專利名稱：治療心瓣膜病的方法和化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學方法和化合物的普遍領(lǐng)域，且特別涉及治療心瓣膜病 的方法和化合物。
背景技術(shù)：
心臟的功能是提供心血管系統(tǒng)中血液循環(huán)所需要的能量。在各器官的 血液流動是纟皮動的，且只有通過心臟的泵作用(pumping action)保4爭動脈 壓高于靜脈壓時發(fā)生。右心臟泵提供血液在肺血管中流動所需的能量，左 心臟泵提供引起在系統(tǒng)臟器(systemic organs )中流動的能量。
"l爭月永血經(jīng)由上下月空"l爭月永(superior and inferior venae cavae ) 乂人系統(tǒng)月左器 回到右心房。血液穿過三尖瓣進入右心室，再泵過肺動脈瓣經(jīng)肺動脈進入 肺循環(huán)。含氧的肺靜脈血在肺靜脈中流至左心房，再經(jīng)過二尖瓣進入左心 室。/人此處，血液泵過主動月永瓣進入主動脈并分配到系統(tǒng)臟器。
因此，在正常的運轉(zhuǎn)下，富含氧氣的血液由心臟的左心室通過主動脈 泵入身體的脈管系統(tǒng)的動脈中。當心臟泵動時，位于左心室和主動脈之間 的主動脈瓣張開和閉合以控制血液流動方向。更加具體地，在心搏或收縮 期間，主動脈瓣張開允許血液從左心室流入主動脈。而在心搏之間或舒張 期間，主動脈瓣關(guān)閉形成密封，防止血液滲漏回心室。
所述瓣的結(jié)構(gòu)設(shè)計只允許一個方向的流動，且依據(jù)穿過他們的壓力方向的不同被動地張開和關(guān)閉。通常，主動脈瓣是由三個纖維性瓣葉或尖
(leaflets or cusps )組成。在血液心室射血期間，所述瓣葉逆主動月永壁強制 張開，而在舒張期期間落回，他們的自由邊縛^姿合以防止血液回到心臟。
每個主動脈瓣尖后的主動脈壁向外凸起，形成三個稱為主動脈竇 (sinuses of Valsalva)的結(jié)構(gòu)。兩個最前面的瓣膜主動脈尖由于來自各自 主動脈竇的左和右的冠狀動脈的起源而被稱為左和右冠狀尖，且剩余的后 面的瓣膜尖被稱為非冠狀尖。
因為許多原因中的任何一個，主動脈瓣以某種方式損壞和變狹窄是可 以發(fā)生的。當這發(fā)生時，所述主動脈瓣不能夠張開到它的正常程度，而且 阻礙了從心臟進入主動脈的血液流動。這導致了通常一皮稱作主動脈瓣狹窄 的心"莊病癥。
主動脈瓣狹窄的一般病因?qū)W包括先天畸形、風濕熱、老齡患者中的鈣 化變性(degeneration with calcification)。 二尖瓣是最普通的先天畸形，而 且通常在主動脈尖中的一個上有縫隙，其表明連合的發(fā)育是失敗的。4艮少 見i也，出生時可以為單瓣或四尖瓣(unicuspidorquadricuspidvalve)。盡管二 尖瓣最初并非是狹窄的，但是纖維化和加厚(thickening)最終導致鈣化且縮 小的孔尺寸。的確，機械剪切應力(mechanical sheer stress)通常會導致鈣化 損傷(calcific injury)。
風濕熱損傷所述瓣葉的邊緣，且最終連合融合和鈣化。發(fā)現(xiàn)超過50% 的有主動脈瓣狹窄的成人有二尖瓣，但是纖維化和鈣化可以使辨別是二尖 瓣還是三尖瓣變得困難。
在有變性主動脈瓣狹窄的老齡患者中，鈣沉積物通常發(fā)生在竇和環(huán) 上，而瓣葉邊緣通常沒有4丐化。
目前，提出了許多關(guān)于主動脈瓣狹窄的細胞病理生理學理論。這些理 論包括心血管風險因子激發(fā)對損傷的應答、機械剪切應力、自身免疫現(xiàn)象 引起的變性、慢性增加的心搏量以及改變的鈣代謝(例如在腎衰竭、Paget 病等中發(fā)生的)。
不論其病因?qū)W為何，主動脈瓣狹窄導致了左心室收縮壓的升高。心室
5腔內(nèi)收縮性高血壓被心壁(myocardialwall)的向心型肥大補償，允許壁應力 保持正常。低順應性的、增厚的左心室變得更加依賴于心房對舒張期充盈 的貢獻，以致當心房收縮消失時(例如在心房纖維性顴動或房室分離期間)， 左心室的工作情況惡化。在舒張期期間，增厚左心室異常的舒張和增加的 硬度也導致舒張功能障礙以及左心室和左心房舒張壓的升高。
心肌衰竭最終由慢性嚴重性心瓣堵塞以及收縮狀態(tài)的減少(depression of contractile state)發(fā)展而來。左心室擴張也可以發(fā)生在一些患者。心肌氧 耗量因左心室收縮壓的升高以及左心室質(zhì)量的增加而保持在高水平。此 外，增加的左心室舒張壓減少了心肌灌注所需要的壓力梯度。因此，嚴重 的主動脈瓣狹窄產(chǎn)生了其中減少的氧氣供應不足以滿足高心肌需氧量的 疾患(condition),其導致心內(nèi)膜下缺血。
最終，在心肌變力狀態(tài)減少下，射血分數(shù)降至正常范圍以下(有或沒有 相關(guān)的左心室擴張)。左心室舒張末期壓的進一步升高(繼發(fā)于伴隨或未伴 隨收縮功能障礙的舒張功能障礙)導致了肺靜脈高血壓。在有灌注缺損 (underperfused)的心內(nèi)膜下心肌的主動脈瓣狹窄中，增加的心肌需氧量 可以引起心絞痛、心律不齊以及甚至是猝死。
在嚴重的主動脈瓣狹窄的情況中，任何主要癥狀的發(fā)展表示重大的生 命危險也表示需要進行手術(shù)治療。癥狀出現(xiàn)后平均生命期望值為2-3年， 如果癥狀與心臟衰竭相關(guān)，期望值會更少。由于癥狀(而且有可能是捽死) 通常伴隨著強體力活動，因此主動脈瓣狹窄的患者應該避免強體力活動和 竟技性運動，即使它只有輕微至中等的嚴重性。因此，主動脈瓣狹窄不但 與高死亡率相關(guān)，而且與高發(fā)病率相關(guān)。
鉤化主動脈瓣狹窄可以解釋大部分主動脈瓣狹窄的病例。所述疾患以 在主動脈瓣葉的上面或上表面建立鈣化小結(jié)為特征。這些小結(jié)降低了瓣葉 的屈曲性，因此限制了他們移動以及完全張開的能力。
三種技術(shù)^^皮用于治療主動脈瓣狹窄，即瓣膜置換術(shù)、術(shù)中的脫鈣或清 創(chuàng)術(shù)，或者心臟瓣和^求嚢瓣膜成形術(shù)(balloonvalvuloplasty)。
在開胸手術(shù)中的瓣膜置換術(shù)是目前對于癥狀性主動脈瓣狹窄的標準治療。對于單獨的主動脈瓣膜置換，十年存活率是相當不錯的，甚至是對 老年患者。然而，這種技術(shù)要求患者足夠健康以經(jīng)受胸骨切開術(shù)(開胸)和 開胸手術(shù)。這一過程的手術(shù)死亡率(特別是老年人)是相當高的。
有兩種類型的修復心臟瓣，即僅由非來自生物有才幾體的材料組成的機
