專利名稱：：吡咯并六元n雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物的制備方法及其在醫(yī)藥上的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一類新的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物，特別是結構新穎的2(2-氧代吲哚啉-3-亞基)甲基-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-6,7-二氫-lH-吡咯[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮衍生物，其制備方法及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為蛋白激酶抑制劑的用途。
背景技術：
：細胞的信號傳導是一種基礎的作用機制，在信號傳導過程中，來自細胞外的刺激被傳遞到細胞內部，進而調節(jié)不同細胞的進程。這些信號可調節(jié)多種生理響應，包括細胞增殖、分化、調亡和運動等，它們以不同種類溶解因子形式存在，包括以旁分泌因子、自分泌因子和內分泌因子為主的生長因子。通過與特定跨膜受體結合，生長因子配體將細胞外信號傳遞到細胞內信號途徑，從而引起個體細胞對細胞外信號的反應。很多信號傳遞過程是利用蛋白磷酸化的可逆過程，涉及到特定蛋白激酶和磷?；?。蛋白激酶(Proteinkinases,PKs)在信號傳導過程中具有非常重要的作用。它能將ATP的Y-磷酸基轉移到功能蛋白的特定氨基酸殘基上，引發(fā)一系列生物反應。按照在磷酸化過程中作為底物的氨基酸類別，蛋白^:酶可分為絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)和酪氨酸激酶(PTKs)。酪氨酸磷酸化機理普遍存在于信號傳導過程中，調控著諸如有絲分裂、細胞周期進程和分化等多種細胞功能(HanksandHunter,1995，FASEBJ.9:576-596;CadenaandGill,1992，FASEBJ.6:2332-2337;SchlessingerandUllrich,1992，Neuron9:383-391;Vandergeer"a丄，1994,Annu.Rev.CellBiol.10:251-337)。當蛋白酪氨酸激酶在變異、失控的情況下表達，或在不正常的高水平下表達時，可以將正常細胞轉變?yōu)槟[瘤顯型(neoplasticphenotype)(Chiaoeta丄，1994，CancerMetast.Rev.9:63—80;Hunter,1991，Cell64:249—270)。血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是主要作用于血管內皮細胞的生長因子，具有促進內皮細胞增殖、增加微血管通透性、誘導血管生成等多種功能(HanksandHunter,1995，FASEBJ.9:576-596)。VEGF是目前所知最有效的、直接作用的血管生成素蛋白(angiogenicprotein),是一種可擴散的內皮細胞特異性有絲分裂素和血管生長因子(FerraraNetal.,EndocrRev,1997，18，4-25;TofimuraTetal.,HumPharthol,1998,29，986-991)。目前所知VEGF家族包括6個成員VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生成因子(PDF)，均為二聚體糖蛋白形式，且均含有規(guī)則的8個胱氨酸殘基的空間構型，具特異性，被認為是"胱氨酸結"(cysteineknot)。李凌等(李凌等.生物化學與生物物理學報，2002，34(1)，21-27)發(fā)現惡性腫瘤細胞高水平表達VEGF，并且還發(fā)現腫瘤細胞也高水平表達Flk-1，提示腫瘤局部存在VEGF自分泌與旁分泌通路。VEGF的表達與一些實體瘤的微血管密度具有相關性，并且組織中VEGF的濃度與某些實體瘤的預后有關，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌和結腸癌。已知缺氧是刺激VEGF產生的重要因素，在腫瘤細胞中缺氧誘導VEGF基因表達不光是基因轉錄率的提高，還有VEGFmRNA穩(wěn)定性的增強。VEGFR家族已明確有VEGFR-1/Fit-1、VEGFR-2/Flk-1/KDR和VEGFR-4/Fit-43種，VEGFR-1和VEGFR-2為細胞表面酪氨酸激酶受體，主要位于腫瘤血管內皮細胞表面。血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及血管內皮生長因子受體(vascularendothelialgrowthfactorrec印tor，VEGFR)在腫瘤新生血管形成過程中起著重要作用成為抗腫瘤生物治療的一個重要靶點。目前以VEGF和VEGFR為耙點的腫瘤治療主要有以下五種1.基因治療(EllisLM.etal.JBiolChem1998，273，1052-1057):VEGF和VEGFR對于腫瘤血管新生起正調節(jié)作用。通過基因治療，使VEGF和VEGFR表達減少，或阻斷其信號轉導通路，從而抑制二者發(fā)揮生物學活性。2.抗VEGF/VEGFR單克隆抗體(GordonMetal.ProcAmSocCUrvOneol，1998，17，2IIa):應用VEGF及VEGFR的單克隆抗體，可封閉已分泌的VEGF及VEGFR，阻止VEGF誘發(fā)的內皮信號轉導，抑制血管的形成。3.小分子抑制物由sugen公司開發(fā)研制的su系列化合物。4.可溶性VEGFR:可溶VEGFR僅具有與VEGF結合能力，卻無信號轉導功能。5.導向治療VEGF的兩個主要受體Fit一l和Flk—l/KDR在腫瘤血管內皮細胞中過度表達，而VEGFR在相鄰正常組織血管內皮中幾乎不能檢出。因此，VEGF和VEGFR為腫瘤的導向治療提供了特異性較高的耙點，VEGF可與其他抗腫瘤藥物、毒素、放射性核素等聯用，用于腫瘤的導向治療。本發(fā)明的目的在于在酪氨酸激酶抑制劑SU-14813以及具有抗腫瘤效果的吡咯并六元N雜環(huán)A衍生物的基礎上，設計了具有通式(I)所示的類似物。本發(fā)明的化合物同現有技術中具體公開的化合物具有較大的結構差異，且表現出優(yōu)良的使用效果和作用。SU-1481
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物，即新型酪氨酸激酶抑制劑2(2-氧代吲哚啉-3-亞基)甲基-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-6,7-二氫-lH-吡咯[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮類化合物以及它們的互變異構體、對映體、生理上可以接受的鹽、代謝產物和代謝前體或者前藥，以及它們調節(jié)蛋白激酶的活性。(I)其中RbR2、R3、R4分別選自氫原子、鹵素、垸基、芳基、雜芳基、-OR5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5Re、-COR5或-NR5COR^，其中芳基、雜芳基、可以進一步被一個或多個垸基、烷氧基或者鹵素所取代；R5和R6各自分別選自氫原子或垸基，其中烷基可以進一步被一個或多個選自芳基、雜芳基、鹵代芳基、羥基、垸氧基、芳氧基、羧酸或者羧酸酯的取代基所取代；R7是氫原子或者烷基;r是16。本發(fā)明典型化合物包括但不限于:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>或其藥學上可接受的鹽。其中，所述的鹽為上述通式化合物與選自以下的酸形成的鹽蘋果酸、乳酸、馬來酸、鹽酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸，優(yōu)選為蘋果酸或馬來酸。在本發(fā)明的另一4^方面，是一種藥物組合物，含有通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽、載體或賦形劑。在本發(fā)明的另一個方面，涉及的是蛋白激酶催化活性的調節(jié)方法，包括使蛋白激酶與通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽、載體或賦形劑接觸。此蛋白激酶選自受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶和絲氨酸-蘇氨酸激酶。在本發(fā)明的另一個方面，是含有通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物在治療與蛋白質激酶有關的疾病的藥物中的用途。其中所述疾病選自與VEGFR-2,EGFR,HER-2，HER-3,HER-4,PDGFR,c-Kit，c-Met,FGFR或Flt3相關的疾病。在本發(fā)明的另一個方面是通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或鹽的制備方法，包括以下步驟氮氣保護下，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(lb);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(IC);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>進一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼烷加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯Ud);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);O<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲烷中與三氯氧磷和N，N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲酰化反應，生成旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的吲哚酮加熱212小時即得到通式(I)所示的目標化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中R,、R2、R3和R4的定義同上。發(fā)明的詳細說明除非有相反陳述，下列用在說明書和權利要求書中的術語具有下述含義。"烷基"指飽和的脂族烴基團，包括1至20個碳原子的直鏈和支鏈基團。優(yōu)選含有1至10個碳原子的中等大小垸基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。更優(yōu)選的是含有1至4個碳原子的低級烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基等。垸基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以為鹵素、羥基、垸氧基、芳基、雜芳基、鹵代芳基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6。"芳基"指具有至少一個芳環(huán)結構的基團，即具有共軛的兀電子體系的芳環(huán)，包括碳環(huán)芳基、雜芳基和聯芳基。芳基可以是被取代的或未被取代的，當被取代時，取代基可以為鹵素、烷氧基、垸基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NRsC0R6。"雜芳基"指具有1至3個雜原子作為環(huán)原子，其余的環(huán)原子為碳的芳基，雜原子包括氧、硫和氮。所述環(huán)可以是5元或6元環(huán)。雜環(huán)芳基基團的實例包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。雜芳基可以是被取代的或未被取代的，當被取代時，取代基可以為鹵素、烷氧基、烷基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NRsC0R6。"羥基"指-OH基團。"垸氧基"指-O-(烷基)和-O-(未取代的環(huán)烷基)。代表性實例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。垸氧基可以取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以為卣素、羥基、烷氧基、芳基、雜芳基、鹵代芳基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-OR5、-0[CH2CH20]fR7、-NR5R6、-(30115或-順5(:0116。"芳氧基"指-o-芳基和-o-雜芳基，芳基和雜芳基定義同上。代表性實例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。芳氧基可以取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以為齒素、烷氧基、烷基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-OR5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6。"鹵素"指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟或氯。"鹵代烷氧基"指-O-(鹵代烷基)。代表性實例包括但不限于三氟甲氧基、三溴甲氧基等。"羧酸"指(烷基)C(-O)OH。"羧酸酯"指(烷基)C(O)O(垸基)。"可選"或"可選地"意味著隨后所描述地事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說明包括該事件或環(huán)境發(fā)生或不發(fā)生的場合。例如，"可選被烷基取代的芳基"意味著烷基可以但不必存在，該說明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。"