專利名稱：：熱穩(wěn)定性增加的含蛋白物質(zhì)的制作方法熱穩(wěn)定性增加的含蛋白物質(zhì)本發(fā)明涉及一種熱穩(wěn)定性增加的含蛋白物質(zhì)，包括具有至少一種生物活性蛋白的核心和含有一種豆科植物的微?；a(chǎn)品的包被層。本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)熱穩(wěn)定性增加的含蛋白的物質(zhì)的方法，以及一種豆科植物的微?；a(chǎn)品在生產(chǎn)顆粒狀和/或丸狀產(chǎn)品的方法中增加生物活性蛋白的熱穩(wěn)定性的用途，并保持含蛋白物質(zhì)的高生物活性。生物活性蛋白，尤其是酶，通常以干燥顆粒狀制劑的形式被^f吏用。此種形式的含蛋白產(chǎn)品易于使用和給藥。已知多種技術(shù)可用于生產(chǎn)這些顆粒狀產(chǎn)品。例如，在流化床干燥器(流化床團粒機)中，顆粒散布在多孔載體上的氣流中并形成團塊，所述團塊隨后被任選地包覆并最終干燥。在混合團粒機如犁片槳式攪拌混合器中，團塊或顆粒是通過粒子碰撞形成的，由此相應(yīng)于剪切力形成致密或不致密的團塊。這些團塊隨后可被干燥至某一個殘余濕度。此外，也經(jīng)常使用擠出或丸狀的產(chǎn)品，其中將一種含有蛋白的糊狀物壓成微丸或?qū)⑵湓趬毫ο聣哼^一個小孔然后再切成顆粒，隨后使所述微丸或顆粒干燥。在所有這些方法中，或多或少地使用了激烈的剪切力和溫度條件。用于動物祠料生產(chǎn)領(lǐng)域中的蛋白——尤其是酶——在它們的生產(chǎn)過程中可能遭受這樣的處理，因此所述蛋白或酶的功能可能被限制。因此，例如，將粉末狀或顆粒狀的酶加到動物飼料微丸的過程中，可能會由于與飼料中的抑制劑接觸或由于動物祠料粒化過程的處理步驟的氣流中溫度和濕度增加而失活。已經(jīng)有實驗來避免在這種制備方法中的失活，尤其是生物活性蛋白的熱失活。例如，酶不是共價固定在較大的顆粒上(如得自木薯淀粉、西米淀粉、米淀粉、小麥淀粉、高粱淀粉或大麥淀粉的含淀粉顆粒；參見WO97/39116)，而是用硅粒子(參見US5，318，卯3;WO94/26883)或植物粉末作為載體(參見US4,106,991)。而且，用例如石危酸鈉(參見WO97/39116、WO92/12645、WO01/04279)降低了所述物質(zhì)附近的水含量，和/或使用防水和防蒸汽屏障即包衣，在水含量增加的情況下保護(hù)生物敏感物質(zhì)免受高溫以及高溫單獨或者與水或水蒸汽結(jié)合所造成的影響(參見WO97/39116、US6,610,519、WO00/01793、WO92/12645、WO96/16151、WO01/04279)。另外，在酶顆粒中特別加入了優(yōu)選地吸收熱能和機械能的成分。WO00/20569中公開了乳酸穩(wěn)定植酸酶的用途。對于酶的情況，還加入了酶穩(wěn)定劑，如海藻糖和硫酸鋅、玉米浸漬液、植酸和肌醇一磷酸酯(對于植酸酶的情況)。例如，WO00/20569中乂>開了加入還含有植酸和肌醇磷酸的玉米浸漬液。US5，972，669、US5,827,709以及EP0758018中具體地公開了加入具體的無機鹽硫酸鋅和硫酸鎂。WO98/55599中公開了海藻糖、硫酸鋅和聚乙二醇用于包衣的用途。然而，這些方法的缺點是，大量加入例如硫酸鋅(一種痕量元素)(>15%;參見US5,827,709)不適用于所有動物的飼料配比。由疏水材料如蠟、脂肪等制成的包衣會降低所述酶的生物利用度，因為所述酶要很長時間才能在胃中釋放，因此必須以高劑量給藥才能顯示效果，如可在約4小時的適時限制保留時間內(nèi)對豬起作用。