專利名稱：：用于難治性腫瘤的治療和/或難治性腫瘤對(duì)于抗癌藥物的化學(xué)敏化的藥物組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及分子和實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)領(lǐng)域，特別涉及描述旨在難治性腫瘤的治療和/或難治性腫瘤對(duì)于常規(guī)細(xì)胞生長抑制劑的化學(xué)敏化的藥物組合?，F(xiàn)有技術(shù)在過去30年中，使用化學(xué)藥物作為用于癌癥治療的細(xì)胞生長抑制劑構(gòu)成了作為用于某些實(shí)體和造血系統(tǒng)腫瘤的第一線治療的選擇之一。用于癌癥治療的最常用的化學(xué)藥物尤其是鉑類、紫杉'^類長春花生物堿、多柔比星、5-氟尿嘧啶和環(huán)磷酰胺(JackmanA.L.，S.，WorkmanP.(2004)Thecombinationofcytotoxicandmolecularlytargetedtherapies-canitbedone"rwgZ/"ore/y7b^y1:445-454)。然而，來自臨床試驗(yàn)的結(jié)果顯示出這類藥物在癌癥治療中的低的治療指數(shù)(如由邊際治療益處(marginaltherapeuticbenefit)所證實(shí)的)，以及在患者中所觀察到的高毒性特性謙(SchraderC.等人M.(2005)Symptomsandsignsofanacutemyocardialischemiacausedbychemotherapywithpaclitaxel(taxol)inapatientwithmetastaticovariancarcinoma,/#edieslO:498-501)。例如，許多作者同意，順鉑構(gòu)成了用于肺癌的第一線治療，然而，通常觀察到適度功效，并且臨床癥狀和6周存活增加具有很少的改善(GrilloR.，Ox隨nA.，JulianJ.(1993)Chemotherapyforadvancednon-smallcelllungcancer./0腳/11:1866-1871;BouquetP.J.,ChauvinF.等人(1993)Polychemotherapyinadvancednon-smallcelllungcancer:ameta-analysis.Za/2cW342:19-21)。因此，目前用于達(dá)到最佳治療益處的策略集中于基于常規(guī)細(xì)胞生長抑制劑以及分子靶向療法的藥物組合。目前的抗癌藥物中的一些被分類為癌癥把向療法，例如，尤其是靶向在慢性髓性白血病的發(fā)展中起重要作用的Abl激酶的格列衛(wèi)(伊馬替尼)(GilesJ.F.，CortesJ.E.，KantarjianH.M.(2005)TargetingtheKinaseActivityoftheBCR-ABLFusionProteininPatientswithChronicMyeloidLeukemia.{7wrre/2f#0/￥ecf5:615-623)，以及靶向與表皮生長因子(EGF)受體相關(guān)的酪氨酸激酶的易瑞沙(OnnA.，HerbstR.S.(2005)Moleculartargetedtherapyforlungcancer.Za力ce纟366:1507-1508)，和通過耙向蛋白酶體機(jī)制來阻斷蛋白質(zhì)降解的萬珂(硼替佐米)(SpanoJ.P.等人(2005)Proteasomeinhibition:anewapproachforthetreatmentofmalignancies.Sw//Ca"cer92:E61-66)?？紤]到常規(guī)化學(xué)治療劑的非特異性機(jī)制集中于細(xì)胞有絲分裂的廢除，新型癌癥靶向治療劑的使用提供了實(shí)現(xiàn)產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)的協(xié)同作用的藥物組合的極大前景。另一方面，抗藥性現(xiàn)象被認(rèn)為是當(dāng)使用化學(xué)治療劑時(shí)，癌癥療法失敗的主要原因。盡管在腫瘤位置處的亞最佳藥物濃度可以影響抗藥性，但其他因素如細(xì)胞起源也在許多肺瘤的化學(xué)抗性中起重要作用。抗藥性是依賴于多個(gè)獨(dú)立機(jī)制的多因素現(xiàn)象，所述獨(dú)立機(jī)制包括細(xì)胞內(nèi)解毒、細(xì)胞應(yīng)答的變化、對(duì)應(yīng)激的耐受性和凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的缺陷(LuqmaniA.(2005)Mechanismsofdrugresistanceincancerchemotherapy.尸r2'"c.尸ra"14:35-48)。