專利名稱：：一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，更具體地說是測定藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮含量的方法，屬于中藥現(xiàn)代化領域。技術背景藿香正氣處方出自《太平惠民和劑局方.巻二》所載藿香正氣散，主要藥物組成有藿香、蒼術、半夏、厚樸、大腹皮、白芷、紫蘇、茯苓、陳皮、桔梗、甘草。具有解表和中，芳香化濁的功效，主要用于外感風寒，內有濕滯或感受暑濕，外見寒熱頭痛等表證，內有胸腹?jié)M悶、腹痛泄瀉，口淡苔膩，脈濡緩等濕阻之證。本方常用于胃腸型感冒、急性胃腸炎或消化不良等具有上述證候者。天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠首家研發(fā)了我國第一個藿香正氣軟膠囊制劑。目前，藿香正氣軟膠囊廣泛用于現(xiàn)代醫(yī)學的胃腸型感冒、急慢性腸炎等，被列為全國中醫(yī)醫(yī)院急診必備中成藥，國家中藥保護品種。紫蘇葉為唇形科植物紫蘇Perillafrutescens(L.)Britt的干燥葉(或帶嫩枝)。在中國、閂本、韓國和其他國家，紫蘇葉已經成為一種很普遍的中藥、香料和調料。它所含的揮發(fā)油是一種重要的化學成分，也是一種有藥理活性的成分，同時可以作為化妝品的添加劑或者香料。現(xiàn)代藥理研究表明，紫蘇葉具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、鎮(zhèn)咳、止吐、抗菌、抗病毒、抗炎、抗過敏、止血等作用(1)解表散寒，行氣和胃的功用；(2)抑菌作用抑制葡萄球菌生長；(3)升血糖作用；(4)對血凝的作用可縮短血凝時間、血漿復鈣時間和凝血活酶時間，說明紫蘇對內源性凝血系統(tǒng)有促進作用；(5)促進腸蠕動；(6)鎮(zhèn)靜作用。用于風寒感冒、咳嗽嘔惡、妊娠嘔吐、魚蟹中毒。中國藥典中，藿香正氣水、藿香正氣口服液、藿香正氣軟膠囊中，處方中使用的都是紫蘇葉油，但在成方質量標準中并沒有相應對紫蘇葉油所含化學成分的質量控制。紫蘇葉揮發(fā)油的組成和含量一定會直接影響它的藥理活性和其他性質。同時也影響到成方制劑中的藥理活性。因此對藿香正氣軟膠囊中的紫蘇葉油的成分進行研究是非常必要的。至今未見相關報道。本發(fā)明中，我們通過比較含紫蘇酮(perillaketone，1-(3-呋喃基)-4-甲基-正戊垸-1-酮)與不含紫蘇酮的藿香正氣軟膠囊藥理作用發(fā)現(xiàn)，含有紫蘇酮的藿香正氣軟膠囊具有促進正常小鼠小腸推進作用、能緩解阿托品致小鼠小腸推進抑制作用，能夠增加對正常小鼠胃排空的抑制作用，對乙酰膽堿致大鼠離體回腸痙攣具有解痙作用，這些作用與藿香正氣軟膠囊的臨床作用是相一致的，因此對藿香正氣軟膠囊中的紫蘇酮進行檢測和質量控制是非常必要的，至今未有相關研究和報道。
發(fā)明內容本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，通過對藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮含量的監(jiān)控可控制藿香正氣軟膠囊的內在質量。本發(fā)明是利用氣相色譜法測定藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮的含量，以控制藿香正氣軟膠囊的產品質量。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案(1)供試品的制備稱取藿香正氣軟膠囊內容物，置容量瓶中，加有機溶劑溶解，加入內標溶液，用有機溶劑定容，即為供試品；(2)參照物溶液的制備精密量取環(huán)己酮、正十二烷、正十三烷、正十四垸、正十六垸、正十八烷、乙醚或乙酸乙酯中的一種，為參照物溶液(內標)；(3)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚硅氧垸柱為固定相；程序溫度初始溫度5011(TC，保持015分鐘，以每分鐘l-10。C的速率升溫至110~150°C，保持lIO分鐘，氣化溫度為280~320°C，檢測器溫度為250~300°C,分流比為101000;(4)測定方法采用氣相色譜法測定；取紫蘇葉揮發(fā)油，置容量瓶中，加入內標溶液，用有機溶劑溶解并定容，作為供試品溶液；吸取該溶液，注入氣相色譜儀，測定，即得。