專(zhuān)利名稱(chēng)：鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子(deer ngf)提取及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于鹿茸提取物的醫(yī)用或食用制品領(lǐng)域。更具體地來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及由鹿茸提取神經(jīng)生長(zhǎng)因子(DEER NGF)的方法以及由該方法制備的富含神經(jīng)生長(zhǎng)因子的鹿茸提取物。另外，本發(fā)明還涉及該鹿茸提取物在藥品、食品和保健品等方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
鹿茸(鹿尚未骨化的幼角)和鹿角作為傳統(tǒng)的中藥材，具有強(qiáng)筋健骨、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、疏通血脈等功效，自古以來(lái)就被廣泛應(yīng)用于配制成為各種滋補(bǔ)藥品、食品、保健品和化妝品。通過(guò)現(xiàn)代藥物化學(xué)研究分析，鹿茸中含有許多種生理活性成分，包括磷脂、生物胺類(lèi)化合物、前列腺素、維生素、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、不飽和脂肪酸、皮質(zhì)醇等。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)高速發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)鹿茸中除了含有上述各種生理活性成分之外，其中還含有胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)、胰島素、人生長(zhǎng)激素(HGH)、促生長(zhǎng)釋放因子(GHRF-6)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維生長(zhǎng)因子(FGF)等大分子活性蛋白質(zhì)。以上各種活性成分，尤其是各種活性蛋白質(zhì)，相互協(xié)同作用，發(fā)揮功效。其中，神經(jīng)生長(zhǎng)因子具有突出的藥理作用。
神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)組織具有多種營(yíng)養(yǎng)性生物效應(yīng)，能夠促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化，修復(fù)神經(jīng)損傷，因此可治療多種神經(jīng)疾病，如老年性癡呆癥、帕金森氏癥、神經(jīng)末梢炎癥等(參見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利CN1144693A、CN1304772A)。此外，神經(jīng)生長(zhǎng)因子還具有免疫調(diào)節(jié)、抑制某些腫瘤的有絲分裂、促進(jìn)創(chuàng)口組織的修復(fù)反應(yīng)等作用。
然而，在傳統(tǒng)的鹿茸加工過(guò)程中，鹿茸直接粉碎后服用，顆粒較大，造成吸收效率低下；有時(shí)，鹿茸的加工需要經(jīng)過(guò)加熱煎煮、烘干等步驟，高溫會(huì)使其中的NGF等蛋白質(zhì)變性，從而降低乃至喪失它們的功效。另一種傳統(tǒng)的加工方式是將鹿茸浸泡在高濃度酒精含量的酒中，制成藥酒服用。但是由于酒中含有高濃度的作為有機(jī)溶劑的酒精，會(huì)使NGF等蛋白質(zhì)變性，而且從大顆粒鹿茸中也不利于溶解出NGF等蛋白質(zhì)，因而會(huì)導(dǎo)致鹿茸中的NGF利用效率低下，造成資源浪費(fèi)。另外，高濃度酒精含量的藥酒也限制了每次的服用量。
為了提高鹿茸材料的使用效率，人們嘗試了各種方法提取鹿茸中富含神經(jīng)生長(zhǎng)因子的有效成分。例如，中國(guó)專(zhuān)利CN1133651C披露了一種從蛇毒中提取NGF的方法，預(yù)處理后，需要經(jīng)過(guò)三步層析，生產(chǎn)工藝復(fù)雜而且條件較為苛刻；中國(guó)專(zhuān)利CN1104095A中公開(kāi)了一種含有NGF的鹿茸生長(zhǎng)因子制劑，預(yù)處理后，需要對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行超濾、CM-32柱層析和Sephadaex G50柱層析，不但需要換層析柱，而且沒(méi)有提供洗脫峰的圖譜，收集到的所謂活性峰只有標(biāo)號(hào)，需要重新摸索才能重復(fù)該方法。
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期艱苦的研究摸索，本發(fā)明人獲得了一種提取鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的方法，該方法通過(guò)階段梯度洗脫，預(yù)處理后，僅僅需要一步層析就可以獲得高純度的神經(jīng)生長(zhǎng)因子，大大簡(jiǎn)化了生產(chǎn)工藝的復(fù)雜程度，便于在大規(guī)模生產(chǎn)中控制質(zhì)量，節(jié)約成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供提取鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的方法以及由該方法制備的富含神經(jīng)生長(zhǎng)因子的鹿茸提取物，并提供了該鹿茸提取物在藥品、食品、保健品和化妝品等方面的應(yīng)用。
