專利名稱：黃酮衍生物及制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬有機(jī)化合物的合成，涉及多取代黃酮衍生物的制備方法，尤其涉及2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃酮衍生物具有抗腫瘤作用。自1971年科學(xué)工作者研究揭示槲皮素(3′，4′，5，7-四羥基黃酮)有一定的抗腫瘤活性后，人們陸續(xù)報(bào)道了多種具有抗腫瘤活性的黃酮化合物。2003年X.Zheng等報(bào)道了一系列B環(huán)含三氟甲基取代基的黃酮衍生物具有抗腫瘤作用，其中5，7-二丙氧基-2-(4’-三氟甲基苯基)-苯并吡喃-4-酮對人胃癌細(xì)胞SGC-7901活性最強(qiáng)，IC50值為2.7μM。該文所提供的黃酮衍生物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是B環(huán)的4’-位含三氟甲基取代基，A環(huán)的5-位單取代或5，7-位二取代含氧功能基(羥基和烷氧基)。作者僅對這些化合物進(jìn)行了初步的構(gòu)效關(guān)系探討，而未對其抗腫瘤作用的機(jī)制作進(jìn)一步的深入研究；2005年Y.K.Rao等報(bào)道一系列的多甲氧基黃酮衍生物對人淋巴癌細(xì)胞、人前列腺癌細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞均具有抑制作用，IC50值的范圍為15-100μM，而對正常細(xì)胞幾乎無影響(IC50值＞200μM)。細(xì)胞周期的分析研究表明部分化合物能將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，因此他們可作為特異的G2/M期阻滯先導(dǎo)物。2007年S.Li等報(bào)道了多甲氧基黃酮和羥基甲氧基黃酮對人白血病細(xì)胞具有中等程度的抑制作用，其中2個(gè)化合物顯示了較強(qiáng)的抑制活性，IC50值分別為2.07和4.16μM，并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎的未見文獻(xiàn)報(bào)道的含有氮原子的黃酮衍生物(2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物)。本發(fā)明是在黃酮母核的8-位上引入不同的胺亞甲基結(jié)構(gòu)，合成了一系列的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物。本發(fā)明提供的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的結(jié)構(gòu)通式為
其中R1為1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷烴；Ar為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)，苯環(huán)上的取代基可為氫原子、鹵原子、羥基、含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基、含1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基；R2是開鏈或環(huán)狀的叔胺結(jié)構(gòu)NR3R4，其中R3和R4可以是相同或不同，它們可以是甲基、乙基，含1-4個(gè)碳原子的烷基醇及其酯，含1-4個(gè)碳原子的羧酸及其酯，含1-4個(gè)碳原子的烷基胺，或R3、R4分別與碳、氧及氮原子環(huán)合成五元或六元環(huán)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一類2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)(1)化合物I在堿性條件下經(jīng)烷基化試劑的選擇性醚化可得到化合物II，經(jīng)過重結(jié)晶可得純品。反應(yīng)通常在極性溶劑如丙酮中進(jìn)行，常用的堿性物質(zhì)有碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀，反應(yīng)溫度可以在10-30℃之間進(jìn)行，通常在室溫下進(jìn)行；(2)化合物II在堿性條件下與芳香醛縮合得到化合物III，反應(yīng)通常在質(zhì)子性混合溶劑中進(jìn)行，如甲醇-水、乙醇-水、異丙醇-水等，常用的堿有氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉等，反應(yīng)溫度可以在10-30℃之間進(jìn)行，通常在室溫下進(jìn)行，所得粗品可通過重結(jié)晶精制；(3)所得的III在質(zhì)子性溶劑中，在酸和甲醛的存在下與仲胺反應(yīng)生成化合物IV，所用的質(zhì)子性溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇等，所用的甲醛可以為甲醛水溶液、三聚甲醛和多聚甲醛等，反應(yīng)通常在50-90℃之間進(jìn)行，所得產(chǎn)物經(jīng)過柱層析可得純品；(4)化合物IV在極性溶劑中，經(jīng)碘催化環(huán)合得到化合物V，反應(yīng)所用的極性溶劑為二氧六環(huán)、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲亞砜中任一種。反應(yīng)溫度可以在10-100℃之間，通常在室溫進(jìn)行，所得產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離可得純品；(5)化合物V經(jīng)過脫烷基化得到化合物VI，常用的脫烷基化試劑選用路易斯酸如氫溴酸、濃鹽酸、三氯化鋁、三溴化鋁、三甲基碘硅烷、三氯化硼、三溴化硼中任一種，反應(yīng)在極性溶劑中進(jìn)行，所用的極性溶劑可以為二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈中任一種，反應(yīng)溫度為10-80℃，粗產(chǎn)物經(jīng)過柱層析分離可得到純品。
化合物I可直接購買，化合物II可按文獻(xiàn)方法(K.Y.T.Juntend et al，EP0292576)制得，化合物III可按文獻(xiàn)方法(Xiaoyong Bu et al，Synthesis，1997，11，1246-1248)制得。
