專利名稱：：一種治療惡性腫瘤的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及制備一種用于治療惡性腫瘤的藥物組合物。該藥物組合物包括大黃、黃連、姜黃，金錢草、澤瀉，莪術(shù)。該藥物組合物可以是片劑、丸劑、膠囊、粉劑、粒劑、注射劑和/或口服液。發(fā)明背景惡性腫瘤是常見的嚴(yán)重危害人類健康的疾病。20世紀(jì)后期，學(xué)術(shù)界證實(shí)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程伴有體內(nèi)銅鋅含量的異常。病例對照研究顯示與正常人和非惡性腫瘤患者相比較，惡性腫瘤患者體內(nèi)銅水平顯著增高，而鋅水平顯著降低，銅鋅比例增高。在臨床實(shí)踐中，測定血清銅鋅含量對惡性腫瘤的診斷具有一定的價值。但由于沒有明確銅鋅含量的異常在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中的作用，2000年之前，本領(lǐng)域?qū)W術(shù)界還沒有將影響銅鋅含量的藥物應(yīng)用于惡性腫瘤的治療和/或預(yù)防中。在臨床實(shí)踐中，抗銅藥物用于治療一種銅代謝異常的非惡性腫瘤疾病——肝豆?fàn)詈俗冃裕鴽]有應(yīng)用于惡性腫瘤的治療和預(yù)防的報(bào)道。2000年，美國學(xué)者通過動物模型發(fā)現(xiàn)治療肝豆?fàn)詈俗冃缘目广~藥物Tetrathiomolybdate(TM)可以抑制新生血管生成過程，該項(xiàng)研究引起了本領(lǐng)域?qū)W術(shù)界的關(guān)注。該項(xiàng)研究提示，抗銅藥物可能通過抑制惡性腫瘤的新生血管生成達(dá)到抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本領(lǐng)域的研究已經(jīng)證實(shí)，惡性腫瘤自身必須具備啟動和促進(jìn)新生血管生成的能力，以滿足自身的新陳代謝和營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)的需要。如果沒有血管生成，原發(fā)腫瘤的生長不會超過12mm，也不會出現(xiàn)浸潤和轉(zhuǎn)移。抑制腫瘤血管生成，與阻斷腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。抑制腫瘤血管生成，還可阻斷腫瘤的發(fā)生和阻止癌前病變向癌的惡性轉(zhuǎn)變。不僅實(shí)體腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移依賴新生血管生成，血液系統(tǒng)惡性腫瘤(如惡性淋巴瘤、淋巴細(xì)胞白血病等)的生長和轉(zhuǎn)移也與血管生成密切相關(guān)。腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、預(yù)后與血管生成密切相關(guān)，以腫瘤的血管生成為靶點(diǎn)，開發(fā)血管生成抑制劑，是近20年來腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。血管生成抑制劑不但可用于大多數(shù)實(shí)體腫瘤的治療，還可用于癌的預(yù)防和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療。惡性腫瘤血管生成與多種血管生成促進(jìn)因子相關(guān)，血管生成抑制劑多靶向于血管生成促進(jìn)因子及其受體，或者其協(xié)同因子。自2000年開始一系列最新的研究表明，銅是大多數(shù)血管生成促進(jìn)因子，具體的講，包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)、纖維母細(xì)胞生長因子(FGF)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)的合成所必需的微量元素。因此，抗銅藥物可以抑制血管生成促進(jìn)因子的合成，從而抑制惡性腫瘤的血管生成，進(jìn)而抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移。發(fā)明人依據(jù)上述理論，完成了本發(fā)明。發(fā)明人通過實(shí)施例2在細(xì)胞水平證實(shí)本發(fā)明所涉及的藥物組合物可以有效地降低惡性腫瘤細(xì)胞銅含量，增加鋅水平，降低銅/鋅比例；通過實(shí)施例3證實(shí)本發(fā)明所涉及的藥物組合物可以有效地抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖、遷移和管形成能力；通過實(shí)施例4在動物體內(nèi)水平證實(shí)本發(fā)明所涉及的藥物組合物可以有效地抑制惡性腫瘤的生長和血管生成；通過實(shí)施例5證實(shí)本發(fā)明所涉及的藥物組合物可以有效地增加惡性腫瘤患者銅的排泄，降低惡性腫瘤患者血清銅水平，增加血清鋅水平，降低血清銅鋅比例，有效地抑制惡性腫瘤血管生成過程，達(dá)到治療惡性腫瘤的目的。