專利名稱：一種用于人外周血來源造血干細(xì)胞的培養(yǎng)基的制作方法
一種用于人外周血來源造血干細(xì)胞的培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人外周血來源造血干細(xì)胞的培養(yǎng)基，具體來說，本發(fā)明提 供了一種對體外釆集的人外周血來源造血干細(xì)胞進(jìn)行短期培養(yǎng)以提高其抗腫瘤 活性的培養(yǎng)基。本發(fā)明還涉及一種用于對造血干細(xì)胞進(jìn)行短期培養(yǎng)的培養(yǎng)基。 本發(fā)明最后還涉及一種造血干細(xì)胞的移植方法，其可顯著提高患者的生存能力。
背景技術(shù)：
造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells , HSC)是一小群具有高度自我復(fù)制能 力和多向分化潛能的造血前體細(xì)胞。其基本特征是l)高度的自我更新或自我 復(fù)制能力；2)可分化生成所有類型的血細(xì)胞。正常情況下，造血干細(xì)胞通過不 對稱性的有絲分裂，不斷產(chǎn)生大量祖細(xì)胞，造血祖細(xì)胞進(jìn)一步增殖和分化，補 充和維持人體外周血細(xì)胞。在造血細(xì)胞發(fā)育譜系中，造血干細(xì)胞的位置處頂端， 具有極其重要的生物學(xué)功能。近10多年來，隨著外周血干細(xì)胞移植治療的開展， 對造血干細(xì)胞的研究日益深入。細(xì)胞的增殖分化、發(fā)育成熟、遷移定居、衰老 凋亡和癌變等生命科學(xué)中的許多基本問題，已成為基礎(chǔ)研究的主要熱點。
造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)是近幾十年 逐步發(fā)展起來的一種治療方法，通過大劑量放化療或其他免疫抑制預(yù)處理，清 除受體體內(nèi)腫瘤細(xì)胞、異?？寺〖?xì)胞，阻斷發(fā)病機制，然后把自體或異體造血 干細(xì)胞移植給受體，使受體重建正常造血或免疫功能，從而達(dá)到治療目的一種 治療手段。目前造血干細(xì)胞移植是治療/根治惡性或難治性血液病、遺傳性疾病、 免疫性疾病及某些實體瘤的有效方式(參見Paneesha S， Milligan DW. Stem cell transplantation for chronic lymphocytic leukaemia.Br J Haematol. 2005 Jan; 128(2): 145-52.; Bredeson CN, Pavletic SZ. Considerations when designing a clinical trial of haematopoietic stem cell transplantation for autoimmune disease.BestPract Res Clin Haematol. 2004 Jun;17(2):327-43 )。 1955年Thomas等率先開展人 骨髓移植工作，并獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)獎，至今已半個世紀(jì)，目前，造血干細(xì) 胞移植已在國內(nèi)外廣泛用于臨床。
常規(guī)的造血干細(xì)胞移植方法，根據(jù)移植供體細(xì)胞的來源分為自體造血干細(xì) 胞移植(Tomblyn M， Winter JN. Autologous hematopoietic stem cell transplant in first remission in non-Hodgkin's lymphoma. Expert Rev Anticancer Ther. 2003 Jun;3(3):281-94 )和異體造血干細(xì)胞移植(Bensiger WI, Clift R , Martin P , et al. Allogeneic peripheral blood stem cell transplantation in patients with advanced hematologic malignancies: aretrospective comparison with marrow transplantation. Blood ， 1996,88:2794-2799.)兩大類。理論上異體干細(xì)胞移植是較為理想的方 式，但由于存在供體來源有限、配型問題以及移植相關(guān)病死率高等問題，其臨 床應(yīng)用受到一定限制。自體干細(xì)胞移植相關(guān)病死率相對較低,故目前應(yīng)用較多。 造血干細(xì)胞移植根據(jù)血液來源的不同區(qū)分為骨髓、外周血和臍帶血造血干細(xì)胞 移植。由于外周血干細(xì)胞移植相對于其他來源的干細(xì)胞移植具有釆集安全簡便、 造血和免疫系統(tǒng)重建快等優(yōu)點，而且目前觀察到的短期療效令人滿意，因此是 目前臨床采用較多發(fā)展較快的一種方法。
目前現(xiàn)有技術(shù)中外周血干細(xì)胞移植步驟通常分為以下幾大基本步驟
1) 外周血干細(xì)胞的動員與釆集；
2) 外周血干細(xì)胞的保存、復(fù)蘇；
3) 外周血干細(xì)胞向受體患者體內(nèi)的回輸；
4) 移植后的術(shù)后觀察。并且根據(jù)供體的不同，還可根據(jù)需要加入預(yù)防患者
移植物抗宿主病的預(yù)處理步驟(參見外周血干細(xì)胞移植[M],北京: 人民衛(wèi)生出版社，2000;"異基因外周血干細(xì)胞移植治療惡性血液病" 中華血液學(xué)雜志2002年8月第23卷第8期)。 但是現(xiàn)有技術(shù)中上述外周血干細(xì)胞移植中存在以下缺點