本發(fā)明的合成路線 在(HCHO)n中，當(dāng)n為1時(shí)是甲醛，n為3時(shí)是三聚甲醛，如果沒有特別說明，則(HCHO)n為多聚甲醛。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。初步的藥理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)它們對多種腫瘤細(xì)胞株，包括Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7等均有一定的體外抑制增殖作用，黃酮母核8-位具有開鏈?zhǔn)灏方Y(jié)構(gòu)的化合物對HL-60細(xì)胞有選擇性的抑制作用，其中Vg對HL-60細(xì)胞具很強(qiáng)的抑制活性，IC50值為0.6μM；化合物VIc的作用尤為突出，對6種腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制活性，IC50值分別為24.4，10.9，12.7，9.1，8.7，13.1μM，具廣譜的抗腫瘤活性。另外對部分化合物進(jìn)行細(xì)胞周期素依賴性激酶1/周期素B的抑制活性測定，結(jié)果表明部分化合物確有抑制細(xì)胞周期的作用，如化合物VIc對細(xì)胞周期依賴性激酶1/周期素B的抑制IC50值為低微摩爾水平(IC50值為0.2052μM)，說明這些化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用可能與其阻滯腫瘤細(xì)胞周期的進(jìn)程有關(guān)。
本發(fā)明的特點(diǎn)是以具有活性的黃酮為先導(dǎo)化合物，在其母核結(jié)構(gòu)的8-位引入胺亞甲基而得到的2-取代苯基-5，7-含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物。這是一類結(jié)構(gòu)全新的化合物，初步的藥理活性篩選試驗(yàn)表明這些化合物具有一定的抗腫瘤活性，有些化合物的選擇性很好，有些化合物的抗瘤譜較廣，對細(xì)胞周期依賴性激酶1/周期素B的抑制活性表明這些化合物的抗腫瘤活性可部分歸因于它們對細(xì)胞周期的抑制作用。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。以下的實(shí)施例是說明本發(fā)明的，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1、2’-羥基-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(III)參照文獻(xiàn)方法(Xiaoyong Bu et al，Synthesis，1997，11，1246-1248)制得。
m.p.123-124℃1HNMR(CDCl3)δ14.20(s，1H)，8.14(d，1H，J＝15.6Hz)，7.87(d，1H，J＝15.2Hz)，7.68-7.70(m，1H)，7.42-7.44(m，1H)，7.26-7.31(m，2H)，6.11(d，1H，J＝2.4Hz)，5.96(d，1H，J＝2.4Hz)，3.90(s，3H)，3.84(s，3H)。
實(shí)施例2、2’-羥基-3’-(四氫吡咯-1-基-甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVa)將化合物III 1.59g(4.99mmol)、甲醛水溶液1.24g(15.30mmol)、四氫吡咯0.80g(11.25mmol)、甲醇13ml和鹽酸數(shù)滴加入反應(yīng)瓶中，回流2h。冷卻，減壓回收溶劑，加水稀釋，堿化，二氯甲烷提取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，柱層析分離得到黃色固體1.00g，收率50％，m.p.125-127℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.05(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.68(m，1H)，7.54(d，1H，J＝15.6Hz)，7.43-7.40(m，1H)，7.30-7.28(m，2H)，6.02(s，1H)，3.94(s，2H)，3.93(s，3H)，3.91(s，3H)，2.86(brs，4H)，1.89(brs，4H)。
實(shí)施例3、2’-羥基-3’-(4-甲基哌嗪-1-基-甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVb)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N-甲基哌嗪代替四氫吡咯。得到黃色結(jié)晶，收率56％，m.p.146-148℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.98(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.67(m，1H)，7.42(d，1H，J＝15.6Hz)，7.41-7.39(m，1H)，7.29-7.26(m，2H)，6.00(s，1H)，3.86(s，3H)，3.85(s，3H)，3.71(s，2H)，2.61-2.60(m，4H)，2.45-2.44(m，4H)，2.26(s，3H)。
實(shí)施例4、2’-羥基-3’-(N，N-二乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVc)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N，N-二乙胺代替四氫吡咯。得到黃色結(jié)晶，收率71％，m.p.187-190℃。
1HNMR(CDCl3)δ14.71(s，1H)，8.17(d，1H，J＝15.6Hz)，7.80(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.68(m，1H)，7.45-7.44(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.06(s，1H)，4.17(s，2H)，4.07(s，3H)，3.99(s，3H)，3.12(q，4H，J＝7.0Hz)，1.47(t，6H，J＝7.0Hz)。
實(shí)施例5、2’-羥基-3’-(N，N-二甲胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVd)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N，N-二甲胺代替四氫吡咯。得到黃色結(jié)晶，收率63％，m.p.188-190℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.01(d，1H，J＝15.6Hz)，7.68-7.65(m，1H)，7.52(d，1H，J＝16.0Hz)，7.40-7.38(m，1H)，7.27-7.25(m，2H)，5.99(s，1H)，3.88(s，3H)，3.87(s，3H)，3.58(s，2H)，2.30(s，6H)。
