專利名稱：：馬齒莧提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及以中藥馬齒莧為原料制備的一種提取物及提取方法，以及將該提取物用于制備抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激的藥物及食品。
背景技術(shù)：
：馬齒莧(/br^JacaoJerac朋L.)為馬齒莧科植物，又名馬齒草、五行草、長命菜、九頭獅子草、酸味菜等，廣布于全球溫帶和熱帶地區(qū)，為藥食兩用植物。中藥馬齒莧以其地上部分入藥，其味酸、性寒，具有清熱解毒、涼血消腫之功效，可用來治療腹瀉、痢疾、尿路感染等?，F(xiàn)代藥理研究表明馬齒莧具有抗菌、降血脂、抗衰老、抗氧化、松弛肌肉、抗炎、鎮(zhèn)痛以及促進(jìn)傷口愈合等作用。但是如果采用馬齒莧原藥材或總提物入藥，存在用藥量過大，服用不便，難于接受的問題，應(yīng)用受到嚴(yán)重制約。目前，基于新藥和保健食品的研發(fā)目的，為制備工業(yè)上可接受的中藥提取物，在先期研究中，就一般情況而言多采用以下方法制備提取物供藥理篩選①采用水提醇沉方法；②藥材水或醇提液適當(dāng)濃縮后，采用系統(tǒng)溶劑分段萃?。?D藥材水或醇提液適當(dāng)濃縮后，離心，沉淀物棄掉，上清液過大孔樹脂吸附分段。④藥材水或醇提液適當(dāng)濃縮后，離心，沉淀物棄掉，將上清液進(jìn)行后續(xù)處理。如中國專利200410016122.6，公開了一種馬齒莧提取物及其抗缺氧用途，該馬齒莧提取物就是采用水提取后取上清液，離心產(chǎn)生的沉淀被作為無效成分丟棄。目前尚無對馬齒莧提取物過程中離心后產(chǎn)生的沉淀進(jìn)行化學(xué)成分和藥理研究的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種以中藥馬齒莧為原料制備的提取物，及其提取方法，以及將該提取物在制備抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激的藥物及食品中的應(yīng)用。申請人在進(jìn)行馬齒莧抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激研究過程中，也采用
背景技術(shù)：
中①-④的方法制備了多種馬齒莧提取物，經(jīng)反復(fù)研究表明，這些提取物藥理作用并不理想。而馬齒莧藥材的水或醇提液適當(dāng)濃縮后，離心產(chǎn)生的沉淀物反而具有顯著的抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激作用，這種結(jié)果大大出乎意料。據(jù)此，我們對此沉淀物藥理作用、工藝條件、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了反復(fù)研究、優(yōu)化，形成了本發(fā)明所述的馬齒莧提取物的制備工藝。一種馬齒莧提取物的制備方法，包括如下步驟(A)制備提取液將馬齒莧粗粉以水或各種濃度的乙醇或甲醇水溶液作為提取溶劑提取，合并，過濾，即得提取液。本步驟制備提取液所用的溶劑可以為水或各種濃度的乙醇或甲醇水溶液，優(yōu)選50%-95%乙醇或甲醇水溶液，最優(yōu)選80%乙醇或甲醇水溶液。當(dāng)然，考慮到可能的有機(jī)溶劑殘留、生產(chǎn)中的安全因素以及生產(chǎn)成本因素，乙醇水溶液更為常用。提取方式可以選擇常規(guī)熱回流提取、滲漉提取或浸泡提取，以及其他藥學(xué)上可接受的提取方式。如熱回流提取可以選擇10倍、8倍、8倍，1.5小時、1小時、1小時，也可選擇其他可接受的提取溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間。滲漉提取、浸泡提取可以選擇5-100倍溶劑，選用過多或過少的溶劑，盡管也可部分或全部實現(xiàn)本專利所述的提取物，但并不能對本發(fā)明構(gòu)成實質(zhì)性改變。(B)濃縮將上述提取液減壓回收至無醇味，即得濃縮液。濃縮方式可以采用40-10(TC減壓濃縮、烘干濃縮以及其他藥學(xué)上可接受的濃縮方式。當(dāng)然顧及到過高的溫度可能對提取物中化學(xué)成分穩(wěn)定性造成影響，選用50-75°C溫度濃縮更為可行。(C)沉淀將上述濃縮液放冷，析出沉淀，分取沉淀。沉淀方式可以采用過濾、離心及其他可接受的沉淀、分取方法。譬如可采用5000rpm，1-5分鐘，離心，分取沉淀。在本步驟若調(diào)整濃縮液的pH值為7-11，譬如采用10%Na0H溶液調(diào)整pH值為7.6，可以進(jìn)一步降低提取物得率，而提取物本身藥理作用無顯著改變。(D)干燥、粉碎將上述沉淀干燥、粉碎，即得提取物。千燥方式可以50-10(TC常壓烘干、真空干燥及其他可接受的干燥方式。粉碎方式可以采用球磨機(jī)、沖擊式粉碎機(jī)、流能磨粉碎以及其他可接受的粉碎方式。如將噴霧干燥、冷凍干燥技術(shù)用于本步驟，可同時實現(xiàn)烘干、粉碎，應(yīng)用更為方便。本專利所述提取物經(jīng)采用化學(xué)成分檢定、系統(tǒng)化學(xué)成分分離、鑒定、以及GC-MS方法進(jìn)行化學(xué)成分分析，表明其主要含有亞麻酸、亞油酸、9，12-十八碳二烯酸乙酯、亞麻酸乙酯、4a-甲基-3P-羥基木栓垸等成分。本發(fā)明還提供了以上述制備方法制得的馬齒莧提取物。本發(fā)明的馬齒莧提取物經(jīng)實驗證明具有抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激的作用，因而可用于制備防治抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激的藥物及食品。本發(fā)明所述的提取物主要含有亞麻酸、亞油酸、9,12-十八碳二烯酸乙酯、亞麻酸乙酯、4a-甲基-3e-羥基木栓烷等低極性成分，而采用如