發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物組合物，所述組合物主要成分包含大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)。本發(fā)明還提供了主要成分包含大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)的藥物組合物在治療和/或預(yù)防惡性腫瘤中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的藥物可制成片劑、丸劑、膠囊粉劑、粒劑、口服液、膏劑、霜劑、注射劑等多種劑型。上述各種劑型的藥物均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。優(yōu)選是片劑、丸劑、膠囊、粉劑、粒劑，更優(yōu)選是片劑、丸劑、膠囊。所述藥物組合物中還可加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、填充劑、賦形劑、粘合劑、濕潤劑、崩釋劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑、防腐劑等，必要時加入香味劑、甜味劑等。所述組合物的給藥途徑可以是口服給藥、肌肉內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥。優(yōu)選是口服給藥。所述的大黃是指蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖及其制備的大黃生藥、生粉、飲片、大黃粗提取物、大黃素提取物、大黃酸提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為大黃粗提取物、大黃素提取物、大黃酸提取物，更優(yōu)選為大黃素提取物。所述的黃連是J旨毛茛科多年生草本植物黃連(味連)、三角葉黃連(雅連).或云連C的干燥根及根莖及其制備的黃連生藥、生粉、飲片、黃連提取物、黃連素提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為黃連提取物、黃連素提取物，更優(yōu)選為黃連素提取物。所述的姜黃是指姜科植物姜黃的根莖及其制備的姜黃生藥、生粉、飲片、姜黃提取物、姜黃素提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為姜黃提取物、姜黃素提取物，更優(yōu)選為姜黃素提取物。所述的金錢草是指報(bào)春花科多年生草本獵物過路黃(神仙對坐草)的全草及其制備的金錢草生藥、生粉、飲片、金錢草提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為金錢草提取物。所述的澤瀉是指澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖及其制備的澤瀉生藥、生粉、飲片、澤瀉提取物、澤瀉甾醇提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥锏热魏涡问降脑纤幬?。?yōu)選為澤瀉提取物、澤瀉甾醇提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥铮鼉?yōu)選為澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?。所述的莪術(shù)是指姜科植物莪術(shù)、郁金或廣西莪術(shù)的干燥根莖及其制備的莪術(shù)生藥、生粉、飲片、莪術(shù)提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為莪術(shù)提取物。本發(fā)明還提供了以上文所述的大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)為有效成分的用于治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的片劑、丸劑、膠囊的制備方法。所述組合物的組份和重量份數(shù)為大黃5-10黃連5-10姜黃5-10金錢草10-20澤瀉5-10莪術(shù)5-10。優(yōu)選為大黃6黃連6姜黃9金錢草15澤瀉5莪術(shù)9。所述的片劑、丸劑、膠囊是按以下方法制備而成取大黃6g黃連6g姜黃9g金錢草15g澤瀉5g莪術(shù)9g，將澤瀉、金錢草、姜黃、莪術(shù)及大黃(3g)用水煎煮兩次,過濾后濾液靜置過夜，濃縮成稠浸膏,再將黃連6g及剩余大黃(3g)粉碎與上述浸膏混勻，加適量輔料制粒。