專利名稱：：一種新型的抗乙型肝炎病毒藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物化學(xué)合成領(lǐng)域，特別涉及一種以釩氧稀土雜多化合物為抗乙型肝炎病毒藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：病毒是引起人類傳染病的重要病原體之一。在人類的傳染病中，由病毒引起的疾病約占3/4。由病毒引起的疾病具有傳染性強(qiáng)、流行面廣、發(fā)病率高等特點(diǎn)。例如由乙肝病毒引起的乙型肝炎全世界感染者現(xiàn)已超過20億人。研究表明，乙型肝炎患者發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌的機(jī)率比正常人高200-250倍。目前臨床上常用的治療乙型肝炎病毒的藥物，主要有阿德福韋、更昔洛韋、泛昔洛韋和以及嘧咬類的拉米夫定。這些藥物屬核苷類藥物，存在易產(chǎn)生耐藥性、抗病毒譜較窄、多數(shù)具有毒副作用、而且價(jià)格較高、用藥時(shí)間較長等缺點(diǎn)，至使其廣泛應(yīng)用受到了很大的限制。雜多化合物的抗病毒研究始于七十年代，自1971年首次發(fā)現(xiàn)雜多陰離子[SiWuO40]"具有抑制白血病病毒活性以來，相繼發(fā)現(xiàn)有些雜多化合物對合胞病毒、麻滲病毒、腮腺炎病毒等多種病毒有較強(qiáng)的抑制作用。近年來雜多化合物的抗病毒研究主要集中在抗HIV病毒、流感病毒等多種RNA病毒的研究上。而國內(nèi)外尚未見利用釩氧稀土雜多化合物抗乙型肝炎病毒的報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種毒性低、價(jià)格低廉、能有效抑制乙肝病毒的抗乙型肝炎病毒藥物。它是一種釩氧稀土雜多化合物。本發(fā)明的另一目的是提供新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是新型的抗乙型肝炎病毒藥物以通式[Ln(V03)2].nH20所表示，其中Ln為鑭系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一種，n=l~5。新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法是將稀土氯化物和硫酸氧釩溶解在蒸餾水中，滴加有機(jī)胺或有機(jī)羧酸，攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，在90-200。C保溫l-9天，過濾、濾液冷卻，濾液冷卻后析出淺黃色晶體[Ln(V03)2].nH20。其中，稀土氯化物和硫酸氧釩的摩爾比為1:2,每毫摩爾稀土氯化物加入蒸餾水1040ml,加入有機(jī)胺或有機(jī)羧酸0.10.5克。所述的稀土氯化物為La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy的氯化物。所述的有機(jī)胺是鹽酸羥胺、N，N-二乙基羥胺或肼的一種。所述的有機(jī)羧酸是2-吡咬硫代乙酸、3-吡啶硫代乙酸或代乙酸的一種或兩種以上混合物。本發(fā)明的抗乙型肝炎病毒藥物易溶于水或極性有機(jī)溶劑中，其水溶液在pH=48時(shí)化學(xué)性質(zhì)是穩(wěn)定的，其水溶液的酸堿穩(wěn)定性是依據(jù)電位滴定法測定的。本發(fā)明的新型的抗乙型肝炎病毒藥物(也即釩氧稀土雜多化合物)具有二維結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)如圖l所示，稀土離子是+2的，釩原子是+5價(jià)的。九配位的稀土離子和四配位的釩中心相互連接構(gòu)成二維層狀化合物。本發(fā)明的抗乙型肝炎病毒藥物，在治療乙型肝炎中的應(yīng)用時(shí)，其有效劑量一般為，按成人一天0.1克，比較合適?？梢约兊拟C氧稀土雜多化合物服用，也可按常規(guī)生產(chǎn)工藝制成片劑，粉劑，膠嚢，水劑。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的抗乙型肝炎病毒藥物生產(chǎn)工藝簡單，原料易得，產(chǎn)率高，產(chǎn)率可達(dá)52%,生產(chǎn)成本降低，價(jià)格低廉。通過對乙肝病毒的抑制作用試驗(yàn)，本發(fā)明所涉及的藥物對HBeAg和HBsAg均有抑制作用，對HBeAg分泌的抑制率在第9天最高，藥物濃度為10pg/ml抑制率達(dá)68.4%，藥物濃度為80jag/ml抑制率達(dá)94.2%。第九天時(shí)的半數(shù)抑制濃度(IC50)為7.8|ug/ml。對HBsAg分泌的抑制作用，當(dāng)藥物作用第9天時(shí)HBsAg的分泌量均受到了明顯的抑制，其中濃度為5.6jug/ml對HBsAg分泌量抑制率達(dá)60.2%。通過對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)給藥后觀察小鼠的中毒表現(xiàn)，連續(xù)觀察14d,用改良寇氏法測定半數(shù)致死劑量LD50為2169mg/kg。