專利名稱：芹菜素囊泡制劑及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，確切地說它是利用非離子表面活性劑與芹菜 素形成的芹菜素囊泡制劑及其制備工藝。
背景技術：
芹菜素(5,7,4，-三羥基黃酮)屬于黃酮類，廣泛存在于傘形科植物旱 芽 (Apium graveolens var. dulce) 葉； 巻柏禾斗巻柏 (Selaginella tamariscina)全草；柏科圓柏(Sabina chinens is)葉中。芽菜素具有多種 藥理活性(l)抗腫瘤作用芹菜素可以使乳腺癌細胞(MCF-7和MDA-MB -468)發(fā)生G2/M期阻滯。用斧菜素處理細胞3 d后，細胞的生長均受到 明顯的抑制，其IC50分別為7. 18Mg/ml和8. 19wg/ml;芹菜素可以使 人類前列腺癌細胞及人類白血病細胞HL - 60發(fā)生選擇性周期阻滯，并誘 導細胞凋亡。其誘導凋亡的機制可能是通過細胞色素C的釋放及切冬酶 (casep2ase - 9、 casepase-3) 的激活而實現(Ant icancer Res , 2001,21 (1A) :413 420);斧菜素可以抑制黑色素瘤細胞的侵襲和轉移，以斧菜 素作用于小鼠隨后向其尾靜脈注射黑色素瘤細胞，14~18d后小鼠斷髓處 死，并記數鼠肺中黑色素瘤細胞的克隆數。結果顯示，芹菜素可以明顯降 低肺組織中黑色素瘤細胞克隆數量，且呈劑量依賴關系(Int J Cancer ，2000 , 87 :595 - 600.)。 (2)抗炎作用急、慢性炎癥的發(fā)生 均和NO有關，NO是由NO合酶(NOS)催化合成的，而在病理狀態(tài)下過多的 NO是由誘導型NO合酶(iNOS)催化生產的，芹菜素可顯著抑制脂多糖(LPS) 引起的巨噬細胞iNOS高表達，因而能夠顯著降低細胞內N0含量，然而芽 菜素對iNOS本身的活力并沒有影響(action. Bioorg Med Chem， 2003, 11(9): 1995)。 (3)降血壓和舒張血管作用對原發(fā)性高血壓的降壓效果 明顯，且未發(fā)現快速耐受現象，關于降壓機制的初步分析，認為主要是通 過頸動脈體和主動脈弓的化學感受器的反射作用引起的(中藥活血化瘀有 效成分藥理與應用.哈爾濱黑龍江科學技術出版社，1999: 22)。 (4)抗 動脈硬化和血栓癥芹菜素-7-0- (3 -D-吡喃葡萄糖醛酸可顯著減少12 -HETE的產生，說明芹菜素及其苷可通過抑制血小板的花生四烯酸代謝途 徑來抵抗動脈硬化和血栓形成(旱柳葉中抗血栓、抗動脈硬化活性成分的研 究.中藥材，1999， 22(3): 13)。 (5)抗焦慮作用與傳統(tǒng)的抗焦慮藥苯 二氮類藥物(BDZ)相同，芹菜素可與GA-BA-BDZ—C1受體復合物的BDZ 受體結合，通過增強GABA能神經傳遞來發(fā)揮抗焦慮作用，然而與BDZ相比， 芽菜素只有微弱的鎮(zhèn)靜催眠作用，不會產生肌肉松馳和抗驚厥作用，因而 副作用大大降低(effects. PlantaMed, 1995， 61: 213)。 (5)雌激素樣作用—芹菜素是一種植物性雌激素，與雌激素結構相似，有雌激素和抗雌激 素樣作用。芹菜素(10I9M)可以抑制卵巢分泌雌激素和孕激素(錦州醫(yī)學院 學報，2005.Dec., 26 (6), (9-12))。也有將芹菜素用于治療脂肪肝、肥胖癥和作為軟骨再生劑用于治療骨關節(jié)炎的報道(中國專利申請 號03127190. 1和200480030411. X)，但芹菜素相關制劑及臨床應用的其它 研究，迄今為止未見國內外文獻報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥黃酮類囊泡制劑，即芹菜素囊泡制劑。 本發(fā)明是通過如下技術方案完成的本發(fā)明所涉及的基本處方(液體，按 重量體積算)如下斧菜素0.25%-20%; 非離子表面活性劑40°/。-90%; 膽固醇8.7%-48. 8%; 所說的非離子表面活性劑為司盤20、司盤40、司盤60、司盤80、吐 溫20、吐溫60、吐溫80、節(jié)澤、賣澤、泊洛沙姆或其任意比例混合物。 囊泡、前體囊泡的制備如下(1) 芹菜素囊泡的制備按比例將芹菜素、非離子表面活性劑與(或不與)膽固醇共同溶于有 機溶劑如乙醇、乙醚、氯仿和二氯甲烷及其混合溶液中，水相介質為水或 緩沖液(包括磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液， pH=4. 