專利名稱：一氧化氮供體型糖皮質(zhì)激素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化合物領(lǐng)域，具體涉及NO供體型糖皮質(zhì)激素，本發(fā)明還公開了該衍生物的制備方法及其作為抗炎藥物的用途。

背景技術(shù)：
糖皮質(zhì)激素因?yàn)槠鋸?qiáng)大的藥理作用而被臨床廣泛地使用，但長(zhǎng)期使用容易誘發(fā)高血壓、柯興氏綜合癥、骨質(zhì)疏松、糖尿病等許多不良反應(yīng)，為此近年來國(guó)際醫(yī)藥界一直在努力追求開發(fā)新的副作用更小，效果更好的糖皮質(zhì)激素。
一氧化氮(NO)在體內(nèi)參與眾多生理功能的調(diào)節(jié)，與心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、骨代謝系統(tǒng)等有著密切的關(guān)系，是研究較為深入的一種小分子化合物。NO供體型藥物近年來無論是在基礎(chǔ)研究方面還是應(yīng)用研究方面都有了較顯著的發(fā)展。NO與某些藥物相連，可以增強(qiáng)藥效和/或降低毒副作用。法國(guó)NICOX公司申請(qǐng)的中國(guó)專利ZL 97180284.X公開了一類一氧化氮供體型糖皮質(zhì)激素，通過一個(gè)二價(jià)連接的橋?qū)㈢摅w母核和—NO2連接起來，而公開的橋?yàn)閬喭檠趸騺啳h(huán)烷氧基，或者是如下幾個(gè)通式表示的橋，包括

和
以及

和
然而上述化合物，由于采用了不穩(wěn)定的—NO2作為NO供體，所得的NO供體型糖皮質(zhì)激素穩(wěn)定性不佳，不但儲(chǔ)存時(shí)需要完全避光的環(huán)境，而且在常溫下分解較快，儲(chǔ)存時(shí)間較短。不利于推廣應(yīng)用。
中國(guó)專利ZL 97180284.X公開了一種用呋咱氮氧化物作為一氧化氮供體的氫化可的松衍生物。雖然穩(wěn)定性比—NO2供體的糖皮質(zhì)激素好，但是由于氫化可的松是一種低效、低副作用的糖皮質(zhì)激素所以制得的NO供體型糖皮質(zhì)激素抗炎效果一般，降低糖皮質(zhì)激素副作用的效果也不明顯。


發(fā)明內(nèi)容
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種如下通式(II)的化合物 A—L—X 其中A與L相連的位置是通過A上取代基的羥基與L相連，優(yōu)選可以通過A中的R”上的羥基，也可以通過17位上的羥基相連 其中A為甾體激素殘基，具有如下結(jié)構(gòu)，在1-2位是雙鍵
其中，取代通式中所述的CH基中的H或CH2中的二個(gè)氫H2的取代基可如下 在2位，可以是F，Cl，Br 在3位，可以是，CO(酮基)，—O—CH2—CH2—Cl，OH 在4-5位，可以是雙鍵； 在5-6位，可以是雙鍵； 在6位，可以是Cl，F(xiàn)，CH3，—CHO； 在7位，可以是Cl，Br 在9位可以是Cl，F(xiàn) 在11位，可以是OH，CO，Cl； 在16位可以是CH3，OH，＝CH2 在17位，可以是OH，CH3，OCO(O)x(CH2)yCH3，或

即糠酰基 其中x為0或1的整數(shù)，y是0至4的整數(shù)， 在16-17位置，可以是下述基團(tuán)；
其中，R2和R3可以相同或不同，并可以為氫或1至8個(gè)碳的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈，或環(huán)，優(yōu)選R2為H，R3為正丙基、環(huán)己基. R和R’可以相同或不同，并且可以為氫或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或直鏈烷基。優(yōu)選R和R’均為—CH3。
A為皮質(zhì)甾類基團(tuán)殘基，橋基團(tuán)L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連 所述的R”是CO(CR4R5)O—T1，或CO(CR4R5)—T2T1是H，CO(O)x1(CH2)y1CH3或T2是H或Cl，其中x1為0或1的整數(shù)，y1是0至4的整數(shù) 當(dāng)R”是所述的殘基所在時(shí)，為CO(CR4R5)O—，通過其中的羰基與17位相連，氧與橋基團(tuán)L相連。
所述的殘基還可以在17位，為—O—，與橋基團(tuán)L相連。
二價(jià)橋基團(tuán)L選自—(CO)Ob1(CR’4R’5)na(CO)(R7)— 其中，na為0至4的整數(shù)，b1為0至1的整數(shù)，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個(gè)碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環(huán)，優(yōu)選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H。通過L中的羰基與甾類基團(tuán)殘基A相連，通過R7與NO供體相連 R7 選自下列基團(tuán)中的一種 —O(R8)O—，R8為C1～C4的亞烷基 —O(CH2)2O(CH2)2O—，—NHCH2CH2O—，或者 —OCH2C(Ph)O—，—O(CH2)2C(Ph)O—，Ph代表苯基。
—X是釋放一氧化氮的功能基團(tuán)，選自
R6為C1～C8的飽和或不飽和的烴基，優(yōu)選苯基。
根據(jù)上述定義 本發(fā)明的所述的化合物的皮質(zhì)激素殘基A所代表皮質(zhì)激素殘基中的H，H2，R，R’，R”的可以選自但不僅限于以下化合物的相應(yīng)基團(tuán)布地奈德、環(huán)索奈德、阿氯米松、阿爾孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯潑尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯波尼醇、地夫可特、地奈德、去羥米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、氟氯奈德、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、丁基氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍醋酸酯、氟潑尼定醋酸酯、氟潑尼松龍、氟氫縮松、哈西奈德、鹵倍他索丙酸酯、鹵米松、鹵潑尼松醋酸酯、氫可他酯、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲波尼松龍、莫米松糠酸酯、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松龍、波尼松龍25—二乙基氨基醋酸酯、、潑尼松、強(qiáng)的松龍戊酸酯、波尼立定、利美索龍、曲安西龍、曲安奈德、21—乙酰氧基孕烯諾龍、可的伐唑、安西奈德、氟替卡松丙酸酯、馬潑尼酮、替可的松、曲安西龍六縮丙酮、 本發(fā)明所得的任一化合物其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療人或哺乳動(dòng)物，特別是人類的炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病的藥物中應(yīng)用。