專利名稱：包含幾種肉毒桿菌毒素的組合物的制作方法
包含幾種肉毒桿菌毒素的組合物
本發(fā)明主題是包含幾種A型肉毒桿菌毒素的組合物。 自20世紀(jì)80年代以來，肉毒桿菌毒素，尤其是A1型肉毒桿菌毒素(由 Ipsen出售的Dysport⑧或由AUergan出售的Botox )已經(jīng)用于在人類中治 療多種疾病/病癥。在使用肉毒桿菌毒素治療的疾病/病癥中，尤其可以提及 肌障礙(例如瞼痙攣、成人或兒童的痙攣狀態(tài)或斜頸)、偏頭痛、肌起源疼 痛、神經(jīng)性疼痛、糖尿病、多汗癥(或過量出汗)、唾液分泌過多或甚至皺 紋。
如在提及的治療中描述的，目前已知的肉毒桿菌毒素的用途涉及它們 的標(biāo)準(zhǔn)肌內(nèi)施用。肌內(nèi)注射引起它們暫時麻痹，即在某段時間內(nèi)阻斷肌肉 收縮。
現(xiàn)在，目前4吏用的肉毒桿菌毒素組合物具有時間有限的作用時間。 為了響應(yīng)工業(yè)需要，尋找增加肉毒桿菌毒素作用時間而不改變它生物
活性的方法已經(jīng)成為必須。
因此，本發(fā)明計劃解決的問題是提供具有延長作用時間的新的肉毒桿
菌毒素組合物。
出乎意料地，發(fā)明人已表明組合幾種肉毒桿菌毒素是可能的。 為此目的，本發(fā)明提出組合物，其包括至少 -一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，
-和一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基酸序列與Al型肉毒桿菌神經(jīng) 毒素的氨基酸序列有至少5%的差異。
本發(fā)明提供確定的優(yōu)點(diǎn)，尤其是當(dāng)將所迷組合物注射進(jìn)平滑肌或骨骼 肌內(nèi)時，本組合物引起延長的肌肉麻痹持續(xù)時間。在某些情況中肌肉麻痹 的持續(xù)時間可高達(dá)10個月，并且更通常地在2至8個月間變動。
本發(fā)明提供如下事實(shí)作為另一優(yōu)點(diǎn)，所述事實(shí)是與目前市售肉毒桿菌 毒素的劑量相比，本發(fā)明的組合物可以以低得多的劑量來使用。換句話講， 為獲得肌肉相同的松弛，注射更少量的肉毒桿菌毒素。對于相同的治療適
應(yīng)癥，已經(jīng)觀察到給藥劑量降低10至70%，優(yōu)選25至50%(為得到相同 的生物學(xué)效應(yīng)，在注射的毒素單位間進(jìn)行的比較)。
本發(fā)明組合物的另一優(yōu)點(diǎn)是它們引起很少的副作用，并且尤其是比目 前已知的肉毒桿菌毒素組合物引起少得多的副作用。特別是使用低劑量的 本發(fā)明組合物的可能性有利地使減少副作用成為可能。在避免的副作用中， 可以提及與蛋白質(zhì)自身的免疫原性相關(guān)的那些，及咽下困難、上瞼下垂或 全身肌無力，該列表并非窮盡的。
此外，本發(fā)明組合物具有當(dāng)將所述組合物注射進(jìn)平滑肌或骨骼肌內(nèi)時 具有提高的作用速度的另一優(yōu)點(diǎn)。生物學(xué)或臨床效應(yīng)可在注射后12小時出 現(xiàn)，并且更通常在注射后14至24小時期間出現(xiàn)。
有利地是，根據(jù)本發(fā)明的組合物獲得非常均一的肌肉松弛效應(yīng)。
最后，本發(fā)明具有能夠在所有工業(yè)，尤其是在制藥、獸醫(yī)和化妝品工 業(yè)中及在每日保健或身體保健領(lǐng)域中利用的優(yōu)點(diǎn)。
閱讀下面的描述和實(shí)施例后本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)和特征將變得非常明 顯，所述描述和實(shí)施例完全以闡明的方式給出并且是非限制性的。
本發(fā)明的主題是組合物，該組合物包含至少
-一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，
-和一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基酸序列與Al型肉毒桿菌神經(jīng) 毒素的氨基酸序列有至少5%的差異。
表述"肉毒桿菌神經(jīng)毒素"是指肉毒桿菌毒素，其為游離蛋白質(zhì)(即沒 有與它復(fù)合的蛋白質(zhì))，或蛋白質(zhì)復(fù)合體，所述蛋白質(zhì)復(fù)合體能夠包括，例 如，與肉毒桿菌毒素組合的血凝素(HA蛋白質(zhì))，或蛋白質(zhì)片段。