0-8. 0 ),采用薄膜分散超聲法、乙醇注入法、逆相蒸發(fā)法制得芹菜 素囊泡溶液。(2) 斧菜素前體囊泡的制備于上述囊泡中加入支撐劑(支撐劑為一種或任何兩種或兩種以上混合 的多元醇，海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、甘露醇及其混合物), 溶解后，進行噴霧干燥或冷凍干燥即得。釆用上述冷凍干燥法和噴霧干操法方法所獲得的芹菜素前體囊泡再水 化時，能夠重新分散(或重建)成粒度和形態(tài)與原液中的囊泡無顯著差別 的囊泡。(3) 包封率測定評價脂質體質量的指標有粒徑、粒徑分布和包封率等。 其中包封率是衡量脂質體內在質量的一個重要指標。常見的包封率測定方 法有凝膠柱法、超速離心法、超濾法等。我們釆用微柱離心法測定包封率， 具有樣品用量少、耗時短、操作簡單、成本低等優(yōu)點。-具體方法取斧菜素囊泡0. 2ml各兩份， 一份直接加入5ml容量瓶中， 加入適量TritonX100,用蒸餾水定容后測定吸光度；另一份加入離心 (2000r/min)后的SephadexG-50凝膠小柱，收集前兩管離心液，加入適 量TritonX100后定容于5ml容量瓶中測定吸光度(A)，按下列公式計算包 封率。(芹菜素的最大吸收波長為312nm)E % = ( A,/A2) x 100 % -其中，E %為包封率；人1為過凝膠柱樣品的A值；A2為未過凝膠柱樣 品的A值。囊泡可以為了提高囊泡貯存過程中的穩(wěn)定性，還可在囊泡溶液中加入 適當的支撐劑，經冷凍干燥和噴霧干燥將其制成前體囊泡，并可用此前體 囊泡制備無菌粉針、片劑、顆粒劑、膠囊劑等。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明選擇適宜的非離子表面活性劑將芹菜素制成囊
泡，本發(fā)明具有較高的包封率，粒徑較小。所制得的囊泡按芹菜素計包封率在60%以上，粒徑為160 - 220nm。提高生物利用度，并實現靶向給藥目 的，具有明顯的緩釋作用，從而延長藥物的作用時間。所述的囊泡可以制 成注射劑、口服劑型、糖漿、滴劑、噴鼻劑、外用軟膏等制劑，可以經靜 脈、肌肉、口腔、鼻腔等途徑給藥。


圖1為0. 5小時小鼠體內組織分布圖。圖2為l小時小鼠體內組織分布圖。圖3為3小時小鼠體內組織分布圖。圖4為5小時小鼠體內組織分布圖。圖5為8小時小鼠體內組織分布圖。圖中SL AP表示芹菜素溶液組，Nios AP表示斧菜素囊泡組。
具體實施例方式芹菜素囊泡在小鼠體內的組織分布研究昆明種小鼠隨機分成兩組，以注射芹菜素水針劑的一組為對照組，另 外一組注射芹菜素囊泡，使每組中每個時間點均有6只動物。12h前禁食 不禁水，尾靜脈注射，2.0mg/kg，給藥后于不同時間點0.5 h, lh, 3h, 5h， 8h摘除眼球取血后處死，取心、肝、脾、肺、腎、腦組織。取各組 織約0. lg加入生理鹽水勻漿(小于0. lg的組織直接勻漿)，加入10(il水 飛薊賓內標液(0. 4mg/mL)，渦旋混勻，加入lmL甲醇沉淀蛋白，渦旋混勻 后4000rpm/min離心15min精密移取上清液至離心管中，氮氣吹干，加入 200nl流動相溶解，進HPLC檢測。色譜條件Shimadzu色譜柱(250 mmx 4. 6 mm)，流動相為水(0. 1%磷酸)乙腈(體積比為45: 55),流速1. 0 mL/min， 檢測波長312 nm，進樣量為2(VL。數據處理方法小鼠體內組織分布的血 藥濃度數據用中國藥理學會數學藥理委員會編制的3P87藥動學程序進行 處理。藥時曲線下面積(AUC。—8 )分別由梯形法求得，并經過對數轉換 后進行方差分析。附圖1-5.組織分布結果表明，制劑組明顯延長了藥物在體內的循環(huán)時間，生物 利用度為129%，具有明顯的緩釋作用。實施例l:芹菜素囊泡的制備 處方芹菜素 0.05gTween 80 0. 5g膽固醇 0. 25g乙醇 適量 - pH7.4的磷酸鹽緩沖液 適量制成100mL制備工藝稱取處方量的芹菜素、Tween 80和膽固醇于燒杯中，加入 適量乙醇溶解，在55。C水浴條件下，注入到pH7.4的磷酸鹽緩沖液中，制 得芹菜素囊泡溶液。所得囊泡進行包封率測定，包封率為65.80%。實施例2:芹菜素囊泡的制備 處方芹菜素 0. 05gSpan8G 0.4g膽固醇 0. 20g乙醇 適量pH7. 