專利名稱：：體重減輕的誘導和ptp1b的選擇性抑制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明針對化合物1436在誘導肥胖哺乳動物體重減輕中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：已經(jīng)從角畫魚——白斑角畫(^wg/mflo^//o)的肝臟分離出幾種氨基甾醇化合物。這些化合物中的一種已被命名為1436，其結(jié)構(gòu)示于圖1中。先前已經(jīng)在例如美國專利5,763,430、5,795,885、5,847,172、5,840,936和6,143,738中對化合物1436進行了描述，這些專利均被以全部內(nèi)容并入，并且化合物1436已顯示出在動物模型中抑制體重增加和抑制食欲，導致體重減輕。肥胖癥在美國是主要的醫(yī)學問題，并且在其它發(fā)達社會也日漸如此。原因主要在于案牘生活方式和富含脂肪的飲食的影響。肥胖者易患與其肥胖癥直接相關(guān)的醫(yī)學問題，例如II型糖尿病、胰島素抵抗、血清膽固醇升高、高血壓、先天性肥胖綜合征(包括先天性瘦蛋白、阿片黑皮質(zhì)素前體(POMC)和黑皮質(zhì)素_4受體(MC4R)缺乏)、以及睡眠性呼吸暫停，尤其皮克韋坎氏綜合征中的睡眠性呼吸暫停。此外，肝臟中脂肪的累積可發(fā)展成非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化。肥胖者的另一個問題是在任何必須切開厚脂肪組織層的手術(shù)中風險增加，其中這些脂肪組織層高度血管化，從而容易出血。必要的手術(shù)經(jīng)常被推遲，直到肥胖患者能夠減輕足夠的體重，以使得手術(shù)風險可以接受。胰島素是不同代謝過程的重要調(diào)節(jié)劑，并在血糖的控制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。胰島素合成和信號傳導相關(guān)的缺陷導致糖尿病。胰島素與胰島素受體(IR)的結(jié)合引起P-亞基胞內(nèi)部分的酪氨酸殘基迅速自磷酸化。三個位置接近的酪氨酸殘基(酪氨酸-1150結(jié)構(gòu)域)必須被磷酸化，以獲得胰島素受體酪氨酸激酶(IRTK)的最大活性，這通過其它細胞底物的酪氨酸磷酸化進一步傳遞信號，其中所述其它細胞底物包括胰島素受體底物蛋白-1(IRS-1)和胰島素受體底物蛋白-2(IRS-2)。蛋白質(zhì)磷酸化是在細胞功能的不同階段傳導和調(diào)節(jié)信號的公認細胞機制(參見，例如Hunter,Phil,Trans.R.Soc.Lond.B.353:583-605(1998);Chan等人，A畫.Rev.Immunol.12:555-592(1994);Zhang,Curr.Top.Cell.Reg.35:21-68(1997):Matozaki和Kasuga,Cell.Signal.8:113-119(1996))。存在至少兩種類主要的公認磷酸酶(1)對絲氨酸或蘇氨酸部分含有磷酸基團(一個或多個)的蛋白質(zhì)進行去磷酸化的那些酶(稱為Ser/Thr磷酸酶或雙特異性磷酸酶或DSP)和(2)從酪氨酸除去磷酸基團(一個或多個)的酶(被稱為蛋白酪氨酸磷酸酶或PTPase或PTP)。若干研究清楚地表明，自磷酸化IRTK的活性可通過體外去磷酸化而被反轉(zhuǎn)(在Goldstein,Receptor3:1-15(1993)中綜述)，其中三磷酸化酪氨酸-l150結(jié)構(gòu)域是PTPase的最敏感靶標。該三磷酸化酪氨酸-1150結(jié)構(gòu)域似乎作為IRTK活性的控制開關(guān)，而IRTK似乎通過PTP-介導的體內(nèi)去磷酸化而被緊密調(diào)節(jié)(Faure等人，J.Biol.Chem.267:11215-11221(1992))。通過體外(Seely等人，Diabetes45:1379-1385(1996))進行的研究和使用PTP1B中和抗體體內(nèi)進行的研究(Ahmad等人，J.Biol.Chem.WO:20503-20508(1995)),PTP舊已被鑒定為參與IRTK調(diào)節(jié)的主要磷酸酶的至少一種。兩個獨立的研究已經(jīng)表明，PTPIB敲除小鼠具有增加的葡萄糖耐量、提高的胰島素敏感度以及在高脂肪飲食下降低的體重增加(Elchebly等人,Science283:1544-1548(1999)和Klaman等人，Mol.Cell.Biol.20:5479-5489(2000))。