背景技術(shù)：
所述方法④制備的提取液系離心后的上清液，恰恰不含或含有非常少的此類成分，申請人采用HPLC方法檢測也證明了這一點(diǎn)。另外，本發(fā)明所述的提取物在抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激等多方面的藥理作用顯著強(qiáng)于
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所述方法④制備的提取液?？傊?，本發(fā)明所述提取物的優(yōu)點(diǎn)是顯而易見的。本發(fā)明提取物的制備方法具有工藝簡便，成本低廉，安全高效，無有機(jī)溶劑殘留等顯著優(yōu)點(diǎn)，完全可以作為標(biāo)準(zhǔn)提取物的制備工藝。同時，由于此提取物最大限度地去除了非藥效成分，克服了馬齒莧原藥材或總提物直接入藥而帶來的用量過大、服用不便等問題。鑒于在現(xiàn)代自然、社會環(huán)境中，特別是在軍事領(lǐng)域，缺氧、疲勞、受應(yīng)激人群急劇擴(kuò)大，因而此提取物具有廣闊的應(yīng)用前景，潛在的社會和經(jīng)濟(jì)效益巨大。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明的實施并不僅限于此。實施例l制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，以80%乙醇，10倍、8倍、8倍，1.5小時、l小時、l小時，回流提取，提取液趁熱過濾，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，蒸餾水調(diào)節(jié)濃度為lg(生藥)/ml，以10MNaOH溶液調(diào)整pH值為7.6，5000rpm，l分鐘，離心，分取沉淀，6(TC真空干燥8h,粉碎，得提取物20.90g。采用HPLC方法進(jìn)行檢測島津LC-20AD高效液相色譜儀(配有四元梯度系統(tǒng)，DAD檢測器)，流動相甲醇-乙腈-0.5%磷酸水溶液(66%:22%:12%)，柱溫26°C;檢測波長210nm;流速1.10ml/min，結(jié)果表明本發(fā)明提取物的中亞麻酸和亞油酸的含量分別為1.25%和0.82%。實施例2制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，以水作為提取溶劑，其余同實施例l，得提取物31.64g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為0.96%和0.26%。實施例3制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，濃縮液不調(diào)pH值，其余同實施例l，得提取物42.54g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為2.79%和1.27%。實施例4制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，以95%乙醇作為提取溶劑，其余同實施例l，得提取物18.64g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為2.83%和1.32%。實施例5制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，以80%甲醇作為提取溶劑，其余同實施例l,得提取物22.51g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為1.31%和0.79%。實施例6制備馬齒覓提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，以30倍的80%乙醇作為提取溶劑，滲漉提取，其余同實施例l，得提取物17.54g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為1.63%和1.02%。實施例7制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，采用噴霧干燥，其余同實施例l，得提取物18.26g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為1.31%和0.91%。實施例8制備馬齒莧提取物馬齒莧藥材粗粉lkg，采用冷凍干燥，其余同實施例l，得提取物19.52g，亞麻酸和亞油酸的含量分別為1.19%和0.72%。實施例9馬齒莧提取物的藥理實驗1、耐缺氧實驗選取體重1822g健康昆明種小鼠，隨機(jī)分5組，每組10只，雌雄各半。實施例1制備的馬齒莧提取物分別以0.5。/。CMC-Na配制為lg/ml、2g/ml、4g/ml(生藥濃度)混懸液。人參莖葉總皂苷以0.5%CMC-Na配制為10mg/ml混懸液。各組動物連續(xù)灌胃給藥一周，給藥體積0.5ml，空白對照組給予等體積空白混懸劑。各組動物于末次給藥后放入盛有10g鈉石灰的200ml廣口瓶內(nèi)，每瓶1只，用凡士林涂抹瓶口，蓋嚴(yán)使之不漏氣，外用保鮮膜再次封住瓶口，從瓶蓋封嚴(yán)即刻計時，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠因缺氧而窒息性死亡的時間。