其中炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病是指皮膚疾病如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、疹癢和超敏性反應(yīng)；鼻子、咽喉或肺部的炎性疾病如哮喘(包括過敏引起的哮喘反應(yīng))、鼻炎(包括枯草熱)、鼻息肉、慢性阻塞性肺病、間質(zhì)性肺部疾病和纖維變性；眼部炎癥包括結(jié)膜和結(jié)膜炎；炎性腸疾病如潰瘍性結(jié)腸炎和節(jié)段性回腸炎；或自體免疫性疾病如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備類皮質(zhì)激素藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備抗炎劑藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備免疫抑制類藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備血管生成抑制劑藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療呼吸道炎癥或變應(yīng)性疾病藥物的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療皮膚病學(xué)疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療眼科疾病的藥物中的的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療腸部炎癥疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療心腦血管疾病中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療心肌、血管局部缺血疾病中的應(yīng)用。
上述任一項(xiàng)的化合物在制備治療腫瘤疾病中的應(yīng)用。
一種藥用組合物，該組合物包含上述本發(fā)明所述的任一化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，及其與一種或多種生理學(xué)上可接受的藥物輔料混合。該組合物還包含另一種治療炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病的藥物。另一種炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病的藥物可以為β2腎上腺素受體激動(dòng)劑。該組合物還可以包含抑制或殺死微生物的藥物，抑制或殺死微生物的藥物是指抗菌素。
上述的藥用組合物，可以配制成液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑、噴霧劑與粉霧劑。上述制劑類型的定義由藥劑學(xué)(第五版，崔福德主編，人民衛(wèi)生出版社出版)中的相關(guān)劑型定義。
一種藥用粉霧劑制劑，該制劑含有上述任一項(xiàng)定義的式(II)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的乳糖或氨基酸。
本發(fā)明的化合物可以由下列方法制備得到將作為皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素即A—H(1)，H與A相應(yīng)的O相連，與相應(yīng)酰化劑二酸酐(2)反應(yīng)得到中間體(3)，(3)再和NO供體(8)經(jīng)酯化反應(yīng)生成目標(biāo)產(chǎn)物相應(yīng)的一氧化氮供體型糖皮質(zhì)激素(9)。
NO供體(8)是以R6—SH(4)為起始原料，與氯乙酸縮合、經(jīng)過過氧化氫氧化、再與硝酸作用、再和H—R7—H反應(yīng)得到。
具體工藝流程如下
由(1)到(2)的反應(yīng)可以選用的溶媒A選自吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的，酮類、醚類中的一種或幾種。優(yōu)選吡啶。
由(4)到(5)的縮和反應(yīng)可以選用的溶媒選自水、吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的酮類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優(yōu)選C1～C4的，反應(yīng)時(shí)加入適量的堿的水溶液，所述的堿為NaOH，KOH，碳酸鈉、碳酸鉀、優(yōu)選NaOH和碳酸鉀。加入的堿與化合物(2)的摩爾比為1.5～31。反應(yīng)溫度為0～50℃。
由(5)到(7)的反應(yīng)中，將化合物(5)溶于2～10倍(重量體積比)溶媒中，所述的溶媒選自四氫呋喃、C1～C4酮類、酯類、氯代烴類、醚、羧酸類中的一種或幾種。加入1.5～5倍(摩爾比)的H2O2，攪拌反應(yīng)1～10h，不經(jīng)分離，向反應(yīng)物中加入5～15倍(摩爾比)的發(fā)煙硝酸，升溫至50～110℃反應(yīng)1～6h，冷卻過濾得到化合物(7)。
化合物(8)的制備將摩爾比2～61的H—R7—H和化合物(7)溶于適量溶媒中，所用溶媒選自水、吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的醇類，酮類、酯類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優(yōu)選THF、吡啶、DMF、DMSO、C1～C4的氯代烴中的一種或幾種。加入10～50％的堿溶液，所述的堿選自NaOH、KOH、碳酸鈉、碳酸鉀中的一種或幾種、優(yōu)選碳酸鈉，所用的堿溶液的與化合物(7)的摩爾比(以所用的堿計(jì))為0.5～21，反應(yīng)1～6小時(shí)后用水稀釋、溶媒萃取。干燥后用柱層析[(乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]分離。
化合物(9)的制備，摩爾比為(0.5～1.5)(0.5～1.5)1的DCC、化合物(3)和(8)溶于適量溶媒中，加入DMAP適量(與化合物(8)摩爾比為0.01～0.1)所用溶媒選自吡啶、DMF、DMSO、四氫呋喃、C1～C4的酮類、酯類、氯代烴類、醚類中的一種或幾種，優(yōu)選氯代烴，在0～40℃下反應(yīng)2～10小時(shí)，過濾，濾液濃縮柱層析[(乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]即得目標(biāo)產(chǎn)物化合物(9) 本發(fā)明所制得的化合物及其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與至少一種藥學(xué)上可接受的輔料制成各種適用于口服、局部(如滴鼻、滴眼、吸入、腔道)及各種注射液形式的藥物。可以制成片劑、膠囊劑、乳膏劑、軟膏劑、搽劑、膜劑、栓劑、吸入劑、注射液、脂質(zhì)體注射液，液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑，、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑、噴霧劑與粉霧劑等藥劑。粉霧劑的載體為優(yōu)選為乳糖或氨基酸。