酪氨酸磚酸酶PTP舊的過表達或改變的活性可能促進各種疾病的進展，包括胰島素抵抗和糖尿病(Ann.Rev.Biochem.54:897-930(1985))。而且，有證據(jù)表明蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B的抑制對于疾病諸如I型和II型糖尿病、肥胖癥、自身免疫性疾病、急性和慢性炎癥、骨質(zhì)疏松和各種形式的癌癥的治療是治療上有益的(ZhangZY等人，ExpertOpin.Investig.Drugs2:223-33(2003);TaylorSD等人，ExpertOpin.Investig.Drugs3:199-214(2004);丄Natl.CancerInst.86:372-378(1994);Mol.Cell.Biol.14:6674-6682(1994);TheEMBOJ.12:1937-1946(1993);J.Biol.Chem.269:30659-30667(1994);和BiochemicalPharmacology54:703-711(1997))。PTPase酶家族可以被分成兩個亞組(1)胞內(nèi)或非跨膜PTPase和(2)受體型或跨膜PTPase。最為人知的胞內(nèi)型PTPase含有單個保守催化磷酸酶結(jié)構(gòu)域，其由220-240個氨基酸殘基組成。PTPase結(jié)構(gòu)域外部的區(qū)域被認為在亞細胞定位胞內(nèi)PTPase中起著重要的作用(Mauro,L丄和DixonJ.E.,TIBS19:151-155(1994))。第一個待純化和鑒定的胞內(nèi)PTPase是PTP舊(Tonks等人，J.Biol.Chem.263:6722-6730(1988))。胞內(nèi)PTPase的其它例子包括(1)T隱細胞PTPase(TCPTP)(Cool等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5257-5261(1989)),(2)神經(jīng)元石壽酸酶STEP(Lombroso等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:7242-7246(1991)),(3)PTP1C/SH-PTP1/SHP腸1(Plutzky等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:1123-1127(1992)),(4)PTPlD/Syp/SH-PPT2/SHP-2(Vogel等人，Science259:1611-1614(1993);Feng等人.Science259:1607-1611(1993))。受體型PTPase由下列組成(a)推定的配體結(jié)合胞外結(jié)構(gòu)域、(b)跨膜段和(c)胞內(nèi)催化區(qū)。受體型PTPase推定的配體結(jié)合胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)和大小是非常有差異的。相反，受體型PTPase的胞內(nèi)催化區(qū)彼此非常同源，并同源于胞內(nèi)PTPase。大多數(shù)受體型PTPase具有兩個串聯(lián)重復(fù)的催化PTPase結(jié)構(gòu)域。所鑒定的第一個PTPase受體亞類是(1)CD45(Ralph,S.J.,EMBO1251-1257(1987))和(2)LAR(Streuli等人.J.Exp.Med.168:1523-1530(1988))。其后，又有許多受體亞類被分離和鑒定，包括例如PTPouPTP卩、PTP5、PTPe和PTPxi。(Krueger等人EMBOJ.9:3241-3252(1990))。盡管已經(jīng)鑒定出多種試劑用作PTP舊抑制劑，例如在WO01/19831、WO01/19830和WO01/17516中描述的雜芳基-氨基乙酸和芳基-氨基乙酸，但這些試劑未表現(xiàn)出在PTP舊和TCPTP之間抑制活性的區(qū)別。而且，由于抑制TCPTP所導致的潛在免疫抑制效應(yīng)，因此相對于TCPTP的選4奪性抑制，PTP舊將使得這類試劑更適合于藥物開發(fā)，因為它們可減少或消除這類非選擇性所帶來的副作用。多巴胺轉(zhuǎn)運體和去曱腎上腺素轉(zhuǎn)運體(分別為DAT和NET)位于下丘腦的突觸前神經(jīng)元中，并用于在多巴胺或去曱腎上腺素被釋放入突觸內(nèi)之后降低它們的水平。當DAT或NET受到抑制時，它們的水平在突觸中升高，并激活它們的受體。