藥物組合物"表示一種或多種本文所述化合物或其生理學上/藥學上可接受的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，其他組分例如生理學/藥學上可接受的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進化合物對生物體的給藥。本發(fā)明化合物的合成方法為了完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術方案本發(fā)明通式(I)所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其鹽的制備方法，包括以下步驟:以旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)(根據專利US20040209937制備所得)為起始原料，氮氣氛下，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N'-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱回流得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib);氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(Ic);進一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼烷加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯(Id);接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲垸中與三氯氧磷和N，N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲?；磻尚膺量┎⒘狽雜環(huán)甲醛(If);最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的U引哚酮加熱212小時即得到通式(I)所示的目標化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物。其中的關鍵技術是硼烷的選擇性還原底物(Ic)以及堿性催化劑一水合氫氧化鋰的催化環(huán)合底物(Id)，特別是后者，無相關文獻報道此類吡咯并六元內酰胺結構的構建方法。本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包括藥物有效量的如本發(fā)明通式(I)所述的化合物或其鹽和藥學上可接受的載體。本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明通式(I)所示化合物或其鹽在制備蛋白激酶抑制劑中的用途。具體實施例方式以下結合實施例對本發(fā)明進行進一歩描述，但這些實施例并不限制著本發(fā)明的范圍。在以下的實施例中，化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或質譜(MS)來確定的。NMR位移(S)以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測定是用BrukerAVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代氯仿(CDCl3)、氘代二甲基亞砜(DMS0-D6)，內標為四甲基硅垸(TMS)，化學位移是以1(^(ppm)作為單位給出。MS的測定用FINNIGANLCQAd(ESI)質譜儀。薄層硅膠使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254硅膠板。柱層析一般使用煙臺黃海硅膠200300目硅膠為載體。DMSO-D6:氖代二甲基亞砜；CDC13:氘代氯仿；制備實施例(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-U引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮實施例1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>第一步5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯室溫下，將(S)-l-氨基-3-嗎啡啉-4-基-異丙醇la(15.125g，94.5mmol)，5-羧甲基一3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯(32.34g，104mmol)，1-羥基苯并三唑(25.5g，189.06mmol)，N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺(36.2g，189.06mmol)攪拌下溶解于450ml乙腈中，再于5(TC油浴反應3小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯和四氫呋喃的混和溶劑(V:V-4:l)萃取(200mlx5)，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂千燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到75g油狀物。油狀物柱層析得到標題產物5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3..甲基-111-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯lb(30g，淺褐色固體)，產率70%。MSm/z(ESI):454.4(M+l)。第二步(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉^-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣保護下，將5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-111-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯lb(25.7g，56.7mmol)攪拌下溶解于70ml無水乙醇中，邊用冰浴冷卻邊滴加71ml鹽酸(12N)。加畢，撤去冰浴，反應體系于60'C油浴中反應約1.5小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應體系于干冰-丙酮浴中用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至7左右，有大量固體析出?；旌衔镞^濾，濾餅用乙醇洗滌。濾液減壓下蒸除溶劑，用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至10左右，二氯甲垸萃取(150mlx3)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去千燥劑，濾液濃縮得到標題產物(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯lc(16.9g，深綠色油狀物)，產率84%。MSm/z(ESI):354.3(M+l)。第三步(S)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣保護下，將(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-4-甲基-111-吡咯-3-羧酸乙酯1(:(16.98，47.9mmol)溶解于143.6ml干燥的四氫呋喃中，冰浴冷卻，加入硼烷的四氫呋喃溶液(143.6ml，1mol/L,143.6mmol)。加畢撤去冰浴，反應體系溫度自然升至室溫，于95'C油浴中回流約1小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入150ml鹽酸(2N)攪拌0.5小時，加入50ml冰水，用ION的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至10左右，乙酸乙酯萃取(200mlx2)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標題產物(3)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯ld(15.6g，黃褐色油狀物)，產率96%。MSm/z(ESI):340.3(M+l)。第四步(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮氬氣保護下，將(S)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯ld(16.2g，47.9mmo1)，一水合氫氧化鋰(8g,190.6mmol)攪拌下溶解于50ml乙二醇中，反應體系于135'C油浴中反應50min。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用二氯甲垸萃取(150ml"),合并有機相，有機相用飽和氯化鈉洗滌(150mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到12.3g油狀物。油狀物柱層析得到標題產物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮le(7.9g，白色固體)，產率60.6%。MSm/z(ESI):294.2(M+l)。第五步(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛室溫下，將三氯氧磷(674u1，4.04mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(963u1，12.32mmol)攪拌下溶解于21.18ml二氯甲烷中，用冰浴控制溫度在-10'C左右，攪拌15min。將(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮le(790mg，2.7mmol)攪拌下溶解于10ml二氯甲烷中，滴加到上述反應體系中。加畢，撤去冰浴，反應體系溫度自然升至室溫，繼續(xù)攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，反應體系中加入冰水淬滅反應，攪拌15min。用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至12左右，用二氯甲烷和甲醇的混和溶劑(V:V-20:1)萃取(100mlx8)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉洗滌(150mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到800mg粗品。粗品柱層析得到標題產物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf(650mg，白色固體)，產率75%MSm/z(ESI):322.6(M+l)。第六步(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-H引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-111-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf(200mg，0.623mmol)，5-氟-1,3-二氫』引哚-2-酮(84.67mg，0.56mmol)和六氫吡啶(30.8ul，0.31mmol)攪拌下溶解于1.09ml乙醇中，反應體系于8(TC油浴中避光攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。撤去油浴，反應體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標題產物(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3隱甲基陽l，5，6,7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮1(256mg，黃色固體)，產率90%。MSm/z(ESI):455.2(M+)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.674(s,1H,批咯環(huán)隱NH)，10,945(s，1H,B引哚-NH)，7.771~7.800(m，1H，-ArH)，7.762(s,1H，-CH=C)，6.927~6.978(dd，1H，-ArH)，6.842~6.874(d，1H，-ArH)，4.707~4.719(d，1H，-OH),3.900~3.915(m,1H，-CHO)，3.704~3.748(dd，2H,六環(huán)內接酰胺氮-CH2-)，3.6163.695(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5633.585(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1053.158(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.433(t,2H，六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.545(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.420~2.431(m，2H,-CH2N，嗎啡啉環(huán)內-CH2N)，2.420~2.431(m，2H，-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3042.330(t,2H,嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例2(R，Z)-2-(5-氯-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c〗卩比啶-4-酮重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-氯-l，3-二氫-d引哚-2-酮作原料，得到標題產物(11，2)-2-(5-氯-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7國四氫-卩比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮2(42mg，黃色固體)，產率64%。