專利名稱：：提高的抗腫瘤治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及Aplidine或aplidine類似物與其它抗腫瘤藥劑的聯(lián)合及這些聯(lián)合在治療癌癥中的應用，特別是在治療肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤中的應用。
背景技術(shù)：
：Aplidine(DehydrodidemninB)是環(huán)狀酯肽，其分離自地中海海洋被囊動物，Jp/W/Mma/Wcara，并且是WO9104985的主題。其涉及己知為didemnins的化合物，并具有下列結(jié)構(gòu)關(guān)于Aplidine,aplidine類似物，其應用，制劑和合成的更多的信息可以見于專利申請WO9942125,WO0135974，WO0176616,WO0230441，WO0202596,WO0333013和WO2004080477。我們通過具體參考這些PCT文本的每個的內(nèi)容來結(jié)合。在動物臨床前研究和人臨床I期研究中，Aplidine已經(jīng)顯示具有針對廣譜的腫瘤類型包括白血病和淋巴瘤的細胞毒潛在作用。見例如Faircloth，G.等"DehydrodidemninB(DDB)anewmarinederivedanticanceragentwithactivityagainstexperimentaltumourmodels(DehydrodidemninB(DDB)，一種具有針對實驗腫瘤模型的活性的新的海洋來源的抗癌劑)"，9thNCI-EORTCSymp.NewDrugsCancerTher(新的藥物癌癥治療).(3月12-15日，Amsterdam)1996,Abst111;Faircloth,G.等"Preclinicalcharacterizationofaplidine,anewmarineanticancerdepsipeptide(aplidine的臨床前特征，一種新的海洋抗癌酯月太)"，尸rac.j膨khoc.Ca,rL1997,38:Abst692;DepenbrockH，PeterR,FairclothGT,ManzanaresI,JimenoJ,HanauskeAR.:"InvitroactivityofAplidine,anewmarine-derivedanticancercompoundonfreshlyexplantedclonogenichumantumourcellsandhaematopoieticprecursorcells(Aplidine，一種新的海洋來源的抗癌化合物對新鮮移植的克隆原人腫瘤細胞和造血前體細胞的體外活性)"JCwceK英國癌癥雜志)，1998;78:739-744;FairclothG,GrantW,NamS，JimenoJ,ManzanaresI,RinehartK.:"Schedule-dependencyofAplidine,amarinedepsipeptidewithantitumoractivity"(具有抗腫瘤活性的Aplidine,—種海洋酯肽的時間依賴性)，爿m.yl^oc.CVwcerias.1999;40:394;BrogginiM,MarchiniS,D'IncalciM，TarabolettiG，GiavazziR,FairclothG，JimenoJ.:"AplidineblocksVEGFsecretionandVEGF/VEGF-R1autocrineloopinahumanleukemiccellline(Aplidine在人白血病細胞系中阻斷VEGF分泌和VEGF/VEGF-R1自分泌環(huán))"，C/z>7.Owceri"(臨床癌癥研究).2000;6(增刊)4509;ErbaE,BassanoL,DiLibertiQMuradoreI,ChiorinoG,UbezioP,VignatiS,CodegoniA,DesiderioMA,FairclothQJimenoJ禾卩D'IncalciM:"Cellcyclephaseperturbationsandapoptosisintumourcellsinducedbyaplidine(aplidine誘導的在腫瘤細胞中的細胞周期階段擾動和凋亡)"，&J.Ca"cer(英國癌癥雜志)2002;86:1510-1517;Paz-AresL,AnthonyA,PronkL，TwelvesC,AlonsoS,Cortes-FunesH，CelliN,GomezC,Lopez-LazaroL,GuzmanC，JimenoJ,KayeS.:"PhaseIclinicalandpharmacokineticstudyofaplidine,anewmarinedidemnin,administeredas24-hourinfosionweekly(aplidine，一禾中新的海洋didemnin每周一次的24小時輸注施用的I期臨床和藥物代謝動力學研究)"Qwcer尺w(臨床癌癥研究).2000;6(增刊)4509;RaymondE,Ady-VagoN，BaudinE,RibragV，F(xiàn)aivreS,LecotF，WrightT，LopezLazaroL，GuzmanC，JimenoJ,DucreuxM，LeChevalierT,ArmandJP.:"AphaseIandpharmacokineticstudyofaplidinegivenasa24-hourcontinuousinfusioneveryotherweekinpatientswithsolidtumorandlymphoma(在患有實體瘤和淋巴瘤的患者中，每隔一周以24小時持續(xù)輸注給藥aplidine的I期和藥物代謝動力學研究)"，C//".Owceri^(臨床癌癥研究).2000;6(增刊)4510;MarounJ，BelangerK，SeymourL，SoulieresD,CharpentierD，GoelR，StewartD，TomiakE,JimenoJ,MatthewsS.:"PhaseIstudyofaplidineina5daybolusq3weeksinpatientswithsolidtumorsandlymphomas(在患有實體瘤和淋巴瘤的患者中，以每3周5天的推注進行aplidine的I期^f究)"，Ca"c^W&s(臨床癌癥研究).2000;6(增刊)4509;IzquierdoMA，BowmanA，MartinezM，CicchellaB，JimenoJ,GuzmanC，GermaJ,SmythJ.:"PhaseItrialofAplidinegivenasa1hourintravenousweeklyinfosioninpatientswithadvancedsolidtumorsandlymphoma(在患有晚期實體瘤和淋巴瘤的患者中以每周一次1小時靜脈內(nèi)的輸注給藥Aplidine的I期試驗)",CW".CW"cwW^(臨床癌癥研究).2000;6(增刊)4509。機制研究顯示Aplidine可以在ALL-MOLT4細胞中阻斷VEGF分泌并且在來自患有再一次或復發(fā)的ALL和AML的小兒科患者中的AML和ALL樣品中觀察到低濃度(5nM)的體外細胞毒活性。Aplidine表現(xiàn)出在藥物處理的白血病細胞中體外誘導Gl和G2抑制。除了VEGF受體的下調(diào)之外，很少了解其它的Aplidine作用的方式。在關(guān)于Aplidine的I期臨床研究中，以24小時預處理或共施用給藥L-肉堿來防止骨髓毒性，見例如WO0230441。共施用L-肉堿證實能夠提高藥物誘導的肌肉毒性的恢復并且容許Aplidine的劑量增加。以前，用Aplidine聯(lián)合其它的抗癌劑進行的體外和體內(nèi)測定顯示測定的藥物聯(lián)合在治療白血病和淋巴瘤的聯(lián)合治療中是有用的。在WO2004080421中，對Aplidine和甲氨蝶呤，阿糖胞苷，米托蒽醌，長春堿，甲潑尼龍和多柔比星的聯(lián)合治療白血病和淋巴瘤進行了具體地評估。因為癌癥是動物和人死亡的主要原因，已經(jīng)進行并且正在進行一些努力以獲得對于施用于遭受癌癥的患者是具有活性和安全的抗腫瘤療法。本發(fā)明待解決的問題是提供有效治療癌癥的抗腫瘤療法。發(fā)明概述我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Aplidine和aplidine類似物加強其它抗癌藥劑的效力并且因此可以成功地用于治療癌癥的聯(lián)合療法。本發(fā)明涉及藥物組合物，藥物劑型，試劑盒，使用這些聯(lián)合療法治療癌癥的方法和Aplidine和aplidine類似物用于制備用于聯(lián)合治療的藥物的應用。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，我們提供基于Aplidine和aplidine類似物，使用其它的有效治療癌癥的藥物的有效聯(lián)合療法。優(yōu)選地，其它的一種或多種藥物有效治療選自下列各項的癌癥肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌,腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤。最優(yōu)選地其它的一種或多種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇(Taxol),多柔比星，順銷，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC),卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16)，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米(bortezomib),erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-a)，達卡巴嗪(DTIC)，貝伐單抗(Avastir^),伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括治療癌癥的方法，所述方法包括向需要所述治療的患者施用治療有效量的Aplidine或aplidine類似物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物，和治療有效量的有效治療癌癥的另一種藥物或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物，所述另一種藥物在施用Aplidine或aplidine類似物前，過程中或其后進行施用。在本發(fā)明的另一個實施方案中，施用治療有效量的第三種藥物，并且在施用Aplidine或aplidine類似物和第二種藥物之前，過程中或其后進行施用。優(yōu)選地，所述其它的一種或多種藥物有效治療選自下列各項的癌癥肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤。最優(yōu)選地，所述其它的一種或多種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇(Taxof),多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC)，卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16),美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib，曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-a)，達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avasti浐)，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。其它的一種或多種藥物可以形成同一組合物(samecomposition)的部分，或作為單獨的組分(separatecompositions)提供以用于在同時或在不同時間進行施用。在另一個方面中，本發(fā)明包括增加有效治療癌癥的藥物的治療功效的方法，所述有效治療癌癥的藥物優(yōu)選地是有效治療選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤的癌癥的藥物，最優(yōu)選地是選自由紫杉醇(Taxof),多柔比星，順鈷，三氧化二砷,5-氟尿嘧啶(5-FU)，阿糖胞苷(AmC),卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16)，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-a),達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avastin),伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗組成的組的藥物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物，所述方法包括向需要所述治療的患者施用一定量的Aplidine或aplidine類似物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物。Aplidine或aplidine類似物在施用其它藥物之前，過程中或之后施用。在本發(fā)明的另一個實施方案中，施用治療有效量的第三種藥物，并且在施用Aplidine或aplidine類似物和第二種藥物之前，過程中，或之后進行施用。優(yōu)選地，所述第三種藥物是有效治療選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤的癌癥的藥物。