械瓣和全部或部分由生物材料組成的生物^修復瓣(bio-prosthetic valves)。目 前使用的機械瓣具有球籠結(jié)構(gòu)、傾斜的盤結(jié)構(gòu)(l或2盤)或者是有鉸鏈的瓣 葉結(jié)構(gòu)。
生物修復瓣通常包括一個支撐支架和多個瓣葉。所述瓣葉通常由生物 材料組成，而支架當存在時通常包括至少部分非生物材料。瓣葉的生物材 料可以為自體組織，例如心包、闊筋膜或者心瓣膜?？蛇x擇地，所述材料 可以來源于同源組織(例如用于人移植的非自體人組織)或可以是異源的。
各種類型的修復心臟瓣均有優(yōu)點和缺點。機械心臟瓣使用持久，且因 此更有可能產(chǎn)生持久功能，但是由于血栓栓塞的危險，需要長期小心抗凝。 然而，長期抗凝治療會引起大出血的危險，其發(fā)生率同血栓事件的殘留危 險(residual risk)的發(fā)生率相似。
生物修復瓣起始地接近自然瓣的血液動力學性質(zhì)。它們出現(xiàn)繼發(fā)于血 栓的并發(fā)癥的風險比機械瓣小。然而，這種瓣發(fā)生鈣化的風險顯著高于機 械瓣。因為功能退化(functionallycompromised)的生物修復心臟瓣的處理經(jīng) 常需要置換新的瓣(且因此二次開胸手術(shù))，所以生物修復心臟瓣的有效生 命期望的限制對患者和醫(yī)療系統(tǒng)的經(jīng)濟損耗都是嚴重的醫(yī)學問題。
此外，所有修復心臟瓣都有稍微狹窄。繼發(fā)于血栓形成或鈣化的修復 功能障礙可以導致增加堵塞或引起反流。反流也可以由瓣周漏(perivalvular leak)引起，這個漏位于所述瓣的縫合環(huán)區(qū)域。與瓣功能障礙相關(guān)的波動可 以《I起溶血和貧血。甚至是正常功能的修復瓣也會在一些患者中引起溶 血。
在使用修復心臟瓣的患者中，心內(nèi)膜炎是另一個潛在且主要的并發(fā) 癥。在牙、胃腸和泌尿生殖外科手術(shù)以及菌血癥相關(guān)的其他操作法之前必 須施用抗生素預防。
7此外， 一些患者的主動脈尺寸不是足夠的大以輕易容納傳統(tǒng)的置換瓣。因此對于相當數(shù)量的患者，瓣膜置換是不可能的、不切實際的或者不受歡迎的。
主動脈瓣的術(shù)中機械脫4丐或清創(chuàng)術(shù)在機械置換瓣出現(xiàn)之前已經(jīng)應用多年。在這一技術(shù)中，手術(shù)中進入主動脈，但與人工置換瓣不同的是，外科醫(yī)生使用合適的外科工具清除鈣化沉積物。最近，已經(jīng)證實超聲清創(chuàng)術(shù)有效地清除鈣化沉積物。然而，這一技術(shù)同樣需要患者足夠健康以從胸腔手術(shù)中生存和恢復，以及包括這種手術(shù)伴隨而來的所有的花費和風險。
用于治療主動脈瓣狹窄的第三種技術(shù)包括經(jīng)皮球嚢主動脈瓣成形術(shù)。在這一過程中， 一個可膨脹氣球?qū)Ч鼙凰瓦M主動脈瓣，通過膨脹擠壓和粉碎鉤化小結(jié)以嘗試提高瓣葉的活動性。盡管這一過程避免了前面兩種技術(shù)所具有的許多的風險和缺點，但是一年內(nèi)再狹窄是非常普通的，這也限制了所述技術(shù)針對那些不適合做手術(shù)或拒絕做手術(shù)的患者的臨時緩解癥狀的應用。
因此，需要一種針對主動脈瓣狹窄和其他心瓣膜病的非手術(shù)療法。
本發(fā)明顯著不同于現(xiàn)有技術(shù)和當前趨勢的是通過提供一種使用脂質(zhì)逆向4專送〗敫動劑(reverse lipid transport agonist)的方法不^f旦可以予貞防主動脈瓣狹窄的發(fā)展，而且減輕狹窄程度。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種心瓣膜病的新穎非手術(shù)療法。發(fā)明概述
在廣泛方面，本發(fā)明提供了 一種預防或治療受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的受治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。例如，所述脂質(zhì)傳送激動劑是膽固醇逆向傳送激動劑。
在本發(fā)明的一些實施方案中，所述瓣膜狹窄是主動脈瓣狹窄、鈣化瓣狹窄或任何其他的瓣膜狹窄。
在本發(fā)明的一些實施方案中，所述脂質(zhì)逆向傳送激動劑是選自由HDL、具有HDL-樣生理學功效的肽、復合脂質(zhì)的具有HDL-樣生理學功效的肽、HDL-模擬劑、CETP調(diào)質(zhì)(modulator )、 SRB1調(diào)質(zhì)、LXR/RXR激動劑、ABCA1激動劑、PPAR激動劑和載脂蛋白A-I(ApoA-l)模擬肽/磷脂復合體組成的組。
在這后面的實例中，施用所述ApoA-l ^t擬狀/磷脂復合體可以包括對受治療者注射ApoA-l模擬肽/磷脂復合體。在這一實例中，劑量的例子是從約1將到約10g每千克受治療者體重，約1 mg到約.5g每千克受治療者體重，和約25mg每千克受治療者體重。
例如，ApoA-l模擬肽具有如下所述的SEQIDNO:l序列，ApoA-l模擬肽可以同卵鞘磷脂以及1,2- 二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)(DPPC)復合。
在某些實施方案中，所述受治療者為哺乳動物，例如人。
在另 一廣泛方面，本發(fā)明提供了 一種預防或治療受治療者瓣膜鈣化的方法，所述方法包括向需要其的受治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
在又另 一 廣泛方面，本發(fā)明提供了 一種控制受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括增加需要其的受治療者的膽固醇逆向傳送。
在又另 一廣泛方面，本發(fā)明提供了 一種預防或逆轉(zhuǎn)(reversing)瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的患者施用脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
在又另一廣泛方面，本發(fā)明提供了一種控制受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的受治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
例如，控制所述瓣膜狹窄可以包括降低瓣膜狹窄發(fā)展速率，或至少部分逆轉(zhuǎn)瓣膜狹窄。
在又另一廣泛方面，本發(fā)明提供了脂質(zhì)逆向傳送激動劑用于控制受治療者瓣膜狹窄的應用。