MSm/z(ESI):471翠+l)。'HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.727(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，11.039(s,1H，吲哚誦NH)，8.003(m，1H,-ArH)，7.814(s,1H,-CH-C)，7.1667.141(dd,1H,-ArH)，6.890~6.869(d，lH，-ArH)，4.713~4.700(d,1H,-0H)，3.907~3.892(m，1H,-CH0)，3.6263.567(t，4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1523.099(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.027~2.994(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH;r)，2.547(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.3282.290(t，2H,嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例32-[(Z)-4-(2，3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫-B引哚-3-次甲基]-5-[(R)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-1，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶4-酮3a3b3c3d第一步4-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2]二氧雜硼烷-2-基)-lH-吲哚氬氣氛下，將4-溴-lH-吲哚3a(29.4g，150mmol)攪拌下溶解于600ml二甲基亞砜中，加入頻哪醇乙硼垸(41.9g，165mmo1)，醋酸鉀(44.1g，450mmol)和l,l，-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(3.6g，4.8mmo1)，加畢，反應液于80'C油浴中攪拌22小時，薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液中加入2L水，用乙酸乙酯萃取(2LX3)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(2LX5)，無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體柱層析后重結晶得到標題產物4-(4,4,5,5-四甲基-[l，3,2]二氧雜硼烷-2-基)-lH-吲哚3b(20g，白色固體)，產率60%。MSm/z(ESI):243.9(M+l)。第二步4-(2，3-二氟-苯基)-lH-吲哚氬氣氛下，將4-(4,4，5，5-四甲基-[l,3,2]二氧雜硼垸-2-基)-lH-吲哚3b(1.22g，5mmol)攪拌下溶解于20ml四氫呋喃中，加入1-溴-2，3-二氟-苯(0.97g，5mmol)，四(三苯基膦)鈀(0.17g，0.15mmol)和7ml氫氧化鈉溶液(2M)。加畢，反應體系在75'C油浴中攪拌過夜，薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液自然冷卻至室溫，用乙酸乙酯萃取(20mlX3)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(10mlX1)，無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體柱層析得到標題產物4-(2,3-二氟-苯基)-lH-吲哚3c(800mg，白色固體)，產率70%。MSm/z(ESI):228.4(M-l)。第三步4-(2,3-二氟-苯基)-l,3-二氫-H引哚-2-酮室溫下，將4-(2，3-二氟-苯基)-lH-吲哚3c(744mg，3.25mmol)攪拌下溶解于12ml乙醇中，依次加入21ml叔丁醇，6.4ml冰醋酸和三溴化吡啶鎗(3.12g，9.7mmol)，加畢攪拌3小時。再加入16ml冰醋酸和鋅粉(l.lg，16.25mmol)，繼續(xù)攪拌1小時。反應液抽濾除去殘渣，濾液減壓濃縮后加入30ml乙酸乙酯，依次用10ml水，10ml飽和碳酸氫鈉和10ml飽和氯化鈉洗滌，用無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體為標題產物4-(2，3-二氟-苯基)-l,3-二氫-吲哚-2-酮3d(780mg，白色固體)，產率97%。MSm/z(ESI):246.6(M+l)。第四步2-[(Z)-4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-[(R)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2<|吡啶-4-酮室溫下，將(11)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-11"1-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf(50mg，0.156mmol)，4-(2，3-二氟-苯基)-l，3-二氫』引哚-2-酮3d(34.3mg，0.14mmol)和六氫吡啶(7.7u1，0.078mmol)攪拌下溶解于0.3ml乙醇中，反應體系于80'C油浴中避光攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。撤去油浴，反應體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標題產物2-[(2)-4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-[(11)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-l,5，6,7-四氫-B比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮3(56mg，黃色固體)，產率73%。MSm/z(ESI):549.3(M+1)。'HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.583(s，1H，吡咯環(huán)-NH),11.164(s,1H,H引哚-NH),7.6477劍(m，1H,-ArH)，7.462~7.411(m,1H,-ArH),7.342~7.308(m，1H,-ArH)，7.277~7.239(m，1H，-ArH)，7.017~6.997(d,1H,-ArH)，6.898~6.879(d,1H，-ArH)，6.716(s，1H，-CH=C)，4.671(s,IH,-OH)，3.854(m，IH,-CHO)，3.673~3.540(m,7H，六環(huán)內-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.124~3.077(q,1H:六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.986~2.954(t，2H,六環(huán)內-12)，2.402-2.392(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N),2.2792.265(d,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.884(s,3H，吡咯環(huán)-CH》。實施例4(R，Z)-2-(5-溴-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-溴-l，3-二氫-吲哚-2-酮作原料，得到標題產物(1^)-2-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮4(24mg，黃色固體)，產率50%。MSm/z(ESI):517.6(M+l)。JHNMR(400MHz,DMSO-d6)13.723(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.047(s，1H,B引哚隱NH)，8.131(s，1H，-ArH)，7.820(s,1H,-CH=C)，7.292~7.271(dd,1H,-ArH)，6.847~6.827(d，1H,-ArH),4.713~4.702(d，1H,隱OH)，3.897(m,IH,-CHO)，3.6263.569(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1533.101(dd,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.029~2.995(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.549(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.308(t,2H,嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例5(S,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-噴哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮第一步5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯室溫下，將(R)-l-氨基-3-嗎啡啉-4-基-異丙醇5a(15.125g，94.5mmol)，5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯(32.34g，104mmol)，1-羥基苯并三唑(25.5g，189.06mmol)，N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺(36.2g，189.06mmol)攪拌下溶解于450ml乙腈中，再于5(TC油浴反應3小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯和四氫呋喃的混和溶劑C^^4:l)萃取(200mlx5)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到75g油狀物。油狀物柱層析得到標題產物5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯5b(30g，淺褐色固體)，產率70%。MSm/z(ESI):454単+1)。第二步(R)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲萄-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣氛下，將5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-111-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯5b(23g，50.77mmol)攪拌下溶解于60ml無水乙醇中，邊用冰浴冷卻邊滴加63.5ml鹽酸(12N)。加畢，撤去冰浴，反應體系于6(TC油浴中反應約1.5小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應體系于干冰-丙酮浴中用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至7左右，有大量固體析出?；旌衔镞^濾，濾餅用乙醇洗滌。濾液減壓下蒸除溶劑，用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至10左右，二氯甲烷萃取(150mlx3)，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標題產物(11)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5c(14.6g，黃綠色油狀物)，產率81.6%。MSm/z(ESI):354舉+1)。第三步(R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基〗-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣氛下，將(11)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-111-吡咯-3-羧酸乙酯5c(2.332g，6.6mmol)溶解于23ml干燥的四氫呋喃中，冰浴冷卻，加入硼垸的四氫呋喃溶液(23.12ml,1mol/L,23.12mmol)。加畢撤去冰浴，反應體系溫度自然升至室溫，于95'C油浴中回流約1小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入5ml的鹽酸(2N)攪拌0.5小時，加入5ml冰水，用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至IO左右，乙酸乙酯萃取(IOOmlx2)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(50mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標題產物(R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5d(2.1g，白色固體)，產率93.75%。