按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑和膠囊。所述的片劑、丸劑、膠囊還可以按以下方法制備而成將大黃素提取物0.25g黃連素提取物0.25g姜黃素提取物0.25g金錢草提取物0.625g澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?.625g莪術(shù)提取物0.625g混勻，加適量輔料制粒。按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑和膠囊。所述的片劑、丸劑和膠囊的規(guī)格為每粒0.3克一1.0克，優(yōu)選為0.5克。所述的片劑、丸劑和膠囊的每日給藥劑量是3-5克。附圖簡述圖l:含藥血清處理后人類血管內(nèi)皮細(xì)胞管形成的光學(xué)顯微鏡照片。圖2:含藥血清處理后人類血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移結(jié)果的光學(xué)顯微鏡照片。圖3:本發(fā)明所提供的中藥片劑1對裸鼠移植瘤生長的抑制曲線圖4:本發(fā)明所提供的中藥片劑2對裸鼠移植大腸癌生長的抑制曲線圖5:本發(fā)明所提供的中藥片劑對裸鼠移植大腸癌治療效果及對微血管密度的影響發(fā)明詳述本發(fā)明提供了一種治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物組合物，所述組合物主要成分包含大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)以及相應(yīng)藥物載體。所述組合物進(jìn)一步包括載體、賦形劑等，進(jìn)一步還可以包括目前已有的用于治療惡性腫瘤的等。所述組合物的給藥途徑可以是局部給藥、口服給藥、肌肉內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥。優(yōu)選是口服給藥。根據(jù)所用的給藥途徑，可以將上述組合物以各種可藥用的形式進(jìn)行給藥。例如，可將本發(fā)明的藥物組合物以固體、溶液、乳液、分散體、微膠粒、脂質(zhì)體等的形式使用，其中，得到的組合物中含有用于本發(fā)明實(shí)踐的大黃、黃連、姜黃，金錢草、澤瀉，莪術(shù)作為其活性成分，可將活性成分與例如常規(guī)的無毒可藥用載體混合制成片劑、微丸、膠囊、栓劑、溶液劑、乳液、懸浮液、以及適于應(yīng)用的其它形式?？墒褂玫妮d體包括葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露糖醇、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石、玉米淀粉、角蛋白、膠態(tài)二氧化硅、土豆淀粉、尿素、中等鏈長的甘油三酯、葡聚糖以及其它適用于制劑生產(chǎn)的固體、半固體或液體形式的載體。此外，還可使用輔料、穩(wěn)定劑、增稠劑、著色劑、防腐劑和香料。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性載體是。藥物組合物中活性成分的含量為足以在待治療的疾病中產(chǎn)生所需效果的量。所述的大黃是指寥科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖及其制備的大黃生藥、生粉、飲片、大黃粗提取物、大黃素提取物、大黃酸提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為大黃粗提取物、大黃素提取物、大黃酸提取物，更優(yōu)選為大黃素提取物。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性大黃為大黃生藥和大黃素提取物。所述的黃連是指毛茛科多年生草本植物黃連(味連)、三角葉黃連(雅連).或云連C的干燥根及根莖及其制備的黃連生藥、生粉、飲片、黃連提取物、黃連素提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為黃連提取物、黃連素提取物，更優(yōu)選為黃連素提取物。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性黃連為黃連生藥和黃連素提取物。所述的姜黃是指姜科植物姜黃的根莖及其制備的姜黃生藥、生粉、飲片、姜黃提取物、姜黃素提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為姜黃提取物、姜黃素提取物，更優(yōu)選為姜黃素提取物。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性姜黃為姜黃生藥和姜黃素提取物。