1) 現(xiàn)有技術(shù)中，目前還沒有一種短期提高造血干細(xì)胞抗腫瘤活性的體外培
養(yǎng)方法，以及適合的造血干細(xì)胞離體培養(yǎng)基；
2) 傳統(tǒng)造血干細(xì)胞移植方法中，從體內(nèi)釆集到造血干細(xì)胞后，造血干細(xì)胞
通常置于細(xì)胞凍存(對自體移植而言凍存，對異體移植而言可不凍存，但均缺乏一個體外迅速提升抗腫瘤活性的激活過程)液中在-196'C液 氮保存，解凍后直接輸入受體體內(nèi)，因而保存后的造血干細(xì)胞活性及 數(shù)量均有所下降；
3)移植后的造血干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞等的殺傷能力有限，因此術(shù)后效果一 般，其對腫瘤生長的抑制能力有待進(jìn)一步提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于彌補現(xiàn)有技術(shù)中缺乏造血干細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的缺陷，提 供了一種效果較好的人外周血來源造血干細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能顯著提高 造血干細(xì)胞的抗腫瘤活性。
本發(fā)明提供了一種提高了人外周血來源造血干細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力的培 養(yǎng)基，并對培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)活性檢測。將培養(yǎng)后的外周血來源造血干 細(xì)胞收集、洗滌后，回輸給腫瘤患者，可以發(fā)現(xiàn)患者食欲增加，睡眠和體力狀 況改善，卡式評分指標(biāo)提高，個別有水腫、行動障礙的患者，在治療后癥狀明 顯好轉(zhuǎn)。這表明將該細(xì)胞回輸?shù)襟w內(nèi)后，能提高免疫力，起到治療腫瘤的目的。
本發(fā)明的上述培養(yǎng)基中所用的培養(yǎng)基命名為IN - VITR03,含有Iscobe改良 的Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) 1000亳升、0.1-10嗎/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml 的膽固醇、5-20fig/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白。緩沖溶液是碳酸氫鈉或 HEPES,培養(yǎng)基的pH值為7.0。
以1000亳升為依據(jù)，營養(yǎng)因子為胰島素、2-巰基乙醇、丙酮酸鈉、NaH2CO3、 谷氨酰胺。營養(yǎng)因子的使用量為常規(guī)量即可，這些組分在培養(yǎng)基中的使用量屬 于公知常識。本發(fā)明的發(fā)明點在于上述組分的組合，發(fā)明人經(jīng)過了多種的試驗， 發(fā)現(xiàn)上述的組合效果非常好。
具體而言，本發(fā)明涉及如下內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種提高人外周血來源造血干細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力的方 法，該方法包括首先對外周血來源的造血干細(xì)胞進(jìn)行動員和釆集；然后將釆集 到的外周血來源造血干細(xì)胞進(jìn)行體外短期活化培養(yǎng)，并對培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行生 物學(xué)活性檢測；將培養(yǎng)后的外周血來源造血干細(xì)胞收集、洗滌后進(jìn)行回輸。
本發(fā)明還提供了一種體外短期活化培養(yǎng)造血干細(xì)胞的方法，該方法為將新鮮釆集的外周血來源造血干細(xì)胞經(jīng)生理鹽水洗滌后，用無菌PBS對倍稀釋，即
比例為l: l的稀釋；用Ficoll分離液去除紅細(xì)胞，離心分離目的造血干細(xì)胞，離 心條件為1800rpm, 20min;用PBS洗滌造血干細(xì)胞兩遍，1400rpm, 15min 離心；臺盼藍(lán)拒染法計數(shù)標(biāo)本，加入含有rhlL-2 100- 5000 U/mL和IFN-y 100-5000U/mL的無血清培養(yǎng)基并調(diào)整細(xì)胞濃度為5xlO6/mL,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培 養(yǎng)條件為37'C, 5%C02;培養(yǎng)活化3 4h后收集細(xì)胞，并進(jìn)行生物活性檢測。
如上文所述的培養(yǎng)基，其中所述的培養(yǎng)基的具體成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) IOOO毫升、0.1-10嗎/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml的膽 固醇、5-20昭/ml的甘油酯、300fig/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES, 培養(yǎng)基的pH值為7.0。