MSm/z(ESI):340.9(M+1)。第四步(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮氬氣氛下，將(R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5(1(2.1g，6.2mmo1)，一水合氫氧化鋰(1.56g，37mmol)攪拌下溶解于25ml乙二醇中，反應體系于140'C油浴中反應50min。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。反應液減壓下蒸除溶劑，加入50ml飽和氯化鈉，用二氯甲烷萃取(80mlx3)，有機相用飽和氯化鈉洗滌(80mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮后柱層析得到標題產物(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮5e(610mg，白色固體)，產率33.9。％。MSm/z卿)294翠+1)。第五步(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡徒-2-甲醛室溫下，將三氯氧磷(500141，3mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(704"I，9mmol)攪拌下溶解于15ml無水二氯甲烷中，用冰浴控制溫度在-l(TC左右，攪拌15min。將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮5e(586mg，2mmol)攪拌下溶解于8ml二氯甲烷中，滴加到上述反應體系中。加畢，撤去冰浴，反應體系溫度自然升至室溫，繼續(xù)攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，反應體系中加入冰水淬滅反應，攪拌15min。用10N的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至12左右，用二氯甲垸和甲醇的混和溶劑(V:V-20:1譯取(100mlx5)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮后柱層析得到標題產物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉斗基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(490mg，白色固體)，產率78.8%。MSm/z(ESI):322単+1)。第六步(S,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-tl引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-I，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(490mg，1.53mmol)，5-氟-1，3-二氫』引哚-2-酮(219mg，1.45mmol)和六氫吡啶(100u1，1.0mmol)攪拌下溶解于5ml乙醇中，反應體系于80'C油浴中避光攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。撤去油浴，反應體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標題產物(S，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-B引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶4-酮5(460mg,黃色固體)，產率69.9%。MSm/z(ESI):455.2(M+l)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.674(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.945(s,1H,B引哚-NH)，7.771~7.800(m,1H,-ArH)，7.762(s,1H,-CH=C)，6.927~6.978(dd,1H，-ArH)，6.842~6.874(d,1H,-ArH)，4.707~4.719(d,1H,-OH),3.900~3.915(m,1H,-CHO)，3.704~3.748(dd,2H,六環(huán)內接酰胺氮-CH;r)，3.6163.695(dd,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5633.585(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1053.I58(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.433(t，2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.545(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.420~2.431(m，2H,-CH2N,嗎啡啉環(huán)內-CH2N)，2.420-2.431(m,2H,-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3042.330(t,2H，嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例6(S，Z)-2-(5-氯-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-氯-l，3-二氫-噴哚-2-酮作原料，得到標題產物(8，2)-2-(5-氯-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-批咯并[3,2-c]吡啶-4-酮6(87mg，黃色固體)，產率85%。MSm/z(ESI):471舉+l)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.727(s,1H,吡咯環(huán)隱NH)，11.038(s，1H，卩引哚-NH)，8駕8篇(m,1H,陽ArH)，7.813(s,1H,-CH=C)，7.166~7.140(dd，1H,-ArH)，6.889~6,869(d,1H，-ArH)，4.712~4.700(d,1H,-OH)，3.893(m,1H,-CHO)，3.723~3.689(dd,2H，六環(huán)內接酰胺氮-012-)，3.6573.641(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5783.556(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1523.099(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.026~2.993(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.547(s,3H,吡咯環(huán)-CH3),2.424~2.412(m,4H,-CH2N，嗎啡啉環(huán)內-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3112.290(t，2H,嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例72_(2;)_[4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-1，2-二氫-卩引哚-3-次甲基]-5-((3)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-妣咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-(2，3-二氟-苯基)-l，3-二氫-噴哚-2-酮3d作原料，得到標題產物2-(Z)-[4-(2，3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基]-5-((S)-2-羥基-3-嗎啡啉誦4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-卩比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮7(49mg，紅色固體)，產率73%。MSm/z(ESI):549.2(M+l)。^NMR(400畫z，DMSO-d6)13.583(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.164(s,1H，卩引哚-NH)，7.604~7.647(m,1H,-ArH)，7.411~7.464(m，1H，-ArH)，7.308~7.342(m，1H,-ArH)，7.239~7.277(m,1H,-ArH)，6.997~7.017(d,1H,-ArH)，6.879~6.898(d，1H,陽ArH)，6.716(s，1H,-CH=C)，4.671(s,1H，-OH)，3.854(m,1H,隱CHO)，3.540~3.673(m,7H,六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH2O)，3.0953.124(q,1H:六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.954~2.986(t,2H,六環(huán)內-CH;O，2.392-2.402(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2,2652.279(d,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N),1.884(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)。實施例8(S，Z)-2-(5-溴-2-氧代-l,2-二氫-B引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-溴-l,3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(S,Z)-2-(5-溴—2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c〗吡啶-4-酮8(49mg，黃色固體)，產率78%。MSm/z(ESI):515翠+1)。!HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.720(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.042(s,1H,吲哚陽NH)，8.127(s，1H,-ArH)，7.813(s，1H,-CH=C)，7.2卯7,265(dd,1H,-ArH)，6.844~6.823(d,1H,-ArH)，4.712~4.699(d,1H,-OH)，3.907(m,1H，-CHO)，3.5783.555(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.151~3.098(dd，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.025~2.992(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.547(s，3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.306~2.290(t,2H，嗎啡啉環(huán)內-CH2N)。實施例9(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-^基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺第一步2，4-二硝基-5-氟-苯乙酸室溫下，將3-氟-苯乙酸9a(31.5g，0.204mol)加入到64ml硫酸(98。/。)中，控制溫度在35'C下滴加100ml硝酸(65。/。一68W)及硫酸(98。/。)的混合溶液(V:V^l:l)。加畢，控溫在35'C左右攪拌，薄層色譜跟蹤至原料消失。將冰加入反應液中，待冰融化后過濾，得到標題產物2，4-二硝基-5-氟-苯乙酸9b(49g,淺黃色油狀液體)。MSm/z(ESI):243.5(M陽l)。第二步2,4-二氨基-5-氟-苯乙酸室溫下，將2,4-二硝基-5-氟-苯乙酸9b(10g，38.7mmol)攪拌下溶解于150ml甲醇中，加入鈀/碳(5%，1.5g)，氫氣氛下，在壓強為0.3MPa下氫化。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾兩次，濾液減壓濃縮得到標題產物2，4-二氨基-5-氟-苯乙酸9c(7.12g，棕色固體)，直接做下一步。第三步5-氟-6-氨基-2-吲哚酮室溫下，將2,4-二氨基-5-氟-苯乙酸9c(7.12g，38.7mmol)攪拌下溶解于100ml鹽酸(1M)，加熱回流l小時，薄層色譜跟蹤至原料消失，停止反應。將反應液冷卻至室溫，繼續(xù)用冰水浴冷卻，滴加100ml氫氧化鈉溶液(lM)中和反應液。用乙酸乙酯萃取反應液(125mLX4)，合并有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(100mLXl)洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產物5-氟-6-氨基-l,3-二氫-2-吲哚酮9d(5.3g，黃色固體)，產率82.8%。MSm/z(ESI):165.3(M-l)。