所述的金錢草是指報(bào)春花科多年生草本獵物過路黃(神仙對坐草)的全草及其制備的金錢草生藥、生粉、飲片、金錢草提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為金錢草提取物。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性金錢草為金錢草生藥和金錢草提取物。所述的澤瀉是指澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖及其制備的澤瀉生藥、生粉、飲片、澤瀉提取物、澤瀉甾醇提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥锏热魏涡问降脑纤幬铩?yōu)選為澤瀉提取物、澤瀉甾醇提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥铮鼉?yōu)選為澤瀉總?cè)勾碱愄崛∥?。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性澤瀉為澤瀉生藥和澤瀉總?cè)h醇類提取物。所述的莪術(shù)是指姜科植物莪術(shù)、郁金或廣西莪術(shù)的干燥根莖及其制備的莪術(shù)生藥、生粉、飲片、莪術(shù)提取物等任何形式的原料藥物。優(yōu)選為莪術(shù)提取物。舉證性本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性莪術(shù)為莪術(shù)生藥和莪術(shù)提取物。所述藥物組合物可制成錠劑、片劑、丸劑、膠囊、粉劑、粒劑、注射劑、口服液等多種劑型。上述各種劑型的藥物均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。優(yōu)選是片劑、丸劑、膠囊。所述藥物組合物中還可加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、填充劑、賦形劑、粘合劑、濕潤劑、崩釋劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等，必要時加入香味劑、甜味劑等。但是并不只限于這些。所述組合物的組份和重量份數(shù)為大黃5-10黃連5-10姜黃5-10金錢草10-20澤瀉5-10莪術(shù)5-10。優(yōu)選為大黃6黃連6姜黃9金錢草15澤瀉5莪術(shù)9。本發(fā)明還提供了兩種所述的片劑、丸劑、膠囊的制備方法，分別應(yīng)用所述的大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)生藥和提取物制備。所述的片劑、丸劑、膠囊是按以下方法制備而成取大黃生藥6g黃連生藥6g姜黃生藥9g金錢草生藥15g澤瀉生藥5g莪術(shù)生藥9g，將澤瀉、金錢草、姜黃、莪術(shù)及大黃(3g)用水煎煮兩次,過濾后濾液靜置過夜,濃縮成稠浸膏,再將黃連6g及剩余大黃(3g)粉碎與上述浸膏混勻，加適量輔料制粒。按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑和膠囊。具體實(shí)施方式見實(shí)施例l。為了提高有效成分純度及生物利用度，達(dá)到更好的療效，所述的片劑、丸劑、膠囊還可以按以下方法制備而成:將大黃素提取物0.25§黃連素提取物0.25§姜黃素提取物0.25g金錢草提取物0.625g澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?.625g莪術(shù)提取物0.625g混勻，加適量輔料制粒。按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑和膠囊。具體實(shí)施方式見實(shí)施例2。此種制備方法的療效穩(wěn)定，生物利用度高，但成本較高。所述的片劑、丸劑和膠囊的規(guī)格為每粒0.3克一1.0克，優(yōu)選為0.5克。所述的片劑、丸劑和膠囊的用法用量為每日2-3次，每次3-6粒。本說明書中所使用的術(shù)語"惡性腫瘤"包括全部的癌和肉瘤以及全部的血液系統(tǒng)惡性腫瘤。本發(fā)明實(shí)施中所用的舉證性惡性腫瘤為大腸癌。本說明書中所使用的下面結(jié)合附圖和實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，所述的實(shí)施例是用于描述本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例l:本發(fā)明提供的中藥復(fù)方片劑、丸劑和膠囊的制備取大黃6g黃連6g姜黃9g金錢草15g澤瀉5g莪術(shù)9g，將澤瀉、金錢草、姜黃、莪術(shù)及大黃(3g)用水煎煮兩次,過濾后濾液靜置過夜,濃縮成稠浸膏，再將黃連6g及剩余大黃(3g)粉碎與上述浸膏混勻,加適量輔料制粒。壓片干燥后即得，每劑制成30片，每片0.375g。