表述"肉毒桿菌毒素，，是指具有肉毒桿菌毒素生物活性的分子，其可 以是蛋白質(zhì)，或多肽，或肽，或融合蛋白，或截短的蛋白質(zhì)，或嵌合蛋白， 或突變蛋白質(zhì)或重組蛋白質(zhì)。表述"毒素的生物活性"在本發(fā)明意義中是指肌肉麻痹或胞吐的抑制 作用，尤其是乙酰膽堿或另一神經(jīng)遞質(zhì)的胞吐的抑制作用。
"蛋白質(zhì)、多肽或肽"在本發(fā)明意義中是指氨基酸的聚合物，其為天 然的或非天然的、左旋的或非左旋的、右旋的或非右旋的。
"嵌合蛋白"在本發(fā)明意義中是指不同類型分子進(jìn)行組合后獲得的蛋 白質(zhì)，例如脂類、糖脂、肽、多肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白、碳水化合物、多糖、 核酸、聚乙二醇等等進(jìn)行組合后。
例如才艮據(jù)在Current topics in Microbiology and Immunology (1995)， 195， p. 151-154中描述的方法從包含肉毒桿菌毒素的蛋白質(zhì)復(fù)合體中可以 獲得純的或基本純的肉毒桿菌神經(jīng)毒素。例如通過對含有肉毒梭菌 (Clostridium botulinum )菌林的發(fā)酵培養(yǎng)基或培養(yǎng)液進(jìn)行純化可以獲得 純的或基本純的肉毒桿菌神經(jīng)毒素，并且例如可以用肉或富含蛋白質(zhì)的食 物來進(jìn)行富集。
組合物的第一基本成分由Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素構(gòu)成。
Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素事實(shí)上對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的肉毒桿菌毒素，所述標(biāo)準(zhǔn)的 肉毒桿菌毒素在不區(qū)分亞型的情況下通常被稱為A型肉毒桿菌毒素。Al 型肉毒桿菌神經(jīng)毒素以DYSPORT⑧或BOTOX⑧名稱出售。
根據(jù)本發(fā)明，Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素可以對應(yīng)Al肉毒桿菌毒素和血 凝素的復(fù)合體，或可以對應(yīng)沒有所有復(fù)合體蛋白質(zhì)的Al型肉毒桿菌毒素。
組合物的第二基本成分由A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素構(gòu)成，其氨基酸序列 與Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少5%的差異。為了方便閱讀 本公開的剩余內(nèi)容，該神經(jīng)毒素被稱為Ax型肉毒桿菌神經(jīng)毒素。
表述"A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基^列與Al型肉毒桿菌神經(jīng) 毒素的氨基酸序列有至少1%的差異"是指這些氨基酸序列(重鏈和輕鏈) 對應(yīng)沒有所有復(fù)合體蛋白質(zhì)的肉毒桿菌毒素的序列。例如，10%的差異是 指在100個氨基酸中有10個氨基酸是不同的。應(yīng)理解差異可以是丟失，在 實(shí)例中10%的差異可以是指在100個氨基酸中有10個氨基酸丟失了。
更特別地，本發(fā)明組合物包含至少一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨
基酸序列與Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少8%的差異。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含至少一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基 酸序列與Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少10%的差異。
更優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含至少一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨 基酸序列與Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少12%的差異。