上述任一所述式(II)的化合物在治療哺乳動(dòng)物的疾病中的劑量以皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素A—H計(jì)為0.001mg-1mg/kg/天。
上述任一所述式(II)化合物，在治療哺乳動(dòng)物的疾病中的劑量以A—H的計(jì)為0.005mg-0.5mg/kg/天。
上述任一所述式(II)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病中的劑量以皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素A—H的計(jì)為0.001mg-1mg/kg/天 上述任一所述的式(II)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病中的劑量以皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素A—H的計(jì)為0.005mg-0.5mg/kg/天。
本發(fā)明所制得目標(biāo)化合物，實(shí)質(zhì)上是一種NO供體型糖皮質(zhì)激素，即用化學(xué)合成的方法將糖皮質(zhì)激素活性殘基與NO供體鍵合起來得到，在本發(fā)明中，采用了呋咱類化合物作為NO供體，與現(xiàn)有技術(shù)中如法國(guó)NICOX公司申請(qǐng)的中國(guó)專利ZL 97180284.X中公開的采用硝酸酯作為NO供體的技術(shù)方案相比，本發(fā)明采用的NO供體所制得的目標(biāo)化合物更為穩(wěn)定，能夠在常溫下長(zhǎng)期儲(chǔ)存而不變質(zhì)分解變質(zhì)。而本發(fā)明由于采用了1，2位是雙鍵的甾體激素殘基，與中國(guó)專利CN20071009805.5公開的采用氫化可的松為甾體激素殘基的NO供體型糖皮質(zhì)激素相比，抗炎作用有了顯著的提高的同時(shí)，更能夠顯著的降低糖皮質(zhì)激素的副作用，我們驚奇的發(fā)現(xiàn)，在采用1，2位是雙鍵的糖皮質(zhì)激素時(shí)，呋咱衍生物類NO供體的連接不但克服了糖皮質(zhì)激素的副作用，而且產(chǎn)生了顯著的協(xié)同作用，達(dá)到了意想不到的技術(shù)效果。綜上所述，本發(fā)明中所選用的1，2位是雙鍵的甾體激素母核，在和采用呋咱類的NO供體制成NO供體型糖皮質(zhì)激素時(shí)，與現(xiàn)有技術(shù)中的硝酸酯為供體的NO供體型糖皮質(zhì)激素和以1，2位是飽和鍵的以氫化可的松為甾體激素母核的以呋咱衍生物為供體的NO供體型糖皮質(zhì)激素相比，本發(fā)明所述的化合物既有NO供體型糖皮質(zhì)激素對(duì)慢性炎癥的更好的抗炎效果，令人意外的是，呋咱衍生物與1，2位是雙鍵的甾體母核的結(jié)合還產(chǎn)生了令人意想不到的對(duì)慢性炎癥的抗炎效果。根據(jù)外國(guó)文獻(xiàn)Wallace JL(Nitric oxide as a regulator of inflammatory processes[J].MemInst Oswaldo Cruz.2005，100(S1)5—9.)報(bào)道NO供體型糖皮質(zhì)激素對(duì)慢性炎癥模型的治療機(jī)理，其抗炎機(jī)制可能是由于在治療慢性炎癥時(shí)長(zhǎng)時(shí)間的釋放釋放低水平的NO，血管平滑肌舒張使內(nèi)皮層拉伸，變得更加緊密，阻礙了水和其他小分子的通透，從而抑制炎癥物質(zhì)的滲出，對(duì)抗炎癥的作用。其具體的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究，而在將本發(fā)明采用所選用的甾體激素母核和NO供體結(jié)合時(shí)，由于某種機(jī)制，使糖皮質(zhì)激素和呋咱衍生物的NO供體產(chǎn)生了協(xié)同作用，出現(xiàn)意想不到的抗炎效果。產(chǎn)生這種效果的原因可能是由于在對(duì)比實(shí)施例4中的NO體外釋放曲線所表現(xiàn)出來本發(fā)明所得的化合物在釋放低劑量的NO時(shí)，釋放的速度更快，維持一定釋放水平的持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)引起的。



圖1是NO體外釋放曲線圖
具體實(shí)施例方式 層析方法 層析柱的長(zhǎng)度最少70cm，內(nèi)部裝填254-硅膠，并將需要分離的有機(jī)物全溶于最少量的氯仿甲醇＝11中，用最少量254-硅膠將該溶液吸收后置于層析柱內(nèi)硅膠的上部，使用流動(dòng)相，洗脫流動(dòng)相采用[乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(V/V)]，層析柱下用若干個(gè)10ml試管接經(jīng)過柱層析得到的溶液，控制流速為10ml/3min，將每個(gè)試管的溶液用HPLC進(jìn)行分析，將保留時(shí)間相同的試管溶液合并，取主點(diǎn)的化合物進(jìn)行重結(jié)晶，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。
確定主點(diǎn)的方法將需要分離的有機(jī)物用HPLC進(jìn)行分析，除原料外峰面積最大的點(diǎn)確定為主點(diǎn)，其保留時(shí)間為主點(diǎn)的保留時(shí)間。
HPLC的條件按照化合物1相應(yīng)的AH的分析方法測(cè)定，如果沒有相應(yīng)的測(cè)定方法也可以按照以下方法測(cè)定。
設(shè)備HP 1084B液相色譜儀，HP 79850BLC終端和UV檢測(cè)器 柱材料Supelcosil Lc-18，5um，150×4.6mm 檢測(cè)波長(zhǎng)245nm 流動(dòng)相乙腈水四氫呋喃＝36643 柱溫25℃ 流速約0.8ml/分 合成實(shí)施例中對(duì)化合物的編號(hào)沿用前述流程圖對(duì)通式的編號(hào)結(jié)合實(shí)施例號(hào)編成，如流程圖中通式(3)化合物，具體到實(shí)施例1中相應(yīng)化合物為(3.1)，實(shí)施例2中相應(yīng)化合物為(3.2) DCC是二環(huán)己基碳二酰亞胺 DMAP是4—N，N二甲基氨基吡啶，實(shí)施例中數(shù)粒指2～5粒，每粒20～50mg NO供體的合成 苯巰基乙酸(5.1)的合成 將苯硫酚(4.1)24.2g(0.22mol)，氫氧化鈉8.8g(0.22mol)溶于150ml乙醇中，加入由氯乙酸22.78g(0.24mol)和碳酸鈉12.7g(0.12mol)配成得200ml水溶液，室溫?cái)嚢?h，回流1h。冷卻至室溫后加入6mol/L鹽酸調(diào)pH等于2，減壓蒸去乙醇，有白色沉淀生成，過濾，得白色棒狀晶體33.3g，收率90％，m.p.62—63℃。