此外，這些組合物中的許多只特異性地針對某些酶如植酸酶優(yōu)化甚至僅對這些酶有效。其他添加劑如高嶺土、沸石和硅石是不能被生物降解的不可溶化合物，這極大地限制了它們的用途。噴霧到載體上或用可膨脹多聚糖吸收會限制蛋白的可用量和生產(chǎn)的產(chǎn)量，因為它會導(dǎo)致在噴霧過程中凝集。這樣生產(chǎn)的酶顆粒中最大可獲得的酶活性也受到載體與可用酶的比率的限制。因此，需要一種方法來增加生物活性蛋白的熱穩(wěn)定性。具體地，需要增加用于生產(chǎn)具有確定顆粒大小和/或小顆粒大小的物質(zhì)的方法——優(yōu)選地用于生產(chǎn)例如丸狀產(chǎn)品的方法——的生物活性蛋白的熱穩(wěn)定性。特別需要增加酶制備過程中的熱穩(wěn)定性，即在熱負(fù)載后恢復(fù)所用酶的活性。所述生產(chǎn)方法可以容易和可靠地實施。此外，所述方法可得到對于人類和動物消耗無毒和無害的顆粒狀產(chǎn)品。所述方法可廣泛適用于任何結(jié)塊產(chǎn)品、顆粒狀產(chǎn)品和擠出產(chǎn)品，并可保證即使在高加工溫度下應(yīng)用由此生產(chǎn)的產(chǎn)品時，所述酶也具有足夠的溫度^t、定性。而且，此方法所用的物質(zhì)與所述生物活性蛋白不會發(fā)生其他負(fù)面相互作用。此外，所述方法是環(huán)保的，即所使用的物質(zhì)可生物降解，并且不包括任何例如不環(huán)保的化學(xué)品或溶劑的再循環(huán)。所用的成分是被特別容許在動物祠料、食品和藥物領(lǐng)域中使用的。通過包覆活性蛋白(特別是酶蛋白)，還防止了所述活性蛋白與例如存在于礦物質(zhì)預(yù)混料中的抑制性物質(zhì)接觸，并且生產(chǎn)出可穩(wěn)定儲存的混合物。令人驚奇的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過將一層或數(shù)層豆科植物的微?；a(chǎn)品應(yīng)用在含有生物活性蛋白的顆粒上或者通過包覆、覆蓋、封裝含有生物活性蛋白的核心，可大幅度增加這些生物活性蛋白的耐熱性(熱穩(wěn)定性)而不以任何其他方式影響由此獲得的包覆蛋白的活性。因此應(yīng)用了由來源于豆科植物的微粒化產(chǎn)品獲得的包被層，這樣只有含蛋白顆粒的外層與豆科植物的微粒化產(chǎn)品接觸。這使得可有效保護(hù)如此包覆的生物活性蛋白，抵御產(chǎn)品熱負(fù)載的加工方法中溫度的升高。所述包衣也用于例如以與作為抑制劑的物質(zhì)的混合物儲存時酶的保護(hù)。此外，所述方法允許在生產(chǎn)和使用的其他步驟中生產(chǎn)具有本發(fā)明的特性的高度濃縮的產(chǎn)品(酶產(chǎn)品)。因此，本發(fā)明涉及一種熱穩(wěn)定性增加的包括核心和包被層的含蛋白試劑或物質(zhì)，其特征在于所述核心包含至少一種生物活性蛋白而所述包被層包含一種來源于豆科植物的微粒化產(chǎn)品。此外，本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)這種含蛋白物質(zhì)的方法，其中將含有來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品的懸浮液應(yīng)用于包含至少一種生物活性蛋白的核心并且干燥由此獲得的包覆顆粒。本發(fā)明還涉及一種豆科植物的微?