Billes和Cowley(Neuropsychopharmacology1:1-13(2006)),Gadde和Xiong(ExpertRev.Ne腦ther.,7:17-24(2007))和Gehlert等人(J.Pharmacol.Exp.Ther.,287:122-7(1998))的工作已經(jīng)i正明，DAT和/或NET的抑制劑或它們的受體的拮抗劑可充當有效的體重減輕劑。因此，在本發(fā)明中，利用化合物1436,在體外觀察到的DAT和NET的抑制，支持了這作為體重減輕機理的一部分。因此，對于可安全快速誘導肥胖者體重減輕的藥物存在需求，其中肥胖癥是飲食誘導的。該類型的藥物也可用于治療由于肥胖癥、II型糖尿病中的肥胖癥、高血清膽固gf、睡眠性呼吸暫停(尤其在皮克韋坎氏綜合征中)、非酒精性脂肪性肝炎和肥胖患者手術(shù)帶來的并發(fā)癥。發(fā)明概述本發(fā)明的一方面是通過給藥化合物1436快速誘導外源性肥胖對象體重減輕的方法。本發(fā)明的另一方面是通過給藥1436治療與外源性肥胖癥有關(guān)并發(fā)癥的方法，其中所述并發(fā)癥包括但不限于II型糖尿病、高血清膽固醇、心臟病和中風發(fā)作、睡眠性呼吸暫停(尤其在皮克韋坎氏綜合征中)、先天性肥胖綜合征(包括先天性瘦蛋白、POMC和MC4R缺乏)、非酒精性脂肪性肝炎和由于肥胖而進行的手術(shù)。進一步的方面是使用化合物1436治療外源性肥胖哺乳動物，以產(chǎn)生體脂肪百分比的顯著下降。在本發(fā)明的另一方面，提供了化合物1436形式的PTP1B抑制劑，其表現(xiàn)出相對于其它磷酸酶，對PTP1B的選擇性抑制活性。在示例性實施方式中，本發(fā)明涉及圖1的化合物(即，化合物1436)或其治療上可接受的鹽或前體藥物。本發(fā)明的另一方面是藥物組合物，其包含治療有效量的化合物1436以及藥學上可接受的載體。本發(fā)明的另一方面涉及相對于T細胞蛋白酪氨酸磷酸酶選擇性抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB的方法，其包括給藥治療有效量的化合物1436。本發(fā)明的另一方面涉及治療由過表達的蛋白酪氨酸磷酸酶IB或增強的蛋白酪氨酸磷酸酶活性引起的疾病的方法，包括向需要的接受者給藥治療有效量的化合物1436。本發(fā)明的另一方面涉及治療I型和II型糖尿病的方法，包括為患有這些疾病之一的接受者給藥治療有效量的化合物1436。本發(fā)明的另一方面涉及治療肥胖癥的方法，包括為患有肥胖癥的接受者給藥治療有效量的化合物1436。本發(fā)明的另一方面涉及通過增加在多巴胺或去甲腎上腺素再吸收轉(zhuǎn)運體附近多巴胺或去甲腎上腺素的量治療疾病的方法，該方法包括為需要的接受者給藥治療有效量的化合物1436。圖1-12僅僅是本發(fā)明范圍的闡述性實施方式并不旨在以其它方式限制本發(fā)明的范圍。圖1.示出了化合物1436的結(jié)構(gòu)。圖2示出了高脂肪飲食對鼠體重的影響以及經(jīng)化合物1436治療得到的反轉(zhuǎn)。圖3示出了在各種治療下，進食60%脂肪飲食的小鼠的體重變化百分比(%)。圖4示出了在各種治療下，進食45%脂肪飲食的小鼠的體重變化百分比(%)。圖5示出了在各種治療下，進食10%脂肪飲食的小鼠的體重變化百分比(%)。圖6示出了在各種治療下，進食60°/。脂肪飲食的小鼠的機體組成。圖7示出了在各種治療下，進食45%脂肪飲食的小鼠的機體組成。圖8示出了在各種治療下，進食10%脂肪飲食的小鼠的機體組成。圖9示出了在各種治療下，在正常小鼠和進食60%脂肪飲食的小鼠中棕色脂肪組織的組織學。圖10示出了通過MSI-1436抑制多巴胺和去曱腎上腺素的細胞吸收的劑量-反應(yīng)曲線。圖11示出了MSI-1436對胰島素受體卩的磷酸化程度影響的蛋白質(zhì)印跡分析。圖12示出了MSI-1436對胰島素受體底物蛋白-1的磷酸化程度影響的蛋白質(zhì)印跡分析。圖13示出了在各種治療下，在正常小鼠和進食60。/。脂肪飲食的小鼠中白色脂肪組織的組織學。發(fā)明詳述定義在本文中使用時，"化合物1436"或"MSI-1436"或只是"1436",是指圖1中在結(jié)構(gòu)上進行描述的氨基甾醇?；衔?436還旨在包括該游離基礎(chǔ)化合物的藥學上可接受的鹽。在本文中使用時，當術(shù)語"肥胖的，，涉及人類時，它包括但不限于體重指數(shù)值在大約30以上的人。在本文中使用時，當術(shù)語"肥胖的"涉及小鼠時，它包括但不限于總體脂肪％在至少大約25以上的小鼠。