在Ax型肉毒桿菌神經(jīng)毒素中，可以提及A2型肉毒桿菌毒素。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含至少
-一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和
-一種A2型肉毒桿菌神經(jīng)毒素。
在1990年左右，從患肉毒中毒的兒童病例開始第一次分離到A2型肉 毒桿菌毒素(Sakaguchi et al" Int. J. Food Microbiol. (19卯)，11， 231-242)。 該毒素在免疫學(xué)和生化上不同于Al型肉毒桿菌毒素。
可以從以下菌抹中分離A2型肉毒桿菌毒素Kyoto-F、 Chiba-H、 Y-8036、 7103-H、 7105-H、 KZ1828、 NCTC2012或NCTC9837(Cordoba et al.， System. Appl. Microbiol. (1995)， 18， 13-22; Franciosa et al.,在2003年 11月40th Interagency Botulism Research Coordinating Committee(IBRCC) Meeting上的摘要)。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含從菌林肉毒梭菌分離的A2型肉毒桿菌毒 素，該菌林肉毒梭菌可以在國立典型培養(yǎng)物保藏中心(National Collection of Type Culture-Central Public Health Laboratory -London-UK)以保藏號 NCTC9837得到。菌林NCTC9837有時被稱為菌林Mauritius 1955。
更優(yōu)選地，本發(fā)明組合包含至少
-一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和
畫從菌林肉毒梭菌NCTC9837分離的一種A2型肉毒桿菌神經(jīng)毒素。 A2型肉毒桿菌毒素不同于Al毒素，尤其是它的氨基^列、它的分
子量、它的免疫學(xué)和遺傳學(xué)特征(Kubota et al.， Biochem. Biophys. Res.
Commun. (1996)， 224(3)， 843-848)。
A2型和Al型肉毒桿菌毒素間的生化差異尤其在于Al型肉毒桿菌毒
素含有NTNH蛋白質(zhì)(非毒性和非血凝素蛋白質(zhì))和至少3種血凝素(HA17、 HA34和HA70)，而A2型肉毒桿菌毒素含有NTNH蛋白質(zhì)，無血凝素 (Sakaguchi et al" Int. J. Food Microbiol. (19卯)，11， 231-242)。
A2型肉毒桿菌毒素具有大約101 kDa的重鏈，而Al型肉毒桿菌毒素 具有大約93 kDa的重鏈(Kozaki et al.， Microbiol. Immunol. (1995)， 39(10)， 767-74)。
A2型和Al型肉毒桿菌毒素的氨基^列顯著不同，更特別地是在重 鏈水平上。例如，在來自菌林Kyoto-F的A2型肉毒桿菌毒素的情況中， 兩種毒素間847個重鏈氨基酸中有109個氨基酸是不同的(13%的差 異)(Cordoba et al" System. Appl. Microbiol. (1995)， 18,13-22)。
通常，分離的Al型肉毒桿菌毒素的重鏈彼此間具有低于2°/。的差異。 肉毒桿菌毒素的重鏈參與分子的主要生物活性，包括結(jié)合到耙細(xì)胞上的受 體和胞內(nèi)運(yùn)輸(Zhang et al.， Gene(2003)， 315， 21-32)。
A2型和A1型肉毒桿菌毒素間存在免疫學(xué)差異。事實(shí)上，抗A1型肉 毒桿菌毒素的抗體不識別A2型肉毒桿菌毒素，并且反之亦然。(Sakaguchi et al" Int. J. Food Microbiol. (1990)， 11， 231-242; Kozaki et al" Microbiol. Immunol. (1995)， 39(10)， 767-74)。
根據(jù)本發(fā)明的組合物此外包含至少一種鎮(zhèn)痛劑。
在本發(fā)明合適的鎮(zhèn)痛劑中，可提及選自鈉通道抑制劑的鎮(zhèn)痛劑。
根據(jù)本發(fā)明的組合物也可以包含下面提及的鎮(zhèn)痛劑的混合物。 "鈉通道抑制劑"是指例如以下化合物(任選地以藥學(xué)上可接受的鹽的 形式存在)