第四步乙酸(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰基)-甲酯室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(500mg，3.0mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，加入0.4ml吡啶，攪拌均勻后用丙酮和干冰使反應體系冷卻至-40'C左右。將乙酰氧基乙酰氯(420mg，3.0mmol)加入到10ml四氫呋喃中，溶解后滴加到已冷卻好的反應體系中，加畢撤去干冰-丙酮浴，使反應體系自然升溫至室溫，攪拌過液。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾，所得固體用水洗3次即得到標題產物乙酸(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰萄-甲酯9e(562mg，灰色固體)，產率70.4%。MS:265.3(M-l)。第五步N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺室溫下，將乙酸(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲?；?-甲酯9e(58mg，0.22mmol)攪拌下溶解于1ml甲醇中，加入1ml水和氫氧化鈉(15mg，0.375mmol)，加畢，繼續(xù)攪拌1小時。薄層色譜跟蹤至原料消失，停止反應。反應液過濾，所得固體用水洗3次,干燥即得到標題產物^(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-111-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺9f(46mg,灰白色固體)，產率93.8%。MS:223.7(M-l)。第六步(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺室溫下，將(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-111-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺9f(25.1mg，0.112mmol)，加畢攪拌至溶解。向反應液中加入六氫吡啶(50ul，0.5mmo1)，加畢，反應體系于80'C油浴中避光攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。撤去油浴，反應體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標題產物(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲萄-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺9(51mg，黃色固體)，產率80%。MSm/z(ESI):528.3(M+l)。實施例10(S,Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-卩比咯并[3，2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>第一步5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮室溫下，將5-氟-6-氨基-l，3-二氫-2-吲哚酮9d(2.26g，13.6mmol)攪拌下溶解于40ml乙醇中，用冰浴將上述溶液冷卻至0'C，加入4-氟-苯甲醛(1.5ml,13.6mmol)，加畢室溫攪拌1小時。加入四氫硼酸鈉(1.08g，28.5mmol)，回流18小時，自然冷卻至室溫。加入冰水，有大量固體析出，抽濾，濾餅用水洗滌(50mlX3)后經柱層析得到標題產物5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮10a(1.67g，白色固體)，產率45%。MSm/z(ESI):275(M+l)。第二步(S，Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5，6，7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮室溫下，將(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-11^-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-l,3-二氫-卩引哚-2-酮10a(30.7mg，0.112mmo1)，加畢，攪拌至溶解。向反應液中加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應液于油浴中加熱回流2小時，薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標題產物(5，。-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6，7-四氫-吡咯并[3，2《]吡啶-4-酮10(18mg，灰色固體)，產率27.8%。MSm/z(ESI):578翠+1)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.503(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，10.557(s，1H，卩引哚-NH)，7.584~7.614(d,1H,-ArH)，7.359~7.400(m,2H，-ArH)，7.359(s，1H,-CH=C)，7,140~7.184(t,2H,-ArH)，6.426(m,1H,-NH)，6.039~6.057(d，1H,-ArH),4.684~4.696(d,1H,-OH)，4.346~4.361(d，2H,-C=CCH2N)，3.893(m，1H，-CHO)，3.667~3.713(d,2H,六環(huán)內-CH2N)，3.596~3,627(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.564(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.07~3.12(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，2.9282.961(t,2H,六環(huán)內-CH2)，2.468(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.417(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.297(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例11(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]:氧代-H二氫-lH-吲哚-6-基卜^羥基冬甲基-丙酰胺第一步乙酸l-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-m-吲哚-6-氨基甲?；?-l-甲基-乙酯室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(410mg，2.47mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，用干冰-丙酮浴冷卻至-45'C，加入332ul吡啶。將2-乙酰氧基異丁酰氯(423mg，2.71mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，滴加到上述反應液中，加畢撤去干冰-丙酮浴，讓反應體系溫度自然升至室溫，攪拌過夜。薄層色譜監(jiān)測反應至原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗滌，所得固體干燥后得到標題產物乙酸l-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲?；?-l-甲基-乙酯lla(792mg，白色固體)，直接進行下步反應。MSm/z(ESI):293.7(M-l)。第二步N-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺室溫下，將乙酸l-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰基)-l-甲基-乙酯lla(2.035g，6.9mmol)攪拌下溶解于20ml甲醇中，加入20ml氫氧化鈉溶液(0.7M)，攪拌4小時，薄層色譜監(jiān)測反應至原料反應完全，停止反應。反應液用1M的鹽酸中和后，減壓蒸除溶劑，柱層析后干燥得到標題產物]^-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺Ub(900mg，白色固體)，產率59.2%。MSm/z(ESI):253舉+1)。第三步(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-2-甲基-丙酰胺室溫下，將(5)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1^1-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)，N-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺llb(28.3mg，0.112mmol)和六氫吡咬(50u1,0.5mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，反應體系于80'C油浴中避光攪拌2小時。薄層色譜監(jiān)測反應至原料基本消失，停止反應。撤去油浴，反應體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標題產物(8,2)^-{5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6，7-四氫-111-吡咯并[3，2-(:]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺ll(46mg，黃色固體)，產率74%。MSm/z(ESI):556翠+1)。NMR(400MHz,DMSO-d6)13.656(s,1H,批咯環(huán)-NH)，10.951(s,1H,剛哚-NH)，9.282(s,1H，-NHCO)，7.873~7.901(d,1H,-ArH)，7.778~7.794(m,1H,-ArH)，7.670(s，1H,-CH=C),6.052(s,1H，-OHC(CH3)2)，4.698(d，1H,OH)，3.893(m，1H,-CHO)，3.667~3.713(d，2H,六環(huán)內-CH2N)，3.596~3.627(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.557~3.578(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.09~3.125(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.961~3.012(t,2H,六環(huán)內-CH;0，2.524(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4122.424(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2972.308(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.376(s，6H，2x-CH3)。實施例12(S,Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮第一步7-溴-5-氟-l,3-二氫-卩引哚-2-酮室溫下，將5-氟-l,3-二氫』引哚-2-酮12a(1.5g，0.01mol)攪拌下溶解于15ml乙腈，逐滴加入一溴代丁二酰亞胺(1.8g，0.01mol)，加畢過夜攪拌，有大量固體析出。薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液抽濾得到標題產物7-溴-5-氟-l,3-二氫-卩引哚-2-酮12b(2g，灰白色固體)，產率87%。MSm/z(ESI):228.3(M-l)。第二步(S，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-111-吡咯并[3,2-(;]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入7-溴-5-氟-l，3-二氫-卩引哚-2-酮12b(25.8mg，0.112mmol)，加畢，攪拌至溶解，再加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應液于油浴中加熱回流2小時，薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標題產物(S,Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮12(45mg，黃色固體)，產率75.4%。MSm/z(ESI):533.6(M+1)。