實(shí)施例6、2’-羥基-3’-(N，N-甲乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVe)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N，N-甲基乙基胺代替四氫吡咯。得到黃色固體，收率72％，m.p.179-181℃。
1HNMR(CDCl3)δ14.71(s，1H)，8.19(d，1H，J＝15.6Hz)，7.83(d，1H，J＝15.2Hz)，7.72-7.69(m，1H)，7.47-7.45(m，1H)，7.35-7.33(m，2H)，6.09(s，1H)，4.22(s，2H)，4.07(s，3H)，4.04(s，3H)，3.16(q，2H，J＝7.2Hz)，2.72(s，3H)，1.53(t，3H，J＝7.2Hz)。
實(shí)施例7、2’-羥基-3’-(N-甲基-N-β-羥乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVf)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N-甲基-N-β-羥乙胺代替四氫吡咯。得到黃色固體，收率74％，m.p.127-130℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.13(d，1H，J＝15.6Hz)，7.80(d，1H，J＝15.6Hz)，7.71-7.69(m，1H)，7.46-7.43(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.03(s，1H)，3.96(s，3H)，3.92(s，3H)，3.67(t，2H，J＝5.4Hz)，3.61(s，2H)，2.65(t，2H，J＝5.4Hz)，2.27(s，3H)。
實(shí)施例8、2’-羥基-3’-(N-甲基-N-β-乙酰氧乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVg)將化合物IVf2.03g(5.01mmol)溶于CH2Cl225ml中，加入醋酐0.55ml，室溫?cái)嚢?h。用稀鹽酸調(diào)pH至8，二氯甲烷提取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，柱層析分離得到黃色固體1.05g，收率47％，m.p.97-99℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.04(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.67(m，1H)，7.59(d，1H，J＝15.6Hz)，7.42-7.40(m，1H)，7.30-7.29(m，2H)，6.01(s，1H)，4.25(t，2H，J＝5.6Hz)，3.91(s，3H)，3.88(s，3H)，3.68(s，2H)，2.75(t，2H，J＝5.6Hz)，2.34(s，3H)，2.04(s，3H)。
實(shí)施例9、2’-羥基-3’-(N-甲基-N-甲氧羰基甲基胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVh)操作過程參見實(shí)施例2，只是用肌氨酸甲酯鹽酸鹽代替四氫吡咯。得到黃色結(jié)晶，收率53％，m.p.115-117℃。
1HNMR(CDCl3)δ13.88(brs，1H)，8.12(d，1H，J＝16.0Hz)，7.75(d，1H，J＝16.0Hz)，7.71-7.70(m，1H)，7.46-7.44(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.02(s，1H)，3.97(s，3H)，3.92(s，3H)，3.82(s，2H)，3.73(s，3H)，3.35(s，2H)，2.47(s，3H)。
實(shí)施例10、2’-羥基-3’-(N-甲基-N’，N’-二甲基丙基胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVi)操作過程參見實(shí)施例2，只是用N，N’，N’-三甲基丙二胺代替四氫吡咯。得到黃色結(jié)晶，收率49％，m.p.86-87℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.92(d，1H，J＝15.6Hz)，7.61-7.59(m，1H)，7.36(d，1H，J＝15.2Hz)，7.32-7.30(m，1H)，7.20-7.18(m，2H)，5.93(s，1H)，3.79(s，6H)，3.55(s，2H)，2.43-2.41(m，4H)，2.10(s，9H)，1.66-1.64(m，2H)。
實(shí)施例11、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(四氫吡咯-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Va)將化合物IVa 1.00g(2.40mmol)溶于二甲基甲酰胺32mL中，再加入碘96mg(0.38mmol)，室溫反應(yīng)3h。減壓蒸餾除去大部分的二甲基甲酰胺，將反應(yīng)液倒入100mL水中，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，濾液減壓回收。柱層析分離得淡黃色結(jié)晶0.60g，收率62％，m.p.124-126℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.44-7.40(m，2H)，6.60(s，1H)，6.45(s，1H)，4.03(s，3H)，3.98(s，3H)，3.91(s，2H)，2.57(brs，4H)，1.74-1.72(m，4H)。
實(shí)施例12、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vb)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVb替代化合物IVa。得到微黃色結(jié)晶，收率70％，m.p.147-149℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.38-7.36(m，2H)，6.58(s，1H)，6.44(s，1H)，4.02(s，3H)，3.96(s，3H)，3.79(s，2H)，2.64(brs，8H)，2.37(s，3H)。
