專利名稱：一種含有丹參丹酚酸a的注射藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
丹酚酸Asalvianolic acidA是丹參中活性最強(qiáng)的成分，具有很好的藥理作用(杜冠華基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20(5)10～14、胡義揚(yáng)中藥藥理學(xué)報(bào)，1997，18(5)478-480)，丹參丹酚酸A在丹參中含量很低，只有萬分之五左右，即使通過一系列的工藝將其提取出，只能得到微量級(jí)的丹酚酸A，因此傳統(tǒng)中藥將丹參與其它藥材進(jìn)行配伍，其實(shí)質(zhì)是與丹參其它相對作用較弱的成分(比如丹參酮、丹酚酸B等)的配伍，這種配伍雖然在臨床上起到了一定的治療作用，但沒有將丹參中發(fā)揮最大藥效的有效成分應(yīng)用于疾病的治療中，造成了資源的巨大浪費(fèi)。因此將批量級(jí)的丹酚酸A應(yīng)用于疾病的治療是很多醫(yī)藥科研者的希望，特別是將批量級(jí)的丹酚酸A與其它中藥有效成分的配伍，更是需待解決的難題之一。
燈盞花素是從菊科飛蓬植物燈盞花(Erigeron brieviscapus(Vant)Hand Mazz.)中提取出來的黃酮類有效成分，具有擴(kuò)張腦血管、冠脈血管和外周血管的作用，可使血流量增加，改善局部供血，使外周阻力下降，改善微循環(huán)等；臨床上以燈盞花素為原料的制劑包括有燈盞花素注射液、燈盞細(xì)辛注射液等，這些制劑在臨床應(yīng)用對血栓性心腦血管疾病具有一定的治療作用，但血栓溶散恢復(fù)組織器官血流的同時(shí)，將會(huì)不同程度的發(fā)生再灌注損傷，可導(dǎo)致更為嚴(yán)重的后果，燈盞花素注射制劑無法較好的解決溶栓的同時(shí)產(chǎn)生的再灌注損傷，因而其療效并不是非常理想，需要在臨床中配伍幾種藥物，以降低溶栓后再灌注產(chǎn)生的損傷，這些臨床上簡單的配伍，雖然能夠達(dá)到一定的治療作用，但會(huì)產(chǎn)生大量的不良反應(yīng)，給醫(yī)生帶來巨大的用藥困難，給患者帶來更大的痛苦，因此，應(yīng)針對中藥有效成分或組分有效部位的配伍，進(jìn)行一系列的實(shí)驗(yàn)，挖掘中藥有效成分或組分有效部位的組合，以降低不良反應(yīng)，增加療效，將能夠進(jìn)一步推動(dòng)中藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。
傳統(tǒng)中藥配伍研究多停留在藥材配伍的基礎(chǔ)上，雖然可以用中醫(yī)理論進(jìn)行解釋，但其科學(xué)性一直存在爭議，因此將中藥有效成分或組分有效部位進(jìn)行配伍，已經(jīng)被眾多科研工作者認(rèn)同，這種配伍與配比關(guān)系是其核心與靈魂所在，是中醫(yī)藥的特色和優(yōu)勢，它既不是簡單的中藥藥材在作用上、數(shù)量上的相加，也不是機(jī)械的毒性反應(yīng)的抵消，而是通過一系列的研究(藥效學(xué)篩選、系統(tǒng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)與藥代動(dòng)力學(xué)研究等方面)，在辨證法的基礎(chǔ)上，以法統(tǒng)方，立方遣藥，有序組合而成的有制之師。
查閱文獻(xiàn)和專利，未有丹參丹酚酸A與燈盞花素配伍的報(bào)道，但有丹參總酚酸與燈盞花素的配伍，這種藥物組合雖然具有一定的療效，但因?yàn)楝F(xiàn)有技術(shù)的存在著一定的缺陷得到丹參丹酚酸是以丹參丹酚酸B為主的丹酚酸類物質(zhì)，而無法得到批量級(jí)的丹參丹酚酸A，因此，批量級(jí)的丹參丹酚酸A與燈盞花素能否進(jìn)行組合，需要科研人員通過大量的科研實(shí)驗(yàn)才能確定。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們通過對丹參藥材進(jìn)行一系列的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，即將丹參總酚酸通過一定的化學(xué)反應(yīng)得到了批量級(jí)的丹參丹酚酸A，再通過注射給藥的方式，以藥代動(dòng)力學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)等實(shí)驗(yàn)確定了一定量的丹參丹酚酸A與一定量的燈盞花素可以進(jìn)行組合，這種藥物組合除了具有互補(bǔ)的作用外，還能夠很好的解決溶栓后產(chǎn)生的再灌注損傷，降低了臨床注射藥物聯(lián)合用藥的不良反應(yīng)，達(dá)到了1+1大于2即增加療效，降低不良反應(yīng)的效果。
本申請通過下述方案實(shí)現(xiàn)的。
含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中丹參丹酚酸A1-10重量份，燈盞花素1-20重量份；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中優(yōu)選為丹參丹酚酸A1-5重量份，燈盞花素1-12重量份；其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)大于等于90％且小于100％；其中丹參丹酚酸A的含量大于等于90％且小于100％；(市售或文獻(xiàn)記載方法得到。)藥物組合物制備成單位劑量的水針劑、輸液劑、粉針劑；其中單位劑量為5mg-1000mg；其中優(yōu)選單位劑量為20-500mg。單位劑量低于5mg在臨床使用中沒有效果，單位劑量大于1000mg在臨床使用會(huì)產(chǎn)生一定的毒副反應(yīng)。
含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、痛風(fēng)、肝損傷、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
一.工藝制法丹參丹酚酸A的提取純化丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5-9.0、30-80℃溫度、加熱1-6小時(shí)或調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度、表壓0.05MPa-0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1-6小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20-50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50-95％乙醇溶液，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2-5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備。
制劑制備水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑。
其中水針劑、輸液劑、粉針劑制備方法中所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
其中水針劑、輸液劑、粉針劑制備方法中所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種。
