專利名稱：抗過(guò)敏藥以及含有其的食品及飲料、外用藥、化妝品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗過(guò)敏藥以及含有其的食品及飲料、外用藥、化妝品，上述抗過(guò)敏藥含有作為有效成分的新的兒茶素。

背景技術(shù)：
在現(xiàn)代社會(huì)，隨著飲食生活和生活方式的多樣化不斷推進(jìn)，過(guò)敏癥狀也趨于多樣化，并且在逐年增加?，F(xiàn)在，包括潛在的患者在內(nèi)的過(guò)敏患者共有3000萬(wàn)人。另外，還有很多人擔(dān)心類固醇等藥劑的副作用，盡管意識(shí)到過(guò)敏癥狀，但擔(dān)心藥劑的副作用，因此不能期望積極治療而苦于癥狀。因此，消費(fèi)者非常期待和關(guān)心能夠簡(jiǎn)便且放心地?cái)z取具有抗過(guò)敏作用的成分的食品及飲料的開發(fā)。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)指出綠茶中所含的兒茶素類、皂角苷、類黃酮、咖啡因具有抗過(guò)敏效果(參照專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)1和非專利文獻(xiàn)2)，紅富貴(Benifuuki)、紅藤(Benifuji)、紅譽(yù)(benihomare)等含有甲基化兒茶素的茶葉具有I型過(guò)敏抑制效果、抗炎癥效果(參照專利文獻(xiàn)2)。
其中，由紅富貴、紅藤、紅譽(yù)等阿薩姆雜種所制造的綠茶或者包種茶具有抗過(guò)敏作用、抗炎癥作用，這些茶葉已被利用。但是，這些茶葉目前產(chǎn)量少，價(jià)格高，并且其效果存在個(gè)體差異。因此，開發(fā)了一種對(duì)所有人都可期待效果的食品及飲料。
專利文獻(xiàn)1日本專利特開2001-253879號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)2日本專利特開2000-159670號(hào)公報(bào)
非專利文獻(xiàn)1Allergy，52，58(1997)，F(xiàn)ragrance J.，11，50(1990)
非專利文獻(xiàn)2Biol.Pharm.Bull.，20,565(1997)

發(fā)明內(nèi)容
已知具有抗過(guò)敏活性的兒茶素類有表沒(méi)食子兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為EGCG3＂Me)。然而，雖然在其他茶葉中也含有此EGCG3＂Me，但僅憑EGCG3＂Me的抗過(guò)敏活性并不能說(shuō)明所述阿薩姆雜種茶葉萃取物的強(qiáng)抗過(guò)敏活性。
如果可以將阿薩姆雜種茶葉所特有的具有高抗過(guò)敏活性的物質(zhì)提取出來(lái)，用作抗過(guò)敏藥，則能夠容易地制造出對(duì)所有人均可期待效果的食品及飲料。但是，迄今為止還不了解阿薩姆雜種茶葉所特有的具有高抗過(guò)敏活性的物質(zhì)是何種物質(zhì)。
鑒于以上問(wèn)題，本發(fā)明提供一種抗過(guò)敏藥以及含有其的食品及飲料、外用藥、化妝品，所述抗過(guò)敏藥含有以提取阿薩姆雜種茶葉所特有的具有強(qiáng)抗過(guò)敏性的物質(zhì)為目的而獲得的兒茶素類，即表兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)沒(méi)食子酸酯以及這些物質(zhì)的差向異構(gòu)體，并將其作為有效成分。
更具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供如下物質(zhì)和方法。
(1)一種抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是由下述通式(1)表示。
[化1]
[式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。] 如上所述，兒茶素類具有抗氧化作用、動(dòng)脈硬化抑制作用、血壓上升抑制作用、血糖上升抑制作用、殺菌作用、抗菌作用、除臭作用等各種效果。本發(fā)明的發(fā)明人們發(fā)現(xiàn)，由通式(1)所表示的化合物，即表兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂Me)、表兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG4＂Me)、表兒茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂4＂diMe)、表兒茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂5＂diMe)、表兒茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂4＂5＂triMe)以及這些物質(zhì)的差向異構(gòu)體(以下稱為CG3＂Me、CG4＂Me、CG3＂4＂diMe、CG3＂5＂diMe、CG3＂4＂5＂triMe)是阿薩姆雜種茶葉所特有的具有強(qiáng)抗過(guò)敏性的物質(zhì)。其中，發(fā)現(xiàn)ECG3＂Me具有特別強(qiáng)的抗過(guò)敏性。這些物質(zhì)在萃取茶葉時(shí)容易差向異構(gòu)化，所以例如在利用色譜法等分離方法時(shí)，這些物質(zhì)會(huì)和其他甲基化兒茶素一起被分離。此外，R1、R2、R3的對(duì)應(yīng)關(guān)系如下所示。