糖蛋白-P和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是介導(dǎo)與癌癥中的抗藥性現(xiàn)象相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)解毒過程的主要蛋白質(zhì)(SaekiT.,TsuruoT.,SatoW.,NishikawsaK.(2005)Drugresistanceinchemotherapyforbreastcancer.Ca/icerC力e/z/"力er尸力ar邁aco/56:84-89)(HaraT.等人(2004)GluthathioneS-transferasePIhasprotectiveeffectsoncellviabilityagainstcamptothecin.Ca/cer力e"ers203:199-207)。已才艮道其他蛋白質(zhì)如P-微管蛋白參與抗藥性現(xiàn)象，并且其水平與對(duì)紫杉醇的腫瘤抗性直接相關(guān)(0rrG.A.等人(2003)MechanismsofTaxolresistancerelatedtomicrotubules.0/2COge"e22:7280-7295)。此外，已報(bào)道順柏抗性受不同蛋白質(zhì)的過表達(dá)的影響，所述蛋白質(zhì)如T-絲束蛋白(HisanoT.等人(1996)IncreasedexpressionofT-plastingeneincisplatin-resistanthumancancercells:identificationbymRNAdifferentialdisplay.M5SZe"ers397:101-107)、熱休克蛋白(HSP70)和(HSP90)(JaattelaM.(1999)Escapingcelldeath:survivalproteinsincancer.iU77Ce"248:30-43)和轉(zhuǎn)錄因子YB1(FujitaT.等人(2005)IncreasednuclearlocalizationoftranscriptionfactorY-boxbindingproteinaccompaniedbyup-regulationofP-glycoproteininbreastcancerpretreatedwithpaclitaxel.yes11:8837-8844)。此外，已報(bào)道糖酵解和丙酮酸合成途徑的加劇對(duì)于在腫瘤細(xì)胞中觀察到的化學(xué)抗性現(xiàn)象起重要作用(BorosL.G.等人()Useofmetabolicpathwayfluxinformationintargetedcancerdrugdesign./ri/g7bcfa/1:435-443)。來自不同團(tuán)體的報(bào)道已表明，存在這樣的一系列蛋白質(zhì)，其抑制凋亡和增加肺瘤細(xì)胞的存活，從而促成腫瘤的化學(xué)抗性現(xiàn)象。實(shí)例之一是核磷蛋白，其在促進(jìn)細(xì)胞周期、抑制凋亡中起關(guān)鍵作用，并且已被視為癌癥中的不良預(yù)后標(biāo)記(YeK.(2005)Nucleophosmin/B23，amultifunctionalproteinthatcanregulateapoptosis.CaxcerWer4:918-923)。此外，CK2酶在細(xì)胞存活和腫瘤細(xì)胞針對(duì)凋亡的抗性中起重要作用(TawficS.，YuS.，WangH.，F(xiàn)austR.，DavisA.,AhmedK.(2001)ProteinkinaseCK2signalinneoplasia.W^opaMo/.16:573-582)。先前的發(fā)現(xiàn)已揭示，CK2活性在上皮實(shí)體瘤中相對(duì)于正常組織升高3-7倍(TawficS.,YuS.等人(2001)ProteinkinaseCK2signalinneoplasia.V/i^o/"/"o/7"o/.16:573-582;FaustR.A.，GapanyM.等人(1996)ElevatedproteinkinaseCK2activityinchromatinofheadandnecktumors:associationwithmalignanttransformation.Ca/7c"Ze〃ewl01:31-35)。此外，CK2活性是惡性轉(zhuǎn)化的重要細(xì)胞事件，并且它為一種腫瘤進(jìn)展標(biāo)記(SeldinD.C.,LederP.(1995)CaseinKinaseIIatransgene-inducedmurinelymphoma:relationtotheileroiosisincattle.5We"ce267:894-897)。CK2磷酸化代表了保護(hù)肺瘤細(xì)胞免于凋亡的強(qiáng)信號(hào)這一事實(shí)導(dǎo)致這種酶被視為細(xì)胞生理學(xué)中的抗凋亡介體(AhmedK.