專利名稱：：用于治療血管性癡呆癥的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含有《艮杏葉4是耳又物用于治療血管性癡呆癥的藥物、含有其的藥物組合物，以及制備其的方法。
背景技術(shù)：
：隨著世界人口的老齡化，老年癡呆的發(fā)病率也大大增加，已成為嚴(yán)重威脅老年人健康的四大疾病之一。據(jù)調(diào)查，血管性癡呆的發(fā)病率隨年齡而直線上升，65歲以上的老年人年發(fā)病率在1.2%~4.2%,估計(jì)70歲以上老年人每年患病人數(shù)在6~12例/1000人。平均病程5年，死亡率為25.7%。我國(guó)是世界上老年人口最多的國(guó)家，又屬發(fā)展中國(guó)家之一，因此研究和開發(fā)安全、有效、質(zhì)量可控、價(jià)才各低廉、長(zhǎng)期服用方便的用于治療血管性癡呆的藥物，具有明顯的社會(huì)效益，同時(shí)又能降4氐該病的防治成本，為^土?xí)盹@著的經(jīng);齊歲文益。血管性癡呆屬于中醫(yī)1*忘、眩暈、呆病、癲狂、中風(fēng)等病癥范疇。中醫(yī)i^為其發(fā)病乃由風(fēng)、火、痰、癡阻滯腦絡(luò)，上4尤腦神，或肝、腎、心、脾虧虛，腦髓失充所致。其病位在腦絡(luò)，影響腦髓、腦轉(zhuǎn)，與肝、腎、心、脾有關(guān)；其病性為本虛標(biāo)實(shí)，虛在陰陽氣血，實(shí)在風(fēng)、火、痰、癡，多以虛實(shí)兼夾為主。其治療宜#4居虛實(shí)相互夾雜的多少，或以補(bǔ)虛為主，兼顧其實(shí)，或以4去邪為主，兼補(bǔ)其虛。唐啟盛認(rèn)為腎虛是血管性癡呆發(fā)生與發(fā)展的根本原因，而痰濁停聚和脈絡(luò)疳阻后化毒為害，產(chǎn)生的內(nèi)生之毒則為血管性癡呆發(fā)病過禾呈中的基本病理環(huán)節(jié)(中國(guó)醫(yī)藥學(xué)才艮，1996，5)。宮洪濤從生理、病理兩方面論述了腎精與血管性癡呆的關(guān)系，認(rèn)為腎精是人體正常精神意識(shí)活動(dòng)的基礎(chǔ)，也是五臟六腑賴以濡養(yǎng)的源泉。腎精虧虛不僅可導(dǎo)致五臟所主的情志失常，而且是癡呆病理因素痰痂產(chǎn)生的關(guān)4建，并因此決定著癡呆的發(fā)生('浙江中醫(yī)雜志，2005,11)。衛(wèi)振華回顧了歷代醫(yī)家對(duì)癡呆的認(rèn)識(shí)，綜合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，認(rèn)為血管性癡呆多是在平臺(tái)、波動(dòng)、下滑三期交替更迭過程中呈階梯進(jìn)展，三期證候各不相同，腎精虧虛、痰瘀互結(jié)、阻滯絡(luò)脈是血管性癡呆的發(fā)生基礎(chǔ)，痰癡蘊(yùn)結(jié)、釀生濁毒、敗壞腦絡(luò)腦髓為血管性癡呆發(fā)展的關(guān)鍵(山西中醫(yī)，2005，6)。苗桂芬等根據(jù)臨床觀察，認(rèn)為老年血管性癡呆多屬中醫(yī)痰阻血瘀腦之清竅，元神為之迷蒙所致。認(rèn)為滌痰開竅、化瘀通絡(luò)為老年血管性癡呆治療的重要治法(吉林中醫(yī)藥，2005,12)。綜上可知，血管性癡呆的一個(gè)重要特征是痰瘀阻絡(luò)、腎虛精虧。對(duì)于血管性癡呆有針對(duì)性的治療西藥，國(guó)內(nèi)外均無研究成功的報(bào)道。以血管性癡呆為主治病癥的中成藥，僅有消栓通絡(luò)片(《中華人民共和國(guó)藥典》，2005年版第一部)川芎、丹參、黃芪、澤瀉、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片山楂。該藥用于活血化癡，溫經(jīng)通絡(luò)，主治腦血栓引起的癡呆，已列入國(guó)家基本用藥目錄和基本醫(yī)療保險(xiǎn)用藥目錄。主治病癥不是血管性癡呆，但有臨床應(yīng)用報(bào)道的中成藥，有華佗再造丸(中醫(yī)藥信息，1997,6)、丹參注射液(中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1992,7)、清開靈注射液(北京中醫(yī)學(xué)院學(xué)才艮，1992，3)、月永纟各寧注射液(浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)l艮，1994，6)、烏雞白丸(北京中醫(yī)雜志，1993,6)、4艮杏葉片(實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2003,4)、二十五p木;l^朱丸(中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2003,10)等。目前正在研究的血管性癡呆治療藥物，有復(fù)方丹參片、腦"永泰膠嚢等。以上治療血管性癡呆的中成藥，絕大多#t以活血4匕癡藥物為主，少部分以清熱解毒藥為主，都不是血管性癡呆痰癡阻絡(luò)、腎虛灃奇虧i正的治療藥物。因此，市場(chǎng)對(duì)治療以痰癡阻絡(luò)、腎虛精虧為主證的血管性癡呆的藥物存在著需求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種藥物，用于治療以痰瘀阻絡(luò)、腎虛精虧為主i正的血管性癡呆癥。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述藥物的方法。本發(fā)明提供的藥物由以下重量配比的原料制成銀杏葉提取物地龍淫羊藿川考遠(yuǎn)志(制)60.1~10份22~37份22~37份11~25份11—25份。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物由以下重量配比的原料制成:本發(fā)明提供的藥物可以制成多種制劑包括片劑、丸劑、膠嚢劑、嚢片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝膠劑、糊劑中的任意一種。制備上述藥物的制備方法包括以下步驟包括(a)按比例取地龍、淫羊藿、川穹、遠(yuǎn)志四味藥材，用°/。60~95%的乙醇水溶液浸泡才是耳又優(yōu)選70%乙醇為溶劑回流提耳又1~10小時(shí)，次凄史為1~3次；(b)回收乙醇，濃縮、干燥，粉碎成細(xì)粉；(c)按比例取銀杏葉提取物，與所述細(xì)粉混合均勻；(d)加適量的賦形劑和/或其他添加劑，制成適宜劑型。本發(fā)明提供的藥物能明顯提高小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力，改善各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)能顯著改善急性血瘀大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積的異常；能明顯改善小鼠的耳廓樣"盾環(huán)；對(duì)可的+>陽虛大鼠和曱減小鼠的血漿環(huán)核苷酸有4艮好的調(diào)節(jié)作用，能明顯提高血漿cAMP水平，降低cGMP水平，升高cAMP/cGMP比值。圖1為小鼠假手術(shù)組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。銀杏葉提取物地龍淫羊藿川穹遠(yuǎn)志(制)1~5份27~33份27~33份14—23份。