在又另 一廣泛方面，本發(fā)明提供了脂質(zhì)逆向傳送激動劑用于制備控制受治療者瓣膜狹窄的藥物組合物物質(zhì)的應用。
在變化方案中，所述方法包括施用治療有效量的一種化合物，此后被
稱為化合物A,其模擬載脂蛋白A-l(ApoA-l)的生物性質(zhì)?；衔顰和其他合適的化合物在發(fā)表于2001年9月11日美國專利號為6,287,590和發(fā)表于2003年1月14日美國專利號為6,506,799中描述，在此其全部內(nèi)容通過引用并入。的確，可以相信鑒于當前關(guān)于這些專利中所述化合物和分子的作用的知識，這些化合物和分子可以得到與本文所述那些相似的結(jié)果。
有利地，所提議的方法代替了相對侵入性的或相對無效的針對心瓣膜病的已有療法。同時，除了延緩心瓣膜病的發(fā)展，所提議的方法也逆轉(zhuǎn)瓣膜狹窄。因此，所提議的療法不但具有延緩或阻止主動脈瓣狹窄和其他心瓣膜病發(fā)展的潛力，同時導致主動脈瓣狹窄和其他心瓣膜病的消退。
主動脈瓣狹窄(AVS)是最普通的心瓣膜病，且標準治療療法仍然是開胸手術(shù)的心臟瓣膜置換。為了驗證脂質(zhì)逆向傳送激動劑是否具有預防或治療AVS的潛力，ApoA-l模擬肽輸注被試驗以確定它們是否誘導了 AVS的消退。為此目的，十五只雄性新西蘭白兔獲得了富含膽固醇的飲食和維生素D2，直到通過超聲心動描記術(shù)檢測到顯著的AVS。然后動物們隨機地獲得鹽水(對照組，11=8)或ApoA-l模擬肽(處理組，n=7),共2周每周3次。執(zhí)行一系列超聲心動圖和死后瓣組織學(post mortem valve histology)分析。與對照組相比，處理組的主動脈瓣面積顯著增加，為治療后7天(21.9士3.6mm2 vs. 19.6 ± 1.8 mm2， ？=0.019)(14.2%和3.9%的增加)、10天(23.0±4.1mm2 vs. 20.3 ± 2.4 mm2，P=0.006)(19.8% vs. 7.6%)和14天(23.8 ±3.1 mm2 vs.21.3 ±2.4 mm2, P=0.012)(24.6% vs. 12.9%)。在處理組中，經(jīng)過14天的處理，主動脈瓣的厚度減少了 21%，而在對照組中沒有變化(0.094 士 0.034 cmvs. 0.075 ±0.033 cm) (P二0.0006)。處理組的瓣葉和主動月永竇的基部的損傷程度比對照組小(52.8 ± 12.5% vs. 66.7 ± 9.9%, P=0.032)。同樣觀察到了減少4丐化面積的強趨勢(1.6±2.0% vs. 6.9±6.7%， P=0.063)。因此，ApoA-l模擬肽的輸注導致了實一驗AVS的消退。
本發(fā)明其他目的、優(yōu)點和特征通過對其優(yōu)選實施方案的后續(xù)非限定性描述的閱讀會變得更加清楚，所述優(yōu)選實施方案僅通過與附圖相關(guān)的例子
10給出。附圖簡述
在附圖中


圖1表明在ApoA-l才莫擬肽處理期間通過超聲心動圖測量獲得的主動脈瓣面積值。第"0"天對應于膽固醇加維生素D2飲食結(jié)束和ApoA-l模擬肽處理期開始時，*^<0.05; ** 《0.01. (b)，主動月永瓣厚度值，0.001;
圖2表明在ApoA-l模擬肽處理期間通過超聲心動圖測量獲得的主動脈瓣厚度值。第"0"天對應于膽固醇加維生素D2飲食結(jié)束和ApoA-l模擬肽處理期開始時，*尸《0.05; **尸《0.01, 0.001;
圖3表示在對照組和處理組中，主動脈瓣中的損傷面積(LA)對分析區(qū)域(ROA)的百分比對比，"=0.032。
圖4表示兩組中主動脈瓣面積(AVA)同主動脈瓣中損傷面積(LA)對分析區(qū)域(ROA)的百分比之間的關(guān)系；以及
圖5表示兩組中超聲心動描記術(shù)中主動脈瓣的厚度與動物主動脈竇面積中4丐化面積的百分比之間的關(guān)系。注意，在圖的左側(cè)底部， 一個對照動物的值(方塊)被兩個三角隱藏。
發(fā)明詳述
本發(fā)明描述涉及許多公開文件，其全部內(nèi)容通過引用并入。組織病理學、實驗和臨床數(shù)據(jù)表明4丐化主動脈瓣狹窄(AVS)是一個主動性疾病過程(active disease process)并伴隨著脂蛋白沉積、炎癥和主動性瓣葉4丐化(1)。雖然AVS與動脈粥樣硬化之間有相似，但是它們的生理病理學和治療顯著不同。就生理病理學而言，二葉主動脈瓣(bicuspid aortic valve )是存在的，而且大約一半患者的AVS是由它引起的，而動脈粥樣硬化并非由于結(jié)構(gòu)先天畸形。風濕性心臟病也可以引起AVS,但是它與動脈粥樣硬化沒有關(guān)聯(lián)。
li老年人的4丐化AVS是西方國家最常見的類型，通常導致獨立的主動脈瓣置換且不需要相關(guān)的冠狀動脈架橋手術(shù)。就醫(yī)學治療而言，已經(jīng)證明他汀類
藥物(statins)可以保護冠心病的患者，阻止動脈粥樣硬化的發(fā)展或誘導其消退(3);相反，近期隨機臨床試驗表明，加強的他汀類藥物治療不能阻止AVS的發(fā)展(4)。相似地，在許多大規(guī)模的臨床試驗中已經(jīng)表明血管緊張肽轉(zhuǎn)變酶抑制劑具有心肌保護，但沒有成功的延緩AVS的發(fā)展?？傊?，動脈粥樣硬化和AVS是不同的疾病，影響不同的患者人群。
HDL-膽固醇的血漿水平與冠心病之間負相關(guān)。對動物進行實驗動脈粥樣硬化的研究已經(jīng)證明ApoA-1 Milano/磷脂復合體快速地移動膽固醇，因而減少動脈粥樣硬化斑塊負荷(5,6)。此外，兩個臨床研究表明輸注再造的HDL可以誘導冠狀動脈粥樣硬化的迅速改善(7,8)。我們已經(jīng)假設(shè)以HDL為基礎(chǔ)的療法也可以誘導AVS的消退。如果這能夠安全地完成，AVS的醫(yī)學治療以及消退可以轉(zhuǎn)變我們對這種常見疾病的臨床療法。載脂蛋白A-I(ApoA-l)是HDL的一個結(jié)構(gòu)組分，它可以介導其許多有益效果包括加強膽固醇的逆向傳送(9)。在我們的研究中，使用的肽在脂質(zhì)存在下能夠形成兩親性a螺旋，例如ApoA-l(lO，ll)。因此，我們已經(jīng)測試了模擬新生的HDL的與磷脂復合的這種ApoA-l模擬肽在前文所述的兔模型中誘導鈣化AVS消退的能力(12)。
眾所周知，血漿中脂蛋白的主要功能是運輸脂質(zhì)，例如膽固醇和甘油三酯。為在血漿中運輸，膽固醇，通常是膽固醇酯以及甘油三酯被包含在脂蛋白粒子中，在其中它們形成疏水核。所述核被包含磷脂、未酯化的膽固醇和被稱為載脂蛋白的蛋白質(zhì)的表面包衣所包圍。后者負責脂質(zhì)的運輸而且，此外， 一些可以和脂質(zhì)代謝中的許多酶相互作用。目前，鑒定了至少IO種載脂蛋白，即A國l、 A-2、 A畫4、 B-48、 B-100、 C國I 、 C-II、 C國III、 D和E。
