專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種從枳實(shí)等中藥的提取液中分離總生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥有效成分的提取分離方法，特別是涉及一種從中藥枳實(shí)提取液中提取分離枳實(shí)總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：生物堿是自然界中廣泛存在的一大類(lèi)堿性含氮化合物，是許多中草藥的有效成分，是自然界中存在的一類(lèi)重要物質(zhì)。枳實(shí)，收載于中國(guó)藥典2005年版一部172頁(yè)，系蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或甜橙Citrussinensis0sbeck的干燥幼果，又名枸頭橙、臭橙、香橙，是一種常用民間中草藥，具有化痰散痞，破氣消積等功效。研究表明，枳實(shí)總堿是其主要有效部位，包括含辛弗林(Syn印hrine)、N-甲基酪胺(N-Methyltyamine)、去甲腎上腺素(Noradrenaline)、色胺諾林(Quinoline)等。臨床治劑已用于治療積滯內(nèi)停、痞滿脹痛、瀉痢后重、大便不通、痰滯氣阻胸痹等。同時(shí)，與枳實(shí)藥用部位相同但藥材采摘時(shí)間不同的枳殼(收載于中國(guó)藥典2005年版一部171頁(yè))以及青皮(收載于中國(guó)藥典2005年版一部136頁(yè))、陳皮(收載于中國(guó)藥典2005年版一部132頁(yè))，含有的生物堿成分與枳實(shí)基本相同或者相近，應(yīng)用也很廣泛。這些生物堿都具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)階段，中藥生物堿的提取工藝已較成熟，根據(jù)生物堿的理化特性，采用適宜的溶劑如水、酸水、酸醇及堿醇等，利用浸漬、滲漉、煎煮、回流、超聲、酶解等技術(shù)將生物堿類(lèi)成分提取出來(lái)，提取率能達(dá)到90%以上。但由于生物堿在中藥中的相對(duì)含量較低(多數(shù)含量為0.01%-1%)，提取時(shí)勢(shì)必引入大量的其他藥物成分和雜質(zhì)類(lèi)成分，要保證最后制劑的安全有效，必須對(duì)其進(jìn)行精制純化，制備成有效部位甚至有效成分來(lái)應(yīng)用，因此生物堿有效部位的精制純化技術(shù)就顯得十分重要。但由于其他多種成分的并存以及淀粉、樹(shù)膠、果膠、粘液質(zhì)、色素等雜質(zhì)的干擾，生物堿有效部位的精制技術(shù)一直是中藥現(xiàn)代化的"瓶頸"，嚴(yán)重影響了現(xiàn)代中藥制劑對(duì)三效(高效、速效、長(zhǎng)效)、三小(劑量小、毒性小、副作用小)、五方便(生產(chǎn)、運(yùn)輸、攜帶、貯存、應(yīng)用方便)的要求。雖然在教科書(shū)及各種文獻(xiàn)中多有提取分離中藥總生物堿的方法，但這些方法僅停留于實(shí)驗(yàn)室的研究水平，多數(shù)是將含有生物堿的溶液過(guò)柱后，以氨液或NaOH溶液洗脫，收集洗脫液后再以有機(jī)溶劑萃取生物堿；或者將上過(guò)樣品的樹(shù)脂以堿液浸泡，然后再用有機(jī)溶劑回流提取生物堿。但這些方法具有步驟繁瑣，有機(jī)溶劑用量大、大設(shè)備無(wú)法實(shí)現(xiàn)和生物堿轉(zhuǎn)移率低等缺點(diǎn)，因而一直處于實(shí)驗(yàn)室研究水平，不能在大生產(chǎn)中應(yīng)用。曾惠芳、席萍、姚育法在2001年第一期《中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志》中發(fā)表《枳實(shí)注射液提取精制工藝研究》一文，文中提出了一種最新的從中藥枳實(shí)中提取分離總生物堿的技術(shù)是用離子交換樹(shù)脂法，基本過(guò)程為將枳實(shí)飲片經(jīng)常規(guī)提取得提取液，通過(guò)強(qiáng)酸型(氫型)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，用2%氫氧化鈉洗脫，收集洗脫液，以1(m鹽酸調(diào)整pH后再進(jìn)行后續(xù)處理。這種方法避免了大量有機(jī)溶劑的使用，具有一定的進(jìn)步性，但仍存在嚴(yán)重缺陷試驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)該發(fā)法雖可以提高生物堿的純度，但堿性條件下游離的枳實(shí)生物堿在水中的溶解度不高，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移率不高。故為了適應(yīng)市場(chǎng)及生產(chǎn)，需要一種安全、低成本、收率高的提取分離方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種安全、低成本、高效率的提取分離枳實(shí)總生物堿的方法。該發(fā)明目的是通過(guò)如下工藝實(shí)現(xiàn)的取枳實(shí)等藥材的提取液，調(diào)整pH值l至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5%15%酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得所需總生物堿。在上述工藝過(guò)程中，將含有總生物堿的提取液調(diào)至合適的酸度后，生物堿電離成為陽(yáng)離子，非堿性物質(zhì)不被電離，提取液過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱后，電離的生物堿有機(jī)離子與樹(shù)脂柱上的氫離子交換而被牢固地吸附于樹(shù)脂柱上。