14~23份圖2為小鼠才莫型組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖3為小鼠都可喜組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖4為小鼠復(fù)方4艮杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖5為小鼠復(fù)方4艮杏葉片中劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖6為小鼠復(fù)方銀杏葉片低劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖7為大鼠假手術(shù)組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖8為大鼠模型組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖9為大鼠都可喜組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖10為大鼠復(fù)方《艮杏葉片高劑量組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx楊倍)。圖11為大鼠復(fù)方4艮杏葉片中劑量組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖12為大鼠復(fù)方銀杏葉片低劑量組海馬CAl區(qū)病理切片(HEx400倍)。圖13為大鼠-假手術(shù)組海馬CAl區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖14為大鼠才莫型組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖15為大鼠都可喜組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖16為大鼠復(fù)方銀杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖17為大鼠海馬中劑量組CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖18為大鼠低劑量組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)。圖19為大鼠假手術(shù)組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。圖20為大鼠沖莫型組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。圖21為大鼠都可喜組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。圖22為大鼠復(fù)方銀杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。圖23為大鼠復(fù)方4艮杏葉片中劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。圖24為大鼠復(fù)方4艮杏葉片低劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)。本發(fā)明提供的用于治療血管性癡呆癥的中醫(yī)配方由銀杏葉提取物、地龍、淫羊藿、川穹、遠(yuǎn)志五味中藥制成。該配方是本發(fā)明人根據(jù)多年的中醫(yī)從業(yè)經(jīng)驗(yàn)和對(duì)中醫(yī)理論的深入理解而才是出。配方中各成分的功用如下(1)銀杏葉4是取物，甘、苦、澀、平，歸心、肺經(jīng)，活血化瘀，促使腦脈恢復(fù)通暢，從而增加腦腑氣血的供養(yǎng)，使腦竅復(fù)靈，其針對(duì)腦脈瘀阻這一起始病因起作用，是方中的君藥。(2)地龍，咸、寒，歸肝、脾、膀胱經(jīng)，清熱息風(fēng)，通絡(luò)，其中地龍的通絡(luò)作用能輔助君藥銀杏葉提取物增強(qiáng)其活血作用；淫羊，藿，辛、甘、溫，歸肝、腎經(jīng)，補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕。淫羊奢的溫腎壯陽、填精補(bǔ)腦對(duì)腎虛這一主要病機(jī)起作用。地龍的寒與淫羊藿的溫相配，互相配合，相車乾相成，共同作為方中的臣藥。(3)川穹，辛、溫，歸肝、月旦、心包經(jīng)，活血4亍氣，祛風(fēng)止痛。其活血行氣，可佐助君藥4艮杏葉4是取物、臣藥地龍以增強(qiáng)其活血化癡作用，并且川穹兼入氣分，配合銀杏葉提取物專入血分，氣血并治，是方中的佐藥。(4)遠(yuǎn)志，苦、辛、溫，歸心、腎、肺經(jīng)，祛痰開竅，寧心安神，益智，既能祛痰，針對(duì)痰這一繼發(fā)性病因起作用；又能開竅寧心、安神益智，佐助臣藥淫羊藿以增強(qiáng)其益智^fc腦作用；還能"通調(diào)心氣，，(《本草正義》)，可作為上述各藥的引經(jīng)，古丈可為方中的佐使藥。以上諸藥配合，共同達(dá)到活血化瘀、祛痰通絡(luò)、健腦益智的效果，具有標(biāo)本同治以治標(biāo)為主、寒溫并用以平調(diào)為主、氣血同調(diào)以治血為主的特點(diǎn)，切合血管性癡呆的以腎虛為本、以痹痰為標(biāo)、但>標(biāo)證較急的發(fā)病機(jī)制，故適宜于血管性癡呆的屬痰癡阻絡(luò)、腎精虧虛i正者。其立法、-澤藥、組方，符合中醫(yī)藥理i侖及適應(yīng)病癥的病因病機(jī)。才艮據(jù)本發(fā)明的用于治療血管性癡呆癥的藥物是由下述重量配比的原并+制成銀杏葉提取物地龍淫羊藿川穹遠(yuǎn)志在本發(fā)明的一個(gè)典型的實(shí)施方式中，該用于治療血管性癡呆癥的藥物是由下述重量配比的原料制成^艮杏葉提取物地龍淫羊藿川穹遠(yuǎn)志在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，該用于治療血管性癡呆癥的藥物是由下述重量配比的原^1"制成銀杏葉提取物地龍淫羊藿0.1~10份22~37份22~37份11~25份11~25份。1~5份27~33份27~33份14~23份14~23份。1.5份30份30份川芎18份遠(yuǎn)志18份。本發(fā)明中使用的銀杏葉提取物在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)容易購(gòu)得，一般釆用符合2005版《中國(guó)藥典》銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的市售產(chǎn)品為原料(例如來自常州神馬藥業(yè)有限公司的銀杏葉提取物)。其通常通過乙醇回流提取，大孔樹脂吸附，然后噴干、粉碎而制得。其通常為淺棕黃色至棕褐色粉末；味微苦。本發(fā)明使用的其他原料皆為草藥，其可以是在藥店出售的草藥成品，也可以是新收獲的草藥，對(duì)于后者的情況，一般要將新草藥進(jìn)行烘干或曬干，以基本除去水份。作為優(yōu)選，其中的遠(yuǎn)志已經(jīng)過炮制。制備本發(fā)明的藥物的方法是常規(guī)方法，一般地，按重量份稱取地龍、淫羊藿、川芎、遠(yuǎn)志(制)，力口60%~95%乙醇水溶液浸泡才是耳又適當(dāng)時(shí)間和適當(dāng)次H，時(shí)間通常在1~10小時(shí)之間，次凄《為1~3次。然后回收乙醇，濃縮、干燥，粉碎成細(xì)粉。這些4喿作皆使用常規(guī)設(shè)備。將上述細(xì)粉與合適分量的銀杏葉提取物細(xì)粉混勻，加入適宜的H武形劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物可以制成片劑。在確定劑型的基礎(chǔ)上，根據(jù)處方藥物性質(zhì)與有效成分的藥理作用，結(jié)合實(shí)-瞼研究(包括才是取溶劑、提取次數(shù)、及水提醇沉工藝的考察)，確定了本制劑的提取工藝路線，即地龍、淫羊藿、川芎、遠(yuǎn)志(制)四味藥材，以60%~95%、優(yōu)選65%~80%的乙醇為溶劑回流提取二次；銀杏葉提取物在制劑成型時(shí)直接入藥。在醇提工藝條件研究中，以淫羊藿苷浸出量及浸膏得率為評(píng)^階指標(biāo)，采用正交試^r法對(duì)浸泡時(shí)間、加醇量、^是耳又時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)選，確定醇4是最優(yōu)工藝條件為力卩65-75%乙醇浸泡1.5小時(shí)，提取2次，加醇量分別為藥材的10倍、8倍，提取時(shí)間分別為2.0小時(shí)、1.5小時(shí)。