；a(chǎn)品用于——優(yōu)選地在生產(chǎn)顆粒狀產(chǎn)品的方法中——增加生物活性蛋白熱穩(wěn)定性的用途。微小的顆粒狀顆粒，其最佳地保護(hù)所述酶抵御在高溫和高濕度的變性條件。例如，用擠出法(WO00/47060)或犁片槳式攪拌混合器(WO01/04279)生產(chǎn)的顆粒為約400-2000jnm。本發(fā)明的顆粒可為100—300jim，并且因此它們非常適合于生產(chǎn)均質(zhì)產(chǎn)品，尤其當(dāng)所述顆粒顯示高酶活性時。本發(fā)明的方法或本發(fā)明的用途普遍適于增加熱穩(wěn)定性，尤其是酶制品的熱穩(wěn)定性，并且可適于用在如丸狀動物祠料中；由于所述物質(zhì)的高溶解性，所述酶也立即是生物有效的。使用的材料量少，這不同于現(xiàn)有技術(shù)的方法，因此能夠生產(chǎn)高活性酶顆粒。在本發(fā)明的制備包覆的含蛋白物質(zhì)的方法中，將一種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品——ife選地為微粒化大豆產(chǎn)品——施用到包含至少一種生物蛋白的核心上。所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品可通過簡單噴霧然后干燥來應(yīng)用。然而，所述來源于豆科植物的微粒化產(chǎn)品也可被直接用于各個選定方法的一個步驟中，如流化床干燥器或平板噴霧干燥器中。根據(jù)本發(fā)明，所述包被層包含一種豆科植物的微?；a(chǎn)品或由其組成。根據(jù)本發(fā)明，這涉及含有脂肪、蛋白、淀粉和其他碳水化合物作為儲存劑的微粒化的豆類植物(豆科)。其實例是豌豆、小扁豆、豆類、花生、大豆、利馬豆、鷹嘴豆、牛豆、羽扇豆的微粒化產(chǎn)品。優(yōu)選地，所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品是一種微粒化的大豆產(chǎn)品。所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品本身可用于包覆生物活性蛋白，或者結(jié)合從技術(shù)上來講必須的和合理的添加劑使用。這些可為，例如，用于調(diào)節(jié)pH值的酸和堿，和/或鹽、緩沖物質(zhì)等?？墒褂枚箍浦参锕麑嵉奈⒘；煞?，例如去脂肪后的殘渣。優(yōu)選地使用各種豆科植物的完整果實的微?；a(chǎn)品。因此可才艮據(jù)任何本身已知的微?；椒▉砩a(chǎn)所述豆科植物的微?；a(chǎn)品。微?；且粋€短時間高溫加熱過程。因此用幾秒鐘的脈沖將起始材料加熱，但沒有嚴(yán)重的失水。在此方面，用波長為1.8-3.4pm的紅外脈沖進(jìn)行微?；绕浜线m?？赡艿?，在調(diào)節(jié)到一個特定pH值之后，將所述豆科植物的微?；a(chǎn)品可在水溶液中通過攪拌懸浮或用Ultraturrax勻漿。在生產(chǎn)過程中，這是通過在流水線中位于噴霧器嘴之前的勻漿器進(jìn)行的，以避免懸浮液分相。如此獲得的懸浮液可被噴霧到任何種類的顆粒上。所述顆?？蓙碜杂?，例如噴霧干燥過程、?；^程、結(jié)塊過程或擠出過程。然后可根據(jù)間歇法用單獨的設(shè)備(如流化床干燥器、裝備或未裝備Wurster管的包衣機、ProCell設(shè)備等)施用所述包被層，或者也可在?；蚪Y(jié)塊之后用例如平層噴霧干燥器或在最后干燥過程之前用后噴霧室之一中的ProCell設(shè)備連續(xù)地施用所述包被層。