專利名稱：清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及以青黛、甘草、訶子、薄荷腦、冰片、人工牛黃、聚乙二醇6000為原料制成的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

背景技術(shù)：
清咽滴丸是疏風(fēng)清熱，解毒利咽。用于風(fēng)熱喉痹，咽痛，咽干、口渴；或微惡風(fēng)、發(fā)熱，咽部紅腫，舌邊尖紅，苔薄白或薄黃，脈浮數(shù)或滑數(shù)，適于急性咽炎見上述證候者的藥物，具有劑量小，吸收快，服用方便，利于攜帶，安全可靠之特點(diǎn)，對咽炎患者有很好的療效。自投放市場以來，以其療效確切、見效迅速等優(yōu)點(diǎn)得到廣大病患者的普遍認(rèn)可。現(xiàn)有部頒標(biāo)準(zhǔn)號WS3-176(Z-25)-97(Z)中記載“清咽滴丸 [處方]青黛100g 甘草100g 訶子80g 薄荷腦80g 冰片20g 人工牛黃12g 聚乙二醇6000 500g [制法]取聚乙二醇6000加熱溶化，加入青黛充分?jǐn)嚢瑁瑸V過，一次加入甘草膏(注1)、棵子膏(注2)人工牛黃、冰片、薄荷腦、充分?jǐn)嚢?、混合均勻、過篩，在90-100攝氏度保溫滴于15-20攝氏度的液體石蠟中冷卻，制成約30000丸滴丸，擦干液體石蠟，包衣，即得。
[性狀]本品為棕褐色至黑褐色的滴丸；味微苦澀，氣辛涼。
[鑒別]1.取本品40粒，研細(xì)，加乙醇30ml，溫?zé)崛芑?，趁熱過濾。取濾液10ml，加三氯化鐵試液3滴，呈墨綠色沉淀。
2.取本品40粒，研細(xì)，加三氯甲烷5ml，振搖使溶化，濾過，濾液作為供試品溶液。另取膽酸、去氧膽酸對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml各含1mg的混合液，作為對照品溶液a，再取靛藍(lán)、靛玉紅對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml中各含1mg的混合液，作為對照品溶液b。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μl分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，立即檢視。供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3.取本品2g，加無水乙醇5ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取冰片與薄荷腦對照品，加乙醇分別制成每1ml中含冰片20mg，薄荷腦60mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μ1，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯-環(huán)己烷(18∶2∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛乙醇-硫酸(100∶4)溶液，在80℃烘約10分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[檢查] 應(yīng)符合滴丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國藥典1995年版一部附錄I k) [含量測定]照高效液相色譜法(中國藥典1995年版一部附錄VID)測定。
系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇-二甲基亞砜-2％醋酸(51∶34∶15)為流動相，檢測波長為450nm理論板數(shù)按膽紅素峰計(jì)算為10500。
對照品溶液的制備取膽紅素約7mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加冰醋酸-三氯甲烷(1∶4)約80ml，超聲處理，10分鐘后取出，放冷至室溫，加冰醋酸-三氯甲烷(1∶4)，稀釋到刻度，搖勻，精密量取2ml，置50ml棕色量瓶中，用冰醋酸-三氯甲烷(1∶4)稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備取清咽滴丸2g，精密稱定，置10ml棕色容量瓶中，加冰醋酸-三氯甲烷(1∶4)約8ml，超聲處理10分鐘，取出，放冷至室溫，用冰醋酸-三氯甲烷(1∶4)，稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。
測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，量取峰面積，計(jì)算，即得。本品每1g含膽紅素(C33H36N4O6)不少于15μg 。
[功能與主治]疏風(fēng)清熱，解毒利咽。用于風(fēng)熱喉痹，咽痛，咽干、口渴；或微惡風(fēng)、發(fā)熱，咽部紅腫，舌邊尖紅，苔薄白或薄黃，脈浮數(shù)或滑數(shù)，適于急性咽炎見上述證候者。
[用法與用量]含服，一次4-6粒，一日3次。[注意事項(xiàng)]孕婦慎服。
[規(guī)格]每丸重20mg。[儲藏]密封，置陰涼干燥處。
注(1)甘草膏取甘草加水，煎煮3次，每次2小時(shí)，合并煎液，濃縮之相對密度1.18-1.23(85攝氏度)，加乙醇至75％，靜置，傾取上清液，加氨水調(diào)至PH8-8.5，回收乙醇至膏狀，加相當(dāng)于上清液量的水，緩緩加入鹽酸適量，調(diào)至PH2-3，沉淀，濾過，冷水洗2-3次，自然揮干2-3小時(shí)，即得。
(2)訶子膏取訶子分別加水(20倍、10倍)，煎煮二次(1.5、1小時(shí))，濾過，合并濾液，濃縮成1∶2膏，加乙醇(8倍、5倍)醇沉兩次，吸取上清液，回收乙醇至稠膏狀，即得。[使用期限]2年?！鄙鲜霈F(xiàn)有清咽滴丸部頒標(biāo)準(zhǔn)中的檢測方法存在如下缺點(diǎn) 1、原標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)由于是復(fù)方制劑中沉淀反應(yīng)的專屬性差，不能說明問題。
2、靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別由于原標(biāo)準(zhǔn)中樣品前處理的方法為以醇溶超聲提取后過濾的方法，在日常檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)藥物中基質(zhì)聚乙二醇-6000對點(diǎn)樣的干擾較大，使展開效果不理想。
