專利名稱：：抗體配制品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及穩(wěn)定抗體的配制品和方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定傾向于在鉸鏈區(qū)發(fā)生非酶裂解(non-enzymaticcleavage)的抗體的配制品和方法。更特別地，本發(fā)明涉及含有緩沖液和凍干保護(hù)劑(lyoprotectant)的傾向于在鉸鏈區(qū)發(fā)生非酶裂解的抗體的配制品。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定抗VEGFR抗體的方法和配制品。
背景技術(shù)：
：液體配制品中的抗體對各種化學(xué)和物理學(xué)過程敏感，這些過程包括水解、聚集、氧化、脫酰胺和在鉸鏈區(qū)片段化(fragmentatkm)。這種片段化是非酶解過程，可以是溫度和/或pH依賴性的，并典型地在重鏈鉸鏈區(qū)靠近木瓜蛋白酶裂解位點處發(fā)生。這些過程可以通過降低功能抗體的利用度和通過降低或消除它們的抗原結(jié)合特征而改變或消除治療性抗體的臨床效果。本發(fā)明滿足了對單克隆抗體、特別是那些傾向于在鉸鏈區(qū)發(fā)生非酶裂解的單克隆抗體的穩(wěn)定配制品的需求，并且進(jìn)一步提供了凍干這些抗體的方法和配制品。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于穩(wěn)定抗體制備物的配制品和方法。另外，本發(fā)明還涉及用于穩(wěn)定傾向于發(fā)生非酶裂解特別是在鉸鏈區(qū)發(fā)生非酶裂解的抗體的配制品和方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定的配制品，其包含傾向于發(fā)生非酶裂解的抗體和緩沖液。所述配制品還可以含有一或多種穩(wěn)定劑。另外，所述配制品可含有表面活性劑。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了能凍干的配制品并且可以含有凍干保護(hù)劑。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了凍干的配制品，其包含傾向于發(fā)生非酶裂解的抗體、組氨酸緩沖液和凍干保護(hù)性糖(lyoprotectingsugar)。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定傾向于發(fā)生非酶裂解的抗體的方法，包括在組氨酸緩沖液和凍干保護(hù)性糖中進(jìn)行配制。另外，配制品可含有表面活性劑。配制品可以被凍干以在加工和儲存過程中穩(wěn)定抗體，然后配制品可以重配以用于藥物學(xué)給藥。在另一個實施方案中，重配的抗體可以多劑量形式使用。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定的凍干的配制品，其包含抗VEGFR抗體、緩沖液和凍干保護(hù)劑。所述配制品還可含有一或多種穩(wěn)定劑。另外，所述配制品可含有表面活性劑。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定的凍干的配制品，其包含抗VEGFR2抗體、緩沖液和凍干保護(hù)劑。所述配制品還可含有一或多種穩(wěn)定劑。另外，所述配制品可含有表面活性劑。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了凍干的配制品，其包含抗VEGFR2抗體、組氨酸緩沖液和凍干保護(hù)性糖。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定抗VEGFR抗體的方法，包括凍干抗VEGFR抗體的水性配制品。所述配制品可以被凍干以在加工和儲存過程中穩(wěn)定抗VEGFR抗體，然后所述配制品可以重配以用于藥物學(xué)給藥。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了通過提供本發(fā)明的組合物而抑制VEGFR活性的方法。本發(fā)明還提供了抑制哺乳動物特別是人中VEGF途徑的方法，包括給予本發(fā)明的組合物。本發(fā)明還提供了治療VEGFR依賴性病癥的方法，包括給予本發(fā)明的組合物。附圖簡述圖1顯示了在4(TC保溫3個月后，在PBS中的IMC-1121B抗體的大小排阻層析-高效液相層析(SEC-HPLC)的層析譜。圖2顯示了IMC-1121B的重鏈的氨基酸序列，以及非酶裂解發(fā)生的位點。圖3顯示了降解的IMC-1121B及其大小排阻級分的SDS-PAGE。圖4顯示了IMC-1121B的DSC分析的回歸圖。圖5顯示了攪拌研究(agitationstudy)的預(yù)測圖譜(predictionprofiler)。圖6顯示了在4CTC時IMC-1121B的實時加速溫度穩(wěn)定性的預(yù)測圖譜。圖7顯示了在-2(TC時IMC-1121B的實時加速溫度穩(wěn)定性的預(yù)測圖譜。圖8是在PBS和.OmM組氨酸緩沖液(pH6.0)中于4(TC和室溫保溫150天后IMC-1121B的SEC-HPLC層析譜。圖9顯示了作為在4CrC和室溫的保溫時間的函數(shù)，在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1121B單體百分比的變化。圖10顯示了作為在4(TC和室溫的保溫時間的函數(shù)，在PBS禾ll10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1J21B聚集體百分比的變化。圖11顯示了作為在4(TC和室溫的保溫時間的函數(shù)，在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1121B的降解物(degradent)百分比的變化。圖12是在室溫和4(TC保溫30和150天后IMC-1121B的IEC-HPLC層析圖13顯示了在室溫和4(TC保溫150天后在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1121B的還原和非還原SDS-PAGE。圖14顯示了在室溫和4(TC保溫150天后IMC-1121B的等電聚焦。圖15顯示了IMC-1121B凍干過程的凍干循環(huán)。圖16顯示了在4(TC和5(TC保溫100天后，IMC-1121B凍干產(chǎn)物中所剩余的單體百分比。圖17顯示了作為在5(TC保溫時間的函數(shù)，凍干和溶液配制品中所剩余的IMC-1121B單體的百分比。圖18顯示了作為在5CTC保溫時間的函數(shù)，凍干和溶液配制品中的IMC-1121B聚集體的百分比。