我們已經(jīng)假設(shè)通過適當化合物的使用來針對增加脂質(zhì)逆向傳送機制效率的策略，其可能是心瓣膜病治療的方法。這也可能清除鈣化沉積物，因而有效治愈瓣膜狹窄。
用于檢驗這一假設(shè)的化合物(此后稱為化合物A)是一種脂蛋白，其模擬載脂蛋白A-I(ApoA-l)的生物性質(zhì)。這種類型的化合物(一種Apo A-I模擬物或激動劑)在2002年4月23日授予Dasseux等人的美國專利號為6,376,464名為"Lipid complexes of APO A-1 agonist compounds(APO A-1 ;敫
動劑化合物的脂質(zhì)復合體)"的專利中進一步詳細描述。本文件在此全部通過引用并入。
簡單地說，這些化合物包括肽或其類似物，它們在脂質(zhì)存在下能夠形成兩親性oc螺旋并才莫擬ApoA-1的活性。因此它們被稱作ApoA-1激動劑。所述激動劑具有作為它們主要特征的由15-29個氨基酸殘基，優(yōu)選22個氨基酸殘基或其類似物組成的"核心"肽，其中肽的至少一個酰胺4建被取代的酰胺、酰胺的電子等排物或模擬酰胺(amide mimetic)代替。
這些ApoA-1激動劑部分地依據(jù)下述發(fā)現(xiàn)改變22-mer共有序列的基本序列中某些被認為對活性關(guān)鍵的氨基酸殘基，產(chǎn)生表現(xiàn)出活性的合成肽，其活性接近，或者在某些實施方案中甚至超過天然ApoA-1的活性，所述22-mer共有序列公開于Venkatachalapathi等，1991, Mol. Conformationand Biol. Interactions, Indian Acad. Sci. B: 585-596
(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK;此后"Segrest共有22-mer"或"共有22-mer")。發(fā)現(xiàn)使用疏水Leu殘基取代Segrest共有22-mer肽的三個帶電荷的氨基酸殘基(Glu-5、 Lys-9和Glu-13)提供了模擬ApoA-1的結(jié)構(gòu)和功能特性達到了本領(lǐng)域前所未有程度的肽。
化合物A包含具有以下序列的肽
H-Pro-Val-Leu-Asp-Leu-Phe-Arg-Glu-Leu-Leu-Asn-Glu-Leu-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu隱Lys-OH(SEQ ID NO:l)
以及該月太由Polypeptide Laboratories(Torrance， CA， USA)合成。4吏用高效液相色i普法評估純度，且質(zhì)譜分析超過98%。所述肽與卵鞘磷脂和1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)(Avanti Polar Lipids)(10)以1:1:1的重量比復合，所述復合通過將各成分在鹽水中混合，并進行多次加熱和冷卻循環(huán)直到溶液變得十分澄清而完成。低壓凍千所述包含復合體的溶液以等^f分試樣長期保存。每周在保持4。C且無菌的條件下重建新鮮溶液。在大鼠中測試復合體的生物活性，所述生物活性指在靜脈注射所述肽后轉(zhuǎn)移
13膽固醇以及提高血液中HDL-膽固醇的能力(數(shù)據(jù)未顯示)。
根據(jù)它們已知的生物活性和結(jié)構(gòu)，可以認為其他的化合物，例如上文
提到的美國專利號6,376,464中出現(xiàn)的化合物，將表現(xiàn)出與化合物A相似的效果。
術(shù)語一種狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥的"治療(treating)"或"治療(treatment)" 包括
(1) 預防或延緩受治療者的狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥的臨床癥狀的出現(xiàn)，所述受治療者可以是受到狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥的折磨或易受到狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥的感染，但并未經(jīng)歷或者表現(xiàn)出狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥的臨床或亞臨床癥狀；
(2) 抑制所述狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥，即阻止或減輕狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥或至少其一種臨床或亞臨床癥狀的發(fā)展；或
(3) 緩解所述狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥，即導致所述狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥或至少其一種臨床或亞臨床癥狀的消退。
受治療者從治療中獲得的益處是統(tǒng)計學顯著的或者至少是所述受治療者或醫(yī)生可以感覺到的。
所述術(shù)語"受治療者"包括哺乳動物(特別是人)和其他動物，如家畜(如，家養(yǎng)寵物包括貓和狗)以及非家畜(如野生動物)。
"治療有效量"是指一種化合物的量，當施用于受治療者以治療狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥時，可足以實現(xiàn)所述治療。所述"治療有效量"根據(jù)以下因素變化化合物、狀態(tài)、疾病、失調(diào)或病癥和其嚴重性以及接受治療的受治療者的年齡、體重、身體狀況和響應度。
藥物組合物
本發(fā)明的藥物組合物包括至少 一種本發(fā)明的化合物和藥學上可接受的賦形劑(如藥學上可接受的載體或稀釋劑)。優(yōu)選地，所述藥物組合物包括治療有效量的本發(fā)明所述的化合物。本發(fā)明所述的化合物可與藥學上可接受的賦形劑(如載體或稀釋劑)結(jié)合，或被載體稀釋，或被封入載體，該載體可以為膠嚢、香嚢(sachet)、紙或其他容器的形式。
