專利名稱：一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種查斯曼寧的提取方法，特別是涉及一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法。
背景技術(shù)：
松潘烏頭(Aconitum sungpanense Hand-Mazz)，俗稱纏繞烏頭，民間稱為火焰子，為毛茛科烏頭屬植物，甘肅、青海、四川等地分布較廣，具有確切的鎮(zhèn)痛作用，民間用于治療跌打損傷，風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎引起的疼痛和紅腫等癥。其化學(xué)成分主要是多種生物堿，以二萜生物堿為主。
傳統(tǒng)的生物堿的提取分離方法是將松潘烏頭塊根粗粉8kg，以0.2％鹽酸滲漉，滲漉液通過苯乙烯磺酸氫型陽離子交換樹脂。樹脂用去離子水洗至中性，晾干后用10％氨水堿化，置連續(xù)提取器中，依次用乙醚、乙醇提取，得乙醚部分總堿60g，乙醇部分總堿7g，總堿分成兩部分，A1、A2。A1部分經(jīng)pH梯度法得B1、B2、B3、B4。B3部分用混合溶劑經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和離心薄層層析得化合物1、2、3、4、5、6。A2部分用混合溶劑經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得化合物7、8。B2部分用混合溶劑經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得化合物9、10。
上述提取分離的步驟繁瑣，特別是將生物堿提取出來以后，要多次反復(fù)進(jìn)行柱層析，層析用的洗脫液需用不同比例的混合溶劑，給操作帶來很多不便，裝柱的技術(shù)要求較高，混合溶劑回收后不能重新使用，如果需要再用，還要在原來的基礎(chǔ)上重新配制，而且很難重復(fù)原來的濃度，從而給試驗(yàn)帶來許多新問題。如果不再利用回收的混合溶劑，則造成很大的浪費(fèi)，并會造成環(huán)境污染。并且成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，包括如下步驟(1)將1質(zhì)量份的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為10％-90％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，加入3-5質(zhì)量份的體積百分濃度為60％-80％的乙醇水溶液，采用滲漉法，得到提取液，過濾，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.3-1.7的粘稠狀浸膏；(2)用鹽酸水溶液提取浸膏，活性炭脫色，過濾，得濾液，調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)調(diào)節(jié)至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用3-8質(zhì)量倍的體積比為1∶3-8的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將步驟(2)得到的白色結(jié)晶用硅膠柱層析分離，甲醇作洗脫液，分離得到查斯曼寧。
所述步驟(1)優(yōu)選的是將1質(zhì)量份的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為10％-90％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置4-8小時(shí)，加入3-5質(zhì)量份的體積百分濃度為60％-80％的乙醇水溶液，于15-30℃浸泡5-7天后，以20-80ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以20-80ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在35-55℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.3-1.7的粘稠狀浸膏。
所述步驟(2)優(yōu)選的是每次用質(zhì)量比為5-6∶1的體積百分濃度為1％-7％的鹽酸水溶液提取浸膏，3-10次，提取液用活性炭脫色2-3次，過濾，得濾液，活性炭部分用氯仿洗滌3-4次，在氯仿洗滌液中加入0.1-0.5mol/L鹽酸水溶液振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用濃氨水或三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)用濃氨水或三乙胺堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用3-8質(zhì)量倍的體積比為1∶3-8的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶。
所述步驟(3)中所述硅膠最好要經(jīng)過預(yù)處理，所述步驟為將硅膠清洗干凈，稱重，倒入帶蓋的燒瓶中，加入1-3質(zhì)量倍的氯仿浸泡6-40小時(shí)，放入超聲波中振蕩30-50min，取出過濾，回收氯仿；再用1-3質(zhì)量倍的甲醇浸泡2-7小時(shí)，放入超聲波中振蕩30-50min，過濾，回收甲醇，將硅膠在60-80℃烘4-8小時(shí)。