在本文中使用時，術(shù)語"外源性肥胖"是指由于暴食導致的肥胖癥。在本文中使用時，術(shù)語"皮克韋坎氏綜合征"是指肥胖癥、嗜眠、通氣不足和紅細胞增多的綜合癥狀。在本文中使用時，"非酒精性脂肪性肝炎"是指最頻繁在患有II:型糖尿病的女性中發(fā)現(xiàn)的炎性疾病。在本文中使用時，術(shù)語"骨關(guān)節(jié)炎，，是指受肥胖癥加重的非炎性退行性關(guān)節(jié)病。在本文中使用時，術(shù)語"基礎(chǔ)代謝率"或BMR是指哺乳動物包括人類在安靜狀態(tài)下為維持正常的機體功能而燃燒的卡路里數(shù)。12在本丈中使用時，術(shù)語"降低的熱量攝入，，是指哺乳動物包括但不限于人所消費的熱量的下降。在本文中使用時，術(shù)語"相對于T細胞蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(TCPTP)，選擇性抑制蛋白酪氨酸磷酸酶-l.B(PTP1B)，，是指抑制蛋白酪氨酸磷酸酶-lB的IC5Q值比T細胞蛋白酪氨酸磷酸酶-lB的IQ。值小至少約40倍。在具體實施方式中，抑制PTP舊的1(350值比抑制TCPTP的1(350值小至少約50倍，或小至少約60倍，或小至少約70倍，或小至少約80倍，或小至少約90倍，或小至少約100倍，或小至少約200倍。在本文中使用時，術(shù)語"抑制劑"是指防止PTP舊結(jié)合其內(nèi)源性底物和/或防止通過PTP1B介導的對其內(nèi)源性底物(包括但不限于胰島素受體酪氨酸激酶(IRTK)和IRTK的片段)和非天然底物諸如的去磷酸化的化合物對硝基苯基磷酸鹽。在本文中使用時，術(shù)語"選擇性，，是指在對于PTP1B酶的IC5。值方面，相比于其它酶的IC5。值，化合物具有高至少大約3倍的抑制，其它酶包括但不限于TC-PTP、SHP-2、LAR、CD45、PP2B和Cdc25c。在本文中使用時，"有效量，，是足以實現(xiàn)有益或期望結(jié)果的量。例如，治療量是實現(xiàn)期望的治療效果的量。該量可以與預(yù)防有效量相同或不同，預(yù)防有效量是防止疾病或疾病綜合征起始所必需的量。有效量可以以一次或更多次給藥、應(yīng)用或劑量進行給藥。在一個實施方式中，有效量是誘導肥胖者體重減輕的化合物1436的量。治療方法氨基甾醇化合物1436在本發(fā)明中已經(jīng)表現(xiàn)出快速誘導飲食誘發(fā)的肥胖小鼠的體重減輕。此外，所觀察到的體重減輕在最肥胖的小鼠中是最高的，并且原因主要在于脂肪減少，但很少在于蛋白質(zhì)減少(如果有的話)。同樣，觀察到最肥胖的1436-治療的小鼠比起它們的成對飼養(yǎng)的對應(yīng)體減少了顯著更多的體重，這表明不僅僅是食欲抑制導致的體重減輕得到了誘導。令人驚奇地，在一段時間的治療之后，例如大約7至大約IO天的治療，觀察到對于成對飼養(yǎng)的小鼠，體重減輕的速率出現(xiàn)下降，而對于1436-治療的小鼠，速率下降較小。1436-治療組和對飼組之間的最終體重差異看來至少部分是由于1436-治療組的相對跟多的脂肪減少。治療外源性肥胖癥的最常見方法是飲食限制。該方法具有三個主要問題:(1)個體順應(yīng)性；(2)減少顯著量的肌肉塊以及脂肪的傾向；和(3)個體的代謝重調(diào)至較低的水平。用化合物1436治療克服了所有這些問題。醫(yī)師控制的藥物治療將大大提高個體順應(yīng)性。如圖6-9和13所示，在用化合物1436治療后脂肪顯著減少，伴隨很少的蛋白質(zhì)減少。如圖3-5所示，當1436-治療的動物體重持續(xù)減輕甚至當飲食-治療的動物的體重減輕已經(jīng)穩(wěn)定時，代謝的重調(diào)似乎都不發(fā)生。化合物1436的藥學上可接受的鹽包括非毒性鹽或季銨鹽，其從無機/有機酸或堿形成。這類酸加成鹽的例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、十二烷基硫酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、曱磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽和酒石酸鹽。堿式鹽包括銨鹽、堿金屬鹽例如鈉鹽和鉀鹽、堿土金屬鹽例如鈣鹽和鎂鹽、與有機堿的鹽諸如二環(huán)己基胺鹽以及與氨基酸諸如精氨酸的鹽。同樣，堿性含氮基團可以被諸如烷基卣季銨化。除了載體之外，本發(fā)明的藥物組合物還可以包括穩(wěn)定劑和防腐劑。