專利名稱：神經(jīng)生長(zhǎng)因子在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)生長(zhǎng)因子在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī) 藥領(lǐng)域。
技術(shù)背景近視眼是指眼在不使用調(diào)節(jié)作用的狀態(tài)下，平行光線經(jīng)過眼的屈光系統(tǒng)在視 網(wǎng)膜前形成焦點(diǎn)，然后到視網(wǎng)膜上呈分散而又模糊的光圈，這種屈光狀態(tài)稱為近視眼。近視眼按近視程度分輕度近視眼(小于300度)、中度近視眼(300-600 度)高度近視眼(大于600度)；而病理性近視眼是指20歲以后眼球仍在發(fā)展 的進(jìn)行性，伴有眼底改變或合并視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜變性等或其他眼部器質(zhì)性病變的 近視眼，近視度數(shù)在-6.0D以上。據(jù)調(diào)查，群體近視眼的平均患病率3 6歲為1% 3%， 7 12歲為20%， 13 15歲為30%， 16 18歲為40%，大于18歲為50%。近視發(fā)病率還以每年10%的速 度增長(zhǎng)。目前我國(guó)約有3.6億人配戴眼鏡，堪稱"眼鏡大國(guó)"。病理性近視眼占總近視眼的2%,已經(jīng)成為致盲的主要原因，是目前眼科學(xué) 界關(guān)注的重大課題。在中國(guó)，約1000萬 2000萬人深受病理性近視眼的困擾， 生活質(zhì)量受到影響，部分患者甚至在40 50歲左右就喪失了勞動(dòng)能力。病理性近視眼的發(fā)病機(jī)理病因目前仍不十分清楚，包括種族遺傳因素，并 涉及眼的解剖、生理、血供、營(yíng)養(yǎng)和植物神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等。 但仍以遺傳學(xué)說和機(jī)械學(xué)說為主。目前治療病理性近視眼的非藥物療法主要是配戴眼鏡、眼睛激光手術(shù)。配戴 眼鏡在一個(gè)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)仍將是不會(huì)被取代的主要矯正法。但是，無論是配戴 框架式眼鏡還是配戴隱形眼鏡又都有這樣或那樣難以克服的不足，所以人們一直 在尋找摘除眼鏡的治療方法。眼睛激光手術(shù)療法盡管有些已較成熟，但是均屬不 可逆的創(chuàng)傷，而且術(shù)后視功能恢復(fù)并不完善，(如對(duì)比覺、夜視力及暗適應(yīng)等) 受到損害。手術(shù)通常僅作用于屈光(降低近視屈光度)，無阻止近視眼病變進(jìn)行 的效果，甚至有可能促使病變進(jìn)行及合并癥加重?，F(xiàn)有藥物療法主要是防止近視眼的進(jìn)展和并發(fā)癥的對(duì)癥治療，而對(duì)病理性近視基本沒有治療效果。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor, NGF)是最早被發(fā)現(xiàn)而且研究得最清 楚的一個(gè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，其作為一種靶源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子維持著特定神經(jīng)元的存 活和發(fā)育，這一點(diǎn)已被大量的實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。然后現(xiàn)今將NGF的作用僅限于神經(jīng)營(yíng) 養(yǎng)方面的概念已經(jīng)不全面。最近，由于生理學(xué)技術(shù)生物化學(xué)技術(shù)原位雜交及免疫 組化技術(shù)的綜合運(yùn)用，不但證實(shí)了 NGF在胚胎發(fā)育中維持與促進(jìn)某些神經(jīng)元發(fā)育 成熟和其在成體及損傷修復(fù)中的作用，而且還在非神經(jīng)系統(tǒng)獲得了 NGF受體和 mRNA的證據(jù)。這些研究表明，NGF不僅作用于神經(jīng)系統(tǒng)，也作用于非神經(jīng)系統(tǒng)。 因此，有學(xué)者提出了NGF是一種"泛調(diào)節(jié)素"的概念。一些國(guó)內(nèi)、外的研究表明NGF及其受體存在于視覺系統(tǒng)中，視神經(jīng)、視網(wǎng)膜、 角膜、結(jié)膜可通過受體表達(dá)產(chǎn)生和利用NGF，從而改善在視覺系統(tǒng)的神經(jīng)退變 性疾病的狀況。在研究中我們發(fā)現(xiàn)，通過肌肉及眼內(nèi)注射的方式給予外源性NGF 可以改善病理性近視中的眼底改變或其他視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜變性等器質(zhì)性病變，從 而達(dá)到遠(yuǎn)期矯正屈光的目的。進(jìn)而通過試驗(yàn)證實(shí)了在眼局部滴入外源性NGF完全 可以被角膜、結(jié)膜吸收，進(jìn)而達(dá)到節(jié)后部位，發(fā)揮其調(diào)節(jié)修復(fù)作用，治療病理性 近視。