圖19顯示了作為在5(TC保溫時間的函數(shù)，凍干和溶液配制品中的8IMC-1121B降解物的百分比。圖20顯示了作為在4(TC保溫時間的函數(shù)，凍干和溶液配制品中所剩余的IMC-1121B單體的百分比。圖21顯示了作為在4(TC保溫時間的函數(shù)，凍千和溶液配制品中的IMC-1121B聚集體的百分比。圖22顯示了作為在4(TC保溫時間的函數(shù)，凍干和溶液配制品中的IMC-1121B降解物的百分比。圖23顯示了在5(TC保溫后凍干和溶液配制品中所剩余的IMC-1121B單體的百分比。圖24顯示了在5(TC保溫后凍干和溶液配制品中的IMC-1121B聚集體的百分比。圖25顯示了在5(TC保溫后凍干和溶液配制品中的IMC-1121B降解物的百分比。圖26顯示了在4(TC保溫后凍干和溶液配制品中所剩余的IMC-1121B單體的百分比。圖27顯示了在4(TC保溫的溶液和凍干配制品中的IMC-1121B聚集體的百分比。圖28顯示了在4(TC保溫后凍干和溶液配制品中的IMC-1121B降解物的百分比。圖29是在4CTC保溫3個月后溶液和凍干配制品中的IMC-1121B的IEC-HPLC層析譜。圖30顯示了在室溫保溫后凍干和溶液配制品中所剩余的IMC-1121B單體的百分比。圖31顯示了在室溫保溫后凍干和溶液配制品中的IMC-1121B聚集體的百分比。圖32顯示了在室溫保溫后凍干和溶液配制品中的IMC-1121B降解物的百分比。200780009201.6圖33是在室溫保溫3個月后溶液和凍干配制品中的IMC-1121B的IEC-HPLC層析譜。圖34顯示了在室溫、4(TC和5(TC保溫3個月后溶液和凍干配制品中的IMC-1121B的還原SDS-PAGE。圖35顯示了在室溫、4(TC和5(TC保溫3個月后溶液和凍干配制品中的IMC-1121B的非還原SDS-PAGE。發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了用于凍干傾向于非酶裂解的抗體包括其功能片段的配制品。所述配制品可包含另外的成分如穩(wěn)定劑、表面活性劑、還原劑、載體、防腐劑、氨基酸和螯合劑。本發(fā)明還提供了穩(wěn)定抗體組合物的方法，包括在凍干保護(hù)劑的存在下凍干抗體的水性配制品。所述配制品可以被凍干以在加工和儲存過程中穩(wěn)定抗體，然后可在藥物學(xué)給藥前重配。優(yōu)選地，從生產(chǎn)到給藥抗體基本上保留其物理學(xué)和化學(xué)穩(wěn)定性和完整性。根據(jù)本發(fā)明，各種配制品組分可以適于增強穩(wěn)定性，包括緩沖液、表面活性劑、糖、糖醇、糖衍生物和氨基酸。根據(jù)本發(fā)明，各種配制品性質(zhì)可適于增強穩(wěn)定性，包括pH和配制品組分的濃度。根據(jù)本發(fā)明，可用緩沖液維持配制品的pH。緩沖液使由于外部差異導(dǎo)致的pH波動最小化。本發(fā)明的配制品含有一或多種緩沖液以提供合適pH的配制品，優(yōu)選地約5.5至約6.5，最優(yōu)選約6.0。舉例的緩沖液通常包括但非限于有機(jī)緩沖液，如組氨酸、擰檬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽和乙酸鹽。在一個實施方案中，緩沖液濃度為約5mM至約50mM。在另一個實施方案中，緩沖液濃度為約10mM。本發(fā)明的配制品可含有一或多種穩(wěn)定劑，其可有助于防止抗體的聚焦和降解。合適的穩(wěn)定劑包括但非限于多羥基糖、糖醇和氨基酸。優(yōu)選的穩(wěn)定劑包括但非限于天冬氨酸、乳糖酸、甘氨酸、海藻糖、甘露醇和蔗糖。本發(fā)明的配制品可含有一或多種表面活性劑?？贵w溶液在空氣-水界面有高表面張力。為了降低這個表面張力，抗體傾向于在空氣-水界面聚集。表面活性劑使在空氣-水界面的抗體聚集最小化，從而幫助保持溶液中抗體的生物學(xué)活性。例如，加入0.01%吐溫80可降低溶液中的抗體聚集。當(dāng)配制品被凍干時，表面活性劑還可降低在重配的配制品中的顆粒形成。在本發(fā)明的凍干的配制品中，表面活性劑可被加入到一或多種凍干前的配制品、凍干的配制品和重配的配制品中，但是優(yōu)選加入到凍干前的配制品中。例如，可在凍干前將0.005%吐溫80加入到抗體溶液中。表面活性劑包括但非限于吐溫20,吐溫80,Pluronic.F-68和膽汁鹽。在一個實施方案中，表面活性劑濃度為大約0.001%至大約1.0%。凍干過程可產(chǎn)生各種應(yīng)激，可導(dǎo)致蛋白質(zhì)或多肽的變性。這些應(yīng)激包括溫度降低、冰晶形成、離子強度增加、pH變化、相分離、水合層除去和濃度變化。對冷凍和/或干燥過程的應(yīng)激敏感的抗體可通過加入一或多種凍干保護(hù)劑而穩(wěn)定化。凍干保護(hù)劑是一種保護(hù)抗凍干相關(guān)應(yīng)激的化合物。因此作為一類物質(zhì)的凍干保護(hù)劑包括冷凍保護(hù)劑(cryoprotectants)，其僅在凍干過程提供保護(hù)。一或多種凍干保護(hù)劑可被用于保護(hù)抗凍干相關(guān)應(yīng)激，并可以是例如糖如蔗糖或海藻糖；氨基酸如谷氨酸單鈉或組氨酸；甲基胺如甜菜堿；易溶(lyotropic)鹽如硫酸鎂；多元醇如三羥基或更高級糖醇，例如甘油(gjycerin)、赤蘚糖醇、甘油(glycerol)、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露醇；丙二醇；聚乙二醇；Pkironics;及其組合。優(yōu)選的凍干保護(hù)劑的例子包括但非限于上述穩(wěn)定劑和表面活性劑。本發(fā)明提供了穩(wěn)定的配制品，其可以通過凍干過程制備。凍干是一個穩(wěn)定化過程，其中物質(zhì)首先被冷凍，然后先通過升華降低溶劑數(shù)量(初級干燥過程)，然后通過脫附作用降低溶劑數(shù)量(二級干燥過程)，直到溶液數(shù)量為不再支持生物學(xué)活性或化學(xué)反應(yīng)的值。在凍干配制品中，與溶液相關(guān)的水解、脫酰胺、氧化和片段化反應(yīng)可以被避免或顯著減慢。凍干的配制品還可以避免由于運輸過程中的短期溫度波動導(dǎo)致的損害并且使得可以室溫儲存。本發(fā)明的配制品還可以通過本領(lǐng)域已知的其它方法干燥，如噴霧干燥和鼓泡干燥(bubbledrying)。除非特別指明，本發(fā)明的配制品是根據(jù)它們在凍干前配制品中測量的組分濃度進(jìn)行描述。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定傾向于非酶降解的抗體的方法和配制品，所述非酶降解可發(fā)生在鉸鏈區(qū)?？墒箍贵w傾向于非酶裂解的因素包括氨基酸序列、構(gòu)象和翻譯后加工?？贵w經(jīng)歷非酶降解的確定可通過將抗體在水溶液中保溫而完成。典型地，保溫在用以縮短研究時間的升高的溫度下進(jìn)行。