二.檢測分析方法1.丹參丹酚酸A檢測分析方法色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測波長286nm；理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘；0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例進(jìn)行洗脫；對照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；樣品溶液的配制精密稱取丹酚酸A樣品，加入甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；或精密量取或稱取制劑，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；2.燈盞花素檢測分析色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫30℃；檢測波長335nm；理論板數(shù)按燈盞花乙素計(jì)不低于2000；以體積比甲醇∶冰醋酸∶水＝32∶2∶66溶液為流動(dòng)相；對照品溶液的制備精密稱定燈盞花乙素對照品，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的制備精密稱取燈盞花素，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；或精密稱取或量取本申請注射制劑，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2表1原料藥的檢測分析

表2制劑的檢測分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請藥物組合具有實(shí)際意義。
三.藥效學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)1.對麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素1重量份；方案2丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素20重量份；方案3丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素12重量份；方案4丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素7重量份；方案5丹參丹酚酸A9重量份，燈盞花素1重量份；方案6丹參丹酚酸A8重量份，燈盞花素2重量份；方案7丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素20重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組空白對照組，實(shí)驗(yàn)方案組。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物稱重，20％烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按10～12ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸∶呼比為1∶1。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為1～1.5mm，寬2～3mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液(給藥量為4mg/kg)，空白對照組給予相應(yīng)量的生理鹽水，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分別記錄心電圖。再灌3小時(shí)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，4000rpm離心10min取血清，解剖取心臟，冰生理鹽水洗去殘血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷凍。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。

檢測指標(biāo)分別為，心肌梗死范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表3表3對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響(x±s)

注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05；與方案9比較#P＜0.05。
2.大鼠降血脂實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素12重量份；方案2丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素1重量份；方案3丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素9重量份；方案4丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素8重量份；方案5丹參丹酚酸A8重量份，燈盞花素1重量份；方案6丹參丹酚酸A15重量份，燈盞花素1重量份；方案7丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素20重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法雄性SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周以后，按體重隨機(jī)分為正常對照組、模型組、實(shí)驗(yàn)方案組。除正常對照組每天上午8點(diǎn)-9點(diǎn)灌胃1.0ml/100g的蒸餾水外，其余各組灌胃1.0ml/100g脂肪乳劑，組方為30％豬油、10％膽固醇、2％膽酸鹽、0.2％丙基硫氧嘧啶、20％吐溫80、20％丙二醇、10％蔗糖，用蒸餾水溶成100ml，連續(xù)10天。禁食12小時(shí)眶靜脈叢取血，檢測血清TC、TG、HDL-C及LDL-C含量，并按血清TC水平重新分組。調(diào)整分組后，各組大鼠每天上午按上述造模試驗(yàn)方法給予脂肪乳劑，乳劑配方變?yōu)?0％豬油、5％膽固醇、2％膽鹽、0.2％丙基硫氧嘧啶、10％吐溫、10％丙二醇、5％蔗糖用蒸餾水溶成100ml，下午1點(diǎn)-2點(diǎn)按各組給藥劑量尾靜脈給藥，連續(xù)給藥4周，給藥量為4mg/kg。給藥4周結(jié)束后，禁食12小時(shí)，股動(dòng)脈取血，一部分血液用1％肝素抗凝(約4ml)，用于血液流變學(xué)檢測。另一部分血液分離血清用于生化指標(biāo)的檢測。試驗(yàn)期間每周稱一次體重，按體重調(diào)整給藥量，并測定攝食量。給藥4周分別檢測血清TC、TG、LDL-C和HDL-C水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4表4給藥4周丹燈對大鼠血脂的影響(

)

注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05； 與方案8、9比較#P＜0.05。
3.腦血管疾病藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素12重量份；方案2丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素15重量份；方案3丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素1重量份；方案4丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素9重量份；
方案5丹參丹酚酸A7重量份，燈盞花素6重量份；方案6丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素3重量份；方案7丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素19重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法采用大腦中動(dòng)脈阻塞(MACO)誘導(dǎo)大鼠局灶性腦缺血模型的方法，探討不同方案對大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞所致局部腦缺血的防治作用。應(yīng)用生理鹽水作為陰性對照組，尼莫地平為陽性對照，尾靜脈給藥，給藥量為4mg/kg，各方案組給藥量為4mg/kg，以腦含水測定作為指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5表5對MACO大鼠腦組織含水量