3)3，4—二苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物(7.1)的合成 將(5.1)20.16g(0.12mol)溶于90ml冰醋酸中，滴加24.3ml 30％H2O2，室溫?cái)嚢?h，得(6.1)。產(chǎn)物不經(jīng)分離。直接向反應(yīng)液中緩慢滴加發(fā)煙硝酸48ml，內(nèi)溫不超過40℃，1h內(nèi)滴完。升溫至100℃反應(yīng)，有大量紅棕色氣體產(chǎn)生，溶液從無色逐漸變?yōu)辄S色，紅棕色。4h后反應(yīng)液冷卻至室溫，有白色針狀晶體析出，過濾，干燥得16.8g，收率76％，m.p.153—155℃ 4.1)2-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙醇(8.1)的合成 將二甘醇1.06g(10mmol)和(7.1)1g(2.7mmol)溶于10mlTHF中，滴入25％氫氧化鈉水溶液(0.5ml，3mol)，2小時(shí)后，反應(yīng)液從淡黃色變?yōu)槌赛S色。將反應(yīng)液傾入20ml水中，用乙酸乙酪(3×20ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥。過濾后將濾液濃縮。柱層析[乙酸乙酯石油醚(60—90℃)＝12(VV)]得油狀物0.32g，收率30％。ESLMS[M十H1’＝331。
4.2)2-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]乙醇(8.2)的合成 將乙醇胺0.6g(10mmol)和(7.1)1g(2.7mmol)溶于10mlTHF中，滴入25％氫氧化鈉水溶液(0.5ml，3mmol)，2小時(shí)后，反應(yīng)液從淡黃色變?yōu)槌赛S色。將反應(yīng)液傾入20ml水中，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，有機(jī)層合并后加飽和食鹽水洗一次，用無水硫酸鈉干燥。過濾后將濾液濃縮。柱層析[乙酸乙酯石油醚(60—90℃)＝12(VV)]得淡黃色油狀物0.26g，收率35％。ESLMS[M十H]’＝331。
實(shí)施例1 呋咱甲潑尼龍的合成 1)4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代-丁酸(3.1)的合成 將5.62g(15mmol)甲潑尼龍溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時(shí)后停止反應(yīng)，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調(diào)pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產(chǎn)物6.01g，收率84.4％。
2)4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.1)的合成 將化合物(3.1)0.6g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC0.206g(1mmol)，DMAP數(shù)粒，室溫下反應(yīng)20h，至反應(yīng)液中有白色絮狀產(chǎn)物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.45g即(9.2)收率50％。結(jié)構(gòu)式如下
元素分析計(jì)算值(％)C，58.00；H，5.89；N，3.56；O，28.47；S，4.08元素分析實(shí)測(cè)值(％)C38H46N2O14S C，58.17；H，5.93；N，3.63；O，28.18；S，4.09 13C-NMR(CDCl2)1位至38位碳的數(shù)值 實(shí)施例2 呋咱地塞米松 1)2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代-乙酸(3.2)的合成 將5.89g(15mmol)地塞米松溶于80ml吡啶中，加入2.58g(30mmol)乙二酸酐，加熱回來8小時(shí)后停止反應(yīng)，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調(diào)pH＝5靜止析出白色固體，過濾水洗得到產(chǎn)物4.69g，收率65.3％IR 2)2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代—乙酸—2—[2-(3-苯磺酰基—1，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.2)的合成 將化合物(3.2)0.5g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數(shù)粒，室溫下反應(yīng)20h，至反應(yīng)液中有白色絮狀產(chǎn)物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.35g即(9.2)收率50％。結(jié)構(gòu)式如下
元素分析計(jì)算值(％)C，55.66；H，5.32；F，2.45；N，3.61；O，28.84；S，4.13 元素分析實(shí)測(cè)值(％)C36H41FN2O14S C，55.51；H，5.26；F，2.57；N，3.58；O，28.63；S，4.45 13C-NMR(CDCl2)1位至36位碳的數(shù)值 實(shí)施例3 呋咱環(huán)索奈德 1)4—(去異丁酰環(huán)索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸(3.3)的合成 將7.62g(15mmol)去異丁酰-環(huán)索奈德溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時(shí)后停止反應(yīng)，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調(diào)pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產(chǎn)物5.5g，收率55％。
2)4—(去異丁酰環(huán)索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.3)的合成 將0.7g(1mmol)化合物(3.3)溶于無水二氯甲烷中加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數(shù)粒，室溫下反應(yīng)20h，至反應(yīng)液中有白色絮狀產(chǎn)物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.40g即(9.3)收率35％。結(jié)構(gòu)式如下
元素分析計(jì)算值(％)C，59.85；H，6.16；N，3.17；O，27.18；S，3.63 元素分析實(shí)測(cè)值(％)C44H54N2O15S C，59.63；H，6.04；N，3.21；O，27.41；S，3.71 13C-NMR(CDCl2)1位至44位碳的數(shù)值 實(shí)施例4 呋咱曲安西龍 1)6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸(3.4)的合成 將曲安西龍5.9g(15mmol)溶于80ml吡啶中，加入3.84g(30mmol)己二酸酐，加熱回流10小時(shí)后停止反應(yīng)，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調(diào)pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產(chǎn)物5.1g，收率53％。