對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的典型載體、穩(wěn)定劑和佐劑的例子，參見i^m/"gtow:77e/SWewcg朋J戶racft'ce尸/wr附a!cy,21sted.(Lippincott,Williams&Wilkins,PA(2005))?；衔?436可單獨給藥，或優(yōu)選以藥物制劑給藥，該藥物制劑包含1436連同至少一種藥學上可接受的載體。任選地，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它療法可以與給藥1436聯(lián)合。在整個療程中，化合物1436的體內(nèi)給藥可以以一個劑量、多個劑量、連續(xù)或間歇實現(xiàn)。以單一劑量或分開的日劑量，劑量范圍在約0.05mg/kg至約5mg/kg之間，例如在約0.07mg/kg至約3mg/kg之間，例如在約0.1mg/kg至約2mg/kg之間，例如在約0.3mg/kg至約1.5mg/kg之間，例如在約0.5mg/kg至約1mg/kg之間。最有效的給藥方式和劑量的確定方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員人員已知的，并且隨著用于治療的組合物、治療目的、被處理的靶細胞和被治療的對象而變化。對于主治醫(yī)師所選"f奪的給藥水平和途徑，可以進行單次或'多次給藥。也可以給藥化合物1436的長效、延效和/或緩釋制劑。含有化合物1436的藥物組合物可以通過任何合適的途徑給藥，包括經(jīng)口、直腸、鼻內(nèi)、局部(包括經(jīng)皮、氣溶il交、頰部和舌下)、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi))、腹膜內(nèi)和肺部給藥?？梢岳斫猓瑑?yōu)選的途徑將隨著接受者的狀況和年齡以及所治療的疾病而變化。實施例實施例14大食誘發(fā)的肥胖小鼠的體重減輕的誘導小鼠和研究設(shè)計。在斷奶時，來自JacksonLaboratories(BarHarbor,Maine,USA)的雄性AKR/J小鼠被給藥10%、45%或60。/o脂肪kcal飲食(ResearchDiets,Inc.,NewBrunswick,NJ,USA)。小鼠每周稱重，并且在進食不同方的脂肪飲食13-14周后開始治療。緊在治療開始之前，所有三種飲食的小鼠在同一脂肪組成飲食內(nèi)被進一步隨機再分成三組，具有一致的體重分布。以q7dx4方案，對AU小鼠給藥(腹腔注射途徑)，其中第一劑量的1436為10mg/kg,而所有剩余的劑量為5mg/kg。鹽水治療的動物以10mL/kg給藥。以與其它組交錯l天的、相同的q7dx4方案，給藥成對飼養(yǎng)的動物鹽水(10mL/kg)。作為食物消耗的量度，剩余的食物進行每日稱重。提前24小時，對伺組被分配予1436-治療組所消誄毛的4青確量的食物。才艮據(jù)由InstitutionalAnimalCareandUseCommittee批準的方案，進行涉及小鼠的AU步驟。如圖2所示，進食45%和60%脂肪飲食的小鼠變得肥胖，而進食10%脂肪飲食(正常小鼠飲食)的那些小鼠正常增加體重。進食60%脂肪飲食的動物比45。/。飲食飼養(yǎng)的動物顯著更重，并且兩者都顯著更重于10%脂肪飲食伺養(yǎng)的那些動物。當用1436治療這三個組時(在圖2中的第0天開始)，所有三個組的體重都減輕，但小鼠越肥胖，體重減輕越快，體重減輕越多，因為在三周結(jié)束時所有三個組具有大致相同的體重(圖2)。圖3-5表明，1436對體重減輕的影響大于飲食單獨的影響(例如，基于1436-治療組的體重減輕與對飼組的體重減輕的比較)。該影響在60%脂肪飲食組中最大，其中p值為0.013。該觀察結(jié)果支持了這樣的結(jié)論化合物1436還通過防止基礎(chǔ)代謝率的重調(diào)來誘導體重減輕，該重調(diào)通常見于飲食誘導的體重減輕中。機體組成。機體組成(水分、脂肪、蛋白質(zhì)和灰分百分比)根據(jù)所描述修改的方法進4亍測定(OfficialMethodsofAnalysisofAOACINTERNATIONAL.2000)。簡言之，在125。C下干燥樣品4小時，以測定水分。干燥后，將戊烷滴注入樣品5小時，以測定脂肪組成。通過檢測氮的燃燒法測定蛋白質(zhì)，因數(shù)6.25被用于將氮百分比轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)百分比。為測定灰分，在550。