，GerberD.A.,CochetC.(2002)Joiningthecellsurvivalsquad:anemergingroleforproteinkinaseCK2.rre油Ce//飾/，12:226-229;TorresJ.，RodriguezJ.等人(2003)Phosphorylation-regulatedcleavageofthetumorsuppressorPTENbycaspase-3:implicationsforthecontrolofproteinstabilityandPTEN-proteininteractions./C力e范，278:30652-60)。總之，CK2磷酸化是代表了用于癌癥治療的潛在靶標(biāo)的生物化學(xué)事件，并且這個(gè)事件的特異性抑制劑可以產(chǎn)生對(duì)于癌癥治療而t共有前景的藥物候選物。不同研究組已使用2種獨(dú)立的方法開發(fā)出了抑制CK2磷酸化的不同策略a)對(duì)CK2a催化亞基的直接抑制，b)對(duì)CK2底物上的酸性結(jié)構(gòu)域的直接靶向(專利WO03/054002和PereaS.E.等人(2004)AntitumoreffectofanovelproapoptoticpeptideimpairingthephosphorylationbytheproteinkinaseCK2.Wes.64:7127-7129)。通過使用這2種方法，作者已證實(shí)CK2抑制導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡這一構(gòu)思。這些發(fā)現(xiàn)加強(qiáng)了CK2作為合適靶以開發(fā)抗癌藥物的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究以及分子生物學(xué)的發(fā)展已部分地使得能夠了解參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤化學(xué)抗性的分子機(jī)制。因此，癌癥治療方案應(yīng)將其注意力集中于產(chǎn)生有效的藥物組合，其極大地減少毒性并且還降低化學(xué)抗性出現(xiàn)的可能性。因此，當(dāng)前癌癥治療的主要目標(biāo)之一是通過減少由這類藥物的有效劑量和固有毒性來增加目前的細(xì)胞生長抑制劑的治療指數(shù)。其他的目前策略是克服針對(duì)常規(guī)細(xì)胞生長抑制劑的肺瘤化學(xué)抗性。發(fā)明詳述本發(fā)明解決了上文提及的問題，因?yàn)樗峁┝税率?種成分的藥物組合CK2磷酸化抑制劑(肽P15)和藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑。在本發(fā)明中，"藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑"指用于實(shí)體瘤和造血系統(tǒng)起源的腫瘤的癌癥化學(xué)療法的所有細(xì)胞生長抑制性化學(xué)化合物。優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑是與合適的栽體相混合的柏類(例如，卡鉑和順鉑)、紫杉烷類(例如，紫杉醇和多西他賽)、長春花生物堿(例如，長春新堿和長春堿)、5-氟尿嘧啶、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、絲裂霉素C、伊馬替尼、易瑞沙和萬珂(硼替佐米、在本發(fā)明中，"CK2磷酸化的抑制劑"這一術(shù)語還包括阻斷4或酶本身的任何化學(xué)或肽性化合物。根據(jù)情況，這種藥物組合的活性成分可以同時(shí)、分開或順次施用。這種藥物組合的施用可以通過全身、局部或口服途徑來進(jìn)行。本發(fā)明還涉及在哺乳動(dòng)物尤其是人中難治性腫瘤的治療和/或化學(xué)敏化，包括施用上文提及的藥物組合。此外，本發(fā)明還涉及這種藥物組合的成分在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療化學(xué)難治性腫瘤并增強(qiáng)本發(fā)明中提及的細(xì)胞生長抑制劑的抗腫瘤效應(yīng)。實(shí)施例l(表l)顯示了，本發(fā)明中描述的藥物組合在體外產(chǎn)生協(xié)同的抗腫瘤效應(yīng)。因此，亞最佳劑量的肽P15以及順鉑、紫杉醇、多柔比星、長春新堿、依托泊苷、絲裂霉素C、5-氟尿嘧啶、伊馬替尼或易瑞沙的同時(shí)組合實(shí)現(xiàn)了本發(fā)曰/效劑量10或IOO倍減少。有效劑量是達(dá)到50%抗腫瘤效應(yīng)的劑量，這在體外增殖測(cè)定法中也稱為50%抑制濃度(IC50)。在本發(fā)明中，"亞最佳劑量，，指低于IC50的那些劑量。