2)將6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]—乙酯(9.3)的合成 將化合物(3.4)0.1mmol溶于無水二氯甲烷中加入(8.2)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數(shù)粒，室溫下反應(yīng)20h，至反應(yīng)液中有白色絮狀產(chǎn)物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.3g即(9.4)收率30％。結(jié)構(gòu)式如下
元素分析計(jì)算值(％)C，56.17；H，5.80；F，2.28；N，5.04；O，26.86；S，3.85 元素分析實(shí)測(cè)值(％)C39H48FN3O14S C，56.28；H，5.88；F，2.31；N，4.97；O，26.71；S，3.85 13C-NMR(CDCl2)1位至39位碳的數(shù)值 實(shí)施例5 外用制劑 以下實(shí)施例用于詳細(xì)解釋說明本發(fā)明配伍組方，但不受限于下述實(shí)施例，以下實(shí)施例制劑的制備按相應(yīng)制劑的常規(guī)制備方法制成。
活性成分實(shí)施例1制得4-(甲潑尼龍-21-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，按甲潑尼龍計(jì)1g 藥用輔料 環(huán)糊精 20g 羧甲基纖維素50g 丙二醇 200g 尼泊金乙酯 5g 蒸餾水 加至1000ml 制備工藝 將活性成分與環(huán)糊精分別過100目篩，按照處方量稱取，混勻，加入適量無菌蒸餾水充分研磨；將羧甲基纖維素與丙二醇混勻，然后加入適量熱蒸餾水，放置待溶脹成凝膠后，再加入含有研磨后的活性成分和環(huán)糊精與尿素和尼泊金乙酯的水溶液，加水至足量即可。
其活性成分中還可以增加抗菌素如紅霉素、氟康唑等藥物 實(shí)施例6 吸入制劑 活性成分4—(去異丁酰環(huán)索奈德-21-氧)-4-氧代-丁酸[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，以環(huán)索奈德計(jì)為2g 輔料 乳糖 1000g 制備工藝 將活性成分和乳糖分別粉碎成99％粒徑為2-5μm的固體，混勻后，裝填如膠囊即可。
其活性成份還可以增加β2腎上腺素受體激動(dòng)劑如馬來酸福美特羅、沙美特羅。
實(shí)施例7 口服制劑-分散片 活性成分2-(地塞米松-21-氧-)-2-氧代—乙酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯，按地塞米松計(jì)5g 藥用輔料 羥丙基γ-環(huán)糊精 10g 預(yù)膠化淀粉 300g 制備工藝主藥過100目篩，羥丙基γ-環(huán)糊精和預(yù)膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的主藥，與羥丙基γ-環(huán)糊精充分混勻后研磨，再與預(yù)膠化淀粉混合均勻，直接壓片即得。每片活性成分以地塞米松計(jì)為5mg 實(shí)施例8 口服制劑—膠囊 活性成分6—(曲安西龍-21-氧)-6-氧代-己酸-[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙胺基]—乙酯，以曲安西龍計(jì)為10g 二甲基β-環(huán)糊精40g 羥乙酸纖維素 300g 瓜耳膠50g 10％淀粉漿適量 制備工藝 先將所有的固體輔料過100目篩，按處方量稱取，將活性成分和二甲基β-環(huán)糊精混勻，加入適量蒸餾水充分研磨后，加入羥乙酸纖維素、瓜耳膠和10％淀粉漿適量制粒，60℃以下烘干，18目篩整粒，膠套充填即可，每粒膠囊含活性成分以甲基潑尼松龍計(jì)算為10mg。
實(shí)施例9. 17-呋咱莫米松的合成 1)4—(莫米松-17-氧)-4-氧代-丁酸(3.9)的合成 將莫米松6.1g(15mmol)溶于80ml吡啶中，加入3g(30mmol)丁二酸酐，加熱回流10小時(shí)后停止反應(yīng)，冷卻后倒入200ml飽和冰鹽水中，用鹽酸調(diào)pH＝5，靜止析出白色固體，過濾、水洗，得到產(chǎn)物5.1g，收率53％。
2)4-(莫米松-17-氧-)-4-氧代—丁酸—2—[2-(3-苯磺?；?，2，5—惡二唑—2—氧化物—4—氧—)乙氧基]乙酯(9.1)的合成 將化合物(3.9)0.6g(1mmol)溶于20ml無水二氯甲烷中，加入(8.1)1mmol，DCC 0.206g(1mmol)，DMAP數(shù)粒，室溫下反應(yīng)20h，至反應(yīng)液中有白色絮狀產(chǎn)物生成，過濾，濃縮柱層析乙酸乙酯石油醚(60～90℃)＝12(VV)]，得到固體0.45g即(9.9)收率50％。結(jié)構(gòu)式如下
元素分析計(jì)算值(％)C，54.35；H，5.28；Cl，8.44；N，3.34；O，24.77；S，3.82 元素分析實(shí)測(cè)值(％)C38H44Cl2N2O13S C，54.22；H，5.21；Cl，8.51；N，3.36；O，24.86；S，3.84 13C-NMR(CDCl2)1位至39位碳的數(shù)值 試驗(yàn)實(shí)施例1 穩(wěn)定性對(duì)比試驗(yàn) 參考中國(guó)藥典2005原料藥和藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，分別在常溫、高溫條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)照品1～3 采用中國(guó)專利CN 97180284.X公開的以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍為甾體激素母核的NO供體型糖皮質(zhì)激素，分別為 甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯、 地塞米松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 曲安西龍-21-(3-硝基氧)丙酸酯 并按照實(shí)施例8的方法制成膠囊為對(duì)照品1、2、3，活性成分以相應(yīng)的甾體激素母核計(jì)均為10mg/粒。
實(shí)驗(yàn)品1～3 分別采用實(shí)施例1、2、4所制得的活性成分(9.1)、(9.2)、(9.4)按照實(shí)施例8的方法制成膠囊為實(shí)驗(yàn)品1、2、3，活性成分含量以相應(yīng)的甾體激素母核計(jì)也均為10mg/粒 取實(shí)驗(yàn)品1～3與對(duì)照品1～3膠囊各60粒，在不同的條件下，即常溫(25℃±2℃/60％RH±10％)下放置0天，1個(gè)月，3個(gè)月，分別在高溫(60℃±2℃)下放置5天，10天，每次分別取實(shí)驗(yàn)品1、2、3，對(duì)照品1，2，3的膠囊各10粒，進(jìn)行含量分析。其中不同的條件，參考中國(guó)藥典2005原料藥和藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，RH代表相對(duì)濕度，±后面的數(shù)代表可以浮動(dòng)的數(shù)值范圍。
表1 穩(wěn)定性數(shù)據(jù)對(duì)比