根據(jù)WHO毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，該受試藥物為低等毒性。圖1為本發(fā)明的抗乙型肝炎病毒藥物的分子結(jié)構(gòu)示意圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1[Ce(V03)2]'2H20(POM-6)的制備將稀土氯化鈰1.0mmol;硫酸氧釩2.0mmol溶解在23ml的蒸餾水中，滴加O.lg鹽酸羥胺攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，160。C保溫7天，濾液冷卻后析出淺黃色晶體[Ce(V03)2]'2H20。實(shí)施例2[La(V03)2]'2H20的制備將稀土氯化鑭1.0mmol;硫酸氧釩2.0mmol溶解在15ml的蒸餾水中，滴加0.3g4-吡啶基硫代乙酸攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，200°C保溫2天，濾液冷卻后析出淺黃色晶體[La(V03)2]'2H20。實(shí)施例3[Pr(V03)2]'2H20的制備將稀土氯化鐠1.0mmol;硫酸氧釩2.0mmol溶解在40ml的蒸餾水中，滴力。0.1g2-吡咬硫代乙酸和0.4g3-吡啶基硫代乙酸混合物，攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，90。C保溫9天，濾液冷卻后析出淺黃色晶體[Pr(V03)2]'2H20。實(shí)施例4藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)取實(shí)施例1的抗乙型肝炎病毒藥物(POM-6)進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)一、對乙肝病毒的抑制作用1.受試抗乙型肝炎病毒藥物對2.2.15細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)取處于指數(shù)生長期的2.2.15細(xì)胞，用含10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為5xl04/ml，于96孔培養(yǎng)板中加入200pl單細(xì)胞懸液，于37。C，5%<302條件下培養(yǎng)過夜。吸棄上清，實(shí)驗(yàn)組每孔加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)液200^1,最高濃度為2000jag/ml，最低濃度為125pg/ml，倍比稀釋。陰性對照。對照組每孔加入含10。/。胎牛血清的IMDM培養(yǎng)液200jul，于37。C，5%C02條件下培養(yǎng)48h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4h每孔加入MTT液(5mg/ml)20pl，再培養(yǎng)4h,棄上清，每孔加150plDMSO，振蕩5分鐘，用酶標(biāo)儀在490nm波長下測定OD值。每個(gè)濃度三復(fù)孔。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，從表中可以看出藥物對2.2.15細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50為732.86pg/ml。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.受試抗乙型肝炎病毒藥物對HBeAg、HBsAg的抑制實(shí)驗(yàn)取處于對數(shù)生長期的2.2.15細(xì)胞，用含'10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為5x104/ml，于24孔培養(yǎng)板中每孔加入lml單細(xì)胞懸液，于37。C,5。/。C02條件下培養(yǎng)，細(xì)胞長至匯合時(shí)實(shí)驗(yàn)組每孔加入含不同濃度受試藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液lml,最高濃度為80^g/ml，倍比稀釋，最低濃度為5.0嗎/ml。陰性對照組每孔加入含10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)液lml，陽性對照組每孔加入含不同濃度阿德福韋(Lamivudine)的培養(yǎng)液lml，繼續(xù)培養(yǎng)。每兩天收集上清液，同時(shí)補(bǔ)充等體積的含不同濃度受試藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液，上清液于-20。C保存。