3、冰片、薄荷腦的薄層鑒別由于原標(biāo)準(zhǔn)中樣品前處理的方法為以醇溶超聲提取后過濾的方法，在日常檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)藥物中基質(zhì)聚乙二醇-6000對點(diǎn)樣的干擾較大，使展開效果不理想。
中國藥典對中成藥產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求日趨嚴(yán)格，中藥產(chǎn)品含量測定項(xiàng)要求對有效成分種類盡可能多地加以控制，市場競爭激烈，為了嚴(yán)格控制藥品的質(zhì)量，確保療效，對產(chǎn)品的質(zhì)量水平要求不斷提升，提升產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以增加產(chǎn)品的市場競爭力。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在清咽滴丸原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上對產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，提高成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提供一種操作簡便、質(zhì)量可控的清咽滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
為達(dá)到本發(fā)明的目的首先對處方中各組分進(jìn)行了成分分析的實(shí)驗(yàn)和研究。經(jīng)過對精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、回收率的試驗(yàn)考察，確定提供一種清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，處方青黛100g 甘草 100g 訶子80g薄荷腦80g 冰片 20g 人工牛黃12g 聚乙二醇6000 500g； 制法取聚乙二醇6000加熱溶化，加入青黛充分?jǐn)嚢?，濾過，一次加入甘草膏(注1)、棵子膏(注2)人工牛黃、冰片、薄荷腦、充分?jǐn)嚢?、混合均勻、過篩，在90-100攝氏度保溫滴于15-20攝氏度的液體石蠟中冷卻，制成約30000丸滴丸，擦干液體石蠟，包衣，即得；其特征在于將原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)進(jìn)行了刪除，修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別，靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別，膽紅素含量的測定項(xiàng)目；增設(shè)了訶子的薄層鑒別，甘草的薄層鑒別，甘草酸含量的測定檢驗(yàn)項(xiàng)目；并確定了每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg的定量指標(biāo)。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是 對照品溶液的配制取薄荷腦對照品0.5mg/ml；冰片對照品1mg/ml用乙酸乙酯定溶即可； 樣品的配制取清咽滴丸研碎，精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液； 陰性對照品液的制備按處方比例取除薄荷腦、冰片以外的其它藥材研碎精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液； 色譜條件柱PEG-20M毛細(xì)管柱，內(nèi)徑0.25mm，長25m.柱溫140℃ FID溫度200℃進(jìn)樣溫度200℃ 載氣流速0.8ml/min分流比50； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了的靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是 取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，用氯仿約1ml溶解做為供試品溶液；另取膽酸與去氧膽酸對照品，加甲醇分別制成每1ml各含1mg的對照品溶液a，再取靛藍(lán)與靛玉紅對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的對照品溶液b；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)；取上述幾種溶液各6μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；取本品40粒，研細(xì)，加三氯甲烷5ml，振搖使溶化，濾過，濾液作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml各含1mg的混合液，作為對照品溶液a，再取靛藍(lán)、靛玉紅對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml中各含1mg的混合液，作為對照品溶液b；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μl分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，立即檢視；供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了的膽紅素含量的測定項(xiàng)目檢驗(yàn)方法是 溶液的制備 對照品儲備液的制備精密稱取膽紅素對照品約10mg置50ml棕色容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，即得每1ml約含20μg對照品的溶液。
對照品溶液的制備吸取對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容即得(約4μg/ml)。配制后嚴(yán)格避光。
供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約50mg置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，振搖5分鐘，即得。