穩(wěn)定性對(duì)照試驗(yàn)表明，與對(duì)照品相比，各個(gè)儲(chǔ)存條件下實(shí)驗(yàn)品組的含量均具顯著性差異(P<0.05)，而且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增長(zhǎng)，活性成分含量的差距越來越大，更說明采用本發(fā)明所得化合物為活性成分的實(shí)驗(yàn)品制得的膠囊的穩(wěn)定性要優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。
試驗(yàn)實(shí)施例2 藥理實(shí)驗(yàn) 1.皮質(zhì)激素藥理活性 藥理活性可以采用糖皮質(zhì)激素激動(dòng)劑活性的功能體外試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
依據(jù)K.P.Ray等(Biochem J.(1997)，328，707—715)描述的功能試驗(yàn)，給出一種糖皮質(zhì)激素激動(dòng)劑的反式抑制活性測(cè)試方法。在37℃下，用適當(dāng)劑量的受試化合物處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有報(bào)告基因的A549細(xì)胞1小時(shí)，該報(bào)告基因含來自ELAM啟動(dòng)子連接sPAP(分泌性磷酸脂酶)基因的響應(yīng)NF-КB元件。然后用腫瘤壞死因子(TNF，10ng/ml)刺激該細(xì)胞16小時(shí)，并用標(biāo)準(zhǔn)的比色法測(cè)試此時(shí)產(chǎn)生的堿性磷酸酶含量。構(gòu)建劑量響應(yīng)曲線，并可通過曲線估算EC50值。
依據(jù)R.J.H.Austin等(Eur Resp J.(2002)，20，1386-1392)描述的功能試驗(yàn)，測(cè)試化合物立接反式激活基因表達(dá)的能力。在37℃下，用適當(dāng)劑量的受試化合物處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有報(bào)告基因的A549細(xì)胞6個(gè)小時(shí)，該報(bào)告基因含小鼠乳腺瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù)系列(MMTV-LTR)的糖皮質(zhì)激素響應(yīng)區(qū)連接renilla熒光素酶基因。通過將細(xì)胞酶與適合的底物一起孵育后，通過測(cè)量所發(fā)出的光來測(cè)定熒光素酶活性。構(gòu)建劑量響應(yīng)曲線，并通過曲線估算EC50值，其中最大響應(yīng)值是相對(duì)于地塞米松值(100％)來計(jì)算的。
實(shí)施例1的化合物在該試驗(yàn)中的最大響應(yīng)值小于70％。
實(shí)施例2的化合物在該試驗(yàn)中的最大響應(yīng)值小于50％。
實(shí)施例3的化合物在該試驗(yàn)中的最大響應(yīng)值小于30％ 實(shí)施例4的化合物在該試驗(yàn)中的最大響應(yīng)值小于50％ 孕酮受體活性的篩選 已經(jīng)有報(bào)道稱人乳癌細(xì)胞系T47D對(duì)孕酮有上調(diào)內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的反應(yīng)(Di Lorenzo等人，Cancer Research(1991)51，4470—4475)。將T47D細(xì)胞以每孔1 X 105個(gè)細(xì)胞的密度接種到96孔板中并使其在37℃下生長(zhǎng)一夜。將甾族化合物溶解于DMSO中，將其加入到細(xì)胞中(最終DMSO濃度為0.7％)，然后將其在37℃下培養(yǎng)24小時(shí)。然后將該細(xì)胞用PBS洗滌并用RIPA緩沖劑(在磷酸鹽緩沖液中包含1％IGEPAL，0.5％脫氧膽酸鈉，0.1％SDS)進(jìn)行溶解。用溶解于1M二乙醇胺、0.28M NaCl、0.5mMMgCl2中的作為底物的對(duì)-硝基苯磷酸酯(1.5mg/ml)用分光光度法(405nm)來對(duì)堿性磷酸酯酶的活性進(jìn)行測(cè)定。劑量響應(yīng)曲線是由所評(píng)估的EC50值得出的。
實(shí)施例2 的化合物在該試驗(yàn)中的EC50值大于100nM。
通過以上實(shí)驗(yàn)證明，實(shí)施例1到4的化合物具有明顯的藥理活性。
試驗(yàn)實(shí)施例3 實(shí)施例制得的化合物與對(duì)照品相比，對(duì)骨質(zhì)、血壓的影響 1.材料和方法 1.1 材料4月齡雌性SD大鼠70只，重量200±10g。隨機(jī)分為7組，每組10只，對(duì)照組10只和服藥組60組。采用試驗(yàn)實(shí)施例1中的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照品組分組(給藥采用實(shí)施例6制成的膠囊內(nèi)容物)，所用劑量為以原甾體激素計(jì)。
1.2 飼養(yǎng)各組任其自由活動(dòng)，統(tǒng)一條件喂養(yǎng)。
2、給藥與對(duì)比 2.1、給藥情況如下表對(duì)照組給與安慰劑(按照實(shí)施例8的方法得到的不含活性成分的膠囊的內(nèi)容物)，服藥組分別給與的情況如下。
安慰劑按照實(shí)施例8的方法得到的不含活性成分的膠囊內(nèi)容物。
2.2、觀察指標(biāo)90天后進(jìn)行血壓測(cè)定，在進(jìn)行骨檢驗(yàn) (1)全身BMD(骨密度)XR-36型雙能x線骨密度儀掃描測(cè)量各組大鼠BMD(美國(guó)Norland公司)； (2)大鼠股骨干重、灰重及灰分鈣含量測(cè)定采用陶永輝等(陶永輝，譚成，蔡剛明.去勢(shì)雌性大鼠骨質(zhì)疏松癥的藥物干預(yù)療效的評(píng)價(jià).中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2002，847-50)的方法。
(3)血壓測(cè)量切開頸部皮膚，分離出左頸總動(dòng)脈后，進(jìn)行插管固定，連接八導(dǎo)生理記錄儀，穩(wěn)定10min后，記錄血壓，測(cè)出收縮壓、舒張壓。
2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，在SPSS10.0軟件下處理，所有數(shù)據(jù)方差分析兩兩比較t檢驗(yàn)。
2.4 結(jié)論 1 各組收縮壓、舒張壓的變化 通過上述實(shí)驗(yàn)證明，相應(yīng)組別的實(shí)驗(yàn)品組與對(duì)照品組的血壓對(duì)比具有顯著性(P<0.01)，而各個(gè)組別的實(shí)驗(yàn)品組與采用安慰劑的對(duì)照品組的血壓相比，均無顯著性。說明與能夠引起高血壓的傳統(tǒng)糖皮質(zhì)激素相比，采用本發(fā)明制備的NO供體型糖皮質(zhì)激素能夠明顯抑制現(xiàn)有引起高血壓的副作用，甚至將其抑制到與安慰劑相同 2 各組骨的生理數(shù)據(jù)的變化 1-3組與其它組BMD的分析結(jié)果 通過上述實(shí)驗(yàn)證明，作為NO供體型糖皮質(zhì)激素的1-3組的化合物與安慰組對(duì)BMD的影響無顯著性差異，而與相應(yīng)的糖皮質(zhì)激素相比具有顯著性差異，由此說明本發(fā)明制得的NO供體型糖皮質(zhì)激素能夠顯著的克服傳統(tǒng)糖皮質(zhì)激素致BMD降低的副作用。
