專利名稱：：洪連提取物及其在制備抗病毒藥物和保肝藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藏藥洪連提取物及其這種提取物在制備抗病毒藥物和保肝藥物中的應(yīng)用，屬于民族醫(yī)藥范疇。
背景技術(shù)：
：隨著全球"天然藥物熱"的興起，藏藥以其獨(dú)特的療效倍受人們的關(guān)注和青睞[1]。藏藥之所以具有獨(dú)特的療效，是由其生長(zhǎng)環(huán)境的特殊性決定的，藏藥植物多生長(zhǎng)在青藏高原氣候干燥、寒冷、風(fēng)力強(qiáng)勁的氣候環(huán)境中，而且多生長(zhǎng)在海拔3800米以上的高原上，加上高原空氣稀薄，太陽(yáng)輻射強(qiáng)烈等的因素，導(dǎo)致了藏藥所特有的次生代謝物質(zhì)，奠定了藏藥藥用成分的基礎(chǔ)[2—3]。洪連是常用的藏藥[4]，又叫藏黃連，兔耳草，全草入藥，主要用于治療全身發(fā)燒、腎炎、肺病、陰道流黃黑色液物、濕熱瀉痢、高血壓病、動(dòng)脈粥樣硬化癥、綜合性毒物中毒及"心熱"等疾病。據(jù)藏藥典藉《晶珠本草》記載藏藥洪連苦寒，能清熱解毒，行血調(diào)經(jīng)，平逆降壓。用于五臟有熱，血分熱毒，急慢性肝炎，月經(jīng)不調(diào)。《藏藥志》記載其全草具有清熱解毒，治血旺、急慢性肝炎、肺病、高熱的功效[5]。據(jù)記載[6—7]，各地作為洪連入藥的兔耳草屬植物主要有短管兔耳草L.brevituba、大萼兔耳草L.clarkei、全緣兔耳草L.integra、圓禾惠兔耳草L.ramalana、矢豆禾惠兔耳草L.brachystachyaMaxim、矮兔耳草LagotishumilisTsoongetH.P.Yang、兔耳草LglaucaGaertn及Lstolonifera等。肝臟是人體的中心代謝器官，肝損傷是影響人類健康的最重要的常見(jiàn)病之一。各種有害因素所致的肝損傷主要有病毒性肝炎、酒精性肝炎和藥物性肝炎等，臨床表現(xiàn)為肝壞死、脂肪肝、膽汁郁積、肝硬化以及肝癌等[8]。目前對(duì)肝損傷的防治仍是一個(gè)全球性的嚴(yán)峻課題。我國(guó)是個(gè)肝炎大國(guó)，病毒性肝炎發(fā)病數(shù)位居法定管理傳染病的第一位，僅慢性乙型肝炎病毒感染者就達(dá)1.2億。慢性乙型肝炎病程迀延，如得不到及時(shí)的治療，將會(huì)發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類健康。盡管目前治療肝炎的藥物較多，然而能夠達(dá)到令人滿意療效的藥物較少。而藏藥洪連以其特有的藥用功效，在預(yù)防和治療肝病方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，使其成為具有廣闊利用選擇空間和較高潛在醫(yī)用價(jià)值的寶貴資源。病毒性疾病治療藥物發(fā)展較遲緩，主要由于病毒有嚴(yán)格寄生性，與細(xì)胞關(guān)系密切，病毒感染細(xì)胞后，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在宿主細(xì)胞內(nèi)利用細(xì)胞酶系統(tǒng)復(fù)制;有些病毒核酸整合于細(xì)胞染色體，難于清除。病毒嚴(yán)格寄生在細(xì)胞內(nèi)，使得藥物殺傷病毒的同時(shí)對(duì)機(jī)體細(xì)胞也有損害?，F(xiàn)有的抗病毒化學(xué)藥物即因?yàn)槎拘蕴蠡蚰退幮缘漠a(chǎn)生，其臨床難以取得令人滿意的效果。本發(fā)明以單純皰疹病毒為例，闡明藏藥洪連提取物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。單純皰疹病毒引起的性傳播性疾病，與宮頸癌關(guān)系密切。目前國(guó)內(nèi)外研究的抗病毒藥物已接近50種，但真正應(yīng)用于臨床的只有阿昔洛韋、拉米夫定等少數(shù)幾類核苷類藥物，這類藥物作用靶點(diǎn)為病毒DNA聚合酶。它們以酶反應(yīng)底物類似物的形式與正常底物競(jìng)爭(zhēng)，直接降低或阻斷病毒DNA聚合酶活性，其共同缺點(diǎn)是易產(chǎn)生耐藥毒株，抗病毒譜窄，毒副作用大，價(jià)格高昂或藥理特性不理想。因此，尋求更新更好的抗病毒藥物已勢(shì)在必行。本發(fā)明提供了一種藏藥洪連提取物，該提取物可以在制備抗病毒藥物和保肝藥物中應(yīng)用，與現(xiàn)有藥物相比，其毒性低，安全可靠，藥效作用強(qiáng)，而且藏藥洪連原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡(jiǎn)單、制備成本低，可以制成各種劑型。參考文獻(xiàn)加措.藏藥資源的科學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略探討.西藏科技，2007，5:14-16[2]強(qiáng)巴赤烈.中國(guó)的藏醫(yī).北京中國(guó)藏學(xué)出版社，2000[3]蔡景峰.中國(guó)藏醫(yī)學(xué).北京科學(xué)出版社，1999中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所.中藥志(第4冊(cè)).北京人民衛(wèi)生出版社，1998中科院西北高原生物研究所編著.藏藥志.西寧青海人民出版社，1991鄭秀萍，石建功.短筒兔耳草化學(xué)成分的研究.中草藥，2004，35(5):503504中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志.北京科學(xué)出版社，1979[8]陳勇，程明，韓鳳梅，等.CCU肝損傷與免疫性肝損傷小鼠模型間差異性比較.研究實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2005，35(5):417422劉燕.抗肝炎中藥研究概括.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，28(7):68668