所有施用所述包被層的方法都需要對全部產(chǎn)品進(jìn)行高度的最后干燥，這樣獲得如>90%的干質(zhì)量，優(yōu)選地>92%，更優(yōu)選地>95%,最優(yōu)選地>97%的干質(zhì)量。所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品的施用量可以為所用的含蛋白顆粒干質(zhì)量的2-50%(w/w)。所述豆科植物的微?；a(chǎn)品優(yōu)選地為一種微?；拇蠖巩a(chǎn)品，特別優(yōu)選地為MicronizingCompany(UK)Ltd.的下述產(chǎn)品"微:?；蠖?micronizedsoja)"。實施例中用于施用包被層的微?；蠖巩a(chǎn)品是用全脂肪大豆生產(chǎn)的。一種示例性的可用于本發(fā)明目的的微?；蠖巩a(chǎn)品是MicronizingCompany(UK)Ltd.,CharnwoodMill,Framlingham,Suffolk,IP139PT(www.micronizing,com)的產(chǎn)品"樣i^化大豆(micronizedsoja)"。此產(chǎn)品通過紅外微粒化生產(chǎn)，其中使用波長為1.8-2.3nm的紅外線。用于此產(chǎn)品的典型生產(chǎn)方法包括如下步驟國用紅外線使預(yù)先純化的產(chǎn)品在120C下在振動式傳送機上持續(xù)地琳騰，籍此水蒸汽的分壓強烈地增加并且所述產(chǎn)品含有的成分如蛋白質(zhì)、纖維素、半纖維素因此被消化?？?fàn)I養(yǎng)因子——它例如存在于大豆中——^因此失活并且所述材料作為動物飼料具有4艮高的營養(yǎng)價值。-加熱的產(chǎn)品被儲存于一個容器中5-15分鐘。-然后用一個高性能的磨粉機將所述產(chǎn)品碾成薄片，隨后冷卻至室溫。對于大豆和其他含油種子和作物，研磨過程導(dǎo)致油體的消化和所含油的釋放。-所述薄片被置于粉碎機中以獲得全脂肪面粉。這樣得到的待用顆粒的顆粒大小為直徑小于lmm,優(yōu)選地小于0.5mm,更優(yōu)選地小于0.3mm。很明顯此方法或具有同樣結(jié)果的相應(yīng)方法也可用于其他豆科植物的微?；?。方法中的參數(shù)(如溫度和時間)以及所述方法步驟的順序可根據(jù)待微?；亩箍浦参锏姆N類和數(shù)量而變化。這些變化在本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員的知識范圍之內(nèi)并可通過簡單的常規(guī)實驗確定。重要的是，在噴霧前通過微?；踔两Y(jié)合勻漿化得到的顆粒大小降低到直徑小于lmm,優(yōu)選地降低到直徑小于0.5mm,甚至更優(yōu)選地降4氐到直徑小于0.3mm。所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品的使用量的范圍是達(dá)到含有所述生物活性蛋白和所述來源于豆科植物的微粒化產(chǎn)品的顆粒的干質(zhì)量的50%(w/w),優(yōu)選2-50%(w/w),更優(yōu)選5-35%,最優(yōu)選7-25°/0。因此，所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品本身可以水溶液的形式使用，或者被勻漿化，并由此以比純粹的懸浮液更精細(xì)的崩解物的形式使用。