所述步驟(3)優(yōu)選的是將過200-300目篩的硅膠干法裝柱，硅膠頂部鋪一層厚0.5-1.5cm的脫脂棉，用體積百分濃度3％-5％的氨水甲醇溶液過柱，使硅膠得到堿化，再將步驟(2)獲得的白色結(jié)晶按硅膠與白色結(jié)晶80-100∶1的比例稱重，用少量的丙酮溶解白色結(jié)晶，從柱上端小心均勻的加到硅膠柱上，調(diào)節(jié)流速到10-20ml/min，用甲醇作洗脫液，從流出液流出開始計(jì)20-30min后收集流出液，由薄層色譜檢查流出液的流出情況，減壓濃縮，得到查斯曼寧。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是①全部生產(chǎn)過程相對簡便，易于工人的培訓(xùn)和操作的規(guī)范化，可減少生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的失誤，提高成品率，為管理層的質(zhì)量控制和生產(chǎn)技術(shù)指標(biāo)的考核提供了方便。
②硅膠柱層析分離查斯曼寧，采用單一的甲醇作為洗脫液分離效果好，可以得到一次分離的純度達(dá)到95％以上的單一化合物，而且節(jié)省時(shí)間，減少配制步驟，溶劑回收后可再利用，降低成本，減少污染，實(shí)現(xiàn)了清潔生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明制備的查斯曼寧與標(biāo)準(zhǔn)品的薄層色譜分離圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1(1)將20千克的松潘烏頭根塊粉碎后(過60目，也可以過80目)，用質(zhì)量百分濃度為10％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置6小時(shí)，加入60千克的體積百分濃度為70％的乙醇水溶液，于25℃浸泡6天后，以60ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以60ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在45℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.35的粘稠狀浸膏(得27公斤)；(2)每次用質(zhì)量比為4∶1的體積百分濃度為5％的鹽酸水溶液提取浸膏，提取4次，提取液用活性炭脫色3次，過濾，得濾液，活性碳部分用氯仿800ml分三次洗滌，在氯仿洗滌液中加入0.4mol/L鹽酸水溶液1000ml振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用三乙胺調(diào)節(jié)pH至7.0，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I(51.6g)，水層繼續(xù)用三乙胺堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II(20.79g)，將所述生物堿II用4質(zhì)量倍的體積比為1∶5的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將過300目篩的硅膠干法裝柱，硅膠頂部鋪一層厚1.0cm的脫脂棉，用體積百分濃度4％的氨水甲醇溶液過柱，使硅膠得到堿化，再將所述步驟(2)獲得的白色結(jié)晶按硅膠與白色結(jié)晶90∶1的比例稱重，用少量的丙酮溶解白色結(jié)晶，從柱上端小心均勻的加到硅膠柱上，調(diào)節(jié)流速到15ml/min，用甲醇作洗脫液，從流出液流出開始計(jì)25min后收集流出液，由薄層色譜檢查流出液的流出情況，減壓濃縮，得到查斯曼寧13.1g。得率0.066％。
步驟(3)中的硅膠要經(jīng)過預(yù)處理，步驟為將硅膠清洗干凈，稱重，倒入帶蓋的燒瓶中，加入2質(zhì)量倍的氯仿浸泡20小時(shí)，放入超聲波中振蕩40min，取出過濾，回收氯仿；再用2質(zhì)量倍的甲醇浸泡5小時(shí)，放入超聲波中振蕩40min，過濾，回收甲醇，將硅膠在70℃烘5小時(shí)備用。
用上述方法獲得的查斯曼寧用薄層色譜法進(jìn)行檢測，展開劑選用體積比為8-12∶1的甲醇∶氨水，所有的組分達(dá)到完全分離，每個(gè)斑點(diǎn)的形狀呈圓形或橢圓形，達(dá)到了理想分離。(見圖1)圖1中，1為本實(shí)施例制備的查斯曼寧，2為查斯曼寧標(biāo)準(zhǔn)品，展開劑為10∶1的甲醇∶氨水。
實(shí)施例2(1)將20千克的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為60％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置5小時(shí)，加入80千克的體積百分濃度為75％的乙醇水溶液，于20℃浸泡6天后，以50ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以50ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在40℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.45的粘稠狀浸膏；(2)每次用質(zhì)量比為6∶1的體積百分濃度為6％的鹽酸水溶液提取浸膏，提取5次，提取液用活性炭脫色2次，過濾，得濾液，活性碳部分用氯仿900ml分4次洗滌，在氯仿洗滌液