優(yōu)選的本發(fā)明可通過下列步驟實施所述(1)供試品的制備中，有機溶劑為無水乙醇、甲醇、石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、苯、甲苯和二甲苯中的一種或幾種。所述(3)色譜條件中聚硅氧烷柱為交聯(lián)苯基聚硅氧烷柱。最佳的藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮的含量測定方法，如下(1)供試品的制備精密稱取藿香正氣軟膠囊內容物20mg,置10ml量瓶中，精密加入內標溶液lml，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取正十四垸適量，加無水乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為內標溶液；另精密稱取紫蘇酮對照品30mg，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液5ml，加無水乙醇至刻度，搖勻，取lul，注入氣相色譜儀，計算較正因子；(3)色譜條件彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25um)DB-17MS柱(交聯(lián)50%苯基甲基聚硅氧院為固定相)；程序溫度初始溫度100'C，保持5分鐘，以每分鐘3'C的速率升溫至112°C，保持3分鐘，再以每分鐘8'C的速率升溫至250'C，保持l分鐘；檢測器溫度為280'C，氣化溫度為28(TC;分流比為50:1;(4)測定方法吸取1U1供試品，注入氣相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明提供了一種藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮的檢測方法。其優(yōu)點是本發(fā)明通過使用氣相色譜法，對紫蘇酮進行定性定量的測定，測試精密度高，可靠性好。通過對藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮的監(jiān)控可有效地控制產品的內在質量。對于本領域技術人員而言，根據本發(fā)明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發(fā)明的其它實施方案，本發(fā)明實施例僅作為示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對本發(fā)明進行各種改變和改進。例如，使用不同的檢測儀器所獲得的測定結果可能有所不同，但只要使用本發(fā)明所述的質量控制方法，均在本發(fā)明保護范圍之內。圖1為實施例1的供試品色譜圖，批號為E292090;保留時間內標15.089min，紫蘇酮16.883min。圖2為實施例2的供試品色譜圖，批號為2920066;保留時間內標15.138min，紫蘇酮16.932min。圖3為紫蘇酮對照品的色譜圖。圖4為紫蘇酮對照品的紫外譜圖。圖5為紫蘇酮對照品的紅外光譜(IR)。圖6為紫蘇酮對照品的'HNMR譜圖。圖7為紫蘇酮對照品的13C剛R譜圖。圖8為紫蘇酮對照品的E頂S譜。具體實施方式下面列舉的實施例為進一步說明本發(fā)明，對本發(fā)明并不構成限制。以下實施例使用的儀器和試劑1.島津氣相色譜儀，型號GC-17A。DB-17MS氣相色譜柱(30mX0.25誦X0.25um)，安捷倫科技有限公司2.正十四烷，正十三烷(天津市軒昂科工貿有限公司)乙酸乙酯(分析純，天津市北方天醫(yī)化學試劑廠)紫蘇酮對照品(天津中新藥業(yè)研究中心植化事業(yè)部提供，批號200707;(1)經島津GCMC-QP2010質譜儀GC-MS歸一化測得純度為99.09%,色譜見圖3;(2)紫外譜圖見圖4;在MeOH溶液的UV譜圖中入max252nm(e3X103)歸屬為呋喃基的K吸收帶；(3)紫蘇酮的紅外光譜(IR)見圖5:按照紅外光譜的譜圖規(guī)律，將紫蘇酮譜的吸收峰歸屬為v=C-H3136，vC=01681，v環(huán)1569、1513'5=C-H1161、740。