優(yōu)選地用水來生產(chǎn)所述懸浮液，并且可在施用前用緩沖物質(zhì)和/或堿或酸將其調(diào)節(jié)至特定的pH值，或者可加入其他物質(zhì)如鹽以提高所述豆科植物的微?；a(chǎn)品的效果。根據(jù)本發(fā)明，來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品組成的包被層被施用于其上的核心包含至少一種生物活性蛋白，任選地結(jié)合從技術(shù)上來講必需和合理的物質(zhì)。它還可能包含數(shù)種生物活性蛋白的結(jié)合物，任選地結(jié)合從技術(shù)上來講必需和合理的物質(zhì)。所述生物活性蛋白優(yōu)選地為熱不穩(wěn)定的。所述生物活性蛋白優(yōu)選地為一種酶。所述核心也可能只由所述生物活性蛋白構(gòu)成。此酶優(yōu)選地選自植酸酶、磷酸酶、a-半乳糖苷酶、P-半乳糖苷酶、漆酶、磷脂酶、內(nèi)切葡聚糖酶(尤其是內(nèi)切-p-l，4-葡聚糖酶、內(nèi)切-卩-1，3(4)-葡聚糖酶、內(nèi)切-l，2-p-葡聚糖酶和內(nèi)切-l，3-,a-半乳糖苷酶)、纖維素酶、木糖苷酶、半乳聚糖酶(尤其是阿拉伯半乳聚糖-內(nèi)切-l，4-P-半乳糖苷酶和阿拉伯半乳聚糖-內(nèi)切-l，3-P-半乳糖苷酶)、果膠降解酶(尤其是果膠酶、果膠酯酶、果膠裂合酶、多聚半乳糖醛酸酶、阿拉伯糖酶、鼠李半乳糖醛酸酶(rhamnogalacturonase)、半乳糖醛酸鼠李聚糖乙酰酯酶、半乳糖醛酸鼠李聚糖-a-鼠李糖苷酶、果膠裂解酶和a-葡糖苷酸酶)、甘露聚糖酶、P-甘露糖苷酶、甘露聚糖乙酰酯酶、木聚糖乙酰酯酶、蛋白酶、其他木聚糖酶、阿拉伯木聚糖酶、脂肪分解酶(如脂肪酶、二半乳糖苷酶甘油二酯酶和角質(zhì)酶)，以及其他酶如漆酶和轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。所述酶特別優(yōu)選地選自植酸酶、內(nèi)切葡聚糖酶、木聚糖酶或磷酸酶。所述包含至少一種生物活性蛋白的核心還可包含載體物質(zhì)和添加劑，例如部分水解的淀粉產(chǎn)物(如玉米淀粉、小麥淀粉等)、含蛋白的物質(zhì)(如脫脂奶粉、干酪素水解物、酵母水解物或自溶物)、其他植物成分(如纖維素、半纖維素或含木質(zhì)素的成分和細(xì)胞提取物)、有機鹽和無機鹽(如丙酸釣、檸檬酸或檸檬酸鹽)，以及用于調(diào)節(jié)pH值的緩沖物質(zhì)、酸和堿。通過施用本發(fā)明的豆科植物微?；a(chǎn)品的包被層，如此包覆的生物活性蛋白可獲得更高的溫度穩(wěn)定性(熱穩(wěn)定性)。通過所獲得的增加的熱穩(wěn)定性，所述生物活性蛋白在該蛋白通常會發(fā)生部分或全部失活的條件下仍保持活性。蛋白獲得的增加的熱穩(wěn)定性允許它們在原本會導(dǎo)致所述生物活性蛋白失活的熱條件下被進(jìn)一步加工，以及相應(yīng)的更長的儲存時間或在更高的溫度下儲存。所述包被層也可防止所述蛋白在進(jìn)一步加工或儲存過程中與其他對被包覆蛋白有抑制作用的物質(zhì)接觸。對于所獲得的本發(fā)明增加的熱穩(wěn)定性來說，包含至少一種生物活性蛋白的核心被豆科植物微?；a(chǎn)品包被層完全包覆是很重要的。這種含有生物活性蛋白的起始物質(zhì)的包覆包被層通常要通過施用所述包被層時仔細(xì)的加工操作而獲得。由于處于微粒化狀態(tài)，可想象到所述豆科植物樹^立化產(chǎn)品會包圍尤其是完全包圍起始物質(zhì)。使用前述量范圍內(nèi)的豆科植物微?