發(fā)明內(nèi)容將洪連全草在磨碎機(jī)上磨碎，過(guò)40目篩備用。稱取300g粉末，用4倍體積的75%乙醇溶液加熱回流提取5h，趁熱用四層紗布過(guò)濾，再用布氏漏斗抽濾。之后再加入乙醇加熱回流，反復(fù)處理四次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干乙醇后得到總浸膏。將總浸膏用溫水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等雜質(zhì)。萃取多次，直到石油醚層透亮且顏色不再變淺為止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇顏色不再變淺為止。將正丁醇相在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，所得固體物質(zhì)即為總皂苷。以洪連總皂苷灌胃昆明種小鼠，CC14(四氯化碳)誘導(dǎo)肝損傷，解剖發(fā)現(xiàn)肝臟顏色呈現(xiàn)暗紅色，且表面斑點(diǎn)不明顯，斑點(diǎn)數(shù)量較少。鏡檢觀察發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，肝竇結(jié)構(gòu)清晰，未發(fā)現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞壞死。血清中ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)，AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)均降低，且隨著劑量增加ALT，AST值越趨于正常值，有明顯的量效關(guān)系。通過(guò)采用上述方法處理所得的洪連提取物，可以按中國(guó)藥典2005版的標(biāo)準(zhǔn)制成各種制劑，包括栓劑，栓劑、片劑、丸劑、顆粒劑、膜劑、微囊劑、滴丸劑、氣霧劑、酒劑、糖漿劑、口服液、注射液或注射粉針劑，這些藥物組合物可以含有O.1%100%洪連提取液，本發(fā)明所提供得洪連提取物對(duì)于治療肝炎、改善和恢復(fù)肝功能方面療效顯著。具體實(shí)施例方式實(shí)施例一洪連總皂苷提取物的制備將洪連全草在磨碎機(jī)上磨碎，過(guò)40目篩得粉末。稱取300g粉末，用4倍體積的75%乙醇溶液加熱回流提取5h，趁熱用四層紗布過(guò)濾，再用布氏漏斗抽濾。之后再加入乙醇加熱回流，反復(fù)處理四次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干乙醇后得到總浸膏。將總浸膏用溫水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等雜質(zhì)。萃取多次，直到石油醚層透亮且顏色不再變淺為止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇顏色不再變淺為止。將正丁醇相在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，所得固體物質(zhì)即為總皂苷。實(shí)施例二CC14肝損傷模型的建立昆明種小鼠，普通級(jí)，體重為1822g，蘭州大學(xué)醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將小鼠禁食24h，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、CCU模型組、洪連提取物治療組。對(duì)照組和CCl4模型組以生理鹽水0.25ml/10g灌胃，治療組以洪連提取物灌胃，每天1次，共7d，藥物濃度分別為125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg。末次給藥后lhCCl4模型組和治療組均腹腔注射0.2XCCl4，每只小鼠注射0.2ml，同時(shí)正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水0.2ml/只，之后禁食不禁水。16h后以摘除眼球取血法取血，收集血液，4"C靜置30min后于4000轉(zhuǎn)/分離心10min。收集血清，于4。C保存待測(cè)。小鼠取血后立即以頸椎脫臼法處死。解剖，取肝組織，用生理鹽水清洗后拍照觀察。實(shí)施例三洪連提取物對(duì)肝損傷小鼠血清中ALT、AST活性的影響與對(duì)照組相比，CC14模型組小鼠血清ALT，AST值明顯升高(表l)。治療組與CCU模型組相比ALT，AST均降低，且隨著劑量增加，ALT、AST值越趨于正常值，有明顯的量效關(guān)系。表l洪連提取物對(duì)肝損傷小鼠血清中ALT、AST活性的影響±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例四洪連提取物對(duì)肝損傷小鼠肝臟的治療作用cci4模型組小鼠在注射ccu后早期即有明顯的肝損傷表現(xiàn)，鏡下可見(jiàn)肝小葉中央靜脈周圍及小葉內(nèi)外有彌漫的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)同時(shí)伴有肝細(xì)胞變性及點(diǎn)、片狀壞死，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)損傷不斷加重。