實(shí)施例13、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(二乙胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vc)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVc替代化合物IVa。得到淡黃色結(jié)晶，收率64％，m.p.117-119℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.75(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.55(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.47-7.43(m，2H)，6.58(s，1H)，6.48(s，1H)，4.06(s，3H)，4.01(s，3H)，3.82(s，2H)，2.60(q，4H，J＝7.0Hz)，1.01(t，6H，J＝7.0Hz)。
實(shí)施例14、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(二甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vd)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVd替代化合物IVa。得到淡黃色結(jié)晶，收率71％，m.p.160-162℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.70(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.58(s，1H)，6.44(s，1H)，4.02(s，3H)，3.97(s，3H)，3.64(s，2H)，2.25(s，6H)。
實(shí)施例15、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(甲基乙基胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Ve)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVe替代化合物IVa。得到白色結(jié)晶，收率69％，m.p.146-147℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.71(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.42-7.40(m，2H)，6.57(s，1H)，6.45(s，1H)，4.02(s，3H)，3.97(s，3H)，3.71(s，2H)，2.50(q，2H，J＝7.2Hz)，2.19(s，3H)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)。
實(shí)施例16、2-{[(2-(2-氯苯基)-5，7-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙醇醋酸酯(Vf)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVg替代化合物IVa。得到淡黃色結(jié)晶，收率67％，m.p.127-128℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.75(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.42-7.40(m，2H)，6.54(s，1H)，6.43(s，1H)，4.15(t，2H，J＝5.6Hz)，4.00(s，3H)，3.97(s，3H)，3.76(s，2H)，2.69(t，2H，J＝5.6Hz)，2.23(s，3H)，1.94(s，3H)。
實(shí)施例17、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(2-羥乙基甲基胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vg)將化合物Vf 0.89g(2.0mmol)、氫氧化鉀0.15g(2.7mmol)、乙醇20mL和水1mL投入反應(yīng)瓶中，回流0.5h。減壓回收大部分溶劑，加水稀釋，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，濾液減壓回收。硅膠柱層析分離得淡黃色固體0.60g，收率74％，m.p.162-164℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.65(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.52(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.48(s，1H)，6.46(s，1H)，4.03(s，3H)，4.00(s，3H)，3.93(s，2H)，3.64(t，2H，J＝5.0Hz)，2.74(t，2H，J＝5.0Hz)，2.34(s，3H)。
實(shí)施例18、2-{[(2-(2-氯苯基)-5，7-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙酸甲酯(Vh)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVh替代化合物IVa。得到黃色結(jié)晶，收率54％，m.p.116-118℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.73(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.58(s，1H)，6.45(s，1H)，4.03(s，3H)，4.00(s，5H)，3.58(s，3H)，3.29(s，2H)，2.41(s，3H)。
實(shí)施例19、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-{[((3-二甲胺基)丙基)(甲基)胺基]甲基}-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vi)操作過程參見實(shí)施例11，只是用化合物IVi替代化合物IVa。得到淡棕色固體，收率62％，m.p.70-72℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.71(dd，1H，J1＝8.0Hz，J2＝2.0Hz)，7.52(dd，1H，J1＝8.0Hz，J2＝2.0Hz)，7.42(m，2H)，6.54(s，1H)，6.45(s，1H)，4.02(s，3H)，3.98(s，3H)，3.74(s，2H)，2.50(t，2H，J＝7.4Hz)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.21(s，9H)，1.73-1.69(m，2H)。