1-3組與其它組股骨干重的分析結(jié)果 通過上述實(shí)驗(yàn)證明，作為NO供體型糖皮質(zhì)激素的1-3組的化合物與安慰組對(duì)股骨干重的影響無顯著性差異，而與相應(yīng)的糖皮質(zhì)激素相比，能夠限制的克服股骨干重降低的副作用 1-3組與其它組股骨灰重的分析結(jié)果 通過上述實(shí)驗(yàn)證明，與對(duì)股骨干重的影響相似，作為NO供體型糖皮質(zhì)激素的1-3組的化合物與安慰組對(duì)股骨干重的影響無顯著性差異，而與相應(yīng)的糖皮質(zhì)激素相比，能夠限制的克服股骨干重降低的副作用。
對(duì)比實(shí)施例4 體外NO釋放試驗(yàn) 按照馮曉春等(ZLR-8對(duì)大鼠胃潰瘍愈合的影響及體外一氧化氮的釋放，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，35(4)357-360)和趙蕊等(生理溶液中硝普鈉釋放一氧化氮巰基通路的動(dòng)力學(xué)研究.中國(guó)藥學(xué)雜志，2003，38(2)104—105)公開的方法進(jìn)行測(cè)驗(yàn) 1 Greiss試劑的配制 氨苯磺胺4g、N—萘乙烯二胺鹽酸鹽0.2g和85％磷酸10mL用蒸餾水稀釋至100mL。
2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 配制0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.20，0.40μg/mL的亞硝酸鹽 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 配制0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.20，0.40μg/mL的亞硝酸鹽氮系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取10mL與Greiss試劑2.5mL充分混勻，室溫放置10min后，于540nm測(cè)定其吸收度。得線性回歸方程A＝2.3908c+0.0013，R2＝0.9995。其中A代表吸收度， c 代表亞硝酸鹽濃度(μg/mL) 3 目標(biāo)化合物NO釋放量的測(cè)定化合物先溶于0.01mol/L二甲亞砜中，再用磷酸緩沖液稀釋。緩沖液里含有過量的半胱氨酸(5mmol/L)，混勻，受試物終濃度為10-4mol/L。將溶液置于37℃水浴，于不同時(shí)間點(diǎn)取溶液2mL與Greiss試劑500μL混合，室溫放置10min，于540nm處測(cè)吸收度。從給藥起每15分鐘為一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取3個(gè)樣本，NO釋放量以其相當(dāng)于氧化產(chǎn)物——亞硝酸鹽的量(μg/mL)表示。
測(cè)定的釋放度曲線見圖1 從圖1的NO體外釋放度曲線圖中可以看出，本發(fā)明的實(shí)施例1～4制得的化合物和現(xiàn)有技術(shù)中的相應(yīng)NO供體型糖皮質(zhì)激素相比，NO釋放更為迅速，能夠更快的達(dá)到釋藥高峰，穩(wěn)定的維持在較高的釋放度上。由此說明本發(fā)明所選用的NO供體在制成NO供體型糖皮質(zhì)激素后，NO的釋放更快，更穩(wěn)定。
對(duì)比實(shí)施例4 對(duì)大鼠棉球肉芽腫抗炎效果對(duì)比動(dòng)物試驗(yàn) 1.試驗(yàn)動(dòng)物與分組，SD大鼠130只，雌雄不限體重200g±10g，分為，實(shí)驗(yàn)1～3組，對(duì)照1～5組，對(duì)照1’～4’組，以及陽性對(duì)照組。分別以采用實(shí)施例1、2、4所制得的活性成分(9.1)、(9.2)、(9.4)為實(shí)驗(yàn)組1～3所用藥物，以采用中國(guó)專利CN 97180284.X公開的以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍、氫化可的松為甾體激素母核的NO供體型糖皮質(zhì)激素 甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯、 地塞米松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 曲安西龍-21-(3-硝基氧)丙酸酯 氫化可的松-21-(3-硝基氧)丙酸酯 為對(duì)照組1～4所用藥物，以中國(guó)專利CN 200710019806.5公開的NO供體型氫化可的松為對(duì)照組5 以甲潑尼龍、地塞米松、曲安西龍、氫化可的松為對(duì)照組1’～4’組所用藥物，以上各組的劑量以原糖皮質(zhì)激素計(jì)分別為 氫化可的松 20mg/kg 甲潑尼龍 1mg/kg 地塞米松 0.5mg/kg 曲安西龍 0.5mg/kg 2.實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù)外國(guó)文獻(xiàn)Intahphuak S(Intahphuak S，Panthong A，Kanjanapothi D，etal.Anti-inflammatory and analgesic activities of Mallotus spodocarpus Airy Shaw[J].JEthnopharmacol，2004，9069—72)等人公開的方法，將上述隨機(jī)分組的大鼠用20％烏拉坦以5mL/kg的劑量麻醉后，手術(shù)植入棉球，棉球的重量為50±1mg，手術(shù)后第二天開始灌胃給藥，連續(xù)7d。給藥容量為10ml/kg，以總?cè)萘?％DMSO溶解，5％吐溫-80助溶，0.5％CMC-Na混懸。給藥劑量如上所述，并以溶劑作為陽性對(duì)照組。于末次給藥后12h處死大鼠，剝離棉球，將棉球置于干燥箱中65℃，12h烘干，稱取棉球重量，減去棉球重量即為肉芽重量，所述的腫脹抑制率＝(相應(yīng)組肉芽重量-陽性對(duì)照組肉芽重量)/陽性對(duì)照組肉芽重量 測(cè)量結(jié)果見下表 從上表中數(shù)據(jù)可以看出本發(fā)明所制得的化合物(9.1)、化合物(9.2)、化合物(9.4)對(duì)棉球誘導(dǎo)的大鼠肉芽組織增生的慢性炎癥有顯著的抑制作用，與相應(yīng)的等摩爾劑量的原型甾體激素相比，抗炎效果也具有顯著差異(P<0.05)，而與中國(guó)專利ZL 97180284.X公開的采用相同的甾體激素母核的硝酸酯類NO供體型糖皮質(zhì)激素相比，本發(fā)明所制得的化合物對(duì)棉球誘導(dǎo)的大鼠肉芽組織增生的慢性炎癥的抗炎效果也具有顯著差異(P<0.05)。
然而，對(duì)與同樣采用了呋咱類NO供體的中國(guó)專利ZL 97180284.X公開的以氫化可的松為甾體激素母核的NO供體型糖皮質(zhì)激素，雖然與采用同樣摩爾劑量的氫化可的松的對(duì)照組4’相比，抗炎效果稍好，但并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著性。
權(quán)利要求
1.如下通式(II)的化合物
A—L—X
其中A為甾體激素殘基，具有如下結(jié)構(gòu)，
其中在1-2位是雙鍵，A與L相連的位置是通過A中的R”上的羥基，也可以通過17位上的羥基相連，
其中，取代通式中所述的CH基中的H或CH2中的二個(gè)氫H2的取代基可如下
在2位，可以是F，Cl，Br