這里提取液的pH值不宜過(guò)高或過(guò)低，如果過(guò)高，提取液呈中性或堿性，生物堿不能電離，也就不能完成樹(shù)脂上的交換過(guò)程；如果過(guò)低，提取液中的氫離子濃度太高，阻礙了樹(shù)脂柱上的氫離子解離，同樣不能很好地完成樹(shù)脂交換過(guò)程，因而實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)調(diào)整提取液的pH值為1至7是比較合適的。以水洗脫時(shí)，使用的是去離子水，以確保不引入新的離子干擾，洗脫時(shí)那些沒(méi)有被樹(shù)脂吸附的非堿性物質(zhì)就很容易被水洗脫下來(lái)，從而與被吸附在樹(shù)脂柱上生物堿有機(jī)離子分離了。此后再加較高濃度的酸液進(jìn)行洗脫，由于此時(shí)酸液中的氫離子濃度很高，就會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地與樹(shù)脂相結(jié)合，從而將吸附在樹(shù)脂柱上的生物堿有機(jī)離子交換下來(lái)，溶解在酸洗脫液中，流出樹(shù)脂柱，完成生物堿的富集過(guò)程。之后，在洗脫液中加入堿中和掉多余的酸，再經(jīng)常規(guī)脫鹽處理，即可得到純度較高的總生物堿了。該工藝過(guò)程與現(xiàn)有技術(shù)相比，工藝流程簡(jiǎn)單，生物堿轉(zhuǎn)移率高；其主要貢獻(xiàn)在于，打破了傳統(tǒng)理論認(rèn)為的離子交換能力順序規(guī)律，即Ca2+>K+"NH4+>Na+>H+。正是在這一傳統(tǒng)理論的影響下，所有關(guān)于枳實(shí)總生物堿的離子交換樹(shù)脂分離法中都是堿液或氨液進(jìn)行洗脫，或者先用堿液中和樹(shù)脂柱再用有機(jī)溶劑回流提取理論上己經(jīng)游離的生物堿，而實(shí)際應(yīng)用中的效果非常不理想且不適于大生產(chǎn)。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，雖然氫離子的交換能力是最弱的，但通過(guò)提高酸洗脫液中氫離子的濃度，從而抵消了其交換能力弱的缺點(diǎn)，同時(shí)在酸性條件下，可以使交換下來(lái)的生物堿迅速溶解到酸液中，并被沖出柱子，由此保證了生物堿的洗脫效果。并且，以酸液進(jìn)行洗脫，在洗脫的同時(shí)，也使陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱得以再生，從而可以循環(huán)使用，減少了堿液洗脫后再生樹(shù)脂柱的過(guò)程，降低了成本。本發(fā)明的技術(shù)完全突破了現(xiàn)有技術(shù)中以堿液洗脫的傳統(tǒng)觀念和工藝過(guò)程，取得了意想不到的效果，極大的提高了枳實(shí)總生物堿的得率，使陽(yáng)離子交換樹(shù)脂在工業(yè)生產(chǎn)中用于精制分離總生物堿成為可能?；谏鲜龉に囘^(guò)程，發(fā)明人又進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，細(xì)化各步驟的參數(shù)，篩選出最優(yōu)方案，具體內(nèi)容如下1、上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍優(yōu)選為2至5，效果更加明顯。2、所用的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是大孔型或凝膠型強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂,在實(shí)際使用時(shí)可以根據(jù)情況處理成氫型、鈉型或銨型中的任一種。3、所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的柱徑與柱高之比并無(wú)一定之規(guī)，但考慮生產(chǎn)實(shí)際，柱徑柱高=1:51:IO時(shí)可以取得最好的效果。4、給樹(shù)脂柱上樣的藥液濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，具體情況可以根據(jù)藥液的前處理方式?jīng)Q定，如果是采用浸漬、滲漉等方式，得到的藥液就會(huì)比較??；而如果是回流提取、煎煮等方式，尤其是經(jīng)過(guò)濃縮處理，藥液的濃度就會(huì)比較大，但只要是在這個(gè)范圍內(nèi)，都能實(shí)現(xiàn)上樣。同時(shí)，上樣速度也根據(jù)藥液的濃度進(jìn)行適時(shí)調(diào)整，基本滿足在0.55倍柱體積/小時(shí)即可。5、上樣方式一般選擇為從柱上端上樣，藥液靠自流力而流過(guò)整個(gè)柱子；發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果逆流上樣，即將藥液從柱子底端上樣，通過(guò)一定的壓力，使藥液注滿整個(gè)柱子，這種上樣方式可以發(fā)揮柱子的最大交換效率，也避免了從上端上樣時(shí)由于生物堿交換不完全而發(fā)生的提前穿透問(wèn)題。這一點(diǎn)也是發(fā)明人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)。6、洗脫所用的酸液優(yōu)選為鹽酸溶液或硫酸溶液，其濃度均優(yōu)選為3%6%。7、洗脫時(shí)洗脫液的流速不宜過(guò)快或過(guò)慢，如果過(guò)快，則氫離子與生物堿有機(jī)離子的交換不充分，酸液浪費(fèi)較多；如果過(guò)慢，則解離下來(lái)的生物堿有機(jī)離子可能又重新吸附回樹(shù)脂柱上，影響洗脫效率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洗脫速度保持在26倍柱體積/小時(shí)為宜。進(jìn)一步優(yōu)選，洗脫速度保持在46倍柱體積/小時(shí)最好。8、發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，如果想更高地提高洗脫效率，可以在水洗脫除雜后，不立即進(jìn)行酸液洗脫，而是先在樹(shù)脂柱中充滿酸液并靜置2小時(shí)以上，一般不需超過(guò)12個(gè)小時(shí)，再進(jìn)行洗脫。