具體而言，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種提取鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的方法，其包括，對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行一步陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫。其中，術(shù)語(yǔ)“一步”指的是在本發(fā)明的方法中，僅僅在同一種層析柱(即陽(yáng)離子交換層析柱)上進(jìn)行上樣和洗脫，而不包括進(jìn)行其他層析的步驟。本發(fā)明由于只進(jìn)行一種層析，因此工藝較之現(xiàn)有技術(shù)更簡(jiǎn)單，節(jié)約了生產(chǎn)成本，適合在大規(guī)模生產(chǎn)中推廣。陽(yáng)離子交換層析是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，優(yōu)選那些已經(jīng)商品化的。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，陽(yáng)離子交換層析優(yōu)選為CM-Cellulose32柱層析。術(shù)語(yǔ)“階段梯度洗脫”指的是分階段洗脫，每階段用含不同NaCl濃度和/或不同pH的緩沖液進(jìn)行洗脫。緩沖液是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，如常用于多肽、蛋白質(zhì)溶解的緩沖液(參見(jiàn)《分子克隆試驗(yàn)指南》(科學(xué)出版社，2002年))。優(yōu)選陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫包括，將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH3～5并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.3～0.5mol/L，然后上樣于陽(yáng)離子交換層析柱，再依次用含0.7～0.85mol/L NaCl的pH3～5的緩沖液、含0.7～0.85mol/L NaCl的pH6～8的緩沖液和含0.9～1.1mol/L NaCl的pH6～8的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。目前已經(jīng)有成熟的方法來(lái)檢測(cè)神經(jīng)生長(zhǎng)因子，優(yōu)選用本發(fā)明實(shí)施例中的活性檢測(cè)方法來(lái)確定含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰并收集。優(yōu)選可以包括進(jìn)一步濃縮的步驟。
本文中，鹿茸浸提液指的是用水或緩沖液對(duì)鹿茸進(jìn)行浸漬而得的提取液，其中含有鹿茸中的水溶性成分，包括神經(jīng)生長(zhǎng)因子。本發(fā)明優(yōu)選選用新鮮鹿茸或冷藏的新鮮鹿茸作為原材料，這樣有利于最大限度地保存NGF的含量和活性。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“新鮮”指的是采集鹿茸后6小時(shí)內(nèi)就開(kāi)始進(jìn)行加工制備本發(fā)明的納米化制品或進(jìn)行冷藏了，優(yōu)選加工或冷藏不遲于采集后的3小時(shí)，更優(yōu)選不遲于1小時(shí)，最優(yōu)選不遲于20分鐘。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“冷藏”指的是將鹿茸保存于0℃以下的環(huán)境中，優(yōu)選保存于-20℃的環(huán)境中。優(yōu)選浸提鹿茸前先將鹿茸粉碎(如，切片、研磨、勻漿和/或超聲波破碎)，這樣有利于提高浸提出有效成份的效率。通過(guò)離心和/或過(guò)濾等方式，可以收集鹿茸浸提液，去除不溶物質(zhì)。
優(yōu)選本發(fā)明第一個(gè)方面的方法，其依次包括如下步驟(1)粉碎鹿茸并浸提出鹿茸浸提液；(2)將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH4并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.4mol/L，然后上樣于CM-Cellulose32柱，再依次用含0.8mol/L NaCl的pH4的緩沖液、含0.8mol/L NaCl的pH7的緩沖液和含1mol/L NaCl的pH7的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性的鹿茸提取物的制備方法，其包括，對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行一步陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫。其中，術(shù)語(yǔ)“一步”指的是在本發(fā)明的方法中，僅僅在同一種層析柱(即陽(yáng)離子交換層析柱)上進(jìn)行上樣和洗脫，而不包括進(jìn)行其他層析的步驟。本發(fā)明由于只進(jìn)行一種層析，因此工藝較之現(xiàn)有技術(shù)更簡(jiǎn)單，節(jié)約了生產(chǎn)成本，適合在大規(guī)模生產(chǎn)中推廣。陽(yáng)離子交換層析是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，優(yōu)選那些已經(jīng)商品化的。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，陽(yáng)離子交換層析優(yōu)選為CM-Cellulose32柱層析。術(shù)語(yǔ)“階段梯度洗脫”指的是分階段洗脫，每階段用含不同NaCl濃度和/或不同pH的緩沖液進(jìn)行洗脫。緩沖液是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，如常用于多肽、蛋白質(zhì)溶解的緩沖液(參見(jiàn)《分子克隆試驗(yàn)指南》(科學(xué)出版社，2002年))。