(4)紫蘇酮的'HNMR和13CNMR譜分別見圖6和圖7，溶劑為CDC13:其1HNMR中，0.93(6H,d,卜6.6Hz)歸屬為二個甲基質子，1.61(3H，m)歸屬為3和4位質子，2.73(2H,dd,J=7.2，8.4Hz)歸屬為2位質子，低場區(qū)偶合常數小的三組峰6.77(1H,dd,J=0.6,1.8Hz)、7.44(1H,t，J=1.8Hz)禾卩8.03(1H,t,J=0.6,1.8Hz)分別歸屬為呋喃環(huán)上的4'、5'禾卩2'位質子。其13CNMR中出現(xiàn)了9個碳信號，分別對應結構中的IO個碳原子，其中兩個甲基信號重疊，其歸屬分別為22.4(2X-CH3)，27.8(C-4)，33.2(C-3)，38.5(C-2)，108.7(C-4')，127.7(C-3')，144.2(C-2')，147.0(C-5')，195.6(C-l)。(5)紫蘇酮對照品的EIMS譜見圖8。EIMS譜中的m/z166為分子離子峰，與紫蘇酮的分子式Ch)Hm02相符。參見《紫蘇油中主要化學成分的分離和鑒定》，《香料香精化妝品》雜志，1998年第1期，作者劉建輝，陳蘭貴，中國預防醫(yī)學科學院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所。)3.供試品天津市中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠生產的藿香正氣軟膠囊，批號2920066和E292090。4.無酮藿香正氣軟膠囊按2005版中國藥典處方及制法制備，無酮紫蘇葉油2007年7月2R購于江西吉安振興香料油提煉廠，經鑒定不含紫蘇葉酮。5.含酮藿香正氣軟膠囊達仁堂藥廠所提供的未加入廣藿香油和紫蘇葉油的藿香正氣軟膠囊內容物、加入藥典規(guī)定相應量的廣藿香油和紫蘇酮重量百分比含量為75%紫蘇葉油，研磨混合均勻，即得。該紫蘇葉油的制備方法為向無酮紫蘇葉油中加入純度為98%的紫蘇酮對照品，使其重量百分含量為75%。6.西沙必利，西安楊森制藥有限公司，批號031212183。7.硫酸阿托品注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批號0608071)8.ICR小鼠，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，合格證號SCXK(京)2007-0001。實施例1:含量測定一.方法(1)供試品的制備精密稱取藿香正氣軟膠囊內容物20mg，置10ml量瓶中，精密加入內標溶液正十四烷lml，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取正十四垸適量，加無水乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為內標溶液；另精密稱取紫蘇酮對照品約30mg，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液5ml，加無水乙醇至刻度，搖勻，取lul，注入氣相色譜儀，計算較正因子；(3)色譜條件彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25um)DB-17MS柱(交聯(lián)50%苯基甲基聚硅氧烷為固定相)；程序溫度初始溫度100。C，保持5分鐘，以每分鐘5'C的速率升溫至120°C，保持2分鐘，再以每分鐘l(TC的速率升溫至230。C，保持l分鐘；檢測器溫度為280。C，氣化溫度為280。C;分流比為50:1;(4)測定方法吸取lul供試品，注入氣相色譜儀，測定，即得。二.結果見圖1和表1。表l:藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮含量測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>一.