專利名稱：肝水解肽注射液的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域。
背景技術：
目前關于肝水解肽注射液的生產(chǎn)工藝已是普遍應用的工藝，其缺點是1、工藝過程較為復雜，有些試藥如A-T3942霉菌蛋白酶已無廠家生產(chǎn)。2、另外由于工藝過程時間較長，且在高溫條件下進行，造成產(chǎn)品氧化，并使終產(chǎn)品顏色較深，為棕色。3、工藝過程中加入苯酚為抑菌劑，使產(chǎn)品不可靜脈注射。4、工藝中無截留1萬分子量大分子超濾過程，使產(chǎn)品過敏性難以保障，也使靜脈注射已乎不可能。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種可以靜脈注射的肝水解肽注射液。
本發(fā)明的工藝過程是a、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結(jié)締組織，切成塊，水洗二次，沖凈血水，再用純化水沖洗二次，稱重，按1∶0.5--3加水，用膠體磨勻漿，循環(huán)數(shù)分鐘，放入血漿瓶中，備用。
b、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調(diào)至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的0.5--5％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃--60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不銹鋼桶中，放入54℃--60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃--60℃保溫1-5小時?？筛鶕?jù)水解情況調(diào)整。
c、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調(diào)pH5-8，按肝組織重量的0.5--4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根據(jù)上清晰出情況定，加熱至沸，持續(xù)數(shù)分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開后按組織重量的0.5--2‰加入亞硫酸氫鈉，如水解液顏色較淺，亦可不加。冷卻后，過濾至澄清。
d、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷柜深凍過夜，24小時后取出，室溫條件下自然化凍。
e、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。
f、灌封上述原液進行檢測，合格后加水稀釋至11.5-12.0mg/m1，調(diào)節(jié)pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
本發(fā)明優(yōu)點1、本工藝省去了原工藝中的乙醇沉淀步驟及苯酚抑菌步驟，保證了制劑不含任何抑菌劑，從而使靜脈注射成為可解，同時也使工藝過程簡單。
2、由于工藝加熱時間較原工藝大大縮小，使該產(chǎn)品顏色變化不大，符合新的國家藥品質(zhì)量標準，即微黃色至淡黃色或淡黃棕色。
3、由于采用了現(xiàn)化的超濾技術，保證了成品的分子量在1萬道爾頓以下，使得靜脈注射后不過敏，從而使靜脈給藥成為可能。
本發(fā)明的
具體實施例方式1、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結(jié)締組織，切成4-6cm小塊，水洗二次，沖凈血水，再用純化水沖洗二次，稱重，按1∶1(w∶w)加水，用膠體磨勻漿，循環(huán)數(shù)5鐘，放入1萬毫升血漿瓶或不銹鋼桶中，備用。
2、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調(diào)至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的1.25％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃--60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不銹鋼桶中，放入54℃--60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃--60℃保溫2小時。
3、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調(diào)pH5-8，按肝組織重量的1.0％(w∶w)加入活性碳，加熱至沸，持續(xù)10分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開后按組織重量的2‰加入亞硫酸氫鈉，冷卻后，過濾至澄清。
4、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷柜深凍過夜，24小時后取出，室溫條件下自然化凍。
5、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。