實(shí)施例2:本發(fā)明提供的中藥復(fù)方片劑、丸劑和膠囊的制備將大黃素提取物0.25g黃連素提取物0.25g姜黃素提取物0.25g金錢草提取物0.625g澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?.625g莪術(shù)提取物0.625g混勻，加適量輔料制粒。按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑和膠囊。實(shí)施例3本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方片劑對大腸癌細(xì)胞銅鋅代謝的影響1.含藥血清的制備應(yīng)用實(shí)施例l和實(shí)施例2所提供的片劑。隨機(jī)選取15只新西蘭白兔，5只為一組，分別記為用藥組l、用藥組2和對照組，實(shí)驗(yàn)前禁食l天。隨后用藥組1逐日口服片劑5片欣，2次沃，間隔12小時，共給藥10天。用藥組2逐日口服片劑3片/次，2次沃，間隔12小時，共給藥10天。對照組給予不含有效成分的輔料。給藥10天后，各組兔均在常規(guī)消毒下不經(jīng)麻醉直接經(jīng)心臟進(jìn)針取血，取血瓶斜放2小時，待血清析出后，置冷藏箱中過夜，次日吸取上層血清離心、抽濾、除菌后，置-20下保存?zhèn)溆?，分別記為含藥血清1、含藥血清2和空白血清。2.含藥血清對大腸癌細(xì)胞銅鋅含量的影響常規(guī)方法培養(yǎng)大腸癌細(xì)胞系LOVO、HT29。當(dāng)細(xì)胞融合成片占據(jù)整個視野的80%左右，細(xì)胞數(shù)量絕對值205個時，即可檢測出細(xì)胞內(nèi)銅、鋅含量，構(gòu)成一個細(xì)胞模型。分為4組，每組均由3個相同的細(xì)胞模型構(gòu)成，一組加入無血清培養(yǎng)基，一組加入0.5ml空白血清，另兩組分別加入0.5ml含藥血清1和含藥血清2，分別編號為培養(yǎng)液組、空白血清組、含藥血清1組和含藥血清2組，培養(yǎng)24小時后收獲備用。采用改良Loway法計(jì)算細(xì)胞模型中Cu2+、Zn2+和總蛋白的含量，以細(xì)胞模型中Cu2+、Zn2+含量與總蛋白含量的比值(ng/mg)作為細(xì)胞模型Cu2+、Zn2+含量測定值。各組數(shù)據(jù)均以(義±5)表示，配對資料分析采用t檢驗(yàn)。3.結(jié)果培養(yǎng)液組、空白血清組和兩含藥血清組細(xì)胞內(nèi)Cu2+、Zn2+含量和012+/2112+比值的變化見表1。兩含藥血清組細(xì)胞內(nèi)Cu2+含量顯著低于培養(yǎng)液組和空白血清組(pO.Ol)，Zn2+含量顯著高于培養(yǎng)液組和空白血清組(p<0.01)，Cu2+/Zn2+比值顯著低于培養(yǎng)液組和空白血清組。含藥血清2組的降銅效果更為明顯。表1:培養(yǎng)液組、空白血清組和兩含藥血清組細(xì)胞內(nèi)Cu2+、Zn2+含量和Cu2+ZZn2+比值的變化(義±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例4:本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方片劑對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管形成能力的影響1:含藥血清對人類血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用。將人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC，購自CascadeBiologies公司，Cot:C-003-5C)置于含10%胎牛血清(FBS)的Medium200(購自CascadeBiologies公司)中培養(yǎng)(37oC、5%C02、95%濕度)，取第四代細(xì)胞按密度4000/250ul接種于96孔培養(yǎng)板中，設(shè)定培養(yǎng)液組、空白血清組、含藥血清1組和含藥血清2組，每組均做3個復(fù)孔?？瞻籽?、含藥血清1和含藥血清2的制備同實(shí)施例3。待細(xì)胞生長密度達(dá)80%，分別加入10ul的培養(yǎng)液、空白血清、含藥血清1和含藥血清2，繼續(xù)培養(yǎng)(M200培養(yǎng)基，2%FBS)48小時后，加入5mg/ml的四唑溴鹽(MTT)20ul，37oC繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，棄上清，每孔加入150ulDMSO，輕輕振蕩，1小時后在490nm波長處用BIO-RADModel3500微板讀數(shù)儀測定各孔吸光值，以吸光值表示各孔中活細(xì)胞的數(shù)量。