專利名稱：：類別-i具體組織蛋白脫乙酰基酶抑制劑與蛋白酶體抑制劑的組合的制作方法類別_1具體組織蛋白脫乙酰基酶抑制劑與蛋白酶體抑制劑的組合本發(fā)明涉及與蛋白酶體抑制劑組合的組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑。涉及它們的制備方法，涉及含有它們的組合物，以及它們作為藥品的用途，例如，作為抑制生血肺瘤的藥品，比如、淋巴腺瘤和血癌。在它們的第一基質(zhì)得到確定之后，即，核組織蛋白，HDAC酶家族已經(jīng)一皮命名。組織蛋白(H2A、H2B、H3和H4)形成八聚配合物，它們周圍的DNA螺旋被纏繞以確定凝聚染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。組織蛋白的乙?；癄顟B(tài)處于受組織蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HATs)(其乙?；?和HDACs支配的動(dòng)態(tài)平tf,HDAC負(fù)責(zé)對(duì)組織蛋白尾部的脫乙酰作用。對(duì)HDAC酶的抑制作用有助于核粒組織蛋白尾部的乙酰化作用，有利于更具有轉(zhuǎn)染能力的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，這反過來導(dǎo)致在細(xì)胞代謝過程(比如細(xì)胞增殖、細(xì)胞程序死亡和分化)涉及的基因產(chǎn)生改變的表達(dá)。近年來，越來越多的另外的非組織蛋白HDAC基質(zhì)已經(jīng)得到了鑒定。將結(jié)合致癌轉(zhuǎn)錄因子至染色質(zhì)上的非規(guī)律和恒定HDAC補(bǔ)充已經(jīng)在特定的血癌和淋巴腺瘤形式中被觀察到了，比如急性早幼粒細(xì)胞性白血病(APL)、非Hodgkm，s淋巴腺瘤和急性骨髓性白血病(AML)。當(dāng)疾病/人惡性病變和分化良好型的雄激素-響應(yīng)前列腺腺癌向表型去分化雄激素非敏感前列腺癌癥發(fā)展時(shí)，蛋白水平上的HDAC1上調(diào)在前列腺癌細(xì)胞中被觀察到。此外，增強(qiáng)的HDAC2表達(dá)已經(jīng)在大多數(shù)人類結(jié)腸癌外植體中被發(fā)現(xiàn)，其由肺瘤抑制器腺瘤病息肉病大腸菌(APC)的缺失引發(fā)。與癌癥中的HDAC/HAT活性平衡一致，已經(jīng)表明，HDAC抑制劑在許多人類腫瘤細(xì)胞線中體外誘發(fā)細(xì)胞-周期停止、終末分化和/或細(xì)胞程序死亡，從而抑制血管形成和在棵鼠的人類異種移植模型中表現(xiàn)出體內(nèi)4元癌活性。酶的HDAC家族通常被分為三類即類別I、II和III。在臨床研究中，當(dāng)前僅僅類別I和II顯著地隱含介導(dǎo)HDAC抑制劑的作用。已經(jīng)表明，由HDAC家族成員1-3和8組成的類別-I組HDACs對(duì)于腫瘤細(xì)胞增殖是至關(guān)重要的。在眾多利用類別-IHDACS使具體啟動(dòng)子靜止的轉(zhuǎn)錄因子中，—最熟知的實(shí)例為核激素受體類別，在它們的配體不存在時(shí)其僅僅結(jié)合HDAC3,和由此保持轉(zhuǎn)染靜止?fàn)顟B(tài)。配合物以配體-依賴方式被分離，例如，通過類視黃醇、雌激素、雄激素等等，導(dǎo)致基因表達(dá)和分化。另一關(guān)鍵實(shí)例是依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶抑制劑p21wafl'eipl的HDACl-依賴靜止。在HDAC抑制劑的抗增殖作用中，p21wafl'eipl誘導(dǎo)的關(guān)鍵作用由以下研究表明，該研究表明，同母系HCT-116細(xì)胞相比，在p2iwaf"^缺失的細(xì)胞中，對(duì)HDAC抑制劑曲古抑菌素A(TSA)的抗性增加6倍。此外，與真性胂瘤抑制基因不同，P21wafl'eipl普遍存在于腫瘤細(xì)胞中，和通過HDAC抑制劑誘發(fā)。組織蛋白并不是類別-IHDACs的唯一基質(zhì)。例如，HDACs1-3脫乙?；阜瘟鲆种破鱬53,結(jié)果其達(dá)到泛素化和降解。因?yàn)閜53為有效的腫瘤抑制器，包括細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞程序死亡，保持該蛋白質(zhì)的低水平對(duì)于允許胂瘤細(xì)胞存活和無控增殖是關(guān)鍵性的。類別-IIHDACs可以分為兩個(gè)亞類包含HDACs4、5、7、9和HDAC9剪接變體MITR的類別-IIa。類別-IIb包括均具有復(fù)制的HDAC域的HDAC6和HDAC10。類別-IIaHDACs不具有固有的組織蛋白脫乙?；富钚?，但是通過發(fā)揮橋接因子的作用調(diào)節(jié)基因表達(dá)，因?yàn)樗鼈兺瑫r(shí)與類別-1HDAC配合物和轉(zhuǎn)錄因子/DNA配合物相聯(lián)系。HDAC6,類別-lib的成員，由于其作為Hsp90脫乙酰基酶一皮識(shí)別而受到了關(guān)注。HDAC抑制劑LAQ824和LBH589已經(jīng)被證實(shí)誘發(fā)Hsp90的脫乙酰作用，<旦是trapoxin和丁酸鈉不具有該作用。Hsp卯脫乙酰酶導(dǎo)致與Hsp90結(jié)合的前-存活和前-增殖委托(client)蛋白質(zhì)相關(guān)的降解。關(guān)鍵的實(shí)例包括Her-2、Bcr-Abl、腎上腺糖皮質(zhì)激素受體、變種(mutant)FLT-3、c-Raf和Akt。除了Hsp90之外，HDAC6還介導(dǎo)導(dǎo)致微管在應(yīng)激狀態(tài)下失穩(wěn)的微管蛋白脫乙酰化作用。HDAC6的生物學(xué)角色進(jìn)一步一皮HDAC6的具體小分子抑制劑tubacm導(dǎo)致a-微管蛋白過乙酰化和降低細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性而不影響細(xì)胞周期進(jìn)展的事實(shí)證實(shí)。僅僅抑制HDAC6的a-微管蛋白脫乙?；赣虻腡ubacin僅僅導(dǎo)致HSP90乙?；暮苌倭可摺Ｅc此一致，發(fā)現(xiàn)HDAC6對(duì)于MCF-7乳腺癌細(xì)胞的雌二醇-刺激的細(xì)胞遷移是關(guān)鍵的。最后，HDAC6在錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的細(xì)胞管理和由細(xì)胞質(zhì)清除這些蛋白質(zhì)中起著至關(guān)重要的作用。由于由HDACs在它們的表達(dá)水平或者活性水平上調(diào)節(jié)的大量細(xì)月包周期調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，因此HDAC抑制劑的抗增殖作用不能與簡(jiǎn)單的活性機(jī)制聯(lián)系。HDAC抑制作用在抗癌治療學(xué)中具有特定的預(yù)期，其中對(duì)涉及生長(zhǎng)抑制、分化和細(xì)胞程序死亡的多種途徑的協(xié)同效應(yīng)在異形病理學(xué)(比如腫瘤形成和生長(zhǎng))的處理中證實(shí)可能是有利的。這些年來，已經(jīng)顯然，HDACs不僅在致癌作用中起著關(guān)鍵作用，而且在多種非惡性分化過程中起著關(guān)鍵作用。對(duì)于類別-IIa4、5、7和9,這是最顯然的。例如，已經(jīng)提出，HDAC7在T細(xì)胞的胸腺成熟中起著至關(guān)重要的作用，而HDAC4已經(jīng)被指可用于軟骨細(xì)胞機(jī)能性肥大和軟骨內(nèi)骨化的調(diào)節(jié)作用。然而，最關(guān)心的問題聚焦于類別-IIaHDACs在肌肉分化中的作用。由于為肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2(MEF2)的轉(zhuǎn)染共-阻遏劑的原因，HDACs4、5、7和9都抑制肌細(xì)胞(肌細(xì)胞)的分化。使用HDAC抑制劑的最普遍毒性是輕度至中度的骨髓抑制。此外，惡心/嘔吐、疲勞和腹瀉是多種臨床試驗(yàn)中的特征副作用。2003年9月18日公開的EP1485365描述了具有以下Markush式的制備、制劑和藥物性能。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其N-氧化物形式、藥學(xué)上可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中n、m、t、R1、R2、R3、R4、L、Q、X、Y、Z和"0具有如所述說明書中所定義的含義。在2006年2月2日公開的WO2006/010750公開了HDAC抑制劑JNJ26481585及其它化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>然而，HDAC抑制劑的治療學(xué)前景超過單個(gè)試劑的應(yīng)用。