例如，在4(TC或5(TC保溫3個月。在保溫后，降解產(chǎn)物可用大小排阻層析-高效液相層析(SEC-HPLC)進(jìn)行分析。本領(lǐng)域己知的各種分析技術(shù)可以測量重配的凍干配制品的抗體穩(wěn)定性。這些技術(shù)包括例如(i)使用確定主熔融溫度(Tm)的差示掃描量熱法(DSC)確定熱穩(wěn)定性；(ii)使用在室溫的受控攪拌確定機(jī)械穩(wěn)定性；(iii)確定在大約-2(TC、大約4。C、室溫(大約23。C-27。C)、大約40。C和大約5(TC的溫度下的實時等溫加速溫度穩(wěn)定性；(iv)通過監(jiān)測在大約350nm的吸光度確定溶液濁度，以及O)用SEC-HPLC確定單體、聚集體和降解物的量。穩(wěn)定性可以在選定的溫度選定的時間期間測量。在一個實施方案中，凍干的配制品在重配時提供了高濃度的抗體。在另一個實施方案中，穩(wěn)定的凍干配制品可用液體重配以形成溶液，該溶液中抗體濃度比凍干前配制品中的抗體濃度高約l-10倍。例如，在一個實施方案中，凍干的配制品用lmL或更少的水重配以獲得無顆粒的重配配制品，其抗體濃度為大約50mg/mL至大約200mg/mL。天然存在的抗體典型地具有兩個相同的重鏈和兩個相同的輕鏈，每一輕鏈通過鏈間二硫鍵與重鏈共價連接。多個二硫鍵進(jìn)一步將兩個重鏈進(jìn)一步互相連接起來。各個鏈可以折疊成具有相似大小(110-125個氨基酸)和結(jié)構(gòu)但不同功能的結(jié)構(gòu)域。輕鏈可包含一個可變區(qū)(VJ和/或一個恒定區(qū)(QJ。重鏈也可包含一個可変區(qū)(Vh)和/或3或4個恒定區(qū)(Ch1、Ch2、Ch3和CH4)，這取決于抗體的類別或同種型。在人類中，同種型是IgA，IgD,IgE,IgG和IgM，其中IgA和IgG進(jìn)一步分成亞類或亞型(IgAw和IgGw)。通常，可變區(qū)在一個抗體至另一個抗體間顯示相當(dāng)大的氨基酸序列變異性，特別是在抗原結(jié)合位點。在每一Vl和VH中發(fā)現(xiàn)有3個區(qū)域，稱為超變區(qū)或互補決定區(qū)(CDR)，它們被稱為構(gòu)架可變區(qū)的變異性較低的區(qū)域支持。由Vl和VH結(jié)構(gòu)域組成的抗體部分被稱為Fv(可變區(qū)片段)并組成了抗原結(jié)合'位點。單鏈Fv(scFv)是一種抗體片段，其在一個多肽鏈上含有VJ吉構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域，其中一個結(jié)構(gòu)域的N末端與另一個結(jié)構(gòu)域的C末端通過柔性接頭連接(參見例如U.S.Pat.No.4，946，778(Ladneretal.);WO88/09344,(Hustonetal.))。WO92/01047(McCaffertyetal.)描述了在可溶的重組遺傳展示包裝如噬菌體的表面上展示的scFv片段。單鏈抗體缺失其所來源的完整抗體的一些或全部恒定區(qū)。因此，它們能克服與使用完整抗體相關(guān)的一些問題。例如，單鏈抗體趨向于沒有某些不希望的重鏈恒定區(qū)與其它生物學(xué)分子之間的相互作用。另外，單鏈抗體顯著小于完整抗體并可以具有比完整抗體更高的滲透性，使得單鏈抗體更有效地定位和結(jié)合耙抗原結(jié)合位點。另外，單鏈抗體的相對較小的大小使得它們在受體中比完整抗體更不易引起不希望的免疫應(yīng)答。多個單鏈抗體，其中每個單鏈具有由第一個肽接頭共價連接的一個VH和一個VL結(jié)構(gòu)域，可以通過至少一個或多個肽接頭共價連接以形成多價單鏈抗體，這些抗體可以是單特異性的或多特異性的。多價單鏈抗體的每條鏈包括可變輕鏈片段和可變重鏈片段，并且通過肽接頭與至少一條其它鏈連接。所述肽接頭由至少15個氨基酸殘基組成。氨基酸殘基的最大數(shù)量是約100個。兩個單鏈抗體可以組合形成二價抗體，也已知為二價二聚體。二價抗體有兩條鏈和兩個結(jié)合位點，并且可以是單特異性的或雙特異性的。二價抗體的每條鏈包括與VL結(jié)構(gòu)域相連的VH結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域通過接頭連接，接頭足夠短從而防止同一條鏈上的結(jié)構(gòu)域配對，由此驅(qū)動不同鏈上的互補結(jié)構(gòu)域配對以產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點。三個單鏈抗體可以被組合以形成三價抗體，也已知為三價三聚體。三價抗體是用V^或VH結(jié)構(gòu)域的氨基末端直接與Vl或VH結(jié)構(gòu)域的羧基末端融合而構(gòu)建的，即無需任何接頭序列。三價抗體具有三個Fv頭(head)，多肽以環(huán)13狀頭至尾方式排列。三價抗體的一種可能構(gòu)象是平面的，三個結(jié)合位點位于一個平面中，互相呈120度角。三價抗體可以是單特異性的、雙特異性的或三特異性的。Fab(抗原結(jié)合片段)是指由VlClVh和Ch1結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段。木瓜蛋白酶消化后產(chǎn)生的那些片段被簡單稱作Fab并且不保留重鏈鉸鏈區(qū)。在胰蛋白酶消化后，產(chǎn)生了保留重鏈鉸鏈的各種Fab。鏈間二硫鍵保持完整的那些二價片段被稱作F(ab')2,而當(dāng)二硫鍵未保留時得到了單價Fab'。F(ab')2片段具有比單價Fab片段更高的對抗原的親合力。Fc(結(jié)晶片段)是包含配對的重鏈恒定區(qū)的抗體部分或片段。在IgG抗體中，例如，F(xiàn)c包含CH2和CH3結(jié)構(gòu)域。IgA或IgM抗體的Fc進(jìn)一步包含CH4結(jié)構(gòu)域。Fc與Fc受體結(jié)合、補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的激活以及抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)相關(guān)。對于是多個IgG樣蛋白質(zhì)的復(fù)合物的抗體如IgA和IgM，復(fù)合物形成需要Fc恒定區(qū)。最后，鉸鏈區(qū)分開了抗體的Fab和Fc部分，提供了Fab相對于彼此以及相對于Fc的活動性，并且包括多個二硫鍵以共價連接兩個重鏈。因此，本發(fā)明的抗體包括但非限于天然存在的抗體、二價片段如(Fab')2、單價片段如Fab、單鏈抗體、單鏈Fv(scFv)、單域抗體、多價單鏈抗體、二價抗體、三價抗體等，它們特異地與抗原結(jié)合。本發(fā)明的抗體或其片段例如可以是單特異性的或雙特異性的。雙特異性抗體(BsAbs)是具有兩種不同的抗原結(jié)合特異性或位點的抗體。當(dāng)抗體具有一種以上特異性時，被識別的表位可以與單一抗原或一個以上抗原相關(guān)。