-利多卡因；
畫丁卡因；
-布比卡因；
-普魯卡因；
-甲哌卡因；
-辛可卡因；
根據(jù)本發(fā)明的組合物也可包含至少 一種多糖或幾種多糖的混合物。
"多糖"在本發(fā)明意義中是指包含至少2個單體的聚合物，所述單體 為糖。該定義包括二糖。
在本發(fā)明框架內(nèi)，多糖可以是離子型的和/或非離子型的。
優(yōu)選地，組合物包含至少一種多糖，該多糖包含大部分地葡萄糖單位， 在數(shù)值術(shù)語中，術(shù)語"大部分地"意思是大多數(shù)的單體是葡萄糖。
作為本發(fā)明合適的多糖的實(shí)例，可以提及淀粉、淀粉衍生物、羥乙基 淀粉，尤其是2-羥基-乙基淀粉。
本發(fā)明合適的多糖可以被取代，尤其可以被烷基、烷氧基取代，或也 可以被本身被醇官能取代的烷基取代。
根據(jù)本發(fā)明的變型，本發(fā)明組合物中包含的多糖的量為每l單位肉毒 桿菌毒素至少ljug多糖。根據(jù)多糖的選擇，可以使用每l單位肉毒桿菌毒 素至少0.5|iig多糖。
根據(jù)本發(fā)明的組合物此外可包含至少一種表面活性劑或幾種表面活性 劑的混合物。
"表面活性劑"在本發(fā)明意義中意思是乳化劑或增溶劑。 在本發(fā)明框架內(nèi)利用的表明活性劑可以選自陽離子型、陰離子型或非
離子型表面活性劑。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含至少一種選自聚山梨酯的非離子型表面活
性劑的表面活性劑。
在聚山梨酯中，可以提及聚山梨酯20、聚山梨酯21、聚山梨酯40、
聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚
山梨酯85、聚山梨酯120、醋酸聚山梨酯80。
根據(jù)本發(fā)明組合物變型的優(yōu)選表面活性劑是聚山梨酯80。 根據(jù)本發(fā)明的組合物此外可包含至少 一種血管收縮劑或幾種血管收縮
劑的混合物。
在本發(fā)明框架內(nèi)利用的血管收縮劑可以選自兒茶酚胺或非兒茶酚胺類 型的血管收縮劑。
在本發(fā)明合適的血管收縮劑中，可以提及例如腎上腺素、去曱腎上腺 素、左旋異腎上腺素、苯異丙胺、麻黃堿、去氧腎上腺素、內(nèi)皮素。
本發(fā)明組合物可以是固體形式，例如粉劑、凍干粉、粒劑、片劑或脂
質(zhì)體。固體形式的本發(fā)明組合物可以例如在低于4。C或低于0'C的溫度下保 存而不改變它的生物活性。
本發(fā)明組合物可以以凝膠化體系中肉毒桿菌神經(jīng)毒素顆粒的水分散體 形式給出。
本發(fā)明組合物也可以以液體形式，例如溶液劑、乳劑或混懸劑的形式 給出。
本發(fā)明組合物的施用優(yōu)選如例如通過肌肉注射或皮下注射進(jìn)行。
在注射的情況下，本發(fā)明組合物可以與利于注射的試劑組合，所述試 劑也稱為注射媒介物或注射載體。
根據(jù)本發(fā)明組合物的實(shí)施方案，Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素與Ax型肉毒 桿菌神經(jīng)毒素的單位分?jǐn)?shù)的比值[單位Al/單位Ax可以在1/99到99/1之 間，有利地在5/95到95/5之間，或在10/90到90/10之間。
根據(jù)本發(fā)明組合物的變型，Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素與Ax型肉毒桿菌 神經(jīng)毒素的單位分?jǐn)?shù)的比值為50/50。
根據(jù)本發(fā)明組合物的另一變型，Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素與Ax型肉毒 桿菌神經(jīng)毒素的單位分?jǐn)?shù)的比值為60/40。
根據(jù)本發(fā)明組合物的另一變型，Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素與Ax型肉毒 桿菌神經(jīng)毒素的單位分?jǐn)?shù)的比值為40/60。
本發(fā)明的主題也是如上描述本發(fā)明組合物用于獲得藥物的用途，所述 藥物旨在治療肌肉疾病、神經(jīng)肌肉疾病、神經(jīng)疾病、整形外科疾病、目艮科 疾病、關(guān)節(jié)病理、內(nèi)分泌障礙或泌尿疾病。
本發(fā)明主題也是如上描述的本發(fā)明組合物用于獲得藥物的用途，所述 藥物旨在治療斜頸、痙攣性斜頸、上肢和/或下肢痙攣狀態(tài)的局部障礙、疼 痛、肌肉疼痛、由肌肉痙攣引起的疼痛、肌筋膜疼痛、術(shù)后疼痛、肌肉痙 攣、半面肌痙攣、瞼痙攣、斜視、面部不對稱、肌張力障礙、大腦性癱瘓、