[表1] 因此，通過(guò)將所述化合物用作抗過(guò)敏藥制造用化合物，可以提供速效性更高的抗過(guò)敏藥。另外，此化合物是從茶葉中萃取出的兒茶素類的一種，因此對(duì)像醫(yī)藥品那樣的副作用的顧慮也很少。
其中，所謂“抗過(guò)敏藥”是指以ECG3＂Me等為有效成分，并且發(fā)揮抑制過(guò)敏癥狀效果的藥物。判斷在所述抗過(guò)敏藥中含有有效成分量的ECG3＂Me等，即可判斷所述抗過(guò)敏藥發(fā)揮充分效果的程度。因此，在本發(fā)明中，所謂抗過(guò)敏藥包括ECG3＂Me單體以及含有其他兒茶素類或保存劑、防腐劑等的混合物這兩種。
(2)根據(jù)(1)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是來(lái)自以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶的茶葉的成分。
以通式(1)所表示的ECG3＂Me等是來(lái)自阿薩姆雜種茶葉的化合物。因此，根據(jù)本發(fā)明(2)，可以通過(guò)制成以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶來(lái)提高茶葉中的ECG3＂Me等的含量，因此可以效率良好地制造抗過(guò)敏藥制造用化合物。
(3)根據(jù)(2)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于所述阿薩姆雜種茶葉是紅富貴。
即使在阿薩姆雜種系茶葉中，紅富貴的抗過(guò)敏活性也特別強(qiáng)。因此，根據(jù)本發(fā)明(3)，可以通過(guò)將紅富貴的茶葉制成綠茶或者包種茶來(lái)提高茶葉中的ECG3＂Me等的含量，因此可以效率更加良好地進(jìn)行提取。此外，提取時(shí)也可以添加磷酸溶液、乙酸溶液、檸檬酸溶液、抗壞血酸溶液。其原因在于通過(guò)添加磷酸溶液等酸性溶液，可以防止像小木麻黃素(strictinin)這樣的水解型單寧酸分解。并且可以提高兒茶素類的萃取效率。
(4)根據(jù)(1)至(3)中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是在利用使用了粒徑為5μm、柱長(zhǎng)度為150mm的十八烷基二氧化硅柱的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定的條件下，洗脫液為水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，在流動(dòng)相的流速為1ml/min下，多元酚組分在37分鐘至50分鐘的溶出時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的成分。
根據(jù)發(fā)明(4)，通過(guò)使用粒徑為5μm、柱長(zhǎng)度為150mm的十八烷基二氧化硅柱(ODS-C18柱)，洗脫液為水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，將在流動(dòng)相的流速為1ml/min下提取出來(lái)的物質(zhì)用作抗過(guò)敏藥制造用化合物，可以更高效良好地制造抗過(guò)敏藥制造用化合物。
洗脫液使用將水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇全部以特定的比例進(jìn)行混合而獲得的溶液。例如，優(yōu)選使用將水、乙腈、磷酸分別以體積比400:10:1進(jìn)行混合而獲得的溶液作為洗脫液A，并且使用將所述洗脫液A與甲醇分別以體積比2:1進(jìn)行混合而獲得的溶液作為洗脫液B。
(5)一種飲料，其特征在于在每100ml的飲料中含有0.08mg至80mg的根據(jù)(1)至(4)中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物。
根據(jù)發(fā)明(5)，通過(guò)使飲料中的抗過(guò)敏藥制造用化合物含量為所述量，可以使兒茶素類在飲料中發(fā)揮抗過(guò)敏作用。如果所述含量不足0.08mg，則不能發(fā)揮充分的抗過(guò)敏作用。另外，當(dāng)所述含量超過(guò)80mg時(shí)，口味會(huì)受損。
此外，本發(fā)明中所謂的“飲料”是指例如綠茶、紅茶、中國(guó)茶等茶飲料，果汁飲料、運(yùn)動(dòng)飲料等清涼飲料，咖啡類、可可、果汁類、牛奶飲料、碳酸飲料、酒精飲料、其他在日本標(biāo)準(zhǔn)商品分類(總務(wù)廳)中所公布的各種飲料。