C下燃燒樣品5小時，并通過重量分析進行定量。圖6-8示出了研究結(jié)束時10%、45%和60%脂肪飲食組的總機體組成。預(yù)處理飲食結(jié)果示出了一個比高脂肪飲食高30%但比正常飲食低20%的體脂肪%。1436-治療組和對飼組對于所有飲食都顯著降低體脂肪％。存在這樣的趨勢，相比于對飼組，在1436-治療組中體脂肪減少更多。組織學。在10%鋅福爾馬林(FisherScientific,Kalamazoo,MI,USA)中將肩胛內(nèi)棕色脂肪組織固定48小時，并轉(zhuǎn)移至70o/c)EtOH。將包埋入組織石蠟中，并且將5jiM切片應(yīng)用于玻璃顯微鏡載玻片上。切片用蘇木精/伊紅染色，并在OlympusAX70顯微鏡(Melville,NY,USA)上用Insight18.2ColorMosaicCamera(DiagnosticInstruments,SterlingHeights,MI，USA)4翁獲圖寸象。圖9示出了在正常小鼠(10%脂肪飲食，用鹽水治療，A區(qū))、用鹽水治療的進食60%飲食的小鼠(B區(qū))、用1436治療的進食60%飲食的小鼠(C區(qū))和進食60%飲食的成對飼養(yǎng)的小鼠中棕色脂肪組織(BAT)的脂肪(白色小球)含量。1436-治療的小鼠減去了通過進食60°/。飲食所增加的所有脂肪，并且比僅進食限制飲食的小鼠(成對飼養(yǎng))減去的多。圖13示出了在正常小鼠(10%脂肪飲食，用鹽水治療，A區(qū))、用鹽水治療的進食60%飲食的小鼠(B區(qū))、用1436治療的進食60%飲食的小鼠(C區(qū))和進食60%飲食的成對飼養(yǎng)的小鼠中白色脂肪組織(WAT)的脂肪(白色小球)含量。1436-治療的小鼠減去了通過進食60%飲食所增加的所有脂肪，并且比僅進食限制飲食的小鼠(成對飼養(yǎng))減去的多。實施例2-酪氨酸磷酸酶的選擇性抑制16根據(jù)與MDSPharma的合同，在分別使用大腸桿菌(五.中表達人重組蛋白、以及酪氨酸磷酸肽(20昭/mL)或DiFMUP(10uM)作為底物的酶測定中，測定化合物1436對PTP1B和TCPTP的抑制。在PTP1B測定中，通過在室溫下與各種濃度(0.05(iM至500(iM)的1436溫育30分鐘后，ELISA分析殘余的酪氨酸磷酸肽，定量磷酸酶活性。使用DataAnalysisToolbox(MDLInformationSystems),通過非線性最小二乘回歸分析法，測定IC50值(1.14)iM)(見表l)。TCPTP測定要求酶與底物在37。C下預(yù)溫育15分鐘，隨后在37。C下與各種濃度的1436(0.5(iM至50|iM)溫育60分鐘。通過DiFMU的焚光分光光度法定量，評估TCPTP活性。由于在所檢測的1436的任何濃度下均未表現(xiàn)出抑制，IQo被評定為〉50(iM(表1)。表1:1436對酪氨酸磷酸酶的抑制的ICso值<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例3-與多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT)和去曱腎上腺素轉(zhuǎn)運體(NET)結(jié)合的抑制使用CH0-K1或MDCK細胞中表達的人重組蛋白，在放射性配體結(jié)合測定中分別測定MSI-1436對與多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT)和去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運體(NET)結(jié)合的抑制。在存在1436(0.005至50)下，膜制備物與[125I]RTI-55(對于DAT為0.15nM,對于NET為0.20nM)于4。C下溫育3小時。如同在PTP1B測定中，測定IC5o值(見表2)。表2:1436對結(jié)合DAT和NET的抑制的1(350值<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例4-MSI-1436對細胞攝入多巴胺和去曱腎上腺素的抑制使用表達多巴胺轉(zhuǎn)運體的CHO-Kl細胞和表達去曱腎上腺素轉(zhuǎn)運體的MDCK細胞，研究在化合物1436(0.005|aM至50(iM)存在下多巴胺和去曱腎上腺素的攝入。在所述細胞與放射性配體在化合物存在下于室溫溫育10分鐘后，卩H]多巴胺或卩H]去曱腎上腺素的量化顯示出M36的拮抗作用。