最優(yōu)選地，所述第三種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇(Taxo1⑧)，多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC),卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16),美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-ct),達卡巴嗪(DTIC)，貝伐單抗(Avastin),伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物。在另一個方面，本發(fā)明包括藥物組合物，所述藥物組合物包含Aplidine或aplidine類似物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物和有效治療癌癥的另一種藥物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述藥物組合物還包含也有效治療癌癥的第三種藥物。優(yōu)選地，其它一種或多種藥物有效治療選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤的癌癥。最優(yōu)選地，其它的一種或多種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇(Taxof),多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU)，阿糖胞苷(AraC),卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38)，依托泊苷(VP16),美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-a),達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avastir^),伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。本發(fā)明還包括用于治療或預防癌癥的試劑盒，其包括Aplidine或aplidine類似物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物的劑型，有效治療癌癥的另一種藥物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物的劑型，和用于聯(lián)合使用每種作用物來治療或預防癌癥的說明書。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述試劑盒還包含也有效治療癌癥的第三種藥物，或其藥用前藥，鹽，溶劑合物或水合物的劑型。優(yōu)選地，其它的一種或多種藥物有效治療選自下列各項的癌癥肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤。最優(yōu)選地，其它的一種或多種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇(Taxo產(chǎn))，多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC),卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16),美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2)，干擾素-a2(INF-a),達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avastin),伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。本發(fā)明還包括基于使用三種藥物，Aplidine和aplidine類似物，加上兩種其它的藥物(第二種藥物和第三種藥物)的有效的聯(lián)合療法。在一個優(yōu)選的方面，本發(fā)明涉及協(xié)同聯(lián)合。附圖簡述圖1.作為揭示協(xié)同作用存在的方法的線性回歸分析的實例。圖2.Aplidine(Aplidh^)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖3.Aplidine(Aplidin⑧)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對MOLT3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖4.Aplidine(Aplidin⑧)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖5.Aplidine(Aplidii^)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對HL60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖6.Aplidine(Aplidh^)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對MXl細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖7.Aplidine(Aplidii^)與紫杉醇(Taxof)聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖8.Aplidine(Aplidii^)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖9.Aplidine(Aplidir^)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖10.Aplidine(Aplidii^)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖11.Aplidine(Aplidin②)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對MOLT3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖12.Aplidine(Aplidi,)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對MXl細胞的體外活性數(shù)據(jù).圖13.Aplidine(Aplidin⑧)與多柔比星(DOX)的聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖14.Aplidine(AP,Aplidir^)與順鉑(DDP)的聯(lián)合針對MX1細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖15.Aplidine(Aplidir^)與順鉑(順式-DDP)的聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖16.Aplidine(APL,Aplidii^)與順鉬(順式DDP,DDP)的聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖17.Aplidine(Aplidin⑧)與順鉬(順式DDP,DDP)的聯(lián)合針對MOLT3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖18.Aplidine(Aplidin⑧)與順鉑(順式DDP,DDP)的聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖19.Aplidine(Aplidh^)與三氧化二砷(TRI)聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖20.Aplidine(Aplidii^)與三氧化二砷(TRI)的聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖21.Aplidine(Aplidin②)與三氧化二砷(TRI)的聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖22.Aplidine(Aplidir^)聯(lián)合三氧化二砷(TRI)針對MOLT3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖23.Aplidine(Aplidir^)與5-氟尿嘧啶(5FU)聯(lián)合針對HL60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖24.Aplidine(Aplidir^)與5-氟尿嘧啶(SFU)聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖25.Aplidine(Aplidin②)與5-氟尿嘧啶(5FU)聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖26.Aplidine(AplidiZ)與5-氟尿嘧啶(5FU)聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖27.Aplidine(Aplidii^)與5-氟尿嘧啶(5FU)聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖28.Aplidine(Aplidir^)與阿糖胞苷(AmC)聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖29.Aplidine(Aplidir^)與阿糖胞苷(AraC)聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖30.Aplidine(Aplidi,)與阿糖胞苷(AraC)聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖31.Aplidine(Aplidir^)與阿糖胞苷(AraC)聯(lián)合針對HL60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖32.Aplidine(Aplidii^)與阿糖胞苷(AraC)聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖33.Aplidine(Aplidir^)與卡鉑的聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖34.Aplidine(Aplidir^)與卡鉑的聯(lián)合針對HT29細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖35.Apidine(AplidiZ)與卡鉑的聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖36.Aplidine(Aplidir^)與卡鉑的聯(lián)合針對MOLT3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖37.Aplidine(Aplidir^)與卡鉑的聯(lián)合針對MXl細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖38.Aplidine(Aplidin⑧)與SN-38的聯(lián)合針對A549細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖39.Aplidine(Aplidir^)與SN-38的聯(lián)合針對SKBR3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖40.Aplidine(AplidiZ)與SN-38的聯(lián)合針對HL60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖41.Aplidine(Aplidii^)與SN-38的聯(lián)合針對PC3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖42A和42B.Aplidine(A,Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對HL-60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖43A和43B.Aplidine(A,Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對K562細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖44A和44B.Aplidine(A,Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對MOLT-3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖45A和45B.Aplidine(A,Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對MCI16細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖46A和46B.Aplidine(A，Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對RAMOS細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖47A和47B.Aplidine(A,Aplidii^)與VP16(B)的聯(lián)合針對U937細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖48A和48B.Aplidine(A，Aplidii^)與VP16(B)的聯(lián)合針對NCI-H929細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖49A和49B.Aplidine(A,Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對HUNS-1細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖50A和50B.Aplidine(A,Aplidin)4VP16(B)的聯(lián)合針對U266Bl細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖51A和51B.Aplidine(A，Aplidin⑧)與VP16(B)的聯(lián)合針對RPMI8226細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖52.Aplidine(Aplidii^)與卡鉑的聯(lián)合針對LOX-I-MVI細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖53.Aplidine(Aplidi,)與卡鉑的聯(lián)合針對UACC-257細胞的體外活性數(shù)據(jù)。