方法(1)供試品的制備取紫蘇葉揮發(fā)油，約20mg，精密稱定，置10ml量瓶中，精密加入內標溶液正十三烷lml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取正十三烷適量，加乙酸乙酯制成每lml含3mg的溶液，作為內標溶液；另取紫蘇酮對照品約30mg，精密稱定，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液5ml，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，取lul，注入氣相色譜儀，計算較正因子；G)色譜條件彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25um)DB-17MS柱(交聯(lián)5%苯基甲基聚硅氧垸為固定相)；程序溫度初始溫度6(TC，保持3分鐘，以每分鐘8'C的速率升溫至150°C，保持4分鐘，再以每分鐘l(TC的速率升溫至230°C，保持l分鐘；檢測器溫度為30(TC，氣化溫度為320'C;分流比為50:1;(4)測定方法吸取1U1供試品，注入氣相色譜儀，測定，即得。二.結果見圖2和表2。表2:藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮含量測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例3:對正常小鼠小腸推進的影響的比較一.方法小鼠隨機分組空白對照組，西沙必利，藿香正氣無酮組，藿香正氣含酮組。灌胃給藥7天，木次給藥前禁食16小時，給藥后60分鐘每只小鼠灌胃給予5%碳末(10%阿拉伯膠)混懸液0.3ml/只，15分鐘后脫頸椎處死動物，立即剖腹，分離腸系膜，剪取上端至幽門，下端至回盲腸的腸管，平鋪于玻璃板上，輕輕拉呈直線，測量腸管長度為"小腸總長度"，從幽門至碳末前沿的距離作為"碳末在腸內推進距離"，計算推進百分率。,1、日^地、丑^VA審/。/、碳末在腸內推進距離1AA0/小腸推進百分率(％)=-,D7^,7A-x100%小腸總長度二.結果見表3。_表3:連續(xù)七天給藥對正常小鼠小腸推進的影響(Y*0組別劑量(g生藥/kg)動物數(只)碳末推進率(％)空白——1266.7±11.4西沙必利10mg/kg1167.5±8.0含酮(75%)13.51190.4±10.5**無酮_^_^_78.2±9.3**將Vs空白**P<0.01VS含酮組##P<0.01三結論藿香正氣含酮組與無酮組均與空白組有極顯著性差異，藿香正氣含酮組與無酮組比較有極顯著性差異。提示藿香正氣含酮組與無酮組均能促進正常小鼠小腸推進作用，且含酮的藿香正氣作用優(yōu)于無酮的。實施例4:對阿托品致小鼠小腸推進抑制的影響的比較一.方法小鼠隨機分組空白對照組，模型組，西沙必利，藿香正氣無酮組，藿香正氣含酮組。灌胃給藥7天，末次給藥前禁食16小時，除空白對照組外，其他各組給藥后40分鐘后均腹腔注射阿托品0.3mg/kg，給藥體積0.1ml/10g，20分鐘后灌胃給于碳末0.3m1/只，15分鐘后脫頸椎處死小鼠，立即剖腹，分離腸系膜，剪取上端至幽門，下端至回盲腸的腸管，平鋪于玻璃板上，輕輕拉呈直線，測量腸管長度為"小腸總長度"，從幽門至碳末前沿的距離作為"碳末在腸內推進距離"，計算推進百分率。二.結果見表4。表4:連續(xù)七天給藥對阿托品致小鼠小腸推進抑制的影響(**0<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>Vs空白AAPO.01Vs模型**P<0.01Vs含酮組##P<0.01三.結論藿香JH氣含酮組與模型組比較有極顯著性差異，藿香正氣無酮組與模型組比較無顯著性差異，藿香正氣含酮組與無酮組比較有極顯著性差異。提示藿香正氣含酮組能緩解阿托品致小鼠小腸推進抑制，且作用優(yōu)于無酮組。實施例5:對正常小鼠胃排空的影響的比較一.方法小鼠隨機分組空白對照組，西沙必利，藿香正氣無酮組，藿香正氣含酮組。灌胃給藥7天，末次給藥前禁食16小時，給藥后60分鐘每只小鼠灌胃給予營養(yǎng)性半固體糊(由奶粉，糖，淀粉組成)0.8ml/只，20分鐘后脫頸椎處死小鼠。開腹取胃，稱胃全重和凈重，計算胃內殘留物占所灌半固體糊的重量百分比為胃內殘留率。胃內殘留率(％)=胃鍾-胃賴_x100%0.8二.結果見表5。表5:連續(xù)七天給藥對小鼠胃排空的影響(**0<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>Vs空白"P<0.01Vs含酮##P<0.01三.結論藿香正氣含酮組與無酮組均與空白組比較均有極顯著性差異，藿香正氣含酮組與無酮組比較有極顯著性差異。提示藿香正氣含酮組增加對正常小鼠胃排空抑制的作用，且作用強于無酮組。權利要求1.