專利名稱：：復(fù)合磷酸酯酶及其提取方法,和該復(fù)合磷酸酯酶膠囊的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及復(fù)合磷酸酯酶，具體地說(shuō)是涉及一種從大麥芽根須中提取的復(fù)合磷酸酯酶，以及這種提取的方法，和使用該純化的復(fù)合磷酸酯酶制得的膠囊。
背景技術(shù)：
：復(fù)合磷酸酯酶是從制麥的副產(chǎn)物——大麥根須中提取制得的多種酶的混合物，主要由磷酸單酯酶、磷酸二酯酶、核苷酸酶、淀粉酶等組成。這些生物活性物質(zhì)能催化多種磷酸酯水解，調(diào)節(jié)人體新陳代謝，服用后可改善機(jī)體代謝，增進(jìn)食欲，增強(qiáng)體質(zhì)，使某些疾病得以改善或痊愈。因此，在臨床上可用于遷延性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、冠心病、膠原性硬皮病、小兒頑固性牛皮癬、再生障礙性貧血、白血球減少癥及矽肺的輔助治療。傳統(tǒng)的方法是將大麥根粉碎，水提取復(fù)合磷酸酯酶，將水提液離心棄去雜質(zhì)沉淀，上清液加入3—4倍乙醇使復(fù)合磷酸酯酶沉淀，離心得到復(fù)合磷酸酯酶。此方法用到大量乙醇，極大地增加了生產(chǎn)成本。而且，得到的復(fù)合磷酸酯酶的活力不是很高。由于復(fù)合磷酸酯酶易于在胃中被胃酸破壞，所以為了減少胃內(nèi)首過(guò)效應(yīng)，現(xiàn)有的復(fù)合磷酸酯酶的制劑僅有腸溶片劑，劑型單一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有較高活力的復(fù)合磷酸酯酶。本發(fā)明的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的提取方法會(huì)用到大量的乙醇，極大地增加了生產(chǎn)成本的缺點(diǎn)，從而提供一種避免了使用大量乙醇，從麥芽根水提液中可低成本地提取復(fù)合磷酸酯酶的方法，本發(fā)明的方法成本低廉、適于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明的再一目的在于提供一種上述復(fù)合磷酸酯酶的新劑型制劑。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種從大麥芽根中提取純化復(fù)合磷酸酯酶的方法，包括如下歩驟1)硫酸銨分級(jí)沉淀于25"C，邊攪拌，邊向大麥芽根水提取液中，加入硫酸銨，使得溶液中的硫酸銨濃度為40—80°/。飽和度(如表l所示)，即按照每1升溶液加固體硫酸銨243—561g的量加入硫酸銨；繼續(xù)攪拌，充分沉淀后，離心棄去上清；所述的大麥芽根水提取液是將麥芽根粉碎為80目，按lkg:8L的質(zhì)量體積比加入水，在不高于2(TC的溫度下提取20小時(shí)，然后以轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，濾出水相，即為大麥芽根水提取液；2)丙酮-水溶液洗鹽在-2(TC下，用丙酮-水溶液清洗歩驟1)得到的沉淀；離心棄去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的體積比為2:3—7:3，其加入量與歩驟l)中得到的沉淀的質(zhì)量體積比為1:10—15(g/ml);3)丙酮溶液干燥在-2(TC下，用純丙酮清洗步驟2)得到的沉淀；離心棄去上清，在室溫晾干，粉碎，得到所需的復(fù)合磷酸酯酶。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，所述步驟l)中，加入硫酸銨后，繼續(xù)攪拌的時(shí)間為30—50分鐘。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，所述歩驟l)中，離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為25分鐘。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，所述步驟2)中，離心時(shí)，轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為15分鐘，溫度為4。C。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，所述歩驟2)中的丙酮-水溶液的清洗和離心過(guò)程為重復(fù)3—4次。表l、在25。C下，硫酸銨溶液由初濃度調(diào)到終濃度時(shí)，_每升溶液所加固體硫酸銨的克數(shù)_硫酸銨終濃度(％飽和度)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明采用硫酸銨分級(jí)沉淀、丙酮-水溶液洗鹽、丙酮溶液干燥相結(jié)合的方法，從大麥芽根水提取液中提取純化復(fù)合磷酸酯酶，并將所有丙酮-水、純丙酮洗滌復(fù)合磷酸酯酶沉淀的操作控制在-2(TC下低溫操作，以避免復(fù)合磷酸酯酶活性降低。最終獲得了符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的要求的復(fù)合磷酸酯酶，該復(fù)合磷酸酯酶的活力單位可達(dá)到39000u/mg。