4的磷酸鹽緩沖液 制成lOOmL 制備工藝同上，包封率為60.68%。 實施例3:芹菜素囊泡的制備 處方芽菜素 Tween 80 0.05g 賣澤 0,50g 膽固醇 0.20g乙醇 適量pH7. 4的磷酸鹽緩沖液 適量 制成lOOmL制備工藝稱取處方量的芹菜素、賣澤和膽固醇于燒杯中，加入適量 的乙醇和氯仿混合溶劑溶解后，減壓蒸發(fā)除去有機溶劑成薄膜，加入磷酸 鹽緩沖液，水化1 ~ 2小時，高壓均質機處理5分鐘，過0 . 22um濾 膜，得芹菜素囊泡溶液。所得囊泡進行包封率測定，包封率為68.62%。 實施例4:芹菜素囊泡的制備 處方芹菜素 0. 05g節(jié)澤 0. 40g膽固醇 0. 20g乙醇 適量 pH7. 4的磷酸鹽緩沖液 適量 制成lOOmL 制備工藝同上，包封率為69.52%。 實施例5:芹菜素囊泡的制備 處方芽菜素 0. 05gTween 80 0. 30g賣澤 0. 10g膽固醇 0. 20g乙醇 適量 pH7. 4的磷酸鹽緩沖液 適量 制成lOOmL -制備工藝同上，包封率為65.56%。 實施例6:芹菜素囊泡的制備 處方芹菜素 0. 05gTween 80 0. 40gSpan80 0. 10g膽固醇 0. 20g乙醇pH7.4的磷酸鹽緩沖液 制成lOOmL 制備工藝同上，包封率為68.09%。 實施例7:芹菜素前體囊泡的制備 處方芹菜素 0. 05gTween 80 0. 50g膽固醇 0. 20g乙醇 適量 蒸餾水 適量 制成lOOmL制備工藝同實例1,包封率為70.47%。在此囊泡中加入2%的甘露醇， 溶解后進行冷凍干燥，得前體囊泡，該前體囊泡水化后的包封率為65. 15%。 實施例8:芹菜素前體囊泡的制備 處方芹菜素 0. Tween 80 0.賣澤 0. 膽固醇 0.乙醇 蒸館水制成lOOmL制備工藝同實例l,包封率為73.47%。在此囊泡中加入5%的乳糖， :后進行噴霧干燥，得前體囊泡，該前體囊泡水化后的包封率為69.48%,溶)05g 40g10g 20g
權利要求
1、芹菜素囊泡制劑，其特征在于組分組成按重量百分比如下芹菜素0.25％-20％；非離子表面活性劑40％-90％；膽固醇48.9％-8.7％。
2、 根據權利要求1所述的芹菜素囊泡制劑，其特征在于所述的 非離子表面活性劑為司盤20、司盤40、司盤60、司盤80、吐溫20、吐 溫60、吐溫80、節(jié)澤、賣澤、泊洛沙姆或其任意比例混合物。
3、 根據權利要求1所述的芽菜素囊泡制劑，其特征在于制劑可 以為注射劑、滴鼻劑、軟膏劑、口服液。
4、 根據權利要求3所述的芹菜素囊泡制劑，其特征在于注射劑 包括注射液和無菌粉針。
5、 根據權利要求4所述的芽菜素囊泡制劑，其特征在于無菌粉針為注射液中加入適當支持劑或賦形劑，通過噴霧干燥和冷凍干燥獲得。
6、 根據權利要求5所述的芹菜素囊泡制劑，其特征在于所述的 支持劑為一種或任何兩種或兩種以上混合的多元醇，海藻糖、蔗糖、葡萄 糖、乳糖、右旋糖營、甘露醇及其混合物。
7、 一種如權利要求1所述的芹菜素囊泡制劑的制備方法，其特征在 于可以采用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、水化法、擠出法、 機械法，pH梯度法等。
8、根據權利要求7所述的芹菜素囊泡制劑的制備方法,其特征在于機械法包括使用均質機、乳勻機、擠出儀、納米機、勻漿機、高壓微射流 等各種機械設備制備囊泡的方法。
全文摘要
本發(fā)明提供了芹菜素囊泡制劑及其制備工藝。該制劑按重量體積百分比如下芹菜素為0.25％-20％，非離子表面活性劑為40％-90％，膽固醇為8.7-48.8％，凍干保護劑為2％-20％。所說的非離子表面活性劑為司盤20、司盤40、司盤60、司盤80、吐溫20、吐溫60、吐溫80、芐澤、賣澤、泊洛沙姆及其混合物；本發(fā)明可以制成注射劑、滴鼻劑、軟膏劑、口服液等制劑，可以經靜脈、肌肉、鼻腔、口腔等途徑給藥。采用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、水化法、擠出法、機械法，pH梯度法等制備。本發(fā)明制劑具有較高的包封率，提高了藥物穩(wěn)定性，具有明顯的緩釋作用。
文檔編號A61K31/352GK101164536SQ20071015758
公開日2008年4月23日 申請日期2007年10月22日 優(yōu)先權日2007年10月22日
發(fā)明者丹 劉, 胡海洋, 趙秀麗, 陳大為 申請人:沈陽藥科大學