實(shí)施例20、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(四氫吡咯-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIa)化合物Va 0.50g(1.20mmol)、三氯化鋁0.29g(2.16mmol)和無水乙腈10mL投入反應(yīng)瓶中，回流反應(yīng)2h。將反應(yīng)液倒入冰水中，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 7～8，產(chǎn)生大量鮮黃色固體。用乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，濾液減壓回收得黃色粗品。硅膠柱層析，得黃色結(jié)晶0.20g，收率43％，m.p.112-114℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.87(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.44-7.42(m，2H)，6.58(s，1H)，6.43(s，1H)，3.90(s，3H)，3.86(s，2H)，2.56(brs，4H)，1.74-1.70(m，4H)。
實(shí)施例21、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIb)操作過程參見實(shí)施實(shí)施例20，只是用化合物Vb替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率54％，m.p.129-131℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.82(s，1H)，7.71(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.60(s，1H)，6.41(s，1H)，3.88(s，3H)，3.69(s，2H)，2.45(brs，8H)，2.23(s，3H)。
實(shí)施例22、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(二乙胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIc)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vc替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率22％，m.p.154-156℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.87(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.45-7.43(m，2H)，6.56(s，1H)，6.45(s，1H)，3.94(s，3H)，3.77(s，2H)，2.57(q，4H，J＝7.2Hz)，0.98(t，6H，J＝7.2Hz)。
實(shí)施例23、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(二甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VId)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vd替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率23％，m.p.134-137℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.99(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.54(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.48-7.46(m，2H)，6.59(s，1H)，6.47(s，1H)，3.95(s，3H)，3.75(s，2H)，2.35(s，6H)。
實(shí)施例24、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(乙基甲基胺甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIe)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Ve替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率25％，m.p.152-154℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.99(s，1H)，7.73(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.56(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.49-7.45(m，2H)，6.57(s，1H)，6.48(s，1H)，3.97(s，3H)，3.95(s，2H)，2.78(q，2H，J＝7.2Hz)，2.39(s，3H)，1.23(t，3H，J＝7.2Hz)。
實(shí)施例25、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-(2-羥乙基甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIf)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vg替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率26％，m.p.109-112℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.95(s，1H)，7.63(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.54(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.46-7.44(m，2H)，6.52(s，1H)，6.45(s，1H)，3.92(s，3H)，3.81(s，2H)，3.60(t，2H，J＝5.4Hz)，2.67(t，2H，J＝5.2Hz)，2.27(s，3H)。