受HDAC抑制劑影響的分子途徑使得它成為具有前景的聯(lián)合研究候選者?？紤]到效力和/或毒性，需要可以單獨(dú)或者協(xié)同其它治療劑提供臨床優(yōu)點(diǎn)的類別-I具體HDAC抑制劑。同樣，在癌癥治療學(xué)中，蛋白酶體抑制作用表示重要的最新研究策略。蛋白酶體是存在于所有在涉及細(xì)胞周期調(diào)整的蛋白質(zhì)的降解中起作用的細(xì)胞中的多酶配合物。在細(xì)胞周期期間，多種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，包括p53、細(xì)胞周期蛋白和依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶p21wafl'eipl都通過泛素(ubiquitm)-蛋白酶體途徑暫時(shí)降解。對(duì)于細(xì)胞發(fā)展經(jīng)過細(xì)胞周期和經(jīng)受有絲分裂而言，需要這些蛋白質(zhì)的有序降解。此外，對(duì)于轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)需要泛素-蛋白酶體途徑。EP788360、EP1312609、EP1627880、US6066730和US6083903/>開了可以用作蛋白酶體抑制劑的肽硼酸酯和酸化合物。一種N-吡。秦羰基-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酸化合物(PS-341,現(xiàn)在已知為硼替佐米(Bortezomib)或者Velcade(Millenium))在人類胂瘤異種移植才莫型中具有抗癌活性和已經(jīng)被批準(zhǔn)用于治療患有再發(fā)性難治療多發(fā)性骨髓瘤的患者，并且當(dāng)前正在對(duì)另外的適應(yīng)癥進(jìn)行臨床試馬全，包括另外的血液學(xué)癌癥以及實(shí)體肺瘤。硼替佐米通過導(dǎo)致錯(cuò)折疊和其它受損蛋白質(zhì)的出現(xiàn)從而活化細(xì)胞程序死亡的線粒體途徑而誘發(fā)細(xì)胞死亡，例如經(jīng)Bax-或者活性氧類依賴機(jī)制。硼替佐米導(dǎo)致泛素-偶聯(lián)的蛋白質(zhì)被聚集成稱為聚集體的結(jié)構(gòu)。聚集體似乎參與響應(yīng)蛋白酶體抑制作用而被激活的細(xì)胞保護(hù)響應(yīng)，所述細(xì)胞保護(hù)響應(yīng)可能通過將泛素化蛋白質(zhì)往復(fù)運(yùn)送至溶酶體進(jìn)行降解而被激活。硼替佐米-誘發(fā)聚集體構(gòu)造可以利用HDAC抑制劑SAHA(辛二酰苯胺異羥肟酸)進(jìn)4亍斷裂。SAHA還一皮證實(shí)對(duì)體外和體內(nèi)正位胰癌異種移植沖莫型的細(xì)胞程序死亡具有協(xié)同作用(CancerResearch2006;66:(7)3773陽3781)。平(JournalofBiologicalChemistry2005;280:(29)26729-26734)。SAHA和LAQ824與硼替佐米的協(xié)同作用涉及到它們的HDAC6抑制活性。進(jìn)一步需要提高蛋白酶體抑制劑對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制效力和提供所述試劑的較低劑量以降低對(duì)患者不利的毒副作用的可能性。當(dāng)前，并沒有關(guān)于乙?；潭扰c腫瘤響應(yīng)的相關(guān)性的充分?jǐn)?shù)據(jù)?？焖佟⒑?jiǎn)單和易于重現(xiàn)的定量由下述類別-I具體HDAC抑制劑或者包含所述HDAC抑制劑的組合物所引起的組織蛋白和非組織蛋白基質(zhì)的乙?；潭鹊姆椒▽?duì)于它們的未來應(yīng)用是至關(guān)重要的。本發(fā)明的目的是提供類別-I具體HDAC抑制劑和蛋白酶體抑制劑與如下所述類型的HDAC抑制劑的治療學(xué)組合，其具有強(qiáng)烈和特征的乙?；饔?、類別-I具體HDAC抑制作用、對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的有利抑制作用和降低的不期望副作用。因此，根據(jù)本發(fā)明，我們提供了蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合其藥學(xué)上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中Rs選自氫；噻吩基；被二(C"烷基)氨基Cw烷基或者C"烷基哌嗪基C"烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；或者被一個(gè)獨(dú)立地選自二(Q-4烷基)氨基Cw烷氧基、二(d—4烷基)氨基、二(d—4烷基)氨基4烷基、二(d—4烷基)氨基C!—4烷基(d-4烷基)氨基Cl4烷基、吡咯烷基Cw烷基、吡咯烷基d-4烷氧基或者d-4烷基哌。秦基Cw烷基的取代基取代的苯基。從取代基畫入二環(huán)系統(tǒng)中的線表示所示4建可以連接在二環(huán)系統(tǒng)的任何適宜環(huán)原子上。如以上定義和下文中所使用，d—4烷基的定義為具有1~4個(gè)碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，比如，例如為曱基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基等等；Cm烷基包括CM烷基及其具有5~6個(gè)碳原子的高級(jí)同系物，比如，例如為戊基、2-甲基-丁基、己基、2-曱基戊基等等。感興趣的式(I)化合物為其中"~為(a-2)的那些式(I)化合物。還感興趣的化合物為其中115為氫的那些式(I)化合物。仍然感興趣的化合物為其中RS位于對(duì)位的那些式(I)化合物。優(yōu)選的式(I)化合物為化合物No.6、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172和No.173,對(duì)應(yīng)于EP1485365中21-23頁表才各中所示的編號(hào)。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>最優(yōu)選的式(I)化合物為其中為(a-2)和115為氫的化合物(EP1485365中化合物No.6(R306465)),或者其藥學(xué)上可接受的加成鹽。在此使用的術(shù)語"組蛋白脫乙?；?，，和"HDAC"意圖是指任何從組蛋白N-末端賴氨酸殘基的s-氨基上除去乙酰基的酶家族中的一種。除非在上下文中另有說明，術(shù)語"組蛋白"意圖是指從任何物種中得到的任意組蛋白蛋白，包才舌H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。人類HDAC蛋白或者基因產(chǎn)品，包括但不限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC畫9、HDAC-10和HDAC-11。所述組蛋白脫乙?；高€可以源于原生動(dòng)物或者真菌源。術(shù)語"組織蛋白脫乙?；敢种苿?或者"組織蛋白脫乙酰基酶的抑制劑"用于鑒定能夠與組織蛋白脫乙?；赶嗷プ饔煤鸵种扑幕钚?更特別而言是它的酶活性)的化合物。抑制組織蛋白脫乙?；该富钚砸馕吨档徒M織蛋白脫乙?；笍慕M織蛋白或者其它蛋白質(zhì)基質(zhì)上除去乙?；哪芰Α?yōu)選所述抑制作用是特異'〖生的，即組織蛋白脫乙酰基酶抑制劑以低于產(chǎn)生其它的、不相關(guān)的生物作用所需的抑制劑濃度的濃度降低組織蛋白脫乙酰基酶從組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)基質(zhì)中除去乙?；哪芰?。術(shù)語"類別-I特異性HDAC抑制作用"或者"類別-I特異性HDAC抑制劑"用于鑒定以低于產(chǎn)生其它類型HDAC酶(比如，例如類別-IIa或者類別libHDACs)的抑制作用所需的抑制劑濃度的濃度降低類別-IHDAC族成員(HDAC1-3或者8)的酶活性的化合物。在此使用的術(shù)語"蛋白酶體"和"泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)"意圖是指UPS中所有組分的任何一種結(jié)構(gòu)和功能，包括但不限于a)泛素(Ub)和泛素樣蛋白質(zhì)(Ulp);f.e.SUMO、NEDD8和ISG15等等，b)泛素單體、K48-連接多泛素鏈和K63-連接多泛素鏈等等，c)El泛素-激活酶；f.e.Elub、ElSUMO、E1NEDD^。