圖54.在MM1S，MM1R,U266和U266-LR7細胞系中，在(48小時處理)后對Aplidine的劑量反應。圖55.Aplidine(Aplidin⑧)和其它藥物對MMlS細胞系(48小時處理)的劑量功效的比較。圖56.Aplidine(Aplidir^)和地塞米松的聯(lián)合，三天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖57.Aplidine(Aplidir^)和地塞米松的聯(lián)合，6天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖58.Aplidine(Aplidii^)和美法侖的聯(lián)合，三天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖59.Aplidine(Aplidin②)和美法侖的聯(lián)合，6天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖60.Aplidine(Aplidii^)和多柔比星的聯(lián)合，3天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖61.Aplidine(Aplidin⑧)和多柔比星的聯(lián)合，6天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖62.Aplidine(Aplidin⑧)和Lenalidomide(Revlimid⑧)的聯(lián)合，3天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖63.Aplidine(Aplidin⑧)和Lenalidomide(Revlimid⑧)的聯(lián)合，6天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖6《Aplidine(Aplidin⑧)和硼替佐米的聯(lián)合，3天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖65.Aplidine(Aplidin②)和硼替佐米的聯(lián)合，6天。A)劑量效應曲線.B)Fa-CI圖。圖66.在用Aplidine(Aplidii^)作為單一藥劑或與達卡巴嗪聯(lián)合開始治療后，在MRI-H-187黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖67.在用Aplidine(Aplidii^)作為單一藥劑或與卡鉑聯(lián)合開始治療后，在MRI-H-187黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖68.在用Aplidine(Aplidin②)作為單一藥劑或與白介素-2(11^-2)聯(lián)合開始治療后，在MRI-H-187黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖69.在用Aplidine(Aplidir^)作為單一藥劑或與干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合開始治療后，在MRI-H-187黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖70.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與達卡巴嗪(DTIC)聯(lián)合開始治療后，在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖71.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與卡鉑聯(lián)合開始治療后，在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖72.在用Aplidine(APL，Aplidir^)作為單一藥劑或與白介素-2(IL-2)聯(lián)合開始治療后，在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力圖73.在用Aplidine(APL，Aplidh^)作為單一藥劑或與干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合開始治療后，在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖74.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與貝伐單抗(Avastir^)聯(lián)合開始治療后，在CaKi-l腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖75.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與白介素-2(IL-2)聯(lián)合開始治療后，在CaKi-l腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖76.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與干擾素-a2a(INF-a2a)聯(lián)合開始治療后，在CaKi-1腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖77.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與貝伐單抗(Avastin⑧)聯(lián)合開始治療后，在MRI-H121腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖78.在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與白介素-2(IL-2)聯(lián)合開始治療后，在MRI-H121腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖79在用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合開始治療后，在MRI-H121腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。圖80.Aplidine(A)+Lenalidomide(Revlimid;R)+地塞米松(0)的聯(lián)合在MMIS中在72小時的處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，Lenalidomide劑量以單位表示，地塞米松劑量以nM單位表示。圖81.Aplidine(A)+硼替佐米(B)+地塞米松(D)的聯(lián)合在MM1S中在72小時處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，硼替佐米劑量以nM單位表示，并且地塞米松劑量以nM單位表示。圖82.Aplidine(A)+硼替佐米(B)+Lenalidomide(Revlimi(f;R)在MMIS中在72小時處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，硼替佐米劑量以nM單位表示，并且Lenalidomide劑量以fiM單位表示。圖83.Aplidine(A)+沙利度胺(T)+地塞米松(0)的聯(lián)合在MMIS中在72小時處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，沙利度胺劑量以單位表示，和地塞米松劑量以nM單位表示。圖84.Aplidine(A)+美法侖(M)+地塞米松(D)的聯(lián)合在MMIS中在72小時處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，美法侖劑量以piM單位表示，和地塞米松劑量以nM單位表示。圖85.Aplidine(A)+美法侖(M)+硼替佐米(B)的聯(lián)合在MMIS中在72小時處理后。Aplidine劑量以nM單位表示，美法侖劑量以fiM單位表示，硼替佐米劑量以nM單位表示。發(fā)明詳述所謂"癌癥"意味著包括腫瘤，瘤和任何其它惡性組織或細胞。本發(fā)明涉及Aplidine或aplidine類似物用于聯(lián)合治療一般癌癥的應用，但是更優(yōu)選地用于治療肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤。為了研究Aplidine對其它的抗癌藥劑的可能的增效作用，我們開始了對于可能應用在上述癌癥類型中的藥物聯(lián)合的系統(tǒng)研究。在不同的細胞系類型上進行藥物聯(lián)合研究。使用腫瘤細胞系如對Aplidine具有不同敏感性(從低到高)的NSCLA549，乳腺癌MX1,早幼粒細胞性白血病HL60，結(jié)腸腺癌HT29，前列腺癌PC3,乳腺癌SKBR3和急性淋巴母細胞白血病(MOLT3)進行體外研究。還用白血病，淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤和黑素瘤細胞系進行了另外的研究。此外，使用以黑素瘤，腎，骨髓瘤，和淋巴瘤異種移植物進行的體內(nèi)研究來確定Aplidine與其它標準藥劑的聯(lián)合的效果。最終，使用三種藥物的聯(lián)合，即Aplidine與兩種其它的^^準藥劑(第二和第三種藥物)的聯(lián)合在多發(fā)性骨髓瘤細胞系中進行體外研究。作為一般結(jié)論，我們發(fā)現(xiàn)Aplidine在腫瘤細胞中的細胞毒性在與用于該評估的許多標準藥劑的聯(lián)合中被大大增加。用Aplidine與紫杉醇(Taxol),多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶(5-FU)，阿糖胞苷(AraC),卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16),美法侖,地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2),干擾素-a2(INF-a),達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avastin),伊達比星，沙利度胺,和利妥昔單抗的聯(lián)合觀察到了主要的協(xié)同作用效果。此外，還發(fā)現(xiàn)用Aplidine與上述提及的藥劑的三重聯(lián)合還獲得細胞毒性的增加。特別優(yōu)選的是，Aplidine與紫杉醇的聯(lián)合，其用于治療癌痺，更具體地治療選自乳腺癌，白血病,和前列腺癌的癌癥。特別優(yōu)選的是，Aplidine與多柔比星的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地在治療選自肺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，和多發(fā)性骨髓瘤的癌癥中。特別優(yōu)選的是，Aplidine與順鉑的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療選自乳腺癌，和結(jié)腸癌的癌癥中。特別優(yōu)選的是Aplidine與三氧化二砷的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療選自肺癌，結(jié)腸癌和前列腺癌的癌癥中。特別優(yōu)選的是，Aplidine與5-氟尿嘧啶的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療選自下列各項的癌癥中白血病，肺癌，乳腺癌,和前列腺癌。特別優(yōu)選的是Aplidine與阿糖胞苷的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療選自下列各項的癌癥中肺癌，乳腺癌,和前列腺癌。特別優(yōu)選的是Aplidine與卡鉑的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療選自下列各項的癌癥中結(jié)腸癌，前列腺癌,和黑素瘤。特別優(yōu)選的是Aplidine與SN38的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療肺癌中。特別優(yōu)選的是Aplidine與依托泊苷的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療選自下列各項的癌癥中淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤。特別優(yōu)選的是Aplidine與地塞米松的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與lenalidomide的聯(lián)合用在治療癌癥中,更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與硼替佐米的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與達卡巴嗪的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療黑素瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與貝伐單抗的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療腎癌中。特別優(yōu)選的是Aplidine與白介素-2的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療腎癌中。特別優(yōu)選的是Aplidine與美法侖的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與伊達比星的聯(lián)合，其用在治療癌癥中,更具體地用在治療白血病中。特別優(yōu)選的是Aplidine與利妥昔單抗的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療淋巴瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與沙利度胺的聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與lenalidomide和地塞米松的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與硼替佐米和地塞米松的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與硼替佐米和lenalidomide的三重聯(lián)合用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與硼替佐米和沙利度胺的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與地塞米松和沙利度胺的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與地塞米松和美法侖的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。特別優(yōu)選的是Aplidine與美法侖和硼替佐米的三重聯(lián)合，其用在治療癌癥中，更具體地用在治療多發(fā)性骨髓瘤中。本發(fā)明的組合物可以在單一的藥用制劑中包含全部的成分(藥物)。或者，所述成分可以單獨配制并且彼此聯(lián)合施用?？梢詫⒈绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種藥用制劑用在本發(fā)明中。選擇用在本發(fā)明的適合的制劑可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員基于施用的方式和組合物的成分的溶解性特征常規(guī)進行。包含Aplidine或aplidine類似物的藥物組合物的實例包括適合靜脈內(nèi)給藥的液體組合物(溶液，混懸液或乳劑)，并且它們可以包含純的化合物，或組合以任何載體或其它藥用活性化合物。溶解的Aplidine在熱和光脅迫測試條件下顯示充分的降解，并且開發(fā)了凍干的劑型，見結(jié)合在本文作為參考的WO9942125。本發(fā)明的Aplidine或組合物的施用基于給藥手冊優(yōu)選地通過靜脈內(nèi)輸注給藥。我們優(yōu)選使用多到72小時的輸注時間，更優(yōu)選地l-24小時，其中約1，約3或約24小時是最優(yōu)選的。較短的輸注時間尤其理想，其容許進行治療，而不用在醫(yī)院過夜。然而，輸注根據(jù)需要可以是約24小時或甚至更長。輸注可以以變化的模式，以適當?shù)拈g隔進行，舉例說明每周一次，每周兩次，或每周更頻繁，任選地以典型地一或數(shù)周的間隙每周重復。聯(lián)合的化合物的正確的劑量將根據(jù)具體的制劑，應用的方式和具體的位點，待治療的宿主和腫瘤而變化。要考慮其它的因素如年齡，體重，性別，飲食，給藥時間，排泄率，宿主的狀況，藥物聯(lián)合，反應敏感度和疾病的嚴重性。施用可以在最大耐受劑量內(nèi)持續(xù)地或周期地進行。施用Aplidine的另外的指導在WO0135974中給出，將其完全結(jié)合在本文作為參考。在一個方面，本發(fā)明涉及應用Aplidine或aplidine類似物的協(xié)同聯(lián)合。協(xié)同作用的指示可以容易地通過測試聯(lián)合和分析結(jié)果而獲得，例如通過線性回歸分析而獲得。參考圖l來舉例說明該點?？梢詫溥x的方法如等效線圖解分析(isobologmmanalysis)用于揭示協(xié)同作用并且可以用于本發(fā)明的目的。適合的aplidine類似物包括由WO0202596的權(quán)利要求1所定義的化合物，尤其是權(quán)利要求1的任何從屬權(quán)利要求所定義的化合物。我們通過具體參考在WO0202596中關(guān)于作為aplidine的類似物的化合物的公開內(nèi)容，包括權(quán)利要求而結(jié)合其。實施例實施例1.確定Aplidine聯(lián)合另一種標準藥劑對腫瘤細胞系的作用的體外研究針對一些腫瘤細胞系評估Aplidine作為單一藥劑或與選定的標準化療劑聯(lián)合以測量在細胞毒性中的不同。選擇下列標準藥劑作為單一藥劑并且與Aplidine聯(lián)合紫杉醇(Taxol),多柔比星，順鉬，三氧化二砷(Trisonex),5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC),卡鉑和7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38)。單一的藥劑Aplidine以不同的效價對一些癌癥類型具有細胞毒性。為此原因，選擇對Aplidine具有低度，中度或高度敏感性的代表性腫瘤細胞系。將所用的腫瘤細胞系列在表l中表l<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>以兩部分進行篩選a.在第一組測定中，在每種腫瘤細胞系暴露于藥物72小時后，測定每種化合物的ICs。值。所有的細胞系在各自生長培養(yǎng)基中，以37'C，5%0)2和98%濕度維持。所有的培養(yǎng)基配方不包含抗生素。在接種細胞之前的一天，將所有的培養(yǎng)物用新鮮的完全的生長培養(yǎng)基培養(yǎng)。在收獲(接種)日，將細胞用錐蟲藍排除染色法(堿性細胞培養(yǎng)物)進行計數(shù)。收集細胞并且以10,000細胞/孔接種在96孔微量滴定板中的190|aL培養(yǎng)基中并且溫育24小時以容許細胞在藥物添加前貼壁。細胞用藥物進行處理，并且通過MTS測定(四氮唑)測量細胞毒性效應，所述MTS測定是測量活細胞的數(shù)量的比色方法。在用藥物溫育72小時后，將25(aL的MTS+PMS溶液加入每個微量滴定孔中并且在37r溫育4小時。接著從培養(yǎng)箱移出板，并且置于板搖動器上5分鐘(用鋁箔覆蓋以避光)。在分光光度計板閱讀器上在490nm讀出光密度。使用SoftMaxv3.12程序分析數(shù)據(jù)。計算IQ。，其是1&。(測量到50%的生長抑制的濃度)的近似等價物。使用SoftMax程序產(chǎn)生回歸曲線，接著將50%的抑制濃度手工加入并且將該濃度通過除以化合物的分子量來轉(zhuǎn)化該濃度為摩爾(M)。將每個IC5o值(72小時藥物暴露)顯示在表2中。ICs。值表示100%的藥物濃度。表2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>30%25%0%0%70%75%100%0%將微量滴定板在5%C02和37。C溫育72小時。通過MTS測定測量細胞毒性效應。在4卯nm讀光密度。對標準化數(shù)據(jù)進行繪圖并且如所述進行解釋。將數(shù)據(jù)分析為1.將Prism(Graphpad)軟件程序用于將數(shù)據(jù)相對于對照值而標準化(100%=在無藥劑(藥物)存在下的細胞生長;0%=空白對照)。2.將標準化的數(shù)據(jù)繪制為散點圖。對于每種藥劑(藥物)聯(lián)系(connecting)100%IC5Q的值繪制線。明顯在線之上的值指示拮抗作用，在下面的值指示協(xié)同作用，并且在線上的值指示可加性。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理按照LaskaE.等Biometrics(1994)50:834-841和Greco等PharmacolRev(藥物綜述).(1995)47:331-385。當對細胞增殖的抑制超過每種藥物單獨的最大抑制值(在100%1(:5())時，判斷在測試的劑量比率上的聯(lián)合是有協(xié)同作用的。相反，當抑制低于兩個最大值時，可以推斷出拮抗作用。當聯(lián)合的作用對于兩種藥物沒有明顯不同于最大值時，推斷出可加性。通過對在每種劑量比率上的抑制對比對于每種藥物的最大值的抑制進行斯氏t檢驗來評估統(tǒng)計顯著性。對于每種細胞系的藥物聯(lián)合的總的顯著性取決于對于超過50%的劑量比率顯示統(tǒng)計學顯著性。作為視覺輔助，在散點圖上對反應值進行繪圖，其中在X軸上給出劑量比率，在y軸上給出n/。反應值。在兩個終點反應值(例如，在對于100。/。IC50Aplidine和100%IC5o標準化療劑的反應值之間)之間繪制水平線。如果在兩個終點的劑量值大約相等，在該可加性的預期線之上或之下的點可以解釋為分別代表拮抗或協(xié)同藥物相互作用。每種藥物與Aplidine的體外聯(lián)合具有協(xié)同，添加或拮抗作用的潛能。對于腫瘤細胞的協(xié)同細胞毒性是最佳的效果并且顯示Aplidine與另一種藥物的聯(lián)合比單獨的任一種藥物更為有效。根據(jù)該測定，發(fā)現(xiàn)a.Aplidine與紫杉醇的聯(lián)合顯示在乳腺癌SKBR3細胞(圖2),急性淋巴母細胞白血病MOLT3細胞(圖3)和前列腺癌PC3細胞(圖4)中顯示協(xié)同作用。在早幼粒細胞白血病HL60細胞(圖5)，乳腺癌MX1細胞(圖6)和NSCLA549細胞(圖7)中觀察到可加性的趨勢。b.Aplidine與多柔比星的聯(lián)合在NSCLA549細胞(圖8),結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖9)和前列腺癌PC3細胞(圖10)中顯示協(xié)同作用。在急性淋巴母細胞白血病MOLT3細胞(圖11),乳腺癌MX1細胞(圖12)和乳腺癌SKBR3細胞(圖13)中觀察到可加性。c.Aplidine與順鉑的聯(lián)合在乳腺癌MX1細胞(圖14)和結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖15)中顯示協(xié)同作用。在乳腺癌SKBR3細胞(圖16)和急性淋巴母細胞白血病MOLT3細胞(圖17)中觀察到可加性,和在NSCLA549細胞(圖18)中發(fā)現(xiàn)協(xié)同作用的趨勢。d.Aplidine與三氧化二砷的聯(lián)合在NSCLA549細胞(圖19),結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖20)和前列腺癌PC3細胞(圖21)中顯示協(xié)同作用。在急性淋巴母細胞白血病MOLT3細胞(圖22)中觀察到可加性。e.Aplidine與5-氟尿嘧啶的聯(lián)合在早幼粒細胞白血病HL60細胞(圖23),乳腺癌SKBR3細胞(圖24),NSCLA549細胞(圖25)和前列腺癌PC3細胞(圖26)中顯示協(xié)同作用。在結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖27)中觀察到可加性。f.Aplidine與阿糖胞苷的聯(lián)合在乳腺癌SKBR3細胞(圖28),NSCL乳A549細胞(圖29)和前列腺癌PC3細胞(圖30)中顯示協(xié)同作用。在早幼粒細胞白血病HL60細胞(圖31)和結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖32)中觀察到可加性。g.Aplidine與卡鉑的聯(lián)合在前列腺癌PC3細胞(圖33)和結(jié)腸腺癌HT29細胞(圖34)中顯示協(xié)同作用。在NSCLA549細胞(圖35)，急性淋巴母細胞白血病MOLT3細胞(圖36)和乳腺癌MX1細胞(圖37)中觀察到可加性。h.Aplidine與SN38的聯(lián)合在NSCLA549細胞(圖38)中顯示協(xié)同作用。在乳腺癌SKBR3細胞(圖39),早幼粒細胞白血病HL60細胞(圖40)和前列腺癌PC3細胞(圖41)中觀察到可加性。實施例2.確定Aplidine與另一種標準藥劑的聯(lián)合對白血病，淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤和黑素瘤腫瘤細胞系效果的體外研究按照在實施例1中公開的相同的方法，針對一些腫瘤細胞系來評估Aplidine作為單一藥劑或與選定的標準化療劑聯(lián)合以測量細胞毒性的不同。選擇下列標準藥劑作為單一藥劑并且與Aplidine聯(lián)合依托泊苷(VP16)和卡鉑。將選擇用于該測定的腫瘤細胞系顯示在表3中。3<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>細胞培養(yǎng)方法所有的細胞系在各自生長培養(yǎng)基中，以37。C，5%002和98°/。濕度維持。所有的培養(yǎng)基配方不包含抗生素。在接種細胞之前的一天，將所有的培養(yǎng)物用新鮮的完全的生長培養(yǎng)基培養(yǎng)。在收獲(接種)日，將細胞用錐蟲藍排除染色法進行計數(shù)。