實(shí)施例2舉例說明了通過使用這種藥物組合增強(qiáng)了體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)，所述藥物組合包含肽P15以及順柏(圖1A)、環(huán)磷酰胺(圖1B)和絲裂霉素C(圖1C)。該藥物組合在相關(guān)動(dòng)物模型(如在棵鼠中異種移植的人腫瘤的動(dòng)物模型)中導(dǎo)致完全的腫瘤消退。然而，與在安慰劑組中觀察到的效應(yīng)相比較，作為單一療法來使用這種藥物組合的成分僅產(chǎn)生在肺瘤生長方面的少量延遲。這種藥物組合的成分的順次施用證實(shí)，P15處理在體外和體內(nèi)克服了腫瘤化學(xué)抗性。在本發(fā)明中，應(yīng)當(dāng)理解"克服腫瘤化學(xué)抗性或化學(xué)敏化"指在用肽P15預(yù)處理后降低了對(duì)于產(chǎn)生50%抗腫瘤效應(yīng)而言所需的藥物劑量的事件。實(shí)施例3(表2)舉例說明了肽P15預(yù)處理在腫瘤細(xì)胞的化學(xué)敏化中的效應(yīng)，并且它導(dǎo)致有效藥物劑量10-100倍減少。類似地，表3中顯示的數(shù)據(jù)表示，所述藥物組合的順次施用在體外克服了腫瘤細(xì)胞的固有化學(xué)抗性。在本發(fā)明中，當(dāng)IC50值達(dá)到高于IOOOMM的濃度時(shí)，被視為具有體外化學(xué)抗性。類似于體外結(jié)果，在體內(nèi)用肽P15預(yù)處理克服了腫瘤的固有化f抗性(實(shí)施例4)(圖2A、2B、2C)。肽P15成分(氨基酸序列CWMSPRHLGTC)先前已被報(bào)道為CK2抑制齊'J(PereaS.E.等人(2004)AntitumoreffectofanovelproapoptoticpeptideimpairingthephosphorylationbytheproteinkinaseCK2.Ca/cer64:7127-7129)。然而，這種肽出乎意料地在腫瘤細(xì)胞中調(diào)節(jié)一組蛋白質(zhì)(表4)，所述蛋白質(zhì)加強(qiáng)并闡明所述藥物組合中的成分的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)以及通過用肽PI5預(yù)處理而產(chǎn)生的化學(xué)敏化。例如，由P15調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)在腫瘤細(xì)胞增殖的控制和凋亡中起重要作用，并且這些機(jī)制獨(dú)立于由這種藥物組合的其余組分例如在本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑所釆用的機(jī)制。同樣地，由成分P15調(diào)節(jié)的其他蛋白質(zhì)是這樣的蛋白質(zhì)，其參與對(duì)于本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑的腫瘤化學(xué)抗性的分子機(jī)制。這些出乎意料的結(jié)果構(gòu)成了當(dāng)成分順次施用時(shí)，由這種藥物組合產(chǎn)生的肺瘤化學(xué)敏化的分子基礎(chǔ)。本發(fā)明的特點(diǎn)是下述事實(shí)與細(xì)胞生長抑制劑單獨(dú)使用時(shí)的有效劑量相比較，所述藥物組合中的細(xì)胞生長抑制劑的有效濃度減少10-100倍。這表示，在CK2抑制劑和本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑之間發(fā)生協(xié)同相互作用。從實(shí)際觀點(diǎn)來看，這種協(xié)同相互作用意味著，基于這種藥物組合的藥物的毒性比僅基于細(xì)胞生長抑制劑的藥物的毒性低得多。類似地，在順次施用這種藥物組合的成分后所引發(fā)的腫瘤的化學(xué)敏化表現(xiàn)出巨大優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗试S治療在實(shí)體瘤和造血系統(tǒng)起源的腫瘤中經(jīng)常觀察到的化學(xué)抗性。附圖簡(jiǎn)述圖1:在癌癥動(dòng)物模型中由所述藥物組合增強(qiáng)了抗腫瘤效應(yīng)(A)顯示了順鉑+P15的協(xié)同作用的結(jié)果，(B)顯示了環(huán)磷酰胺+的協(xié)同作用的結(jié)果，(C)顯示了絲裂霉素C+P15在體內(nèi)的協(xié)同:;-,8^結(jié)果。圖2:在體內(nèi)肽P15的化學(xué)敏化效應(yīng)(A)顯示了對(duì)于順鉑的化學(xué)敏化，(B)顯示了對(duì)于紫杉醇的化學(xué)敏化，和(C)顯示了對(duì)于多柔比星的化學(xué)敏化。