6、灌封上述原液進行檢測，合格后加水稀釋至11.5-12.0mg/ml，調(diào)節(jié)pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
實驗數(shù)據(jù)1、上述的水解溶液按質(zhì)量標準方法測定多肽濃度(方法見參考文獻1)，結(jié)果如下

2、鑒別實驗三批均符合國家藥品標準WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液項下的規(guī)定。
3、蛋白質(zhì)檢測取本品稀釋至10mg/ml，取1ml，加20％磺基水楊酸，混勻，均未發(fā)生混濁。
4、高分子物質(zhì)按國家藥品標準WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液項下進行，取本品適量加水制成每ml含1mg的溶液，作為供試品溶液，另取細胞素C適量，加水制成每ml含5mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。
采用凝膠色譜柱(如TSKgelG2000SW)，以磷酸緩沖液(取磷酸氫二鉀13.93g，磷酸二氫鉀5.32g，加異丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸調(diào)pH7.0)為流動相，檢測波長為280nm，取對照溶液與供試品各20ul，分別注入液相色譜柱，記錄色譜圖，供試品色譜圖中，各峰的保留時間均應大于對照溶液峰的保留時間。結(jié)果細胞色素C主峰保留時間為8.49min，各批樣品峰保留時間大于8.49min。
5、熱源取本品制成注射液后，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI D)，劑量按家兔每1kg注射0.5ml，結(jié)果均符合規(guī)定。
6、過敏實驗取本品，加氯化鈉注射液制成每ml含2mg的溶液作為致敏液及供試品，依法檢查，健康豚鼠，雌雄均可，體重250--350g，試驗前及試驗期內(nèi)，均應按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，取上述豚鼠6只，隔日腹腔注射供試品0.5ml，連續(xù)3次，然后分成兩組，每組3只，分別在第一次注射后14日及21靜脈注射供試品溶液1.0ml。靜脈注射15分鐘內(nèi)均不得出現(xiàn)過敏反應，如有豎毛，呼吸困難，噴嚏、干哎或咳嗽3聲等現(xiàn)象中的兩種以上者，或有啰音、抽搐、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者應判斷為陽性。
7、降壓物質(zhì)取肝水解肽注射液，加0.9％氯化鈉注射液制成1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版第二部附錄XG)，劑量按貓體重每1kg注射0.2ml，結(jié)果三批均符合規(guī)定。
8、其他應符合注射劑項下有關的各項規(guī)定，各批均符合，尤其澄明度很好。
權利要求
1.一種肝水解肽注射液，其特征在于其工藝過程是a、勻漿取新鮮牛肝，去除脂肪、大血管及其它結(jié)締組織，切成塊，水洗二次，沖凈血水，再用純化水沖洗二次，稱重，按1∶0.5--3加水，用膠體磨勻漿，循環(huán)數(shù)分鐘，放入血漿瓶中，備用。b、酶解用Ca(OH)2的混懸液將上述勻漿調(diào)至pH至7.0--7.5。將胰酶按組織重量的0.5--5％稱出胰酶，每500g胰酶加純化水1000ml，加入CaCl25-6g，攪勻，室溫放置1小時活化。將上述活化的胰酶加入勻漿中，攪勻，在水浴鍋中加熱至54℃-60℃，將上述混合物分至血漿瓶或不銹鋼桶中，放入54℃-60℃的水浴鍋中，每半小時攪拌一次，54℃-60℃保溫1-5小時?？筛鶕?jù)水解情況調(diào)整。c、分離上清將上述水解液取出，用磷酸調(diào)pH5-8，按肝組織重量的0.5-4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根據(jù)上清晰出情況定，加熱至沸，持續(xù)數(shù)分鐘，自然放冷，吸取上清液過濾，濾液煮開后按組織重量的0.5--2‰加入亞硫酸氫鈉，如水解液顏色較淺，亦可不加。冷卻后，過濾至澄清。d、冷凍上述濾液過5萬或10萬分子量的超濾柱，濾液立即放入-20～-30℃冷庫或冷柜深凍過夜，24小時后取出，室溫條件下自然化凍。e、超濾注意觀察化凍進程，待有少量冰塊時，即吸取上清過1萬分子量超濾柱二次，得超濾液即為肝水解肽原液，每1kg牛肝大約得到中間體溶液600---1200ml。f、灌封上述原液進行檢測，合格后加水稀釋至11.5-12.0mg/ml，調(diào)節(jié)pH至5.5-7.0除菌過濾，灌封滅菌即得。
全文摘要
一種肝水解肽注射液，屬于醫(yī)藥技術領域。本發(fā)明提供一種可以靜脈注射的肝水解肽注射液。本發(fā)明的工藝過程包括六表步驟勻漿、酶解、分離上清、冷凍、超濾、灌封。本發(fā)明省去了原工藝中的乙醇沉淀步驟及苯酚抑菌步驟，保證了制劑不含任何抑菌劑，從而使靜脈注射成為可解，同時也使工藝過程簡單。
文檔編號A61P1/00GK101091722SQ200710055818
公開日2007年12月26日 申請日期2007年6月29日 優(yōu)先權日2007年6月29日
發(fā)明者石海 申請人:石海