實(shí)施例26、2-{[(2-(2-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙醇醋酸酯(VIg)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vf替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率19％，m.p.139-141℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.90(s，1H)，7.69(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.55(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.46-7.44(m，2H)，6.59(s，1H)，6.45(s，1H)，4.17(t，2H，J＝5.8Hz)，3.92(s，3H)，3.74(s，2H)，2.70(t，2H，J＝5.8Hz)，2.25(s，3H)，1.96(s，3H)。
實(shí)施例27、2-{[(2-(2-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙酸甲酯(VIh)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vh替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率24％，m.p.75-77℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.94(s，1H)，7.74(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.56(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.48-7.44(m，2H)，6.62(s，1H)，6.46(s，1H)，3.96(s，2H)，3.93(s，3H)，3.59(s，3H)，3.32(s，2H)，2.44(s，3H)。
實(shí)施例28、2-(2’-氯苯基)-5-羥基-7-甲氧基-8-{[((3-二甲胺基)丙基)(甲基)胺基]甲基}-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIi)操作過程參見實(shí)施例20，只是用化合物Vi替代化合物Va。得到黃色結(jié)晶，收率24％，m.p.40-42℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.94(s，1H)，7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.50(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.47-7.45(m，2H)，6.52(s，1H)，6.43(s，1H)，3.93(s，3H)，3.68(s，2H)，2.48(t，2H，J＝7.4Hz)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.20(s，9H)，1.71-1.67(m，2H)。
實(shí)施例29、抗腫瘤生物活性測試方法腫瘤細(xì)胞離體培養(yǎng)選取腫瘤細(xì)胞Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，待細(xì)胞密度長到70-90％時(shí)傳代(貼壁細(xì)胞用Puck’sEDTA消化后傳代)，用于以后實(shí)驗(yàn)所需。
MTT法測定查耳酮衍生物對不同瘤株的體外抑制作用將化合物用二甲亞砜溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7在96孔板上種入4000個(gè)/200μL/孔，每孔加入化合物2μL，終濃度為12.0μM，6.0μM，3.0μM，1.5μM，共同于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，以二甲亞砜(1％)為空白對照。72小時(shí)后，加入終濃度為0.25mg/mL的MTT，置于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時(shí)，之后吸干溶劑，每孔加入100μL二甲亞砜，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(OD值)，所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC50。所得結(jié)果見表1
表1所合成的黃酮衍生物對不同腫瘤細(xì)胞株的IC50(μM)值 從表1可以看出1)所有的化合物對不同的腫瘤細(xì)胞株均有一定的抑制活性；2)黃酮母核8-位具有開鏈?zhǔn)灏方Y(jié)構(gòu)的化合物對HL-60細(xì)胞有選擇性的抑制作用，其中化合物Vg對HL-60細(xì)胞具很強(qiáng)的抑制活性，IC50值為0.6μM；3)化合物VIc對6種腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制活性，IC50值分別為24.4，10.9，12.7，9.1，8.7，13.1μM，因此具廣譜的抗腫瘤活性。
實(shí)施例30、細(xì)胞周期素依賴性激酶1/周期素B抑制活性的測定實(shí)驗(yàn)方法溶劑對照組；空白對照組；給藥組，濃度分別為3μM、0.3μM和0.03μM。
1、參照下表將各個(gè)樣本準(zhǔn)備好后，30℃反應(yīng)30min；

2、倒去孔中液體，每孔加入200μL的1×沖洗緩沖液，輕輕拍打后，倒去液體。如法洗滌5次；3、每孔加入100μL的抗磷酸的cdc 7 T376單克隆抗體TK-3H7，室溫反應(yīng)30min；4、重復(fù)步驟2的操作；5、每孔加入100μL的辣根過氧化物酶-配對的抗鼠免疫球蛋白G，室溫反應(yīng)30min；6、重復(fù)步驟2的操作；7、每孔加入100μL的底物試劑，室溫反應(yīng)15min；8、每孔加入100μL的終止液；9、用分光光度計(jì)在雙波長450/540nm測定吸收值，所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC50值。所得結(jié)果見表2。