細胞接種收集細胞并且以15,000細胞/孔接種在96孔微量滴定板中的190nL培養(yǎng)基中并且溫育24小時以容許細胞在藥物添加前貼壁。藥物處理在100%DMSO中以5mg/ml制備Aplidine的J)t存溶液。在100%DMSO中以2mg/ml的濃度對于兩種藥物制備化療劑VP16和卡鉑的貯存溶液。將細胞用Aplidine和其它的標準藥劑以下面列出的范圍進行處理，并且以每板一式三份地重復制備每個藥物濃度。將所用的測試藥劑的濃度表示為每種藥劑的ICs。的百分比，在實施例1中進行確定。Aplidine的IC50100%75%60%50%40%30%25%0%標準藥劑的IC0%25%40%50%60%70%75%100%將對于每種細胞系的每種藥劑的每個ICso值顯示在表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>通過MTS測定(四氮唑)測量細胞毒性效應，所述測定是確定活細胞數(shù)量的比色方法。，在用測試藥劑溫育72小時后，將25|il的MTS+PMS溶液加入每個微量滴定孔中并且在37"C溫育4小時。接著從培養(yǎng)箱移出板，并且置于板搖動器上5分鐘(用鋁箔覆蓋以避光)。在分光光度計板閱讀器上在490nm讀出光密度。將數(shù)據(jù)分析為1將Prism(Graphpad)軟件程序用于將數(shù)據(jù)相對對照值而標準化(100%=在無藥劑(藥物)存在下的細胞生長;0%=空白對照)。2.將標準化的數(shù)據(jù)繪制為散點圖。對于每種藥劑(藥物)聯(lián)系100%ICso的值繪制線。明顯在線之上的值指示拮抗作用，在下面的值指示協(xié)同作用，并且正好在線上的值指示可加性。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理按照LaskaE.等Biometrics(1994)50:834-841和Greco等PharmacolRev(藥物綜述).(1995)47:331-385。當對細胞增殖的抑制超過每種藥物單獨的最大抑制值(在100%1(35。)時，判斷在測試的劑量比率上的聯(lián)合是有協(xié)同作用的。相反，當抑制低于兩個最大值時，可以認為拮抗作用。當聯(lián)合的作用對于兩種藥物沒有明顯不同于最大值時，推斷出可加性。通過對在每種劑量比率上的抑制對比對于每種藥物的最大值的抑制進行斯氏t檢驗來評估統(tǒng)計學顯著性。對于每種細胞系的藥物聯(lián)合的總的顯著性取決于對于超過50%的劑量比率顯示統(tǒng)計學顯著性。作為視覺輔助，在散點圖上對反應值進行繪圖，其中在X軸上給出劑量比率，在y軸上給出。/。反應值。在兩個終點反應值(例如，在對于100。/。IC50Aplidine和100%ICs。標準化療劑的反應值之間)之間繪制水平線。如果在兩個終點的反應值大約相等，在該可加性的預期線之上或之下的點可以解釋為分別代表拮抗或協(xié)同藥物相互作用。在圖42A和42B中，顯示Aplidine與VP16聯(lián)合針對HL-60細胞的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)獲得累加效應。在圖43A和43B中，顯示Aplidine與VP16聯(lián)合針對K562細胞的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)獲得可加性。在圖44A和44B中，顯示Aplidine與VP16聯(lián)合針對MOLT-3細胞的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)獲得可加性。在圖45A和45B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對MC116細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)，在該腫瘤細胞系中獲得可加性。在圖46A和46B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對RAMOS細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)在該腫瘤細胞系中獲得協(xié)同作用。在圖47A和47B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對U937細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)獲得可加性。在圖48A和48B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對NCI-H929細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)獲得協(xié)同作用。在圖49A和49B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對HUNS-1細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)，在該腫瘤細胞系中獲得可加性。在圖50A和50B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對U266B-1細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)，在該腫瘤細胞系中獲得可加性。在圖51A和51B中，顯示用Aplidine與VP16聯(lián)合針對RPMI8226細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)，在該腫瘤細胞系中獲得可加性。在圖52中，顯示用Aplidine與卡鉑的聯(lián)合針對LOX-I-MVI細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)，在該腫瘤細胞系中獲得可加性。在圖53中，顯示用Aplidine與卡鉑的聯(lián)合針對UACC-257細胞觀察到的體外活性數(shù)據(jù)。根據(jù)該數(shù)據(jù)在該腫瘤細胞系中獲得協(xié)同作用。實施例3:確定Aplidine與其它的標準藥劑聯(lián)合對多發(fā)性骨髓瘤腫瘤細胞系的效果的體外研究多發(fā)性骨髓瘤(MM)是血漿細胞的惡性疾病，通常起源自在骨髓中增殖和積累的血漿細胞的克隆?；加泄撬枇龅幕颊叩呐R床病理學特征包括在血液或尿液中的單克隆蛋白的聚集，松解的骨病灶，貧血癥和腎功能障礙(SirohiB.等Lancet(2004)363:875-87)。骨髓瘤的實際治療依賴于由干細胞移植支持的高劑量治療。盡管在最近十年里取得的進展，目前，MM仍舊是不可治愈的疾病，對于患者的中值總存活時間是2-5年(SirohiB.等Lancet(2004)363:875-87)。需要新的治療方法來改善患者在三項主要的研究項目后的結(jié)果a)通過使用高劑量增加化療的功效；b)增加針對骨髓瘤細胞的宿主免疫應答；禾nc)開發(fā)具有更特異靶標的新藥物，其不僅可以干擾骨髓瘤細胞，還干擾骨髓微環(huán)境(SanMiguelJF等Curr.Treat.OptionsOncol.(2003)4:247-58)。有希望的是，兩種或多種這些治療劑的聯(lián)合將導致改善的抗-MM功效和更長的存活率。因此，我們報道對Aplidine作為一種新藥物在治療多發(fā)性骨髓瘤的效果上的一些研究。這些研究包括1)使用細胞存活(MTT測定)和細胞凋亡(膜聯(lián)蛋白V染色)測定，研究Aplidine(單獨地或聯(lián)合地)對一些MM細胞系的細胞毒性功效2)Aplidine和其它的傳統(tǒng)和最近開發(fā)的藥物的聯(lián)合在治療該疾病中的細胞毒性功效。材料和方法細胞系和細胞培養(yǎng)試劑將四種MM-來源的細胞系用在該研究中人多發(fā)性骨髓瘤細胞系MM.l(GreensteinS.等Exp.Hemato1(2003)31:.271-82)的地塞米松-敏感性(MM.IS)和地塞米松-抗性(MM.1R)變體，其由Dr.SRudikoff,貝塞斯達MD惠贈；并且U266和其美法侖-抗性負體U266LR7細胞系獲自Dr.W.Dalton,Tampa，F(xiàn)L。將所有的MM細胞系培養(yǎng)在RPMI1640培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基添加了10%熱滅活的胎牛血清，100U/ml的青霉素，lOOpg/ml的鏈霉素和2mM的L-谷氨酰胺。所有的細胞培養(yǎng)基和試劑購自Iiwitrogen公司(卡爾斯巴德，CA)。細胞存活測定使用甲硫基四唑(MTT;西格瑪，圣路易斯MO)比色測定評估MM細胞增殖的分析。將MM細胞系在48-孔板中以50000細胞/20(^1培養(yǎng)基/孔的密度接種，并且用確定的藥物劑量和時間進行處理。在治療結(jié)束前兩小時，加入MTT溶液(在PBS中的5mg/ml;通常是每個孔的體積的10%)，并且由代謝活性細胞還原四氮唑鹽為有色的甲朥晶體。在通過與10%SDS-HC1溶液過夜溫育溶解這些晶體后，在570nm，以在630nm的校正測量吸光度。對于每種條件分析四個孔，并且將結(jié)果表示為重復至少三次的代表性實驗的四次重復的平均值士SD。蛋白質(zhì)印跡收集細胞，并且用PBS洗滌，在冰冷的裂解緩沖液(140mMNaCl，10mMEDTA,10%甘油，1%NonidetP-40，20mMTris(pH7.0)1(iM胃酶抑制齊U,lpg/ml牛胰蛋白酶抑制劑，lng/ml亮抑蛋白酶肽，1mM原釩酸鈉)中溫育后獲得總的細胞裂解物。接著，在4。C，在10,000g離心樣品達10分鐘并且通過6%-12.5。/。SDS-PAGE分辨上清液中等量的蛋白質(zhì)。接著，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝化纖維素或PVDF膜上，通過在PBST緩沖液(在PBS中的0.05%-Tween20)中的5%脫脂干奶粉中溫育來封閉，并隨后用特定的一級antCruzTechnologies,ibody[抗-p-c-jun,抗-p-Erk1/2禾口抗-Erk5抗體購自SantaCruzBiotechnologies(圣克魯斯，加利福尼亞)，而抗-p-p38獲自CellSignaling(丹弗其萬,MA)，抗-PARP抗體獲自BectonDickinsonBiosciences(貝德福德，MA)]溫育。在用相應的二抗第二次溫育后，通過增加的化學發(fā)光(ECL;阿莫仙(Amersham)，阿靈頓山莊，伊利諾斯州)使免疫印跡顯影。鑒定激活的JNK和Erk5需要在前用相應的特異性抗體和蛋白質(zhì)A瓊脂糖進行蛋白質(zhì)裂解物的免疫沉淀。等效線圖解分析使用Calcusyn軟件程序(Biosoft,Ferguson,MO)分析在Aplidine和其它的抗-MM藥劑之間的相互作用。將來自細胞存活測定(MTT)的數(shù)據(jù)表示為在藥物處理的細胞中受劑量(Fa)影響的細胞與未處理細胞(對照)比較的分數(shù)。該程序基于根據(jù)下列等式CI=(D)l/(Dx)l+(D)l(D)2/(Dx)l(Dx)2的Chou-Talalay方法(ChouTC等Adv.EnzymeRegul.(1984)22:27-55)，其中(D)l和(D)2是單獨使用時具有相同x作用的藥物1和2的劑量。少于1.0的CI值顯示協(xié)同作用，等于1.0的CI值顯示累加效應，而超過1的值對應于拮抗作用。結(jié)果在MM-來源的細胞系中對Aplidine的劑量反應我們首先使用在對常規(guī)治療藥物敏感和具有抗性的MM-來源的細胞系上的MTT測定確定Aplidine是否影響細胞存活力。如在圖54中所觀察到的，Aplidine治療48小時在所有的測試的細胞系中，以劑量依賴性方式誘導細胞存活力的類似減少。在48小時處理后，在存活細胞中的50%的減少(IC5。)對于四種測試的細胞系在1-10nM范圍內(nèi)。Aplidine在治療MM上的功效還與其它傳統(tǒng)(美法侖，地塞米松)和新藥物(硼替佐米)進行比較。圖55顯示當以0.1-1nM劑量在MM.lS細胞系上測試48小時時，Aplidine相比于其它藥物優(yōu)越的功效;其效果類似于Bortexomib在最大劑量(IO-IOOnM)的效果。在Aplidine的雙重聯(lián)合中評價協(xié)同作用由于向MM化療的持續(xù)暴露在許多情況中與增加的毒性和新的藥物抗性的發(fā)展相關(guān)，我們測試了最小毒性濃度的Aplidine與其它藥物的聯(lián)合是否影響MM細胞存活力。具體而言，在治療MM中將Aplidine與傳統(tǒng)藥物聯(lián)合(如地塞米松或美法侖)，還與最近開發(fā)的抗骨髓瘤藥劑(硼替佐米)聯(lián)合，和與特異性靶向骨髓微環(huán)境的藥物(lenalidomide(1^^11^@))聯(lián)合。還對于上述提及的治療劑進行l(wèi)，2，3和6天的時間進程實驗以確定對于聯(lián)合實驗的適合的次優(yōu)劑量(10%-30%生長抑制)并且研究治療的延續(xù)時間。在培養(yǎng)3天或6天后，進行Aplidine和其它藥物的聯(lián)合實驗。通過如上所述的MTT測定測量MM.1S細胞系的細胞生長，并且通過CalcuSyn程序分析抑制百分比。使用計算機計算的聯(lián)合指數(shù)(CI)來判斷聯(lián)合的效果CI》，Chl,和CKl分別指示拮抗作用，累加效應和協(xié)同作用。數(shù)據(jù)與半數(shù)有效原則的一致性可以容易地通過半數(shù)有效繪圖的線性相關(guān)系數(shù)(r)證實log(fa/fu)=mlog(D)-mlog(Dm)，其中D是劑量，Dm是50%效果所需要的劑量，fa是受劑量影響的分數(shù)，fu是未受影響的分數(shù)，并且m是劑量效應曲線的S形的系數(shù)。對于每個雙重聯(lián)合，使用非常數(shù)比率聯(lián)合。每個實驗重復三次，并且處理每個單一藥物和三種聯(lián)合的三個數(shù)據(jù)點的最小值。.Aplidine與地塞米松的聯(lián)合在第三天，對于0.5nMAplidine/1nM和10nM地塞米松聯(lián)合觀察到協(xié)同作用(圖56)。如在圖57中舉例說明，聯(lián)合在6天更加具有協(xié)同作用。