頭疼、偏頭痛、纖維肌痛、肌痛、多汗、臭汗、髖關(guān)節(jié)變性病、髖部關(guān)節(jié) 病、肘部上髁炎、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、運(yùn)動障礙、失弛緩癥、奧迪 括約肌功能障礙、胰腺炎、痛風(fēng)、肛裂、便秘、肛門痙攣、幽門瓣痙攣、 痙攣性膀胱、膀胱痙攣、尿失禁、尿潴留、前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位癥、
牛皮癬、鼻炎、過敏性鼻炎、肥胖、過度流淚(hyperlacrimation)、骨折、
腱撕裂或肩部回旋肌肉帶病變。
本發(fā)明主題也是如上描述的本發(fā)明組合物用于獲得化妝品的用途。 本發(fā)明主題也是如上描述的本發(fā)明組合物用于治療面部皺紋線(facial
frown lines)、面部鈹紋(facial wrinkles)、皮膚鈹紋、目艮輪廓鈹紋、眉間鈹
紋線、禿頭、痤齊、過量出汗或脫發(fā)的用途。
本發(fā)明主題也是如上描述的本發(fā)明組合物，其作為藥物。 本發(fā)明主題也是藥物組合物，其包含上面描述的本發(fā)明組合物。 提供用于治療上面提及的疾病或病癥的本發(fā)明組合物的劑量，根據(jù)施
用方法、待治療的受試者的年齡和體重及后者的狀態(tài)而不同，并且最后將
由主治醫(yī)師或獸醫(yī)來決定。由主治醫(yī)師或獸醫(yī)確定的此數(shù)量此處稱為"治
療有效量"。
應(yīng)注射的治療有效量也根據(jù)待治療的肌肉數(shù)量及根據(jù)這些肌肉的質(zhì)量 而不同。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物的注射劑量在5到2000單位的肉毒桿菌毒素， 更優(yōu)選地在10到1000單位的肉毒桿菌毒素，還更優(yōu)選地在25到500單位 的肉毒桿菌毒素。
以下實(shí)施例闡述本發(fā)明，但不限制它的范圍。
實(shí)施例
通過測定致死劑量LDs。對本發(fā)明使用的肉毒桿菌神經(jīng)毒素進(jìn)行定量。 "LDso"在本發(fā)明意義中是指給定物質(zhì)的致死劑量或半致死劑量。這是導(dǎo) 致群組中檢測的50%動物死亡的劑量(或數(shù)量)。毒素的單位(U)對應(yīng)經(jīng)腹膜 內(nèi)途徑施用的小鼠中的LD50。
實(shí)施例中4吏用的組合物
實(shí)施例中使用的組合物的基本成分如下描述。沒有詳細(xì)說明存在的其 它成分。
組合物A: -250單位的Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素(Dysport⑧)
-250單位的從菌林肉毒梭菌NCTC9837分離的A2型肉毒 桿菌神經(jīng)毒素
組合物B: -500單位的Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素(Dyspor條)
實(shí)施例1:瞼痙攣(劑量120單位)
患瞼痙攣的50歲患者，由位于眼周圍肌肉收縮引起不隨意的閉眼，所 述患者接受本發(fā)明組合物A的幾次肌內(nèi)注射，組合物A的總注射劑量為 120單位的肉毒桿菌神經(jīng)毒素，總體積lml。
注射方案如下實(shí)施將無菌針頭引入含組合物A的小瓶中，為了向其 中引入2.5ml可注射的0.9 %的氯化鈉溶液。因此獲得了含200單位/ml的 肉毒桿菌神經(jīng)毒素的澄清溶液。
患兩側(cè)瞼痙攣的患者通過注射每只眼睛接受120單位的肉毒桿菌神經(jīng) 毒素(組合物A)(即0.6ml，將含500單位肉毒桿菌神經(jīng)毒素(組合物A)的1 小瓶稀釋在2.51111中)。在清潔眼睛周圍的皮膚后，使用lml注射器(23或 25號針頭)通過皮下途徑進(jìn)行注射。
將O.lml劑量(20單位)的組合物A注射到每只眼睛的上眼輪臣肌眶隔 前區(qū)和眶區(qū)間連接的內(nèi)部，并將0.2ml劑量(40單位)的組合物A注射到所 述連接的外部。同樣地，將0.1ml劑量(20單位)的組合物A注射到每只眼 睛下眼輪匝肌眶隔前區(qū)和眶區(qū)間連接的內(nèi)部，并將0.2ml劑量(40單位)的 組合物A注射到所述連接的外部。在向上眼瞼注射的過程中，必須優(yōu)選地 將針定向使得避免眼瞼的中心，即上瞼提肌插入的部分。在隨后的施用中， 每只眼睛的總劑量可以減少至80單位(0.4ml),即每個注射位點(diǎn)20單位(即 O.lml)。