在3位，可以是，CO(酮基)，—O—CH2—CH2—Cl，OH
在4-5位，可以是雙鍵；
在5-6位，可以是雙鍵；
在6位，可以是Cl，F(xiàn)，CH3，—CHO；
在7位，可以是Cl，Br
在9位可以是Cl，F(xiàn)
在11位，可以是OH，CO，Cl；
在16位可以是CH3，OH，＝CH2
在17位，可以是OH，CH3，OCO(O)x(CH2)yCH3，或
即糠?；?br> 其中x為0或1的整數(shù)，y是0至4的整數(shù)，
在16-17位置，可以是下述基團(tuán)；
其中，R2和R3可以相同或不同，并可以為氫或1至8個(gè)碳的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈，或環(huán)；
R和R’可以相同或不同，并且可以為氫或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或直鏈烷基；
A為皮質(zhì)甾類基團(tuán)殘基，橋基團(tuán)L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連
所述的R”是CO(CR4R5)O—T1，或CO(CR4R5)—T2
T1是H，CO(O)x1(CH2)y1CH3或T2是H或Cl，其中x1為0或1的整數(shù)，y1是0至4的整數(shù)
當(dāng)R”是所述的殘基所在時(shí)，為CO(CR4R5)O—，通過其中的羰基與17位相連，氧與橋基團(tuán)L相連；
所述的殘基還可以在17位，為—O—，
二價(jià)橋基團(tuán)L選自
—(CO)Ob1(CR’4R’5)na(CO)(R7))—
其中，na為0至4的整數(shù)，b1為0至1的整數(shù)，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個(gè)碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環(huán)，優(yōu)選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H；
R7選自下列基團(tuán)中的一種
—O(R8)O—，R8為C1～C4的亞烷基
—O(CH2)2O(CH2)2O—，—NHCH2CH2O—，或者
—OCH2C(Ph)O—，—O(CH2)2C(Ph)O—，Ph代表苯基；
—X是釋放一氧化氮的功能基團(tuán)，選自
R6為C1～C8的飽和或不飽和的烴基。
2.如權(quán)利要求1所述的式(II)化合物，優(yōu)選通過A中的R”上的羥基相連。
3.如權(quán)利要求1或2所述的式(II)化合物，其特征是R和R’均為—CH3。
4.如權(quán)利要求1或3中任一所述的化合物，在16-17位置的下述基團(tuán)
其R2為H，R3為正丙基、環(huán)己基。
5.如權(quán)利要求1至4中任一所述的式(II)化合物中釋放一氧化氮的功能基團(tuán)，其特征是所述的R6優(yōu)選含有苯環(huán)的取代基。
6.如權(quán)利要求1至5中任一所述的式(II)化合物，其特征在于甾體殘基A的H，H2，R1，R2，R3具有下面所列的化合物所定義的結(jié)構(gòu)；布地奈德、環(huán)索奈德、阿氯米松、阿爾孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯潑尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯波尼醇、地夫可特、地奈德、去羥米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、氟氯奈德、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、丁基氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍醋酸酯、氟潑尼定醋酸酯、氟潑尼松龍、氟氫縮松、哈西奈德、鹵倍他索丙酸酯、鹵米松、鹵潑尼松醋酸酯、氫可他酯、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲波尼松龍、莫米松糠酸酯、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松龍、波尼松龍25—二乙基氨基醋酸酯、、潑尼松、強(qiáng)的松龍戊酸酯、波尼立定、利美索龍、曲安西龍、曲安奈德、21—乙酰氧基孕烯諾龍、可的伐唑、安西奈德、氟替卡松丙酸酯、馬潑尼酮、替可的松、曲安西龍六縮丙酮。
7.如權(quán)利要求1至6中任一所述的式(II)或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎癥性、變應(yīng)性或過敏性疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.一種藥用組合物，包括權(quán)利要求1至7中任一所述的式(II)化合物或其生理學(xué)上可接受鹽或溶劑合物和至少一種藥學(xué)上的載體。
9.一種制備如權(quán)利要求1至7中任一所述的式(II)化合物的方法包括如下步驟
1)將作為皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素即A—H(1)在有機(jī)溶劑中與?；瘎┒狒?2)反應(yīng)得到中間體(3)
2)中間體(3)再和NO供體(8)經(jīng)酯化反應(yīng)生成目標(biāo)產(chǎn)物相應(yīng)的一氧化氮供體型糖皮質(zhì)激素式(II)化合物
3)以R6—SH(4)為起始原料，與氯乙酸縮和、經(jīng)過過氧化氫氧化、再與硝酸作用、再和H—R7—H(5)反應(yīng)得到NO供體(8)。
10.權(quán)利要求1至7中任一所述的項(xiàng)式(II)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病中的劑量以皮質(zhì)激素殘基A所代表的皮質(zhì)激素A—H計(jì)為0.001mg-5mg/kg/天。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種一氧化氮供體型糖皮質(zhì)激素，為如下通式的化合物(II)或其酯或鹽A-L-X，其中A為甾體激素殘基，橋基團(tuán)L可以與R”或17位上的羥基以酯鍵的形式相連，二價(jià)橋基團(tuán)L選自-(CO)Ob1(C R’4R’5)na(CO)(R7))-，其中，na為0至4的整數(shù)，b1為0至1的整數(shù)，R4、R’4或R’5、R5相等或彼此不同并選自H，具有1至8個(gè)碳原子的飽和或不飽和烴基，可以為直鏈、支鏈或環(huán)，優(yōu)選na＝2，b1為0，R4＝R5＝R’4＝R’5＝H；本發(fā)明還提供了該化合物或其生理上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應(yīng)性或過敏性疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/58GK101397328SQ20071005979
公開日2009年4月1日 申請(qǐng)日期2007年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者盧彥昌, 靜 李, 陳立營(yíng), 松 陳 申請(qǐng)人:天津藥業(yè)研究院有限公司