專利名稱：：一種治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療骨質(zhì)增生的制劑及其制備方法，特別是涉及一種治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑及其制備方法。技術(shù)背景骨質(zhì)增生是指椎骨邊緣或關(guān)節(jié)邊緣、關(guān)節(jié)面及骨突處骨小梁增多和骨密度增高。因有時其形狀象口唇或象鳥嘴，故叫做唇狀突起或骨贅，也叫骨刺，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)稱為增生性骨關(guān)節(jié)病，是骨科的一種常見病和多發(fā)病。骨質(zhì)增生雖然不至于要人命，但是患者必需長期忍受各種麻痛的感覺，是令人非常痛苦的一種疾病。同時該癥也可以說是一種正常的生理現(xiàn)象，因為隨著年齡的增長，關(guān)節(jié)的軟骨逐漸退化，細胞的彈性減小，骨關(guān)節(jié)在不知不覺中被磨損，尤其是活動量較大的頸、腰、膝關(guān)節(jié)、足跟、損傷的關(guān)節(jié)軟骨在沒有血管供給營養(yǎng)時就很難修復(fù)，這時在關(guān)節(jié)軟骨的周圍血液循環(huán)比較旺盛，就會出現(xiàn)代償性軟骨增長，此即為骨質(zhì)增生的前身。時間久了增生的軟骨又被鈣化，這就是骨質(zhì)增生。所以骨質(zhì)增生是中老年人的常見病、多發(fā)病，輕者可使患者肢體發(fā)生功能性障礙，重者可致畸或致癱。骨性關(guān)節(jié)炎起病隱襲，發(fā)展可致關(guān)節(jié)畸形，及關(guān)節(jié)功能障礙，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。早期及時診治，可阻止或延緩病情進展，改善關(guān)節(jié)功能，可解除患者痛苦，提高生活質(zhì)量。目前尚無治療骨性關(guān)節(jié)炎的特效藥物或療法，尤其缺乏快速、安全、有效的緩解疼痛癥狀的藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑及其制備方法，該中藥制劑所用到的原料藥種類少，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，更好的提高本發(fā)明藥物的治療效果，從而提供一種能更加有效的治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案按照重量份計算，本發(fā)明治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑是由赤芍1517份、威靈仙2325份、乳香2729份、沒藥2729份、木鱉子1214份、蓖麻子1315份和麻油3035份制備而成。優(yōu)選地，選用如下的重量份配比赤芍16份、威靈仙24份、乳香28份、沒藥28份、木鱉子13份、蓖麻子14份和麻油32份。上述治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑的制備方法按比例稱取取乳香和沒藥粉碎成細粉，混合均勻，得A品備用；取赤芍加水煎煮三次，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙放入8010(TC的麻油中，浸漬2.54小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于8010(TC浸漬2.54小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于8010(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后按常規(guī)制劑工藝制成各種外用劑型。本發(fā)明外用貼劑是這樣制備的取乳香和沒藥粉碎成粒度為100目的細粉，混合均勻，得A品備用；取赤芍?jǐn)酁?3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于9(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后用制片機制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，制得外用貼劑。本發(fā)明配方選用赤芍、威靈仙、乳香、沒藥、木鱉子、蓖麻子和麻油進行組合，將這些藥物組合在一起使各藥物協(xié)同增效，共奏軟堅散結(jié)、通絡(luò)定痛之功效，從而有效治療由于骨性關(guān)節(jié)炎引起的膝關(guān)節(jié)增生、頸椎增生、雄椎增生、腰椎增生、骶骨增生、足跟增生等各種骨質(zhì)增生所致的疼痛、僵硬、活動受阻等癥。本發(fā)明選用赤芍是因為赤芍味苦，性微寒，歸肝經(jīng)，清熱涼血，散瘀止痛，用于溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。威靈仙味辛、咸，性溫，歸膀胱經(jīng)，祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛。用于風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利，骨哽咽喉。乳香味辛、苦，性溫?；钛雇矗糜谛母怪T痛，筋脈拘攣，跌打損傷，瘡癰腫痛；外用消腫生肌。沒藥味苦，辛，性平，入肝、脾、心、腎經(jīng)，散血去瘀，消腫定痛，用于治跌打損傷、金瘡、筋骨、心腹諸痛、癥瘕、經(jīng)閉、癰疽腫痛、痔漏、目障。木鱉子，味苦微甘，性溫，有毒，入肝、脾、胃經(jīng)，散結(jié)，祛毒，治癰腫、疔瘡、瘰疬、痔瘡、無名腫毒、癬瘡，風(fēng)濕痹痛，筋脈拘攣。蓖麻子味甘辛，性平，有小毒，入大腸經(jīng)，消腫拔毒，瀉下通滯，治癰疽腫毒，瘰疬，喉痹，疥癩癬瘡，水腫腹?jié)M，大便燥結(jié)。麻油性味甘、涼，具有潤腸通便、解毒生肌之功效，臨床還用麻油來煎熬膏藥，有生肌肉、止疼痛、消癰腫、補皮裂的作用，外用作為軟膏及硬膏基質(zhì)為了確保本發(fā)明藥物的有效性和用藥安全，申請人進行了有效性、安全性等動物實驗。一、主要藥效學(xué)研究1、材料來源1.1藥膏的制備取乳香和沒藥粉碎成粒度為100目的細粉，將其混合均勻，得A品備用；取赤芍?jǐn)酁?厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙粉碎為最粗粉，放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子和蓖麻子于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機內(nèi)打漿并經(jīng)IOO目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟使之熔于9(TC的藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后即得膏塊，通過壓片機壓制成圓形外用膏片。1.2實驗動物來源Wister/SD大鼠，雌雄各半，體重160士10g，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究中心，合格證號SCXK11-00-0006。昆明/ICR種小鼠，雌雄各半，體重21士lg，由北京維通利華試驗動物技術(shù)研究所提供，許可證號SCXK(京)-2002-0003。2、劑量設(shè)計60kg人一日用量為2.3g藥膏，貝1」0.04g/kg/d，按人與動物等效劑量折算，試驗中大鼠用量為0.4、0.2、0.1g/kg/d、小鼠為0.8、0.4、0.2g/kg/d，均分別相當(dāng)于人用量的2倍、等倍及l(fā)/2倍。各劑量組均采用藥膏按等體積不等濃度皮膚涂抹給藥。藥物用賦形劑(麻油)調(diào)制成同體積。賦形劑組麻油的劑量采用調(diào)制小劑量時所采用的量。3、方法及結(jié)果3.1、對小鼠骨質(zhì)增生模型的影響原理rh-BMP-2的主要生物學(xué)作用是誘導(dǎo)未分化的間質(zhì)細胞分化成軟骨或骨組織，而且這一作用無種屬特異性。不同組織的間質(zhì)細胞分化成骨或軟骨的能力差異很大，最理想的組織是肌肉、筋膜、骨髓和骨膜處，這些組織中血管周圍的間質(zhì)細胞分化能力很強，對BMP的反應(yīng)最為敏感，是研究成骨作用的理想部位。目前不少的試驗研究證明，rh-BMP-2在大鼠、小鼠、家兔模型上均有明顯誘導(dǎo)成骨的作用。試驗研究顯示小鼠股部肌肉內(nèi)植入BMP18—21天后，植入部位有明顯骨組織團塊形成，外層為白色骨皮質(zhì)，中心為紅色骨髓。植入附近的股骨干增粗、重量增加，病理觀察可見不規(guī)則的骨基質(zhì)形成和骨髓腔(1、2、3)。試驗方法取小鼠60只，乙醚麻醉后，左后腿外側(cè)部脫毛、消毒，順股部外側(cè)肌肉切開皮膚，切口為lcm，分離股部肌肉間隙隱窩，在肌肉內(nèi)靠近骨膜處埋置rh-BMP-2凍干粉，0.5mg/只，空白對照組植入牛血清白蛋白(BSA)，植入后縫合切口。然后將植入rh-BMP-2的動物隨機分為5組，分別為模型對照組、陽性藥對照組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組，每5只一籠飼養(yǎng)在清潔環(huán)境中。植入l周后各給藥組在植入處皮膚涂抹給藥，對照組涂抹水，連續(xù)1周。試驗結(jié)束后處死動物，剝離出植入后形成的骨組織稱重、取股骨干稱重，結(jié)果采用組間比較T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表l。表l本發(fā)明藥膏對小鼠骨質(zhì)增生模型的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型對照組比較*P〈0.05**P〈0.01表l結(jié)果顯示小鼠左側(cè)股部肌肉內(nèi)植入rh-BMP-2凍干粉2周后，局部有明顯的異位股組織形成，且股骨干重量明顯增加；本發(fā)明藥膏三個劑量組異位骨組織重量和左側(cè)股骨干的重量明顯減輕，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05P〈0.01)。一般情況觀察埋置手術(shù)第7天局部可觸及小團塊，稍硬，以后逐漸增大，變硬，與周圍組織界線不清。3.2、對正常大鼠血液流變學(xué)的影響實驗方法取健康Wister大鼠60只，雌雄兼用。