以1000亳升為依據(jù)，上述培養(yǎng)基還可以添加的營養(yǎng)因子為胰島素、2-巰基 乙醇、丙酮酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺?？梢园凑粘Ｒ?guī)使用量添加。 一種釆用上文所述方法短期活化培養(yǎng)得到的造血干細(xì)胞。 如上文所述的造血干細(xì)胞在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。 如上文所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤為淋巴瘤、肺癌、結(jié)腸癌或乳腺癌。


圖l:外周血來源造血干細(xì)胞釆集、培養(yǎng)前后的表型特點； 圖2:外周血來源造血干細(xì)胞培養(yǎng)前后形成的粒單細(xì)胞集落形態(tài)(A.活化 前；B.活化后)；
圖3:不同效靶比下外周血來源造血干細(xì)胞培養(yǎng)前后對多種實體腫瘤的殺傷 活性；
圖4:釆用本發(fā)明培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的細(xì)胞集落培養(yǎng)前4- 1，培養(yǎng)后 4-2。
具體實施方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。 如下實施例僅為說明本發(fā)明人外周血來源的造血干細(xì)胞的活化培養(yǎng)方法，不是為限制本發(fā)明的保護范圍。如下實施例中所用的化學(xué)試劑、細(xì)胞因子和實
驗用的腫瘤細(xì)胞系，如無特別說明均購于GIBICO公司；如下實施例中所涉及到
的檢測，及評價方法均為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的檢測、評價方法。 實施例l
外周血來源造血干細(xì)胞的釆集
如下實施例僅為說明本發(fā)明人外周血來源的造血干細(xì)胞的活化培養(yǎng)方法， 不是為限制本發(fā)明的保護范圍。如下實施例中所用的化學(xué)試劑、細(xì)胞因子和實
驗用的腫瘤細(xì)胞系，如無特別說明均購于GIBICO公司；如下實施例中所涉及到 的檢測，及評價方法均為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的檢測、評價方法。
實施例2
外周血來源造血干細(xì)胞的體外短期培養(yǎng)活化。 實施例2-1
將新鮮采集的外周血來源造血干細(xì)胞標(biāo)本經(jīng)生理鹽水洗滌后，用無菌PBS 對倍稀釋。用Ficoll分離液去除紅細(xì)胞，離心分離目的造血干細(xì)胞，離心條件為 1800rpm, 20min。用PBS洗滌造血干細(xì)胞兩遍，1400rpm, 15min離心。臺盼藍(lán) 拒染法計數(shù)標(biāo)本，加入含有rhlL-2 5000U/mL和IFN-y 1000U/mL的無血清培養(yǎng)基 并調(diào)整細(xì)胞濃度為5xl06/mL,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37。C, 5%C02; 培養(yǎng)活化3后收集細(xì)胞，進(jìn)行生物活性檢測。
其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為lOOO亳升含有Iscobe改良的Dulbecco基本 培養(yǎng)基(IMDM)、 10嗎/ml的脂肪酸、1.5昭/ml的膽固醇、5(ag/ml的甘油酯、 300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES,培養(yǎng)基的pH值為7.0。
實施例2-2
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為IOOO毫升含有 Iscobe改良的Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM)、 0.1昭/ml的脂肪酸、1.5昭/ml的膽 固醇、20)ag/ml的甘油酯、300昭/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES， 培養(yǎng)基的pH值為7.0。
實施例2-3
將新鮮釆集的外周血來源造血干細(xì)胞標(biāo)本經(jīng)生理鹽水洗滌后，用無菌PBS對倍稀釋。用Ficoll分離液去除紅細(xì)胞，離心分離目的造血干細(xì)胞，離心條件為 1800rpm， 20min。用PBS洗滌造血干細(xì)胞兩遍，1400rpm,15min離心。臺盼 藍(lán)拒染法計數(shù)標(biāo)本，加入含有rhlL-2 100U/mL和IFN-y5000U/mL的無血清培養(yǎng)基 并調(diào)整細(xì)胞濃度為5xl06/mL,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37。C， 5%C02; 培養(yǎng)活化4h后收集細(xì)胞，進(jìn)行生物活性檢測。
其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為lOOO毫升含有Iscobe改良的Dulbecco基本 培養(yǎng)基(IMDM)、 5嗎/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml的膽固醇、10昭/ml的甘油酯、 300(ig/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES,培養(yǎng)基的pH值為7.0。
實施例2-4