中加入0.3mol/L鹽酸水溶液900ml振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用濃氨水調(diào)節(jié)pH至7.0，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)用濃氨水堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用5質(zhì)量倍的體積比為1∶4的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將過300目篩的硅膠干法裝柱，硅膠頂部鋪一層厚0.5cm的脫脂棉，用體積百分濃度5％的氨水甲醇溶液過柱，使硅膠得到堿化，再將所述步驟(2)獲得的白色結(jié)晶按硅膠與白色結(jié)晶80∶1的比例稱重，用少量的丙酮溶解白色結(jié)晶，從柱上端小心均勻的加到硅膠柱上，調(diào)節(jié)流速到20ml/min，用甲醇作洗脫液，從流出液流出開始計(jì)20min后收集流出液，由薄層色譜檢查流出液的流出情況，減壓濃縮，得到查斯曼寧。
將步驟(2)得到的白色結(jié)晶用硅膠柱層析分離，甲醇作洗脫液，分離得到查斯曼寧。
步驟(3)中的硅膠要經(jīng)過預(yù)處理，步驟為將硅膠清洗干凈，稱重，倒入帶蓋的燒瓶中，加入1質(zhì)量倍的氯仿浸泡40小時(shí)，放入超聲波中振蕩30min，取出過濾，回收氯仿；再用1質(zhì)量倍的甲醇浸泡7小時(shí)，放入超聲波中振蕩30min，過濾，回收甲醇，將硅膠在60℃烘6小時(shí)備用。
實(shí)施例3(1)將20千克的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為10％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置8小時(shí)，加入60千克的體積百分濃度為80％的乙醇水溶液，于15℃浸泡7天后，以80ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以80ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在35℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.7的粘稠狀浸膏；(2)每次用質(zhì)量比為5∶1的體積百分濃度為1％的鹽酸水溶液提取浸膏，提取3次，提取液用活性炭脫色3次，過濾，得濾液，活性炭部分用氯仿900ml分3次洗滌，在氯仿洗滌液中加入0.1mol/L鹽酸水溶液1000ml振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)用三乙胺堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用8質(zhì)量倍的體積比為1∶3的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將過200目篩的硅膠干法裝柱，硅膠頂部鋪一層厚1.5cm的脫脂棉，用體積百分濃度3％的氨水甲醇溶液過柱，使硅膠得到堿化，再將所述步驟(2)獲得的白色結(jié)晶按硅膠與白色結(jié)晶100∶1的比例稱重，用少量的丙酮溶解白色結(jié)晶，從柱上端小心均勻的加到硅膠柱上，調(diào)節(jié)流速到10ml/min，用甲醇作洗脫液，從流出液流出開始計(jì)30min后收集流出液，由薄層色譜檢查流出液的流出情況，減壓濃縮，得到查斯曼寧。
步驟(3)中的硅膠要經(jīng)過預(yù)處理，步驟為將硅膠清洗干凈，稱重，倒入帶蓋的燒瓶中，加入3質(zhì)量倍的氯仿浸泡6小時(shí)，放入超聲波中振蕩50min，取出過濾，回收氯仿；再用3質(zhì)量倍的甲醇浸泡2小時(shí)，放入超聲波中振蕩50min，過濾，回收甲醇，將硅膠在80℃烘4小時(shí)備用。
實(shí)施例4
(1)將1千克的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為90％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置4小時(shí)，加入5千克的體積百分濃度為60％的乙醇水溶液，于30℃浸泡5天后，以20ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以20ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在55℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.3的粘稠狀浸膏；(2)每次用質(zhì)量比為6∶1的體積百分濃度為7％的鹽酸水溶液提取浸膏，提取10次，提取液用活性炭脫色2次，過濾，得濾液，活性炭部分用氯仿700ml分4次洗滌，在氯仿洗滌液中加入0.5mol/L鹽酸水溶液700ml振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用濃氨水調(diào)節(jié)pH至7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)用濃氨水堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用3質(zhì)量倍的體積比為1∶8的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將步驟(2)得到的白色結(jié)晶用硅膠柱層析分離，甲醇作洗脫液，分離得到查斯曼寧。