表2部分黃酮化合物對細(xì)胞周期素依賴性激酶1/周期素B的抑制活性


從表2可以看出1)一部分的黃酮化合物顯示了一定的細(xì)胞周期依賴性激酶1/周期素B的抑制作用，其中化合物VIc對該激酶的抑制作用達(dá)到了低微摩爾水平(IC50值為0.2052μM)；2)結(jié)合表1，化合物VIc對6種腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制活性，這說明該化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用可能與其阻滯腫瘤細(xì)胞周期的進(jìn)程有關(guān)；3)總而言之，該類化合物有較好的抗腫瘤應(yīng)用前景，有必要進(jìn)一步的深入研究。
權(quán)利要求
1. 2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物，結(jié)構(gòu)通式為 其中R1為1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷烴；Ar為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)，苯環(huán)上的取代基為氫原子、鹵原子、羥基、含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基、含1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基；R2是開鏈或環(huán)狀的叔胺結(jié)構(gòu)NR3R4，其中R3和R4相同或不同，為甲基、乙基、含1-4個(gè)碳原子的烷基醇及其酯、含1-4個(gè)碳原子的羧酸及其酯、含1-4個(gè)碳原子的烷基胺，或R3、R4分別與碳、氧及氮原子環(huán)合成五元或六元環(huán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)(1)化合物I在堿性條件下經(jīng)烷基化試劑的選擇性醚化可得到化合物II，經(jīng)過重結(jié)晶得純品，反應(yīng)通常在極性溶劑丙酮中進(jìn)行，反應(yīng)溫度在10-30℃之間；(2)化合物II在堿性條件下與芳香醛縮合得到化合物III，反應(yīng)在質(zhì)子性混合溶劑中進(jìn)行，質(zhì)子性混合溶劑選用甲醇-水、乙醇-水或異丙醇-水，反應(yīng)溫度在10-30℃之間，所得粗品通過重結(jié)晶精制；(3)所得的III在質(zhì)子性溶劑中，在酸和甲醛的存在下與仲胺反應(yīng)生成化合物IV，反應(yīng)溫度在50-90℃之間，所得產(chǎn)物經(jīng)過柱層析得純品；(4)化合物IV在極性溶劑中，經(jīng)碘催化環(huán)合得到化合物V，反應(yīng)溫度在10-100℃之間，所得產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離得純品；(5)化合物V經(jīng)脫烷基化反應(yīng)得到化合物VI，常用的脫烷基化試劑選用路易斯酸，反應(yīng)在極性溶劑中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為10-80℃，粗產(chǎn)物經(jīng)過柱層析分離得到純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(1)中所用的堿性物質(zhì)選用碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀中任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(2)中的堿選用氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫化鈉中任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(3)中所用的質(zhì)子性溶劑選用甲醇、乙醇或異丙醇中任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(3)中所用的甲醛選用甲醛水溶液、三聚甲醛或多聚甲醛中任一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(4)中所用的極性溶劑選用二氧六環(huán)、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲亞砜中任一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(5)中所用的路易斯酸選用氫溴酸、濃鹽酸、三氯化鋁、三溴化鋁、三甲基碘硅烷、三氯化硼、三溴化硼中任一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物的制備方法，其特征是步驟(5)中所用的極性溶劑選用二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈中任一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亞甲基黃酮衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一類含有氮原子的黃酮衍生物(2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亞甲基黃酮衍生物)。是在黃酮母核的8－位上引入不同的胺亞甲基結(jié)構(gòu)，合成一系列2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亞甲基黃酮衍生物。本發(fā)明經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)對多種腫瘤細(xì)胞株，包括Bel－7402，PC－3，ECA－109，A－549，HL－60和MCF－7等有體外抑制增殖作用，對細(xì)胞周期依賴性激酶1/周期素B的抑制活性表明這些化合物的抗腫瘤活性可部分歸因于它們對細(xì)胞周期的抑制作用，可在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亞甲基黃酮衍生物的結(jié)構(gòu)通式。
文檔編號(hào)A61K31/352GK101066961SQ20071006925
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日
發(fā)明者胡永洲, 劉滔, 何俏軍, 楊波, 羅沛華 申請人:浙江大學(xué)