色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相甲醇∶二甲亞砜∶2％冰醋酸＝51∶34∶15 流速1ml/min 檢測波長450nm 柱溫45℃ 測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，量取峰面積，計(jì)算，即得；本品每1g含膽紅素(C33H36N4O6)不少于15μg。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的訶子的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是 取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取沒食子酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述兩種溶液各3μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的甘草的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是 取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取甘草對照藥材1g同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)；取上述兩種溶液各1～2μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液噴勻，晾干后，在110℃活化30分鐘處理后的硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，在與對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)。
所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的甘草酸含量的測定檢驗(yàn)方法是 色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相乙腈∶水∶冰醋酸＝40∶60∶2 流速1ml/min 檢測波長254nm 檢測靈敏度0.1AUF 溶液的制備 對照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對照品約20mg置50ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，甲醇定容即得每1ml約含40μg對照品的溶液； 供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約60mg置10ml容量瓶中，甲醇溶解，超聲15分鐘，放冷后，定容，即得； 陰性樣品的制備取未加甘草的樣品，按供試品溶液的制備方法制備，按上述的色譜條件測定。在與對照品圖譜比較可見，在對照品圖譜中甘草酸峰出現(xiàn)的位置上未見有峰出現(xiàn)； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg。
發(fā)明效果本發(fā)明的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有如下優(yōu)越性 1、清咽滴丸是復(fù)方制劑中沉淀反應(yīng)的專屬性差，不能說明問題，將原標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)進(jìn)行了刪除，精減了不必要條款。
2、修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別，靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別，膽紅素含量的測定項(xiàng)目，克服缺點(diǎn)了原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的缺點(diǎn) 3、增設(shè)了訶子的薄層鑒別，甘草的薄層鑒別，甘草酸含量的測定檢驗(yàn)項(xiàng)目；并確定了每丸含甘草以甘草酸的定量指標(biāo)。
達(dá)到了中藥產(chǎn)品含量測定項(xiàng)要求對有效成分種類盡可能多地加以控制，使產(chǎn)品的質(zhì)量水平提升，可以增加產(chǎn)品的市場競爭力。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1清咽滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂說明及精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、回收率的試驗(yàn) 鑒別
1、將原標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)進(jìn)行了刪除。原因是復(fù)方制劑中沉淀反應(yīng)的專屬性差，不能說明問題。
2、增加了訶子的薄層鑒別 (1)在試驗(yàn)中首先進(jìn)行了空白試驗(yàn)，以證明本方法無干擾。按處方十分之一量，取處方中除訶子以外的所有原輔料，按工藝制備方法制備陰性樣品。取陰性樣品1g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。點(diǎn)樣，展開后發(fā)現(xiàn)專屬性良好。
(2)前處理?xiàng)l件的選擇由于訶子中的主要有效成分易溶于乙醇，所以選擇了乙醇作為提取溶劑。開始以醇溶超聲提取后過濾的方法，點(diǎn)樣，展開后發(fā)現(xiàn)藥物中基質(zhì)聚乙二醇-6000對點(diǎn)樣的干擾較大。經(jīng)過大量試驗(yàn)，將提取方法改為醇溶冷析法，去除了供試液中聚乙二醇-6000，同時(shí)，供試液過濾快。
(3)取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取沒食子酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述兩種溶液各3μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。薄層圖譜見附

圖1。薄層圖譜見所附實(shí)審參考資料中的圖1訶子的薄層圖譜。