濃縮干燥工藝研究中，經(jīng)對(duì)比試驗(yàn)，表明提取液濃縮至相對(duì)密度為1,30(6(TC熱測(cè))后于60。C真空干燥(—0.08MPa)為佳。藥用賦形劑是指對(duì)于制備藥物組合物有用的賦形劑，通常它是安全、無毒并合乎需要的，且包括可應(yīng)用于獸醫(yī)學(xué)和人類藥物學(xué)的賦形劑。這類賦形劑可以是固體、液體、半固體，或在氣溶膠組成的情況下是氣體。本發(fā)明的藥物可以以干的口服制劑形式經(jīng)口給予。本發(fā)明的藥物可以以片劑、丸劑、膠嚢劑、嚢片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝月交劑、糊劑等經(jīng)口給予?？诜M合物可以包括常用載體、賦形劑和稀釋劑。本發(fā)明藥物組合物的口服劑型可以用本領(lǐng)域已知^支術(shù)制備，并含有治療上有效量的藥物成分。對(duì)于本發(fā)明制劑的治療有效的口服劑量根據(jù)從業(yè)醫(yī)生的判斷通過標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)來確定。例如，除醫(yī)學(xué)參考書和藥物學(xué)文獻(xiàn)提供的信息外，可以用熟知的體外或者體內(nèi)化-驗(yàn)來幫助確定最佳劑量。本發(fā)明的藥物可以單獨(dú)一使用，或者在適當(dāng)情況下，與其他藥物結(jié)合使用。本發(fā)明的藥物可以含有一種或多種藥用貝武形劑。貝武形劑出于多種目的^皮加入到藥物成分中。該藥物成分可以方i"更地以單位劑量形式提供，并且由本領(lǐng)域已知的方法制備。這樣的方法包括將提取物成分與載體相組合的步驟，其中載體本身可以包括一種或多種輔助成分。一般地，該劑型的制備是通過均勻而密切地使提取物成分與液體載體、或者粉末固體載體或者二者的結(jié)合相混合，然后必要時(shí)成形該產(chǎn)物。優(yōu)選地，該藥物制劑是干的口服劑型。優(yōu)選地，該藥物制劑是固體劑型。優(yōu)選地，該藥物組合物是選自由片劑、丸劑、膠嚢劑、嚢片劑、粉劑和顆粒劑構(gòu)成的組的口服劑型。干的劑型可以包括藥學(xué)可接受的添加劑，如賦形劑、載體、稀釋劑、穩(wěn)定劑、增塑劑、粘結(jié)劑、助流劑、崩解劑、填充劑、潤(rùn)滑劑、塑化劑，著色劑、成膜劑、增味劑、防腐劑、給藥載體(dosingvehicle)以及前述中的任意結(jié)合。這些皆是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，在此不再贅述。賦形劑和用量的選擇由制劑設(shè)計(jì)師根據(jù)經(jīng)驗(yàn)并考慮標(biāo)準(zhǔn)工序和本領(lǐng)域參考資料^艮容易確定。本發(fā)明的固體藥物包括粉末、顆粒、聚集體和壓實(shí)組分。本發(fā)明的優(yōu)選給藥途徑是口服。該劑量可以以單位劑型方便地提供，并用藥學(xué)領(lǐng)域的任何熟知方法制備。劑型包括固體劑型，如片劑、丸劑、粉劑、膠嚢、顆粒劑、嚢片劑、小袋劑、藥片和錠劑。本發(fā)明特別優(yōu)選的劑型為片劑。糊劑溶液或凍干粉末的形式用于胃腸道外給藥。使用前可向粉末中加入合適的稀釋劑或其它藥用載體而進(jìn)行重配。液體配方通常是緩沖、等滲、水溶液。合適的稀釋劑的例子有標(biāo)準(zhǔn)等滲鹽水溶液、5%的葡萄糖水溶液。這類配方尤其適合胃腸道外給藥，但也可口月良。最好添加U武形劑，如聚乙烯p比p各烷酮、明月交、氧4匕纖維素、阿^立伯月交、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉、或檸檬酸鈉?？商鎿Q地，這些化合物可以是膠嚢包,皮的、片劑的、或在乳劑或糖漿劑中配制，用于口服。為了加強(qiáng)或穩(wěn)定組合物、或有利于組合物的制備，可以加入藥用固體或液體載體。液體載體包^^唐漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽水、醇類、或水。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸釣、二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂、或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂、或明膠。載體也可包括緩釋物質(zhì)，諸如甘油單石更脂酸或甘油二石更脂酸，單獨(dú)或與蠟一起。固體載體的量各不相同，但是，優(yōu)選地，每一劑量單位是在約20mg至約lg之間。藥物配制遵循傳統(tǒng)的藥物制備方法，就制備片劑而言，涉及研磨、混合、成粒、和壓縮(當(dāng)必要時(shí))；或就制備石更月交嚢而言，涉及研磨、混合、和填充。當(dāng)使用液體載體時(shí)，藥物制劑為糖漿、酏劑、乳劑、或水性或非水性混懸液形式。對(duì)于這種液體劑型可直接口服(p.o.)給藥或裝填入軟膠囊劑中。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述藥物被制成片劑。在制備該劑型時(shí)，可以將藥^f分與樣i晶纖維素^l安比例(3:2)混勻，加入適量的含2%聚維酮(PVP)的95%乙醇溶液作為粘合劑制濕粒，40-50。C干燥，過20目篩整粒，然后加入1%的硬脂酸鎂混勻，壓片，并包薄膜衣。另外，考察了藥物顆粒的吸濕性，結(jié)合生產(chǎn)經(jīng)-驗(yàn)，{人為本品成型工藝過程控制相對(duì)濕度在50%以下進(jìn)行較為適宜。制備實(shí)施例實(shí)施例1取地龍27份、淫羊藿27份、川穹15份、遠(yuǎn)志(制)15份(均為重量^f分，下同)，力口65%乙醇水溶液浸泡1.5小時(shí)，才是取2次，第一次加10倍量乙醇提取2小時(shí)，第二次加8倍量乙醇提取1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30~1.35(6(TC)，在0.08MPa和6(TC下真空干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取銀杏葉提取物細(xì)粉1.5重量份與上述細(xì)粉混勻，加入適量微晶纖維素和3%的交聯(lián)聚維酮(PVPP),混勻，用2。/o聚維酮K30(PVP)的95%乙醇溶液制軟材，才齊壓過16目篩網(wǎng)，405(TC干燥，整粒，加入3%的羧甲基淀粉鈉(CMS-Na)和0.3%的硬脂酸鎂混勻，壓制成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得。實(shí)施例2取地龍33份、淫羊藿33份、川芎22份、遠(yuǎn)志(制)22份，加85%乙醇水溶液浸泡1.5小時(shí)，提取2次，第一次加5倍量乙醇2小時(shí)，第二次加34咅量乙醇1.5小時(shí)，合并拔_耳又液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30-1.35(60°C),在0.08MPa和60。C下真空干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取銀杏葉提取物細(xì)粉5重量份與上述細(xì)粉混勻，加入適量樣i晶纖維素和3%的交聯(lián)聚維酮(PVPP),混勻，用2%聚維酮K3()(PVP)的95%乙醇溶液制軟材，^齊壓過16目篩網(wǎng)，40-5(TC干燥，整粒，加入3%的羧曱基淀4分鈉(CMS-Na)和0.3%的硬脂酸鎂混勻，壓制成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得。實(shí)施例3取地龍22份、淫羊藿22份、川穹11份、遠(yuǎn)志(制)11份，加5倍量90%乙醇水溶液浸泡3小時(shí)，才是耳又1次，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30~1.35(60°C)，在0.08MPa和60。