；a(chǎn)品也可促成對所述起始材料的優(yōu)選完全包覆?；谒龊鞍孜镔|(zhì)的質(zhì)量，含蛋白物質(zhì)的顆粒越小，豆科植物微粒化產(chǎn)品的使用量就越高。這是由體積和表面積的比導(dǎo)致的。以體積為基準(zhǔn)，較小顆粒的表面積比較大顆粒的表面積要大。由于所述豆科植物微?；a(chǎn)品包被層使熱穩(wěn)定性增加，如此預(yù)處理的起始材料尤其適于應(yīng)用在使用小粒徑試劑的方法中，特別是對于顆粒產(chǎn)品的生產(chǎn)。具體而言，動物祠料經(jīng)常以微粒狀態(tài)使用。因為溫度增加通常發(fā)生在微粒化條件下，本發(fā)明的方法或本發(fā)明的用途提供了制備具有所用蛋白分別具有的最大生物活性的微粒動物伺料產(chǎn)品的可能性。本發(fā)明包覆的含蛋白物質(zhì)或顆?？杀旧砘蛞约庸ば问奖患尤?，以用于另外的用途。例如，它們可加入到動物飼料、食品或藥物中。相應(yīng)的方法和用途為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。附圖更詳細(xì)地解釋了本發(fā)明圖l顯示了一個蒸汽發(fā)生器(蒸鍋；實驗儀器)的結(jié)構(gòu)圖圖2顯示了飼料/酶樣品在蒸汽發(fā)生器中一個典型的溫度曲線，其中條件對應(yīng)于方法A的80x:的條件(見下)。圖3顯示了用各種酸調(diào)節(jié)pH值后，所述包被層對酸性磷酸酶熱穩(wěn)定性的影響。圖4顯示了在應(yīng)用于Glucidex麥芽糊精核心之前添加和不添加Glucidex麥芽糊精，以及隨后用10。/。(w/w)干質(zhì)量的耀^立化大豆包覆的內(nèi)切葡聚糖酶顆粒中，用實驗室蒸鍋進(jìn)行熱負(fù)載后的活性恢復(fù)。以下實施例更詳細(xì)地解釋了本發(fā)明。實施例參考實施例l:植酸酶活性的測定在一種含有0.5%(w/w)植酸(約5mM)、200mM檸檬酸鈉、pH5.0的試驗混合物中測量植酸酶活性。在37n下培養(yǎng)15分鐘之后，通過加入等體積的15%(v/v)的三氯乙酸使反應(yīng)停止。將100jnl所述試驗混合物與卯0jilH20和1ml0.6MH2S04、2%(w/v)抗壞血酸和0.5%(w/v)鉬酸銨混合，在50C下培養(yǎng)20分鐘后，在820nm定量測定釋放的磷酸鹽離子。因此磷酸鉀的標(biāo)準(zhǔn)溶液被用作基準(zhǔn)。參考實施例2:酸性磷酸酶活性的測定酸性磷酸酶活性的測定與參考實施例1中植酸酶的測定類似，不同在于底物溶液是溶于250mM甘氨酰HCl緩沖液中的10mMa-甘油磷酸酯，pH2.5。參考實施例3:內(nèi)切-P-l，4-葡聚糖酶活性的測定卩-葡聚糖酶使溶解的大麥葡聚糖中的糖苷鍵水解。所釋放的還原糖與DNA試劑反應(yīng)生成一種有色復(fù)合物，其含量用光度測定法在540nm測定。1單位的P-葡聚糖酶活性被定義為在規(guī)定條件下每分鐘釋放1nmol能還原葡萄糖的糖等價物所需的酶量。所述酶反應(yīng)在pH5.5和40X:下進(jìn)行。DNS試劑將10g顆粒狀NaOH和200g酒石酸鈉溶解在800ml去離子水中。加入10g3，5二硝基水楊酸曱酯(DNS)后，在30-40"C攪拌1小時再補加至1L。大麥-葡聚糖底物溶液將1g大麥葡聚糖(Megazyme#P-BGBM)懸浮在60-70ml去離子水中，然后加熱至80-85'C并伴隨攪拌直至這些葡聚糖溶解。隨后，將溶液伴隨攪拌冷卻至室溫。添加10ml緩沖液后，pH為5.5,再補加至100ml。