3、增加了甘草的薄層鑒別 (1)在試驗(yàn)中首先進(jìn)行了空白試驗(yàn)，以證明本方法無干擾。按處方十分之一量，取處方中除甘草膏以外的所有原輔料，按工藝制備方法制備陰性樣品。取陰性樣品1g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。點(diǎn)樣，展開后發(fā)現(xiàn)專屬性良好。
(2)前處理?xiàng)l件的選擇試驗(yàn)初期嘗試了多種處理方法，發(fā)現(xiàn)過氧化鋁層析小柱法，去除雜質(zhì)效果較好，但對甘草中極性較大的幾個成分吸附力太強(qiáng)，洗脫困難，展開后缺失斑點(diǎn)。采用醇(水)提取，乙醚脫脂，正丁醇萃取的處理方法，展開效果雖然好，但耗時(shí)太長，不適于今后的大生產(chǎn)檢驗(yàn)。嘗試了醇溶超聲提取冷析去雜質(zhì)的前處理方法，展開效果與萃取法比較效果基本相同，而且更加簡便、省時(shí)。
(3)取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取甘草對照藥材1g同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述兩種溶液各1～2μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液噴勻，晾干后，在110℃活化30分鐘處理后的硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，在與對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)。薄層圖譜見所附實(shí)審參考資料中的圖2甘草的薄層圖譜。
(4)需要特別說明的是上行展開，展開之前在層析缸中飽和20分鐘。展開前沿須達(dá)到10.5cm～11cm，否則甘草酸單銨鹽斑點(diǎn)與雜質(zhì)斑點(diǎn)分不開。
3、修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別 (1)由于原標(biāo)準(zhǔn)中樣品前處理的方法為以醇溶超聲提取后過濾的方法，在日常檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)藥物中基質(zhì)聚乙二醇-6000對點(diǎn)樣的干擾較大，使展開效果不理想。在本次試驗(yàn)中，改變?yōu)闅庀嗌V法測定冰片、薄荷腦，不僅簡便了操作，節(jié)省了時(shí)間，檢測效果也很好。同時(shí)也進(jìn)行了專屬性考察試驗(yàn)。
(2)GC法鑒別清咽滴丸中的薄荷腦、冰片 儀器與試藥GC-2010氣相色譜儀，AOC-20i自動進(jìn)樣器 薄荷腦、冰片對照品為中檢所提供，乙酸乙酯為分析純。
色譜條件柱PEG-20M毛細(xì)管柱，內(nèi)徑0.25mm，長25m. 柱溫140℃ FID溫度200℃進(jìn)樣溫度200℃ 載氣流速0.8ml/min 分流比50 對照品溶液的配制取薄荷腦對照品0.5mg/ml冰片對照品1mg/ml用乙酸乙酯定溶即可。
樣品的配制取清咽滴丸研碎，精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液； 陰性對照品液的制備按處方比例取除薄荷腦、冰片以外的其它藥材研碎精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液； 通過實(shí)驗(yàn)，證明可以用于清咽滴丸中薄荷腦、冰片的鑒別，方法簡單、快捷。
4、修訂了靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別 (1)由于原標(biāo)準(zhǔn)中樣品前處理的方法為以氯仿處理供試品，在日常檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)藥物中基質(zhì)聚乙二醇-6000對點(diǎn)樣的干擾較大，使展開效果不理想。在本次試驗(yàn)中，改變?yōu)榇既芾湮龅那疤幚矸椒?，不僅簡便了操作，節(jié)省了時(shí)間，同時(shí)展開效果也很好。同時(shí)也進(jìn)行了專屬性考察試驗(yàn)。
(2)取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，用氯仿約1ml溶解做為供試品溶液。另取膽酸與去氧膽酸對照品，加甲醇分別制成每1ml各含1mg的對照品溶液a，再取靛藍(lán)與靛玉紅對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的對照品溶液b。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述幾種溶液各6μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測定
1、增加了甘草酸含量的測定 參考2005版藥典一部中甘草中甘草酸含量的檢測方法，結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)，并經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證。
(1)儀器與試劑、樣品 儀器安捷倫HP110液相色譜儀；HP化學(xué)工作站；美國光譜物理公司SP8810液相色譜儀；SP8450紫外-可見檢測器；日本島津CR-4A數(shù)據(jù)積分儀。
試劑甲醇、乙腈為色譜純；冰醋酸為分析純；水為二次重蒸水。
對照品甘草酸單銨鹽購自中國藥品生物制品鑒定所 樣品為本廠的清咽滴丸。
(2)色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相乙腈∶水∶冰醋酸＝40∶60∶2 流速1ml/min 檢測波長254nm 檢測靈敏度0.1AUF (3)溶液的制備 ①對照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對照品約20mg置50ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，甲醇定容即得每1ml約含40μg對照品的溶液。
②供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約60mg置10ml容量瓶中，甲醇溶解，超聲15分鐘，放冷后，定容，即得。
③陰性樣品的制備取未加甘草的樣品，按供試品溶液的制備方法制備，按(2)中的色譜條件測定。在與對照品圖譜比較可見，在對照品圖譜中甘草酸峰出現(xiàn)的位置上未見有峰出現(xiàn)。