因此，本發(fā)明提供了結(jié)合兩種不同抗原的雙特異性抗體或其片段。抗體或其平的特異性可以基于親和性和/或親合力確定。親和性由抗原與抗體解離的平衡常數(shù)(K》代表，其測量抗原決定簇和抗體結(jié)合位點之間的結(jié)合強度。親合力是抗體與其抗原之間的結(jié)合強度的指標(biāo)。親合力與表位與抗體上的其抗原結(jié)合位點之間的親和性相關(guān)，也與抗體效價有關(guān)，抗體效價是指特定表位的抗原結(jié)合位點數(shù)?？贵w典型地以10-5-10—"升/mol的解離常數(shù)(K》進(jìn)行結(jié)合。低于10—"升/mol的I"通常被認(rèn)為表明非特異性結(jié)合。Kj直越低，抗原決定簇和抗體結(jié)合位點之間的結(jié)合強度越強。如本文所用，"抗體"和"抗體片段"包括保留對特異抗原的特異性的修飾。這些修飾包括但非限于與效應(yīng)分子如化療劑(例如順鉑、紫杉醇、阿霉素)或細(xì)胞毒素(例如蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)有機(jī)化療劑)的綴合。抗體可以通過與可檢測的報道物部分綴合而修飾。還包括在內(nèi)的是具有影響非結(jié)合特征如半衰期的改變的抗體(例如聚乙二醇化)。蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)物質(zhì)可以通過本領(lǐng)域己知方法被綴合于抗體。綴合方法包括直接連接，通過共價附著的接頭連接以及特異性結(jié)合配對成員(例如抗生物素蛋白-生物素)。這些方法包括例如Greenfieldetal.,CancerResearch50，6600-6607(19卯)所述關(guān)于阿霉素的綴合，以及如Arnonetal.,Adv.Exp.Med.Biol.303,79-90(1991)和Kiselevaetal.，Mol.Biol.(USSR)25,508-514(1991)所述關(guān)于鉑化合物的綴合。本發(fā)明的抗體進(jìn)一步包括那些結(jié)合特征已通過直接突變、親和成熟方法、噬菌體展示或鏈改組而改良的抗體。親和性和特異性可以通過突變CDR并篩選具有希望的特征的抗原結(jié)合位點而修飾或改良(參見例如Yangetal.,J.Mol.Biol.,254:392-403(1995))。CDR以各種方式被突變。一種方式是隨機(jī)化各個殘基或殘基組合以便在相同抗原結(jié)合位點群中所有20個氨基酸在特定的位置被發(fā)現(xiàn)?；蛘撸ㄟ^易錯PCR方法在一系列CDR殘基中誘導(dǎo)突變(參見例如，Hawkinsetal.,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992))。例如，含有重鏈和輕鏈可變區(qū)基因的噬菌體展示載體抗原在大腸桿菌突變子(mutator)菌株中繁殖(參見例如，Lowetal.，J.Mol.Biol.,250:359-368(1996))。這些誘變方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多方法的例子。本發(fā)明的抗體的每一結(jié)構(gòu)域可以是完整的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(例如重鏈或輕鏈可變區(qū)或恒定區(qū))，或者其抗原是天然存在的結(jié)構(gòu)域的功能等價物或突變體或衍生物，或者是例如用如WO93/11236(Griffithsetal.)所述的技術(shù)體外構(gòu)建的合成結(jié)構(gòu)域。例如，可以將缺失至少一個氨基酸的相應(yīng)于抗體可變區(qū)的結(jié)構(gòu)域連接在一起?？贵w的重要區(qū)別特征是存在抗原結(jié)合位點。術(shù)語"可變重鏈和輕鏈片段"不應(yīng)被解釋為排除不具有對特異性的實質(zhì)性作用的變體。本發(fā)明的抗體和抗體片段抗原例如得自天然存在的抗體或Fab或scFv噬菌體展示文庫。應(yīng)理解為了從包含Vh和VL結(jié)構(gòu)域的抗體制備單域抗體，在CDR之外一些氨基酸取代可以是增強結(jié)合、表達(dá)或溶解性所希望的。例如，希望的是修飾會包埋在V『VL界面中的氨基酸殘基。另外，本發(fā)明的抗體和抗體片段可以使用產(chǎn)生人免疫球蛋白Y重鏈和k輕鏈的轉(zhuǎn)基因小鼠(例如來自Medarex,SanJose,Calif.的KM小鼠)通過標(biāo)準(zhǔn)雜交瘤技術(shù)獲得(Harlow&Lane,ed.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbor,211-213(1998)，其引入本文作參考)。在一個優(yōu)選的實施方案中，產(chǎn)生人抗體的實質(zhì)部分的基因組被插入到小鼠基因組中，并使得其是產(chǎn)生內(nèi)源鼠抗體缺陷的。這種顯示可以用在完全弗氏佐劑中的部分或全部靶分子皮下(s.c.)免疫。本發(fā)明還提供了治療方法，包括給予重配的配制品。重配的配制品通過例如用lmL水重配本發(fā)明的凍干配制品而制備。重配時間優(yōu)選少于l分鐘。濃縮的重配配制品使得給藥靈活。例如，重配配制品可以以稀釋形式靜脈內(nèi)給藥，或者其可以以更濃縮的形式注射給藥。本發(fā)明的濃縮的重配配制品可以被稀釋至符合特定對象和/或特定給藥途徑的濃度。因此，本發(fā)明提供了治療方法，包括將治療有效量的抗體給予哺乳動物特別是人。本文所用術(shù)語"給予"是指將本發(fā)明的抗體組合物通過可以達(dá)到所要結(jié)果的任何方法輸送給哺乳動物。重配配制品可以例如靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥，在一個實施方案中，濃縮的重配配制品通過注射給藥。本發(fā)明的抗體優(yōu)選是人抗體。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物可以用于治療腫瘤疾?。话▽嶓w腫瘤和非實體腫瘤，以及用于治療過度增生疾病。治療有效量是指本發(fā)明的抗體當(dāng)被給予哺乳動物時有效產(chǎn)生希望的治療效果的量，如降低或中和VEGFR活性、抑制腫瘤生長或治療非癌過度增生疾病。給予如上所述抗體可以與給予其它抗體或任何常規(guī)治療劑如抗腫瘤劑聯(lián)合0在本發(fā)明的一個實施方案中，所述組合物可以與一或多種抗腫瘤劑聯(lián)合給藥?？梢允褂萌魏魏线m的抗腫瘤劑.如化療劑、輻射或其組合?？鼓[瘤劑可以是烷基化試劑或抗代謝物。垸基化試劑的例子包括但非限于順鉑、環(huán)磷酰胺、美法侖(melphalan)和dacarbazine。