專(zhuān)利名稱(chēng)：一種骨肽注射劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種骨肽注射劑的制備方法，屬于中藥制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
骨肽為四肢骨中提取出的小分子多肽類(lèi)物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防治骨質(zhì)疏松作用。用于促進(jìn)骨折愈合。
目前，已公開(kāi)了一些有關(guān)骨肽的提取工藝，比如，專(zhuān)利文獻(xiàn)200410013508.1，發(fā)明名稱(chēng)注射用骨肽及其制備工藝，骨提取物系從哺乳動(dòng)物的骨中提取的多肽類(lèi)物質(zhì)，所述的多肽類(lèi)物質(zhì)的分子量為3000-10000，所述的多肽與所述的賦形劑的含量比為1-100∶0.01，pH值為3.5-9.0，茚三酮反應(yīng)為陽(yáng)性。本產(chǎn)品用于治療增生性骨關(guān)節(jié)疾病及風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等，并能促進(jìn)骨折愈合。
專(zhuān)利文獻(xiàn)200510076912.8，發(fā)明名稱(chēng)骨肽注射液及其制備方法，其制備方法如下1).將哺乳動(dòng)物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過(guò)濾，合并煮提液，在低溫下放置1～40小時(shí)，將提取液溫?zé)岷箅x心過(guò)濾，收集濾液備用；2).將濾液真空濃縮后加入乙醇，靜置沉淀，吸出上層醇液，定容回收乙醇，得水提液；3).將水提液加等體積蒸餾水，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂柱、弱堿性陰離子樹(shù)脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4).將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌，或?qū)⑺盟幰和ㄟ^(guò)冷凍干燥，得到凍干粉針劑。
專(zhuān)利文獻(xiàn)200610150890.X，發(fā)明名稱(chēng)注射用骨肽凍干劑及其制備方法，其包括(1)、取健康新鮮冷凍的哺乳動(dòng)物的四肢骨稱(chēng)重，用純化水清洗三遍后，置液壓機(jī)上壓碎。將壓碎的四肢骨，置夾層鍋中，按原料重量1∶1～5加入5％NaOH溶液，加熱30～55℃水解12～48小時(shí)后取上清液；(2)、上清液置夾層鍋中用HCl調(diào)pH值3.0～6.0，加熱至70～100℃ 15～40min，冷卻降溫至30～55℃，靜置12～48小時(shí)后用濾布過(guò)濾。
專(zhuān)利文獻(xiàn)200510051475.4，發(fā)明名稱(chēng)一種骨肽提取物、其制備方法及其用途，其將哺乳動(dòng)物四肢骨經(jīng)熱壓提取，冷藏去脂肪、調(diào)節(jié)pH值沉淀、加熱、離心過(guò)濾、超濾等步驟制得四肢骨提取物。
目前多數(shù)工藝僅采用酸、堿分別沉淀酸性蛋白和堿性蛋白的工藝，其對(duì)pH值的精密度要求非常高，否則加入的酸、堿的量或多或少都會(huì)導(dǎo)致酸性或堿性蛋白除不凈甚至?xí)鹌渌s質(zhì)，影響產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種骨肽注射劑的制備方法，該工藝能更有效地去除大分子蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證產(chǎn)品的高純度。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的骨肽注射劑的制備方法，包括如下步驟1)將豬或牛四肢骨，洗凈，打碎，加入1～4倍重量的純化水，105～120℃高壓提取至少2次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，冷藏，除去上層油脂，調(diào)pH值1.0～4.0，煮沸，冷藏；2)過(guò)濾取上清液，減壓濃縮至2.5～2.8g(四肢骨)/ml，加入乙醇使含醇體積量達(dá)到60～80％，靜置，過(guò)濾回收乙醇至無(wú)醇味；用注射用水稀配至1～2g/ml，調(diào)pH值6.0～8.0；過(guò)濾，滅菌；冷凍，緩化后置陰涼避光處或室溫放置；過(guò)濾，調(diào)pH值6.8～7.2；脫色，調(diào)pH值6.8～7.2，滅菌，冷凍至結(jié)冰，取出緩化；3)用注射用水將緩化后的藥液稀釋至每1ml含多肽5.0～15.0mg，粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，精濾，得骨肽注射液。
其中，優(yōu)選的為，本發(fā)明的制備方法包括如下步驟