C下真空干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取4艮杏葉提取物細(xì)粉10重量份與上述細(xì)粉混勻，加入適量孩i晶纖維素和3%的交耳關(guān)聚維酮(PVPP),混勻，用2。/o聚維酮K30(PVP)的95%乙醇溶液制軟材，擠壓過16目篩網(wǎng)，405(TC干燥，整粒，加入3%的羧甲基淀粉鈉(CMS-Na)和0.3%的硬脂酸鎂混勻，壓制成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得。實(shí)施例4取;也龍37^f分、淫羊藿37^分、川,24^f分、遠(yuǎn)志(制)244分，加70%乙醇水溶液浸泡1.5小時(shí)，提取10小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至相只于密度為1.30-1.35(60°C),在0.08MPa和60°C下真空干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取銀杏葉提取物細(xì)粉0.5重量份與上述細(xì)粉混勻，加入適量微晶纖維素和3%的交聯(lián)聚維酮(PVPP),200710111567.6說明書第14/30頁混勻，用20/。聚維酮K3()(PVP)的95%乙醇溶液制軟材，沖齊壓過16目篩網(wǎng)，405(TC干燥，整粒，加入3%的羧曱基淀粉鈉(CMS-Na)和0.3%的硬脂酸鎂混勻，壓制成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得。實(shí)施例5取地龍30份、淫羊藿30份、川考18份、遠(yuǎn)志(制)18份，加70%乙醇水溶液浸泡1.5小時(shí)，沖是取2次，第一次加5倍量乙醇2小時(shí)，第二次加3倍量乙醇1.5小時(shí)，合并損:耳又液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.30-1.35(60°C),在0.08MPa和60。C下真空干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取銀杏葉提取物細(xì)粉1.5重量份與上述細(xì)粉混勻，加入適量樣吏晶纖維素和3%的交聯(lián)聚維酮(PVPP)，混勻，用2%聚維酮K30(PVP)的95%乙醇溶液制軟材，擠壓過16目篩網(wǎng)，40-5(TC干燥，整粒，加入3%的羧甲基淀粉鈉(CMS-Na)和0.3%的硬脂酸鎂混勻，壓制成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得。該藥物處方來源于一4立臨床名老中醫(yī)經(jīng)-驗(yàn)方，并用于痰疳阻絡(luò)、腎精虧虛所致智能減退，神呆健忘，眩暈頭痛，腰膝酸軟，舌暗苔滑等。血管性癡呆有上述見癥者。用法用量以實(shí)施例5制得的制劑為例，口月良，l次3片，l曰3次，3個(gè)月為一療程。藥效學(xué)試-驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料與結(jié)果1.1藥物與i式劑(l)復(fù)方銀杏葉片其為本發(fā)明的一種產(chǎn)品，其制備方法如實(shí)施例5所披露。成人臨床日用生藥量16.24g,實(shí)驗(yàn)用干浸膏濃度為9.31g(生藥)/g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成不同濃度的混懸液。(2)都可喜(血管性癡呆模型試驗(yàn)陽性對(duì)照藥)為阿米三嗪和蘿巴新組成的復(fù)方制劑。用于亞急性或慢性腦血管機(jī)能不全障礙癥、腦缺血后遺癥。血管性視網(wǎng)膜功能障礙以及缺血性耳蝸前庭功能失調(diào)等。40mg(有效成分)/片，臨床用量為1片/次，2次/日。國(guó)藥準(zhǔn)字J20030019，法國(guó)施維雅藥廠生產(chǎn)，糸匕號(hào)5A0153。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成混懸液。(3)復(fù)方丹參片(活血化瘀試驗(yàn)陽性對(duì)照藥)成分為丹參、三七、冰片，具有活血化瘀，理氣止痛的功效。用于氣滯血痂所致的胸瘠，癥見月匈悶、心前區(qū)刺痛；冠心病心參交痛。0.3g(成藥)/片，臨床用量為3片/次，3次/日。國(guó)藥準(zhǔn)字Z44023372，廣州白云山和計(jì)黃埔中藥有限乂>司生產(chǎn)，批號(hào)J5A006。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成混懸液。(4)桂附地黃丸(陽虛試驗(yàn)陽性對(duì)照藥)成分為熟地黃、附子(制)、肉桂、山茱萸(制)、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓。具有溫補(bǔ)腎陽的功效，用于腰膝酸軟，肢冷尿頻，為虛證類非處方藥。國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020144，每8丸相當(dāng)于3g生藥。臨床用量為一次8丸，一日3次。長(zhǎng)沙九芝堂股<分有限7>司生產(chǎn)，批號(hào)20060213。實(shí)-驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成混懸液。(5)鹽酸腎上&泉素注射液，lml/lmg/支，批號(hào)0510061,天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)。(6)液體石蠟，4比號(hào)20041014,湖南匯虹i式劑有限乂〉司生產(chǎn)，(7)注射用硝普鈉，批號(hào)20051016,湖南中南科4侖藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。(8)vf危酸慶大霉素注射液，批號(hào)4050302-2,天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)。(9)0.9。/o!U匕鈉注射液，浙匕號(hào)D050925,湖南一牛4侖制藥有限7〉司生產(chǎn)。(10)氫化可的+〉注射液，2ml/10mg/支，批號(hào)06010511，天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)。(11)甲巰。米峻片，5mg/片，4比號(hào)050807，北京燕京制藥廠生產(chǎn)。實(shí)-驗(yàn)時(shí)用蒸々留水配成混懸'液。(12)考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒，批號(hào)20060330，(13)MDA測(cè)試試劑盒，批號(hào)20060324,(14)SOD觀'H式i式劑盒，杏匕號(hào)20060331,(15)乙酰膽堿酯酶測(cè)試試劑盒，批號(hào)20060328,以上(9)-(13)均由南京建成生物工程研究所提供。(16)兔抗-Bax、兔抗-SSTR2抗體、SABC免疫組化試劑盒、DBA顯色試劑盒，生產(chǎn)日期2006年4月，武漢博士德生物工程公司提供。(17)cAMP、cGMP測(cè)定試劑盒，4比號(hào)20060524，上海中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室才是供。1.2動(dòng)物昆明小鼠、SD大鼠，清潔《及，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)馬全動(dòng)物科技服務(wù)部提供，合格證號(hào)scxk(湘)2006-0001。