(6)根據(jù)(5)所述的飲料，其特征在于其是密閉容器裝飲料。
根據(jù)發(fā)明(6)，通過(guò)制成裝入到密閉容器中的飲料，可以隨時(shí)方便地?cái)z取。這樣可以通過(guò)飲茶這種日常行為來(lái)預(yù)防或減輕過(guò)敏癥狀。
另外，本發(fā)明中所謂的“密閉容器裝飲料”是指填充在如下容器等中的飲料以聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯為主要成分的成形容器(即所謂PET瓶)、金屬罐、與金屬箔或塑料膜復(fù)合而形成的紙容器、瓶等。
(7)一種食品，其特征在于在每100g的食品中含有0.08mg至80mg的根據(jù)(1)至(4)中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物。
根據(jù)發(fā)明(7)，通過(guò)使食品中的過(guò)敏劑制造用化合物的含量為所述量，可以使兒茶素類在食品中發(fā)揮抗過(guò)敏作用。如果所述含量不足0.08mg，則不能發(fā)揮充分的抗過(guò)敏作用。另外，當(dāng)所述含量超過(guò)80mg時(shí)，口味會(huì)受損。
此外，本發(fā)明中所謂的“食品”，如果是可以含有本發(fā)明涉及的抗過(guò)敏藥制造用化合物的形態(tài)的食品，那么沒(méi)有特別限定。例如可以是面包、曲奇餅、巧克力、口香糖、谷物食品、點(diǎn)心等固態(tài)食品，果醬、酸奶、果凍等凝膠狀食品或者半固態(tài)食品等。
(8)一種使用方法，其特征在于將根據(jù)(1)至(4)中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物用作抗過(guò)敏增效劑。
根據(jù)發(fā)明(8)，通過(guò)將抗過(guò)敏藥制造用化合物用作抗過(guò)敏增效劑，添加在例如像藪北(yabukita)這樣的ECG3＂Me等的含量不高的茶飲料，或者利用了谷物茶、混合茶的抗過(guò)敏作用的食品的開發(fā)等中，可以在不損失這些茶飲料自身的功能的情況下增強(qiáng)抗過(guò)敏效果。
此外，本發(fā)明中所謂的“抗過(guò)敏增效劑”，除了提純以通式(1)所表示的化合物而獲得的物質(zhì)以外，還包含根據(jù)需要將例如沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯或兒茶素等適當(dāng)組合而獲得的混合物。另外，對(duì)其形狀并無(wú)特別限制，可以是液體、粉末、粒狀等。
(9)一種抗過(guò)敏藥制造用化合物的制造方法，其特征在于具有以下步驟在以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶的茶葉粉末中添加溶劑繼而獲得混合液的步驟；從所述混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗過(guò)敏藥制造用化合物，再利用高效液相色譜法進(jìn)行提純的步驟。
[化2]
[式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。] (10)一種使用方法，其特征在于使用內(nèi)徑為4.6mm、長(zhǎng)度為150mm以及粒徑為5μm的十八烷基二氧化硅柱，用于制造由下述通式(1)所表示的抗過(guò)敏藥制造用化合物。
[化3]
[式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。] 根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)將從阿薩姆雜種茶葉中提取的ECG3＂Me等用作抗過(guò)敏藥制造用化合物，可以提供速效性更高的抗過(guò)敏藥。另外，所述抗過(guò)敏藥制造用化合物是來(lái)自茶葉中的物質(zhì)，因此很少引起嗜睡等的副作用。因此，無(wú)論是誰(shuí)都可以放心地?cái)z取。
另外，通過(guò)將所述抗過(guò)敏藥制造用化合物添加到食品及飲料中，可以提供一種具有符合大眾口味的食品及飲料。這樣可以通過(guò)喝飲料，或者吃食品等日常行為來(lái)預(yù)防過(guò)敏癥狀。
此外，通過(guò)將所述抗過(guò)敏藥制造用化合物用作抗過(guò)敏增效劑使用，可以既不損失抗過(guò)敏效果低的茶飲料等本來(lái)所具有的功能，又增強(qiáng)抗過(guò)敏效果。



圖1是表示使用色譜法來(lái)提取本發(fā)明的抗過(guò)敏藥的結(jié)果的圖。
圖2是表示通過(guò)改變兒茶素類的添加量來(lái)研究組胺釋放抑制效果的結(jié)果的圖。
圖3是表示EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比與組胺釋放抑制效果的關(guān)系的圖。
圖4是表示EGCG3＂Me和ECG3＂Me的添加量與組胺釋放抑制效果的關(guān)系的圖。