JHNMR(400MHz,DMSO-d6)13.689(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.196(s,1H，吲哚-NH)，7.860~7.866(d,1H，-ArH)，7.784(s，1H,-CH=C)，7.232~7.260(m,1H,-ArH)，4.703~4.716(d，1H，-OH)，3.896~2.909(m,1H,-CHO)，3.631~3.747(m，3H,六環(huán)內-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.555~3.578(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.097~3.150(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.015~3.048(t，2H,六環(huán)內-CH2),2.548(s,3H,吡咯環(huán)-CH3),2.4112.424(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2912.307(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例13(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基H-甲氧基-乙酰胺第一步5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(2.028g，12.2mmol)攪拌下溶解于30ml四氫呋喃中，加入1.3ml吡啶，用干冰-乙醇浴使反應體系冷卻至一50'C左右。將甲氧乙酰氯(1.35g，12.5mmol)攪拌下溶解于20ml四氫呋喃中，滴加到上述反應體系中。加畢，撤去干冰-乙醇浴，使反應體系溫度自然升至室溫，攪拌過夜。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾，所得固體用水洗滌(10mlX3)，用甲醇重結晶，即得到標題產物5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a(1.18g，灰色固體)，產率40.6%。MSm/z(ESI):239.3(M+1)。第二步(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基h2-甲氧基-乙酰胺室溫下，將(5)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-111-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a(26.7mg，0.112mmo1)，加畢，攪拌至溶解，再加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應液于油浴中加熱回流2小時，薄層色譜表明原料反應完全，停止反應。反應液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標題產物(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺13(52mg,黃色固體)，產率85.8%。MSm/z(ESI):542.2(M+l)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.666(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.919(s,1H,U引哚-NH)，9.313(s，1H,-NHCO),7.841~7.869(d,1H,-ArH)，7.672(s,1H,-CH=C)，7.546~7.562(m,1H,-ArH)，4.703~4.716(d，1H,-OH)，4.062(s,2H,-CH20)，3.896~2.909(m,1H,-CHO)，3.652~3.720(m,3H，六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5563.578(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.404(s,3H,-CH30)，3.097~3.150(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.982-3.015(t,2H，六環(huán)內-012)，2.523(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4142.425(m，4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2912.307(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例14(R，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l,2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五歩中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和7-溴-5-氟-l,3-二氫』引哚-2-酮12b作原料，得到標題產物(R，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮14(20mg，黃色固體)，產率40%。MSm/z(ESI):533.6(M+l)。HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.691(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.204(s，1H,H引哚-NH)，7.874-7.85l(d，1H，-ArH)，7.797(s，1H，-CH=C)，7.269~7.243(m,1H,陽ArH)，4.710~4.698(d,1H，-OH)，3"003.890(m，1H,-CHO)，3.759~3.611(m,3H,六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.572~3.550(t，4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.148~3.095(q，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.047~3.014(t,2H,六環(huán)內-012)，2.548(s，3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.4182.323(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.3022.285(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例15(R,Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-I，2-二氫-D引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-批咯并吡啶-2-甲醛If和5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮10a作原料，得到標題產物(R，Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基_3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-批咯并[3，2《]吡啶-4-酮15(53mg，深紅色固體)，產率65.6%。MSm/z(ESI):57&7(M+1)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.504(s，1H，吡咯環(huán)-NH)，10.558(s,1H,d引哚隱NH)，7.614~7.585(d，1H，陽ArH)，7.400~7.379(m，2H，陽ArH)，7.359(s,1H，-CH=C)，7.140-7.191(t，2H，-ArH),6.43l(m，1H,-NH)，6扁6細(d,1H，-ArH)，4.698~4.686(d,1H,-OH)，4.346~4.361(d,2H，-C=CCH2N)，3.894(m,1H，-CHO)，3.731~3.668(d,2H，六環(huán)內-CH2N)，3.644~3.612(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.596~3.553(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.135~3.082(q，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.928~2.961(t,2H,六環(huán)內-CH2)，2.468(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.419-2.408(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2.289(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例16(R，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a作原料，得到標題產物(R,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺16(60mg，黃色固體)，產率87%。MSm/z(ESI):543翠+1)。&NMR(400MHz，DMS0-d6)13.668(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.923(s,1H,d引哚－NH)，9.320(s，1H，-NHCO)，7.875~7.847(d，1H，-ArH)，7.678(s,1H,-CH=C)，7.562~7.546(m，1H,-ArH)，4.71卜4.699(d，1H，-OH)，4.063(s，2H，-CH20)，3.729~3.653(m,3H，六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.579~3.556(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.404(s,3H,-CH3O)，2.9833.017(t，2H,六環(huán)內-012)，2.525(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4122.424(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2892.306(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例17(R，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶l亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜l羥基冬甲基-丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例l第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺lib作原料，得到標題產物(R,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基}-2-輕基-2-甲基-丙酰胺17(7111^，黃色固體)，產率82%。MSm/z(ESI》556.2(M+l)。NMR(400MHz，DMSO-d6)13.658(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.954(s,1H,口引哚-NH)，9.289(s，1H,-NHCO)，7.875~7.903(d，1H,-ArH)，7.796~7.780(m,1H,-ArH)，7.672(s,1H,-CH=C)，6.055(s，1H,-OHC(CH3)2)，4.701(d,1H,OH)，3.722(m,1H，-CHO)，3.655~3.691(d,2H，六環(huán)內-CH2N)，3.639(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;r)，3.559~3.580(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，2鄰63.019(t，2H,六環(huán)內-CH;O，2.526(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4152.425(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2.309(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.378(s,6H，2x-CH3)。實施例18(R，Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-2-(2-氧代-4-嘧啶-4-基-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-1，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>重復本發(fā)明實施例1第六步反應，不同的是使用實施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉斗基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和4-嘧啶-4-基-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(R，Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-2-(2-氧代-4-嘧啶-4-基-l，2-二氫-H引哚-3-次甲基)-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-0|吡啶-4-酮18(58mg,黃色固體)，產率72.5%。MSm/z(ESI):514.2(M+l)。'