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密稱定甘草酸單銨鹽對照品溶液0.2、0.4、0.6。、0.8、1.0、1.2ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取10μl注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件，測定峰面積。以甘草酸單銨鹽對照品量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝623.42X+1388.64 r＝0.9993見附圖 結(jié)果表明甘草酸在8.6～51.6μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
(5)重現(xiàn)性試驗(yàn) 取1批清咽滴丸5份，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，按上述色譜條件測定甘草酸含量，結(jié)果測得甘草酸平均含量為57.0μg/丸，RSD為1.22％。
表1 (6)精密度試驗(yàn) 取清咽滴丸1份，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，取供試液10ml按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測定甘草酸含量，結(jié)果測得RSD為0.63％。
表2 (7)回收率試驗(yàn) 取已知含量的清咽滴丸供試品溶液5份，各約20mg分別精密加入 甘草酸單銨鹽對照品溶液ml，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，在上述色譜條件下測定各自含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為97.95％，RSD＝1.91％。見表3。
(8)穩(wěn)定性試驗(yàn) 取清咽滴丸樣品1份，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，按上述色譜條件，分別精密吸取供試品溶液2μl，每隔1h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣9次，測定峰面積，其RSD＝1.47％。見表4，結(jié)果表明供試品溶液在9小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
表3 表4 (9)樣品測定 分別取12個批號的樣品，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μl，按上述色譜條件，測定，計(jì)算樣品中甘草酸含量。
表5 (10)限度制定每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg。
本方法測定清咽滴丸中甘草酸的含量簡單、準(zhǔn)確，符合方法學(xué)要求，可作為請驗(yàn)滴丸的質(zhì)量控制指標(biāo)。增加該指標(biāo)后，不僅通過多參數(shù)量化指標(biāo)提高了清咽滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和市場信譽(yù)。而且對促進(jìn)產(chǎn)品銷售，保證患者用藥安全等意義重大。
2、修訂了膽紅素含量的測定在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了修訂。
(1)儀器與試劑、樣品 儀器美國光譜物理公司SP8810液相色譜儀；SP8450紫外-可見檢測器； 日本島津CR-4A數(shù)據(jù)積分儀。
試劑甲醇為色譜純；二甲亞砜、冰醋酸、三氯甲烷為分析純；水為二次重蒸水。
對照品膽紅素對照品購自中國藥品生物制品鑒定所 樣品清咽滴丸由本廠提供。
(2)色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相甲醇∶二甲亞砜∶2％冰醋酸＝51∶34∶15 流速1ml/min 檢測波長450nm 柱溫45℃ (3)溶液的制備 ①對照品儲備液的制備精密稱取膽紅素對照品約10mg置50ml棕色容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，即得每1ml約含20μg對照品的溶液。
②對照品溶液的制備吸取對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容即得(約4μg/ml)。配制后嚴(yán)格避光。
③供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約50mg置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，振搖5分鐘，即得。
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別吸取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容。分別吸取10μl注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件，測定峰面積。以膽紅素對照品量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，儲備液濃度24.86μg/ml，回歸方程為Y＝584.38X-800.98 r＝0.9998 表7 (5)重現(xiàn)性試驗(yàn) 取清咽滴丸6份，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，按上述色譜條件測定膽紅素含量，結(jié)果測得膽紅素平均含量為67.29μg/丸，RSD為2.71％。
表2 (6)精密度試驗(yàn) 取清咽滴丸1份，按(3)項(xiàng)下②中方法制備供試液，取供試液10ml按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣7次，測定膽紅素含量，結(jié)果測得膽紅素平均含量為69.12μg/丸，RSD為1.59％。(對照品容度4.404μg/ml) 表8 (7)回收率試驗(yàn) 精密稱取樣品5.0209g置50ml棕色容量瓶中，以氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，振搖5分鐘即得。各取2ml分置7個棕色容量瓶中，其中6個瓶各加膽紅素對照溶液0.9ml，在上述色譜條件下測定各自含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.12％，RSD＝2.96％。