注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05；與方案8、方案9組比較#P＜0.05。
4.抗老年性癡呆藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素1重量份；方案2丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素20重量份；方案3丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素2重量份；方案4丹參丹酚酸A2重量份，燈盞花素8重量份；
方案5丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素7重量份；方案6丹參丹酚酸A9重量份，燈盞花素4重量份；方案7丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素19重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法取經(jīng)跳臺(tái)法和八臂迷宮法篩選的正常大鼠采用側(cè)腦室注射β-AP25-35，制成阿爾茨海默病(AD)大鼠模型，應(yīng)用跳臺(tái)法和八臂電迷宮法判斷給藥前后大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力；采用化學(xué)比色法測定腦組織中乙酰膽堿酯酶(AchE)活性，各方案組尾靜脈給藥，給藥量為4mg/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與溶劑組大鼠相比，模型大鼠八臂電迷宮錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P＜0.05)，跳臺(tái)學(xué)習(xí)和記憶錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P＜0.01)。大鼠造模前后連續(xù)靜注給藥21d后，方案1-7組大鼠上述行為學(xué)指標(biāo)得到明顯改善(P＜0.01)，腦組織AchE活性降低(P＜0.01)。結(jié)果表明本申請制劑對β-AP25-35側(cè)腦室注射所致大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶障礙有顯著的預(yù)防和治療作用，該作用與降低腦組織中AchE活性呈相關(guān)性。其它組效果不是太明顯，與模型組沒有顯著性差異。
5.抗器官纖維化實(shí)驗(yàn)方案1丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素12重量份；方案2丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素1重量份；方案3丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素2重量份；方案4丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素2重量份；方案5丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素9重量份；方案6丹參丹酚酸A9重量份，燈盞花素4重量份；方案7丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素15重量份；
方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法用40％四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化模型。同時(shí)給與方案組治療。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測肝功能、III型前膠原(pcIII)、透明質(zhì)酸(HA)，分離肝組織檢測肝羥脯氨酸含量及電鏡觀察肝組織病理變化，各方案組尾靜脈給藥，給藥量為4mg/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案1-7組能明顯改善肝纖維化大鼠的肝功能，降低血清pCIII、HA含量及使肝組織羥脯氨酸明顯下降；明顯減輕貯脂細(xì)胞增生及膠原的沉積。其它組效果不是太明顯，與模型組沒有顯著性差異。
6.微循環(huán)藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素1重量份；方案2丹參丹酚酸A1.5重量份，燈盞花素9重量份；方案3丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素1重量份；方案4丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素5重量份；方案5丹參丹酚酸A8重量份，燈盞花素2重量份；方案6丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素10重量份；方案7丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素20重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法顯微電視放大系統(tǒng)定量觀測各方案組對正常及去甲腎上腺素(NA)所致耳廓微循環(huán)障礙小鼠耳廓微循環(huán)的影響；血漿復(fù)鈣試驗(yàn)測定抗凝作用，各方案組給藥量為6mg/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案1-7組能顯著促進(jìn)或改善正常及NA所致耳廓微循環(huán)障礙小鼠耳廓的微循環(huán)；亦可延長血漿復(fù)鈣時(shí)間。
7.抗腫瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素4重量份；方案2丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素9重量份；方案3丹參丹酚酸A2重量份，燈盞花素12重量份；方案4丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素9重量份；方案5丹參丹酚酸A9重量份，燈盞花素1重量份；方案6丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素17重量份；方案7丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素1重量份；方案8丹參丹酚酸A5重量份；方案9燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法以小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和睪丸染色體畸變實(shí)驗(yàn)觀察各方案組的抗突變作用，以S-180和H-22移植性腫瘤觀察各方案組的抗腫瘤效果，各方案組尾靜脈給藥，給藥量為6mg/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案1-7組對環(huán)磷酰胺誘發(fā)的小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生和絲裂霉素誘發(fā)的小鼠睪丸細(xì)胞染色體畸變均有明顯的抑制效果；對S-180和H-22小鼠移植性腫瘤生長也有明顯的抑制作用。表明方案1-7組對體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的DNA損傷均有保護(hù)作用，對小鼠移植性腫瘤也有一定的抑瘤作用。
實(shí)驗(yàn)8治療痛風(fēng)的藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案