E1ISG15等等，d)El泛素-激活酶的亞單位；f.e.APPBP1、UBA3、SAE1和SAE2等等，e)E2泛素-偶聯(lián)酶；f.e.UBC9、UBC12和UBC8等等，f)E3泛素連接酶；f.e.RING隱fmgerE3s、simpleRING-fmgerE3s、cullm-基RING-fingerE3s、RBX1畫/RBX2陽依賴E3s、HECT-域E3s、U-boxE3s等等，g)SCF(SKPl畫Cullinl-F-box)E3泛素連接酶配合物，f.e.SCFSKP2、SCFB—tRcp和SCFFbw7等等，h)cullins,f.e.CUL1、CUL2、CUL3、CUL4和CUL5等等，i)F-box蛋白質(zhì)，f.e.SKP2、B-TRCP蛋白質(zhì)、FBW蛋白質(zhì)等等，j)其他基質(zhì)特異性接合體，f.e.BTB蛋白質(zhì)、SOCS-box蛋白質(zhì)、DDB1/2、VHL等等，k)蛋白酶體和它的組分等等，1)金屬異肽酶RPNll,蛋白酶體lid的亞單位，在它們纟皮破壞之前去泛素化UPS靶體，等等，m)金屬異肽酶CSN5，COP9-signalosome配合物的亞單位，負(fù)責(zé)從cullins中除去NEDD8,等等，n)通過E1泛素-激活酶進(jìn)行的活化步驟，其中Ub/Ulp首先在它的C-末端甘氨酸殘基上進(jìn)行腺普酸化，然后再在它的C-末端上被填充為碌u醇酯，o)Ub/Ulp/人E1泛素-激活酶向E2泛素偶4關(guān)酶的傳送，p)泛素-偶聯(lián)物的識(shí)別，q)基質(zhì)-泛素配合物的傳送至蛋白酶體和與其結(jié)合，r)泛素除去，或者s)基質(zhì)降解。術(shù)語"蛋白酶體抑制劑"和"泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的抑制劑"用于鑒定能夠與UPS中的正常的、被改變的、過活化或者過表達(dá)的一種組分相互作用和抑制它的活性(更特別而言它的酶活性)的化合物。抑制UPS的酶活性意味著降低UPS組分實(shí)施其活性的能力。優(yōu)選所述抑制作用是特異性的，即蛋白酶體抑制劑以低于產(chǎn)生其它的、不相關(guān)的生物作用所需的抑制劑濃度的濃度降低UPS組分的活性。UPS組分活性的抑制劑包括但不限于a)通過阻斷Ub/Ulp訪問腺苦酸位置或者通過阻斷訪問ATP而抑制Ub或者Ulp的腺苷酰作用的抑制劑；f.e.伊馬替尼(Gleevec;Novartis)等等,b)E3或者E3-配合物與E2相互作用的干<1尤劑，c)基質(zhì)和E3或者E3-配合物上的基質(zhì)相互作用域之間相互作用的阻斷劑，比如阻斷p53(基質(zhì))和MDM2(RING-fingerE3)之間的相互作用，f.e.nutlins(通過結(jié)合MDM2)、RITA(通過結(jié)合p53的N末端)等等，d)E3連接酶配合物的阻斷劑，e)基質(zhì)與泛素連接酶的人工召集，f.e.protacs等等，f)蛋白酶體和它的組分的抑制劑，f.e.硼替佐米、carfilzomib、NPI-0052、Bsc2118等等,g)泛素/Ulp除去抑制劑，比如金屬異肽酶RPN11和CSN5的抑制劑，或者h(yuǎn))修飾多泛素鏈，即ubistatins等等。如上文中所記載的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽意指包括式(I)化合物能夠形成的治療活性的無毒酸加成鹽形式。通過用適當(dāng)?shù)乃崽幚硭鰤A形式，可以將具有堿性性能的式(I)化合物轉(zhuǎn)化為它們藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚?，例如，無機(jī)酸，比如氬卣酸(例如，氫氯酸或者氫溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸等等；或者有機(jī)酸，比如，例如為乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、焦葡萄酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲石黃酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)曱苯磺酸、環(huán)拉酸、水楊酸、對(duì)氨基水楊酸和樸酸等等。通過用適宜的有機(jī)或者無機(jī)堿處理所述酸形式，可以將具有酸性性能的式(I)化合物轉(zhuǎn)化成它們藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。適當(dāng)?shù)膲A鹽形式包括，例如，銨鹽、堿金屬和堿土金屬鹽(例如鋰、鈉、鉀、鎂和鈣鹽等等)，與有機(jī)堿形成的鹽，例如本乍生、N-曱基-D-葡糖胺、哈胺鹽，和與氨基酸，比如，例如精氨酸和賴氨酸等等形成的鹽。術(shù)語"酸或者堿加成鹽"還包括式(I)化合物能夠形成的水合物和溶劑加成形式。所述形式的實(shí)例為，例如水合物和醇化物等等。在上文使用的術(shù)語"式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)形式"定義為式(I)化合物可能具有的所有由相同碳原子通過相同鍵接順序形成但是具有不可互變的不同立體結(jié)構(gòu)的化合物。除非另作說明或者表明，化合物的合物。所述混合物可以含有基本分子結(jié)構(gòu)的所述化合物的所有非對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體。式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)形式(純形式或者相互混合的混合物形式)都意圖包括的本發(fā)明范圍之內(nèi)。中未得到;確說明，但是i圖將這種形式包括在本i明范圍內(nèi)。^無論在下文何時(shí)使用時(shí)，術(shù)語"式(i)化合物"都意圖還包括其藥學(xué)上可接受的酸或者堿加成鹽和所有立體異構(gòu)形式。根據(jù)本發(fā)明，特別優(yōu)選的蛋白酶體抑制劑為硼替佐米。硼替佐米在市場(chǎng)上以商品名Velcade從Millennium購買到，并且可以例如如EP788360、EP1312609、EP1627880、US6066730和US6083903中所述或者通過與此類似的方法制備得到。本發(fā)明還涉及^f艮據(jù)本發(fā)明的用于醫(yī)療治療中的組合物，例如用于抑制胂瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及抑制人類對(duì)象中腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包括給藥對(duì)象有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物來抑制細(xì)胞異常生長(zhǎng)的方法，包括變形的細(xì)胞。細(xì)胞的異常生長(zhǎng)是指獨(dú)立于正常調(diào)節(jié)機(jī)制的細(xì)胞生長(zhǎng)(例如，接觸性抑制的喪失)。這包括通過引起癌細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、成體終末分化和/或細(xì)胞程序死亡直接抑制肺瘤生長(zhǎng)和通過抑制遷移、和肺瘤細(xì)胞存活或者肺瘤新血管形成間接抑制腫瘤生長(zhǎng)。本發(fā)明還提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物至需要所述治療的對(duì)象(并且更特別而言，為人類)而抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法。特別是，本發(fā)明提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物而抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法。本發(fā)明特別適用于治療胰癌、淋巴樣系統(tǒng)的生血腫瘤(例如急性淋巴母細(xì)胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細(xì)胞血癌、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病急性變、伯基特氏腫瘤和多發(fā)性骨髓瘤)、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、非霍金森氏淋巴腺瘤、黑素瘤、前列腺癌癥、乳腺癌和結(jié)腸癌?？