具體實(shí)施例方式 以下，對(duì)本發(fā)明加以詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明并限定于此。
<茶葉萃取物的制造> 本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物的制造方法具有以下步驟在以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶，特別是紅富貴綠茶或者紅富貴包種茶的茶葉粉末中，添加溶劑而獲得混合液的步驟；以及從該混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗過(guò)敏藥制造用化合物，再利用高效液相色譜法進(jìn)行提純的步驟。以下，依次對(duì)使用紅富貴茶葉時(shí)的各步驟加以說(shuō)明。
[化4]
[式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。] 首先，在獲得混合液的步驟中，紅富貴茶葉可以保持原來(lái)的狀態(tài)，但優(yōu)選為粉末物。另外，該粉碎物優(yōu)選為大小均勻的，因此可以將粉碎物篩選后使用。
另外，萃取溶劑只要無(wú)毒性即可，可列舉水，低級(jí)醇類例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇等，及其醚類例如乙醚，二氧六環(huán)，丙酮等；如果考慮到萃取物中的兒茶素類的回收率，則更優(yōu)選使用含有乙醇的溶劑。另外，萃取時(shí)的溫度如果是高于溶劑熔點(diǎn)且低于沸點(diǎn)的溫度，則并沒(méi)有特別限定，但以水進(jìn)行萃取時(shí)優(yōu)選為10℃至100℃，以乙醇以及甲醇進(jìn)行萃取時(shí)優(yōu)選為10℃至40℃。萃取時(shí)間優(yōu)選為10秒至24小時(shí)的范圍。
萃取是最初在250mg茶葉或者茶葉粉末中添加溶劑而得到混合液。此外，這時(shí)為了提高萃取效率，也可以添加磷酸溶液。磷酸溶液的濃度優(yōu)選為0.1％至5％，更優(yōu)選為0.8％。接著，在該混合液中添加乙醇或水等萃取溶劑，然后在20℃至40℃下保溫15分鐘至120分鐘。
<ECG3＂Me等的提取> 利用高效液相色譜法進(jìn)行提純(提取)的步驟是以通常所使用的方法作為化學(xué)分離提純方法，對(duì)由所述方法所獲得的混合液進(jìn)行提取的步驟。所謂化學(xué)分離提純方法，例如可以使用液-液分配、薄層色譜法、吸附柱色譜法、分配柱色譜法、凝膠過(guò)濾柱色譜法、離子交換柱色譜法、電泳或高效液相色譜法等。另外，也可以根據(jù)需要將這些分離提純方法組合起來(lái)進(jìn)行。將利用所述方法進(jìn)行提取而獲得的ECG3＂Me或其異構(gòu)體，與保存劑或防腐劑等通常添加在抗過(guò)敏藥中的物質(zhì)進(jìn)行組合，制成本發(fā)明的抗過(guò)敏藥。
此外，從操作簡(jiǎn)便、分離能力良好等觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選使用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行提取。此時(shí)，優(yōu)選以如下順序進(jìn)行。
首先，以蒸餾水將所述混合液定容后進(jìn)行攪拌，靜置幾分鐘后進(jìn)行過(guò)濾。此外，濾液優(yōu)選采集到Falcon管中。將該濾液以親水性過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，采集到Eppendorf管中。然后，用蒸餾水將該上清液稀釋至10倍。接著，以如下條件將其提取。
洗脫液A(流動(dòng)相A)優(yōu)選將水、乙腈、磷酸(H3PO4)制備成以體積比計(jì)分別為800:10:1至400:40:1，更優(yōu)選制備成400:10:1。另一方面，洗脫液B(流動(dòng)相B)優(yōu)選將甲醇和洗脫液A制備成以體積比計(jì)為1:1至1:4，更優(yōu)選制備成1:2。
提取優(yōu)選在如下所述的條件下進(jìn)行。首先，使流動(dòng)相的流速為1ml/min，在分離開始(測(cè)定開始)后3分鐘內(nèi)使洗脫液B線性梯度為20質(zhì)量％，在30分鐘內(nèi)使洗脫液B線性梯度為75質(zhì)量％。接著將其從測(cè)定開始后保持45分鐘，然后使洗脫液B一下子降低至20質(zhì)量％。
柱通常使用市售的柱，但如果可能柱優(yōu)選使用新柱。這是因?yàn)槿绫?所示，ECG3＂Me或其異構(gòu)體隨著柱的老化，容易與GCG3＂Me一起被提取。
[表2] 另外，在本發(fā)明中，可以將利用所述方法提取所得的ECG3＂Me等，加以濃縮后用作抗過(guò)敏藥制造用化合物。濃縮是使用通常所使用的方法進(jìn)行的，例如在減壓下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。此時(shí)的溫度優(yōu)選為20℃至80℃，更加優(yōu)選為60℃以下。