表9 (8)專屬性試驗(yàn)分別測定對照品、樣品、陰性對照溶液含量。
(9)限度制定本品每1g含膽紅素(C33H36N4O6)含量應(yīng)為15.0μg/g。
通過上述試驗(yàn)證明，本方法測定清咽滴丸中膽紅素的含量準(zhǔn)確可靠，以前由于對樣品和對照品進(jìn)行超聲波處理，導(dǎo)致膽紅素分解，測定結(jié)果不準(zhǔn)確?，F(xiàn)通過嚴(yán)格避光和不超聲處理，使測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。試驗(yàn)證明，對照品溶液、樣品溶液在一天內(nèi)穩(wěn)定不變，完全可達(dá)到含量檢測的標(biāo)準(zhǔn)。注試驗(yàn)中棕色容量瓶用黑紙包裹。
實(shí)施例2修訂后的清咽滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) [處方]青黛100g 甘草100g 訶子80g 薄荷腦80g 冰片20g 人工牛黃12g 聚乙二醇6000 500g [制法]取聚乙二醇6000加熱溶化，加入青黛充分?jǐn)嚢?，濾過，依次加入甘草膏(注1)、訶子膏(注2)人工牛黃、冰片、薄荷腦、充分?jǐn)嚢琛⒒旌暇鶆?、過篩，在90-100攝氏度保溫滴于15-20攝氏度的液體石蠟中冷卻，制成約30000丸滴丸，擦干液體石蠟，包衣，即得。
[性狀]本品為棕褐色至黑褐色的滴丸；味微苦澀，氣辛涼。
[鑒別]1.靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別 取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，用氯仿約1ml溶解做為供試品溶液。另取膽酸與去氧膽酸對照品，加甲醇分別制成每1ml各含1mg的對照品溶液a，再取靛藍(lán)與靛玉紅對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的對照品溶液b。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述幾種溶液各6μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。取本品40粒，研細(xì)，加三氯甲烷5ml，振搖使溶化，濾過，濾液作為供試品溶液。另取膽酸、去氧膽酸對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml各含1mg的混合液，作為對照品溶液a，再取靛藍(lán)、靛玉紅對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml中各含1mg的混合液，作為對 照品溶液b。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μl分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，立即檢視。供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.訶子的薄層鑒別取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取沒食子酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述兩種溶液各3μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3.甘草的薄層鑒別取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液。另取甘草對照藥材1g同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取上述兩種溶液各1～2μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液噴勻，晾干后，在110℃活化30分鐘處理后的硅膠G薄層板上(薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm)，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，在與對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)。
4.冰片與薄荷腦對照品溶液的配制取薄荷腦對照品0.5mg/ml；冰片對照品1mg/ml用乙酸乙酯定溶即可。
樣品的配制取清咽滴丸研碎，精稱0.3g到10ml容量瓶中加乙酸乙酯適量，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。陰性對照品液的制備按處方比例取除薄荷腦、冰片以外的其它藥材研碎精稱0.3g到10ml瓶中加乙酸乙酯適量，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液。
色譜條件 柱PEG-20M毛細(xì)管柱，內(nèi)徑0.25mm，長25m.柱溫140℃ FID溫度200℃進(jìn)樣溫度200℃載氣流速0.8ml/min 分流比50 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測定，即得 [檢查] 應(yīng)符合滴丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國藥典1995年版一部附錄I k) [含量測定]甘草酸含量的測定 溶液的制備 對照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對照品約20mg置50ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，甲醇定容即得每1ml約含40μg對照品的溶液。
供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約60mg置10ml容量瓶中，甲醇溶解，超聲15分鐘，放冷后，定容，即得。
陰性樣品的制備取未加甘草的樣品，按供試品溶液的制備方法制備，按(2)中的色譜條件測定。在與對照品圖譜比較可見，在對照品圖譜中甘草酸峰出現(xiàn)的位置上未見有峰出現(xiàn)。
