專利名稱：：一種抗癌藥物組合物及其在制備抗癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從天然植物中提取物的藥物組合物及其在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：菊科旋覆花(InulaL.)屬約有100多種。本屬多種植物常供藥用，如土木香(I.henlenium)可作為健胃、利尿、祛痰和驅(qū)蟲藥；歐亞旋覆花(I.britannica)具有消炎、下氣、軟堅(jiān)、行水等功效。倍半萜類化學(xué)成分是本屬植物的特征性成分，它包括有桉垸型、裂環(huán)桉垸型、吉馬烷型和愈創(chuàng)木烷型倍半萜。近年來，人們從歐亞旋覆花(InulabritannicaL)中分離提取出三種裂環(huán)桉垸型倍半萜(即1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯，1-氧-乙?；笮不▋?nèi)酯，1，6-二氧-二乙?；笮不▋?nèi)酯)，并對其藥理活性進(jìn)行了廣泛的研究。研究發(fā)現(xiàn)1-氧-乙酰基大旋覆花內(nèi)酯具有抑制一氧化氮合酶的活性和抗炎活性(詳見參考文獻(xiàn)JeKH，HanAR，LeeHT，etal.Theinhibitoryprincipleoflipopolysaccharide-inducednitricoxideproductionfromInulabritannicavar.chinensis.ArchPharmRes,2004,27:83-85.);1-氧-乙酰基大旋覆花內(nèi)酯，1，6-二氧—二乙?；笮不▋?nèi)酯具有抑制白血病細(xì)胞毒活性和肝癌細(xì)胞毒活性(詳見參考文獻(xiàn)LiuS,LkiH，YanW，etal.Studieson1-O-acetylbritannilactoneanditsderivative,(2-0-butyloxime-3-phenyl)-propi-only-l-0-acetylbritannilactoneester.BioorgMedChemLett,2004,14:1101-1104.)。不過令人感到遺憾的是，單一化合物的藥理活性較弱，不能滿足臨床需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一提供一種具有良好協(xié)同作用的抗癌藥物組合物；本發(fā)明的目的之二是提供該藥物組合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明人對1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯，1-氧-乙?；笮不▋?nèi)酯，1，6-二氧'-二乙?；笮不▋?nèi)酯的抗癌藥理活性作了進(jìn)一步的研究，發(fā)現(xiàn)其單獨(dú)應(yīng)用時(shí)抗癌活性均不夠理想，而將這三種化合物按照一定的配比進(jìn)行組合后，竟產(chǎn)生了意想不到的顯著效果。據(jù)此，本發(fā)明人完成了本發(fā)明藥物的組方配伍。本發(fā)明所提供的抗癌藥物組合物，包括有以下重量份比的原料1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份，1-氧-乙?；笮不▋?nèi)酯0.1-5份，1，6-二氧-二乙酰基大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份。本發(fā)明所提供的抗癌藥物組合物，其優(yōu)選的原料重量份比是1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯1-3份，1-氧-乙?；笮不▋?nèi)酯0.1-2份，1，6-二氧-二乙?；笮不▋?nèi)酯4-5份。'本發(fā)明中的1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯亦稱Britannilactone(1)，在以下表述中簡稱為BL;其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下1-氧-乙酰基大旋覆花內(nèi)酯亦稱l-O-diacetylbritannilactone，在以下表述中簡稱為ABL;其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下1,6-二氧-二乙酰基大旋覆花內(nèi)酯亦稱1，6-0,0-diacetylbritannilactone，在以下表述中簡稱為l，6-02-ABL;其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本發(fā)明藥物組合物各組分的提取制備方法可按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行提取，也可參考以下方法a、將歐亞旋覆花粉碎，50-95%乙醇提取，提取液減壓濃縮至膏狀；依次用石油醚，氯仿，乙酸乙酯和正丁醇萃取膏狀物，取氯仿萃取物；b、取a歩驟中的氯仿萃取物進(jìn)行加壓硅膠柱層析，用氯仿-乙酸乙酯(10:l—0:10)迸行梯度洗脫；將洗脫液依次等量分成3部分，濃縮；第1部分用30-95%乙醇重結(jié)晶得到1，6-02-ABL;第2部分用30-95%乙醇重結(jié)晶得到l-O-ABL;第3部分再經(jīng)硅膠柱層析得到BL。本發(fā)明所提供的抗癌藥物組合物，其中各組分的定性定量方法可采用以下方法進(jìn)行定性方法按照BL、l-O-ABLl、1，6-02-ABL的順序1.熔點(diǎn)依次為173175°C、124126°C、8284°C。2.TLC固定相硅膠G;展開劑石油醚一乙酸乙酯(1:1);顯色劑5%H2S04-香草醛溶液，105。