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供神經(jīng)生長(zhǎng)因子在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用以下技術(shù)方案 神經(jīng)生長(zhǎng)因子在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用。病理性近視眼是指20歲以后眼球仍在發(fā)展的進(jìn)行性，伴有眼底改變或合并 視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜變性等或其他眼部器質(zhì)性病變的近視眼，近視度數(shù)在-6. 0D以上。 在研究中我們發(fā)現(xiàn)，通過肌肉及眼內(nèi)注射的方式給予外源性NGF可以改善病理性 近視中的眼底改變或其他視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜變性等器質(zhì)性病變，從而達(dá)到遠(yuǎn)期矯正 屈光的目的。進(jìn)而通過試驗(yàn)證實(shí)了在眼周部滴入外源性NGF完全可以被角膜、結(jié) 膜吸收，進(jìn)而達(dá)到節(jié)后部位，發(fā)揮其調(diào)節(jié)修復(fù)作用，治療病理性近視。本發(fā)明所述的神經(jīng)生長(zhǎng)因子的劑型是藥學(xué)上可接受的劑型，以便為患者提供 多種便捷、安全的給藥方式。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1)提供一種有效治療病理性近視的藥物與目前治療病理性近視的治療手段相比，神經(jīng)生長(zhǎng)因子能直接作用于局部受體，發(fā)揮修復(fù)及調(diào) 節(jié)作用，改善患者眼部器質(zhì)性病變及屈光狀況；2)無明顯不良反應(yīng)與現(xiàn)有的 藥物相比，本研究中未發(fā)現(xiàn)NGF有明顯的不良反應(yīng)；因此利用神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療病理性近視具有很好的社會(huì)及市場(chǎng)前景。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l、藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)選用健康雄性海蘭雞雛90只(購于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué))，隨機(jī)分為6組，每組15 只。實(shí)驗(yàn)前對(duì)雞進(jìn)行檢影驗(yàn)光，排除先天性近視。于出生后第2天將右眼以半透 明眼罩遮蓋作為遮蓋眼，眼罩為10ml塑料試管底，以IOI(成分為氰丙烯酸酯) 粘貼于雞眼眶周羽毛上，并在眼罩下方留有縫隙供透氣用。左眼開放作為對(duì)照眼。 室內(nèi)人工飼養(yǎng)，保持室溫32'C，自然晝夜節(jié)律。分別遮蓋1周和2周。在遮蓋 組中分別選擇遮蓋1周和2周組各兩組(低劑量組和高劑量組)采取邊遮蓋邊給藥 的方式，給予神經(jīng)生長(zhǎng)因子滴眼液(本公司試驗(yàn)室制備)每眼l滴(0.05ml)，每天 2次，神經(jīng)生長(zhǎng)因子滴眼液的濃度分別為13.3u g/ml(低劑量組)和39.9" g/ml(高劑量組)。6組眼罩脫落剔除，最后隨機(jī)選取每組10只，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。去除眼罩，暗室驗(yàn)光，確定對(duì)照眼、剝奪眼及對(duì)剝奪治療眼的屈光狀態(tài)。用 水合氯醛深度麻醉處死，迅速取出眼球，剪除眼球周圍軟組織，用游標(biāo)卡尺測(cè)量 眼軸長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、遮蓋眼的眼軸較對(duì)照眼明顯增長(zhǎng)，隨遮蓋時(shí)間的延長(zhǎng)明顯增長(zhǎng)。 遮蓋期間雙眼眼軸長(zhǎng)(mm)的比較(3f±s)眼別湖撒組別i周2周對(duì)照眼108. 49±0. 078. 53±0. 03遮蓋眼 10 9.86±0.07 11.47±0.082、遮蓋眼為負(fù)性屈光 遮蓋期間雙眼屈光(D)的比較(f±s)眼別傷ll救組別.l周2周對(duì)照眼101.88±0. 671.35 ±0.41遮蓋眼10-3.58±0.65-7. 58±0. 763、遮蓋治療眼的眼軸長(zhǎng)(腿)的比較(3^±"眼別加l浙組別w數(shù)l周2周低劑量組108. 75±0. 158. 65±0. 06高劑量組108. 64±0. 088. 59±0. 07,遮蓋治療眼的屈光眼別湖新組別Wl雙l周2周低劑量組10-7. 02±0. 83-6. 57±0.41高劑量組10-6. 42 ±0. 32-4. 85±0. 67通過上述實(shí)驗(yàn)證實(shí)神經(jīng)生長(zhǎng)因子滴眼液對(duì)于治療病理性近視有較好的治療效果，且高劑量組(39.9 u g/ml)的治療效果做于低劑量組(13.3 n g/ml)。 實(shí)施例2、臨床有效性病理性近視眼患者26例，31眼，肌肉注射神經(jīng)生長(zhǎng)因子，治療組15例， 20眼；空白對(duì)照組11例，11眼。兩組療效比較(主要觀察指標(biāo)是視力)比較顯示， 治療組療效明顯優(yōu)于對(duì)照組，差異具有顯著性。治療組分為兩組，各10眼，分別為低劑量組(10ug/眼/天)和高劑量組(30" g/眼/天)，療程為4 8周，進(jìn)行3 4個(gè)療程。