H畫R(400MHz，DMSO-d6)13.573(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.149(s，1H,B引哚-NH)，7.7427.770(d，2H,吡啶環(huán)N-CH-)，7.5007.513(d,2H，吡啶環(huán)-CH^，7.2267.265(t，lH,-ArH)，6.9766.995(t，lH，-ArH),6.8136,834(d,2H,-CH=C,-ArH)，4.6664.677(d，1H，-OH)，3.854(m,1H,-CHO)，3,5413.688(m,7H，六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.0633.115(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.9462.979(t,2H，六環(huán)內-CH2)，2.394(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2642.278(d,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.8101.822(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)。實施例19(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-(5-甲氧基-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>19重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-甲氧基-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-(5-甲氧基-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮19(40mg，橙紅色固體)，產率76.6%。MSm/z(ESI):467.2(M+l)。畫R(400MHz，DMSO-d6)13.846(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，10.742(s,1H，卩引哚-NH)，7.696(s，H,-CH=C)'7.490~7.495(m,1H,-ArH),6.728~6.792(m，2H,-ArH)，4.699~4.711(d,m,-OH)，3.896~3.909(m，1H，陽CHO)，3.783(s,3H,-CH30)，3.689~3.732(m,2H,六環(huán)內-CH2N)，3.654(m,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;O，3.558~3.580(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.097-3.150(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.978-3.01l(t，2H,六環(huán)內-CH2)，2.543(s,3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.4142.425(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2308(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例20(8,2)-2-[4-(2,6-二氟-苯基)-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-亞甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-cI吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-(2，6-二氟-苯基)-l,3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(S，Z)-2-[4-(2，6-二氟-苯基)-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮20(52mg，黃色固體)，產率84.7%。MSm/z(ESI):549.3(M+l)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.604(s，1H，吡咯環(huán)-NH)，U.171(s,1H,吲哚-NH)，7.646~7.666(m,1H，-ArH)，7.338~7.380(m，2H，-ArH)，7.2447.282(m,1H,-ArH)，7.008~7.027(m,1H,-ArH)，6.900~6.919(m,1H，-ArH)，6.657(s,1H,-CH=C)，4.672~4.683(d，1H，-OH)，3.855~3.868(m，1H,-CHO)，3.541~3.673(m，7H,六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.077~3.130(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.955~2.988(t，2H,六環(huán)內-CH2)，2.394(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2662.280(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.856(s,3H，吡咯環(huán)-CH3)。實施例21(3義)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-[5-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-1,2-二氫-噴哚-3-亞甲基]-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-(4-甲氧基-苯基)-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-[5-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-l，2-二氫-H引哚-3-亞甲基]-3-甲基-1，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-0]吡啶-4-酮21(53mg，橙黃色固體)，產率87.2%。MSm/z(ESI):543.3(M+l)。雨R(400MHz,DMSO-d6)13.708(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.004(s，1H，吲哚陽NH)，7.321~7.852(m,1H,-ArH)，7.673(s,1H,-CH=C)，7.582~7.604(m,2H,-ArH)，7.254~7.277(m,1H，-ArH)，7.070(m,1H，-ArH)，7.016~7.038(d,2H，-ArH)，4.704~4.716(d,1H,-OH)，3.855~3.868(m,1H,-CHO)，3扁(s，3H，-CH30)，3.659~3.728(m,3H,六環(huán)內-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2)，3.559~3.581(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.077~3.130(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;r)，2.990~3.024(t,2H,六環(huán)內-CH2)，2.539(s,3H,吡咯環(huán)-013)，2.415~2.427(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2942.311(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例22(S,Z)-2-(4-溴-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-亞甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮重復本發(fā)明實施例5第六步反應，不同的是使用實施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-溴-]，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標題產物(S,Z)-2-(4-溴-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-亞甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6，7-四氫-P比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮22(43mg，橙黃色固體)，產率74.5%。MSm/z(ESI):515.2(M+l)。NMR(400MHz,DMSO誦d6)13.670(s,1H,吡咯環(huán)-NH),11.189(s，1H，吲哚-NH)'8.562(s，1H,-CH=C)，7.201~7.221(m，1H,-ArH)，7.042~7.081(m，1H,-ArH)，6.920~6.938(m,1H,-ArH)，4.709~4.721(d，1H，-OH)，3.902~3.915(m,1H,-CH0)，3.631~3.745(m,3H,六環(huán)內-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-012)，3.558~3.580(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.090~3.143(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.011~3.035(t,2H,六環(huán)內-CH2)，2.479(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.413~2.426(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2932.311(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實施例23(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮馬來酸鹽室溫下，將(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6，7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮1(709mg，1.562mmol)和順丁烯二酸(217mg，1.874mmol)攪拌下溶解于150ml甲醇中，攪拌均勻后，混合液于4(TC油浴中加熱攪拌20分鐘。反應液減壓抽濾，濾液減壓濃縮后加入50ml乙腈，加畢，加熱回流20分鐘。反應混合物冷卻至室溫后減壓抽濾得到標題產物(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮馬來酸鹽23(811mg，黃色固體)，產率91.1%MSm/z(ESI):455翠+1)。實施例24(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮蘋果酸鹽室溫下，將2-羥基-丁二酸(231mg，1.72mmol)攪拌下溶解于100ml甲醇中，再分批加入(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5,6,7-四氫-卩比咯并[3,2《]嘧啶-4-酮1(560mg，1.233mmol)，200ml甲醇和100ml水。加畢，反應體系于50'C油浴中避光加熱攪拌至澄清，過濾，濾液減壓下蒸除溶劑得到黃色固體。向所得固體中加入100ml乙腈，避光加熱回流1.5小時，撤去油浴，反應體系溫度自然冷卻至室溫，過濾得到標題產物(11，2)-2-(5-氟-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-卩比咯并[3，2-c]嘧啶-4-酮蘋果酸鹽24(718mg，黃色固體)，產率99%。MSm/z(ESI):455.2(M+l)。測試例生物學評價例l:抑制細胞增殖測試下面的體外試驗是用來測定本發(fā)明化合物對于人類腫瘤細胞HUVECVEGFR高表達的細胞株抑制增殖活性。下面所述的體外細胞試驗可確定受試化合物的對高表達VEGFR的腫瘤細胞的抗血管生成活性和抑制增殖活性，其活性可用IC50值來表示。此類試驗的一般方案如下首先選擇高表達VEGFR的人類腫瘤細胞，以適宜細胞濃度下(exp5000個細胞/mlmedium)接種在96孔培養(yǎng)板上，然后將細胞在二氧化碳恒溫箱內進行培養(yǎng)，當它們生長至85%匯合，更換培養(yǎng)基為加有一系列濃度梯度(一般6到7個濃度)受試化合物溶液的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板重新放回培養(yǎng)箱，連續(xù)培養(yǎng)72個小時。72小時后，可用sulforhodamineB(SRB)方法進行測試化合物對于抑制細胞增殖活性。ICso值可通過一系列不同濃度下，受試化合物對于細胞的抑制數值進行計算。材料和方法a.二甲基亞砜(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20050806號)b.HUVEC細胞(購于Instituteofbiochemistryandcellbiology)c.Falcon100mm細胞培養(yǎng)板(BatonDickisonLabware,BatonDickisonandcompany,目錄18677號)d.corning96孔培養(yǎng)板(CorningInco卬orated,目錄3599號)e.Fisher移液管(Fisherscientific,目錄03-692-164號)f.DMEM/F12細胞培養(yǎng)基(Gibco,目錄12400-024號)g.澳大利亞胎牛血清(Gibco，目錄10099-141號)h.