在該患者的情況中，在治療開始后約12小時發(fā)生肌肉麻痹，并且麻痹持續(xù)約20至21周。沒有觀察到部分的或完全的上瞼下垂。
在年齡相同并且呈現(xiàn)相似癥狀的另 一患者的情況中，使用相同的方案， 但是使用相同劑量的組合物B，在治療開始后約24小時發(fā)生肌肉麻痹并且 麻痹持續(xù)約12至13周。
實(shí)施例2:瞼痙攣(劑量60單位)
患瞼痙攣的50歲患者，由位于眼周圍肌肉收縮引起不隨意的閉眼，所 述患者接受本發(fā)明組合物A的幾次肌內(nèi)注射，組合物A的總注射劑量為 lml總體積60單位的肉毒桿菌神經(jīng)毒素。
注射方案如下實(shí)施將無菌針引入含組合物A的小瓶中，為了向其中 引入2.5ml可注射的0.9 %氯化鈉溶液。因此獲得了含200單位/ml的肉毒 桿菌神經(jīng)毒素的澄清溶液。
患兩側(cè)瞼痙攣的患者通過注射每只眼睛接受60單位的肉毒桿菌神經(jīng) 毒素(組合物A)(即0.3ml，將含500單位肉毒桿菌神經(jīng)毒素(組合物A)的1 小瓶稀釋在2.5ml中)。在清潔眼睛周圍的皮膚后，通過皮下途徑進(jìn)行注射。
將0.05ml劑量(IO單位)的組合物A注射到每只眼睛的上眼輪匝肌眶隔 前區(qū)和眶區(qū)間連接的內(nèi)部，并將O.lml劑量(20單位)的組合物A注射到所 述連接的外部。同樣地，將0.05ml劑量(10單位)的組合物A注射到每只眼 睛下眼輪匝肌眶隔前區(qū)和眶區(qū)間連接的內(nèi)部，并將O.lml劑量(20單位)的 組合物A注射到所述連接的外部。在向上眼瞼注射的過程中，必須優(yōu)選地 將針定向使得避免眼瞼的中心，即上瞼提肌插入的部分。在隨后的施用中， 每只眼睛的總劑量可以減少至40單位(0.2ml)，即每個注射位點(diǎn)10單位(即 0.05ml)。
在該患者的情況中，在治療開始后約24小時發(fā)生肌肉麻痹并且麻痹持 續(xù)約12至13周。
因?yàn)槭┯脛┝吭诙舅貑挝粩?shù)量上減少了 50°/。，結(jié)果因此與使用組合物 B得到的那些結(jié)果相似。
實(shí)施例3:痙攣性斜頸
患痙攣性斜頸的35歲女性患者接受本發(fā)明組合物A的幾次肌內(nèi)注射， 根據(jù)本發(fā)明，組合物A的總注射劑量為lml總體積500單位的肉毒桿菌神 經(jīng)毒素。
注射方案如下實(shí)施將無菌針引入含組合物A的小瓶中，以便向其中 引入lml可注射的0.9 %氯化鈉溶液。因此獲得了含500單位/ml的肉毒桿 菌神經(jīng)毒素的澄清溶液。
患痙攣性斜頸的女性患者通過注射接受500單位的肉毒桿菌神經(jīng)毒素 (組合物A)，即lml,將l小瓶500單位在lml中稀釋。將總劑量分配在2 或3個最受影響的頸肌(胸鎖乳突肌、夾肌、斜方肌或耳角肌)間。
在該患者中，在治療開始后約18小時發(fā)生肌肉麻痹。麻痹持續(xù)約20 至21周。沒有注意到咽下困難。
在年齡相同并且呈現(xiàn)相似癥狀的另 一女性患者中，使用相同的方案， 但是使用相同劑量的組合物B，在治療開始后約48至60小時發(fā)生肌肉麻 痹，并且麻痹持續(xù)約12至13周。
權(quán)利要求
1.組合物，其包含至少-一種A1型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和-一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基酸序列與A1型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少5％的差異。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征在于它包含至少一種A型肉毒桿 菌神經(jīng)毒素，該A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基^列與Al型肉毒桿菌神 經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少10%的差異。
3. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少 -一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和-一種A2型肉毒桿菌神經(jīng)毒素。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少 -一種Al型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和-一種從菌林肉毒梭菌NCTC9837分離的A2型肉毒桿菌神經(jīng)毒素。
5. 根據(jù)前述;K利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種鎮(zhèn)痛劑。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種多糖。
7. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種多 糖，該多糖為2-羥基-乙基淀粉。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種表面 活性劑，該表面活性劑選自陽離子型、陰離子型或非離子型表面活性劑。
9. 根據(jù)前述^=又利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種表面 活性劑，該表面活性劑選自聚山梨酯的非離子型表面活性劑。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種表 面活性劑，該表面活性劑為聚山梨酯80。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于它包含至少一種血管收縮劑。
12. 根據(jù)權(quán)利要求l至ll的組合物，其作為藥物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1至12之一的組合物用于獲得藥物的用途，所述藥 物旨在治療肌肉疾病、神經(jīng)肌肉疾病、神經(jīng)疾病、整形外科疾病、眼科疾 病、關(guān)節(jié)病理、內(nèi)分泌障礙或泌尿疾病。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至12之一的組合物用于獲得藥物的用途，所述藥 物旨在治療斜頸、痙攣性斜頸、上肢和/或下肢痙攣狀態(tài)的局部障礙、疼痛、 肌肉疼痛、由肌肉痙攣引起的疼痛、肌筋膜疼痛、術(shù)后疼痛、肌肉痙攣、 半面肌痙攣、瞼痙攣、斜視、面部不對稱、肌張力障礙、大腦性癱瘓、頭 疼、偏頭痛、纖維肌痛、肌痛、多汗、臭汗、髖關(guān)節(jié)變性病、髖部關(guān)節(jié)病、 肘部上髁炎、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、運(yùn)動障礙、失弛緩癥、奧迪括約 肌功能障礙、胰腺炎、痛風(fēng)、肛裂、便秘、肛門痙攣、幽門瓣痙攣、痙攣 性膀胱、膀胱痙攣、尿失禁、尿潴留、前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位癥、牛 皮癬、鼻炎、過敏性鼻炎、肥胖、過度流淚(hyperlacrimation)、骨折、腱 撕裂或肩部回旋肌肉帶病變。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1至12之一的組合物用于獲得化妝品的用途。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至12之一的組合物用于治療面部皺紋線、面部皺 紋、皮膚皺紋、目艮輪廓皺紋、眉間皺紋線、先頭、痤瘡、過量出汗或脫發(fā) 的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及組合物，其包含至少一種A1型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，和一種A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素，其氨基酸序列與A1型肉毒桿菌神經(jīng)毒素的氨基酸序列有至少5％的差異。
文檔編號A61P21/00GK101360509SQ200780001572
公開日2009年2月4日 申請日期2007年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月27日
發(fā)明者L·貝呂埃 申請人:科學(xué)研究和應(yīng)用咨詢公司