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明解決了原老技術(shù)本身技術(shù)中所存在的弊病，避免了使用大量的有機(jī)溶劑，節(jié)約了大量成本，操作簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)；而且，可以得到高純度高生物活性的復(fù)合磷酸酯酶。本發(fā)明還提供了一種復(fù)合磷酸酯酶膠囊，其中含有作為有效成分的上述復(fù)合磷酸酯酶，和藥用輔料。所述的藥用輔料包括固體制劑中常用的填充劑和潤(rùn)滑劑；所述的潤(rùn)滑劑，可以是硬脂酸鎂、滑石粉和微粉硅膠中的一種或多種；所述的填充劑可以是淀粉、乳糖、糖粉、可壓性淀粉中的一種或多種；其中，潤(rùn)滑劑占總藥量的重量比為0-5%;填充劑占總藥量的重量比為40-85%;余量為上述復(fù)合磷酸酯酶。本發(fā)明提供的復(fù)合磷酸酯酶膠囊，是先將上述提取得到的復(fù)合磷酸酯酶提取物粉碎，過(guò)100目篩，然后將此粉末和所需比例的填充劑和潤(rùn)滑劑混勻，加入潤(rùn)濕劑和粘合劑制軟材，制顆粒，整粒，干燥，裝膠囊。所述的濕潤(rùn)劑和粘合劑為選自蒸餾水、淀粉漿、3%-5%聚乙烯吡咯烷酮水或醇溶液。所用膠囊為腸溶膠囊，為4號(hào)或5號(hào)膠囊。與現(xiàn)有的腸溶片劑相比，該復(fù)合磷酸酯酶膠囊的優(yōu)點(diǎn)在于l.服用量小，每粒膠囊裝量0.2至0.4g，每次服用l-2粒，每日3次。3.制劑輔料少，僅加入適量的潤(rùn)滑劑和填充劑。4.制劑成本低，節(jié)約資源和能源。5.膠囊劑方便儲(chǔ)存，運(yùn)輸，掩蓋了藥物異味，更加方便患者服用。該復(fù)合磷酸酯酶膠囊可用于肝炎輔助治療的藥物。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l:從大麥芽根須水提液中提取復(fù)合磷酸酯酶將3kg麥芽根粉碎為80目，按l:8的質(zhì)量體積比加入24L水，在不高于2(TC的溫度下提取20小時(shí)，然后以轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，濾出水相，得到大麥芽根水提取液。取上述大麥芽根水提取液20L，于25"C，邊攪拌，邊將11.22公斤硫酸銨緩慢加入到該大麥芽根水提液中，繼續(xù)攪拌30分鐘，充分沉淀后，于室溫在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。于-2(TC，采用800ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的體積比為3:2)充分洗滌磷酸二酯酶沉淀，然后于4"C，在離心機(jī)中離心15分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程3次。于-20。C，用800ml純丙酮清洗沉淀，然后于4。C在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程2次。然后將得到的沉淀物在室溫晾干，粉碎，即得到所需的復(fù)合磷酸酯酶65g，產(chǎn)品酶活效價(jià)為38000u/mg。實(shí)施例2:從大麥芽根須水提液中提取復(fù)合磷酸酯酶取實(shí)施例1中的大麥芽根水提取液20L，于25。C，邊攪拌，邊將9.44公斤硫酸銨緩慢加入到該大麥芽根水提液中，繼續(xù)攪拌45分鐘，充分沉淀后，于室溫在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。于-20"C，采用1000ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的體積比為3:2)充分洗滌磷酸二酯酶沉淀，然后于《C,在離心機(jī)中離心15分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程4次。于-2(TC，用800ml純丙酮清洗沉淀，然后于4"C在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程2次。然后將得到的沉淀物在室溫晾干，粉碎，即得到所需的復(fù)合磷酸酯酶70g，產(chǎn)品酶活效價(jià)為39000u/mg。實(shí)施例3:從大麥芽根須水提液中提取復(fù)合磷酸酯酶取實(shí)施例1中的大麥芽根水提取液20L，于25"C，邊攪拌，邊將4.86公斤硫酸銨緩慢加入到該大麥芽根水提液中，繼續(xù)攪拌50分鐘，充分沉淀后，于室溫在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清，得到沉淀物謂g。于-2(TC，采用1000ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的體積比為7:3)充分洗滌磷酸二酯酶沉淀，然后于fC，在離心機(jī)中離心15分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程4次。于-20'C，用800ml純丙酮清洗沉淀，然后于4'C在離心機(jī)中離心25分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去上清。重復(fù)此洗滌一離心過(guò)程3次。然后將得到的沉淀物在室溫晾干，粉碎，即得到所需的復(fù)合磷酸酯酶80g，產(chǎn)品酶活效價(jià)為838500u/mg。