①顯效視力提高1 2行；②有效視力有所提高，但低于前者標(biāo)準(zhǔn)；③無效視力不提高。低劑量組顯效率為63%，有效率為100%，在使用過程中未見不良反應(yīng)。高 劑量組顯效率為79%，有效率為100%，在使用過程中未見不良反應(yīng)。治療組與 空白對(duì)照組的療效差異具有顯著意義。實(shí)施例3、安全性試驗(yàn) 一、急性毒性試驗(yàn)1、 藥物神經(jīng)生長(zhǎng)因子(本公司試驗(yàn)室制備)凍干粉，臨用時(shí)用生理鹽水配制成注射液。2、 動(dòng)物上海種小鼠(購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射NGF，容量為0.17ml/10g，劑量為10萬單位/公斤體重，給藥 后連續(xù)觀察14天，未見動(dòng)物出現(xiàn)異常表現(xiàn)，亦未發(fā)現(xiàn)死亡動(dòng)物。故小鼠靜脈注 射神經(jīng)生長(zhǎng)因子的半數(shù)致死量大于10萬單位/公斤體重。二、 長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)1、 藥物神經(jīng)生長(zhǎng)因子(本公司試驗(yàn)室制備)凍干粉，臨用時(shí)用生理鹽水配制成注射液。2、 動(dòng)物Wistar大鼠(購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，20只，雌雄各半。 大鼠肌肉注射NGF，劑量為2萬單位/公斤體重，每天一次，連續(xù)給藥12 周，共檢測(cè)8項(xiàng)生理指標(biāo)、8項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)、13項(xiàng)血液生化指標(biāo)、20多種組織 臟器及注射部位的病理學(xué)檢查，均未發(fā)現(xiàn)有毒理意義的變化，表明該藥的安全范 圍是比較大的。三、 生殖毒性試驗(yàn)1、 藥物神經(jīng)生長(zhǎng)因子(本公司試驗(yàn)室制備)凍千粉，臨用時(shí)用生理鹽水配制成注射液。2、 動(dòng)物昆明種小鼠(購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，20只，雌雄各半。(一) 、 一般生殖毒性試驗(yàn)小鼠肌肉注射，劑量為4000、 8000、 16000單位/公斤體重/日，按一般毒性 試驗(yàn)的規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)和檢査。試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)期間，小鼠體重增長(zhǎng)正常， 生長(zhǎng)發(fā)育良好，胎仔外觀、骨骼及內(nèi)臟均未見畸形，雌性小鼠受孕率正常。(二) 、致畸敏感期毒性試驗(yàn)小鼠肌肉注射，劑量為4000、 8000、 16000單位/公斤體重/日，按致畸敏感 期毒性試驗(yàn)的規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)和檢查。試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)期間，小鼠體重增 長(zhǎng)正常，生長(zhǎng)發(fā)育良好，胎仔外觀、骨骼及內(nèi)臟均未見畸形。四、 全身過敏試驗(yàn) 1、藥物神經(jīng)生長(zhǎng)因子(本公司試驗(yàn)室制備)凍干粉，臨用時(shí)用生理鹽水配制成液體。 2、動(dòng)物成熟健康豚鼠(購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，8只，雄性。 豚鼠口服，劑量為85ug/只，隔日1次，共3次致敏后，首次給藥14天膠21天以靜脈注射每只豚鼠170ug劑量攻擊，注射后未見異常表現(xiàn)。表明在本試驗(yàn)條件下，神經(jīng)生長(zhǎng)因子無全身過敏反應(yīng)。通過上述神經(jīng)生長(zhǎng)因子的急性毒性、長(zhǎng)期毒性、生殖毒性及全身過敏試驗(yàn)未見致毒、致畸、致敏等毒性作用，安全使用的范圍大。
權(quán)利要求
1. 神經(jīng)生長(zhǎng)因子在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種神經(jīng)生長(zhǎng)因子制劑在制備治療病理性近視藥物中的應(yīng)用。與目前治療病理性近視的治療手段相比，神經(jīng)生長(zhǎng)因子能直接作用于全身及局部受體，發(fā)揮修復(fù)及調(diào)節(jié)作用，改善患者眼部器質(zhì)性病變及屈光狀況；與現(xiàn)有的藥物相比，未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子制劑有明顯的不良反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61K38/18GK101229365SQ200710062999
公開日2008年7月30日 申請(qǐng)日期2007年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月24日
發(fā)明者馮宇霞, 馬莉娜 申請(qǐng)人:舒泰神(北京)藥業(yè)有限公司