<食品及飲料的制造> 本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物可以作為單獨(dú)或者與其他兒茶素類混合的抗過(guò)敏藥，應(yīng)用于像飲料、醫(yī)藥、食品等各種用途中。用于食品時(shí)，可以作為食品添加物調(diào)配到特定保健用食品、特殊營(yíng)養(yǎng)食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品、健康食品等中。添加對(duì)象的食品可以是各種食品。用于飲料時(shí)，可以調(diào)配到作為特定保健用食品、特殊營(yíng)養(yǎng)食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品的飲料或其他營(yíng)養(yǎng)飲料、健康飲料、各種健康茶、其他飲料等中。其他食品可列舉點(diǎn)心類、面包、面類、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、魚肉加工品、油脂、調(diào)味料等。
具體的制造方法是使用公知的方法進(jìn)行制造。此外，在制造步驟中，可以進(jìn)一步添加將茶葉本身加以粉碎而獲得的粉碎物。另外，還可以混合入以生化方法合成的其他甲基化兒茶素。
這里所謂的甲基化兒茶素，是指被甲基化的兒茶素以及在提純時(shí)不可避免的成分。本發(fā)明中的甲基化兒茶素，除了表兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂Me)、表兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG4＂Me)、表兒茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂4＂diMe)、表兒茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂5＂diMe)、表兒茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為ECG3＂4＂5＂triMe)、兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為CG3＂Me)、兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為CG4＂Me)、兒茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為CG3＂4＂diMe)、兒茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為CG3＂5＂diMe)、兒茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為CG3＂4＂5＂triMe)以外，主要有如下化合物符合要求表沒(méi)食子兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為EGCG3＂Me)、表沒(méi)食子兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為EGCG4＂Me)、沒(méi)食子兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為GCG3＂Me)、或者沒(méi)食子兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為GCG4＂Me)。
另外，將本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物和其他兒茶素類混合后用于食品及飲料、外用藥中時(shí)，優(yōu)選混合(EGCG3＂Me+GCG3＂Me)/(ECG3＂Me+CG3＂Me)的值為0.5至6。其原因在于如果該數(shù)值不足0.5，則無(wú)法發(fā)揮充分的抗過(guò)敏效果。另外，當(dāng)該數(shù)值大于6時(shí)，口味會(huì)受損。
此外，在飲料及食品中，為了使所述抗過(guò)敏藥制造用化合物充分發(fā)揮抗過(guò)敏效果，可單獨(dú)或并用調(diào)配以下添加劑抗氧化劑、香料、各種酯類、有機(jī)酸類、有機(jī)酸鹽類、無(wú)機(jī)酸類、無(wú)機(jī)酸鹽類、無(wú)機(jī)鹽類、色素類、乳化劑、防腐劑、調(diào)味料、甜味劑、酸味劑、果汁提取物類、蔬菜提取物類、花蜜提取物類、pH調(diào)節(jié)劑、品質(zhì)穩(wěn)定劑等。
例如甜味劑可列舉砂糖、葡萄糖、果糖、異構(gòu)化液糖、甘草甜素、甜菊糖(stevia)、阿斯巴甜、低聚果糖、低聚半乳糖等。酸味劑除了從天然成分中萃取出的果汁類以外，可列舉檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、磷酸。在飲料中可以含有0.1g/L至5g/L的檸檬酸或蘋果酸，優(yōu)選含有0.5g/L至2g/L的檸檬酸或蘋果酸?？寡趸瘎┛闪信eL-抗壞血酸、L-抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉。在飲料中可以含有0.005質(zhì)量％至0.5質(zhì)量％的抗氧化劑，優(yōu)選含有0.01質(zhì)量％至0.1質(zhì)量％的抗氧化劑。