C加熱；顯示桃紅色。Rf值依次為0.1，0.3，0.6。3.HPLC條件AgilentSB-C184.6x250mm色譜柱，流動(dòng)相流速lml/min;流動(dòng)相乙腈-水(25:75;31:69;100:0)，波長210nm。保留時(shí)間分別為4';13';20'。4.顯色三個(gè)化合物異羥肟酸鐵反應(yīng)均顯陽性。定量方法采用HPLC方法AgilentSB-C184.6x250mm色譜柱，流動(dòng)相流速lml/min;流動(dòng)相乙腈-水(25:75;31:69;100:0)，波長210nm。用外標(biāo)法分別測定含量。本發(fā)明所提供的抗癌藥物組合物，對人大腸癌細(xì)胞株HT29，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，肺癌細(xì)胞株A-549，肝癌細(xì)胞株BEL-7404有非常顯著的抑制。據(jù)此可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述抗癌藥物組合物在制備腸癌藥物中的應(yīng)用；所述抗癌藥物組合物在制備乳腺癌藥物中的應(yīng)用；所述的抗癌藥物組合物在制備肺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果通過以下實(shí)驗(yàn)得到了驗(yàn)證:實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)用藥實(shí)驗(yàn)1組BL;實(shí)驗(yàn)2組l-O-ABL;實(shí)驗(yàn)3組1，6-02-ABL;實(shí)驗(yàn)4組本發(fā)明實(shí)施例1所制備的藥物組合物；陰性對照組生理鹽水，生產(chǎn)廠家石家莊四藥有限公司生產(chǎn)；生產(chǎn)批號05062844。陽性對照組5-氟尿嘧啶，生產(chǎn)廠家天津金耀氨基酸制藥廠；生產(chǎn)批號0704171。實(shí)驗(yàn)組藥物的配制取所需重量的藥物溶于70%乙醇作為儲(chǔ)存液，使用時(shí)，用生理鹽水稀釋1000倍至工作濃度。給藥劑量及給藥方法實(shí)驗(yàn)組10mg/kg/天，灌胃給藥，隔天一次，共5次。陽性對照組30mg/kg/天，肌注給藥，隔天一次，共5次。血藥濃度檢測于灌胃2h后，用HPLC或毛細(xì)管電泳分析系統(tǒng)檢測血漿藥物濃度。2、細(xì)胞株人大腸癌細(xì)胞株HT29，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，肺癌細(xì)胞株A-549，肝癌細(xì)胞株BEL-7404。3、種植瘤模型的建立與給藥(1)皮下種植瘤分別將上述細(xì)胞培養(yǎng)至90%融合，收集細(xì)胞，取2xl06細(xì)胞懸液，注射至BALB/c-nu/nu裸鼠右或左肋下皮下組織，于術(shù)后15天取材，測量瘤體積。另取同樣模型，觀察30天，計(jì)算藥物對模型動(dòng)物存活率的影響。(2)脾內(nèi)種植瘤肝轉(zhuǎn)移膜型手術(shù)暴露腹腔取2xl()S細(xì)胞，注射至BALBZc-nu/nu脾包膜內(nèi)，于術(shù)后15天取脾和肝臟，測量瘤體積和肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。(3)給藥方式種植瘤細(xì)胞同時(shí)給藥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)組用藥均有不同程度的抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用，可延長實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生存期，但實(shí)驗(yàn)4組用藥效果明顯優(yōu)于實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組和實(shí)驗(yàn)3組。實(shí)驗(yàn)4組與陽性對照組，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。詳見表l、表2、表3。表1不同藥物對種植瘤大小的影響(cm3，n=20)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2不同藥物對腫瘤肝轉(zhuǎn)移發(fā)生率的影響(％，n=20)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表1、表g可以看出，實(shí)驗(yàn)4組用藥其抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的效果與陽性對照組基本相當(dāng)，且明顯優(yōu)于其它實(shí)驗(yàn)組。表3不同藥物對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生存率的影響(％，n=20)生\實(shí)\存\體重\瘤組HT29MCF-7A-549BEL-7404陰性對照組0000實(shí)驗(yàn)l組0000實(shí)驗(yàn)2組75544761實(shí)驗(yàn)3組80726381實(shí)驗(yàn)4組95948993陽性對照組80837981由表3可以看出，實(shí)驗(yàn)4組用藥可有效延緩患癌動(dòng)物的生存壽命，其效果明顯優(yōu)于其它組。從以上試驗(yàn)可以看出，本發(fā)明藥物組合物其無論是抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移方面還是在延長患癌動(dòng)物壽命方面，其效果均優(yōu)于單一藥物組(實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組)，且抗癌活性與5-氟尿嘧啶相當(dāng)。