1)將豬、牛四肢骨，洗凈、打碎成5～10cm的小塊，加入2～3倍重量的純化水，110～120℃、0.08～0.1Mpa壓力下提取2次，分別為2～3小時(shí)和1～2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于0～5℃冷藏8～36小時(shí)，除去上層油脂，調(diào)pH值2.0～3.0，煮沸30～60分鐘，冷藏8～24小時(shí)；2)濾取上清液，在70～75℃減壓濃縮至2.5～2.8g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇體積量達(dá)到70～80％，靜置8～24小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味；用注射用水稀配至1g/ml，調(diào)pH值6.7～7.3；濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，6000～10000分子量超濾器超濾，115℃滅菌40分鐘；冷凍至結(jié)冰，緩化后置陰涼避光處或室溫放置5～20天；再經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾，用6000～10000分子量超濾器超濾，調(diào)pH值6.8～7.2；加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸15～30分鐘，冷卻至40～60℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值6.8～7.2，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化；3)用注射用水將緩化后的藥液稀釋至每1ml含多肽5.0～10.0mg，粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，精濾，得骨肽注射液。
本發(fā)明還可直接將骨肽注射液經(jīng)冷凍干燥，得骨肽凍干粉針劑。
或是先加注射用水將賦形劑溶解后，再加入活性炭脫色，過(guò)濾得水溶液；將水溶液加入到所述的骨肽注射液中，調(diào)整至每1ml含多肽5.0～15.0mg，賦形劑100～200mg，0.45μm濾膜粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，0.2μm微孔濾膜精濾，冷凍干燥，得骨肽凍干粉針劑。
所述的賦形劑為甘露醇、乳糖或葡聚糖等。
本發(fā)明調(diào)整pH可采用常用的酸或堿進(jìn)行，比如鹽酸或氫氧化鈉等。
所述的冷凍干燥可采用本領(lǐng)域常用的工藝、設(shè)備來(lái)完成。比如，真空冷凍干燥，工藝過(guò)程為預(yù)凍、保溫、升華干燥與徹底干燥幾步驟，在干燥箱體內(nèi)的一組擱板上完成。
本發(fā)明的制備工藝獲得的骨肽注射劑，由新鮮或冷凍的豬、牛的四肢骨經(jīng)高壓提取，脫脂，酸處理，醇沉，堿處理，超濾而成。采用酸、堿分別去除骨中的酸性蛋白和堿性蛋白，同時(shí)還采用醇沉，能有效地去除大分子蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證骨肽凍注射劑雜質(zhì)少，純度高。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例11.骨肽溶液提取工藝將新鮮的豬四肢骨，剔除殘肉、洗凈、打碎成10cm的小塊。加入2倍量純化水，120℃、0.1Mpa壓力下提取2次，分別為2小時(shí)和1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于5℃冷藏24小時(shí)。除去上層油脂，用10％(體積，以下同)鹽酸調(diào)pH值2.6，煮沸40分鐘，冷藏12小時(shí)。濾取上清液，在75℃減壓濃縮至2.8g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇量達(dá)到70％(體積，以下同)，靜置12小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味。用注射用水稀配至1g/ml，40％NaOH溶液調(diào)pH值7.3。濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，6000分子量卷膜式超濾器超濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰，取出緩化后置室溫放置一周。倒出藥液，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值6.8，用6000分子量卷膜式超濾器超濾，收集超濾后的藥液，攪拌均勻，20％(體積，以下同)氫氧化鈉溶液調(diào)pH值7.2。加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸15分鐘，冷卻至50℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.2，灌裝，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化。