上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果如表2顯示，含藥血清1組和含藥血清2組活細(xì)胞的數(shù)量顯著低于培養(yǎng)液組和空白血清組(pO.Ol)。表2:培養(yǎng)液組、空白血清組和兩含藥血清組吸光值(義±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2:含藥血清對人類血管內(nèi)皮細(xì)胞管形成能力的抑制作用。24孔培養(yǎng)板每孔加入BDMatrigelMatrix原膠200ul，使之聚合成膠，第四代人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)懸液按30000cell/500ul密度接種至涂有Matrigel膠的24孔板中，設(shè)定培養(yǎng)液組、空白血清組、含藥血清1組和含藥血清2組，每組均做3個復(fù)孔?？瞻籽?、含藥血清1和含藥血清2的制備同實(shí)施例3。分別加入10ul的培養(yǎng)液、空白血清、含藥血清1和含藥血清2，每組均做3個復(fù)孔。37°C、5%C02、95%濕度培養(yǎng)24小時，OLYMPUSCK40-RFL光學(xué)顯微鏡觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞管的形成，每孔取4個低倍視野計(jì)數(shù)，以O(shè)LYMPUSCK40數(shù)碼照相機(jī)拍照(圖1)。結(jié)果如表3所示，含藥血清1組和含藥血清2組血管內(nèi)皮細(xì)胞管形成顯著低于培養(yǎng)液組和空白血清組(p<0.01)。表3:培養(yǎng)液組、空白血清組和兩含藥血清組血管內(nèi)皮細(xì)胞管形成數(shù)量組別管形成數(shù)量培養(yǎng)液組152±6.2空白血清組154±8.3含藥血清1組64±9.8含藥血清2組58±10.13:含藥血清對人類血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的抑制作用。1、制備趨化因子取傳代后第二天長勢良好的NIH3T3細(xì)胞。無血清DMEM輕柔漂洗2次。無血清DMEM，5XC02，37。C培養(yǎng)24—48hours。收集細(xì)胞上清。離心(12000g,4。C,10min)。上清濾菌(0.22um濾膜)，分裝保存(一2(TC)。2、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)取稀釋的Matrigel25ul(原膠以DMEM按1:2比例稀釋)加入Transwell板上室，覆蓋整個聚酯膜表面，37t:孵育30min，使Matrigd聚合成膠。第四代人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)懸液按30000/250ul密度接種至上室，PBS洗滌3次從培養(yǎng)瓶中消化并收獲細(xì)胞。用無血清DMEM制成單細(xì)胞懸液，5X105cdls/ml，設(shè)定培養(yǎng)液組、空白血清組、含藥血清1組和含藥血清2組，每組均做3個復(fù)孔?？瞻籽?、含藥血清1和含藥血清2的制備同實(shí)施例3。分別加入10ul的培養(yǎng)液、空白血清、含藥血清1和含藥血清2。Transwell板下室加入500ul步驟1制備的趨化因子。5%C02，37t:培養(yǎng)24小時。用DMEM濕棉簽輕輕擦去凝膠及聚酯膜上表面的細(xì)胞。小心取出上室，用冰預(yù)冷的甲醇固定30分鐘。蘇木素染色l分鐘。梯度酒精脫水(80%，95%，100%，100°/O，二甲苯透明。小心將聚酯膜從上室切取下來，置于載玻片上中性樹脂封片。附著于聚酯膜下表面的細(xì)胞在高倍鏡下(400X)隨機(jī)取6個視野計(jì)數(shù)取平均值并拍照(圖2)。重復(fù)實(shí)驗(yàn)2次。結(jié)果如表4所示，含藥血清1組和含藥血清2組血管內(nèi)皮細(xì)胞穿越Matrigel遷移至Transwell板聚碳酯膜下表面的數(shù)量顯著低于培養(yǎng)液組和空白血清組(p<0.01)。表4:培養(yǎng)液組、空白血清組和兩含藥血清組血管內(nèi)皮細(xì)胞穿孔細(xì)胞數(shù)量(義±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例5:本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方片劑對大腸癌動物模型的腫瘤血管生成和腫瘤生長的影響收獲人類結(jié)腸癌細(xì)胞系LoVo細(xì)胞，用PBS制成細(xì)胞懸液，以200萬/200u接種至8周大的BALB/cAnN-nu/nu裸鼠的右股部皮下。待瘤體生長至5mmX5mm大小時，隨機(jī)分成三組，每組5只，記為用藥組1、用藥組2和對照組。用藥組1逐日口服實(shí)施例1所提供的片劑5片/次，2次/天，間隔12小時，共給藥10天。