合適載體的例子包括且不限于水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、多羥乙氧基蓖麻油、花生油、橄欖油、明膠、乳糖、白土、蔗糖、糊精、碳酸鎂、糖、環(huán)糊精、直鏈淀粉、硬脂酸鎂、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯樹膠、硬脂酸或纖維素的低級烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺、脂肪酸甘油一酸酯和甘油二酯、季戊四醇脂肪酸酯、聚氧乙烯、羥甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。
所述載體或稀釋劑可以包括一種持續(xù)釋放的材料，如單獨或與蠟混合的甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。
所述藥物組合物也可以包括一種或多種藥學上可接受的助劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、影響滲透壓的鹽、緩沖劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、或前述的任何組合。本發(fā)明所述藥物組合物可以通過使用本領(lǐng)域所熟知的步驟配制，以對受治療者提供施用后活性成分的快速、持續(xù)、或延緩釋放。
本發(fā)明所述藥物組合物可以通過常規(guī)技術(shù)制備，如在Remington: TheScience and Practice of Pharmacy, 20th Ed" 2003 (Lippincott Williams &Wilkins)中描述的。例如，所述活性化合物可以同載體混合，或i皮載體稀釋，或被封入載體，其可以為安瓿、膠囊、香嚢、紙或其他容器的形式。當載體作為稀釋劑時，它可以是固體、半固體、或者液體材料，其作為所述活性化合物的運載體、賦形劑或介質(zhì)。所述活性化合物可以被吸附在顆粒狀固體容器(如在香嚢中)上。
所述藥物組合物可以為常規(guī)形式，例如，膠嚢、片劑、氣溶月交、溶液、懸浮液或用于局部應用的產(chǎn)品。
施用途徑可以是任何將本發(fā)明的活性化合物有效地運送到合適或期望的作用部位的途徑。合適的施用途徑包括且不限于口服、鼻、肺、含服、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮、胃腸外、直腸、貯庫(depot)，皮下、靜脈內(nèi)、尿道內(nèi)、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、眼(如用眼用溶液)或局部(如用局部軟膏)。
15實施例
在兔中已經(jīng)建立主動脈瓣狹窄的復合動物模型。所述模型引起的以鈣 化為特點的主動脈瓣狹窄與在人臨床環(huán)境中觀察到的相似。
方法
動物和實聰r
使用根據(jù)Drolet等的描述(12)所修改的一種動物模型。用一種富含 0.50/。膽固醇的飲食(Harlan, Indianapolis, lndiana)加上含有維生素D2(50000 UI每天；Sigma, Markham, Canada)的飲用水喂養(yǎng)十五只雄性新西蘭白兔 (2.7-3.0 kg，年齡12-13周)直到出現(xiàn)顯著的AVS，所述顯著AVS可以通過 主動脈瓣面積(AVA)或5爭瓣速率比(transvalvular velocities ratio)(Vi/V2)的減 少> 10%來定義，可以通過超聲心動描記術(shù)檢測(12.9 ± 2.4周)。
然后所述動物恢復標準飲食(沒有維生素D2)來模擬膽固醇降低，且隨 機地被分配到接受鹽水(對照組，11=8)或所述ApoA-l模擬肽(處理組，n=7)。 兔通過耳緣靜脈注射鹽水或復合磷脂(化合物A)的ApoA-l模擬肽(25 mg/kg)2周，每周3次。在全部隨機處理期間，每3至4天連續(xù)地(見超聲 心動描記術(shù)方法)執(zhí)行超聲心動圖。最后輸注后兩天，所述動物接受最后的 超聲心動圖并處死，然后采集主動脈瓣進行組織學分析。處理前和處死前 通過其耳動脈獲得在基線的血液樣本。全部膽固醇、HDL膽固S孚、甘油三
面旨和4丐水平通過自動濾光光度計系統(tǒng)(automated filter photometer system)(Dimension RxL Max, Dade Behring, IL)觀'J量。
動物護理和程序遵守加拿大動物飼養(yǎng)協(xié)會的準則(Canadian Council on Animal care guidelines), 并一皮動物研究才幾構(gòu)道德委員'會(institutional ethics committee for animal research)批準。
超聲心動描記術(shù)
在以下時間執(zhí)行經(jīng)胸廓的超聲心動圖的研究在基線，在高膽固醇的 飲食直到產(chǎn)生顯著的AVS的8周中從開始以每周為基礎(chǔ)進行一次，以及用 ApoA-l模擬肽或鹽水對照處理后4、 7、 10和14天。研究用S12探針使 用標準的超聲心動圖系統(tǒng)(Sonos 5500, Philips Medical Imaging, MA)執(zhí)行。肌肉內(nèi)注射氯胺酮(45 mg/kg)和咪達唑侖(0.75 mg/kg)用于鎮(zhèn)靜。
主動脈瓣的胸骨旁長軸和短軸圖被記錄下來以評估瓣葉形態(tài)學。在放 大的胸骨旁長軸圖中測量左心室流出道(LVOT)的直徑，且LVOT的截面積 (CSAlvot)根據(jù)以下計算CSALVOT = tt (Dlvot/2)2。在頂端5腔圖中用最接 近于主動脈瓣的脈沖波Doppler采樣以獲得LVOT的速率(V1)和速率時間 積分(VTlLvoT)。在同一圖中，使用穿過主動脈瓣的連續(xù)波(CW)D叩pler 詢問獲得跨瓣最大速率(V2)和VTI(VTIAO)。在前處理期計算Vl/V2比來確 定AVS的發(fā)展。通過以下的連續(xù)等式獲得在每個時間點的主動脈瓣面積 (AVA): AVA= CSALVOT x (VTILV0T/ VTIAO)。中間部位的主動脈瓣厚度在舒 張末期在放大的胸骨旁長軸圖中分別在基線、隨機治療前和最后的超聲心 動圖的檢查時進行測量。
三個連續(xù)心動周期的均值被用于每次測量。通過在繼續(xù)研究前回顧以 前的記錄，特別注意到在系列檢測中的獲得相似的成像平面。整個方案中 所有的超聲心動圖的成像和測量是由對隨機處理安排未知的同 一有經(jīng)驗 的研究者進行。
組織形態(tài)測定
升主動脈和主動脈瓣縱向打開且3個瓣膜尖被分開。兩個瓣膜尖立即 在包埋劑(OCTTissue-Tek; Sakura， USA)中冷凍，且在-80。C下保存。第三個 瓣膜尖在4。C下在10%緩沖福爾馬林中浸入固定24小時且包埋入石蠟中。 從每個瓣膜尖的中間三分之一獲得的染色的或免疫組織化學標記的組織