梢砸种频钠渌[瘤的實(shí)例包括但不限于甲狀腺小嚢癌、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、間質(zhì)源腫瘤(例如纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤)、畸胎癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤、皮膚良性胂瘤(例如角化棘皮瘤)、腎癌、卯巢癌、膀胱癌和表皮癌。本發(fā)明還提供了通過給藥需要所述治療的哺乳動(dòng)物(并且更特別是人類)有效量的式(I)組織蛋白去乙?；敢种苿┲委熂毙粤馨湍讣?xì)胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細(xì)胞血癌、慢性粒細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病急性變、伯基特氏肺瘤和多發(fā)性骨髓瘤的方法。本發(fā)明還提供了通過給藥需要所述處理的對(duì)象(例如，哺乳動(dòng)物(并且更特別是人類))有效量的單獨(dú)使用或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)組織蛋白去乙?；敢种苿﹣碇委熆顾幮苑瘟龅姆椒?，比如但不限于淋巴樣系統(tǒng)的生血性肺瘤，比如抗藥性急性淋巴母細(xì)胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細(xì)胞性白血病、抗藥性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細(xì)胞性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細(xì)胞血癌、抗藥性慢性粒細(xì)胞性白血病、抗藥性慢性粒細(xì)胞性白血病急性變、抗藥性伯基特氏腫瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明特別適用于處理抗藥性多發(fā)性骨髓瘤，更特別是抗蛋白酶體抑制劑的多發(fā)性骨髓瘤，更特別是硼替佐米抵抗的多發(fā)性骨髓瘤的處理。術(shù)語"抗藥性多發(fā)性骨髓瘤"包括但不限于抗一種或者多種選自以下藥物的多發(fā)性骨髓瘤沙立度胺、地塞米松、來那度胺、阿霉素、長(zhǎng)春新;咸、環(huán);壽酰胺、帕米膦酸、米爾法蘭、去纖苷、潑尼矛>、darinaparsin、belinostat、伏林司他、PD0332991、LBH589、LAQ824、MGCD0103、HuLuc63、AZD6244、帕唑帕尼、P276-00、plitidepsin、苯達(dá)莫司汀、坦螺旋霉素、enzastaurin、哌立福新、ABT-737或者RAD001。術(shù)語"抗藥性多發(fā)性骨髓瘤"還包括再發(fā)或者難治的多發(fā)性骨髓瘤。術(shù)語"抗藥的"是指表明固有抗性或者獲得性抗性的狀態(tài)。"固有抗性"是指關(guān)鍵基因的癌細(xì)胞在相關(guān)途徑中的特征表達(dá)靠模，包括但不限于細(xì)胞程序死亡、細(xì)胞發(fā)展和DNA修復(fù)，同它們的正常對(duì)照相比，其促進(jìn)癌細(xì)胞具有更快生長(zhǎng)的能力。"獲得性抗性"是指在胂瘤形成和發(fā)展過程中產(chǎn)生的可以影響癌細(xì)胞對(duì)藥物敏感性的多因素現(xiàn)象。獲得性抗性可以由于數(shù)種機(jī)制，比如但不限于藥物-靶體的改變、降低的藥物累積、胞內(nèi)藥物分布的變化、降低的藥物-靶體相互作用、增強(qiáng)的解毒響應(yīng)、細(xì)胞-周期反調(diào)節(jié)作用、增強(qiáng)的損傷-DNA修復(fù)和降低的凋亡響應(yīng)。所述機(jī)制中的數(shù)種可以同時(shí)存在和/或可以彼此相互作用。它們的活化和/或鈍化可以由于遺傳性或者次生性事件產(chǎn)生或者由于oncoviral蛋白質(zhì)的存在而產(chǎn)生。獲得性抗性可以對(duì)單個(gè)藥物存在，但是還可以對(duì)多種具有不同化學(xué)結(jié)構(gòu)和不同作用機(jī)制的藥物更廣泛的存在。這種抗性形式^C稱為多藥物抗性。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以用于其它治療學(xué)目的，例如a)在輻射腫瘤以治療癌癥之前、期間或者之后通過給藥才艮據(jù)本發(fā)明的化合物來促進(jìn)肺瘤對(duì)放射治療的敏感性；b)治療關(guān)節(jié)病和骨病理學(xué)癥狀，比如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、少年關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；c)抑制平滑肌細(xì)胞增殖，包括血管增殖疾病、動(dòng)脈粥樣硬化癥和再狹窄；d)治療炎性癥狀和皮膚病，比如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、過敏性鼻炎、移植對(duì)宿主疾病、結(jié)膜炎、哞喘、ARDS、貝切特氏病、移植排斥、蕁麻滲、過敏性皮炎、斑形脫發(fā)、硬皮癥、皮滲、濕滲、皮膚肌炎、粉刺、糖尿病、系統(tǒng)紅斑狼瘡、川崎氏疾病、多發(fā)性腦硬化、氣腫、嚢性纖維化和慢性支氣管炎；e)治療子宮內(nèi)膜異位、子宮的纖維狀、功能性月經(jīng)失調(diào)和子宮內(nèi)膜增生；f)治療眼睛血管形成，包括影響視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管的血管病變；g)治療心臟功能障礙；h)抑制免疫抑制癥狀；比如HIV感染的治療；i)治療腎功能障礙；j)4中制內(nèi)分)必病癥；k)抑制糖原異生功能障礙；1)治療例如帕金森氏癥的神經(jīng)病理學(xué)或者導(dǎo)致認(rèn)知障礙的神經(jīng)病理學(xué)，例如，阿爾茨海默氏病或者多谷酰胺相關(guān)的神經(jīng)元疾病；m)治療精神錯(cuò)亂，例如精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁癥、焦慮和津青神?。籲)抑制神經(jīng)fl肉病理學(xué)，例如力幾萎縮性側(cè)索硬化；o)治療脊髓性肌萎縮；p)治療其它通過加強(qiáng)基因表達(dá)能夠檢驗(yàn)從而進(jìn)行治療的病理學(xué)癥狀；q)增強(qiáng)基因療法；r)抑制脂肪生成；s)治療寄生蟲病，比如瘧疾。由此，本發(fā)明公開了用作藥品的以上所述組合物，以及單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療一種或者多種上述狀況的藥物的用途。'由此，本發(fā)明公開了單獨(dú)或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療急性淋巴母細(xì)胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細(xì)胞血癌、慢性粒細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病急性變、伯基特氏腫瘤和多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途。本發(fā)明還公開了單獨(dú)或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療抗藥性腫瘤的藥物的用途，所述腫瘤比如但不限于淋巴樣系統(tǒng)的生血性腫瘤，例如抗藥性急性淋巴母細(xì)胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細(xì)胞性白血病、抗藥性急性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細(xì)胞性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細(xì)胞血癌、抗藥性慢性粒細(xì)胞性白血病、抗藥性慢性粒細(xì)胞性白血病急性變、抗藥性伯基特氏肺瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明進(jìn)一步公開了單獨(dú)或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療抗藥性多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途，更特別是抗蛋白酶體抑制劑的多發(fā)性骨髓瘤，更特別是硼替佐米抵抗性的多發(fā)性骨髓瘤。蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑可以同時(shí)(例如，在分離或者單元組合物中)或者以任何次序順序給藥。