由此充分證明本發(fā)明藥物組合物具有良好的協(xié)同作用。5-氟尿嘧啶是目前公認(rèn)的療效確切的抗癌藥物，其在臨床上也早已廣泛用于治療消化系癌(胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等)、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、絨毛膜上皮癌、惡性葡萄胎、膀胱癌、肺癌、皮膚癌、頭頸部癌等各種癌癥。但其毒性大，有時(shí)會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的毒副作用甚至死亡。上述實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物與5-氟尿嘧啶相比較其療效相當(dāng)，且在延長患癌動(dòng)物壽命方面的效果還優(yōu)于5-氟尿嘧啶。由此充分說明本發(fā)明藥物組合物具有顯著的抗癌活性，且其毒副作用小。以本發(fā)明藥物組合物為活性成分制備成各種藥物制劑，可為臨床治療各種癌癥提供新的用藥選擇。尤其是為腸癌，乳腺癌，肺癌的治療提供了新的選擇。本發(fā)明藥物組合物在制劑應(yīng)用中，可以本發(fā)明藥物組合物為活性成分按照常規(guī)的制劑技術(shù)制備成各種臨床用藥物制劑。本發(fā)明藥物組合物可經(jīng)口服或不經(jīng)口服給藥，給藥量因給藥途徑不同而各有不同。通常情況下，按照人用藥劑量為動(dòng)物劑量的1/6進(jìn)行折算，體重60公斤的成人，每天服用l克，5天為一療程/月，連續(xù)服用6個(gè)療程。但本發(fā)明藥物的用法用量，也不完全限于此，臨床醫(yī)師也可以根據(jù)病人的具體情況決定藥物的用法用量。本發(fā)明藥物組合物經(jīng)口服給藥時(shí)，首先使用該藥物組合物與常規(guī)的藥用輔料如賦形劑、崩解劑、黏合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，將其制成顆粒劑、膠囊劑、片劑的等形式給藥。非經(jīng)口服給藥時(shí)可以注射液、輸液劑或栓劑等形式給藥。以下實(shí)施例是由本發(fā)明提供的藥物組合物制成制劑。它僅為更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。具體實(shí)施方式，制劑實(shí)施例1按照本領(lǐng)域已知的方法制備片劑，每片含有下述成分BL5mg1-0ABL25mg1，6-02-ABL;25mg乳糖50mg硬脂酸鎂5mg糊精130mg制劑實(shí)施例2按照本領(lǐng)域已知的方法制備膠囊劑，每個(gè)膠囊中含有下述成分:9lOOmg1-O-ABL10mg1，6-02-ABL;lOOmg乳糖70mg玉米淀粉"mg硬脂酸鎂lmg聚乙烯比咯垸酮130mg制劑實(shí)施例4按照本領(lǐng)域已知的方法制備注射劑，5ml注射液中含有下述成分BL500mg1-O-ABL400mg1，6-02-ABL;lOOmg以下實(shí)施例是本發(fā)明藥物組合物的配比實(shí)施例，其按照常規(guī)的制劑技術(shù)制備成各種制劑，均可達(dá)到i發(fā)明所述效果，其中實(shí)施例5、6所制備的藥物綜合療效更好。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種抗癌藥物組合物，其特征在于它包括有以下重量分比的原料1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份，1-氧-乙酰基大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份，1，6-二氧-二乙酰基大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抗癌的藥物組合物，其特征在于它包括有以下重量分比的原料1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯l-3份，1-氧-乙?；笮不▋?nèi)酯0.1-2份，1，6-二氧-二乙酰基大旋覆花內(nèi)酯4-5份。3、權(quán)利要求1或2所述的抗癌藥物組合物在制備腸癌藥物中的應(yīng)用。4、權(quán)利要求l或2所述的抗癌藥物組合物在制備乳腺癌藥物中的應(yīng)用。5、權(quán)利要求1或2所述的抗癌藥物組合物在制備肺癌藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗癌藥物組合物及其在制備腸癌藥物中的應(yīng)用、在制備乳腺癌藥物中的應(yīng)用、在制備肺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明藥物組合物包括有以下重量百分比的原料1-羥基-大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份，1-氧-乙酰基大旋覆花內(nèi)酯0.1-5份，1，6-二氧-二乙?；笮不▋?nèi)酯0.1-5份。本發(fā)明藥物組合物具有顯著的抗癌活性，且其毒副作用小。同時(shí)，以本發(fā)明藥物組合物為活性成分制備成各種藥物制劑，可為臨床治療各種癌癥提供新的用藥選擇。尤其是為腸癌，乳腺癌，肺癌的治療提供了新的選擇。文檔編號A61P35/00GK101125141SQ200710062540公開日2008年2月20日申請日期2007年8月10日優(yōu)先權(quán)日2007年8月10日發(fā)明者張嫡群,溫進(jìn)坤,梅韓申請人:河北醫(yī)科大學(xué)