優(yōu)選陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫包括，將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH3～5并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.3～0.5mol/L，然后上樣于陽(yáng)離子交換層析柱，再依次用含0.7～0.85mol/L NaCl的pH3～5的緩沖液、含0.7～0.85mol/L NaCl的pH6～8的緩沖液和含0.9～1.1mol/L NaCl的pH6～8的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。目前已經(jīng)有成熟的方法來(lái)檢測(cè)神經(jīng)生長(zhǎng)因子，優(yōu)選用本發(fā)明實(shí)施例中的活性檢測(cè)方法來(lái)確定含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰并收集。優(yōu)選可以包括進(jìn)一步濃縮的步驟。更優(yōu)選本發(fā)明第一個(gè)方面的方法，其依次包括如下步驟
(1)粉碎鹿茸并浸提出鹿茸浸提液；(2)將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH4并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.4mol/L，然后上樣于CM-Cellulose32柱，再依次用含0.8mol/L NaCl的pH4的緩沖液、含0.8mol/L NaCl的pH7的緩沖液和含1mol/L NaCl的pH7的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一個(gè)方面的方法提取的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子。該NGF對(duì)神經(jīng)組織具有多種營(yíng)養(yǎng)性生物效應(yīng)，能夠促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化，修復(fù)神經(jīng)損傷。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，該NGF能促使神經(jīng)節(jié)長(zhǎng)出長(zhǎng)而密的突起，活性達(dá)到1.5×104BU/mL。
在第四個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第二個(gè)方面的方法制備的具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性的鹿茸提取物。該鹿茸提取物具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性，能夠促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化，修復(fù)神經(jīng)損傷。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，該鹿茸提取物能促使神經(jīng)節(jié)長(zhǎng)出長(zhǎng)而密的突起，活性達(dá)到1.5×104BU/mL。
在第五個(gè)方面，本發(fā)明提供了含有本發(fā)明第四個(gè)方面的鹿茸提取物的制劑。鹿茸提取物可以和藥學(xué)上可接受的輔劑組合從而加工各種制劑。藥學(xué)上可接受的輔劑包括藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑等，它們與活性成分相容。運(yùn)用藥學(xué)上可接受的輔劑制備制劑對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知的。本發(fā)明的制劑優(yōu)選為單位劑量形式，如片劑、丸劑、膠囊(包括持續(xù)釋放或延遲釋放形式)、粉劑、混懸劑、顆粒劑、酊劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮液、針劑等劑型，從而適合各種給藥形式，例如口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、皮內(nèi)或經(jīng)過(guò)皮膚等的給藥形式。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，制劑優(yōu)選為鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子凍干劑，其由本發(fā)明第四個(gè)方面的鹿茸提取物冷凍干燥而得。
在第六個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第三個(gè)方面的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子、本發(fā)明第四個(gè)方面的鹿茸提取物或本發(fā)明第五個(gè)方面的制劑在制備用于促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)或分化的藥品、食品和/或保健品中的應(yīng)用。在第七個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第三個(gè)方面的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子、本發(fā)明第四個(gè)方面的鹿茸提取物或本發(fā)明第五個(gè)方面的制劑在制備用于修復(fù)神經(jīng)損傷的藥品、食品和/或保健品中的應(yīng)用。由于NGF能夠促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化，修復(fù)神經(jīng)損傷，因此可治療多種神經(jīng)疾病或改善這些疾病的癥狀，如老年性癡呆癥、帕金森氏癥、神經(jīng)末梢炎癥等。