1.3儀器(1)FA1004上海電子分析天平:上海精科儀器有限公司(2)ES-C-600電子天平湘4義天平4義器廠(3)DT-200小鼠跳臺(tái)儀:成都泰盟科技有限公司(4)生物顯微鏡(帶顯微測(cè)微尺，O.Olmm):江南光學(xué)儀器廠(5)HHW-21CU-600電熱恒溫水槽上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司(6)TD4-II臺(tái)式自動(dòng)平衡離心機(jī)湖南凱達(dá)實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司(7)UV-1600型分光光度計(jì)北京瑞利公司(8)LBY-N6型旋轉(zhuǎn)式血液粘度計(jì):北京普利生^〉司(9)DMLB2型雙目顯微鏡德國(guó)LEICA公司(10)325型石蠟切片機(jī)英國(guó)Shandon公司(11)XW-80A旋渦混合器上海精科實(shí)業(yè)有限7>司(12)KDC-2046j氐溫大容量離心才幾中國(guó)^f學(xué)^支術(shù)大學(xué)利^支實(shí)業(yè)總公司中佳光電儀器分公司(13)GC-1200y》文射免疫計(jì)凄t器中國(guó)科學(xué)才支術(shù)大學(xué)開發(fā)實(shí)業(yè)總公司中佳光電儀器分公司1.4劑量設(shè)置(見表1和表2)表1.小鼠用藥劑量組別(g/kg)相當(dāng)于臨床等效劑量倍數(shù)給藥濃度給藥體積(ml/kg)復(fù)方銀杏低劑量組2.111210.105520復(fù)方銀杏中劑量組6.333630,316520復(fù)方銀杏高劑量組19細(xì)890,949520都可喜組0,02080細(xì)0420復(fù)方丹參片組1,05330,0526520桂附地黃丸組3.5130.175520表2.大鼠用藥劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注*藥物劑量復(fù)方銀杏葉片各組、桂附地黃丸劑量組為生藥量，都可喜為有效成分含量，復(fù)方丹參片組為成藥量2.對(duì)小鼠血管性癡呆模型的影響取2530g昆明小鼠IOO只，雌雄各半，按性別體重分層，隨機(jī)分為2組假手術(shù)組10只，其余為手術(shù)組90只。參考文獻(xiàn)[2],手術(shù)組小鼠以1%水合氯醛300mg/kg腹腔注射，麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，75%酒精消毒頸前皮膚，行頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈穿線備用，用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈10min，同時(shí)在尾尖斷尾,方丈血0.3ml。^^開動(dòng)樂:K夾再通10min，再夾閉10min,撤線，縫合切口。手術(shù)中燈照保溫。假手術(shù)組只分離頸總動(dòng)脈30min后縫合，不阻斷血流，尾部不力欠血。術(shù)后每日力幾注慶大霉素5mg/kg，連續(xù)5天。第3天將存活的手術(shù)組小鼠進(jìn)行跳臺(tái)測(cè)定，#>選手術(shù)組中反應(yīng)時(shí)間相近的50只小鼠均勻分成5組(復(fù)方銀杏低、中、高劑量組、都可喜組、才莫型組)，各組灌服相應(yīng)藥物。才莫型組和，I手術(shù)組給等容量的蒸餾水，每天給藥一次，給藥14天后測(cè)定以下指標(biāo)①跳臺(tái)法測(cè)定學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試裝置為被動(dòng)回避反應(yīng)箱，先讓小鼠在反應(yīng)箱內(nèi)銅柵上(未通電)適應(yīng)環(huán)境3min,然后給銅柵通電，記錄小鼠首次受電擊后跳上安全臺(tái)所需時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間)，5min內(nèi)跳下圓臺(tái)次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))，作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24小時(shí)后,先將銅柵通電，然后將小鼠放置在箱內(nèi)安全臺(tái)之上，記錄小鼠首次從安全臺(tái)跳至銅斥冊(cè)所需時(shí)間(潛伏時(shí)間)，5min內(nèi)跳下圓臺(tái)次數(shù)(4晉i吳次數(shù))，作為記憶成績(jī)。(測(cè)試時(shí)大鼠停留在平臺(tái)上超過5min，其潛伏期以300s計(jì))。結(jié)果見表3、表4。表3復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)能力的影響(i±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較*P>0.05,**P<0.05,承**P<0.01。表4復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型小鼠記憶能力的影響(I±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較*P>0.05,**P<0.05，***P<0,01。②血清丙二醛(MDA)測(cè)定末次給藥1小時(shí)后摘除眼3求取血，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行測(cè)定。見表5。③腦組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活力、乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)定。耳又左半腦，稱重后加94咅重量生理鹽水制備勻漿，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行測(cè)定。見表5。表5復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型小鼠生化指標(biāo)的影響(Z±S,n=10)組別劑量(g/kg)(nmol/ml)S0D活力(U/mgprot)乙酰膽堿酯酶(U/邁gprot)假手術(shù)組蒸餾水2.96i:i.65'科87.80±10.82".2.94±0.42"'模型組蒸餾水6.44±1.恥70.67±9.183.79±0.75都可審組0.02083.76土2.92"82.55±14.33"3.11±0.66"復(fù)方銀杏高劑量組19.00084.51±1.69"83.60±16.17"3.02±0.82一復(fù)方銀杏中劑量組6.33364.86士1.39"85.33±19.65"2.90±0.55"*復(fù)方銀杏低劑量組2.11124.79i:L33"83.07±13.60'*3.30±0.58*注與模型組比較:*P>0.05,P<0.05,④大腦海馬區(qū)病理學(xué)4全查。耳又右半腦，置于10%甲醛-容液中固定24h,修取海馬組織,梯度酒精脫水，透明，浸蠟，石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚6jim，蘇木素-伊紅(HE)染色，400倍光鏡下觀察。見附圖1-6。其中圖1為小鼠假手術(shù)組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞排列整齊致密，胞漿清晰明朗，核仁明顯，細(xì)胞質(zhì)豐富。未見核固縮。圖2為小鼠才莫型組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)月包減少且變形皺縮，大小不一，4非列紊亂，細(xì)力包核形4犬為三角形或多角形，結(jié)構(gòu)不清，呈核固縮，胞質(zhì)濃染，細(xì)胞周圍間隙增寬。圖3為小鼠都可喜組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞較清晰，排列尚整齊，有少量核固縮，有的形成石爭(zhēng)片。圖4為小鼠復(fù)方銀杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞排列整齊，胞漿清晰，核仁明顯，偶見核固縮。