實(shí)施例的詳細(xì)說明一般操作程序細(xì)胞培養(yǎng)H-125細(xì)胞系來源于人非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，而SW948細(xì)胞系來源于人結(jié)腸癌。將這2種細(xì)胞系維持在補(bǔ)充有10%胎牛血清和慶大霉素(50jug/ml)的RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco)中。細(xì)胞培養(yǎng)物的溫育于37。C在5%C02中進(jìn)行。細(xì)胞生存力測(cè)定法為了這個(gè)目的，將20jul四唑鏘(MTS)(Promega)加入至每個(gè)包含所播種的細(xì)胞的96孔平板中。于37。C放置2小時(shí)后，讀取在492nm處的吸光度。最后，使用"CurveExpert"軟件由各自的劑量-反應(yīng)曲線估計(jì)IC50值。癌癥動(dòng)物模型本發(fā)明中使用的動(dòng)物模型基于在棵鼠(Nu/Nu，BalBC)中植入人肺瘤。簡(jiǎn)而言之，將5><106個(gè)H-125細(xì)胞懸浮于磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中并進(jìn)行皮下接種。在腫瘤出現(xiàn)(大約30mm3)后，使用本發(fā)明中描述的藥物組合開始處理。為了評(píng)估所述藥物組合的抗腫瘤效應(yīng)，測(cè)量肺瘤體積，其通過使用下式來進(jìn)行計(jì)算V=寬度、長度/2。細(xì)胞提取物中蛋白質(zhì)諳的分析H-125細(xì)胞用本發(fā)明中描述的藥物組合的肽P15成分處理40分鐘或不進(jìn)行此處理。隨后，用PBS洗滌細(xì)胞單層并從表面上刮下細(xì)胞。在用冷PBS再洗滌2次后，將細(xì)胞粒狀沉淀重懸浮于10mMtris-HClpH7.5，0.25M蔗糖，1mMEGTA+蛋白酶抑制劑混合物中，并且如先前所述獲得核內(nèi)蛋白級(jí)分(GotizrtlezL.J.等人(2003)IdentificationofnuclearproteinsofsmalleelilungcancercelllineH82:Animprovedprotocolfortheanalysisofsilverstainedproteins,^7e"ro/力ores/s24:237-252)。為了分析由P15調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)，各核內(nèi)蛋白提取物備選地在二維凝膠(pH4-7)中和/或通過與質(zhì)i瞽法偶聯(lián)的液相色鐠(納米HPLC)來進(jìn)行解析。本發(fā)明通過下述實(shí)施例來進(jìn)行說明實(shí)施例l:肽P15+常規(guī)細(xì)胞生長抑制劑的組合的協(xié)同效應(yīng)。在下述實(shí)驗(yàn)條件下評(píng)估了與不同細(xì)胞生長抑制劑相組合的肽PI5成分的抗腫瘤協(xié)同效應(yīng)將H-125細(xì)胞種植在96孔平板中，并將肽P15以10和SOuM的濃度加入至每個(gè)平板中。同時(shí)，在本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑各自以l-2000nM的劑量加入，并且在相同條件下繼續(xù)溫育72小時(shí)。最后，如本發(fā)明中上文所述，測(cè)定細(xì)胞生存力和IC50值。表1中所示的結(jié)果證實(shí)，當(dāng)同時(shí)與10或50mM的成分P15相組合時(shí)，每種細(xì)胞生長抑制劑的IC50值減少10-100倍。這些結(jié)果明確地證實(shí)，包含肽P15和在本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑作為成分的藥物組合加強(qiáng)了抗腫瘤效應(yīng)。表l.通過同時(shí)施用這種藥物組合中的成分而獲得的抗腫瘤協(xié)同相互作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例2:在癌癥動(dòng)物模型中所述藥物組合的抗腫瘤效應(yīng)的加強(qiáng)。為此，如本發(fā)明中上文所述，將5x106個(gè)H-125腫瘤細(xì)胞植入6-8周大的BalBc棵鼠中。腫瘤出現(xiàn)后，如下施用所述藥物組合的成分在5天期間以0.5mg/kg/天經(jīng)腹膜內(nèi)施用在鹽水溶液中的肽P15。與此同時(shí)，以相同的頻率以1mg/kg/天來腹膜內(nèi)注射順鉑(圖1A)、環(huán)磷酰胺(圖1B)或絲裂霉素C(圖1C)。也將細(xì)胞生長抑制劑溶解于鹽水溶液中。如本發(fā)明中上文所述，記錄腫瘤體積。