2.注射用骨肽制備工藝稱(chēng)甘露醇，加注射用水使其溶解，再加入0.3％(g/ml)藥用炭攪拌15分鐘，過(guò)濾除炭得甘露醇溶液；取骨肽冷凍溶液，室溫融化，加入配好的甘露醇溶液，加注射用水調(diào)整至每1ml含多肽5mg，甘露醇100mg，用0.45μm濾膜初過(guò)濾，將濾液調(diào)pH7.2，經(jīng)0.2μm微孔濾膜除菌過(guò)濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實(shí)施例21.骨肽溶液提取工藝將冷凍的豬四肢骨，剔除殘肉、洗凈、打碎成8cm的小塊。加入2倍量純化水，110℃、0.08Mpa壓力下提取3次，分別為3小時(shí)、2.5小時(shí)和1.5小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于0℃冷藏12小時(shí)。除去上層油脂，用10％鹽酸調(diào)pH值2.0，煮沸30分鐘，冷藏8小時(shí)。濾取上清液，在73℃減壓濃縮至2.5g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇量達(dá)到80％，靜置8小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味。用注射用水稀配至2g/ml，40％NaOH溶液調(diào)pH值6.0。濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，8000分子量卷膜式超濾器超濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰，取出緩化后置陰涼避光處放置10天。倒出藥液，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值6.8，用8000分子量卷膜式超濾器超濾，收集超濾后的藥液，攪拌均勻，20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值7.0。加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸20分鐘，冷卻至60℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.0，灌裝，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化。
2.注射用骨肽制備工藝將骨肽冷凍溶液，室溫融化，再加注射用水稀釋至每1ml含多肽10mg，用0.45μm濾膜初過(guò)濾，將濾液調(diào)pH6.8，經(jīng)0.2μm微孔濾膜除菌過(guò)濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實(shí)施例31.骨肽溶液提取工藝將新鮮或冷凍的牛四肢骨，剔除殘肉、洗凈、打碎成7cm的小塊。加入3倍量純化水，112℃、0.09Mpa壓力下2次，分別為2.5小時(shí)和2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于0℃冷藏12小時(shí)。除去上層油脂，用10％鹽酸調(diào)pH值2.6，煮沸60分鐘，冷藏20小時(shí)。濾取上清液，在75℃減壓濃縮至2.6g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇量達(dá)到65％，靜置24小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味。用注射用水稀配至2g/ml，40％NaOH溶液調(diào)pH值6.7。濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，10000分子量卷膜式超濾器超濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰，取出緩化后置室溫放置15天。倒出藥液，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.2，用10000分子量卷膜式超濾器超濾，收集超濾后的藥液，攪拌均勻，20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值7.2。加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸15分鐘，冷卻至40℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.2，灌裝，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化。
2.注射用骨肽制備工藝稱(chēng)取乳糖，加適量的注射用水使其溶解，再加入0.3％(g/ml)藥用炭攪拌15分鐘，過(guò)濾除炭得乳糖溶液；取骨肽冷凍溶液，室溫融化，加入配好的乳糖溶液，再加注射用水每1ml含多肽5.5mg，乳糖150mg，用0.45μm濾膜初過(guò)濾，將濾液調(diào)pH7.5，經(jīng)0.2μm微孔濾膜除菌過(guò)濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實(shí)施例41.骨肽溶液提取工藝將新鮮或冷凍的豬四肢骨，剔除殘肉、洗凈、打碎成6cm的小塊。加入3倍量純化水，115℃、0.1Mpa壓力下高壓提取3次，分別為2小時(shí)、1.5小時(shí)和1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于5℃冷藏36小時(shí)。除去上層油脂，用10％鹽酸調(diào)pH值3.5，煮沸50分鐘，冷藏16小時(shí)。濾取上清液，在70℃減壓濃縮至2.6g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，靜置20小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味。用注射用水稀配至1g/ml，40％NaOH溶液調(diào)pH值8.0。濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，10000分子量卷膜式超濾器超濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰，取出緩化后置陰涼避光處放置5天。倒出藥液，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.0，用10000分子量卷膜式超濾器超濾，收集超濾后的藥液，攪拌均勻，20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值6.8。加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸30分鐘，冷卻至60℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值6.8，灌裝，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化。
2.注射用骨肽制備工藝取葡聚糖，加水使其溶解，再加入0.3％(g/ml)藥用炭攪拌15分鐘，過(guò)濾除炭得葡聚糖溶液；取處方量骨肽冷凍溶液，室溫融化，加入配好的葡聚糖溶液，再加注射用水每1ml含多肽15mg，葡聚糖200mg，用0.45μm濾膜初過(guò)濾，將濾液調(diào)pH7.0，經(jīng)0.2μm微孔濾膜除菌過(guò)濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實(shí)施例51.骨肽溶液提取工藝將新鮮或冷凍的牛四肢骨，剔除殘肉、洗凈、打碎成6cm的小塊。加入3倍量純化水，115℃、0.08Mpa壓力下高壓提取3次，分別為2小時(shí)、1.5小時(shí)和1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于5℃冷藏36小時(shí)。除去上層油脂，用10％鹽酸調(diào)pH值3.5，煮沸50分鐘，冷藏16小時(shí)。濾取上清液，在70℃減壓濃縮至2.6g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，靜置20小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味。用注射用水稀配至1g/ml，40％NaOH溶液調(diào)pH值7.3。濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，6000分子量卷膜式超濾器超濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰，取出緩化后置陰涼避光處放置6天。倒出藥液，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.2，用10000分子量卷膜式超濾器超濾，收集超濾后的藥液，攪拌均勻，20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值7.0。加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸30分鐘，冷卻至60℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值7.2，灌裝，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化。
2.骨肽注射液制備工藝用注射用水將緩化后的藥液稀釋至每1ml含多肽8mg，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH7.5，經(jīng)0.2μm微孔濾膜除菌過(guò)濾，得骨肽注射液。
實(shí)驗(yàn)例11)蛋白質(zhì)的檢查取骨肽注射液1ml或1支注射用骨肽加水制成每1ml含多肽類(lèi)物質(zhì)約5mg的溶液，加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，均未出現(xiàn)混濁。
2)不溶性微粒檢查取實(shí)施例1-3方法獲得的凍干粉針劑以及現(xiàn)有工藝獲得的骨肽制劑各1支，加微粒檢查用凈化水溶解，用相應(yīng)溶劑作空白，依法檢查(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IX R)，每支含10μm以上的微粒不得過(guò)6000粒，含25μm以上的微粒不得過(guò)600粒。實(shí)際檢測(cè)3批樣品結(jié)果見(jiàn)表1。
表1

3)溶液的澄清度與顏色取注射用骨肽加水制成每1ml中含多肽類(lèi)物質(zhì)約5mg的溶液，溶液澄清，顏色淺于黃色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。
4)異常毒性取注射用骨肽，加氯化鈉注射液制成每1ml中含多肽類(lèi)物質(zhì)約5mg的溶液，依法檢查(《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄XIC)，按靜脈注射法給藥，符合規(guī)定。