背部脫毛，脫毛面積約為扭5cm2。然后將動物隨機分成6組空白對照組、賦形劑對照組、陽性藥組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大劑量組、中劑量組和小劑量組，每組10只。各給藥組脫毛皮膚處涂抹給藥，空白對照組涂抹水，賦形劑組給麻油，連續(xù)7天。給藥第7天傍晚禁食。第8天耳緣靜脈采血，采用LG-R-80系列血液黏度測試儀和LG-B-190型細胞流變學(xué)測定儀測定血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果采用組間比較T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表2。表2本發(fā)明藥膏對大鼠血液流變學(xué)的影響組別空白對照組賦形劑組陽性藥組大劑量組中劑量組小劑量組劑量(/kg/d)12.6cm20.4g0.2g0.lg動物數(shù)101010101010全血黏度15.25±1.4415.56±1.7215.47±3.0015.28±1.9815.31±1.7915.60±1.62血漿黏度1.34±0.051.34±0.051.33±0.071.37±0.081.35±0.061.39±0.16還原黏度34.94±4.6034.49±3.8533.69±6.3933.25±4.5334.00±4.1234.78±3.00血球壓積41.00±3.0142.20±1.8742.90±2.9942.90±2.7642.10±0.9941.90±1.85聚集指數(shù)1.84±0.241.86±0.271.71±0.411.04±0.33**1.09±0.31林1.00±0.16林聚集指數(shù)積分面積360.30±54.00365.90±54.51331.90±84.17211.50±66.03林225.70±65.16林206.50±34.08**變形指數(shù)0.43±0.040.43±0.040.44±0.030.43±0.030.47±0.010.44±0.01變形指數(shù)積分面積214.80±22.69223.50±19.73223.30±17.93214.60±22.00238.60±10.97219.50±9.55表2結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏所試三個劑量組對大鼠的全血黏度、血漿黏度、還原黏度無明顯影響。本發(fā)明藥膏三個劑量組均對大鼠的血球壓積無明顯影響(與空白對照組比較林P〈0.01)。本發(fā)明藥膏三個劑量組的大鼠血液的聚集指數(shù)及聚集指數(shù)積分面積明顯降低，與空白對照組比較有顯著性差別(P〈0.01P〈0.05)，說明本發(fā)明藥膏對大鼠血液聚集性有明顯的抑制作用。本發(fā)明藥膏三個劑量對大鼠血細胞的變形指數(shù)和變形指數(shù)積分面積無明顯影響。3.3、骨質(zhì)增生帖對正常小鼠耳廓微循環(huán)的影響取健康昆明種小鼠50只，雌雄兼用。隨機分為5組，空白對照組、陽性藥組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組。各組動物按2。/。戊巴比妥鈉4mg/kg腹腔注射麻醉后，顯微錄象系統(tǒng)下觀察右耳前面同一部位微循環(huán)情況。然后開始給藥，右耳背面涂抹藥物，每日l次，連續(xù)3天。第4天用溫水去除藥物后，立即再觀察右耳同一部位微循環(huán)變化情況。在監(jiān)視器下放大l50倍測量小動脈、小靜脈口徑。各項指標(biāo)采用組間比較差值T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表3表3本發(fā)明藥營對小鼠耳廓微循環(huán)的敦向(小血管口徑及變化值)組別空白對照組陽性藥對照組大剤重組中劑重組小劑重組剤重(/kg/d)—OSg"g動物數(shù)1010101010動脈藥前042±0.040.44±0.050.44±0.060.4M040.41±0.02藥后0.45^0.05Cl息0.0『0.54±0.07**0.54±,**差值a03t0.060.訓(xùn).05**0.0闊.07*0.11±0.06**0.1M0『藥前0.5&0.070.57±0.060.5歸060.5&0.05脈藥后a他,O息O.OS0.67±0.060.67±0.03差值0.01±0.030.0扭0.03**Cl.OfcO.04**0.0扭a03"0.07士0.0541與對照組比較*P〈0.05**P〈0.01單位cm表3結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組有明顯擴張小鼠耳廓小動脈及小靜脈的作用，其給藥前后動靜、脈口徑的變化值與對照組比較有顯著性差別(P〈0.05P〈0.01)。3.4、對小鼠醋酸疼痛模型的影響取小鼠60只，背部皮膚脫毛(面積為2X3cm2)，然后按體重隨機分為6組模型對照組、賦形劑組、陽性藥對照組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組，各給藥組脫毛處皮膚涂抹給藥，模型對照組涂抹水、賦形劑(麻油)組涂抹麻油，每日一次，連續(xù)4天，第4天涂抹后1小時，各動物腹腔注射0.5。/。