在后一情形中，兩種化合物將在同一周期內(nèi)和以足以確保有利的或者協(xié)同作用能夠?qū)崿F(xiàn)的量和方式給藥。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選的給藥方法和次序以及各種組合組分的相應(yīng)劑量和制度將取決于給藥的具體蛋白酶體抑制劑和HDAC抑制劑、組合的給藥途徑、進(jìn)行治療的具體肺瘤和進(jìn)行治療的具體主體。最優(yōu)的給藥方法和次序以及劑量和制度可以由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員利用常步見方法和考慮本文給出的信息輕易確定。本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有作為第一活性成分的式(I)HDAC抑制劑和作為笫二活性成分的蛋白酶體抑制劑的產(chǎn)品，該產(chǎn)品是在患有癌癥的患者治療中用于同時(shí)、分離或者順序應(yīng)用的聯(lián)合制劑。本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員根據(jù)以下試驗(yàn)結(jié)果可以4艮容易地確定其有效量。通常，預(yù)期式(I)化合物和蛋白酶體抑制劑的治療有效量為0.005mg/kg~100mg/kg體重，并且特別是0.005mg/kg~10mg/kg體重。在一天之中，可以適當(dāng)?shù)貙⑺鑴┝恳赃m當(dāng)?shù)拈g隔分為兩次、三次、四次或者更多次亞劑量給藥。可以將所述亞劑量配制成單位劑型，例如，每個(gè)單位劑型含有0.5~500mg活性成分，特別是10mg~500mg。鑒于它們的有效藥理學(xué)性能，可以將根據(jù)本發(fā)明的組合的組分，即蛋白酶體抑制劑和HDAC抑制劑配制成用于多種給藥目的的多種藥物形式?？梢詫⑦@些組分分離地配制在單個(gè)藥物組合物中或者含有這兩種組分的單元藥物組合物中。HDAC抑制劑可以通過本領(lǐng)域已知的方法制備和配制成藥物組合物，并且特別是根據(jù)在本文提及的公開和在此引入作為參考的專利說明書中描述的方法。因此，本發(fā)明還涉及含有蛋白酵體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑以及一種或者多種藥物載體的藥物組合物。為了制備根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物，將有效量的為活性成分的堿或者酸加成鹽形式的具體化合物與藥學(xué)上可接受的載體合并成密混混合物，取決于期望給藥的制劑形式，所述載體可以為多種形式。這些藥物組合物合宜地為適宜的單元?jiǎng)┬停瑑?yōu)選用于口服給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥或者經(jīng)腸胃外注射給藥的單元?jiǎng)┬?。例如，在制備口服劑型的組合物中，可以使用任何常用的藥物介質(zhì)，例如在口服液體制劑(例如懸浮液、糖漿劑、酏劑和溶液)的情況下，可以使用例如水、乙二醇、油和醇等等；或者在粉劑、丸劑、膠嚢和片劑的情況下，可使用固體載體，例如淀粉、糖、高嶺土、潤(rùn)滑劑、結(jié)合劑和崩解劑等等。因?yàn)楸阌诮o藥，片劑和膠嚢表示最有利的口服劑量單位形式，在此情況下顯然使用固體藥物載體。對(duì)于胃腸外組合物，所述載體通常包括無菌水，至少含有大部分無菌水，不過也可以包含其它成分，例如，溶解輔助劑。例如，可以制成可注射液劑，其中載體包括鹽水溶液、葡萄糖溶液或者鹽水和葡萄糖溶液的混合物。還可以將其制成可注射混懸劑，在這種情況下可以使用適當(dāng)?shù)囊后w載體和助懸劑等等。在適宜于經(jīng)皮給藥的組合物中，所述載體任選含有滲透增強(qiáng)劑和/或適宜的潤(rùn)濕劑，任選與4支小比例的任何性質(zhì)的適宜添加劑聯(lián)合使用，所述添加劑不能對(duì)皮膚產(chǎn)生任何顯著的有害作用。所述添加劑可以便于對(duì)皮膚的給藥和/或可以有助于制備期望的組合物。這些組合物可以以多種方法《合藥，例如，作為透皮貼片、作為spot-on或者作為膏劑。為了便于給藥和使劑量一致，將上述藥物組合物配制成單位劑型是特別有利的。在本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中使用的單位劑型是指適于用作單位劑量的物理分離單位，每個(gè)單位含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生期望的治療作用的預(yù)定量活性成分以及所需要的藥物載體。上述單位劑型的實(shí)施例是片劑(包含刻痕片劑或者糖衣片劑)、膠嚢、丸劑、粉劑包、紙嚢劑、注射溶液或者懸浮液、一茶匙容量的制劑和一湯匙容量的制劑等等，及其隔離的多重形式。在整個(gè)治療期間，可以適當(dāng)?shù)貙⑺璧慕M合中各組分劑量以適當(dāng)?shù)拈g隔分為兩次、三次、四次或者更多次亞劑量給藥?？梢詫⑺鰜唲┝颗渲瞥蓡挝粍┬?，例如，在所有情況下每個(gè)單位劑型獨(dú)立地含有0.01~500mg各活性成分，例如0.1~200mg和特別是1~100mg。術(shù)語"組織蛋白或者其他蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)作用"表示誘導(dǎo)HDAC基質(zhì)的乙酰化狀態(tài)，所述HDAC基質(zhì)比如但不限于組織蛋白，例如組織蛋白3、組織蛋白4等等；微管蛋白，例如a-微管蛋白等等；熱震蕩蛋白質(zhì)，例如Hsp90等等。術(shù)語"由所述乙?；δ苄哉{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)作用，，表示比如但不限于誘導(dǎo)Hsp70、誘導(dǎo)p21等等的副作用。本發(fā)明還涉及表征單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)HDAC抑制劑的方法，包括測(cè)定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量，或者通過所述乙?；δ苷{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)量。更特別是，本發(fā)明涉及表征單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)HDAC抑制劑的方法，包括測(cè)定樣品中的以下量a)組織蛋白3的乙?；T導(dǎo)量，組織蛋白4的乙?；T導(dǎo)量，或者p21的誘導(dǎo)量和b)a-微管蛋白的乙酰化誘導(dǎo)量，Hsp90的乙?；T導(dǎo)量，或者Hsp70的誘導(dǎo)量。最具體而言，本發(fā)明涉及以上方法，其中獲得a)下的誘導(dǎo)所需的濃度低于獲得b)下誘導(dǎo)所需的濃度。測(cè)定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量或者通過所述乙酰化功能化調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量可以包括確定響應(yīng)處理的患者和由此可以對(duì)人類癌癥的治療具有有益作用。測(cè)定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量或者通過所述乙酰化功能化調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量可以包括監(jiān)控對(duì)患者治療的效力和由此可以對(duì)人類癌癥的治療具有有益作用。測(cè)定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量或者通過所述乙酰化功能化調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)量可以包括預(yù)測(cè)對(duì)所述處理的治療學(xué)響應(yīng)和由此可以對(duì)人類癌癥的治療具有有益作用。測(cè)定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量或者通過所述乙?；δ芑{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量可以包括確定響應(yīng)處理的患者、監(jiān)控患者中所述治療的效力和預(yù)測(cè)對(duì)處理的治療學(xué)響應(yīng)，并且由此可以對(duì)人類癌癥的治療具有有益作用。由此，本發(fā)明還涉及單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)類別-I特異性HDAC,f制劑的用途，其中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的過乙酰化誘導(dǎo)作用或通過所述乙醜化功能化調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)作用對(duì)人類癌癥的治療具有有益作用。