5)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)取注射用骨肽，加滅菌注射用水制成每1ml中含多肽類(lèi)物質(zhì)約5mg的溶液或直接取骨肽注射液作為供試品溶液。取體重為250～350g的健康豚鼠6只，連續(xù)3次，間日腹腔注射供試品溶液0.5ml。第三次注射二周后，再自靜脈注射本品1ml，注射后15分鐘內(nèi)，均未出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。
結(jié)論由本發(fā)明制備的骨肽制劑，雜質(zhì)少，純度高，應(yīng)用安全。
權(quán)利要求
1.一種骨肽注射劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟1)將豬或牛四肢骨，洗凈，打碎，加入1～4倍重量的純化水，105～120℃高壓提取至少2次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，冷藏，除去上層油脂，調(diào)pH值1.0～4.0，煮沸，冷藏；2)過(guò)濾取上清液，減壓濃縮至2.5～2.8g(四肢骨)/ml，加入乙醇使含醇體積量達(dá)到60～80％，靜置，過(guò)濾回收乙醇至無(wú)醇味；用注射用水稀配至1～2g/ml，調(diào)pH值6.0～8.0；過(guò)濾，滅菌；冷凍，緩化后置陰涼避光處或室溫放置；過(guò)濾，調(diào)pH值6.8～7.2；脫色，調(diào)pH值6.8～7.2，滅菌，冷凍至結(jié)冰，取出緩化；3)用注射用水將緩化后的藥液稀釋至每1ml含多肽5.0～15.0mg，粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，精濾，得骨肽注射液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨肽注射劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟1)將豬、牛四肢骨，洗凈、打碎成5～10cm的小塊，加入2～3倍重量的純化水，110～120℃、0.08～0.1Mpa壓力下提取2次，分別為2～3小時(shí)和1～2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，于0～5℃冷藏8～36小時(shí)，除去上層油脂，調(diào)pH值2.0～3.0，煮沸30～60分鐘，冷藏8～24小時(shí)；2)濾取上清液，在70～75℃減壓濃縮至2.5～2.8g(四肢骨)/ml，待溫度降至30℃以下加入乙醇使含醇體積量達(dá)到70～80％，靜置8～24小時(shí)后過(guò)濾至澄清，回收乙醇至無(wú)醇味；用注射用水稀配至1g/ml，調(diào)pH值6.7～7.3；濾紙過(guò)濾，0.22μm濾膜過(guò)濾，6000～10000分子量超濾器超濾，115℃滅菌40分鐘；冷凍至結(jié)冰，緩化后置陰涼避光處或室溫放置5～20天；再經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾，用6000～10000分子量超濾器超濾，調(diào)pH值6.8～7.2；加入0.2％(g/ml)活性炭，加熱煮沸15～30分鐘，冷卻至40～60℃，0.2μm濾膜過(guò)濾，調(diào)pH值6.8～7.2，115℃滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，取出緩化；3)用注射用水將緩化后的藥液稀釋至每1ml含多肽5.0～10.0mg，粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，精濾，得骨肽注射液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的骨肽注射劑的制備方法，其特征在于，還包括步驟4)所述骨肽注射液經(jīng)冷凍干燥，得骨肽凍干粉針劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的骨肽注射劑的制備方法，其特征在于，還包括步驟4)先加注射用水將賦形劑溶解后，再加入活性炭脫色，過(guò)濾得水溶液；將水溶液加入到所述的骨肽注射液中，調(diào)整至每1ml含多肽5.0～15.0mg，賦形劑100～200mg，0.45μm濾膜粗濾，調(diào)pH6.8～7.5，0.2μm微孔濾膜精濾，冷凍干燥，得骨肽凍干粉針劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的骨肽注射劑的制備方法，其特征在于，所述的賦形劑為甘露醇、乳糖或葡聚糖。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種骨肽注射劑的制備方法，由新鮮或冷凍的豬、牛的四肢骨經(jīng)高壓提取，脫脂，酸處理，醇沉，堿處理，超濾而成。本發(fā)明采用酸、堿分別去除骨中的酸性蛋白和堿性蛋白，同時(shí)還采用醇沉，有效地去除大分子蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證骨肽注射劑雜質(zhì)少，純度高。
文檔編號(hào)A61K9/12GK101062403SQ200710099629
公開(kāi)日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2007年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月25日
發(fā)明者方同華 申請(qǐng)人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司