圖1A、1B和1C中所示的結(jié)果表明，當(dāng)同時(shí)施用所述成分時(shí)，所述藥物組合加強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)，這表現(xiàn)為觀察到完全的腫瘤消退。相反地，當(dāng)作為單一療法施用所述成分時(shí)，.相對(duì)于安慰劑組僅觀察到不大的抗肺瘤效應(yīng)。因此，我們?cè)谙嚓P(guān)的且預(yù)測(cè)性的臨床前腫瘤模型中進(jìn)一步證實(shí)了這種藥物組合中的成分之間的協(xié)同相互作用。實(shí)施例3:在體外肽P15的化學(xué)敏化效應(yīng)。在這個(gè)測(cè)定法中，我們?cè)u(píng)估了當(dāng)成分順次施用時(shí)所述藥物組合的化學(xué)敏化作用。為此，將H-125細(xì)胞以2000個(gè)細(xì)胞/孔種植在96孔平板中，并且在24小時(shí)后加入20jiiM的肽P15。在與肽P15成分溫育16小時(shí)后，將細(xì)胞單層用鹽水溶液洗滌2次。最后，以1-2000nM的濃度添加在本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑，并將溫育繼續(xù)72小時(shí)。最后，如本發(fā)明中先前所述，測(cè)定每種細(xì)胞生長抑制劑的細(xì)胞生存力和IC50值。表2中所示的結(jié)果證實(shí)，用肽P15成分對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理增加了這些細(xì)胞對(duì)本發(fā)明中優(yōu)選的每種細(xì)胞生長抑制劑的敏感性。此外，我們?cè)u(píng)估了P15預(yù)處理對(duì)于SW948細(xì)胞的影響，所述SW948細(xì)胞固有地對(duì)于細(xì)胞生長抑制劑的效應(yīng)具有抗性。結(jié)果證實(shí)，肽P15成分還將固有藥物難治性肺瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變成對(duì)于本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑敏感的細(xì)胞。(表3)。我們的數(shù)據(jù)證實(shí)，順次施用肽P15成分和本發(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)于此類藥物的抗腫瘤效應(yīng)的敏化。表2.順次施用的藥物組合的體外化學(xué)敏化效應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表3.順次施用的藥物組合對(duì)于固有藥物難治性腫瘤細(xì)胞的體外化學(xué)敏化效應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>通過在本發(fā)明中使用的腫瘤細(xì)胞之中觀察到的由藥物調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)i脊進(jìn)一步驗(yàn)證了肽P15成分對(duì)于化學(xué)敏化的影響。為此，如本發(fā)明中先前所述，分析來自用肽P15成分處理或未處理的H-125細(xì)胞的核內(nèi)蛋白提取物。表4顯示了一組蛋白質(zhì)，其由肽P15成分調(diào)節(jié)，并且通過其功能性質(zhì)，其在分子水平上支持和證明了在本發(fā)明的藥物組合中這種肽的化學(xué)敏化作用。表4.由P15調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)譜<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例4:在體內(nèi)肽P15成分的化學(xué)敏化效應(yīng)。為此，如本發(fā)明中先前所述，將5x1(T個(gè)SW948細(xì)胞植入.,iAM.在腫瘤出現(xiàn)后，如下順次施用所述藥物組合首先，在5天期間以0.5mg/kg/天經(jīng)腹膜內(nèi)施用肽P15成分。隨后，在另外5天期間以5mg/kg/天施用順鉑(圖2A)、紫杉醇(圖2B)和多柔比星(圖2C)。本文的結(jié)果證實(shí)，在體內(nèi)用P15預(yù)處理化學(xué)難治性腫瘤能夠恢復(fù)抗性表型，從而使得所述腫瘤變得能夠?qū)Ρ景l(fā)明中優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑作出應(yīng)答。這些發(fā)現(xiàn)還提供了證據(jù)來證明，當(dāng)順次施用所述成分時(shí)，本發(fā)明的藥物組合能夠克服常常觀察到的固有腫瘤抗性。權(quán)利要求1.