的醋酸0.2ml/只，觀察20分鐘內(nèi)各小鼠出現(xiàn)典型扭體的次數(shù)，結(jié)果采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表4。表4本發(fā)明藥膏對醋酸所致小鼠疼痛模型的影響組別劑量/kg/d動物數(shù)扭體數(shù)(次)抑制率(％)模型對照組—1036.70±6.83賦形劑組—1033.30±5.43陽性藥對照組18.2cm21018.30±4.54**50.13大劑量組0.8g1017.70±5.47**51.77<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型對照組比較**P〈0.01表4結(jié)果顯示注射醋酸后本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組小鼠的扭體次數(shù)明顯少于模型對照組，與模型對照組比較有顯著性差別(P〈0.01)，說明本發(fā)明藥膏對醋酸所致小鼠疼痛有明顯的止痛作用。5.5、抗炎作用5.5.l對大鼠棉球肉芽腫形成的影響取大鼠60只，背部脫毛(面積為扭5cm2)。乙醚淺麻醉后無菌條件下作背部剪一小切口，然后向兩側(cè)皮下植入20mg的滅菌棉球。術(shù)后隨機分組為6組，模型對照組、賦形劑組、陽性藥組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組。手術(shù)當(dāng)天開始脫毛處皮膚涂抹給藥，模型對照組涂抹水、賦形劑組涂抹麻油，每天一次，連續(xù)7天，第8天先稱體重，藥后l小時將大鼠斷頭處死，剝離并取出棉球肉芽組織。于6(TC烘箱內(nèi)干燥12小時后稱重，即為肉芽腫干重，比較各組肉芽腫重量，同時取出大鼠的胸腺和脾臟測定臟器指數(shù)，結(jié)果采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表5。表5本發(fā)明藥營2狀鼠稱求肉荊中形成的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型對照組比較*P〈0.05**P〈0.01表5結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組可明顯抑制大鼠棉球肉芽腫的形成，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05P〈0.01)。本發(fā)明藥膏三個劑量組對大鼠棉球肉芽腫實驗脾臟和胸腺臟器指數(shù)無明顯影響。5.5.2對小鼠皮膚毛細血管通透性的影響取小鼠60只，背部皮膚脫毛(面積為243cm2)，然后按體重隨機分為6組模型對照組、賦形劑組、陽性藥對照組(通絡(luò)琺痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組，各給藥組脫毛處皮膚涂抹給藥，模型對照組涂抹水、賦形劑組涂抹賦形劑，每日一次，連續(xù)3天，第4天用溫水去除藥物后，各鼠尾靜脈注射0.5%伊文思蘭液體0.lml/10g，隨即皮膚上滴加二甲苯40ul，15分鐘后處死動物，取蘭染皮膚剪碎，放于蒸餾水丙酮(3:7)溶液2ml中，3000rpm離心15分鐘，取上清液于波長590nm處測定光密度值。結(jié)果采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表6。表S本發(fā)明藥音對小鼠皮膚毛細血管1^性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型對照組比較**P〈0.01表6結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏大、中二個劑量組能顯著抑制二甲苯引起的小鼠皮膚毛細血管通透性的增高，與對照組比較有顯著性差異(P〈0.05)。結(jié)論本實驗從骨質(zhì)增生形成的機理、血液流變學(xué)、改善微循環(huán)、炎癥、止痛5個方面探討了本發(fā)明藥膏的藥效學(xué)作用，結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組均可抑制小鼠異位骨組織的形成和抑制股骨干的骨質(zhì)增生；可明顯降低大鼠血液的聚集性；擴張小鼠耳部小動、靜脈；對醋酸引發(fā)的小鼠疼痛有明顯的止痛作用；對小鼠皮膚毛細血管通透性有明顯抑制；對大鼠棉球性肉芽腫形成有明顯抑制作用且不影響胸腺和脾臟指數(shù)。通過本實驗為本發(fā)明藥膏在臨床的進一步應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。二、急性毒性實驗1、材料來源1.1藥膏的制備如實驗一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實驗動物來源新西蘭家兔，體重2.02.5kg，一級，雌雄各半。由北京市海淀區(qū)通利實驗動物養(yǎng)殖場提供，合格證號為scxk(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1、動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況是否正常。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度。