但治療組小鼠肝損傷情況明顯輕于同時(shí)間CCU模型組，前者炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，肝竇結(jié)構(gòu)清晰，未發(fā)現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞壞死。實(shí)施例五洪連提取物的抗病毒作用表2顯示，洪連總皂苷可通過(guò)抑制吸附、直接殺滅等方式對(duì)HSV-2病毒產(chǎn)生明顯的抑制作用。表2洪連總皂苷對(duì)HSV-2病毒的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例六洪連提取物急性毒性試驗(yàn)的初步研究昆明種小鼠同實(shí)施例2LD50的測(cè)定參考改良寇氏法，昆明種小鼠購(gòu)買后適應(yīng)環(huán)境3天。在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上選擇5個(gè)劑量組，分別為1250.Omg/kg、1062.5mg/kg、900.0mg/kg、765.0mg/kg、650.0mg/kg，每組10只，雌雄各半。灌胃給藥0.25ml/10g，給藥后讓小鼠自由攝食及飲水每天上、下午各觀察一次，連續(xù)觀察7d，記錄毒性反應(yīng)情況和死亡動(dòng)物分布，對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行解剖，觀察病變情況。按下式計(jì)算藥物的LD5o:LD50=lg-l[lgDm-lgr(EP-0.5)]表3洪連提取物急性毒性試驗(yàn)結(jié)果齊<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>根據(jù)公式r=lg-l[(lgDm-lgDn)/(G-1)];LD50=lg-1[lgDm-lgr(EP-0.5)]得出LD50=916.22mg/kg(式中r一目鄰兩組劑量的比值；Dn^最大劑量；D『最小劑量；11=預(yù)分組數(shù)=5)。小鼠給藥后，未立刻出現(xiàn)死亡。部分小鼠出現(xiàn)蜷縮及活動(dòng)減少，但無(wú)豎毛、抽搐、翻倒等現(xiàn)象。5h后最大劑量組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡。死亡動(dòng)物的主要表現(xiàn)為動(dòng)物毛色無(wú)光、不順、弓背、精神不振，對(duì)外界聲音及刺激表現(xiàn)不敏感，不思飲食。解剖胸腔和腹腔，觀察未見(jiàn)異常病變，死亡動(dòng)物無(wú)性別差異。洪連提取物灌胃給藥，小鼠的急性毒性試驗(yàn)LD5o二916.22mg/kg。參考我國(guó)中藥的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，洪連提取物屬于中等毒性的藥物。權(quán)利要求1.一種洪連提取物，其特征是該提取物可以在制備抗病毒藥物和治療肝病的藥物中應(yīng)用，尤其是在制備抗單純皰疹病毒藥物中應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的洪連提取物，其特征在于該提取物按下列方法制備將洪連全草在磨碎機(jī)上磨碎，過(guò)40目篩得粉末。稱取300g粉末，用4倍體積的75%乙醇溶液加熱回流提取5h，趁熱用四層紗布過(guò)濾，再用布氏漏斗抽濾。之后再加入乙醇加熱回流，反復(fù)處理四次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干乙醇后得到總浸膏。將總浸膏用溫水溶解，加入石油醚除去色素、油脂等雜質(zhì)。萃取多次，直到石油醚層透亮且顏色不再變淺為止。水相再用正丁醇萃取多次，直至正丁醇顏色不再變淺為止。將正丁醇相在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，所得固體物質(zhì)即為總皂苷。3.根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的洪連提取物，其特征在于該提取物可以單獨(dú)或與其它藥物配伍或加入藥學(xué)上可以接受的輔料，制備成軟膠囊、或硬膠囊、或滴丸、微囊劑、或片劑、或分散片、或顆粒劑、或注射液、或注射粉針劑、或口服液、氣霧劑、酒劑、糖漿劑、或栓劑、膜劑、經(jīng)口服或皮膚或粘膜或直腸方式應(yīng)用。洪連總皂苷在其中的含量可以為O.1%100%。全文摘要本發(fā)明為藏藥洪連提取物及其在制備抗病毒藥物和保肝藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的藏藥洪連提取物為有機(jī)溶劑乙醇加熱回流提取，經(jīng)石油醚、正丁醇去除雜質(zhì)所得的總皂苷。該藏藥洪連提取物具有明顯的抗病毒作用，以及保護(hù)肝細(xì)胞，降低血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性，從而改善和恢復(fù)肝功能的作用。故而該提取物可以在制備抗病毒藥物和保肝藥物中應(yīng)用。本發(fā)明提供的藏藥洪連提取物可以在制備抗病毒藥物和保肝藥物中以單味或者復(fù)方方式制備成藥物組合物，同時(shí)，其原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡(jiǎn)單，成本低，并可很方便地做成各種劑型。具有重要的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用前景。文檔編號(hào)A61K36/185GK101167779SQ20071020206公開(kāi)日2008年4月30日申請(qǐng)日期2007年10月16日優(yōu)先權(quán)日2007年10月16日發(fā)明者傅永紅,田允,張春江,李紅玉,王曉琴,璐白申請(qǐng)人:李紅玉;蘭州大學(xué)