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) IOOO亳升、0.1-10嗎/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml的膽 固醇、5-20iag/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、2-巰基乙醇、丙酮 酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES，培養(yǎng)基的pH值為 7.0。
實施例2-5
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) IOOO亳升、0.1-10嗎/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml的膽 固醇、5-20(ig/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、2-巰基乙醇、丙酮 酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES,培養(yǎng)基的pH值為 7.0。
實施例2-6
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) IOOO毫升、0.1-10嗎/ml的脂肪酸、1.5)ng/ml的膽 固醇、5-20iag/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、2-巰基乙醇、丙酮 酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES，培養(yǎng)基的pH值為 7.0。
實施例2-7
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) IOOO毫升、0.1-10fig/ml的脂肪酸、1.5嗎/ml的膽固醇、SJ0iug/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、2-巰基乙醇、丙酮 酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES，培養(yǎng)基的pH值為 7.0。
實施例2-8
方法如實施例2-l所述，其中培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為含有Iscobe改良的 Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM) 1000亳升、0.1-10iug/ml的脂肪酸、1.5iug/ml的膽 固醇、5-20呢/ml的甘油酯、300嗎/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、2-巰基乙醇、丙酮 酸鈉、NaH2C03、谷氨酰胺。緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES,培養(yǎng)基的pH值為 7.0。
實施例3
經(jīng)培養(yǎng)后的外周血來源造血干細(xì)胞的生物活性的檢測 3.1 表型檢測
釆用常規(guī)的直接免疫熒光法結(jié)合流式細(xì)胞儀分別測定培養(yǎng)前后外周血來源 造血干細(xì)胞中003+ CD 4+、 CD3 +CD 8+、 CD3-CD 56+ CD 16+、 CD8 +CD 28+、 CD45RO+CD8+、 CD4+CD25+、 CD25+、 CD69+的表達(dá)。取3 x 106細(xì)胞,1400 轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘。棄上清，以PBS洗滌兩次，同上離心將細(xì)胞懸于0.5mlPBS中， 計數(shù)將細(xì)胞移入U型96孔板中，每孔細(xì)胞數(shù)為不少于5x 105個，分別加入熒光抗 體輕輕混勻，4°C、避光孵育30-60分鐘。1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，棄上清。各加 入200jul PBS洗滌兩遍，1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘。每孔加入100jil 1%多聚甲醛 重懸細(xì)胞并固定。上機分析前30min，每管準(zhǔn)確加入100ulFlow-Count熒光微球， 輕輕混勻，避光。吸取細(xì)胞至流式細(xì)胞儀檢測管，并加適量PBS (0.5-lml),重 懸細(xì)胞后上機檢測。
經(jīng)培養(yǎng)活化后的造血干細(xì)胞結(jié)果如圖l所示。該結(jié)果說明短期活化不會影響 外周造血干細(xì)胞中各種主要細(xì)胞亞群的分布和比例，而是大大增加了T和NK細(xì) 胞的比例，為抗腫瘤殺傷活性的升高提供有力的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。
3.2克隆形成能力檢測
采用常規(guī)的半固體瓊脂糖法測定培養(yǎng)前后外周血來源造血干細(xì)胞中 GM-CFU的數(shù)量。CFU-GM每亳升培養(yǎng)體系含集落刺激因子為GM-CSF50ng 、rlL-3 5ng。以上每毫升分別含有20。/。FCS、 10。/。人AB血清(ABS )、 1%FVBSA、 2-巰基乙醇5x 10-5mol/L、 0.9%甲基纖維素或0.3%的軟瓊脂，每亳升體系加入2 xl05單個核細(xì)胞，置35mm培養(yǎng)皿，在37。C飽和濕度二氧化碳孵箱培養(yǎng)14天， 用倒置顯微鏡下計數(shù)集落，CFU-GM》40個細(xì)胞為1個集落單位，用半固體軟瓊 脂法所形成的集落，可用快速血球染色液直接染色，觀察其細(xì)胞集落的形態(tài)和 種類。