實(shí)施例4、復(fù)合磷酸酯酶膠囊的制備將實(shí)施例1中制得的復(fù)合磷酸酯酶，粉碎成100目，取70g備用；取乳糖(填充劑)300g，粉碎過(guò)IOO目篩；將復(fù)合磷酸酯酶與乳糖混勻，將4g聚乙烯吡咯垸酮(PVP)加入到60%乙醇中，制得4%聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液，作粘合劑，制軟材，過(guò)18目篩，整粒烘干，加入1.85g硬脂酸鎂，作潤(rùn)滑劑，裝入4號(hào)膠囊，套合膠囊帽。實(shí)施例5、復(fù)合磷酸酯酶膠囊的制備將實(shí)施例2中制得的的復(fù)合磷酸酯酶，粉碎成100目，取70g備用；取淀粉(填充劑)300g，過(guò)100目篩；取適當(dāng)干淀粉制淀粉漿作粘合劑，將復(fù)合磷酸酯酶與剩余淀粉混勻，加粘合劑，制軟材，過(guò)18目篩，整粒烘干，加入7.5g滑石粉，作潤(rùn)滑劑，裝入5號(hào)膠囊，套合膠囊帽。權(quán)利要求1.一種復(fù)合磷酸酯酶，其為通過(guò)下述方法制得1)硫酸銨分級(jí)沉淀于25℃，邊攪拌，邊向大麥芽根水提取液中，加入硫酸銨，使得溶液中的硫酸銨濃度為飽和濃度的40—80％；繼續(xù)攪拌，然后離心棄去上清；2)丙酮-水溶液洗鹽在-20℃下，用丙酮-水溶液清洗步驟1)得到的沉淀；離心棄去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的體積比為23—73，其加入量與步驟1)中得到的沉淀的質(zhì)量體積比為110—15；3)丙酮溶液干燥在-20℃下，用丙酮清洗步驟2)得到的沉淀；離心棄去上清，在室溫晾干，粉碎，得到所需的復(fù)合磷酸酯酶。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合磷酸酯酶，其特征在于所述步驟l)中，加入硫酸銨后，繼續(xù)攪拌的時(shí)間為30—50分鐘。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合磷酸酯酶，其特征在于所述歩驟2)中的丙酮-水溶液的清洗和離心過(guò)程為重復(fù)3—4次。4.一種復(fù)合磷酸酯酶的提取方法，包括如下的步驟1)硫酸銨分級(jí)沉淀于25'C，邊攪拌，邊向大麥芽根水提取液中，加入硫酸銨，使得溶液中的硫酸銨濃度為飽和濃度的40—80%;繼續(xù)攪拌，然后離心棄去上清；2)丙酮-水溶液洗鹽在-20。C下，用丙酮-水溶液清洗步驟1)得到的沉淀；離心棄去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的體積比為2:3—7:3，其加入量與步驟l)中得到的沉淀的質(zhì)量體積比為1:10—15;3)丙酮溶液干燥在-2(TC下，用丙酮清洗步驟2)得到的沉淀；離心棄去上清，在室溫晾干，粉碎，得到所需的復(fù)合磷酸酯酶。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合磷酸酯酶的提取方法，其特征在于所述步驟l)中，加入硫酸銨后，繼續(xù)攪拌的時(shí)間為30—50分鐘。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合磷酸酯酶的提取方法，其特征在于所述步驟2)中的丙酮-水溶液的清洗和離心過(guò)程為重復(fù)3—4次。7.—種復(fù)合磷酸酯酶膠囊，其特征在于包括權(quán)利要求1至3之一所述的復(fù)合磷酸酯酶，還包括，占總藥量的重量比為40-85%填充劑和占總藥量的重量比為0-5%潤(rùn)滑劑；余量為所述的復(fù)合磷酸酯酶。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合磷酸酯酶膠囊，其特征在于所述的潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉和微粉硅膠中的一種或多種。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合磷酸酯酶膠囊，其特征在于所述的填充劑為淀粉、乳糖、糖粉、可壓性淀粉中的一種或多種。10.根據(jù)權(quán)利要求7至9之一所述的復(fù)合磷酸酯酶膠囊在制備肝炎輔助治療的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種復(fù)合磷酸酯酶，及其提取方法，和一種復(fù)合磷酸酯酶膠囊。該復(fù)合磷酸酯酶是通過(guò)大麥芽根須水提取、硫酸銨沉淀和丙酮干燥，分離純化得到的高活性的復(fù)合磷酸酯酶。將該純化的復(fù)合磷酸酯酶，加入填充劑、潤(rùn)滑劑，制軟材，整粒，裝膠囊，制備本發(fā)明的復(fù)合磷酸酯酶膠囊。本發(fā)明復(fù)合磷酸酯酶制備成本低廉，適合規(guī)模化生產(chǎn)，膠囊制劑工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性高。文檔編號(hào)A61K38/46GK101368176SQ20071012037公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2007年8月16日優(yōu)先權(quán)日2007年8月16日發(fā)明者王庭健,骉馬申請(qǐng)人:北京賽生藥業(yè)有限公司