Aplidine與美法侖的聯(lián)合下列的聯(lián)合顯示在3和6天差不多的累加效應(分別為圖58和59)。Aplidine與多柔比星的聯(lián)合在3天，僅有一種聯(lián)合具有中度的協(xié)同作用(圖60,聯(lián)合1)，兩種聯(lián)合具有累加效應(圖60,聯(lián)合3和4)。在6天，僅有兩種聯(lián)合具有累加效應(圖61,聯(lián)合7和8)。Aplidine與lenalidomide(Revlimid㊣)的聯(lián)合在本研究中，Aplidine禾卩l(xiāng)enalidomide(Revlimid⑧)的聯(lián)合顯示與所有其它檢査的聯(lián)合相比，更大程度的協(xié)同作用(圖62)。明顯地，協(xié)同作用在6天更加重要(圖63)。A。lidine與硼替佐米的聯(lián)合該聯(lián)合在3天顯示拮抗作用(圖64);在6天，對于兩種聯(lián)合發(fā)現(xiàn)協(xié)同作用C圖65,聯(lián)合4和6)。實施例4:確定Aplidine與其它標準藥劑的聯(lián)合在黑素瘤和腎異種移植物中的作用的體內(nèi)研究本研究的目的是當與抗腫瘤標準藥劑一起施用時，評估Aplidine在雌性無胸腺小鼠的數(shù)種類型的腫瘤異種移植物中的抗腫瘤活性，所述Aplidine和抗腫瘤標準藥劑兩者都使用多次給藥時間表進行施用。無胸腺雌性裸鼠來自HarlanSpragueDawley,麥迪遜，威斯康星州，4-5周齡。在植入腫瘤之前，使小鼠適應實驗室環(huán)境至少一周。將動物籠養(yǎng)在安靜的籠中，隨意取用食物和水。用來自移植建立的人腫瘤的腫瘤部分或直接獲自體外培養(yǎng)物的細胞對實驗動物進行移植。在第O天，將腫瘤皮下植入右脅。從第4或第5天開始，使用游標卡尺每周2次記錄腫瘤大小測量。使用計算長橢球的體積的式估計來自2維腫瘤測量的腫瘤體積腫瘤體積(mm3)=(長度x寬度2)+2。設(shè)定單位密度，將體積轉(zhuǎn)化為重量(即，lmm3=lmg)。當腫瘤達到100±15mg的適合的體積范圍時，將小鼠隨機分為處理組和對照組?；趥€體體重基礎(chǔ)開始處理和給藥。在每個腫瘤模型上進行劑量范圍發(fā)現(xiàn)研究以確定在聯(lián)合研究中所用的每種化合物的適合的劑量水平。將下列治療各種癌癥類型(適應癥)的標準藥劑與Aplidine(APL)聯(lián)合以確定聯(lián)合療法當與作為單一療法施用的兩種藥劑的組合活性比較時，是否提供更大的抗腫瘤活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>從該異種移植物研究中，得出結(jié)論為在黑素瘤MRI-H187細胞中，Aplidine與DTIC的聯(lián)合和Aplidine與卡鉑的聯(lián)合顯示明顯的具有統(tǒng)計學顯著性的抗腫瘤活性的潛力，其中在與卡鉑的聯(lián)合的情形中更為顯著。表6和圖68和69顯示在MRI-H-187黑素瘤腫瘤異種移植物中，用aplidine(Aplidii^)作為單一藥劑或與白介素-2(IL-2)和干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合開始治療后的凈腫瘤體積的動力學。每天通過i.p注射給藥Aplidine，持續(xù)9天，每天通過i.p注射給藥鹽水對照(無菌鹽水)，持續(xù)9天，通過i.p注射在5個工作日(周一到周五)過程中每天給藥IL-2，進行3周，并且通過皮下(s.c.)注射在5個工作日(周-到周五)過程中每天給藥INF-a，進行3周。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>從該異種移植物研究得出結(jié)論，即在黑素瘤MRI-H187細胞中，Aplidine與IL-2的聯(lián)合和Aplidine與INF-a的聯(lián)合顯示可加性。表7和圖70和71顯示用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與DTIC和卡鉑聯(lián)合在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中開始治療后的凈腫瘤體積動力學。每天通過i.p.注射給藥Aplidine,持續(xù)9天，每天通過i.p注射給藥鹽水對照(無菌鹽水)持續(xù)9天，每天通過i.p.注射給藥DTIC，持續(xù)5天，和通過i.p.注射每4天給藥卡鉑一次，共4次治療。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>S.E.M=平均值的標準誤差從該異種移植物研究可以得出結(jié)論，即在黑素瘤LOX-IMVI細胞中，Aplidine與DTIC的聯(lián)合顯示累加效應模式，Aplidine與卡鉑的聯(lián)合顯示協(xié)同作用的趨勢。-表8和圖72和73顯示用Aplidine(APL)作為單一藥劑或與白介素-2(IL-2)和干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合在LOX-IMVI黑素瘤腫瘤異種移植物中開始治療后的凈腫瘤體積動力學。每天通過i.p注射給藥Aplidine,持續(xù)9天，每天通過i.p.注射給藥鹽水對照(無菌鹽水)，持續(xù)9天，通過i.p.注射在5個工作日(周一到周五)過程中每天給藥IL-2，進行3周，并且通過s.c,注射在5個工作日(周一到周五)過程中每天給藥INF-a,進行3周。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>S.E.M=平均值的標準誤差從該異種移植物研究得出結(jié)論，即在黑素瘤LOX-IMVI細胞中，Aplidine與IL-2的聯(lián)合和Aplidine與INF-a的聯(lián)合顯示可加性。表9和圖74,75和76顯示Aplidine(APL)作為單一藥劑或與貝伐單抗(Avastin),白介素-2(IL-2)和干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合在CaKi-l腎腫瘤異種移植物中開始治療后的凈腫瘤體積動力學。每天通過i.p.注射給藥Aplidine，持續(xù)9天，每天通過i.p注射給藥鹽水對照(無菌鹽水)，持續(xù)9天，貝伐單抗(Avastin⑧)通過i.p.注射每3天給藥，總共4次治療，IL-2通過i.p.注射在5個工作日(周一-周五)過程中每天給藥，進行3周，和INF-a在5個工作日(周一-周五)過程中通過s.c.注射每天給藥，進行3周。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>S.E.M,平均值的標準誤差表9(續(xù))__<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>從該異種移植物研究得出結(jié)論，Aplidine與Avastin⑧的聯(lián)合和Aplidine與IL-2的聯(lián)合在腎CaKi-l細胞中顯示協(xié)同作用，其中在與IL-2聯(lián)合的情形中更為顯著。在另一方面，Aplidine與INF-a的聯(lián)合顯示累加效應模式。表10和圖77,78和79顯示在用aplidine(APL)作為單一藥劑或與貝伐單抗(Avastit^),白介素-2(IL-2)和干擾素-a2a(INF-a)聯(lián)合開始治療后在MRI-H121腎腫瘤異種移植物中的凈腫瘤體積的動力學。每天通過i.p注射給藥Aplidine,持續(xù)9天，每天通過i.p注射給藥鹽水對照(無菌鹽水)，持續(xù)9天，貝伐單抗(Avastii^)通過i.p.注射每3天給藥一次，總共4次治療，IL-2通過i.p.注射在5個工作日(周一到周五)過程中每天給藥，進行3周和INF-a通過s.c.注射在5個工作日(周一到周五)過程中每天給藥，進行3周。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表10(續(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>從該異種移植物研究得出結(jié)論，在腎MRI-H121細胞中，三種聯(lián)合顯示累加效應模式。實施例5.在多發(fā)性骨髓瘤(RPMI-8226和U266B1)細胞系中進行另外的體外測定以確定Aplidine與兩種標準治療化療劑(硼替佐米和美法侖)的聯(lián)合的效果。針對多發(fā)性骨髓瘤細胞系，具體地RPMI-8226和U266B1細胞系評價Aplidine作為單一藥劑或與硼替佐米或美法侖的聯(lián)合。將這些細胞系培養(yǎng)在具有10%FBS和1%L-谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中。將每種細胞系以20，000細胞/孔接種在96孔板中。首先單獨測試Aplidine，硼替佐米和美法侖以確定對于它們每個的IQo值。為了確定ICso值，按照在實施例1中公開的方法，在不同范圍的藥物濃度檢查每種藥物的IC5o值。表11顯示針對兩種多發(fā)性骨髓瘤細胞系的三種藥物的每種獲得的每個IC50。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>在下一個步驟中，將硼替佐米或美法侖與Aplidine聯(lián)合。在這些實驗中，使用l:10系列稀釋的Aplidine濃度。將每個系列稀釋度與4個不同濃度的硼替佐米或美法侖配對。將板在37。C和5%C02培養(yǎng)3天。使用PromegaMTS測定系統(tǒng)閱讀所述板，其中MTS被活細胞代謝轉(zhuǎn)化為甲臘，其在490nm波長發(fā)熒光。這是細胞存活力的間接測量。使用SoftmaxPro程序分析這些，所述程序基于對照孔的百分比確定細胞存活力。接著，將該ICso數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化到CalcuSyn程序中進行聯(lián)合指數(shù)分析。CalcuSyn使用算法比較單獨的藥物的K^值和藥物聯(lián)合的IQo值以確定聯(lián)合指數(shù)。重要的是注意聯(lián)合指數(shù)(CI)是兩種藥物的聯(lián)合效果的反映CI=1指示累加效應；CK1指示協(xié)同作用；和CIM指示拮抗作用效應。表12總結(jié)那些劑量，其中在Aplidine與硼替佐米聯(lián)合對抗RMPI8226細胞系中觀察到協(xié)同作用表12<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表13總結(jié)那些劑量，其中在Aplidine與美法侖的聯(lián)合對抗RMPI8226細胞系中觀察到協(xié)同作用表13<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表14總結(jié)那些劑量，其中在Aplidine與硼替佐米的聯(lián)合對抗U266Bl細胞系中觀察到協(xié)同作用表14<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>在接下來的步驟中，伊達比星與Aplidine聯(lián)合。在與MOLT4細胞系相關(guān)的實驗中，使用1:10系列稀釋度的Aplidine的濃度。每個系列稀釋度與4個不同濃度的伊達比星組合。在與K562細胞系相關(guān)的實驗中，使用1:5系列稀釋度的Aplidine的濃度，基于比率，將伊達比星濃度加入每個聯(lián)合組中。因此，聯(lián)合A是l:l,聯(lián)合B是0.008:1,聯(lián)合C是6.4E-05:1并且聯(lián)合D是5.12E-07:1。將板在37"和5%C02培養(yǎng)3天。使用PromegaMTS測定系統(tǒng)閱讀所述板，其中MTS被活細胞代謝轉(zhuǎn)化為甲臘，其在4卯nm波長發(fā)熒光。這是細胞存活力的間接測量。使用SoftmaxPro程序分析這些，所述程序基于對照孔的百分比確定細胞存活力。接著，將該IC5。數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化到CalcuSyn程序中進行聯(lián)合指數(shù)分析。CalcuSyn使用算法比較單獨的藥物的1(^5()值和藥物聯(lián)合的IC5。值以確定聯(lián)合指數(shù)。重要的是注意聯(lián)合指數(shù)(CI)是兩種藥物的聯(lián)合效果的反映CI=1指示累加效應；CI<1指示協(xié)同作用；和CI>1指示拮抗作用效應。表17總結(jié)那些劑量，其中在Aplidine與伊達比星的聯(lián)合對抗MOLT4細胞系中觀察到協(xié)同作用表17<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表18總結(jié)那些劑量，其中在Aplidine與伊達比星的聯(lián)合對抗K562細胞系中觀察到協(xié)同作用表18<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>160ng/ml160ng/ml0.0030.8嗎/ml0,g/ml0.0144pg/ml4pg/ml0.222Combo0.008:1比率256pg/ml32ng/ml0.6871.28ng/ml160ng/ml0.0256.4ng/ml0.8|ag/ml0.02632ng/ml4jag/ml0.209Combo6.4E-05:1比率10.2pg/ml160ng/ml0.19451.2pg/ml0.8嗎/ml0.677256pg/ml4pg/ml0.459Combo5.12E-07:l比率81.9fg/ml160ng/ml0.0910.41pg/ml0.8嗎/ml0.3652.05pg/ml4|ig/ml0.459實施例7:確定Aplidine與另一種標準藥劑的聯(lián)合在黑素瘤異種移植物中的作用的體內(nèi)研究。本研究的目的是當與卡鉑聯(lián)合施用對抗在雌性，無胸腺NCr-小鼠中皮下植入的UACC-257人黑素瘤細胞時，評價Aplidine的抗腫瘤功效。將動物籠養(yǎng)在隔離飼育籠(microisolatorcage)中，每個籠多到五只，伴隨12小時光照/黑暗循環(huán)。