如果相比于諾米芬辛(DAT)或地昔帕明(NET)的誘導反應(yīng)，攝入抑制>50%,則拮抗作用符合顯著性標準。表3給出了所測量的拮抗作用的詳細情況，而圖10示出了劑量-反應(yīng)曲線。對于多巴胺攝入的抑制，IC5o值被計算為422nM,而對于去曱腎上腺素攝入的抑制，IC5o值被計算為718nM。表3:1436對多巴胺和去曱腎上腺素攝入的抑制1436濃度(jiM)_抑制％多巴胺攝入5.0942.5810.5570.25390.051去曱腎上腺素攝入5.0952.5780.5330.25260.0522實施例5-體外和體內(nèi)抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B使用lOnM.胰島素、10jiMMSI-1436、均不使用任意一種或用兩者均使用對HepG2細胞(無限增殖化肝細胞)進行體外處理30分鐘或3小時。圖11示出了細胞裂解液的蛋白質(zhì)印跡分析。未發(fā)現(xiàn)胰島素受體-(3(IR-P)的量的差異(A區(qū))。隨后進行磷酸化酪氨酸蛋白質(zhì)印跡分析的胰島素受體-(3的免疫沉淀，表明單獨的胰島素誘導的IR-(3磷酸化以及MSI-1436不誘導磷酸化(B區(qū))。相比于胰島素誘導的磷酸化，用胰島素和MSI-1436兩者處理30分鐘的細胞顯示出增加的IR-(3磷酸化(B區(qū))。該效應(yīng)在3小時時稍微減弱。為體外檢測MSI-1436對PTHB的效應(yīng)，使用載體、MSI-1436(單劑量，10mg/kg，腹腔注射)對ob/ob小鼠或成對伺養(yǎng)的對照小鼠(『4/組)進行處理。在該單次處理之后24小時，對小鼠進行麻醉，并通過切口暴露出門靜脈。胰島素或磷酸緩沖鹽溶液(PBS)被注射入門靜脈，并在注射2分鐘后收獲肝臟。裂解肝臟，并用抗-胰島素受體底物蛋白-1(IRS-1)抗體免疫沉淀裂解液，然后印跡分析磷酸酪氨酸，所得到的印跡代表磷酸化胰島素受體底物蛋白-1(P-IRS-1)。使用成像軟件，分析該印跡。圖12表明，MS1-1436體內(nèi)增強胰島素誘導的IRS-1磷酸化，并且增強強度大于成對飼養(yǎng)對胰島素誘導的影響(圖12)。除非以其他方式限定，本文所使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。盡管與本文描述的那些類似或等價的方法和材料可用于本發(fā)明的實踐或測試中，但本文仍描述了優(yōu)選的方法和材料。本文引用的所有專利和出版物通過參照以其全部內(nèi)容并入到本文中。權(quán)利要求1.一種誘導肥胖哺乳動物體重減輕的方法，包括給藥有效量的組合物，其中所述組合物包含藥學上可接受的載體或賦形劑和根據(jù)下式的氨基甾醇化合物或其藥學上可接受的鹽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物還患有選自下列所組成組的病癥II型糖尿病、高血清膽固醇、睡眠性呼吸暫停、皮克韋坎氏綜合征和非酒精性脂肪性肝炎。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物是外源性肥胖。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述病癥是II糖尿病。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述病癥是高血清膽固醇。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述病癥是睡眠性呼吸暫停。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述病癥是皮克韋坎氏綜合征。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述病癥是非酒精性脂肪性肝炎。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述肥胖動物需要進行手術(shù)。10.—種誘導外源性肥胖哺乳動物體脂肪快速減輕的方法，包括步驟給藥有效量的組合物，其中所述組合物包含藥學上可接受的載體或賦形劑和根據(jù)下式的氨基甾醇化合物或其藥學上可接受的鹽。11.一種在哺乳動物中致敏胰島素的方法，包括為需要的哺乳動物給藥有效量的根據(jù)下式的氨基甾醇化合物或其藥學上可接受的鹽。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述哺乳動物是人。