴加三氯化鐵溶液(2mol/L)和20。/。NaOH溶液，控制溶液的pH值在8.08.5。當反應液中出現(xiàn)棕紅色不溶性沉淀時，停止滴加三氯化鐵和氫氧化鈉溶液，繼續(xù)在熱水浴中攪拌lh。待反應液冷卻后，離心。取上層深紅棕色液體，減壓濃縮至原體積1/3，加入95%乙醇至溶液醇濃度為80%，靜置過夜，離心收集沉淀，分別用95%乙醇、無水乙醇、無水乙醚各2次洗滌沉淀，405(TC真空干燥得粗多糖鐵，將粗多糖鐵溶于適量蒸餾水，裝入透析袋中，分別用流動水沖洗和蒸餾水透析各24h，醇沉，離心取沉淀，沉淀依次用95%乙醇、無水乙醇、無水乙醚各洗2次，4050。C真空干燥，得多糖鐵。④將重量百分比為10%33.3%的按步驟的到的紅景天多糖鐵、10。/。33.3。/。按步驟①得的紅景天醇提物浸膏、80%33.3%藥用輔料混合制成口服固體制劑?！?qū)⒅亓堪俜直葹?.5。/。的按步驟③的到的紅景天多糖鐵、1.5。/。按步驟①得到的紅景天醇提物浸膏、20%藥用輔料和水混合制成口服液體制劑。3.—種按權(quán)利要求1所述的紅景天多糖鐵復方制劑的用途，其特征在于用作治療缺鐵性貧血疾病的藥物。全文摘要本發(fā)明屬于中藥
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，特別涉及紅景天多糖鐵復方制劑的制備及其在抗缺鐵性貧血中的應用。本發(fā)明利用大花紅景天藥材作原料，通過分離純化得到醇提物浸膏和多糖部位，其中的多糖與鐵離子絡合反應生成紅景天多糖鐵后，與醇提物浸膏制成復方制劑，可用于治療缺鐵性貧血。本制劑制備方法較為簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K36/41GK101390923SQ20071005008公開日2009年3月25日申請日期2007年9月21日優(yōu)先權(quán)日2007年9月21日發(fā)明者韓泳平,黃家錕申請人:韓泳平;黃家錕