磷酸鹽緩沖鹽水(Gibco,目錄10010-072號)i.0.25%胰島素-EDTA(Gibco，目錄25200-056號)j.SulforhodamineB(Sigma,目錄3520-42-1號)k.醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20060508號)L三氯醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20060305號)m.Tris堿(Amresco，目錄0826號)n.II級A/B3型生物學安全工作櫥(ThermoForma目錄.HB0053-03號)0.系列II水套式二氧化碳培養(yǎng)箱(ThermoForma模型3111)p.離心機(FisherScientificMarathon8k,目錄0027-02號)q.Novastar板讀取器(BMGLabtech,目錄700-0081號)r.定軌搖床(Qilinbeier，目錄TS-1號)方案下面的方案用來測試本發(fā)明受試化合物對于HUVEC細胞的抑制細胞增殖ICs。值。1.將HUVEC細胞殖于100mmcorning培養(yǎng)板在生長基(以DMEM/F12+10。/。胎牛血清為培養(yǎng)液)中進行培養(yǎng)(37°C,5%C02)，直至細胞充分匯合；2.在100mm培養(yǎng)板中用胎牛血清洗滌HUVEC細胞，以Tyrpsin消化細胞后，再將細胞接種在corning96孔細胞培養(yǎng)板上，濃度為50000cells/ml，每個板空6孔，作為對照孔.；3.在37'C,5。/。C02條件下，將細胞在96孔板中培養(yǎng)，直至達到約85%匯合；4.用DMSO溶解受試化合物，配置20mM母液，后用DMSO稀釋母液，得到一系列濃度的受試化合物的溶液，即2mM,1mM,0.2mM,20|iM，2^M,0.25.使用細胞培養(yǎng)基(DMEM/F12+10%胎牛血清為培養(yǎng)液)稀釋上面所配置的化合物溶液。每個DMSO系列濃度化合物溶液稀釋20倍，每次在細胞培養(yǎng)基中加入5^1DMSO化合物溶液和95nl培養(yǎng)液，確保HUVEC細胞暴露在DMSO溶液中的濃度不超過0.5%，用渦旋混合，；6.當HUVEC細胞貼壁，生長達到85。/。匯合后，將培養(yǎng)基換為加有DMEM/F12+10%胎牛血清培養(yǎng)液的新培養(yǎng)基，每孔中再加入180pl培養(yǎng)液和20)id在第五步中所制備的受試化合物溶液。陰性對照細胞組，加入含有0.5%DMSO的20pi培養(yǎng)液，這樣HUVEC細胞暴露在受試化合物溶液中的最終濃度為100105^M,1^M,0.1一，0.01nM，and0細一；7.將培養(yǎng)板放入恒溫箱內，在37'C，5n/。C02條件下，連續(xù)培養(yǎng)72小時；8.72小時后，將培養(yǎng)板從恒溫箱中轉移到無菌工作室；9.將試藥級純水加入到TCA中制備固定劑(50%三氯醋酸-TCA)，將細胞慢慢地分層放在50^冷TCA溶液中；10.在4'C下，培養(yǎng)1小時，后用水洗滌數次以除去TCA、血清蛋白等。培養(yǎng)板在空氣中干燥，存儲待用?？瞻妆尘肮鈱W密度值的測定是在沒有細胞生長的培養(yǎng)基中溫育培養(yǎng)所得的數值。11.用10%醋酸溶液制備0.4%SulforhodamineB溶液，并向每孔中加入50plsulforhodamineB溶液；12.細胞著色30分鐘；13.制備10%醋酸洗漆溶液。當著色將要完畢時，棄去著色劑，用10%的醋酸溶液快速沖洗細胞。重復上述的操作直至著色劑洗凈為止，盡量減少沖洗次數以減少與蛋白結合的著色劑的去吸附。沖洗完畢后，將培養(yǎng)板在空氣中干燥；14.混合的著色劑溶解在一定體積的SulforhodamineB中，增溶溶液(10mMTris)與培養(yǎng)基原體積相同，將培養(yǎng)板在室溫下放置5分鐘，用搖床緩慢攪拌加快與染料的混合；15.用分光光度測量，在波長565nm下讀取吸光度值。吸光度數值為565nm下吸光度減去690nm下96孔板背景吸光度所得的數值；16.使用如下方法計算抑制率比值-IR=lOOx(對照組吸光度值-用藥組吸光度值)/對照組吸光度值％.IC50值可通過不同濃度下化合物抑制率比值計算得到。本發(fā)明化合物的活性本發(fā)明化合物的生化學活性通過以上的試驗進行測定，測得的IC50值見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>200.01例2:VEGF-R2激酶活性測定本試驗采用酶聯吸附免疫測定法(ELISA)測定重組人類VEGF-R2蛋白體外激酶活性。材料與試劑a.洗滌緩沖液(PBS-T緩沖液)lxPBS(137mMNaCl、2.7mMKC1、4.3mMNa2HP04、1.4mMKH2P04，調pH至7.2)和0.05%Tween-20b.1X牛血清白蛋白(BSA，Calbiochem#136593)PBS-T緩沖液c.中止反應緩沖液50mMEDTA,pH8.0d.DELFIA⑧銪標記抗鼠IgG(PerkinElmerLifeSciences#AD0124)e.DELFIA⑧信號倍增液(PerkinElmerLifeSciences#1244-105)f.DELFIAStreptavidin包96孔黃板(PerkinElmerLifeSciences#AAAND-0005)g.重組人類VEGF-R2激酶(50mMTris-HCl(pH8.0)，100mMNaCl，5mMDTT,15mM谷酰基胱氨酰甘氨酸和20。/。甘油(Cel1signalingtechnology#7787)h.10mMATP溶液(Cellsignalingtechnology#9804)i.Biotin-GastrinPrecursor(Tyr87)Peptide(Cellsignalingtechnology#1310)j.Phospho-TyrosineMousemAb(P-Tyr-100)(Cellsignalingtechnology#9411)k.HTScanTM酪氨酸激酶緩沖液(4x)lx激酶緩沖液60mMHEPES5mMMgCl25mMMnCl23nMNa3V04(Cellsignalingtechnology#9805)1.1.25MDTT(lOOOx)(Cellsignalingtechnology)方案使用如下方案進行試驗.-1.用DMSO稀釋受試化合物至所需最終濃度，在每個試驗中加入lpl待測化合物、一個陰性對照和空白對照(均不接受任何受試化合物)；2.用dH201:l稀釋6底物蛋白(Tyr87),并在每個測試中加入15pi;3.將VEGF-R2酶從-80。C直接轉移到冰上，酶解凍在冰上；4.取2.2ngVEGF-R2酶到每個測試中；5.加入10piDTT(1.25M)到2.5ml4xHTScan酪氨酸激酶緩沖液(240mMHEPESpH7.5,20mMMgCI2,20mMMnCI2,12pMNa3V04)中，制得DTT/激酶緩沖液；6.轉移0.75mlDTT/激酶緩沖液到每個每個測試中，制得4x反應混合液，并在每個測試中加入7.5pl4x反應液；7.加入2plATP(10mM)至498laldH20中，并在每個測試中加入7.530pl反應最終測試條件為60mMHEPESpH7.55mMMgCl25mMMnCl23nMNa3V041.25mMDTT10一ATP1.5|iM多肽底物22ngVEGF-R2激酶8.在25。C下，將反應管溫育30分鐘；9.每個測試中加入30W反應中止緩沖液(50mMEDTA,pH8.0)中止反應；10.在96孔streptavidin包被培養(yǎng)板每孔中加入25pi反應液和75^dH20，在室溫下，振搖60分鐘；11.每孔用200plPBS-T緩沖液洗滌3次，在紙巾上輕拍以除去剩余的液體；12.用1%牛血清白蛋白PBS-T緩沖液1:1000稀釋主要抗體Phospho-酪氨酸mAb(P-Tyr-lOO)，并在每孔中加入100^稀釋的p-Tyr-100抗體；13.室溫下，振搖溫育60分鐘；14.按第11步所述方法進行洗滌；15.用1%牛血清白蛋白PBS-T緩沖液1:500稀釋銪標記的抗鼠IgG，并在每個孔中加入100nl稀釋的抗體；16.室溫下，振搖溫育30分鐘；17.每孔用PBS-T緩沖液200^d洗滌5次，在紙巾上輕拍以除去剩余的液體；18.每孔中加入100pDELFIA⑧信號倍增液；19.室溫下，振搖溫育5分鐘；20.在波長615nm下，用合適的時間分辨板讀取器讀取熒光強度。計算抑制率比值IR(%)=100-100*(X-B)/(N-B)X-受試化合物吸光度N-陽性對照B-空白IC50值通過受測化合物一系列濃度梯度下的IR值來計算。本發(fā)明化合物的活性本發(fā)明化合物的生化學活性通過以上的試驗進行測定，測得的ICso值見下表。實施例編號<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>權利要求1.一種由通式(I)表示的化合物或其藥學上可接受的鹽其中R1、R2、R3、R4分別選自氫原子、鹵素、烷基、芳基、雜芳基、-OR5、-O[CH2CH2O]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6，其中芳基、雜芳基進一步被一個或多個選自烷基、烷氧基或者鹵素的取代基所取代；R5和R6各自分別選自氫原子或烷基，其中烷基進一步被一個或多個選自芳基、雜芳基、鹵代芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、羧酸或者羧酸酯的取代基所取代；R7是氫原子或者烷基；r是1～6。2.根據權利要求1所述的吡咯并六元雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中包括3.—種藥物組合物，其包含藥物有效劑量的如權利要求1或2任何一項所述的批咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽，及藥學上可接受的載體。4.根據權利要求1所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中所述的藥學上可接受的鹽為化合物與選自以下的酸形成的鹽蘋果酸、乳酸、馬來酸、鹽酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、梓檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸。5.根據權利要求4所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中所述的酸為蘋果酸或馬來酸。6.如權利要求1所述的吡咯并六元雜環(huán)輕基嗎啡啉化合物或其藥學上可接受的鹽的制備方法，該方法包括以下步驟氮氣氛下，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N'-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ia)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(lb)氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(IC);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(lb)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ic)進一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼垸加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯(Id);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ic)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Id)接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Id)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ie)室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲烷中與三氯氧磷和N'N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲?；磻尚膺量┎⒘狽雜環(huán)甲醛(If);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ie)v最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的吲哚酮加熱212小時即得到通式(I)所示的目標化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物；7.—種調節(jié)蛋白激酶催化活性的方法，該方法包括將所述的蛋白激酶與權利要求15中任何一項所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學上可接受的鹽接觸。8.根據權利要求7所述的方法，其中所述蛋白激酶選自受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶或絲氨酸-蘇氨酸激酶。9.一種根據權利要求1所述的化合物在制備治療與蛋白質激酶有關的疾病的藥物中的用途。10.根據權利要求9所述的用途，其中所述與蛋白質激酶有關的疾病選自與VEGFR-2，EGFR,HER-2，HER-3，HER陽4，PDGFR,c-Kit,c-Met,FGFR或Flt3相關的疾病。11.一種調節(jié)蛋白激酶催化活性的方法，其中包括將所述的蛋白激酶與權利要求3所述的組合物接觸。全文摘要本發(fā)明涉及一種通式(I)所示新的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其鹽、其制備方法及含有它們的藥物組合物和它們作為治療劑特別是作為蛋白激酶抑制劑的用途，其中通式(I)中的各取代基同說明書中的定義相同。文檔編號A61K31/5377GK101367801SQ20071014187公開日2009年2月18日申請日期2007年8月15日優(yōu)先權日2007年8月15日發(fā)明者楊家亮,蘇熠東,趙富強,鄧炳初申請人:上海恒瑞醫(yī)藥有限公司