13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述胰島素的致敏包括I型或II型糖尿病的治療。14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述胰島素的致敏包括肥胖癥的治療。15.—種在哺乳動物中相對于酶TCPTP選擇性抑制酶PTP1B的方法，包括為需要的哺乳動物給藥有效量的根據(jù)下式的氨基甾醇化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>或其藥學上可接受的鹽。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述酶PTP1B和TCPTP是人源的。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述哺乳動物是人。18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述相對于酶TCPTP選擇性抑制酶PTP1B包括I型或n糖尿病的改善治療。19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述相對于酶TCPTP選擇性抑制酶PTP1B包括肥胖癥的改善治療。20.根據(jù)權(quán)利要求11或15所述的方法，其中所述化合物還包含藥學上可才妻受的載體或賦形劑。21.根據(jù)權(quán)利要求11或15所述的方法，其中通過皮下注射給藥所述化合物。22.根據(jù)權(quán)利要求11或15所述的方法，其中通過吸入給藥所述化合物。23.用于在哺乳動物中致敏胰島素的藥物組合物，其包含具有下式的化合物24.—種在降低的熱量攝入下維持哺乳動物的基礎(chǔ)代謝率的方法，包括為所述哺乳動物給藥有效量的組合物，其中所述組合物包舍藥學上可接受的栽體或賦形劑和根據(jù)下式的氨基甾醇化合物其中所述氨基甾醇化合物以有效維持所述哺乳動物的代謝率的量進行給藥。25.根據(jù)權(quán)利要求11至24任一項所述的方法，其中所述哺乳動物是人。26.—種在哺乳動物中抑制多巴胺攝入的方法，包括向需要的哺乳動物給藥有效量的根據(jù)下式的氨基甾醇化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>或其藥學上可接受的鹽。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述哺乳動物是人。28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抑制多巴胺攝入包括I型或n糖尿病的改善治療。29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抑制多巴胺攝入包括肥胖癥的改善治療。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>或其藥學上可接受的鹽。30.—種在哺乳動物中抑制去甲腎上腺素攝入的方法，包括向需要的哺乳動物給藥有效量的4艮據(jù)下式的氨基甾醇化合物31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述哺乳動物是人。32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述抑制去甲腎上腺素攝入包括I型或II糖尿病的改善治療。33.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述抑制去甲腎上腺素攝入包括肥胖癥的改善治療。34.根據(jù)權(quán)利要求26或30所述的方法，其中所述化合物進一步包含藥學上可接受的載體或賦形劑。35.根據(jù)權(quán)利要求26或30所述的方法，其中所述化合物經(jīng)由皮下注射進行給藥。36.根據(jù)權(quán)利要求26或30所述的方法，其中所述化合物經(jīng)由吸入進行給37.—種用于在哺乳動物中致敏胰島素的藥物組合物，其包含具有下式的化合物全文摘要本發(fā)明針對化合物1436在誘導肥胖哺乳動物體重減輕中的應(yīng)用。文檔編號A61K31/575GK101472596SQ200780022423公開日2009年7月1日申請日期2007年4月23日優(yōu)先權(quán)日2006年4月21日發(fā)明者亨利·R·伍爾夫,克里斯滕·A·蘭茨,安德魯·V·阿爾布萊特,洪曉玲,蘇珊·G·伊邁哈特,邁克爾·邁克萊恩申請人:吉納拉公司