一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，其特征在于包括以下步驟(1)供試品的制備稱取藿香正氣軟膠囊內容物，置容量瓶中，加有機溶劑溶解，加入內標溶液，用有機溶劑定容，即為供試品；(2)參照物溶液的制備精密量取環(huán)己酮、正十二烷、正十三烷、正十四烷、正十六烷、正十八烷、乙醚或乙酸乙酯中的一種，為參照物溶液(內標)；(3)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚硅氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度50～110℃，保持0～15分鐘，以每分鐘1～10℃的速率升溫至110～150℃，保持1～10分鐘，氣化溫度為280～320℃，檢測器溫度為250～300℃，分流比為10～1000；(4)測定方法采用氣相色譜法測定；取紫蘇葉揮發(fā)油，置容量瓶中，加入內標溶液，用有機溶劑溶解并定容，作為供試品溶液；吸取該溶液，注入氣相色譜儀，測定，即得。2.根據權利要求l所述的一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，其特征在于所述(1)供試品的制備中，有機溶劑為無水乙醇、甲醇、石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、苯、甲苯和二甲苯中的一種或幾種。3.根據權利要求l所述的一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，其特征在于所述(3)色譜條件中聚硅氧垸柱為交聯(lián)苯基聚硅氧烷柱。4.一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，其特征在于包括以下步驟(1)供試品的制備精密稱取藿香正氣軟膠囊內容物20mg，置10ml量瓶中，精密加入內標溶液lml，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取正十四垸適量，加無水乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為內標溶液；另精密稱取紫蘇酮對照品30mg，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液5ml，加無水乙醇至刻度，搖勻，取lul，注入氣相色譜儀，計算較正因子；(3)色譜條件彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25um)DB-17MS柱(交聯(lián)50%苯基甲基聚硅氧烷為固定相)；程序溫度初始溫度10(TC，保持5分鐘，以每分鐘3'C的速率升溫至112°C，保持3分鐘，再以每分鐘8'C的速率升溫至250。C，保持l分鐘；檢測器溫度為280'C，氣化溫度為28(TC;分流比為50:1;(4)測定方法吸取1U1供試品，注入氣相色譜儀，測定，即得。全文摘要本發(fā)明涉及一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，屬于中藥現(xiàn)代化領域。一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，包括(1)供試品的制備；(2)參照物溶液的制備；(3)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚硅氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度50～110℃，保持0～15分鐘，以每分鐘1～10℃的速率升溫至110～150℃，保持1～10分鐘，氣化溫度為280～320℃，檢測器溫度為250～300℃，分流比為10～1000；(4)采用氣相色譜法測定。本發(fā)明的優(yōu)點是通過使用氣相色譜法，對紫蘇酮進行定性定量的測定，測試精密度高，可靠性好。通過對藿香正氣軟膠囊中紫蘇酮的監(jiān)控可有效地控制產品的內在質量。文檔編號A61K36/88GK101224266SQ200710060529公開日2008年7月23日申請日期2007年12月29日優(yōu)先權日2007年12月29日發(fā)明者彤劉,劉志青,琳孫,孫寶珍,江永萍,勤潘,石世學,輝羅,金兆祥申請人:天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