經(jīng)過(guò)靜置后，大量的生物堿有機(jī)離子已被氫離子交換下來(lái)，或者處于半吸附半解離的狀態(tài)，此時(shí)進(jìn)行洗脫，生物堿富集效果明顯，洗脫效率明顯提高。9、為了進(jìn)一步提高洗脫效率，還可以在洗脫用的酸液中加入少量NH4C1、NaCl或CaCl2加入量不宜過(guò)少或過(guò)多，如果過(guò)少，則起不到作用；如果過(guò)多，則因鹽濃度過(guò)高易鹽析而影響生物堿有機(jī)離子的溶解度。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洗脫液中以NH/、Na+或Ca2+濃度為0.1lmol/L時(shí)為佳，進(jìn)一步優(yōu)選，NH4+、Na+或Ca2+的濃度為0.10.3mol/L時(shí)最好。10、工藝中所說(shuō)的脫鹽方法可以是透析法除鹽、膜濾過(guò)除鹽以及其他各種藥物生物領(lǐng)域常規(guī)的除鹽方法，目前這些方法都已經(jīng)比較成熟，并可以管道化生產(chǎn)。11、該方法中所說(shuō)的藥材提取液可以通過(guò)浸潰、滲漉、超聲、微波或煎煮中的任一種方式提取制得，并且提取的溶媒可以是水、酸水、乙醇溶液、酸性乙醇溶液中的任一種，但都屬于目前中藥領(lǐng)域的常規(guī)提取方法。區(qū)別點(diǎn)在于，如果是用浸漬或滲漉方法制得，可以直接上樣；如果是用其他方法提取得到的，還要經(jīng)過(guò)醇沉、過(guò)濾或離心除雜等步驟，以保證上樣的順利。需要說(shuō)明的是，上述優(yōu)選的技術(shù)參數(shù)，可以根據(jù)實(shí)際情況的需要，與基本工藝進(jìn)行任意組合，且均能取得良好的效果，解決技術(shù)問(wèn)題，達(dá)到本發(fā)明的目的。下面通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。一、實(shí)驗(yàn)方案取枳實(shí)飲片1500g，加PH=4的酸水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，離心，濾液稀釋至3000ml并調(diào)節(jié)p^3,均分成三份，分別按以下步驟處理①根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，取上述提取液1000ml，上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7，氫型，徑高比l:5)，再用2MNaOH洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢査為陰性，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳實(shí)總生物堿。②根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)，取上述提取液1000ml，上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7，氫型，徑高比l:5)，以去離子水洗至注出液無(wú)色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳實(shí)總生物堿。③根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)，取上述提取液1000ml，上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7，氫型，徑高比l:8)，逆流上樣，以去離子水洗至注出液無(wú)色，加0.1mol/L的NaCl的3X鹽酸溶液至全柱，靜置2個(gè)小時(shí)，再用上述溶液以5倍柱體積/小時(shí)的速度洗脫，至生物堿檢查為陰性，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳實(shí)總生物堿。二、結(jié)果計(jì)算分別稱(chēng)量三種工藝所得枳實(shí)總生物堿的重量，并與藥材量相除，得總生物堿的收率；以酸堿滴定法對(duì)三種方法所得總生物堿進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算總生物堿的純度。三、結(jié)果對(duì)比，見(jiàn)下表三種工藝的效果評(píng)價(jià)表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由以上對(duì)比結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明的技術(shù)方案可以解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，并顯著地提高產(chǎn)品的質(zhì)量、降低成本、提高生產(chǎn)可行性，本發(fā)明達(dá)到了發(fā)明目的。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:取枳實(shí)飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，離心，調(diào)節(jié)pH-3，離心，上清液以4倍柱體積/小時(shí)通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7,氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用15%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為2倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳實(shí)總生物堿。