抗代謝物的例子包括但非限于阿霉素、道諾霉素、紫杉醇、irinotecan(CPT-1l)和topotecan。當(dāng)抗腫瘤劑是輻射時，輻射源可以是對于被治療患者而言外部的(外部光束輻射治療-EBRT)或內(nèi)部的(近程治療-BT)。給予的抗腫瘤劑的劑量取決于各種因素，包括例如，藥物類型、被治療腫瘤的類型和嚴(yán)重性以及給藥途徑。但是應(yīng)強調(diào)的是本發(fā)明不限于任何特定劑量。本發(fā)明的抗體可以是但非限于針對VEGFR，IGF-IR，EGFR禾口PDGFR的抗體。.在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段是特異于VEGFR的。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了雙特異性抗體或其片段，其結(jié)合兩種不同的抗原，其中至少一種特異性針對VEGFR。VEGFR是指人VEGF受體家族，包括VEGFR-1(FLT1),VEGFR-2(KDR),VEGFR-3(FLT4)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是血管發(fā)生的關(guān)鍵介導(dǎo)物。在健康人中，VEGF在發(fā)育胚胎、傷口愈合和女性生殖周期中促進(jìn)血管發(fā)生。但是當(dāng)其被癌基因表達(dá)、生長因子和低氧上調(diào)時VEGF介導(dǎo)腫瘤中的血管發(fā)生。血管發(fā)生通過營養(yǎng)素和氧的有限擴(kuò)散對于腫瘤生長過一定大小是關(guān)鍵的。因此，在一個實施方案中，抗VEGFR抗體結(jié)合VEGFR并阻斷配體如VEGF的結(jié)合。這一阻斷可通過干擾VEGFR激活的作用而導(dǎo)致腫瘤生長抑制，其包括腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞修復(fù)和血管發(fā)生的抑制。在一個實施方案中，抗體是抗VEGFR-2(KDR)抗體IMC-1121B(IgGl)，其在WO03/07840(PCT/US03/06459)中揭示。IMC-1121B的VH的核苷酸和氨基酸序列分別見SEQIDNO1和2。IMC-1121B的VLJ勺核苷酸和氨基酸序列本發(fā)明的抗體或其片段的等價物也包括具有與本文提供的全長抗VEGFR抗體的可變區(qū)或超變區(qū)的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列的多肽。本文定義的基本上相同的氨基酸序列是具有至少約70%、優(yōu)選至少約80%、更優(yōu)選至少90%同源性的序列，所述同源性由PearsonandLipman(Proc.Natl.Acad.Sci.USA85,2444-8(1988))的FASTA檢索方法確定。實施例下述實施例進(jìn)一步例證了本發(fā)明，但不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明范圍。常規(guī)方法如蛋白質(zhì)分析中采用的方法的詳細(xì)描述可以得自許多出版物如CurrentProtocolsinImmunology(由JohnWiley&Sons出版)。本文提及的所有參考文獻(xiàn)均全文引入。實施例1抗VEGFR-2抗體IMC-1121B的片段化將在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中的5mg/mLIMC-1121B在4(TC保溫3個月。保溫后，用SEC-HPLC和N末端測序分析降解產(chǎn)物。在PBS中的降解的IMC-1121B的SEC-HPLC層析譜示于圖1。除了聚集體(級分l)和單體峰之外，降解的產(chǎn)物還具有兩個降解物峰(級分2和3)。用級分收集器收集級分用于N末端序列分析。IMC-1121B重鏈的cDNA序列示于圖2。信號序列、可變區(qū)和恒定區(qū)分別用下劃線、雙下劃線和純文字示出。降解樣品和級分2和3的N末端序列分析顯示重鏈片段化的兩個位點(圖2中的灰色高亮文字)。在N末端第156個殘基的位點產(chǎn)生兩個重鏈片段，在還原SDS-PAGE(圖3)上顯示為約40KD和約15KD的條帶。在N末端第220個殘基的鉸鏈區(qū)中的其它片段化位點在還原SDS-PAGE上產(chǎn)生約33KD和約27KD的條帶(圖3)。實施例2緩沖液配制品的優(yōu)化IMC-1121B的凍干配制品以兩個階段開發(fā)。在第一階段，使用實驗設(shè)計方法(DOE)用表1列出的分類因子模擬(fractionalfactorialmodeling)優(yōu)化溶劑18緩沖液。在這一優(yōu)化過程中篩選的因素是緩沖液、pH、鹽、氨基酸、表面活性劑糖和糖衍生物。溶劑優(yōu)化在5mg/mL的1121B濃度進(jìn)行。使用在室溫以300rpm的受控攪拌測試機(jī)械穩(wěn)定性。熱穩(wěn)定性用DSC和加速溫度(acceleratedtemperature)測試。用傳統(tǒng)的單因素輪換(one-factor-at-a-time)方法學(xué)證實了DOE預(yù)測。用線性回歸分析確定結(jié)果的顯著性。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表1實驗(DOE)矩陣設(shè)計差示掃描量熱法(DSC)研究熔融或轉(zhuǎn)變溫度(Tm)用MicroCalVP-DSC測量。蛋白質(zhì)濃度設(shè)定為5mg/mL，溫度斜坡(ramping)是以掃描速度1.5°C/min從5匸至95°C。收集各種配制品(表l)中IMC-1121B的熱熔融曲線。相應(yīng)于主轉(zhuǎn)變峰(50%分子被變性)的熔融溫度擬合成線性回歸模型以估計測試的變量對Tm的作用。模型是統(tǒng)計學(xué)有效的，p=0.0006。顯著的因素(p0.05)是pH和緩沖液類型。圖4示出了隨緩沖液類型和pH的Tm變化的回歸圖。對于組氨酸、檸檬酸鹽和乙酸鹽緩沖液，優(yōu)化的pH大約是6.0，其比pH6.0的磷酸鹽緩沖液優(yōu)越。其它的變量對Tm不具有統(tǒng)計學(xué)顯著作用。攪拌研究將抗體溶液在室溫于平臺搖床上以300rpm攪拌。在20mL玻璃瓶中的5mL濃度為5mg/mL的IMC-1121B在各種配制品中(表l)攪拌直至84小時。溶液濁度、單體百分比、聚集體百分比和降解物百分比如下確定。溶液濁度用Shimatzu1601biospec分光光度計在350nm的吸光度而測量。單體百分比、聚集體百分比和降解物百分比用SEC-HPLC測量，SEC-HPLC在Agilent1100SeriesLC上進(jìn)行，使用TosophBiosepTSK3000柱，以10mM磷酸鈉，0.5MCsCl,pH7.0作為流動相。