用藥組2逐日口服實(shí)施例2所提供片劑3片/次，2次/天，間隔12小時，共給藥10天。對照組給予不含有效成分的輔料。連續(xù)給藥60天，隔記錄瘤體的長徑和短徑。用藥期間，小鼠未出現(xiàn)不良反應(yīng)。處死小鼠后，取出腫瘤，檢測腫瘤的質(zhì)量。應(yīng)用CD34染色免疫組化方法檢測對照組和兩治療組腫瘤的微血管密度。結(jié)果顯示，兩用藥組瘤體較對照組縮小，生長明顯減慢差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(圖3)，兩治療組取出瘤塊的體積和質(zhì)量均低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，微血管密度明顯低于對照組(P<0.01)(表5，圖4)。表5:對照組與兩用藥組的腫瘤質(zhì)量和微血管密度(^±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，*表示與對照組比較差異具有顯著性&<0.01)實(shí)施例6:本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方片劑對大腸癌患者血清銅鋅水平及其排泄的影響l.臨床病例選擇、分組和治療選擇40例結(jié)直腸癌患者，男女比例為1.5:1，平均年齡62.3歲，入院后一律停服影響銅、鋅、鐵、鈣等元素代謝的藥物2周。于用藥前2周及用藥全過程一律進(jìn)食統(tǒng)一規(guī)定的低銅飲食。隨機(jī)分為2組，記為治療組1和治療組2，治療組1逐日口服實(shí)施例1所提供的片劑5片/次，每日3次，給藥4周；治療組2逐日口服實(shí)施例2所提供的片劑5片欣，每日3次，給藥4周。另選擇20例非惡性腫瘤患者為對照組，在檢測前2周一律進(jìn)食統(tǒng)一規(guī)定的低銅飲食。2.血清銅鋅水平檢測分別于治療第0日(治療前1日)、第7日、14日、21日和28日采集兩治療組患者以及相應(yīng)時間點(diǎn)對照組的靜脈血2ml，分離血清置-20oC保存。應(yīng)用原子吸收分光光度儀測定血清中銅鋅含量。3.糞便中銅鋅含量檢測分別于治療第0日(治療前1日)、第7日、14日、21日和28日采集兩治療組患者以及相應(yīng)時間點(diǎn)對照組的24小時糞便，將其分別攪勻，隨機(jī)留取少許標(biāo)本，稱其質(zhì)量后，放入鼓風(fēng)箱內(nèi)在70oC溫度下將標(biāo)本中水分大部分除去，放入恒溫干燥箱內(nèi)在240-260oC高溫下燒烤2小時碳化后取出，再稱其重量。將碳化標(biāo)本研沫、混勻，稱取50mg加入3:1的HN03/HCL04溶液2ml，在80oC水浴1小時，制備出棕黃色澄清溶液，加入去離子水至10ml混勻，使用原子吸收分光光度儀測定糞便中銅、鋅的含量。采用SPSSIO.O軟件，F(xiàn)檢驗(yàn)、義2檢驗(yàn)或四格表的確切概率法。4.結(jié)果如表6和表7所示，兩治療組用藥后血清銅離子水平較治療前顯著降低(pO.Ol)，血清鋅離子水平則較治療前顯著增高(pO.Ol)。兩治療組用藥后糞便中排出的銅含量較治療前顯著增高(pO.Ol)，排出的鋅含量則較治療前顯著降低(pO.Ol)。表6:治療第0、7、14、28天兩治療組和對照組血清銅鋅含量(^±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*與對應(yīng)第0日比較，差異具有顯著性(pO.Ol)"與對照組比較，差異具有顯著性(pO.Ol)表7:治療第O、7、14、28天兩治療組和對照組糞便中銅鋅含量(義±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2.47**與對應(yīng)第0R比較，差異具有顯著性(pO.Ol)神與對照組比較，差異具有顯著性(pO.Ol)實(shí)施例7:本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方片劑對人類大腸癌的治療效果權(quán)利要求1.一種治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物組合物，其主要成分包含大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，所述藥物組合物的劑型是片劑、丸劑、膠囊、粉劑、粒劑、注射劑或口服液。3.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述組合物的劑型是中藥復(fù)方片劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于該組合物的組份和重量份數(shù)為大黃5-10、黃連5-10、姜黃5-10、金錢草10-20、澤汚5-10、莪術(shù)5-10。