切片用以計算機為基礎(chǔ)的數(shù)字成像系統(tǒng)(Image Pro Plus, 5.1版本)來分析， 所述以計算機為基礎(chǔ)的數(shù)字成像系統(tǒng)使用了連接到數(shù)字攝影機(Qcolor3, Olympus)的光學顯微鏡(BX41, Olympus)。分析區(qū)域(ROA)是由從瓣葉基部 開始的1000 pn的主動力永竇和乂人瓣葉基部開始的500 pm的瓣葉組成。測 量損傷面積(LA)和瓣葉損傷長度(LLL)。
組織化學
制備蘇木精-根皮紅(phloxin)-番紅(safran)、von Kossa和天狼猩紅(Sirius red) (F3B, BDH, UK)染色的切片分別用于常規(guī)檢查、組織4丐化和膠原蛋白
17研究。如前所述(13)，在偏振光下確定用天狼猩紅苦味酸染色的切片的膠 原蛋白纖維I型和III型的數(shù)量。為了免疫組織化學評估，所有切片用抗兔
巨噬細胞的鼠IgG2a單克隆抗體(RAM11, Dako, Canada)(l:100稀釋)或兔平 滑肌細胞oc-肌動蛋白(Clone 1A4, Dako, Canada)(l:200稀釋)預培養(yǎng)。應用 物種-適當(species-appropriate)的生物素化二級抗體，隨后應用鏈霉親和素 辣根過氧化酶復合體，用偶氮乙基咔唑(azoethylcarbazol)(AEC)顯像，并通 過邁爾氏(Mayer's)蘇木精復染色。在40X放大獲得的數(shù)字影像上確定 ROA中平滑肌細胞、巨噬細胞和鈣化面積的數(shù)量。每個切片的影像均在同 樣光照設(shè)置下數(shù)字化捕捉，其針對所有樣本，在同樣的顏色閾下執(zhí)行自動 化的以計算機為基礎(chǔ)的分析。數(shù)據(jù)表示為ROA中標記面積的百分比。
為了評估組織游離膽固醇，在PBS(pH7.4)中固定于4%多聚甲醛的5 pm的冷凍切片用菲律賓菌素染色(13)。在室溫下，切片在溶解于DMSO 的菲律賓菌素復合體(Sigma, Canada)中培養(yǎng)1小時并用PBS稀釋，固定在 Vectashield(Vector Laboratories, USA)上，通過使用具有DAPI濾光裝置的 Zeiss Axiovert 200M顯微鏡的熒光顯微鏡方法觀察。使用安裝有0.63 x C 支座轉(zhuǎn)接器(C-mount adapter)的AxioCam MRm數(shù)字照相機獲取圖像。 菲律賓菌素數(shù)據(jù)表示為熒光強度的任意單位。
統(tǒng)計分析
數(shù)據(jù)表示為均值士標準偏差。在"前處理，，時期，使用重復測量方差 分析(ANOVA)模型研究跨時間和組間(處理組vs.對照組)的超聲心動圖和 血清的測量。使用以時間、組、組x時間相互作用作為獨立變量的模型， 且只在出現(xiàn)顯著的組x時間相互作用時開始在給定的時間點對比各組。否 則，根據(jù)所述模型主要的組的影響來得出整體結(jié)論。在隨機處理時期，使 用重復測量協(xié)方差分析(ANCOVA)模型研究跨時間和組之間(處理組vs.對 照組)的超聲心動圖和血清的測量，調(diào)整反應變量的基線值。所述ANCOVA ;溪型也包括組x時間相互作用，且只在出現(xiàn)顯著的組x時間相互作用時開 始在給定的時間點對比各組。否則，根據(jù)所述模型主要的組的影響確定整 體結(jié)論。使用Studentt-檢驗對比處理組和對照組之間的組織學變量。使用 Pearson相關(guān)系數(shù)評估組織形態(tài)測定和超聲心動圖的變量之間的關(guān)系。所有
18的分析使用SAS release 8.2(SAS Institute Inc., Cary, NC)執(zhí)行，且在0.05顯 著性水平進行。
結(jié)果
血脂和4丐血
在前處理時期(高膽固醇的飲食期間)，組之間的總膽固醇(尸=0.942)、 HDL-膽固醇(iM).787)、甘油三酯(尸=0.906)和鈣血(尸=0.727)的血清水平?jīng)] 有顯著差異。在2周的處理期間，兩組中的總膽固醇水平仍然是統(tǒng)計相似 的(尸=0.470)。對照組和處理組的值分別為在隨才幾化時20.46 ±3.52 mmol/L 和20.13 ± 5.18 mmol/L以及在處理結(jié)束時13.78 ± 6.24 mmol/L和17.57 ± 10.32 mmol/L。在處理期間，各組的HDL-膽固醇水平?jīng)]有統(tǒng)計顯著差異 (尸=0.374)。 HDL-膽固醇在隨機化時為0.50 ±0.20 mmol/L和0.50 ±0.15 mmol/L以及在處理結(jié)束時為0.39 ± 0.17 mmol/L和0.45 ± 0.17 mmol/L。在 此期間，甘油三酯水平也相似(尸=0.544)。在處理期間，各組的4丐血沒有顯 著差異(尸=0.832)，在各組中隨機化前的值為3.31 ±0.29 mmol/L和3.15 ± 0.37 mmol/L以及在處理結(jié)束時為3.22 ± 0.11 mmol/L和3.22 ± 0.12 mmol/L。
在高膽固醇的飲食和維生素D7補充期間AVS的發(fā)展
通過膽固醇加維生素D2飲食的AVS誘導時間對對照組和處理組是相 似的(12.8士2.2 vs. 13.0±2.9星期；P=0.852)。在基線和在高膽固醇的飲食 期結(jié)束時的AVA之間具有顯著差異(尸0.0001)。兩組中的AVA減少，且對 照兔和處理兔的值幾乎相同(在對照組中為從在基線24.2 ±4.1 mn^到19.0 ± 2.7 mm2 J^及在處玉里纟且中為乂人24.7 ±3.9 mm2 到19.1 ±2.6 mm2)。因此各 組在AVS發(fā)展期間AVA沒有顯著差異(尸二0.852)。因此，在隨機處理前對 照組和處理組中的AVA減少了 20.5 ± 4.2%和21.6 ± 3.7%。
在基線和在高膽固醇的飲食期結(jié)束時測量的Vt/V2比也具有顯著差異 (尸<0.0001)。在這些時間點之間比的減少在各組間沒有顯著差異 (尸=0.914)。
處理時AVS的發(fā)展-超聲心動描記術(shù)如圖l所示，在處理期間(從AVS檢測到處理2星期后)，觀察到AVA 顯著的組x時間相互作用(/^0.013)。使用重復測量ANCOVA模型，超聲 心動圖測量反映出在處理7天(21.9士3.6 mm2 vs. 19.6 ± 1.8 mm2,尸=0.019) (14.2 ±3.5% vs. 3.9±3.4%的相對增加)、10天(23.0士4.1 mm2 vs. 20.3 ±2.4 mm2,尸=0.006) (19.8 ± 3.5% vs. 7.6 ± 4.2%的相對增加)、以及14天(23.8 ± 3.1 mm2 vs. 21.3 ±2.4 mm2,尸=0.012) (24.6 ±2.0% vs. 12.9 ± 3.5%的相對增力口) 后與對照組相比，處理組中的AVA顯著增加。