權(quán)利要求
1.一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，其特征是包括如下步驟(1)將1質(zhì)量份的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為10％-90％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，加入3-5質(zhì)量份的體積百分濃度為60％-80％的乙醇水溶液，采用滲漉法，得到提取液，過濾，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.3-1.7的粘稠狀浸膏；(2)用鹽酸水溶液提取浸膏，活性炭脫色，過濾，得濾液，調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)調(diào)節(jié)至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用3-8質(zhì)量倍的體積比為1∶3-8的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)將步驟(2)得到的白色結(jié)晶用硅膠柱層析分離，甲醇作洗脫液，分離得到查斯曼寧。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，其特征是所述步驟(1)為將1質(zhì)量份的松潘烏頭根塊粉碎后，用質(zhì)量百分濃度為10％-90％碳酸鈉水溶液潤濕浸透，拌勻，裝入提取罐中，放置4-8小時(shí)，加入3-5質(zhì)量份的體積百分濃度為60％-80％的乙醇水溶液，于15-30℃浸泡5-7天后，以20-80ml/min的流速從提取罐中放出，同時(shí)在提取灌的投料口以20-80ml/min的流速加入相同濃度的乙醇，待從提取罐中流出的提取液接近無色時(shí)停止加入乙醇水溶液，并密封投料口，通入壓縮空氣，直至提取灌中的溶液全部流出為止，將提取液過濾，在35-55℃下減壓蒸蹓，將所述提取過濾液濃縮至比重為1.3-1.7的粘稠狀浸膏
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，其特征是所述步驟(2)為每次用質(zhì)量比為5-6∶1的體積百分濃度為1％-7％的鹽酸水溶液提取浸膏，3-10次，提取液用活性炭脫色2-3次，過濾，得濾液，活性炭部分用氯仿洗滌3-4次，在氯仿洗滌液中加入0.1-0.5mol/L鹽酸水溶液振搖，鹽酸水溶液層與濾液合并，用濃氨水或三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)用濃氨水或三乙胺堿化至pH≥10，再用氯仿萃取，減壓濃縮至出現(xiàn)淡黃色固體，得到生物堿II，將所述生物堿II用3-8質(zhì)量倍的體積比為1∶3-8的正己烷-丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，其特征是所述步驟(3)中所述硅膠要經(jīng)過預(yù)處理，所述步驟為將硅膠清洗干凈，稱重，倒入帶蓋的燒瓶中，加入1-3質(zhì)量倍的氯仿浸泡6-40小時(shí)，放入超聲波中振蕩30-50min，取出過濾，回收氯仿；再用1-3質(zhì)量倍的甲醇浸泡2-7小時(shí)，放入超聲波中振蕩30-50min，過濾，回收甲醇，將硅膠在60-80℃烘4-8小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，其特征是所述步驟(3)為將過200-300目篩的硅膠干法裝柱，硅膠頂部鋪一層厚0.5-1.5cm的脫脂棉，用體積百分濃度3％-5％的氨水甲醇溶液過柱，使硅膠得到堿化，再將所述步驟(2)獲得的白色結(jié)晶按硅膠與白色結(jié)晶80-100∶1的比例稱重，用少量的丙酮溶解白色結(jié)晶，從柱上端小心均勻的加到硅膠柱上，調(diào)節(jié)流速到10-20ml/min，用甲醇作洗脫液，從流出液流出開始計(jì)20-30min后收集流出液，由薄層色譜檢查流出液的流出情況，減壓濃縮，得到查斯曼寧。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從松潘烏頭中提取查斯曼寧的方法，步驟為(1)將松潘烏頭根塊粉碎后，用碳酸鈉水溶液潤濕浸透，加入乙醇水溶液，采用滲漉法，得到提取液，過濾，濃縮成粘稠狀浸膏；(2)用鹽酸水溶液提取浸膏，活性炭脫色，濾液調(diào)節(jié)pH至6.5－7.5，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得到生物堿I，水層繼續(xù)調(diào)節(jié)至pH≥10，用氯仿萃取，濃縮得到生物堿II，將生物堿II用正己烷－丙酮熱溶，過濾，濾液蒸發(fā)，沉淀出白色結(jié)晶；(3)白色結(jié)晶用硅膠柱層析分離，甲醇作洗脫液，分離得到查斯曼寧，本發(fā)明生產(chǎn)過程簡便，可減少生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的失誤；用硅膠柱層析分離查斯曼寧時(shí)，采用單一的甲醇作為洗脫液，分離效果好，降低成本，減少污染。
文檔編號A61K36/714GK101037412SQ20071005720
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日
發(fā)明者袁斌 申請人:天津開發(fā)區(qū)川江生物科技有限公司