測試的變量對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用通過用JMP軟件(SASinstitute,NC)擬合成線性回歸模型而估計。預(yù)測圖的實際值(ActualbyPredictedplot)的p值是<0.002。圖5示出了顯著性變量pH、吐溫80,NaCl和時間對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用。在4(TC的實時加速溫度穩(wěn)定性在各種配制品中(表l)的5mg/mL的IMC-1121B在4(TC保溫直至14天。如上所述確定溶液濁度、單體、聚集體和降解物百分比。測試的變量對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用通過將其用JMP軟件擬合成線性回歸模型而估計。預(yù)測圖的實際值的p值是<0.001。圖6示出了顯著性變量對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用。最佳緩沖液是pH6.0的組氨酸。鹽減少了單體并增加了聚集。但是不影響降解。甘氨酸對單體、聚集體或降解物無作用。在-20。C的實時冷凍溫度穩(wěn)定性在各種配制品中(表l)的5mg/mL的IMC-1121B抗體在-2(TC保溫直至16天。如上所述確定溶液濁度、單體、聚集體和降解物百分比。測試的變量對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用通過將其用JMP軟件擬合成線性回歸模型而確定。預(yù)測圖的實際值的p值是<0.001。圖7示出了顯著性變量對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用。最佳pH是6.0。天冬氨酸增加了單體并降低了聚集，對降解的作用可忽略。NaCl和甘氨酸對濁度、單體、聚集體和降解物百分比的作用可忽略。實施例3在PBS禾口10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)配制品中IMC-1121B穩(wěn)定性的對比DOE篩選研究預(yù)測IMC-1121B抗體在10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)配制品中比在PBS中有顯著更好的穩(wěn)定性。在這一研究中，通過各種技術(shù)檢查了以5mg/mL濃度在10mM組氨酸pH6.0和PBS中的IMC-U21B的穩(wěn)定性以證實DOE預(yù)測。差示掃描量熱法(DSC)研究IMC-1121B在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)配制品中的熱穩(wěn)定性根據(jù)上述方法中描述的程序檢查。在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1121B的主轉(zhuǎn)變?nèi)廴跍囟?meltingtemperaturesformaintransition):5)"另ll是70.0禾口76.6°C。在40。C和室溫的實時加速溫度穩(wěn)定性5mg/mL的IMC-1121B在PBS和10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)配制品中在4(TC和室溫(RT)保溫直至150天。保溫后，樣品如下所述用SEC-HPLC，IEC-HPLC,SDS-PAGE和IEF分析。SEC-HPLC分析在4(TC和室溫保溫150天后的在PBS或10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-1121B的SEC-HPLC分析根據(jù)上述程序進(jìn)行。HPLC層析譜如圖8所示。在對照、RT和4(TC樣品中的總聚集體百分比對于PBS分別是0.90,1.49禾Q3.90，對于10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)分別是0.80,0.82禾卩0.75。在對照、RT和4(TC樣品中的總降解物百分比對于PBS分別是1.32,2.56和12.54，對于10mM組氨酸緩沖液pH6.0配制品分別是1.23，2.09和9.00。圖9、10和11分別示出了作為保溫時間的函數(shù)的單體百分比、聚集體百分比和降解物百分比中的變化。在PBS配制品中單體百分比以比在10mM組氨酸(pH6.0)中更快的速度降低，聚集體百分比和降解物百分比以比在10mM組氨酸(pH6.0)中的更快速度增加。10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)提供了用于維持IMC-1121B抗體的優(yōu)越環(huán)境。IEC-HPLC分析在4(TC和室溫保溫30天和150天后的IMC-1121B的21離子交換層析在Agilent1100SeriesLC上使用DionexProPacWCX-10分析柱進(jìn)行。樣品在32分鐘中用從10mM磷酸鹽(pH7.0),20mMNaCl至10mM磷酸鹽(pH7.0),100mMNaCl的線性梯度洗脫。IEC-HPLC層析譜示于圖12.在室溫和40°C保溫導(dǎo)致在兩種配制品中峰向更低的保留時間(即向酸性pH)偏移。但是，偏移在PBS配制品中比在10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)配制品中顯著更大。SDS-PAGE分析在PBS或10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)的IMC-1121B抗體(5mg/mL)在室溫或40。C保溫150天，之后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行還原和非還原SDS-PAGE(4-20%tds-甘氨酸梯度凝膠)。通過條帶密度測量，在PBS中保溫的樣品比在10mM組氨酸(pH6.0)中保溫的樣品具有更大量的降解產(chǎn)物(圖13)。等電聚焦(IEF)分析在RT和4(TC保溫150天后的以5mg/mL在PBS和10mM組氨酸(pH6.0)配制品中的IMC-1121B用IEF分析(pH范圍6.0-10.5)。等電聚焦分析在IsoGd(R)瓊脂糖IEF平板上進(jìn)行，pH范圍6.0-10.5。所得條帶在PBS和組氨酸配制品中向酸性pH遷移。但是PBS配制品的偏移比10mM組氨酸(pH6.0)配制品的偏移更大(圖14)。實施例4凍干配制品篩選在優(yōu)化的第二階段，在固定抗體濃度即在IOmM組氨酸緩沖液(pH6.0)中20mg/mL優(yōu)化填充劑和冷凍保護(hù)劑和凍干保護(hù)劑。測試的添加劑是甘露醇、甘氨酸、蔗糖和海藻糖，如實驗矩陣的設(shè)計所示(表2)。