主動脈瓣厚度通過超聲心動描記術(shù)評估，且在隨才幾治療前和14天處 理后測量。同樣觀察到主動脈瓣厚度的顯著的組x時間相互作用 (尸=0.005)。在隨機化時間點沒有發(fā)現(xiàn)各組之間的顯著差異，但是觀察到在 處理14天后與對照組相比處理組中的主動脈瓣厚度顯著減少。在處理兔 中，主動脈瓣厚度在隨機化前為0.094 ± 0.034 cm以及在處理結(jié)束時0.075 ±0.033 cm,而在對照中同樣的時間點其為0.080 ±0.024 cm和0.080 ± 0.026 cm。
組織學
所有的動物表現(xiàn)出主動脈瓣損傷。損傷在于新組織帽(cap of neotissue)，所述新組織帽是由多層泡沫細胞逐漸被源于損傷約一半深處缺 少泡沫細胞的纖維化材料代替所形成。損傷一般從竇管(sinotubular)區(qū)域發(fā) 展，覆蓋整個主動脈竇且延伸到瓣尖基部并上到靠近瓣葉小動脈支(leaflet arterialis)的一半到三分之二。相反地，在瓣葉心室支(ventricularis)上的損 傷不常見也不嚴重。
組織形態(tài)測定
如圖3所示，用ApoA-l模擬肽處理的組與對照組相比，每ROA的 LA的百分比顯著減少(52.8 ± 12.5%/ROA vs. 66.7 ± 9.9%/ROA,尸=0.032)。 有趣地是，當將兩組中組織形態(tài)測定的LA/ROA的百分比同超聲心動描記 術(shù)確定的AVA匯集起來時，發(fā)現(xiàn)LA/ROA的百分比同AVA之間存在負相 關(guān)0 = -0.54,尸=0.039,圖4。相似地，來自兩組的匯集的數(shù)據(jù)的分析反映了 AVA同o/oLLL(即，損傷占總瓣葉長度的百分比或LLL/總瓣葉長度x 100) 之間的負相關(guān)(r = -0.70,尸=0.004)。然而，處理組和對照組之間的Q/oLLL差異沒有達到統(tǒng)計顯著(55.7 ±24.3% vs, 72.3 ± 11.7%,尸=0.109)。 組織化學
在大多數(shù)動物中觀察到鈣化病灶。在主動脈竇的損傷核心中具有鈣沉 積物的兔的百分比為處理組57%(4/7)和對照組88%(7/8)。在von Kossa 染色上被鈣化占據(jù)的主動脈竇面積的百分比的量反應了一個強趨勢，所述 趨勢為與對照組相比，處理組中有77%的減少(1.6 ±2.0% vs. 6.9 ± 6.7%; P=0.063)。通過使用來自兩研究組中的匯集數(shù)據(jù)，所述竇面積中的鈣化病 灶面積的百分比同超聲心動描記術(shù)確定的主動脈瓣厚度顯著相關(guān)(r = 0.63, iM).012)(圖5)。
通過菲律賓菌素染色檢測的游離膽固醇出現(xiàn)在幾乎所有對照動物的 整個主動脈瓣損傷區(qū)域，而在大多數(shù)用ApoA-l模擬肽處理的動物中，損 傷的腔邊緣的熒光信號趨于減弱。與對照相比，被處理動物中的損傷腔邊 緣的第一個10pm中熒光信號的評估顯示游離膽固醇減少41%，但是這種 差異并沒有達到統(tǒng)計顯著(221 ±54 vs. 377 ±229熒光強度任意單位， P=0.231)。巨噬細胞區(qū)域(34.5%)是"-肌動蛋白正相區(qū)(17.1%)的大約2倍 大，各組之間沒有顯著差異。在ROA中，膠原m型纖維(綠光)的百分比高 于膠原T型纖維(紅-黃)(對照中TIT型19.7 ± 5.5%/ROA vs. T型6.6 ± 4.1%/ROA,尸=0.00009;處理兔中III型19.1 ± 11.3%/ROA vs. I型5.5 ± 5.6。/。/ROA,i^0.015)。然而，在ROA中膠原纖維(I和m型)的百分比在各 組之間是相似的(分別地尸=0.671和尸=0.883)。
討論
這些實驗證明ApoA-l模擬肽的輸注導致實驗AVS顯著消退。相比于 對照組，ApoA-l模擬肽的輸注誘導了 AVA的更大改善以及主動脈瓣厚度 的顯著減少。通過超聲心動描記術(shù)，這些AVS嚴重性的有益變化伴隨著組 織學切片中瓣葉基部區(qū)域損傷程度的顯著減少以及減少鈣化的強趨勢。
使用由Drolet等(12)開發(fā)的AVS兔模型，其允許模擬臨床情況，在所 述模型中主動脈瓣鈣化顯著地且可重復地發(fā)生。在大約13星期的富含膽 固醇的飲食和維生素D2的補充后，超聲心動圖測試表明AVA2P/。的減少。二維影像顯示了增加的瓣厚度和與瓣膜硬化和鈣化區(qū)域相容的回音
(echogenicity )。組織學檢驗確定了在主動脈竇和瓣葉基部的瓣膜增厚和4丐沉積。所述研究提供了 ApoA-1模擬肽對實驗鈣化AVS的有益效果的超聲心動圖和組織學證據(jù)。最早在主動處理開始后7天可以觀察到AVA的增加，在14天達到24%的改善。伴隨著ApoA-1模擬肽的輸注，AVA幾乎確實恢復到開始所述高膽固醇的飲食前表現(xiàn)的正常值。相反地，對照組中富含膽固醇飲食和維生素D2補充的中止(模擬脂質(zhì)降低)僅導致了 AVA的輕微增加，其證明了所述肽的有益效果。如超聲心動描記術(shù)所示，在用肽處理僅14天后，主動脈瓣厚度也顯著減少。有趣地，由超聲心動描記術(shù)確定的AVA同組織學中損傷程度的指數(shù)負相關(guān)(correlate inversely)。ApoA-1模擬肽的輸注也導致了瓣葉基部附近組織學分析區(qū)域中損傷面積百分比的顯著減少。此外，瓣膜鈣化程度在任意選擇的0.05水平幾乎達到統(tǒng)計顯著的巨大減少可能具有臨床重要性，因為老年人的4丐化AVS是在發(fā)達國家中最常見的狹窄形式。這說明主動脈瓣鈣化的出現(xiàn)不但沒有阻止獲得肽的有益結(jié)果而且這種方法甚至可以消退瓣膜鈣化自身。所述發(fā)現(xiàn)也可以應用于二尖瓣和/或環(huán)的4丐化。
與磷脂復合的ApoA-1模擬肽以和天然ApoA-1相似的方式刺激膽固醇逆向傳送(14)。與對照組相比(于處理2星期后觀察)，用肽處理的兔的總膽固醇的更高循環(huán)水平可以表明加強的組織膽固醇的移動。