用于同時(shí)、分開或順次施用的藥物組合，其特征在于包含CK2磷酸化抑制劑和藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑，與合適的載體相混合。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述CK2磷酸化抑制劑是肽P15(CWMSPRHLGTC)。3.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是選自鉑類、紫杉烷類和長春花生物堿的化學(xué)化合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是順鉑和卡鉑。5.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合，其中所迷細(xì)胞生長抑制劑是紫杉醇和多西他賽。6.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是長春新堿和長春堿。7.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是5-氟尿嘧咬。8.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是多柔比星。9.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是環(huán)磷酰胺。10.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是絲裂霉素C。11.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是萬珂(硼替佐米)。12.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是易瑞沙。13.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中所述細(xì)胞生長抑制劑是伊馬替尼。14.根據(jù)權(quán)利要求1-11的藥物組合的用途，所述用途為用于克服實(shí)體腫瘤或造血系統(tǒng)腫瘤對(duì)于藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑的抗性，其中所述藥物組合的成分同時(shí)、分開或順次施用。15.根據(jù)權(quán)利要求1-13的藥物組合的用途，其中所述CK2磷酸化抑制劑是阻斷該酶或其底物的化學(xué)化合物或肽。16.根據(jù)權(quán)利要求1-13的藥物組合的用途，其中所述CK2磷酸化抑制劑在DM載體中表達(dá)。17.CK2磷酸化抑制劑以及藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑在制備用于癌癥治療的藥物中的用途。18.CK2磷酸化抑制劑以及藥學(xué)上可接受的細(xì)胞生長抑制劑在制備用于治療對(duì)于細(xì)胞生長抑制劑具有抗性的腫瘤的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及這樣的藥物組合，其包含酪蛋白激酶2(CK2)磷酸化抑制劑(稱為P15)和用于癌癥化學(xué)療法的細(xì)胞生長抑制劑，它們同時(shí)、分開或順次施用。優(yōu)選的細(xì)胞生長抑制劑為鉑類、紫杉烷類、長春花生物堿、5-氟尿嘧啶、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、絲裂霉素C、伊馬替尼、易瑞沙和萬珂(硼替佐米)。肽P15和抗癌化合物之間的協(xié)同作用意味著，所述組合中的每種細(xì)胞生長抑制劑的有效濃度比相應(yīng)于單獨(dú)的細(xì)胞生長抑制劑的有效濃度低10-100倍。因此，本發(fā)明中描述的組合具有比對(duì)于抗癌細(xì)胞生長抑制劑所報(bào)道的毒性低得多的毒性，這代表了其用于癌癥治療中的關(guān)鍵優(yōu)點(diǎn)。此外，順次施用的所述組合通過用肽P15進(jìn)行預(yù)處理而導(dǎo)致難治性腫瘤對(duì)于所提及的細(xì)胞生長抑制劑的化學(xué)敏化。文檔編號(hào)A61K31/00GK101432012SQ200780015234公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年2月28日優(yōu)先權(quán)日2006年2月28日發(fā)明者A·桑切斯普恩特,A·羅德里格斯烏略亞,B·E·阿塞韋多卡斯特羅,D·E·戈麥斯,D·F·阿隆索,J·希爾巴爾德斯,J·費(fèi)爾南德斯德科西奧多爾塔杜克,L·H·貝坦科特紐涅茲,L·J·岡薩雷斯洛佩斯,L·R·卡斯特拉諾斯薩拉,S·E·佩里亞羅德里格斯,V·貝薩達(dá)佩雷斯,Y·佩雷拉尼格林,Y·拉莫斯戈麥斯申請(qǐng)人:遺傳工程與生物技術(shù)中心;比奧雷克有限公司