5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于該組合物的組份和重量份數(shù)為大黃6、黃連6、姜黃9、金錢草15、澤瀉5、莪術(shù)9。6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，所述載體包括稀釋劑、填充劑、賦形劑、粘合劑、濕潤劑、崩釋劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑、香味劑和/或甜味劑。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，所述組合物的給藥途徑是口服給藥、肌肉注射給藥或靜脈注射給藥。8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物的劑型是片劑、丸劑或膠囊，所述片劑、丸劑或膠囊按以下方法制備而成取大黃6g、黃連6g、姜黃9g、金錢草15g、澤瀉5g、莪術(shù)9g，將澤瀉、金錢草、姜黃、莪術(shù)按所述比例以及3g大黃用水煎煮兩次,過濾后濾液靜置過夜,濃縮成稠浸膏,再將黃連6g及剩余3g大黃粉碎與上述浸膏混勻,加適量輔料制粒，按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑或膠囊。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的藥物組合物的制備方法，所述制備方法包括如下步驟按權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的比例取大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)，將澤瀉、金錢草、姜黃、莪術(shù)按所述比例以及大黃用水煎煮兩次,過濾后濾液靜置過夜,濃縮成稠浸膏,再將黃連及剩余的大黃粉碎與上述浸膏混勻,加適量輔料制粒，按常規(guī)制劑方法制備成片劑、丸劑或膠囊。10.—種治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物組合物，其主要成分包含大黃素提取物、黃連素提取物、姜黃素提取物、金錢草提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?、莪術(shù)提取物。11.根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物，所述藥物組合物的劑型是片劑、丸劑、膠囊、粉劑、粒劑、注射劑或口服液。12.根據(jù)權(quán)利要求11的藥物組合物，所述片劑、丸劑或膠囊按以下方法制備而成將大黃素提取物0.25g、黃連素提取物0.25g、姜黃素提取物0.25g、金錢草提取物0.625g、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?.625g、莪術(shù)提取物0.625g混勻，加適量輔料制粒，按常規(guī)制劑方法制備片劑、丸劑或膠囊。13.根據(jù)權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)的藥物組合物的制備方法，所述制備方法包括如下步驟按權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)所述的比例取大黃素提取物、黃連素提取物、姜黃素提取物、金錢草提取物、澤瀉總?cè)拼碱愄崛∥?、莪術(shù)提取物混勻，加適量輔料制粒，按常規(guī)制劑方法制備成片劑、丸劑或膠囊。14.根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。15.根據(jù)權(quán)利要求14的應(yīng)用，其中所述惡性腫瘤包括實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤。全文摘要本發(fā)明涉及制備一種用于治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的藥物組合物。具體的說，本發(fā)明涉及制備一種治療和/或預(yù)防惡性腫瘤的口服藥物組合物。該藥物組合物包括大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)，通過有效地降低惡性腫瘤患者血清銅水平，提高鋅銅比例，抑制惡性腫瘤病血管生成，從而取得最好的藥物作用效果。本發(fā)明還涉及以大黃、黃連、姜黃、金錢草、澤瀉、莪術(shù)為主要成分的藥物組合物在治療和/或預(yù)防惡性腫瘤中的應(yīng)用。文檔編號A61K36/88GK101322825SQ20071011115公開日2008年12月17日申請日期2007年6月15日優(yōu)先權(quán)日2007年6月15日發(fā)明者王振軍,清賈,博趙申請人:王振軍;賈清;趙博