2.2、將家兔按上述設(shè)計分組，各給藥組在脫毛部位均勻涂抹藥物，空白對照組涂抹蒸餾水，賦形劑組涂抹賦形劑。6小時一次，共涂抹2次，涂藥部位用特制的膠布固定。給藥24小時后用溫水洗去殘留的藥物。連續(xù)觀察7天。2.3、觀察指標(biāo)觀察記錄給藥后動物一般活動、皮膚毛發(fā)、眼和黏膜的變化，皮膚所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)，按表7評分標(biāo)準(zhǔn)來判斷其刺激強度。每天觀察呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等方面的中毒表現(xiàn)。每天記錄動物的體重。表7皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.4、試驗結(jié)果:①接受本發(fā)明藥膏的家兔在觀察期間，一般活動正常，皮毛有光澤，攝食、大小便正常②呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動未表現(xiàn)出明顯急性毒性反應(yīng)。③觀察期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)家兔死亡。④局部皮膚所見對照組動物完整皮膚、破損皮膚均未見紅斑或水腫；本發(fā)明藥膏三個劑量組動物完整皮膚、破損皮膚均未見紅斑或水腫，結(jié)果見表8。表8本發(fā)朗藥^^家兔皮膚急性羞性試驗(皮膚觀察)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>⑤各給藥組體重增長采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果顯示和空白對照組比較無顯著性差異，結(jié)果見表9。表9本發(fā)明藥營2慌兔艦急性羞性微(體重觀察)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)論將本發(fā)明藥膏l(xiāng)g、2g、4g分別涂抹于家兔背部去毛后完整皮膚或破損皮膚，一日內(nèi)2次給藥，動物的一般狀態(tài)、體重、皮膚毛發(fā)、眼及粘膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動未表現(xiàn)出明顯急性毒性反應(yīng)，對局部皮膚也無明顯刺激作用，因此認(rèn)為本發(fā)明藥膏皮膚用藥是安全的。三、長期毒性實驗1、材料來源1.1藥膏的制備如實驗一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實驗動物來源健康新西蘭家兔，體重2.02.5kg，雌雄各半。雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠2只，自由取食及攝水。飼育在室溫2022。C的環(huán)境下。由北京通力試驗動物養(yǎng)殖場提供，動物合格證號SCXK(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1、試驗周期根據(jù)臨床試驗療程7天，長期毒性取其3倍以上，故定為連續(xù)給藥4周，停藥后恢復(fù)期2周。2.2、劑量及分組:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>2.3、動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況是否正常。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度。2.4、將家兔按2.2的設(shè)計分組，各組動物雌雄各半，給藥組在脫毛部位均勻涂抹藥物，空白對照組涂抹水，賦形劑組涂抹賦形劑。每日一次，涂藥部位用一次性膠布固定，每次涂抹24小時后用溫水洗去殘留的藥物后再涂抹。連續(xù)4周，停藥后解剖l/2動物，繼續(xù)觀察2周后解剖l/2動物。觀察指標(biāo)①一般情況給藥期間，觀察記錄動物的精神、活動、毛發(fā)、糞便等情況。②每日觀察動物皮膚、粘膜的反應(yīng)，按表7判斷皮膚的刺激反應(yīng)強度和過敏程度。③每周稱體重。④外周血象測外周血象，作白細胞分類。⑤生化指標(biāo)測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(T-CH0)、葡萄糖(GLU)、總膽紅素(T-BIL)。⑥重要臟器重量指數(shù)⑦重要臟器病理組織學(xué)檢査結(jié)果采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。2.5、試驗結(jié)果2.5.1、給藥期間，三個劑量組家兔一般活動、精神狀態(tài)、毛發(fā)、糞便等均未見明顯異常。