樣品可以來源于已經(jīng)用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理過的細(xì)月包。樣品還可以來源于受病癥影響的組織和/或用式(I)HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)HDAC抑制劑的組合處理的個(gè)體。細(xì)胞可以是已經(jīng)與所述HDAC抑制劑或者所述組合接觸的培養(yǎng)細(xì)可以將所述抑制劑或者所述組合加入到細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。細(xì)月包還可以來源于組織和/或用所述抑制劑或者所述組合處理的個(gè)胞體優(yōu)選所述表征方法僅僅包括體外進(jìn)行的步驟。因此，根據(jù)該實(shí)施方通常將細(xì)胞進(jìn)行處理成適于所用方法、確定組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)作用或通過所述乙?；δ芑{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)作用的狀態(tài)。所述處理可以包括均化作用、提取、固定、洗滌和/或透性化。處理方法主要取決于用于測(cè)定組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)作用或通過所述乙酰化功能化調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)作用的方法。樣品可以是來源于專利的活組織檢查。可以對(duì)所述活組織檢查進(jìn)行進(jìn)一步處理，從而得到處于適于用于確定組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)作用或通過所述乙?；δ芑{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)作用的方法的狀態(tài)的樣品。蛋白質(zhì)的乙酰化量或者誘導(dǎo)蛋白量可以利用抗體確定。在此使用的術(shù)語"抗體"表示免疫球蛋白或者具有相同結(jié)合專一性的其衍生物。根據(jù)本發(fā)明使用的抗體可以是單克隆抗體或者來源于或者包含于多克隆抗血清的抗體。術(shù)語"抗體"進(jìn)一步表示比如Fab、F(ab，)2、Fv或者scFv片l殳的書f生物?？贵w或者其衍生物可以來源于天然來源或者可以(半)合成生產(chǎn)?？梢?吏用本領(lǐng)域通常已知的Western印跡法?？梢詫?duì)細(xì)月包材料或者組織進(jìn)行均質(zhì)化和用變性和/或還原劑處理，從而獲得樣品?？梢詫悠坟?fù)載在聚丙烯酰胺凝膠上以分離蛋白質(zhì)，隨后將其轉(zhuǎn)到薄膜或者直接在固相上進(jìn)行點(diǎn)樣。然后，使抗體與樣品接觸。在一個(gè)或者多個(gè)洗滌步驟之后，結(jié)合的抗體利用本領(lǐng)域已知的工藝檢測(cè)。在對(duì)組織材料e例如實(shí)體舯瘤力t切-片)-iM"齒定和透性化之后，可以應(yīng)用免疫組織化學(xué)，然后抗體用樣品培養(yǎng)，和在一個(gè)或者多個(gè)洗滌步驟之后對(duì)結(jié)合抗體進(jìn)行檢測(cè)。組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量或通過所述乙?；δ芑{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量可以通過ELISA進(jìn)行確定?？梢栽O(shè)計(jì)多種ELISA形式。在一種形式中，將抗體固定在比如微孔板的固相上，隨后阻斷非特異結(jié)合位點(diǎn)和用樣品進(jìn)行培養(yǎng)。在另一形式中，樣品首先與固相接觸從而固定包含于樣品中的乙?；鞍踪|(zhì)和/或誘發(fā)的蛋白質(zhì)。在阻斷和任選洗滌之后，使抗體與固定的樣品接觸。組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙酰化誘導(dǎo)量或通過所述乙?；δ芑{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量可以通過流式細(xì)胞計(jì)進(jìn)行確定。對(duì)細(xì)胞，比如細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞或者血細(xì)胞或者來自于骨髓的細(xì)胞進(jìn)行固定和透性化，從而使得抗體達(dá)到乙?；暮?或誘發(fā)的蛋白質(zhì)。在任選的洗滌和阻斷步驟之后，使抗體與細(xì)胞接觸。為了測(cè)定具有與乙?；暮?或誘發(fā)的蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體的細(xì)胞，根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行流細(xì)胞計(jì)數(shù)法。為了測(cè)定HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合是否具有它的活性，可以確定參照樣品中蛋白質(zhì)的乙酰化量或者蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量，其中參照樣品來源于未經(jīng)所述HDAC抑制劑或者所述組合處理的細(xì)胞。樣品和參照樣品中蛋白質(zhì)的乙?；亢?或誘導(dǎo)蛋白的量的測(cè)定可以平行進(jìn)行。在細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的情形中，提供兩種細(xì)胞組合物，其中之一用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理，而另一個(gè)未經(jīng)處理。隨后對(duì)兩種組合物進(jìn)行進(jìn)一步處理和對(duì)蛋白質(zhì)的乙?；亢?或誘導(dǎo)蛋白量分別進(jìn)行確定。另外地，為了確定HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合是否具有它的活性，可以測(cè)定對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。在患者的情形中，樣品來源于已經(jīng)用式(I)HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)HDAC抑制劑的組合處理的患者。參照樣品來源于患有相同病癥的未用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理的另一患者或者來源于健康個(gè)體。參照樣品來源的組織相應(yīng)于樣品來源的組織。例如，如果樣品來源于乳腺癌患者的肺瘤組織，參照樣品同樣來源于乳腺癌患者的腫瘤組織或者健康個(gè)體的乳房組織。還可以規(guī)定樣品和參照樣品來源于相同的個(gè)體。在這種情形中，參照樣品來源的組織由個(gè)體中得的后效果。試驗(yàn)部分A.藥理學(xué)實(shí)施例對(duì)于對(duì)A2780肺瘤細(xì)胞確定的式(I)化合物的細(xì)胞活性，利用測(cè)定細(xì)胞毒性或者存活的比色定量法(MosmannTim,JournalofImmunologicalMethods65:55-63,1983),參考EP1485365的試驗(yàn)部分。HDAC抑制劑的抗增殖作用已經(jīng)與由HDAC家族成員1-3和8組成的類別1HDACs的抑制作用相關(guān)聯(lián)。當(dāng)與JNJ26481585、SAHA、LBH-589和LAQ-824相比時(shí)，R306465對(duì)由A2780細(xì)胞免疫沉淀的HDAC1的活性和它的效能可以發(fā)現(xiàn)于實(shí)施例A.l中。當(dāng)與JNJ26481585、SAHA、LBH-589和LAQ-824相比時(shí)，R306465對(duì)HDAC8人類重組細(xì)胞酶的活性和它的效能可以發(fā)現(xiàn)于實(shí)施例A.2.中。進(jìn)一步研究R306465是否調(diào)節(jié)HDAC1基質(zhì)組織蛋白3(H3)和組織蛋白4(H4)的乙酰化狀態(tài)。同樣還要研究對(duì)A2780卵巢癌細(xì)胞中的細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑p2rafl'"pl的誘導(dǎo)作用。