色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相乙腈∶水∶冰醋酸＝40∶60∶2 流速1ml/min 檢測波長254nm 檢測靈敏度0.1AUF 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg。
膽紅素含量的測定 溶液的制備 ①對照品儲備液的制備精密稱取膽紅素對照品約10mg置50ml棕色容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，即得每1ml約含20μg對照品的溶液。
②對照品溶液的制備吸取對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容即得(約4μg/ml)。配制后嚴(yán)格避光。
③供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約50mg置10ml容量瓶中，用氯仿∶冰醋酸(4∶1)定容，振搖5分鐘，即得。
色譜條件 色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm) 流動相甲醇∶二甲亞砜∶2％冰醋酸＝51∶34∶15 流速1ml/min 檢測波長450nm 柱溫45℃ 測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，量取峰面積，計(jì)算，即得。
本品每1g含膽紅素(C33H36N4O6)不少于15μg。
[功能與主治]疏風(fēng)清熱，解毒利咽。用于風(fēng)熱喉痹，咽痛，咽干、口渴；或微惡風(fēng)、發(fā)熱，咽部紅腫，舌邊尖紅，苔薄白或薄黃，脈浮數(shù)或滑數(shù)，適于急性咽炎見上述證候者。
[用法與用量]含服，一次4-6粒，一日3次。
[注意事項(xiàng)]孕婦慎服。
[規(guī)格]每丸重20mg。
[儲藏]密封，置陰涼干燥處。
注(1)甘草膏取甘草加水，煎煮3次，每次2小時(shí)，合并煎液，濃縮之相對密度1.18-1.23(85攝氏度)，加乙醇至75％，靜置，傾取上清液，加氨水調(diào)至PH8-8.5，回收乙醇至膏狀，加相當(dāng)于上清液量的水，緩緩加入鹽酸適量，調(diào)至PH2-3，沉淀，濾過，冷水洗2-3次，自然揮干2-3小時(shí)，即得。
(2)訶子膏取棵子分別加水(20倍、10倍)，煎煮二次(1.5、1小時(shí))，濾過，合并濾液，濃縮成1∶2膏，加乙醇(8倍、5倍)醇沉兩次，吸取上清液，回收乙醇至稠膏狀，即得。[使用期限]2年。
權(quán)利要求
1.一種清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括
處方青黛100g甘草100g訶子80g薄荷腦80g冰片20g人工牛黃12g聚乙二醇6000 500g；
制法取聚乙二醇6000加熱溶化，加入青黛充分?jǐn)嚢瑁瑸V過，依次加入甘草膏(注1)、訶子膏(注2)人工牛黃、冰片、薄荷腦、充分?jǐn)嚢?、混合均勻、過篩，在90-100攝氏度保溫滴于15-20攝氏度的液體石蠟中冷卻，制成約30000丸滴丸，擦干液體石蠟，包衣，即得；其特征在于刪除了原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)；修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別，靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別，膽紅素含量的測定項(xiàng)目；增設(shè)了訶子的薄層鑒別，甘草的薄層鑒別，甘草酸含量的測定檢驗(yàn)項(xiàng)目；并確定了每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg的定量指標(biāo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是
A、對照品溶液的配制取薄荷腦對照品0.5mg/ml；冰片對照品1mg/ml用乙酸乙酯定溶即可；
B、樣品的配制取清咽滴丸研碎，精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；
C、陰性對照品液的制備按處方比例取除薄荷腦、冰片以外的其它藥材研碎精稱0.3g到10ml量瓶中，加入8ml乙酸乙酯，超聲20分鐘，放冷，乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液；
D、色譜條件柱PEG-20M毛細(xì)管柱，內(nèi)徑0.25mm，長25m.柱溫140℃ FID溫度200℃進(jìn)樣溫度200℃載氣流速0.8ml/min分流比50；理論塔板數(shù)1500；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了的靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是
取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏30分鐘，使不溶物析出，過濾，用氯仿1ml溶解做為供試品溶液；另取膽酸與去氧膽酸對照品，加甲醇分別制成每1ml各含1mg的對照品溶液a；再取靛藍(lán)與靛玉紅對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的對照品溶液b；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)；取上述幾種溶液各6μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—乙酸乙酯—冰醋酸＝8∶8∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；取本品40粒，研細(xì)，加三氯甲烷5ml，振搖使溶化，濾過，濾液作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml各含1mg的混合液，作為對照品溶液a，再取靛藍(lán)、靛玉紅對照品，加三氯甲烷使溶解，制成每1ml中各含1mg的混合液，作為對照品溶液b；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μl分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸＝8∶8∶1為展開劑，展開，取出，晾干，立即檢視；供試品色譜中，在與對照品溶液b色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；再噴以10％磷鉬酸乙醇液，在105℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照品溶液a色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中修訂了的膽紅素含量的測定項(xiàng)目檢驗(yàn)方法是