用于飲料的容器，可以和一般的飲料同樣地以如下通常形態(tài)提供以聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯為主要成分的成形容器(所謂PET瓶)、金屬罐、與金屬箔或塑料膜復(fù)合而成的紙容器、瓶等。
另外，填充到上述容器后，例如像金屬罐這樣的容器，在可以加熱殺菌的情況下，則在食品衛(wèi)生法所規(guī)定的特定殺菌條件下制造。對(duì)于像PET瓶、紙容器這種無(wú)法進(jìn)行蒸煮(retort)殺菌的容器，采用如下方法預(yù)先以與上述同等的殺菌條件，例如利用板式熱交換器等進(jìn)行高溫瞬間殺菌后，冷卻至一定溫度，然后填充到容器中等的方法。另外，可以在無(wú)菌條件下調(diào)配其他成分并填充到所填充的容器中。并且，也可以進(jìn)行如下操作在酸性條件下進(jìn)行加熱殺菌后，在無(wú)菌條件下使pH恢復(fù)為中性；或者在中性條件下進(jìn)行加熱殺菌后，在無(wú)菌條件下使pH恢復(fù)為酸性等。
另外，在填充到像PET瓶這樣的透明容器中時(shí)，為了防止褐變，優(yōu)選添加L-抗壞血酸、L-抗壞血酸鈉等抗氧化劑。
另外，作為以本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物為有效成分的醫(yī)藥，可列舉用于治療過(guò)敏性鼻炎、遺傳性皮炎、哮喘、蕁麻疹或高脂血癥、肥胖癥、肝病、高血壓癥的醫(yī)藥。
<作為抗過(guò)敏增效劑的用途> 本發(fā)明涉及的抗過(guò)敏藥制造用化合物可以作為抗過(guò)敏增效劑，添加到例如藪北茶這樣的ECG3＂Me等的含量并不高的茶飲料或者谷物茶、混合茶等中。由此可以使該茶飲料等中所含的兒茶素類的抗過(guò)敏效果進(jìn)一步增強(qiáng)。
添加到藪北茶中時(shí)的具體制法是以上述方法制造茶葉萃取物，再?gòu)脑摬枞~萃取物中提取出ECG3＂Me等。然后將提取出來(lái)的抗過(guò)敏藥制造用化合物添加到藪北茶中。作為優(yōu)選添加量，優(yōu)選為在每100ml的飲料中含有0.08mg至80mg，更優(yōu)選在每100ml的飲料中含有0.4mg至40mg。
<醫(yī)藥品的制造> 關(guān)于醫(yī)藥，可直接口服本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物，或者將其以水等加以稀釋后口服?；蛘咄ㄟ^(guò)將其與公知的醫(yī)藥用載體一起制成制劑來(lái)制備。例如可以將本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物制成糖漿劑等的口服液體制劑來(lái)服用，或者加工成提取物、粉末等，與在藥學(xué)上可接受的載體調(diào)配，制成錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑等口服固體制劑來(lái)服用。在藥學(xué)上可接受的載體是作為制劑原料而慣用的各種有機(jī)或無(wú)機(jī)載體物質(zhì)，其作為固體制劑中的賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑，以及液態(tài)制劑中的溶劑、賦形劑、懸浮劑、粘合劑等進(jìn)行調(diào)配。另外，也可以根據(jù)需要來(lái)使用防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等制劑添加物。
除了所述的內(nèi)服藥以外，還可以將本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物添加到軟膏劑、凍膠劑、凝膠劑、乳膏、敷劑、乳液等半固態(tài)物，或者洗劑、化妝水等液體，粉劑等固態(tài)物等中作為外用藥使用。這些外用藥的制造方法可以使用現(xiàn)有公知的方法來(lái)制造，但是將基劑和本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物進(jìn)行混合時(shí)的溫度優(yōu)選為20℃至80℃，更優(yōu)選為50℃以下。另外，抗過(guò)敏藥制造用化合物的添加量?jī)?yōu)選為0.1質(zhì)量％至3質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.2質(zhì)量％至2質(zhì)量％。