由于組織蛋白乙?；饔玫慕Y(jié)果，P2iwaf"^被再壓縮，和在響應(yīng)HDAC抑制劑的細(xì)胞周期停滯誘導(dǎo)作用中起著關(guān)鍵作用(參見實(shí)施例A.3.)。為了評(píng)價(jià)HDAC6的抑制作用，和化合物對(duì)HDAC1與HDAC6的相對(duì)效能，對(duì)它的基質(zhì)微管蛋白的乙?；饔靡约盀镠sp90乙?；饔媒Y(jié)果的Hsp70的誘導(dǎo)作用進(jìn)行監(jiān)控(參見實(shí)施例A.3.)。實(shí)施例A:式(I)化合物的類別-I特異性和乙?；饔脤?shí)施例A.1:由A2780細(xì)胞免疫沉淀的HDAC1酶的抑制作用對(duì)于HDAC1活性測(cè)定，HDAC1由A2780細(xì)l包溶解產(chǎn)物中免疫沉淀，并按照所示的HDAC抑制劑的濃度曲線，和與H4肽的[3H]乙?；?標(biāo)記的片段(50.000cpm)[生物素-(6-氨基己?；?hexanoic))Gly-Ala-(乙醜基[3H]Lys-Arg-His-Arg-Lys畫Val-NH2](AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)—起培養(yǎng)。對(duì)HDAC活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，測(cè)量釋放的游離乙?；?duì)予三個(gè)獨(dú)立試i^，緒果表示為平均IC知值士SD。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例A.2:HDAC8人類重組細(xì)胞酶的抑制作用對(duì)于人類重組細(xì)胞HDAC8的抑制作用，使用HDAC8Colorimetric/FlourimetricActivityAssay/DrugDiscoveryKit(Biomol;Cat.nr.AK-508)。對(duì)于三個(gè)獨(dú)立試馬全，結(jié)果表示為平均ICso值(nM)±SD。測(cè)定按一式兩份進(jìn)行，和IC5o的標(biāo)準(zhǔn)誤差使用GraphpadPrism(GraphpadSoftware)計(jì)算。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例A.3:細(xì)胞HDAC1基質(zhì)的乙?；饔煤蚿2lwafl'Mpl的誘導(dǎo)作用人類A2780卵巢癌細(xì)胞用0、1、3、10、30、100、300、1000和3000nM的化合物培養(yǎng)24h。制備全細(xì)胞溶解產(chǎn)物和通過SDS-PAGE進(jìn)行分析。乙?；腍3和H4組織蛋白水平、H3蛋白質(zhì)的全水平和p2iwan'c^蛋白質(zhì)的水平使用兔多克隆和鼠單克隆抗體的適當(dāng)稀釋物檢測(cè)，和隨后進(jìn)行增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光(ECL)檢測(cè)。乙?；腍3和H4的水平使用得自于UpstateBiotechnology的抗體(Cat.nr.06-299和06-866)檢測(cè)，H3蛋白質(zhì)的全水平使用得自于Abeam的抗體(Cat.nr.abl791)檢測(cè)，和？2廣我叫]蛋白質(zhì)的水平4吏用得自于TransductionLaboratories的抗體(Cat.nr.C24420)檢測(cè)?？贵w在室溫下培養(yǎng)1-2h或者在4。C培養(yǎng)過夜。為了控制相同的負(fù)載，對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行汽提和用鼠單克隆抗肌動(dòng)蛋白IgM(Ab-l,OncogeneResearchProducts)進(jìn)行再探針檢測(cè)。為了控制核酸蛋白的提取效率，對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行汽提和用抗核纖層蛋白Bl(Zymed;Cat.nr.33.2000)進(jìn)行再探針檢測(cè)。然后，根據(jù)廠商說明書，通過化學(xué)發(fā)光(PierceChemicalCo)或者熒光(Odyssey)使蛋白質(zhì)-抗體配合物可視化。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三次。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>實(shí)施例A.4.微管蛋白的乙?；饔煤虷sp70的誘導(dǎo)作用人類A2780卵巢癌細(xì)胞用0、1、3、10、30、100、300、1000和3000nM的化合物培養(yǎng)24h。制備全細(xì)胞溶解產(chǎn)物和通過SDS-PAGE進(jìn)行分析?？偟暮鸵阴；奈⒐艿鞍椎乃绞褂玫米杂赟igmacloneDM1A(Cat.nr.T9026)和clone6-lllB(Cat.nr.T6793)的抗體檢測(cè)。Hsp70蛋白質(zhì)使用來自于Stressgen的抗體(Cat.nr.SPA-810)檢測(cè)，隨后進(jìn)行ECL檢測(cè)?？贵w的適當(dāng)稀釋物在室溫下培養(yǎng)l-2h或者在4。C培養(yǎng)過j復(fù)。為了控制相同的負(fù)載，對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行汽提和用鼠單克隆抗肌動(dòng)蛋白IgM(Ab陽l,OncogeneResearchProducts)進(jìn)^t再^果4十才全測(cè)。為了4空制核蛋白的提取效率，對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行汽提和用抗核纖層蛋白Bl(Zymed;Cat.nr.33.2000)進(jìn)行再探針檢測(cè)。然后，根據(jù)廠商說明書，通過化學(xué)發(fā)光(PierceChemicalCo)或者焚光(Odyssey)使蛋白質(zhì)-抗體配合物可牙見化。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三次。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實(shí)施例B:人類血液學(xué)肺瘤細(xì)l包增殖的抑制作用人類血液學(xué)肺瘤細(xì)^5包系的盤內(nèi)的R306465的抗增殖活性的評(píng)1介在Oncodesign(Dijon,France)進(jìn)行外包。在濕潤(rùn)的5%(302培養(yǎng)器中，在37°C下，作為在相應(yīng)的適當(dāng)培養(yǎng)介質(zhì)中的細(xì)胞懸液使肺瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。將無類菌質(zhì)體肺瘤細(xì)胞播種于96-孔平底微量滴定板中和在含有10%FCS的培養(yǎng)介質(zhì)中，在37°C下培養(yǎng)24小時(shí)。然后，將腫瘤細(xì)胞暴露于載體(對(duì)照)或者升高濃度的R306465(5種不同的濃度*)、硼替佐米(5種不同的濃度*)或者多種比例的兩種藥物的組合。然后，將細(xì)胞另外培養(yǎng)72小時(shí)?；衔锏募?xì)胞毒素活性通過標(biāo)準(zhǔn)MTS測(cè)定，通過測(cè)量在490nm下的吸光率測(cè)得?；衔锵嗷プ饔?協(xié)同、相加或者拮抗作用)通過多重藥效分析進(jìn)行計(jì)算和通過根據(jù)Chou&Talalay所述的方法學(xué)的中值方程原理進(jìn)行[Chou等人(1984)Adv.EnzymeRegul.22:27-55;Chou等人(1991)inEncyclopaediaofhumanBiology.AcademicPress.2:371-379;Chou等人(1991)inSynergismandantagonisminchemotherapy.AcademicPress:61-102;Chou等人(1994)J.Natl.CancerInst.86:1517-1524]。*:基于作為單個(gè)試劑使用的各種藥物的抗增殖活性的預(yù)測(cè)定，在各個(gè)選定的細(xì)胞系中，選擇濃度使得不超過50%抑制作用。實(shí)施例B.l.:R306465的人類血液學(xué)肺瘤細(xì)胞增殖抑制作用。表F.l:結(jié)果表示為平均ICzw值(即，以nM表示的濃度需要達(dá)到40%的細(xì)胞增殖抑制作用)土SD(由3次獨(dú)立的可靠試-驗(yàn)確定)。