結(jié)果見表1。結(jié)果表明馬齒莧提取物低、中、高劑量組都具有顯著的抗缺氧作用。表l馬齒莧提取物耐缺氧實驗結(jié)果組別動物數(shù)(只)劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>63.4±9.3*注與空白對照組比P<0.052、抗疲勞實驗實驗分組及給藥方法同上，末次給藥lh后，在小鼠尾部加10%體重的負(fù)荷，放置于水溫(30土2)X:，水深為25cm的水槽內(nèi)，各組動物的存活時間以小鼠沉到水底6s內(nèi)不再游出水面為止，記錄小鼠游泳時間。結(jié)果見表2。結(jié)果表明馬齒莧提取物低、中、高劑量組都具有顯著的抗疲勞作用。表2馬齒莧提取物抗疲勞實驗結(jié)果Eiij動物數(shù)(只)SIS存活時間(min)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3、抗高溫應(yīng)激實驗實驗分組及給藥方法同上，末次給藥后lh，分別將各組小鼠(單只放入鼠籠內(nèi))置于烘箱中(調(diào)至45'C)，觀察記錄各組小鼠的存活時間。結(jié)果見表3。結(jié)果表明馬齒莧提取物中、高劑量組都具有顯著的抗高溫應(yīng)激作用。表3馬齒莧提取物抗高溫應(yīng)激實驗結(jié)果注與空白對照組比*戶<0.054、抗低溫應(yīng)激實驗實驗分組及給藥方法同上，末次給藥后lh，分別將各組小鼠(單只放入鼠籠內(nèi))置于低溫冰箱中(調(diào)至-22。C)，觀察記錄各組小鼠的存活時間。結(jié)果見表4。結(jié)果表明馬齒莧提取物低、中、高劑量組都具有顯著的抗低溫應(yīng)激作用。表4馬齒莧提取物抗低溫應(yīng)激實驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、一種馬齒莧提取物的制備方法，包括如下步驟(A)制備提取液將馬齒莧藥材用水或乙醇或甲醇水溶液作為提取溶劑提取，得提取液；(B)濃縮將上述提取液減壓回收至無醇味，得濃縮液；(C)沉淀將上述濃縮液放冷，分取沉淀；(D)干燥、粉碎將上述沉淀干燥，粉碎，得提取物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法溶劑為50%95%乙醇或甲醇水溶液。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法溶劑為70%95%乙醇或甲醇水溶液。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法溶劑為80%乙醇或甲醇水溶液。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法液時的pH值為7-11。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法方法為過濾或離心。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法方法為5000rpm離心，卜5分鐘。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法為常壓烘干、真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥中的任一或兩種或多種的組合方法。9、權(quán)利要求l至8所述方法制備的馬齒莧提取物。10、權(quán)利要求9所述的馬齒莧提取物在制備抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激藥物及食品中的應(yīng)用。，其特征在于(A)歩驟中選用的提取，其特征在于(A)步驟中選用的提取，其特征在于(A)步驟中選用的提取，其特征在于(B)步驟中獲得的濃縮，其特征在于(C)步驟中分取沉淀的，其特征在于(C)步驟中分取沉淀的，其特征在于(D)步驟中的干燥方法全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
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，是以中藥馬齒莧為原料制備的一種提取物和提取方法，以及將該提取物用于制備抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激的藥物及食品。常用的馬齒莧提取物是采用水或醇提取后取上清液，離心產(chǎn)生的沉淀被作為無效成分丟棄。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)馬齒莧水或醇提液適當(dāng)濃縮后，離心產(chǎn)生的沉淀物反而具有顯著的抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激作用。本發(fā)明提供了一種新的馬齒莧提取物的制備方法，該方法制得的馬齒莧提取物經(jīng)實驗證明其具有較好的抗缺氧、抗疲勞、抗應(yīng)激作用。文檔編號A61K36/185GK101181317SQ20071017172公開日2008年5月21日申請日期2007年12月4日優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日發(fā)明者侯銀環(huán),凌昌全,岳小強(qiáng),徐燕豐,敏李,王萬銀,辛海量申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)