[實(shí)施例] <抗過(guò)敏藥的制造> 在250mg預(yù)先測(cè)定了水分含量的紅富貴茶葉粉末(水分含量3％)中，添加10ml的2％磷酸溶液，獲得茶葉分散液。接著，在該茶葉分散液中添加10ml的乙醇進(jìn)行攪拌，然后在30℃下保溫60分鐘。接著，以蒸餾水進(jìn)行定容后加以攪拌，靜置約5分鐘后進(jìn)行過(guò)濾。此外，將10ml濾液采集到15ml的Falcon管中。將該濾液用0.45μm的親水性過(guò)濾器(ADVANTEC公司DISMIC-13HP，PTFE non-sterile)進(jìn)行過(guò)濾，采集到1.5ml的Eppendorf管中。然后，將該上清液以蒸餾水稀釋至10倍(1.5ml的Eppendorf管中有900μl的蒸餾水和100μl的上清液)。接著，將其采集約100μl到自動(dòng)注射器管中，在以下條件下提取ECG3＂Me，作為本發(fā)明涉及的抗過(guò)敏藥。
此外，在圖1的下半段表示提取出ECG3＂Me時(shí)的色譜法的圖。圖中，上半段的圖是ECG3＂Me等的含量少的茶葉的茶葉分散液的圖。由此，顯示ECG3＂Me等被提取。
流動(dòng)相A水、乙腈、磷酸混合液(體積比為400:10:1) 流動(dòng)相B甲醇、流動(dòng)相A混合液(體積比為1:2) 柱 和光純藥制造(Wakopak Navi C18-5(4.6×150) 5μm) 保護(hù)柱 和光純藥制造(Wakopak Navi C18-5(4.6×10) 5μm) 自動(dòng)進(jìn)樣器 4℃ 柱溫度 40℃，注入量20μl，流速1ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng) 272nm(利用UV-VIS或PDA檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)) <ECG3＂Me的組胺釋放抑制效果的研究> 對(duì)利用所述方法得到的抗過(guò)敏藥的組胺釋放抑制效果進(jìn)行研究。另外，作為比較使用提取出了其他的兒茶素類、表沒(méi)食子兒茶素-3-O-沒(méi)食子酸酯(以下稱為EGCG)、表沒(méi)食子兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯(以下稱為EGCG3＂Me)的物質(zhì)。
抗過(guò)敏活性(I型過(guò)敏)的判定法是將來(lái)自小鼠肥大細(xì)胞中的組胺釋放抑制作用作為標(biāo)準(zhǔn)。組胺釋放抑制效果是使用來(lái)自小鼠骨髓的培養(yǎng)肥大細(xì)胞(BMMC)，在添加了3ng/ml的10％滅活FBS(胎牛血清)、白細(xì)胞介素-3(IL-3)、5mM谷氨酸Na和50μM的2-巰基乙醇的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
細(xì)胞(1×107cells/mL)是用抗DNP-小鼠IgE抗體致敏一晚后，次日使其懸浮在Tyrode液中，與被驗(yàn)樣品一起培養(yǎng)10分鐘后，添加DNP-HSA(抗原)，誘發(fā)脫顆粒(20分鐘)，以液相色譜法來(lái)測(cè)定上清液中的組胺量。
測(cè)定儀器是使用島津制作所的LC-10A，柱是使用Shodex ODP50-4E。在流速為0.5ml/min、注入量為20μl、柱溫箱溫度為37℃、檢測(cè)器為RF(ex.330nm，em.430nm)的條件下進(jìn)行等度分析。與作為對(duì)照組的蒸餾水的相對(duì)值越低，判斷其抗過(guò)敏性越高。
其結(jié)果示于表3。由此可顯示出本發(fā)明涉及的抗過(guò)敏藥制造用化合物與其他兒茶素類相比，發(fā)揮了更強(qiáng)的組胺釋放抑制效果。
[表3] <ECG3＂Me的添加量對(duì)組胺釋放抑制效果的影響的研究> 接著，改變所述兒茶素類的添加量來(lái)研究組胺釋放抑制效果。將在每1ml中含有2μg、或10μg ECG3＂Me的飲料分別作為樣品1、2。另外，將在每1ml中含有2μg、或10μgEGCG的飲料分別作為比較樣品1、2。將在每1ml中含有2μg、或10μg的EGCG3＂Me的飲料分別作為比較樣品3、4。這些樣品的組胺釋放抑制效果示于圖2。由此顯示出，本發(fā)明的抗過(guò)敏藥制造用化合物與EGCG3＂Me相比，發(fā)揮了約1.5倍的組胺釋放抑制效果。
<EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比與組胺釋放抑制效果的關(guān)系的研究> 接著，對(duì)EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比與組胺釋放抑制效果的關(guān)系進(jìn)行研究。另外，同時(shí)也對(duì)用熱水萃取紅富貴而得到的萃取液的抗過(guò)敏活性一并進(jìn)行研究。制備樣品，使樣品中的兒茶素含量達(dá)到如下述的表4所述的值，研究組胺釋放抑制效果。其結(jié)果示于圖3。推測(cè)在EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合物中，抗過(guò)敏活性的強(qiáng)度為1.5倍至2.5倍。另外，與各物質(zhì)單體相比，紅富貴綠茶熱水萃取液表現(xiàn)出較強(qiáng)的活性。