2.5.2、體重增長與空白對照組比較無明顯差異(表IO);表10本發(fā)胡藥膏對家兔長期壽往試驗體重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.5.3、外周血象，包括紅細胞、白細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積、血小板、白細胞分類均在正常范圍內(nèi)波動(表ll、12);表11本發(fā)明藥營對家，S長期羞性試驗血象的影響(藥后l個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表12本發(fā)明藥營對家兔長期羞性試驗血象的影響(恢復(fù)期)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2.5.4、生化指標(biāo)包括ALT、AST、BUN、Crea、ALP、TP、ALB、T-CHO、GUJ、T-BIL均在正常范圍內(nèi)波動(表13、14);表13本發(fā)明藥營對家兔長期毒性生化指標(biāo)的影響(藥后l個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表14本發(fā)明藥營對家兔長期羞1生生化指標(biāo)白勺影響(恢復(fù)期)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2.5.5、重要臟器包括心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腎上腺、腦、子宮、卵巢、睪丸、副睪、前列腺的重量系數(shù)與空白對照組相比無顯著性差異(表15、表16)。表15本發(fā)明藥營對家兔長期羞性臟器指數(shù)的影響(藥后l個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表1s本發(fā)明藥營對家兔長期羞性臟器指數(shù)的影響(恢夏期)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2.5.6、完整皮膚的對照組和本發(fā)明藥膏三個劑量組給藥期間皮膚無明顯紅腫、脫屑等表現(xiàn)；破損皮膚的對照組和本發(fā)明藥膏三個劑量組給藥期間個別動物的皮膚輕微發(fā)紅，無明顯水腫，主要發(fā)生在皮膚用砂紙摩擦后，通常在2—3天后好轉(zhuǎn)，并非藥物引起(見表17、表18)。表17本發(fā)明藥育家兔長期奉性試驗皮膚惰況(完整皮膚組)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表18本發(fā)明藥育家兔長期壽性試驗皮膚惰況(破損皮膚組)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>2.5.7、各主要臟器肉眼檢査未見明顯腫大、充血、粘連、壞死等病理變化。用藥部位皮膚光滑，無紅腫，無斑丘疹、脫屑、粗糙、無色素沉著；2.5.8、病理組織學(xué)檢査，未發(fā)現(xiàn)有由于藥物引起的病理形態(tài)學(xué)方面的改變。結(jié)論本發(fā)明藥膏三個劑量組涂抹家兔完整皮膚和破損皮膚，連續(xù)1個月，對家兔體重、外周血象、十項生化指標(biāo)、臟器指數(shù)及皮膚粘膜無明顯影響；家兔主要臟器無明顯由藥物引起的病理改變，說明本發(fā)明藥膏在所試劑量范圍內(nèi)無明顯毒副反應(yīng)，是比較安全的。四、家兔皮膚刺激實驗及豚鼠過敏實驗1、材料來源1.1藥膏的制備如實驗一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實驗動物來源新西蘭家兔，體重2.02.5kg，一級，雌雄各半。豚鼠，一級，體重250300g，均由北京市海淀區(qū)通利實驗動物養(yǎng)殖場提供，合格證號為scxk(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1、對家兔一次給藥皮膚刺激性試驗試驗方法動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度試驗采用同體左右側(cè)自身對比，分完整皮膚組及破損皮膚組。每組家兔8只，去毛處左側(cè)涂本發(fā)明藥膏l(xiāng)g，右側(cè)涂賦形劑作為對照，每只動物分籠飼養(yǎng)。涂抹24小時后用溫水洗去殘留藥物，分別記錄l、24、48、72小時涂抹部位皮膚情況。試驗結(jié)果觀察期間完整皮膚組動物對照側(cè)和給藥側(cè)均未見紅斑或水腫；破損皮膚組對照側(cè)和給藥側(cè)去除藥物后l小時內(nèi)輕微發(fā)紅，，24小時內(nèi)消失。結(jié)果見表19表19本發(fā)明藥營對家兔皮膚刺激試驗(一汰給藥)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>2.2、對家兔多次給藥皮膚刺激性試驗試驗方法步驟同一次給藥。連續(xù)涂抹給藥7天，停藥后觀察一周，除觀察并記錄每日的紅斑及水腫情況進行評分外，還觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點，皮膚粗糙等情況試驗結(jié)果完整皮膚組接受本發(fā)明藥膏的家兔在整個觀察期間對照側(cè)和給藥側(cè)均未見紅斑或水腫；破損皮膚組動物從給藥第3天開始對照側(cè)和給藥側(cè)在劃痕處可見輕度的發(fā)紅，停藥后逐日減輕，至停藥第7天觀察結(jié)束時所有動物均已恢復(fù)，提示此反應(yīng)為機械擦傷皮膚后所引起的反應(yīng)，與受試藥物無關(guān)；所有動物涂抹部位皮膚未見色素沉著，出血點、皮膚粗糙等現(xiàn)象。