實(shí)施例2:取枳殼飲片1000g，加pH二5的酸水滲漉，合并滲漉液加水稀釋至10000ml，離心，調(diào)節(jié)pH=l，離心，上清液以5倍柱體積/小時(shí)通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(Doulex50，鈉型，徑高比1:5)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用5%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，洗脫2倍柱體積后浸泡5小時(shí)，再洗脫至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈣中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳殼總生物堿。實(shí)施例3:取青皮飲片5kg，加70%乙醇超聲提取兩次，每次加5倍量，超聲0.5小時(shí)，合并提取液，離心，回收乙醇，加水至5000ml,調(diào)節(jié)pH:2，離心，上清液以2倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X10，鈉型，徑高比1:7)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用1%鹽酸溶液(含1%的氯化鈉)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得青皮總生物堿。實(shí)施例4:取陳皮飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(60'C)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至3000ml，調(diào)節(jié)pH-4，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(AmberlitelR-120，氨型，徑高比l:9),水洗至流出液無(wú)顏色，再用10%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得陳皮總生物堿。實(shí)施例5:取枳殼、陳皮飲片各5kg，混合，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6CTC)，加乙醇至濃度為70%,靜置，上清液回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)pH=5，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(D001X4，氫型，徑高比l:10)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為3倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鉤酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得總生物堿。實(shí)施例6:取枳實(shí)、青皮飲片各lkg，混合，加pF^3的鹽酸溶液，微波提取2次，每次加5倍體積微波提取0.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液加水稀釋至1600ml，調(diào)節(jié)p^6，離心，上清液以2倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(Doulex50，氫型，徑高比1:6)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用2%鹽酸溶液(含0.2mol/L的氯化氨)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得總生物堿。實(shí)施例7:取枳實(shí)、枳殼飲片各5kg，混合，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6CTC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至4000ml，調(diào)節(jié)pH-4，離心，上清液以0.5倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(AmberliteIR-120，氫型，徑高比1:6)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用0.5%硫酸溶液(含lmol/L的氯化鈉)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得總生物堿。實(shí)施例8:取青皮、陳皮飲片各5kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(60°C)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至10000ml，調(diào)節(jié)pl^3，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(00lX5，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用2%鹽酸溶液(含0.3mol/L的氯化鈣)洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得總生物堿。實(shí)施例9:取枳實(shí)飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇,加水至1000ml，調(diào)節(jié)pF^3，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(Doulex50，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用4%硫酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得枳實(shí)總生物堿。