檢測結(jié)果如圖2所示。該結(jié)果說明短期活化不會影響外周造血干細(xì)胞中干細(xì) 胞的數(shù)量和功能。
實施例4
活化前后的造血干細(xì)胞的殺傷活性測定與比較
采用常規(guī)LDH法測定培養(yǎng)前后外周血來源造血干細(xì)胞在不同效乾比下對淋 巴瘤raji細(xì)胞、肺癌95D細(xì)胞、結(jié)腸癌HCT-8和乳腺癌MCF-7 (商購于ATCC,美 國典型物保藏中心,又稱美國模式典型物收集中心)的殺傷活性。方法簡述如下 分別收集活化前后外周血來源造血干細(xì)胞作為不同效應(yīng)細(xì)胞，用1640培養(yǎng)液洗 滌2遍，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至4 x 106/ml。收集乾細(xì)胞raji、 95D、 HCT-8和MCF-7， 洗滌計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至l x 105/ml。每種效應(yīng)細(xì)胞做3個復(fù)孔，每孔100jul， 加入96孔U型板中，并按照效靶比40: 1、 20: 1、 10: l加入靶細(xì)胞，同時設(shè)靶 細(xì)胞最大釋放，自然釋放，培養(yǎng)液空白對照和體積糾正對照，200nl/孔，每組3 個復(fù)孔，離心250g4分鐘，37°C 5。/。C02孵箱培養(yǎng)6小時，在培養(yǎng)結(jié)東前45分鐘， 取出96孔板，在靶細(xì)胞最大釋放組和體積糾正對照組每孔加入lysis buffer 20 pl， 離心250g4分鐘，繼續(xù)培養(yǎng)45分鐘后取出，每孔吸出50ial上清轉(zhuǎn)移入另一96孔 板，毎孔加底物溶液50m1,避光室溫孵育15分鐘，加入50pl終止液，用振蕩器 將色素顆粒打散，測波長490nm處的吸光度，按下列公式
CTL活性(％)=(實驗組-效應(yīng)細(xì)胞自然釋放組-靶細(xì)胞自然釋放組)/ (乾 細(xì)胞最大釋放組-體積糾正對照組-靶細(xì)胞自然釋放組)x 100%
以培養(yǎng)液對照組作為空白對照校正各孔吸光度。
實驗結(jié)果如圖3所示，該結(jié)果表明無論是在效靶比40: l還是20: l的情況下， 釆集的造血干細(xì)胞經(jīng)本發(fā)明所述方法培養(yǎng)活化后，其抑瘤效果均有顯著增加。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述， 但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是 顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基本上所做的這些修改或改進(jìn)，均 屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
權(quán)利要求
1、一種提高人外周血來源造血干細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力的培養(yǎng)基，其特征在于其中所述的培養(yǎng)基的具體成分為含有Iscobe改良的Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM)1000毫升、0.1-10μg/ml的脂肪酸、1.5μg/ml的膽固醇、5-20μg/ml的甘油酯、300μg/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白，緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES，培養(yǎng)基的pH值為7.0；其中以1000毫升培養(yǎng)基為依據(jù)，加入的營養(yǎng)因子為胰島素、2-巰基乙醇、丙酮酸鈉、NaH2CO3、谷氨酰胺。
2、 一種如用權(quán)利要求l所述培養(yǎng)基短期活化培養(yǎng)得到的造血干細(xì)胞。
3、 如權(quán)利要求2所述的造血干細(xì)胞在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4、 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤為淋巴瘤、肺癌、結(jié) 腸癌或乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人外周血來源造血干細(xì)胞的培養(yǎng)基，具體來說，本發(fā)明提供了一種對體外采集的人外周血來源造血干細(xì)胞進(jìn)行短期培養(yǎng)以提高其抗腫瘤活性的培養(yǎng)基。本發(fā)明提高人外周血來源造血干細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力的培養(yǎng)基，其特征在于其中所述的培養(yǎng)基的具體成分為含有Iscobe改良的Dulbecco基本培養(yǎng)基(IMDM)1000毫升、0.1-10μg/ml的脂肪酸、1.5μg/ml的膽固醇、5-20μg/ml的甘油酯、300μg/ml的轉(zhuǎn)鐵蛋白，緩沖溶液是碳酸氫鈉或HEPES，培養(yǎng)基的pH值為7.0。
文檔編號A61P35/00GK101429496SQ20071016628
公開日2009年5月13日 申請日期2007年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月9日
發(fā)明者于津浦, 任秀寶, 水 曹, 慧 李, 郝希山 申請人:天津市腫瘤醫(yī)院