結(jié)果見表20表20本發(fā)明藥營對家兔皮膚剌激試驗(多改給藥)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>2.3、本發(fā)明藥膏對豚鼠皮膚過敏試驗試驗方法2.3.1.皮膚準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%(9cm2)，24小時后檢査皮膚的情況。2.3.2.分組將豚鼠按體重隨機分成3組，每組10只，雌雄各半，第一組為本發(fā)明藥膏組，第二組為賦形劑對照組，第三組為致敏劑對照組。2.3.3.致敏接觸取受試物0.2g涂抹在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)，特制膠布固定保持6小時。第7天、第14天再涂抹一次，共計3次，陽性致敏物組涂抹1%2，4一二硝基氯苯，賦形劑對照組在同等情況下涂抹賦形劑。2.3.4.激發(fā)接觸于末次給藥致敏后14天，將受試物0.2g涂抹豚鼠背部右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用O.1%2，4一二硝基氯苯，6小時后去除藥物即刻觀察，然后于24、48、72小時再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，按表7評分標(biāo)準(zhǔn)及致敏發(fā)生率推斷致敏性，致敏發(fā)生率的計算為:將出現(xiàn)皮膚紅斑、水腫或全身性過敏反應(yīng)的動物例數(shù)(不論程度輕重)，除以受試動物總數(shù)，即致敏發(fā)生率。實驗結(jié)果實驗期間動物活動自如，大小便正常，無站立不穩(wěn)，哮喘、休克等全身癥狀。局部皮膚所見本發(fā)明藥膏和水對照組豚鼠均無一例發(fā)生皮膚過敏反應(yīng)，而陽性對照藥2，4-二硝基氯苯組的10只豚鼠出現(xiàn)不同程度的致敏，致敏率為100%，72小時基本恢復(fù)正常。結(jié)果見表21對豚鼠皮膚過敏試驗體重?zé)o明顯影響，結(jié)果見表22表21本發(fā)明藥膏對豚鼠皮膚的過敏，<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表22本發(fā)明藥膏胨鼠皮膚的過敏，(體重)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>結(jié)論將本發(fā)明藥膏l(xiāng)g—次涂抹或多次涂抹家兔完整皮膚和破損皮膚后均不引起明顯的刺激作用。本發(fā)明藥膏涂抹于豚鼠皮膚后不引起明顯的過敏反應(yīng)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明是以常見的天然動植物藥為原料組成，產(chǎn)品配方來源于苗醫(yī)世代相傳的秘方，經(jīng)苗家特殊工藝精心制成。產(chǎn)品配方構(gòu)成比較簡單，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，更好的提高本發(fā)明藥物的治療效果，從而提供一種能更加有效的治療肩周炎的外用中藥制劑。本發(fā)明中藥制劑的制備方法簡單，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，無毒副作用，無刺激性，非致敏性，臨床可長期使用，為患者提供了一種用藥成本低、療效好的治療骨質(zhì)增生的外用藥物。具體實施方式取乳香280g和沒藥280g粉碎成粒度為100目的細粉，將其混合均勻，得A品備用；取赤芍160g斷為2厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙240g粉碎為最粗粉，放入9(TC的麻油320g中，浸漬3小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子130g和蓖麻子140g于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機內(nèi)打漿并經(jīng)100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)使之熔于9(TC的藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后用制片機制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，分裝，即制得本發(fā)明的外用貼劑。性狀本品為黑色圓形膏片，油潤細膩，無飛邊缺口，氣微香。功能主治軟堅散結(jié)、通絡(luò)定痛。用于骨性關(guān)節(jié)炎引起的膝關(guān)節(jié)增生、頸椎增生、雄椎增生、腰椎增生、骶骨增生、足跟增生等各種骨質(zhì)增生所致的疼痛、僵硬、活動受阻等癥。用法用量外用，傷處洗凈擦干，將鐵膏與隔離紙分開，然后對準(zhǔn)痛處貼牢，24小時換藥膏一次，7天為一療程。注意事項過敏者慎用，孕婦忌用，禁止內(nèi)服。規(guī)格2.3g/片。儲藏密封，置干燥處。有效期暫定24個月。