溶液的制備
對照品儲備液的制備精密稱取膽紅素對照品約10mg置50ml棕色容量瓶中，氯仿∶冰醋酸＝4∶1定容，搖勻；精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，氯仿∶冰醋酸＝4∶1定容，即得每1ml含20μg對照品的溶液；
對照品溶液的制備吸取對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中，用氯仿冰醋酸(4∶1)定容即得4μg/ml，配制后嚴(yán)格避光；
供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取50mg置10ml容量瓶中，用氯仿冰醋酸(4∶1)定容，振搖5分鐘，即得；
色譜條件
色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm)；
流動相甲醇二甲亞砜2％冰醋酸＝51∶34∶15；
流速1ml/min；檢測波長450nm；柱溫45℃；
測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，量取峰面積，計(jì)算，即得；本品每1g含膽紅素(C33H36N4O6)不少于15μg。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的訶子的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是
取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇約1ml溶解做為供試品溶液；另取沒食子酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)；取上述兩種溶液各3μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，規(guī)格為100×100mm，黏合劑為羧甲基纖維素鈉，厚度為0.2～0.25mm，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸＝6∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的甘草的薄層鑒別檢驗(yàn)方法是
甘草的薄層鑒別取研碎的清咽滴丸1g，加入40ml無水乙醇，密封，超聲提取10分鐘，放涼后，放入冰箱冷藏室冷藏約30分鐘，使不溶物析出，過濾，將濾液水浴上蒸干，用甲醇1ml溶解做為供試品溶液；另取甘草對照藥材1g同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)；取上述兩種溶液各1～2μl，采用接觸式半自動點(diǎn)樣方法分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液噴勻，晾干后，在110℃活化30分鐘處理后的硅膠G薄層板上，薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制薄層板，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水＝15∶1∶1∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，在與對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于其中增設(shè)的甘草酸含量的測定檢驗(yàn)方法是
A、色譜條件
色譜柱ALLTIMA-C18(5μm，250mm×4.6mm)；
流動相乙腈∶水∶冰醋酸＝40∶60∶2；流速1ml/min
檢測波長254nm；檢測靈敏度0.1AUF；
B、溶液的制備
a)對照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對照品約20mg置50ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取該溶液1ml置10ml容量瓶中，甲醇定容即得每1ml約含40μg對照品的溶液；
b)供試品溶液的制備取供試品2g，研碎，精密稱取約60mg置10ml容量瓶中，甲醇溶解，超聲15分鐘，放冷后，定容，即得；
c)陰性樣品的制備取未加甘草的樣品，按供試品溶液的制備方法制備，按上述的色譜條件測定，在與對照品圖譜比較可見，在對照品圖譜中甘草酸峰出現(xiàn)的位置上未見有峰出現(xiàn)；
C、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及以青黛、甘草、訶子、薄荷腦、冰片、人工牛黃、聚乙二醇6000為原料制成的清咽滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，刪除了原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中理化鑒別一項(xiàng)，修訂了冰片、薄荷腦的薄層鑒別，靛藍(lán)、靛玉紅，膽酸、去氧膽酸的薄層鑒別，膽紅素含量的測定項(xiàng)目；增設(shè)了訶子的薄層鑒別，甘草的薄層鑒別，甘草酸含量的測定檢驗(yàn)項(xiàng)目，并確定了每丸含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)，不得少于32μg的定量指標(biāo)。提高了清咽滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，而且對促進(jìn)產(chǎn)品銷售，保證患者用藥安全意義重大。
文檔編號A61K36/484GK101152241SQ200710059820
公開日2008年4月2日 申請日期2007年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月11日
發(fā)明者韓露蘭 申請人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司第六中藥廠