對(duì)于藥品來(lái)說(shuō)，可以對(duì)需要促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)或分化和/或需要修復(fù)神經(jīng)損傷的患者進(jìn)行給藥。給藥的劑量和形式一般由醫(yī)師根據(jù)患者的具體情況(如年齡、體重、性別、病情、患病時(shí)間、身體狀況等)確定。一般而言，NGF計(jì)，給藥的劑量為0.001～100mg/kg患者體重，優(yōu)選為0.01～1mg/kg，優(yōu)選為0.02～0.1mg/kg。給藥形式可以根據(jù)各種藥物制劑的劑型來(lái)確定，適合的給藥形式有口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、皮內(nèi)或經(jīng)過(guò)皮膚等給藥形式，優(yōu)選使用口噴劑或膠囊劑口服給藥。
對(duì)于食品和/或保健品來(lái)說(shuō)，由于是天然制品，而且鹿茸本身有著悠久的使用歷史，健康人服用一定量的本發(fā)明的NFG、提取物或制品有助于維持其正常的神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化，具有健腦的功效。本發(fā)明的NFG、提取物或制品可以單獨(dú)作為食品和/或保健品使用，也可以添加到其他食品和/或保健品中使用，例如，可以添加到常規(guī)的飲料、食品和/或保健品中配合應(yīng)用。
本發(fā)明引用了公開(kāi)文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文內(nèi)容均納入本文進(jìn)行參考，就好像它們的全文已經(jīng)在本文中重復(fù)敘述過(guò)一樣。為了便于理解，以下將通過(guò)具體的附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說(shuō)明書(shū)的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對(duì)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)都是顯而易見(jiàn)了。


圖1顯示了NGF離子交換層析圖譜，其中箭頭所指的峰為鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子所在的峰。
圖2顯示了NGF的SDS-PAGE圖譜，其中左邊的條帶為鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子，而右邊的條帶為分子量標(biāo)記。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1，鹿茸的預(yù)處理取新鮮鹿茸0.5kg，用冷凍切片機(jī)將鹿茸切成厚度為1～2mm的切片，然后加入適量(200mL)預(yù)冷的去離子水在4℃用勻漿機(jī)進(jìn)行粉碎，勻漿操作進(jìn)行至勻漿中沒(méi)有可見(jiàn)的組織塊時(shí)結(jié)束。對(duì)勻漿物以5000轉(zhuǎn)/分鐘(rpm)離心20分鐘，取上清液。在沉淀中加入200mL預(yù)冷的去離子水，重懸沉淀后再次以5000rpm離心20分鐘，取上清液。然后，重復(fù)上述重懸、離心過(guò)程一次，取上清液。合并各次離心分離所得的上清液，裝入截留分子量10000Da的透析袋(購(gòu)自Sigma公司)，于4℃對(duì)0.02mol/L磷酸鉀緩沖液(pH6.8)透析30分鐘，然后換磷酸鉀緩沖液重復(fù)透析，共進(jìn)行6次，得到經(jīng)預(yù)處理后的鹿茸浸提液850mL。
實(shí)施例2，鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的層析純化及凍干劑的制備向850mL實(shí)施例1中得到的鹿茸浸提液中加入95mL 0.5mol/L HAc-NaAc緩沖液(pH4.0)，使得溶液的pH值降至4.0，然后再向其中加入固體NaCl，使溶液中的NaCl終濃度為0.4mol/L，充分混勻后靜置10分鐘，然后，5000rpm離心5分鐘。取900mL上清液上樣于CM-Cellulose32柱(5.5cm×10cm)(購(gòu)自Pharmacia公司)，然后進(jìn)行階段梯度洗脫。階段梯度洗脫時(shí)依次以10mL/分鐘的流速使用400mL含0.8mol/L NaCl的0.5mol/L HAc-NaAc緩沖液(pH4.0)、350mL含0.8mol/L NaCl的0.5mol/L磷酸鉀緩沖液(pH7.0)和500mL含1mol/L NaCl的0.5mol/L磷酸鉀緩沖液(pH7.0)進(jìn)行洗脫并用紫外檢測(cè)儀在280nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)(洗脫圖譜如圖1所示)。通過(guò)如實(shí)施例3所述的檢測(cè)方法檢測(cè)各個(gè)洗脫級(jí)分經(jīng)透析得到的產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)如圖1中“目的蛋白峰”所指的峰為鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子。因此，收集該目的蛋白峰，裝入截留分子量3500Da的透析袋，于4℃對(duì)0.02mol/L磷酸鉀緩沖液(pH6.8)透析30分鐘，然后換磷酸鉀緩沖液重復(fù)透析，共進(jìn)行6次。由此得到純化的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子溶液180mL。將溶液裝入透析袋，用聚乙二醇20000進(jìn)行濃縮。然后將濃縮液冷凍，然后在-70攝氏度下用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，得到鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子凍干劑172mg。