在實驗前，使6周齡的雌性，無胸腺NCr-打w/"w小鼠適應實驗室環(huán)境一周。使用23號針，用來自體外細胞培養(yǎng)物的UACC-257人黑素瘤細胞在接近右脅的地方對每只小鼠進行皮下接種。每只小鼠接受重懸浮在0.2mL的Matrigel⑧中的2x107細胞。將具有UACC-257人黑素瘤冷凍細胞的小瓶融解并且在包含低葡萄糖(2,000mg/L)，碳酸氫鈉(l,500mg/mL)，2mML-谷氨酰胺和10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)中培養(yǎng)，并且在+37i:培養(yǎng)箱，在濕潤的氣氛中，以5%(302進行培養(yǎng)直到獲得接種小鼠所需要的細胞數(shù)量。在培養(yǎng)四代后，收集細胞。將細胞從燒瓶中取出，置于50-mL離心管中并且在冷凍離心機中，以1,000rpm離心IO分鐘。將細胞沉淀物重懸在新鮮的完全培養(yǎng)基中。用BeckmanCoulterVICELLXR細胞計數(shù)器和存活力分析儀確定下細胞數(shù)量和存活力。離心細胞混懸液，并且將細胞沉淀物以l.Ox1()S細胞/mL的細胞密度重新懸浮在Matrige產(chǎn)中并置于濕冰(wetice)上。Matrigel⑧在細胞混懸液中的最終濃度是56.9。/。。在細胞收獲的當天，細胞的存活力是98.9%。將腫瘤細胞接種當天設(shè)定為第O天。在治療開始當天，腫瘤細胞接種后的第13天，個體腫瘤的重量達到150-245mg(大小150-245mm3)。將具有適當大小范圍的腫瘤的四十只動物分配到四個處理組從而使在治療第一天的腫瘤重量的中位值彼此盡可能的接近。實驗在治療第一天，腫瘤細胞接種后的第13天，由共40只小鼠組成，其中賦形劑處理的對照組10只小鼠，三種藥物處理的組，每組10只小鼠。用鹽水稀釋的Aplidine的賦形劑對組1中的動物每天i.p.處理，持續(xù)9天(第13-21天)。Aplidine在9天里(第13-21天)，以每天60昭/kg/劑的劑量單獨i.p.給藥(組2)，或與卡鉑聯(lián)合i.p.給藥(組4)?？ㄣK每4天，以50mg/kg/劑的劑量單獨i.v.給藥(組3)，共3次治療(第13天，17天和21天)，或與Aplidine聯(lián)合(組4)i.v.給藥。在兩種化合物都在組4中給藥的當天，首先將Aplidine注射到組中的所有的10只動物，緊接著施用卡鉑(組4)。組1用0.18%聚氧乙烯蓖麻油/0.18%乙醇/0.84%WFI/98.8。/。鹽水(注射體積0.1mL/10g體重)i.p.處理。用包含15%聚氧乙烯蓖麻油/15°/。乙醇/70%WFI的賦形劑重構(gòu)Aplidine并且用鹽水稀釋(注射體積0.1mL/10g體重)。在WFI中制備卡鉑(注射體積0.1mL/10g體重)。每日觀察動物并且記錄臨床體征。測量s.c.腫瘤并且從治療的第一天，第13天開始每周兩次稱重動物。通過測徑器測量(mm)并使用對于橢圓球的式確定腫瘤體積Lx『2/2=mm3，其中L和W指在每次測量收集的更大和更小的垂線大小。設(shè)定單位密度，還使用該式來計算腫瘤重量(lmm3=1mg)。將在第23天(在治療結(jié)束后2天)和第70天(研究終止當天)的處理組(T)的中位值腫瘤重量與對照組的中位值腫瘤重量的比較(T/Cx100%)用于評估抗腫瘤功效。將對于每次處理的。/。T/C在表19中報道。表19<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>賦形劑時間表qldx9第13天Aplidine時間表qldx9第13天卡鉑時間表q4dx3第13天Aplidine/卡鉑時間表qldx9第13天/q4dx3第13天Aplidine加卡鉑的聯(lián)合治療被耐受而沒有死亡。聯(lián)合治療導致在第23天和第70天，分別為95%的17(:值，和53M的T/C值。實施例8:在骨髓瘤異種移植物中確定Aplidine與另一種標準藥劑的聯(lián)合的效果的體內(nèi)研究該研究的目的是評估當與硼替佐米聯(lián)合施用對抗在雄性，SCID小鼠中的皮下植入的RPMI8226人骨髓瘤細胞時，Aplidine的抗腫瘤功效。將動物籠養(yǎng)在隔離飼育籠中，每個籠中多到5只動物，伴隨12小時的光照/黑暗周期。在實驗前，使6周齡的雄性SCID小鼠適應實驗室環(huán)境一周。使用23號針，用來自體外細胞培養(yǎng)物的RPMI8226人骨髓瘤細胞在接近右脅的地方，s.c.接種每只小鼠。每只小鼠接受重懸浮在0.2mL的Matrige產(chǎn)中的2x107細胞。RPMI8226人骨髓瘤細胞開始購自ATCC(ATCC號CCL-155)。將具有冷凍細胞的小瓶融解并且培養(yǎng)在包含高葡萄糖(4，500mg/L)，碳酸氫鈉(1，500mg/mL)，2mML-谷氨酰胺，10mMHepes，lmM丙酮酸鈉和10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)中并且在+37匸培養(yǎng)箱，在濕潤的氣氛中，以5。/。C02進行培養(yǎng)直到獲得接種小鼠所需要的細胞數(shù)量。在培養(yǎng)四代后，收集細胞。將細胞從燒瓶中取出，置于50-mL離心管中并且在冷凍離心機中，以l，OOOrpm離心10分鐘。將細胞沉淀物重懸在新鮮的完全培養(yǎng)基中。用BeckmanCoulterVICELLXR細胞計數(shù)器和存活力分析儀確定細胞數(shù)量和存活力。離心細胞混懸液，并且將細胞沉淀物以l.Ox1()S細胞/mL的細胞密度重新懸浮在Matrige^中并置于濕冰上。Matrige媳在細胞混懸液中的最終濃度是78.3。/。。在細胞收獲的當天，細胞的存活力是89.3%。將腫瘤細胞接種當天設(shè)定為第O天。在治療開始當天，腫瘤細胞接種后的第18天，個體腫瘤的重量達到75-188mg(大小75-188mm3)。將選擇具有適當大小范圍的腫瘤的那些動物分配到四個處理組從而使在治療第一天的腫瘤重量的中位值彼此盡可能的接近。實驗在治療第一天，腫瘤細胞接種后的第18天，由共40只小鼠組成，其中賦形劑處理的對照組IO只小鼠，三種藥物處理的組，每組IO只小鼠。用鹽水稀釋的Aplidine的賦形劑對組1中的動物每天i.p.處理，持續(xù)9天進行兩輪(第18-26天和第38-46天)。Aplidine在連續(xù)9天里(第18-26天和第38-46天)，每天以60嗎/kg/劑的劑量單獨i.p給藥(組2)或與硼替佐米聯(lián)合給藥(組4)，給藥兩輪。從第18天開始，硼替佐米以0.35mg/kg/劑的劑量每3天，共兩次i.v.給藥硼替佐米，進行4周，隨后在第46天單獨(組3)或聯(lián)合Aplidine(組4)i.v.注射給藥一次或多次(onemore)。在組4中給藥兩種化合物的當天，首先將Aplidine注射到組中的所有十只動物中，緊接著給藥硼替佐米(組4)。組l用0.18%聚氧乙烯蓖麻油/0.18%乙醇/0.84%WFI/98.8。/。鹽水(注射體積0.1mL/10g體重)i.p.處理。用包含15%聚氧乙烯蓖麻油/15%乙醇/70%WFI的賦形劑重構(gòu)Aplidine并且用鹽水稀釋(注射體積0.1mL/10g體重)。在鹽水中制備Vdcade⑧(硼替佐米)(注射體積0.1mL/10g體重)。每日觀察動物并且記錄臨床體征。測量s.c.腫瘤并且從治療的第一天，腫瘤細胞接種后第18天開始每周兩次稱重動物。通過測徑器測量(mm)并使用如實施例7所述的對于橢圓球的式確定腫瘤體積。將在第27天(在第一輪Aplidine治療結(jié)束后的一天)和第48天(用Aplidine和硼替佐米治療結(jié)束后兩天)的處理組(T)的中位值腫瘤重量與對照組的中位值腫瘤重量的比較(T/Cx100%)用于評估抗腫瘤功效。將對于每次處理的。/。T/C在表20中報道。表20<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>賦形劑時間表qldx9第18，38天Aplidine時間表qldx9第18,38天硼替佐米時間表q3dx2第18,25，32,39天；qldx1第46天Aplidine/硼替佐米時間表qldx9第18,38天/qldx2第18,25,32,39天;qldx1第46天Aplidine加硼替佐米的聯(lián)合治療被耐受而沒有死亡。聯(lián)合治療有效抑制RPMI8226骨髓瘤細胞的生長，導致第27天和第48天的T/C值分別為49%和31%。聯(lián)合治療的抗腫瘤活性與由每種化合物單獨的給藥的抗腫瘤活性比較，超過累加效應。實施例9:確定Aplidine與另一種標準藥劑的聯(lián)合在淋巴瘤異種移植物中的效果的體內(nèi)研究本研究的目的是評價當與利妥昔單抗聯(lián)合施用對抗雌性，SCID小鼠中的皮下植入的RL人淋巴瘤細胞時，Aplidine的抗腫瘤功效。將動物籠養(yǎng)在隔離飼育籠中，每個籠中多到5只動物，伴隨12小時的光照/黑暗周期。在實驗前，使6周齡的雄性SCID小鼠適應實驗室環(huán)境一周。使用23號針，用來自體外細胞培養(yǎng)物的RL人淋巴瘤細胞在接近右脅的地方，sx.接種每只小鼠。每只小鼠接受重懸浮在0.2mL的Matrige^中的1.0x107細胞。將具有冷凍細胞的小瓶融解并且培養(yǎng)在包含高葡萄糖(4,500mg/L)，碳酸氫鈉(1,500mg/mL)，2mML-谷氨酰胺，10mMHepes，lmM丙酮酸鈉和10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)中，并且在+37t:培養(yǎng)箱，在濕潤的氣氛中，以5%032進行培養(yǎng)直到獲得接種小鼠所需要的細胞數(shù)量。在培養(yǎng)6代后，收集細胞。將細胞從燒瓶中取出，置于50-mL離心管中并且在冷凍離心機中，以1,000rpm離心10分鐘。將細胞沉淀物重懸在新鮮的完全培養(yǎng)基中。用CoulterZl型細胞計數(shù)器確定細胞數(shù)量并在用碘化丙錠染色后測量存活力，使用BeckmanCoulterEPICSXL流式細胞儀進行分析。離心細胞混懸液，并且將細胞沉淀物以5.0x1(^細胞/mL的細胞密度重新懸浮在Matrige產(chǎn)中并置于濕冰上。Matrige產(chǎn)在細胞混懸液中的最終濃度是73.0。/。。在細胞收獲的當天，細胞的存活力是98.9%。將腫瘤細胞接種當天設(shè)定為第O天。在治療開始當天，腫瘤細胞接種后的第15天，個體腫瘤的重量達到100-196mg(大小100-196mm3)。將具有適當大小范圍的腫瘤的四十只動物分配到四個處理組從而使在治療第一天所有組的腫瘤重量的中位值彼此盡可能的接近。實驗在治療第一天，腫瘤細胞接種后的第15天，由共40只小鼠組成，其中賦形劑處理的對照組IO只小鼠，三種藥物處理的組，每組IO只小鼠。用鹽水稀釋的Aplidine的賦形劑對組1中的動物每天i.p.處理，持續(xù)9天進行兩輪(第15-23天和第28-36天)。Aplidine在連續(xù)9天里(第15-23天和第28-36天)，以每天60pg/kg/劑的劑量單獨i.p給藥(組2)或與利妥昔單抗聯(lián)合給藥(組4)，給藥兩輪。從第15天開始，利妥昔單抗以20mg/kg/劑的劑量單獨i.p給藥或聯(lián)合Aplidine(組4)i.p給藥，每輪每3天一次，共兩次治療(q3dX2時間表)，進行4周治療(組3)。在組4中給藥兩種化合物的當天，首先將Aplidine注射到組中的所有十只動物中，緊接著給藥利妥昔單抗(組4)。組1用0.18%聚氧乙烯蓖麻油/0.18°/。乙醇/0.84%WFI/98.8。/o鹽水(注射體積0.1mL/10g體重)i.p.處理。用包含15%聚氧乙烯蓖麻油/15%乙醇/70%WFI的賦形劑重構(gòu)Aplidine并且用鹽水稀釋(注射體積0.1mL/10g體重)。在鹽水中制備Rituxan吸(利妥昔單抗)(注射體積0.1mL/10g體重)。每曰觀察動物并且記錄臨床體征。測量s.c.腫瘤并且從治療的第--天，第15天開始每周兩次稱重動物。通過測徑器測量(mm)并使用如實施例7所述的對于橢圓球的式確定腫瘤體積。將在第24天(在第一輪9天的Aplidine治療結(jié)束后的一天)和第38天(在第二輪9天的Aplidine治療結(jié)束后兩天)的處理組(T)的中位值腫瘤重量與對照組的中位值腫瘤重量的比較(T/Cx100%)用于評估抗腫瘤功效。將對于每次處理的MT/C在表21中報道。表21<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>賦形劑時間表qldx9第15,28天Aplidine時間表qldx9第15，28天利妥昔單抗時間表q3dx2第15，22,29，36天；Aplidine/利妥昔單抗時間表qldx9第15,28天/q3dx2第15,22,29,36天Aplidine加利妥昔單抗的聯(lián)合治療被耐受而沒有死亡。聯(lián)合治療有效抑制RL淋巴瘤細胞的生長，導致第24天和第38天的T/C值分別為69%和74%。因此，當Aplidine與利妥昔單抗聯(lián)合時，觀察到抗腫瘤活性的增效作用。實施例10:確定Aplidine與其它標準藥劑(三重聯(lián)合)聯(lián)合在多發(fā)性骨髓瘤腫瘤細胞系上作用的體內(nèi)研究在本研究中，分析抗腫瘤藥劑的三重聯(lián)合。使用細胞存活力測定(MMT)，在MM.1S細胞系，一種非常敏感的MM細胞系中測試所有的聯(lián)合。使用Calcusyn軟件分析結(jié)果。細胞系和細胞培養(yǎng)試劑地塞米松-敏感的MM細胞系MM.1S由Dr.SRudikoff，貝塞斯達MD惠贈。將細胞系培養(yǎng)在RPMI1640培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基添加了10%熱滅活的胎牛血清，100U/ml的青霉素，100嗎/ml的鏈霉素和2mM的L-谷氨酰胺。所有的細胞培養(yǎng)基和試劑購自Invitrogen公司(卡爾斯巴德,CA)。細胞存活測定使用甲硫基四哇(MTT;西格瑪，圣路易斯MO)比色測定評估MM細胞增殖的分析。將MM細胞系在48-孔板中以50000細胞/200|11培養(yǎng)基/孔的密度接種，并且用確定的藥物劑量和時間進行處理。在治療結(jié)束前兩小時，加入MTT溶液(在PBS中的5mg/ml;通常是每個孔的體積的10%)，并且由代謝活性細胞還原四氮唑鹽為有色的甲臘晶體。