圖5為小鼠復(fù)方4艮杏葉片中劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞減少且有一些皺縮，核結(jié)構(gòu)不清，可見部分核固縮，濃染。圖6為小鼠復(fù)方銀杏葉片低劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞減少，排列較紊亂，且部分皺縮，濃染?？梢姾斯炭s。由上述三個(gè)表中的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知用反復(fù)夾閉頸總動(dòng)月永合并》丈血降壓制造血管性癡呆模型小鼠造模成功，其模型組的各項(xiàng)所測(cè)指標(biāo)與假手術(shù)組比較均有顯著性差異(PO.01)。由表3、表4可見，復(fù)方銀杏葉片各劑量組均能縮短反應(yīng)時(shí)間、延長(zhǎng)潛伏時(shí)間并減少錯(cuò)誤次數(shù)，與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05),這說明復(fù)方銀杏葉片能提高血管性癡呆小鼠的學(xué)習(xí)能力，增強(qiáng)小鼠的記憶能力，表明復(fù)方銀杏葉片對(duì)由腦血管病造成的癡呆有一定的治療作用。表5中，復(fù)方銀杏葉片各劑量組血清MDA與模型組相比均降低，腦組織勻漿SOD活力均增強(qiáng)，這反映復(fù)方4艮杏葉片有一定的抗氧化作用，能增強(qiáng)腦組織SOD活力來清除過多的氧自由基，從而使損傷程度降低。同時(shí)復(fù)方銀杏葉片各劑量組可抑制乙酰膽堿酯酶的升高，其中中劑量組與模型組比較有顯著差異(PO.01)，這說明復(fù)方銀杏葉片能改善膽堿系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)腦組織乙酰膽堿的生理代謝，治療癡呆。由附圖1-附圖6可見，復(fù)方銀杏葉片對(duì)腦海馬錐體細(xì)胞的損傷有一定程度的修復(fù)作用。3.對(duì)大鼠血管性癡呆才莫型的影響取250~300g的雄性和200~250g的雌性SD大鼠各50只，按性別體重分層，隨機(jī)分為2組假手術(shù)組10只，其余為手術(shù)組90只。參考文獻(xiàn)王蕊，楊秦飛，唐一鵬，等大鼠擬血管性癡呆it型的建立及中藥9602防治作用初:探[J].中國(guó)病理生理雜志，2000,16(10):914-916，手術(shù)組大鼠以10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射，麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，75%酒精消毒頸前皮膚，行頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并穿線，硝普鈉才安2.5mg/kg腹腔注射，立即用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)"永10min,+>開動(dòng)脈夾再通10min,再夾閉10min，撤線，縫合切口，術(shù)中燈照保溫。假手術(shù)組只分離頸總動(dòng)脈，30min后縫合，不結(jié)扎。術(shù)后每日肌注慶大霉素5mg/kg,連續(xù)5天。術(shù)后第3天》見察存活的手術(shù)組大鼠進(jìn)4于敞箱實(shí)驗(yàn)。4兆選敞箱得分相近的大鼠隨才幾分為5組(復(fù)方4艮杏低、中、高劑量組、都可喜組、模型組)，各組灌服相應(yīng)藥物。模型組和假手術(shù)組給等容量的蒸餾水，每天給藥一次，給藥14天后測(cè)定以下指標(biāo)①血清丙二醛(MDA)測(cè)定。末次給藥1小時(shí)后眼眶靜月永取血，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行測(cè)定。見表6。②腦組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活力，乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)定。取左半腦，稱重后加9倍重量生理鹽水制備勻漿，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行測(cè)定。見表6。表6復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型大鼠生化指標(biāo)的影響(I±S,n=10)組別劑量SOD活力乙酰膽堿酯酶(g/kg)(咖ol/ml)(U/mgprot)(U/邁gprot)假手術(shù)組蒸餾水6.21±2.16'"96.83±9.54***3.02±0.20彬模型組蒸餾水9.35±0.4384.88±8.533.70±0,44都可喜組0.01448.08±1.12*"106.94±21.l"'3.25±0.43"復(fù)方銀杏高劑量組13.15448.24±1.15*'99.34±15.03"3.24±0.26**復(fù)方銀杏中劑量組4.38488.61±0.99*'95.09士11.84"3.32±0,34**復(fù)方銀杏低劑量組1.46167.89±1.10*'"*103.6±12.00"'3.05±0.24裕注與纟莫型組比較*p>0.05，p<gpo.Ol。③大腦海馬CA1區(qū)病理學(xué)一企查及Bax和海馬SS陽性細(xì)胞數(shù)測(cè)定。取右半腦,置于4。/。多聚曱醛i^液中固定24h,》務(wù)耳又海馬組織，常規(guī)脫水，浸蠟，石蠟包埋,連續(xù)冠狀切片，片厚6^111，分別作蘇木素-爿f尹紅(HE)染色和SABC法免疫組化染色?！菇诱赵噭┖衖兌明書步驟進(jìn)行，顯示Bax和海馬SS陽性細(xì)胞，在400倍光鏡下隨機(jī)選取各張切片5個(gè)視野，用MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分析海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)及光密度值。見表7和表8及附圖7-24。表7復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型大鼠海馬SS表達(dá)的影響(Z±S,n=10)組別劑量(g/kg)陽性細(xì)胞數(shù)(個(gè)/瞧2)光密度儻假手術(shù)組蒸餾水18.31±7.04林*5.51±1.71綱模型組蒸餾水7.63土3.413.46±1.35都可喜組0.014411.66±2.86林4.85±1.53**復(fù)方銀杏髙劑量組13.154414.88±7.48**6.10±3.54林復(fù)方銀杏中劑量組4.384812.92土7.04舉*4.92±1.70**復(fù)方銀杏低劑量組1.461611.57±4.00**4.85±1.56承承注與模型組t匕較*P>0.05,**P<{K05***P<0.01。表8復(fù)方銀杏葉片對(duì)血管性癡呆模型大鼠Bax表達(dá)的影響(X±S,IV=10)組別劑量(g/kg)陽性細(xì)胞數(shù)(個(gè)/W)光密度"H[假手術(shù)組蒸餾水7.02±4.35林*2.42±1.74*林模型組蒸餾水16.01±8.284.699±2.35都可喜組0.01449.99±2.99林3.04±0.77林復(fù)方銀杏高劑量組13.15447.79±5.52林2.67土1.81林復(fù)方銀杏中劑量組11.37±5.95*3.82±1.41*復(fù)方銀杏低劑量組1.46167.47±2.21林*2.77±1,04**注與模型組比較*P>0.05,P<0.05,*承*在圖7—24中圖7為大鼠々支手術(shù)組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞完整清晰，細(xì)胞排列整齊致密，胞漿明朗，核仁明顯。未見核固縮。