實(shí)施例3，神經(jīng)生長(zhǎng)因子的檢測(cè)根據(jù)《分子克隆試驗(yàn)指南》(科學(xué)出版社，2002年)和翟雷等的測(cè)試方法(微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，1999，27(1)43-46)檢測(cè)鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子。將實(shí)施例2得到的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子溶液進(jìn)行SDS-PAGE(15％聚丙烯酰胺分離膠、4％積層膠、10mA恒流電泳)，電泳結(jié)束后以考馬斯亮蘭染色，電泳凝膠照片如圖2所示，在分子量約14kD處有神經(jīng)生長(zhǎng)因子單一條帶，通過(guò)圖像分析得其純度達(dá)到96％。用雞胚背根神經(jīng)節(jié)的生長(zhǎng)來(lái)檢測(cè)NGF的生物活性在加入緩沖液的空白對(duì)照組中，雞胚背根神經(jīng)節(jié)沒(méi)有突起生長(zhǎng)；而在加入實(shí)施例2純化后得到的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子溶液的實(shí)驗(yàn)組中，雞胚背根神經(jīng)節(jié)長(zhǎng)出長(zhǎng)而密的突起，活性為1.5×104BU/mL，比活為1.57×104BU/mg(參比品為鼠源NGF，購(gòu)自Sigma公司)。
權(quán)利要求
1.提取鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的方法，其包括，對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行一步陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫。
2.具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性的鹿茸提取物的制備方法，其包括，對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行一步陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述陽(yáng)離子交換層析為CM-Cellulose32柱層析。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一的方法，其中所述陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫包括，將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH3～5并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.3～0.5mol/L，然后上樣于陽(yáng)離子交換層析柱，再依次用含0.7～0.85mol/L NaCl的pH3～5的緩沖液、含0.7～0.85mol/L NaCl的pH6～8的緩沖液和含0.9～1.1mol/LNaCl的pH6～8的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之任一的方法，其依次包括如下步驟(1)粉碎鹿茸并浸提出鹿茸浸提液；(2)將鹿茸浸提液調(diào)節(jié)至pH4并使鹿茸浸提液中的NaCl濃度達(dá)到0.4mol/L，然后上樣于CM-Cellulose32柱，再依次用含0.8mol/L NaCl的pH4的緩沖液、含0.8mol/L NaCl的pH7的緩沖液和含1mol/L NaCl的pH7的緩沖液進(jìn)行洗脫，收集含鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子的峰。
6.權(quán)利要求1、3-5之任一的方法提取的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子。
7.權(quán)利要求2-5之任一的方法制備的具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性的鹿茸提取物。
8.鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子凍干劑，其由權(quán)利要求7所述的鹿茸提取物冷凍干燥而得。
9.權(quán)利要求6所述的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子、權(quán)利要求7所述的鹿茸提取物或權(quán)利要求8所述的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子凍干劑在制備用于促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)或分化的藥品、食品和/或保健品中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求6所述的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子、權(quán)利要求7所述的鹿茸提取物或權(quán)利要求8所述的鹿茸神經(jīng)生長(zhǎng)因子凍干劑在制備用于修復(fù)神經(jīng)損傷的藥品、食品和/或保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及由鹿茸提取神經(jīng)生長(zhǎng)因子(DEER NGF)的方法，其包括對(duì)鹿茸浸提液進(jìn)行一步陽(yáng)離子交換層析和階段梯度洗脫。另外，本發(fā)明還涉及由該方法制備的富含神經(jīng)生長(zhǎng)因子的鹿茸提取物以及該鹿茸提取物在藥品、食品和保健品等方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K38/18GK101020715SQ20071006760
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月15日
發(fā)明者朱成鋼, 王利忠 申請(qǐng)人:王利忠