[表4] <EGCG3＂Me以及ECG3＂Me的添加量與組胺釋放抑制效果的關(guān)系的研究> 另外，在抗過(guò)敏效果低的藪北熱水萃取物中，添加EGCG3＂Me或者ECG3＂Me，使最終添加濃度分別成為0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml，對(duì)此時(shí)的組胺釋放抑制效果進(jìn)行研究，將其結(jié)果示于圖4。由此可顯示出，與EGCG3＂Me相比，ECG3＂Me可以提高抗過(guò)敏活性。這樣顯示出，可以通過(guò)向抗過(guò)敏效果小的茶葉中添加從阿薩姆雜種中萃取得到的ECG3＂Me衍生物的方式賦予其抗過(guò)敏作用。
權(quán)利要求
1.一種抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是由下述通式(1)表示，
[化1]
式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是來(lái)自以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶的茶葉的成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于所述阿薩姆雜種茶葉為紅富貴。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物，其特征在于其是在利用使用粒徑為5μm、柱長(zhǎng)度為150mm的十八烷基二氧化硅柱的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定的條件下，
洗脫液為水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，
在流動(dòng)相的流速為1ml/min下，多元酚組分在37分鐘至50分鐘的溶出時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的成分。
5.一種飲料，其特征在于在每100ml的飲料中含有0.08mg至80mg的根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的飲料，其特征在于其是密閉容器裝飲料。
7.一種食品，其特征在于在每100g食品中含有0.08mg至80mg的根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物。
8.一種使用方法，其特征在于將根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗過(guò)敏藥制造用化合物用作抗過(guò)敏增效劑。
9.一種抗過(guò)敏藥制造用化合物的制造方法，其特征在于具有以下步驟在以阿薩姆雜種茶葉為原料的綠茶或者包種茶的茶葉粉末中添加溶劑而獲得混合液的步驟；
從該混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗過(guò)敏藥制造用化合物，再利用高效液相色譜法進(jìn)行提純的步驟，
[化2]
式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。
10.一種使用方法，其特征在于使用內(nèi)徑為4.6mm、長(zhǎng)度為150mm且粒徑為5μm的十八烷基二氧化硅柱來(lái)制造由下述通式(1)所表示的抗過(guò)敏藥制造用化合物，
[化3]
式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抗過(guò)敏藥以及含有其的食品及飲料、外用藥、化妝品，所述抗過(guò)敏藥含有以提取阿薩姆雜種茶葉所特有的具有強(qiáng)抗過(guò)敏性的物質(zhì)為目的而獲得的兒茶素類，即表兒茶素-3-O-(3-O-甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(4-O-甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)沒(méi)食子酸酯、表兒茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)沒(méi)食子酸酯以及這些化合物的差向異構(gòu)體等，并將其作為有效成分。將由上述通式(1)所表示的化合物作為抗過(guò)敏藥用化合物。[式中，R1、R2、R3分別獨(dú)立地是氫原子、甲基中的任一基團(tuán)。]
文檔編號(hào)A61K36/18GK101365443SQ200780002119
公開日2009年2月11日 申請(qǐng)日期2007年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月13日
發(fā)明者山本萬(wàn)里, 永井寬 申請(qǐng)人:獨(dú)立行政法人農(nóng)業(yè)·食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究機(jī)構(gòu), 朝日飲料株式會(huì)社