圖8為大鼠才莫型組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞明顯減少且變形皺縮，大小不規(guī)則，排列紊亂，核結(jié)構(gòu)消失，核固縮明顯，月包質(zhì)濃染，細(xì)il包周圍間隙增寬。圖9為大鼠都可喜組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx40(M咅)，錐體細(xì)胞較清晰，形狀不太規(guī)則，排列整齊致密，可見少量核固縮。圖10為大鼠復(fù)方4艮杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞清晰，排列整齊致密，核仁4交明顯，核固縮少。圖11為大鼠復(fù)方4艮杏葉片中劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞排列較疏松，不整齊，大小不一，核固縮少。圖12為大鼠復(fù)方銀杏葉片低劑量組海馬CA1區(qū)病理切片(HEx400倍)，錐體細(xì)胞減少，排列不整齊，形狀不規(guī)則，部分細(xì)胞核固縮，有的形成石爭(zhēng)片。圖13為大鼠-假手術(shù)組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)，錐體細(xì)胞排列整齊緊密，核仁清晰，可見大量細(xì)胞膜黃染，眾多棕黃色顆粒密集，陽性表達(dá)細(xì)胞多。圖14為大鼠才莫型組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x4004咅)，錐體細(xì)胞減少，稀疏散在，有部分空泡，未見明顯棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞表達(dá)弱。圖15為大鼠都可喜組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)，錐體細(xì)胞排列較稀疏，部分胞漿胞膜黃染，陽性表達(dá)細(xì)胞偏少。圖16為大鼠復(fù)方4艮杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)，錐體細(xì)胞排列整齊，胞漿胞膜黃染，可見大量密集棕黃色顆粒，分布廣泛，著色較深，陽性表達(dá)較強(qiáng)。圖17為大鼠海馬中劑量組CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)，錐體細(xì)胞密集但形狀不規(guī)則，可見大量細(xì)胞胞漿胞膜胞核呈黃褐色，著色深，陽性表達(dá)細(xì)胞較多。圖18為大鼠低劑量組海馬CA1區(qū)海馬SS染色(免疫組化x400倍)，錐體細(xì)胞較少，排列較松散，可見少量棕黃色顆粒，著色較淺，陽性表達(dá)細(xì)胞4交少。圖19為大鼠邗支手術(shù)組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)，錐體細(xì)胞完整清晰，排列整齊，核仁明顯，未見明顯的黃褐色胞漿，未見陽性表達(dá)細(xì)胞。圖20為大鼠才莫型組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)，錐體細(xì)胞數(shù)目少，胞體較小，胞漿內(nèi)陽性物質(zhì)密集，染成深褐色，陽性表達(dá)強(qiáng)。圖21為大鼠都可喜組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400)，錐體細(xì)胞較清晰，核仁明顯，部分細(xì)胞膜深染，陽性表達(dá)細(xì)胞略有增多。圖22為大鼠復(fù)方銀杏葉片高劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400),錐體細(xì)胞清晰，核仁明顯，排列整齊，少數(shù)胞膜胞漿呈淺淡黃褐色，陽性表達(dá)細(xì)胞較少。圖23為大鼠復(fù)方銀杏葉片中劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400),錐體細(xì)胞清晰，可見多l(xiāng)t黃褐色顆粒，部分胞膜胞漿染色較深，陽性表達(dá)較強(qiáng)。圖24為大鼠復(fù)方銀杏葉片低劑量組海馬CA1區(qū)BAX染色(免疫組化x400),錐體細(xì)胞清晰，核仁明顯，排列較整齊，可見少數(shù)棕黃色顆粒，胞膜著色淺，陽性表達(dá)細(xì)胞較少。由上述三個(gè)表中的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知用反復(fù)夾閉頸總動(dòng)脈合并降壓制造血管性癡呆模型大鼠造模成功，其模型組的各項(xiàng)所測(cè)指標(biāo)與^^手術(shù)組比較均有顯著性差異(P0.05),表2中復(fù)方4艮杏葉片能顯著降低MDA，提高SOD活力，并可抑制乙酰膽堿酯酶的升高，提示有抗氧化作用，并能改善膽堿系統(tǒng)功能。復(fù)方銀杏葉片各劑量組與模型組比較均有顯著性差異，且低劑量組有非常顯著的差異(PO.01)。由表3可知，模型組的海馬SS表達(dá)明顯低于假手術(shù)組，陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)和光密度值都減少(PO.Ol)，說明腦缺血可抑制腦組織ss的分泌。都可喜和復(fù)方銀杏葉片各劑量組均能增強(qiáng)海馬ss的表達(dá)，增加海馬ss陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)并增強(qiáng)光密度，與模型組比較均有顯著性差異(P0.05)，提示復(fù)方銀杏葉片可促進(jìn)海馬SS的分泌，有效調(diào)節(jié)腦內(nèi)多種激素和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，促進(jìn)智能恢復(fù)。由表4可知，才莫型組腦組織Bax表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(PO.01),說明腦缺血可使促凋亡基因蛋白過多表達(dá)，從而加速腦細(xì)胞凋亡，都可喜和復(fù)方4艮杏葉片對(duì)腦組織Bax表達(dá)有一定的抑制作用，可4吏陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)減少，并使光密度減弱，提示有對(duì)抗腦細(xì)胞凋亡的作用，但復(fù)方4艮杏葉片中劑量組與模型組比較無顯著性差異(參見附圖13-23，陽性細(xì)胞呈棕黃色，顯色部位可見有胞膜、胞漿，胞核)。由附圖7-附圖12的HE染色中可見，復(fù)方銀杏葉片對(duì)造模后腦組織的病理變化有改善作用，能促進(jìn)缺血損傷的腦神經(jīng)元的修復(fù)。4.活血化癡試—瞼，對(duì)血癡型大鼠血液流變學(xué)的影響耳又180~220g，SD大鼠60只，雌i,各半，隨才幾分成6組，每組IO只，分別為空白組、復(fù)方丹參片組、復(fù)方銀杏低、中、高劑量組。各組灌服相應(yīng)藥物每天1次，空白組給等容量蒸餾水，連續(xù)7天，末次給藥后空白組大鼠皮下注射生理鹽水，其余各組動(dòng)物均皮下注射lmg/ml腎上腺素注射液(0.08ml/100g體重)兩次，間隔4小時(shí)，在兩次注射腎上腺素注射液之間將大鼠浸于冰水中5min，造成血瘀模型[5]，停食至次晨，剪開頸動(dòng)脈采血測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)。每個(gè)標(biāo)本取出后兩小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。數(shù)據(jù)經(jīng)成組t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)進(jìn)行比較，結(jié)果見表9。