在通過與10%SDS-HC1溶液過夜溫育溶解這些晶體后，在570nm，以在630nm的校正測量吸光度。對于每種條件分析四個孔，并且將結(jié)果表示為重復至少三次的代表性實驗的四次重復的平均值±SD。等效線圖解分析使用Calcusyn軟件程序(Biosoft，F(xiàn)erguson,MO)分析在Aplidine和其它的抗-MM藥劑之間的相互作用。將來自細胞存活測定(MTT)的數(shù)據(jù)表示為在藥物處理的細胞中受劑量(Fa)影響的細胞與未處理細胞(對照)比較的分數(shù)。該程序基于根據(jù)下列等式CI=(D)l/(Dx)l+(D)1(D)2/(Dx)l(Dx)2的Chou-Talalay方法，其中(D)l和(D)2是單獨使用時具有相同x作用的藥物1和2的劑量。使用計算機計算的聯(lián)合指數(shù)(CI)來判斷聯(lián)合的效果CI>1,CI4,和CK1分別指示拮抗作用，累加效應和協(xié)同作用。數(shù)據(jù)與半數(shù)有效原則的一致性可以容易地通過半數(shù)有效繪圖的線性相關(guān)系數(shù)(r)證實log(fa/fb)=mlog(D)-mlog(Dm),其中D是劑量，Dm是50%效果所需要的劑量，fa是受劑量影響的分數(shù)，fU是未受影響的分數(shù)，并且m是劑量效應曲線的S形的系數(shù)。對于每個聯(lián)合，使用非常數(shù)比率聯(lián)合。結(jié)果Aplidine+Lenalidomide(Revlimid㊣)+地塞米松的聯(lián)合將地塞米松加入Aplidine+Lenalidomide的聯(lián)合在敏感性細胞系(MMIS)中測試的所有聯(lián)合中都顯示重要的協(xié)同作用(圖80)。在圖80中，將Aplidine劑量以nM單位表示，將Lenalidomide劑量以單位表示并且將地塞米松劑量以nM單位表示。Aplidine+硼替佐米+地塞米松的聯(lián)合將地塞米松加入Aplidine與硼替佐米的聯(lián)合導致一些具有明顯協(xié)同作用的趨勢的劑量(圖81)。在圖81中，將Aplidine劑量以nM單位表示,硼替佐米劑量以nM單位表示和地塞米松劑量以nM單位表示。Aplidine+硼替佐米+Lenalidomide(Revlimid㊣)的聯(lián)合將硼替佐米加入Aplidine與免疫調(diào)節(jié)劑如Lenalidomide的聯(lián)合在MM1S中明顯增加其抗腫瘤作用，其中CI在協(xié)同作用范圍內(nèi)(圖82)。在圖82中，Aplidine劑量以nM單位表示，硼替佐米劑量以nM單位表示和Lenalidomide齊U量以|iM單4立表示。Aplidine+沙利度胺+地塞米松的聯(lián)合如可以在圖83中觀察到的，該聯(lián)合在三重聯(lián)合中顯示明顯的協(xié)同作用。在圖83中，Aplidine劑量以nM單位表示，沙利度胺劑量以單位表示和地塞米松劑量以nM單位表示。Aplidin+美法侖+地塞米松的聯(lián)合該聯(lián)合也顯示明顯的協(xié)同作用范圍，主要與高劑量的藥物相關(guān)(圖84)。在圖84中，Aplidine劑量以nM單位表示，美法侖劑量以單位表示和地塞米松劑量以nM單位表示。Aplidin+美法侖+硼替佐米的聯(lián)合當使用高劑量時，該聯(lián)合導致在協(xié)同作用范圍內(nèi)的CI(圖85)。在圖85中，Aplidine劑量以nM單位表示，美法侖劑量以單位表示和硼替佐米劑量以nM單位表示?？梢詫㈥P(guān)于Aplidine的這些發(fā)現(xiàn)延伸到aplidine類似物，衍生物和相關(guān)化合物。例如，本發(fā)明提供化合物如WO0202596的那些與抗癌藥物的聯(lián)合，所述抗癌藥物優(yōu)選地紫杉斷Taxof)，多柔比星，順鈾，三氧化二石申，5-氟尿嘧啶(5-FU),阿糖胞苷(AraC)，卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38),依托泊苷(VP16),美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米,erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide(Revlimid),白介素-2(IL-2)，干擾素-a2(INF-a)，達卡巴嗪(DTIC),貝伐單抗(Avastir^),伊達比星，沙利度胺,和利妥昔單抗?？梢杂糜谌〈鶤plidine本身的aplidine類似物的實例包括在WO0202596中給出的優(yōu)選化合物，特別地我們將關(guān)于優(yōu)選化合物的討論和在WO0202596中給出的相關(guān)方面放入本專利申請說明書中。更優(yōu)選地，所述類似物在結(jié)構(gòu)上接近Aplidine，通常在一個氨基酸或末端側(cè)鏈上不同于Aplidine?？梢詫⒉煌陌被嶂糜诜肿拥沫h(huán)狀部分或側(cè)鏈中。這類化合物的許多實例在WO0202596中給出，并且它們是用在本發(fā)明中的候選物。權(quán)利要求1.Aplidine或aplidine類似物在制備藥物中的應用，所述藥物通過應用Aplidine或aplidine類似物與另一種藥物的聯(lián)合治療來治療癌癥。2.根據(jù)權(quán)利要求1的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述另一種藥物有效治療選自下列各項的癌癥肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌,腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，和淋巴瘤。3.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述Aplidine或aplidine類似物和另一種藥物形成同一組合物的部分。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述Aplidine或aplidine類似物和另一種藥物作為單獨的組分提供以用于在同時或在不同時間給藥。5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述另一種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib，曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2,干擾素-a2，達卡巴嗉，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述Aplidine或aplidine類似物是Aplidine。7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中施用第三種藥物。8.根據(jù)權(quán)利要求7的Aplidine或aplidine類似物的應用，其中所述第二和第三種藥物選自由下列各項組成的組:紫杉醇，多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib，曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2,干擾素-cx2,達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。9.一種治療癌癥的方法，其包括向需要所述治療的患者施用治療有效量的Aplidine或aplidine類似物和治療有效量的有效治療癌癥的另一種藥物。10.根據(jù)權(quán)利要求9治療癌癥的方法，其中待治療的癌癥選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，和淋巴瘤。11.根據(jù)權(quán)利要求9或IO治療癌癥的方法，其中所述另一種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉑，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶,阿糖胞苷，卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib，曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2，干擾素-a2,達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。12.—種增加有效治療癌癥的藥物的治療功效的方法，所述方法包括向需要其的患者施用一定量的Aplidine或aplidine類似物。13.根據(jù)權(quán)利要求12增加有效治療癌癥的藥物的治療功效的方法，其中待治療的癌癥選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，和淋巴瘤。14.根據(jù)權(quán)利要求12或13增加有效治療癌癥的藥物的治療功效的方法，其中所述藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉑，三氧化二砷,5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉑,7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷,美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenaHdomide,白介素-2,干擾素-a2，達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。15.根據(jù)權(quán)利要求9-14任一項的方法，其中所述Aplidine或aplidine類似物和另一種藥物形成同一組合物的部分。16.根據(jù)權(quán)利要求9-14任一項的方法，其中所述Aplidine或aplidine類似物和另一種藥物作為單獨的組分提供以用于在同時或在不同時間給藥。17.根據(jù)權(quán)利要求9-16任一項的方法，其中所述Aplidine或aplidine類似物是Aplidine。18.根據(jù)權(quán)利要求9或17任一項的方法，其中給藥治療有效量的第三種藥物。19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述第二種和第三種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉬，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉑，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2,干擾素-a2,達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。20.—種用于治療或預防癌癥的試劑盒，其包括Aplidine或aplidine類似物的劑型，有效治療癌癥的另一種藥物的劑型和用于聯(lián)合使用每種作用物治療或預防癌癥的說明書。21.根據(jù)權(quán)利要求20的試劑盒，其中所述試劑盒用于治療或預防選自下列各項的癌癥肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，和淋巴瘤。22.根據(jù)權(quán)利要求20或21的試劑盒，其中另一種藥物選自由下列各項組成的組:紫杉醇，多柔比星，順鉑，三氧化二砷,5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide，白介素-2，干擾素-a2,達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。23.根據(jù)權(quán)利要求20或21的試劑盒，其另外包含有效治療癌癥的第三種藥物的劑型。24.根據(jù)權(quán)利要求23的試劑盒，其中所述第二和第三種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉬，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，卡鉬，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2,干擾素-a2，達卡巴嗪，貝伐'單抗，伊達比星，沙利度胺,和利妥昔單抗。25.—種藥物組合物，其包含Aplidine或aplidine類似物以及有效治療癌癥的另一種藥物。26.根據(jù)權(quán)利要求25的藥物組合物，其中所述其它的藥物有效治療選自肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，和淋巴瘤的癌癥。27.根據(jù)權(quán)利要求25或26的藥物組合物，其中所述另一種藥物選自由下列各項組成的組紫杉醇，多柔比星，順鉬，三氧化二砷，5-氟尿嘧啶,阿糖胞苷，卡鈾，7-乙基-10-羥基喜樹堿，依托泊苷，美法侖，地塞米松，環(huán)磷酰胺，硼替佐米，erlotinib,曲妥單抗，lenalidomide,白介素-2,干擾素-a2,達卡巴嗪，貝伐單抗，伊達比星，沙利度胺，和利妥昔單抗。全文摘要本發(fā)明涉及aplidine或aplidine類似物與其它抗腫瘤藥劑的聯(lián)合及這些聯(lián)合在治療癌癥中的應用，特別是在治療肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，腎癌，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，白血病和淋巴瘤中的應用。文檔編號A61K31/00GK101389347SQ200780006866公開日2009年3月18日申請日期2007年2月28日優(yōu)先權(quán)日2006年2月28日發(fā)明者多倫·萊帕赫,巴勃羅·曼紐爾·阿維萊斯·馬里亞諾,格林·托馬斯·費爾克洛思,赫蘇斯·圣·米格爾·伊斯基耶多,阿塔納西奧·潘迭利亞申請人:法馬馬有限公司