方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素12重量份；方案2丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素12重量份；方案3丹參丹酚酸A5重量份，燈盞花素1重量份；實(shí)驗(yàn)方法將尿酸溶解于1mol/L的NaOH溶液中，以HCl調(diào)整PH，經(jīng)攪拌、過濾、低溫干燥、篩選、消毒，制備成無菌尿酸鹽結(jié)晶。以無菌操作法，用4號(hào)注射針頭，將5％尿酸鹽溶液50μl，注入痛風(fēng)模型組和方案組大鼠右后肢內(nèi)踝的脛跗關(guān)節(jié)腔內(nèi)，每個(gè)動(dòng)物僅注射一次。方案組大鼠在痛風(fēng)模型制備的同時(shí)，尾靜脈給藥，給藥量4mg/kg，連續(xù)3天，正常組及痛風(fēng)模型組給等體積生理鹽水。檢測踝關(guān)節(jié)及其周圍組織K+濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6表6踝關(guān)節(jié)及其周圍組織的K+濃度

注與痛風(fēng)模型組比較**P＜0.01藥理實(shí)驗(yàn)小結(jié)通過上述藥理實(shí)驗(yàn)表明，在本申請范圍內(nèi)藥物組合與對照組具有很好的藥理作用(P＜0.01)；與丹參丹酚酸A、燈盞花素組分比較具有顯著性差異(P＜0.05)，充分說明丹參丹酚酸A與燈盞花素組合除具有很好的互補(bǔ)作用外，還具有互相影響提高藥理活性的作用。
四.藥代動(dòng)力學(xué)研究實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素21重量份；方案2丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素1重量份；
方案3丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素7重量份；方案4丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素12重量份；方案5丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素20重量份；方案6丹參丹酚酸A11重量份，燈盞花素1重量份；方案7丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素1重量份；方案8丹參丹酚酸A9重量份，燈盞花素1重量份；方案9丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素17重量份；方案10丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素22重量份；方案11丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素5重量份；方案12丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素9重量份；方案13丹參丹酚酸A8重量份，燈盞花素6重量份；方案14丹參丹酚酸A8重量份，燈盞花素19重量份；方案15丹參丹酚酸A10重量份，燈盞花素1重量份；方案16丹參丹酚酸A12重量份，燈盞花素1重量份；方案17丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素23重量份；方案18丹參丹酚酸A5重量份；方案19燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠，雄性，8周齡，SPF級(jí)；測定方法選用LC-MS/MS方法檢測；血漿處理方法精密量取血漿標(biāo)本100μl，加入100μl 0.1％磷酸、400μl甲醇，渦旋混勻后，10000r/min離心5min。經(jīng)0.2μm過濾器過濾后，上清液通過自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣；雄性SD大鼠，每組6只，經(jīng)尾靜脈單次給予不同方案的藥物組，由生理鹽水溶解，給藥體積為2ml/kg。在藥前及給藥后2min、5min、10min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、10h、12h經(jīng)大鼠尾靜脈收集血樣(0.6ml)，計(jì)算不同方案的制劑的半衰期，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7表7不同方案半衰期的考察

五.毒理學(xué)研究實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素21重量份；方案2丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素1重量份；方案3丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素5重量份；方案4丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素12重量份；
方案5丹參丹酚酸A2重量份，燈盞花素1重量份；方案6丹參丹酚酸A3重量份，燈盞花素1重量份；方案7丹參丹酚酸A4重量份，燈盞花素17重量份；方案8丹參丹酚酸A1重量份，燈盞花素20重量份；方案9丹參丹酚酸A11重量份，燈盞花素1重量份；方案10丹參丹酚酸A5重量份；方案11燈盞花素5重量份；實(shí)驗(yàn)方法上述不同方案的藥物組合物，進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，測定小鼠單次靜脈給藥急性毒性的LD50，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8表8不同方案的LD50值

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過藥效學(xué)論證實(shí)驗(yàn)、藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，我們確定丹參丹酚酸A1-10重量份，燈盞花素1-20重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A1-5重量份，燈盞花素1-12重量份。
六.制備實(shí)施例實(shí)施例1丹參丹酚酸A的提取純化
丹參用50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.0、50℃溫度、加熱4小時(shí)，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用75％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；丹參丹酚酸A含量90.03％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)90.02％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A10克，燈盞花素10克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為5mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例2
丹參丹酚酸A的提取純化丹參用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0、130℃溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用95％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，丹參丹酚酸A含量99.4％。
燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)99.1％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A100克，燈盞花素200克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為900mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例3丹參丹酚酸A的提取純化丹參用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、115℃溫度、表壓0.07MPa壓強(qiáng)，加熱3小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1300-I大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為90.3％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)91.2％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A10克，燈盞花素90克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為1000mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例4丹參丹酚酸A的提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、125℃溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用80％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為94.7％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)95.1％；(市售)制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A50克，燈盞花素120克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為170mg；
含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例5丹參丹酚酸A的提取純化丹參50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、125℃溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、35％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量91.2％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)91.9％；(文獻(xiàn)方法“從燈盞花提取野黃芩苷的工藝研究”《中成藥》2004年26卷10期，855-856。)制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A50克，燈盞花素10克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備
取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為600mg。
含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例6丹參丹酚酸A的提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、130℃溫度、表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1400大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用80％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為94.7％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)95.2％制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A10克，燈盞花素120克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；
粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為130mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例7丹參丹酚酸A的提取純化丹參用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、110℃溫度、表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱3小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)D101大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為90.3％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)91.2％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A100克，燈盞花素10克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為110mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例8丹參丹酚酸A的提取純化丹參50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、125℃溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、35％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量91.2％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)大于98.7％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A2克，燈盞花素18克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備
取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為20mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例9丹參丹酚酸A的提取純化丹參用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、110℃溫度、表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱3小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-400大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為91.7％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)95.0％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A80克，燈盞花素170克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；
輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為500mg；含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施例10丹參丹酚酸A的提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、125℃溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-450A大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、30％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用80％乙醇溶液洗脫，回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A，含量為94.4％；燈盞花素為現(xiàn)有技術(shù)制備，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)96.7％；制劑制備藥物組合為丹參丹酚酸A40克，燈盞花素110克；水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑1000支；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑1000瓶；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑1000支；單位劑量為300mg。
含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、肝損傷、痛風(fēng)、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
注本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。
權(quán)利要求
1.一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其特征在于丹參丹酚酸A1-10重量份，燈盞花素1-20重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中丹參丹酚酸A1-5重量份，燈盞花素1-12重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中燈盞花素含量以燈盞花乙素計(jì)大于等于90％且小于100％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中丹參丹酚酸A的含量大于等于90％且小于100％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中藥物組合物制備成單位劑量的水針劑、輸液劑、粉針劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中單位劑量為5mg-1000mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中單位劑量為20-500mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中水針劑、輸液劑、粉針劑的原料藥包括燈盞花素，其制備方法為丹參丹酚酸A的提取純化丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5-9.0、30-80℃溫度、加熱1-6小時(shí)或調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度、表壓0.05MPa-0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1-6小時(shí)；溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20-50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50-95％乙醇溶液，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2-5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；制劑制備水針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照水針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成水針劑；輸液劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照輸液劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成輸液劑；粉針劑制備取丹參丹酚酸A和燈盞花素，按照粉針劑的藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成粉針劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中水針劑、輸液劑、粉針劑制備方法中所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其中水針劑、輸液劑、粉針劑制備方法中所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、2、8任一項(xiàng)所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物，其特征在于檢測分析方法(1)丹參丹酚酸A檢測分析方法色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測波長286nm；理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘；0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例進(jìn)行洗脫；對照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；樣品溶液的配制精密稱取丹酚酸A樣品，加入甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；或精密量取或稱取制劑，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；(2)燈盞花素檢測分析色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫30℃；檢測波長335nm；理論板數(shù)按燈盞花乙素計(jì)不低于2000；以體積比甲醇∶冰醋酸∶水為32∶2∶66溶液為流動(dòng)相；對照品溶液的制備精密稱取燈盞花乙素對照品，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的制備精密稱取燈盞花素，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；或精密稱取或量取制劑，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
12.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、高血脂、痛風(fēng)、肝損傷、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本申請公開了一種含有丹參丹酚酸A的注射藥物組合物及其制備方法，其特征在于通過藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)確定了藥物組合物丹參丹酚酸A1－10重量份，燈盞花素1－20重量份；優(yōu)選丹參丹酚酸A1－5重量份，燈盞花素1－12重量份；以上述組合物為原料制備成水針劑、輸液劑、粉針劑，藥理實(shí)驗(yàn)表明，具有很好的藥理作用。
文檔編號(hào)A61K31/343GK101019878SQ20071009092
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月27日
發(fā)明者顧群, 栗艷彬, 林治榮, 鄯慧珍, 米長江, 李志剛, 渠守峰 申請人:北京本草天源藥物研究院