這個實施例證明對人使用任何合適的HDL為基礎(chǔ)的療法可以獲得相似的結(jié)果，舉例來說，例如一種或多種HDL或具有HDL-樣效果的肽(有或沒有脂質(zhì))的輸注或推注、口服施用HDL-模擬劑、和/或施用膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)調(diào)質(zhì)、或B族1型(class B, member l)清道夫受體(SRBl)調(diào)質(zhì)或肝X受體(LXR)/類視黃醇X受體(RXR)激動劑、或ATP-結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白l(ABCAl)激動劑、或過氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)激動劑、以及其他。
雖然本文所述的實驗涉及調(diào)節(jié)主動脈瓣狹窄，但是本領(lǐng)域普通技術(shù)人
22模型。
盡管此前通過其優(yōu)選實施方案對本發(fā)明進行了描述，但可以在沒有偏離如附加的權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的精神和性質(zhì)下對其進行改動。
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權(quán)利要求
1. 一種預防或治療受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的受治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述脂質(zhì)傳送激動劑是膽固醇 逆向傳送5敫動劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述瓣膜狹窄是主動脈瓣狹窄。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述瓣膜狹窄是鉤化瓣狹窄。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述脂質(zhì)逆向傳送激動劑是選 自由高密度脂蛋白(HDL)、具有HDL-樣生理學功效的肽、復合脂質(zhì)的具有HDL-樣生理學功效的肽、HDL-模擬劑、膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)調(diào)質(zhì)、 B族1型清道夫受體(SRB1)調(diào)質(zhì)、肝X受體/類視黃醇X受體(LXR/RXR) 激動劑、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白-1 (ABCAl )激動劑以及過氧化物酶體增生物 激活受體(PPAR)激動劑組成的組。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述脂質(zhì)逆向傳送激動劑是載 脂蛋白A-l(ApoA-l)模擬肽/磷脂復合體。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中施用所述ApoA-l模擬肽/磷脂 復合體包括注射所述ApoA-l模擬狀/磷脂復合體于所述受治療者。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述ApoA-l模擬肽/磷脂復合 體以從約1昭到約10g每千克所述受治療者體重的劑量注射。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述ApoA-l模擬肽/磷脂復合 體以從約1 mg到約.5 g每千克所述受治療者體重的劑量注射。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述ApoA-l模擬肽/磷脂復合 體以約25 mg每千克所述受治療者體重的劑量注射。
11. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述ApoA-l模擬肽具有SEQ IDNO:l中所列的序列。
12. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述ApoA-l模擬肽與卵鞘磷脂和1,2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)復合。
13. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述激動劑包括具有SEQ ID NO:l中所列的序列的多肽。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受治療者為哺乳動物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述受治療者為人。
16. —種預防或治療受治療者瓣膜釣化的方法，所述方法包括向需要 其的受治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
17. —種控制受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括增加需要其的 受治療者的膽固醇逆向傳送。
18. —種預防或逆轉(zhuǎn)瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的患者 施用脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
19. 一種控制受治療者瓣膜狹窄的方法，所述方法包括向需要其的受 治療者施用治療有效量的脂質(zhì)逆向傳送激動劑。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中控制所述瓣膜狹窄包括減少 所述瓣膜狹窄進展速率。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中控制所述瓣膜狹窄包括至少 部分地逆轉(zhuǎn)所述瓣膜狹窄。
22. 脂質(zhì)逆向傳送激動劑用于控制受治療者的瓣膜狹窄的應用。
23. 脂質(zhì)逆向傳送激動劑用于制備控制受治療者的瓣膜狹窄的藥物組 合物物質(zhì)的應用。
全文摘要
一種治療瓣膜狹窄的方法。所述方法包括向哺乳動物施用治療有效量的脂質(zhì)(特別是膽固醇)逆向傳送激動劑。最優(yōu)選一種載脂蛋白A-1模擬肽/磷脂復合體，其肽由SEQ ID NO1的氨基酸序列定義。
文檔編號A61K38/17GK101489577SQ200780026891
公開日2009年7月22日 申請日期2007年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月1日
發(fā)明者吉恩-克勞德·塔迪芙 申請人:蒙特利爾心臟病學研究所