作為對照，分析在具有PBS緩沖液(pH6.0)或10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)的溶液配制品(不凍干)中的5mg/mLIMC-1121B抗體。表2用于凍干配制品篩選的DOE矩陣<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>凍干過程產(chǎn)物用LyostarII凍干儀凍干。凍干盤在室溫加樣。產(chǎn)物在-50°〇浸透2小時。初次干燥在-3(TC進(jìn)行10小時，接著在2(TC進(jìn)行二次干燥10小時。冷卻和加熱速度為0.5'C/分鐘。在初次和二次干燥時的腔壓力是50mT。一旦凍干完成，將樣品腔用氮氣回填并加帽。凍干過程在約24小時完成。圖15示出了作為運行時間的函數(shù)的擱板設(shè)定溫度(shelfsettemperature)和產(chǎn)物溫度。當(dāng)產(chǎn)物溫度達(dá)至lj(或跨過(crossed))擱板設(shè)定溫度則認(rèn)為凍干過程完成。加速溫度穩(wěn)定性凍干抗體配制品在4(TC或5(TC保溫100天。在保溫期后，用10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)重配產(chǎn)物至5mg/mL。重配時間少于1分鐘。保溫后保留的單體百分比示于圖16。具有4%蔗糖或4%海藻糖的凍干配制品在40。C或5(TC保溫100天后保留最高單體百分比。凍干和溶液配制品之間加速溫度穩(wěn)定性比較凍干配制品(1)20mg/mLIMC-1121B，4%蔗糖，10mM組氨酸緩沖液(pH6.0),禾口(2)20mg/mLIMC-1121B,4%海藻糖，10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)與溶液配制品(1)5mg/mLIMC-1121B于PBS(pH7.2)中禾口(2)5mg/mLIMC-1121B于10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中進(jìn)行比較。樣品在40。C或50。C保溫直至100天。保溫后，凍干產(chǎn)物用10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)重配至5mg/mL。重配的凍干樣品和溶液樣品經(jīng)SEC-HPLC分析。作為在40。C或5(TC保溫時間的函數(shù)的單體、聚集體和降解物百分比的變化在圖17至23中給出。在溶液配制品中降解百分比隨時間增加但是在凍干配制品中保持不變(圖19和22)。實施例5用于高濃度抗體的凍干配制品前面的結(jié)果證實所測試的化合物中，4%蔗糖或4%海藻糖提供了濃度為20mg/mL的IMC-1121B抗體的凍干配制品的最高穩(wěn)定性。在這一研究中我們將IMC-1121B濃度從20mg/mL升高至50mg/mL并將蔗糖濃度從4%變?yōu)?%，以配制濃度為50mg/mL的IMC-1121B。作為對照，還凍干了在4%蔗糖存在下的20mg/mL的IMC-1121B。凍干的產(chǎn)物和對照溶液配制品在室溫、4(TC和5(TC保溫直至3個月。對照溶液配制品由優(yōu)化的目前推薦的IMC-1121B抗體的溶液配制品(5mg/mL于10mM組氨酸，133mM甘氨酸,75mMNaCl，0.01%吐溫80中)組成。在保溫后，凍干的產(chǎn)物用10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)重配至5mg/mL，然后用SEC-HPLC,IEC-HPLC,和還原和非還原SDS-PAGE分析。凍干和溶液配制的IMC-1121B在5(TC保溫后的SEC-HPLC分析在凍干之前和之后及在1個月和3個月在5(TC保溫后在樣品上進(jìn)行SEC-HPLC。保溫后，凍干的產(chǎn)物用10mM組氨酸(pH6.0)重配。單體、聚集體和降解物百分比的變化分別示于圖23、24和25。對于8%蔗糖樣品單體的百分比最大，聚集體最小。凍干的樣品比溶液配制的樣品含有顯著更少的降解物。凍干的和溶液配制的IMC-1121B在室溫和40'C保溫后的SEC-HPLC和IEC-HPLC分析在凍干之前和之后及在1個月和3個月在室溫和4(TC保溫后在樣品上進(jìn)行SEC-HPLC和IEC-HPLC。保溫后，凍干的產(chǎn)物用10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)重配。對于在4(TC保溫的樣品單體、聚集體和降解物百分比的變化分別示于圖26,27和28，對于在室溫保溫的樣品所述變化示于圖30，31和32中。凍干的樣品比溶液配制的樣品含有顯著更少的降解物。在溶液或含有8%蔗糖的凍干品中保溫3個月的IMC-1121B的IEC-HPLC層析譜示于圖29(4(TC保溫)和圖33(室溫保溫)。參考IMC-1121B樣品包括用于比較。凍干樣品的層析譜類似于參考IMC-1121B，但溶液配制的IMC-1121B的層析譜24向酸性pH偏移。保溫3個月后凍干和溶液配制的IMC-1121B的SDS-PAGE分析凍干的產(chǎn)物重配進(jìn)10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中。在3個月保溫后保持在溶液中的IMC-1121B和在10mM組氨酸緩沖液(pH6.0)中的IMC-112IB重配的凍干的樣品用4-20。/。還原SDS-PAGE(圖34)和4-20%非還原SDS-PAGE(圖35)分析。與非凍干配制品比較，凍干的配制品，具有4%蔗糖的20mg/ml抗體和具有8%蔗糖的50mg/ml抗體展示顯著降低的重鏈降解。權(quán)利要求1.一種穩(wěn)定的配制品，其包含抗體和緩沖液，其中抗體的非酶解片段化被顯著(substantially)降低。2.權(quán)利要求l的配制品，其中所述抗體是抗VEGFR抗體。3.權(quán)利要求l的配制品，其中所述抗體是抗VEGFR2抗體。4.權(quán)利要求3的配制品，其中VEGFR2抗體是IMC-1121B。5.權(quán)利要求1的配制品，其中所述抗體濃度為大約50至大約200mg/ml。6.權(quán)利要求l的配制品，其中所述緩沖液包含組氨酸緩沖液。7.權(quán)利要求6的配制品，其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約5mM至大約50mM。8.權(quán)利要求6的配制品，其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約l.OmM。9.權(quán)利要求6的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約5.5至大約6.5。10.權(quán)利要求6的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約6.0。