表9復(fù)方銀杏葉片對(duì)血瘀型大鼠血液流變學(xué)的影響(Z±S,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>注與模型組比較*P>0.05,**P<:0.05，*神P<0.01。由表9可見，與空白組比較，模型組的全血粘度、血漿粘度及紅細(xì)胞壓積具有顯著性差異，表明血瘀模型造模成功；與模型組比較，復(fù)方銀杏葉片各劑量組均有顯著性差異，表明復(fù)方銀杏葉片能改善急性血瘀模型大鼠血液的濃、粘、凝狀態(tài)，具有一定的活血化痹的作用。陽性對(duì)照藥復(fù)方丹參片也有4交好的活血化癡的作用。5.益腎實(shí)驗(yàn)，復(fù)方銀杏葉片對(duì)可的松腎陽虛大鼠血漿環(huán)核苷酸的影響取200~220g,SD大鼠60只，雌雄各半，按性別體重分層，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白組，模型組，桂附地黃丸組，復(fù)方銀杏葉片低、中、高劑量組?？瞻捉M大鼠每日肌注生理鹽水，其余各組每日肌注氫化可的松(2mg/100g體重)，使其出現(xiàn)明顯陽虛癥狀(司卉良，陳友香，候安繼，等補(bǔ)腎壯陽方對(duì)更年奇腎虛證大鼠的影響[J].2005,24(8):675)，10天后停止注射氫化可的*>,各組灌月良相應(yīng)中藥連續(xù)14天。于末次給藥后稱重，記錄各組大鼠體重，30min后斷頭采血。按cAMP和cGMP》文免試劑盒說明處理，并測(cè)定血漿cAMP、cGMP含量。凄t據(jù)經(jīng)成組t驗(yàn)統(tǒng)計(jì)進(jìn)4亍比較，結(jié)果見表IO、11。表IO復(fù)方銀杏葉片對(duì)可的松腎陽虛大鼠血漿環(huán)核苷酸的影響(X±S,n=10)組別劑量(g/kg)cAMPcGMPcAMR'cGMP空白組蒸餾水115.8±31.02***27.5±14.89**5.08±2.18**模型組蒸餾水73.0±33.2987.4±73.792.23±2.54桂附地黃組2.43114.9±38.82*w31.48±23.42"4.79±2.45**復(fù)方銀杏高劑量組13.15113.5士45.6廣*39.5±29.53*4.00±2.70*復(fù)方銀杏中劑量組4,38111.8±31.29"30.6±20.92"5.01±2.94**復(fù)方銀杏低劑量組1.46118.7土32.74***31.O土ll.50**4.44±2.14**注與模型組比較*P>0.05,**PO.05,***P<0.01。表ll復(fù)方銀杏葉片對(duì)可的松腎陽虛大鼠體重的影響(Z±S,n=10)組別實(shí)驗(yàn)前體重實(shí)驗(yàn)后體重'空白組蒸餾水206.14±9.67269.62±37.51***模型組蒸餾水205.84±10.97212.86±15.96桂附地黃組2.43205.60±9.73243.28±36.64**復(fù)方銀杏高劑量組13."206.15土10.41262.32±32.13***復(fù)方銀杏中劑量組4.38204.37±12.77239.86±34.51**復(fù)方銀杏低劑量組1.46205.40±9.24222.16士23.58*注與模型組比較*P>0.05,**P<0.05,***P<0.01。由表8可見，與空白組比較，模型組大鼠血漿cAMP明顯降低，而cGMP明顯升高，且cAMP/cGMP比值顯著降低，提示陽虛模型大鼠復(fù)制成功。復(fù)方銀杏葉片三個(gè)劑量組均能很好的調(diào)節(jié)血漿cAMP和cGMP水平，升高cAMP，降4氐cGMP。其中4氐劑量和高劑量與模型組比較差異顯著(PO.05),高劑量也有明顯的趨勢(shì)，表明復(fù)方銀杏葉片有補(bǔ)腎陽的作用。由表9可見，模型組大鼠實(shí)驗(yàn)后體重明顯低于空白組，且有顯著性差異(PO.01)，說明模型大鼠生長(zhǎng)受到嚴(yán)重抑制，反映了腎陽虛模型造模成功。復(fù)方銀杏葉片三個(gè)劑量組的實(shí)驗(yàn)后體重均比模型組高，且中、高劑量組能顯著增加大鼠體重(P0.05),這提示復(fù)方銀杏葉片能促進(jìn)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育，有一定補(bǔ)腎益精的作用。通過對(duì)擬血管性癡呆大鼠及小鼠模型實(shí)驗(yàn)及活血化痳、補(bǔ)腎陽等試驗(yàn)的研究，結(jié)果表明復(fù)方銀杏葉片能明顯提高小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力，改善各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)能顯著改善急性血瘀大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積的異常；能明顯改善小鼠的耳廓纟敖循環(huán)；對(duì)可的松陽虛大鼠和甲減小鼠的血漿環(huán)核苷酸有很好的調(diào)節(jié)作用，能明顯l是高血漿cAMP水平，降低cGMP水平，升高cAMP/cGMP比值。本領(lǐng)域纟支術(shù)人員將會(huì)iU只到，或者才艮據(jù)常^見經(jīng)-驗(yàn)就可以確定4艮多本文所描述的本發(fā)明具體實(shí)施方式的等效替換。本申請(qǐng)引用的出版物的披露內(nèi)容也以引用形式全部并入本文中，以作為參考。然而應(yīng)該明白，本發(fā)明的范圍不限于上述具體實(shí)施方式。在此特別指出，盡管在具體實(shí)施例中只列出了本發(fā)明藥物的一種制劑(片劑)，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，本發(fā)明并不局限于此，本文中提到的其他劑型完全可以實(shí)施。因此本發(fā)明不4要照這些具體描述也可以實(shí)施，并且仍然在所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種用于治療血管性癡呆癥的藥物，其為由下述重量配比的原料制成的藥劑銀杏葉提取物0.1～10份地龍22～37份淫羊藿22～37份川芎11～25份遠(yuǎn)志11～25份。2.才艮據(jù)^l利要求1所述的藥物，其為由下述重量配比的原^l"制成的藥劑銀杏葉提取物地龍淫羊藿川t遠(yuǎn)志1~5份27~33份27~33份14~23份14~23份'3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其為由下述重量配比的原料制成的藥劑銀杏葉提取物1.5份地龍30份淫羊藿3(H分川,18份遠(yuǎn)志18份。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物,劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，顆粒劑中的任意一種。其為片劑、丸劑、膠嚢劑、嚢片凝膠劑、糊劑中的任意一種。其為片劑、丸劑、膠嚢劑、粉劑、權(quán)利要求1所述藥物的制備方法，包括(a)4安比例耳又;也龍、淫羊藿、川芎、遠(yuǎn)志四p未藥材，用60%~95%的乙醇水溶液浸泡提取1~10小時(shí)，次數(shù)為1~3次；(b)回收乙醇，濃縮、干燥，粉碎成細(xì)粉；(c)按比例取銀杏葉提取物，與所述細(xì)粉混合均勻；(d)加適量的賦形劑和/或其他添加劑，制成適宜的劑型。才艮據(jù)斥又利要求6所述藥物的方法，其中4是耳又時(shí)間為1~3小時(shí)，^是取次凄t為2次。全文摘要本發(fā)明提供一種藥物，用于治療以痰瘀阻絡(luò)、腎虛精虧為主證的血管性癡呆癥，以及制備該藥物的方法。本發(fā)明提供的藥物由以下重量配比的原料和銀杏葉提取物制成銀杏葉提取物0.1～10份；地龍22～37份；淫羊藿22～37份；川芎11～25份；遠(yuǎn)志11～25份。文檔編號(hào)A61P25/00GK101244127SQ20071011156公開日2008年8月20日申請(qǐng)日期2007年6月19日優(yōu)先權(quán)日2007年6月19日發(fā)明者張慶華申請(qǐng)人:張慶華