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>實(shí)施例B.2.:硼替佐米對(duì)人類血液學(xué)肺瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。表F.2:結(jié)果表示為平均1(34()值(即，以nM表示的濃度需要達(dá)至'-40%的細(xì)胞增殖抑制作用)±SD(由3次獨(dú)立的可靠試-驗(yàn)確定)。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>實(shí)施例B.3:R306465協(xié)同硼替佐米對(duì)人類血液學(xué)肺瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。表3:結(jié)果表示為各個(gè)單獨(dú)研究中的中值CI值的平均復(fù)合指數(shù)(CI士SD)(3次獨(dú)立的可靠試驗(yàn))和由各個(gè)單獨(dú)組合比例計(jì)算。低于0.9的CI表示為協(xié)同'Synergy，(淡灰)，0.91~1.09的CI表示為加和'Additivity'(白色)；和高于1.1的CI表示為拮抗'Antagonism'(暗灰色)。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>權(quán)利要求1.一種蛋白酶體抑制劑和式(I)的組織蛋白脫乙酰基酶抑制劑的組合其藥學(xué)上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中id="icf0002"file="A2007800341790002C2.tif"wi="13"he="9"top="76"left="34"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是選自以下的基團(tuán)R5選自氫；噻吩基；被二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或者C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；被一個(gè)獨(dú)立地選自二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基或者C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基的取代基取代的苯基。2.權(quán)利要求1中要求的組合，其中式(I)的組織蛋白脫乙?；?中制劑選自4t合辟勿No.6(R306465)、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172和No.173<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>其中的Co.No.表示化合物編號(hào)。3.權(quán)利要求1或者權(quán)利要求2中要求的組合，其中式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿镽306465(化合物No.6)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4.權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)要求的組合，其中蛋白酶體抑制劑為硼替佐米(Bortezomib)。5.權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)要求的組合，為含有蛋白酶體抑制劑和式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿┮约耙环N或者多種藥物載體的藥物組合物的形式。6.權(quán)利要求5中要求的組合，用于同時(shí)、分離或者順序使用。7.權(quán)利要求15任一項(xiàng)要求的組合，用于醫(yī)療治療學(xué)。8.權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)要求的組合用于制造抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物的用途。9.組織蛋白脫乙?；敢种苿┯糜谥圃熘委熂毙粤馨湍讣?xì)胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細(xì)胞血癌、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病急性變、伯基特氏肺瘤和多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途，其中所述組織蛋白脫乙?；敢种苿槭?I)化合物其藥學(xué)上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中是選自以下的基團(tuán)(a-l)(a-2)RS選自氫；噻吩基；被二(d—6烷基)氨基Cw烷基或者d—6烷基哌嗪基Cw烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；被一個(gè)獨(dú)立地選自二(d.4烷基)氨基Cw烷氧基、二(Cw烷基)氨基、二(d-4烷基)氨基d—4烷基、二(d-4烷基)氨基d-4烷基(Cw烷基)氨基d-4烷基、吡咯烷基Cw烷基、吡咯烷基C,-4烷氧基或者C!-4烷基哌。秦基C!-4烷基的取代基取代的苯基。10.權(quán)利要求9要求的用途，其中所述藥物用于治療抗藥性急性淋巴母細(xì)胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細(xì)胞性白血病、抗藥性急性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細(xì)月包性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細(xì)胞血癌、抗藥性慢性骨髓性白血病、抗藥性慢性骨髓性白血病急性變、抗藥性伯基特氏肺瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。11.權(quán)利要求9和IO要求的用途，其中所述藥物用于治療硼替佐米抵抗多發(fā)性骨髓瘤。12.權(quán)利要求8~11任一項(xiàng)要求的用途，其中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的過乙酰化誘導(dǎo)作用或者通過所述乙?；δ苄哉{(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)作用對(duì)于人類癌癥的治療具有有益的作用。13.—種表征單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑使用的如權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所定義的式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿┑姆椒?，包括確定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質(zhì)的乙?；T導(dǎo)量，或者通過所述乙酰化功能性調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)量。一種表征單獨(dú)或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑使用的如權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所定義的式(I)組織蛋白脫乙酰基酶抑制劑的方法，包括測(cè)定樣品中的以下量a)組織蛋白3的乙酰化誘導(dǎo)量，組織蛋白4的乙?；T導(dǎo)量，或者p21的誘導(dǎo)量和b)a-微管蛋白的乙?；T導(dǎo)量，Hsp90的乙?；T導(dǎo)量，或者Hsp70的誘導(dǎo)量。全文摘要本發(fā)明涉及用于抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白酶體抑制劑和類別-I特異性組織蛋白脫乙?；敢种苿┑慕M合，其可用于癌癥的治療中。文檔編號(hào)A61K45/06GK101516375SQ200780034179公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年9月11日優(yōu)先權(quán)日2006年9月15日發(fā)明者J·阿茨,M·J·帕格,M·M·F·賈尼科特,P·W·J·赫爾曼斯申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司