11.權(quán)利要求l的配制品，其中所述緩沖液包含擰檬酸鹽緩沖液。12.權(quán)利要求ll的配制品，其中所述檸檬酸鹽緩沖液pH是大約5.5至大約6.5。13.權(quán)利要求ll的配制品，其中所述檸檬酸鹽緩沖液pH是大約6.0。14.權(quán)利要求l的配制品，其中所述緩沖液包含乙酸鹽緩沖液。15.權(quán)利要求14的配制品，其中所述乙酸鹽緩沖液pH是大約5.5至大約6.5。16.權(quán)利要求14的配制品，其中所述乙酸鹽緩沖液pH是大約6.0。17.—種穩(wěn)定的凍干配制品，包含抗體緩沖液，以及凍干保護(hù)劑其中抗體的非酶解片段化被顯著降低。18.權(quán)利要求17的配制品，其中所述抗體是抗VEGFR抗體。19.權(quán)利要求17的配制品，其中所述抗體是抗VEGFR2抗體。20.權(quán)利要求17的配制品，其中VEGFR2抗體是IMC-U21B。21.權(quán)利要求17的配制品，其中所述抗體濃度為大約50至大約200mg/ml。22.權(quán)利要求17的配制品，其中所述緩沖液包含組氨酸緩沖液。23.權(quán)利要求22的配制品，其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約5mM至大約50mM。24.權(quán)利要求22的配制品，其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約10mM。25.權(quán)利要求22的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約5.5至大約6.5.26.權(quán)利要求22的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約6.0。27.權(quán)利要求17的配制品，其中所述緩沖液包含檸檬酸鹽緩沖液。28.權(quán)利要求27的配制品，其中所述檸檬酸鹽緩沖液pH是大約5.5至29.權(quán)利要求27的配制品，其中所述檸檬酸鹽緩沖液pH是大約6.0。30.權(quán)利要求27的配制品，其中所述緩沖液包含乙酸鹽緩沖液。31.權(quán)利要求30的配制品，其中所述乙酸鹽緩沖液pH是大約5.5至大約6.5.32.權(quán)利要求30的配制品，其中所述乙酸鹽緩沖液pH是大約6.0。33.權(quán)利要求17的配制品，其中所述凍干保護(hù)劑是糖。34.權(quán)利要求33的配制品，其中所述凍干保護(hù)劑是蔗糖。35.權(quán)利要求33的配制品，其中所述凍干保護(hù)劑是海藻糖。36.權(quán)利要求17的配制品，其還包括表面活性劑。37.權(quán)利要求36的配制品，其中所述表面活性劑是吐溫80。38.權(quán)利要求17的配制品，其還包括穩(wěn)定劑。39.權(quán)利要求38的配制品，其中所述穩(wěn)定劑是天冬氨酸。40.凍干的配制品，其包含:抗VEGFR抗體，緩沖液，以及凍干保護(hù)劑。41.權(quán)利要求40的配制42.權(quán)利要求41的配制43.權(quán)利要求42的配制44.權(quán)利要求40的配制45.權(quán)利要求44的配制大約50mM。46.權(quán)利要求44的配制47.權(quán)利要求44的配制l品l品l品l品I品I叩I品約6.5。l品48.權(quán)利要求44的配偉49.權(quán)利要求40的配制50.權(quán)利要求40的配制51.權(quán)利要求40的配制52.權(quán)利要求51的配制53.權(quán)利要求51的配制54.權(quán)利要求40的配制55.權(quán)利要求54的配制56.權(quán)利要求40的配制57.權(quán)利要求56的配制58.凍干的配制品，其包含抗VEGFR2抗體，組氨酸緩沖液，以及凍干保護(hù)性糖。l品l品l品l品l品|品l品l品|品其中所述抗體是抗VEGFR2抗體。其中VEGFR2抗體是IMC-1121B。其中所述抗體濃度為大約5至大約50mg/ml。其中所述緩沖液包含組氨酸緩沖液。其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約5mM至其中所述組氨酸緩沖液濃度為大約10mM。其中所述組氨酸緩沖液pH是大約5.5至大其中所述組氨酸緩沖液pH是大約6.0。其中所述緩沖液包含檸檬酸鹽緩沖液。其中所述緩沖液包含乙酸鹽緩沖液。其中所述凍干保護(hù)劑是糖。其中所述凍干保護(hù)劑是蔗糖。其中所述凍干保護(hù)劑是海藻糖。其還包括表面活性劑。其中所述表面活性劑是吐溫80。其還包括穩(wěn)定劑。其中所述穩(wěn)定劑是天冬氨酸。約6.559.權(quán)利要求58的配制品，其中所述VEGFR2抗體是IMC-1121B。60.權(quán)利要求58的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約5.5至61.權(quán)利要求58的配制品，其中所述組氨酸緩沖液pH是大約6.0。62.權(quán)利要求58的配制品，其中所述凍干保護(hù)劑是蔗糖。63.權(quán)利要求58的配制品，其中所述凍干保護(hù)劑是海藻糖。64.權(quán)利要求58的配制品，其還包括表面活性劑。65.權(quán)利要求64的配制品，其中所述表面活性劑是吐溫80。66.權(quán)利要求58的配制品，其還包括穩(wěn)定劑。67.權(quán)利要求66的配制品，其中所述穩(wěn)定劑是天冬氨酸。68.一種治療方法，包括給予重配的配制品，所述重配的配制品包含抗VEGFR抗體，緩沖液，及凍干保護(hù)劑。全文摘要本發(fā)明提供了用于穩(wěn)定抗體的配制品和方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了傾向于在鉸鏈區(qū)非酶解片段化的抗體的穩(wěn)定配制品。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定抗體的方法，包括凍干抗體的水性配制品。所述配制品能夠被凍干以在加工和儲存過程中穩(wěn)定抗體，然后所述配制品可以被重配用于藥物學(xué)給藥。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定抗VEGFR抗體的方法，包括凍干抗VEGFR抗體的水性配制品。所述配制品可以被凍干以在加工和儲存過程中穩(wěn)定抗VEGFR抗體，然后所述配制品可以被重配以用于藥物學(xué)給藥。文檔編號A61K39/00GK101495136SQ200780009201公開日2009年7月29日申請日期2007年2月15日優(yōu)先權(quán)日2006年2月15日發(fā)明者A·斯里瓦斯塔瓦,J·戈爾德施泰因申請人:英克隆系統(tǒng)公司