實施例2:本發(fā)明外用膏藥的制備方法取乳香270g和沒藥270g粉碎成細粉，混合均勻，得A品備用；取赤芍150g粉碎為l厘米的小段，加水煎煮三次，加水量以沒過藥材為宜，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙250g放入8(TC的麻油350g中，浸漬4小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子140g和蓖麻子150g于80'C浸漬4小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)使之熔于8(TC的藥油中，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后按常規(guī)制劑工藝制成膏劑。實施例3:本發(fā)明外用貼劑的制備方法取乳香290g和沒藥290g粉碎成粒度為100目的細粉，將其混合均勻，得A品備用；取赤芍170g斷為3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙230g粉碎為最粗粉，放入10(TC的麻油300g中，浸漬2.5小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子120g和蓖麻子130g于10(TC浸漬2.5小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機內(nèi)打漿并經(jīng)100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)使之熔于10(TC的藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后用制片機制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，分裝，即制得本發(fā)明的外用貼劑。權(quán)利要求1.一種治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是由赤芍15～17份、威靈仙23～25份、乳香27～29份、沒藥27～29份、木鱉子12～14份、蓖麻子13～15份和麻油30～35份制備而成。2.按照權(quán)利要求l所述治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是由赤芍16份、威靈仙24份、乳香28份、沒藥28份、木鱉子13份、蓖麻子14份和麻油32份制備而成。3.如權(quán)利要求1或2所述的治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑的制備方法，其特征在于取乳香和沒藥粉碎成細粉，混合均勻，得A品備用；取赤芍加水煎煮三次，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙放入8010(TC的麻油中，浸漬2.54小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于8010(TC浸漬2.54小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于8010(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后按常規(guī)制劑工藝制成各種外用劑型。4.按照權(quán)利要求3所述的治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑的制備方法，其特征在于取乳香和沒藥粉碎成粒度為100目的細粉，混合均勻，得A品備用；取赤芍?jǐn)酁?3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于9(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后用制片機制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，制得外用貼劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療骨質(zhì)增生的外用中藥制劑及其制備方法，它是由秦艽、威靈仙、乳香、沒藥、木鱉子、蓖麻子和麻油制備而成。將秦艽經(jīng)水煎煮提取濃縮得清膏。威靈仙用麻油先浸漬，所得的藥油再浸漬木鱉子和蓖麻子，浸漬后的木鱉子和蓖麻子打成漿狀物，而所得的藥油加入蜂蠟使之熔化。乳香和沒藥粉碎成細粉，然后將細粉、清膏、漿狀物和藥油混合均勻，按照常規(guī)制劑工藝制成各種劑型。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以常見的中草藥為原料，且所用到的原料藥種類少，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，為患者提供了一種用藥成本低、療效好的治療骨質(zhì)增生的外用藥物。文檔編號A61K36/716GK101156904SQ20071020191公開日2008年4月9日申請日期2007年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年9月29日發(fā)明者何宗祥,張和明申請人:貴州心意藥業(yè)有限責(zé)任公司