于加藥后第9天收集上清液后，收集2.2.15細(xì)胞，PBS懸浮于Eppendorf管中，離心棄上清，加入DEPC-H20,-70°0:凍存。取不同時(shí)間收集的上清液，用乙型肝炎病毒e(s)抗原診斷試劑盒檢測化合物對細(xì)胞分泌HBeAg的抑制作用。受試抗乙型肝炎病毒藥物[Ce(V03)2]對HBeAg的抑制作用見表2,從表中可以看出隨著受試藥物濃度的增加，受試藥物對HBeAg分泌的抑制作用增強(qiáng)，受試藥物對HBeAg分泌的抑制率在第9天最高，藥物濃度為10pg/ml抑制率達(dá)68.4。/。，藥物濃度為80嗎/ml抑制率達(dá)94.2%。第九天時(shí)的半數(shù)抑制濃度(IC50)為7.8pg/ml。表2受試藥物POM-6對HBeAg的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>受試藥物對HBsAg的抑制作用見表3。從表3可以看出，受試藥物對HbsAg均有抑制作用，且隨著受試藥物濃度的增加，受試藥物對HBsAg分泌的抑制作用增強(qiáng)，當(dāng)藥物作用第9天時(shí)HBsAg的分泌量均受到了明顯的抑制，其中受試藥物濃度為5.6txg/ml對HBsAg分泌量抑制率達(dá)60.2%。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>二.受試藥物的急性毒性實(shí)驗(yàn)選取體重18~22g小鼠，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，常規(guī)喂養(yǎng)3~5天，健康者供實(shí)驗(yàn)用。實(shí)驗(yàn)前禁食12h,給藥后3h喂食。陰性對照組口服生理鹽水；實(shí)驗(yàn)組共6個(gè)劑量組，分別為406.23、641.85、1014.12、1602.31、2531.65、4000mg/kg體重。經(jīng)口一次灌胃給藥，給藥后觀察小鼠的中毒表現(xiàn)，連續(xù)觀察14d,記錄死亡數(shù)(表4)。用改良寇氏法測定半數(shù)致死劑量LD50為2169.83mg/kg。根據(jù)WHO毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，該受試藥物為低等毒性。表4受試藥物急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、一種新型的抗乙型肝炎病毒藥物，其特征在于所述的抗乙型肝炎病毒藥物以通式[Ln(VO3)2]·nH2O所表示，其中Ln為鑭系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一種，n＝1～5。2、權(quán)利要求1所述的新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法，其特征在于是將稀土氯化物和硫酸氧釩溶解在蒸餾水中，滴加有機(jī)胺或有機(jī)羧酸，攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，在90-200°C保溫1-9天后，緩慢降溫，過濾、結(jié)晶。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法，其特征在于所述的稀土氯化物為La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy的氯化物。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)胺是鹽酸羥胺、N,N-二乙基羥胺或肼中的一種。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒藥物的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)羧酸是2-吡咬硫代乙酸、3-吡啶硫代乙酸或4-吡咬」琉代乙酸的一種或兩種以上混合物。全文摘要本發(fā)明涉及一種新型的抗乙型肝炎病毒藥物及其制備方法。采用的技術(shù)方案是抗乙型肝炎病毒藥物，以通式Ln(VO₃)₂]·nH₂O所表示，其中Ln為鑭系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pr、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一種，n＝1～5?？挂倚透窝撞《舅幬锏闹苽浞椒ㄊ菍⑾⊥谅然锖土蛩嵫踱C溶解在蒸餾水中，滴加有機(jī)胺或有機(jī)羧酸，攪拌后，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)釜中，在90-200℃保溫1-9天，過濾、濾液冷卻。本發(fā)明具有價(jià)格低廉，毒性低，能有效抑制乙肝病毒。文檔編號A61K33/24GK101161248SQ200710157960公開日2008年4月16日申請日期2007年11月6日優(yōu)先權(quán)日2007年11月6日發(fā)明者何永科,娟李,韓正波申請人:遼寧大學(xué)