實(shí)施例10:取青皮飲片5kg，加水煎煮2次，每次12倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至3000ml，調(diào)節(jié)p^4，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7，鈉型，徑高比l:6)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用10%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時(shí)，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得青皮總生物堿。實(shí)施例11:取陳皮飲片1000g，加p^3的酸水滲漉，合并滲漉液加水稀釋至10000ml，離心，調(diào)節(jié)pH=2，離心，上清液以4倍柱體積/小時(shí)通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(AmberlitelR—120，氫型，徑高比l:4)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用5%鹽酸溶液(含0.2mol/L的氯化鈉)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，洗脫2倍柱體積后浸泡10小時(shí)，再洗脫至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，收集洗脫液，用氫氧化鈣中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得陳皮總生物堿。權(quán)利要求1、一種從中藥枳實(shí)、枳殼、青皮、陳皮或它們?nèi)我饨M合物的提取液中分離總生物堿的方法，其特征在于該方法為取提取液，調(diào)整pH值1至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得枳實(shí)總生物堿。2、如權(quán)利要求1所述的分離總生物堿的方法，其特征在于上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍為2至5。3、如權(quán)利要求1所述的分離總生物堿的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是大孔型或凝膠型強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂。4、如權(quán)利要求3所述的分離總生物堿的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的柱徑:柱高=1:51:10。5、如權(quán)利要求1所述的分離總生物堿的方法，其特征在于該方法中上樣藥液的濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，上樣速度為0.55倍柱體積/小時(shí)。6、如權(quán)利要求5所述的分離總生物堿的方法，其特征在于上樣方式優(yōu)選為逆流上樣。7、如權(quán)利要求1所述的分離總生物堿的方法，其特征在于該方法中洗脫用的酸液是3%~6%的鹽酸溶液或3%6%的硫酸溶液。8、如權(quán)利要求7所述的分離總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為26倍柱體積/小時(shí)。9、如權(quán)利要求8所述的分離總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為46倍柱體積/小時(shí)。10、如權(quán)利要求1所述的分離總生物堿的方法，其特征在于在水洗脫除雜后，可以先在樹(shù)脂柱中充滿洗脫用酸液并靜置212個(gè)小時(shí)，再進(jìn)行洗脫。11、如權(quán)利要求7所述的分離總生物堿的方法，其特征在于洗脫用的酸液中還可以加入0.1lmol/L的NH4C1、NaCl或CaCl2。12、如權(quán)利要求11所述的分離總生物堿的方法，其特征在于酸液中鹽的濃度優(yōu)選為0.l0.3mol/L。13、權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的方法制備的枳實(shí)總生物堿、枳殼總生物堿、青皮總生物堿、陳皮總生物堿或以上各生物堿的任意組合物。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種分離中藥總生物堿的方法，尤其是一種從枳實(shí)等中藥提取液中分離總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。該方法包括如下技術(shù)方案取藥材提取液，調(diào)整pH值1至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，濃縮干燥得所需總生物堿。該方法克服了現(xiàn)有技術(shù)提取率低、有機(jī)溶劑用量大、工藝復(fù)雜、無(wú)法大生產(chǎn)等不足，可以高效率地從枳實(shí)等中藥的提取液中分離高純度的總生物堿。文檔編號(hào)A61K36/185GK101491613SQ20071009844公開(kāi)日2009年7月29日申請(qǐng)日期2007年4月18日優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日發(fā)明者樸美善,武建卓申請(qǐng)人:北京和潤(rùn)創(chuàng)新醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司