為測定所述P-葡聚糖酶的活性，將一組0.9ml底物溶液和0.1ml稀釋的酶溶液在40。C下培育15分鐘。加入l.SmLDNS試劑后，該組被置于沸騰的水浴中加熱20分鐘然后冷卻至室溫。加入2ml去離子水后，用光度計在540nm測定光密度。所述測定是用水代替酶溶液作為空白進(jìn)行的。P-葡聚糖酶活性的測定是通過葡萄糖校準(zhǔn)曲線進(jìn)行的。實施例1:施用包被層兩種優(yōu)選的實施方式如下描述，根據(jù)所述實施方式可施用一種微?；蠖巩a(chǎn)品的包被層。因此使用了上面提到的MicronizingCompany(UK)的產(chǎn)品"微?；蠖?。實施例3-10列舉了這些方法的變型。所述包被層可在下列方法變型中施用方法A:在Aeromatic國FielderAG^Bubendorf，Switzerland公司的Strea-l型流化床干燥器(Aerocoater)上施用所述包被層。在此方法中，包含微?；蠖巩a(chǎn)品的包被層通過特定的流化床干燥器被施用于包含生物活性蛋白的顆粒。所述顆粒是一種用本身已知的方法生產(chǎn)的蛋白顆粒?？諝鈮嚎s機產(chǎn)生干燥、不含脂肪的壓縮至6bar(600kPa)的空氣。Strea-l型流化床干燥器可加工的含蛋白顆粒的一般裝填容量可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法確定。所述包覆實驗在帶有底部噴霧裝置(Aerocater)的Strea-l型干燥器上進(jìn)行。一般裝填容量在50-300g顆粒的范圍內(nèi)。通過一根1.2mm的噴霧噴嘴引入壓力為0.6bar(60kPa)的緩和壓縮的空氣，所述噴嘴被安裝于底部氣體分配板的中央。該氣體分配板被修改以使>95%的氣流進(jìn)入中央，且剩余的5%完全流入該容器的邊緣區(qū)域以避免潮濕的顆粒與器壁接觸。短的沃斯特管(wursterpipe)被用于大部分包覆實驗并被安裝于所述配氣板上方的0.8cm處。在某些實驗中，維持所述顆粒在沃斯特管中的流動很困難，因此所述包覆在無此管的情況下進(jìn)行。一般含有懸浮或均勻的"微?；蠖?的包覆液體的流速為l-6ml/min。用于噴霧的懸浮液是一種干質(zhì)量在5-25%之間的"微粒化大豆"的水懸浮液，其在噴霧前不久通過勻漿器進(jìn)行勻漿。在一個帶有底部噴霧裝置的實施方式中，為避免噴嘴堵塞，噴霧過程中空氣入口的溫度不應(yīng)超過60"C。當(dāng)施用完整的"微?；?大豆時，所述空氣進(jìn)口的溫度會增加到80-95匸，用于使包覆的顆粒干燥，使最終的水含量為5-10%。如此獲得的顆#立可直接使用或再加工。方法B:在GlattSystemtechnikGmbH,Dresden,Germany公司的GPCG1型流化床干燥器中施用所述包被層。在此方法中，包含微粒化大豆產(chǎn)品的包被層在特定的流化床干燥器中被施用于包含生物活性蛋白的顆粒。所述顆粒為使用一種本身已知的方法生產(chǎn)的蛋白顆粒。通過使用例如APVAnhydroAS,Denmark公司的SBD76型噴霧制粒;f幾的工業(yè)方法獲得的的更大量的顆粒，在GPCGl，Glatt中以頂部噴霧方法或底部噴霧方法被包覆。在每個實驗中，在GPCG1中放入大約500g蛋白顆粒。包覆條件如下頂部噴霧包覆制粒溫度40-43匸三氣溫度55°C底部噴霧包覆制豐立溫度38—40X:空氣溫度55*C"微?；蠖?在水中攪拌成10。/。(w/w)的懸浮液并在噴霧前通過一個線上的勻漿機被勻漿。調(diào)節(jié)均質(zhì)微?；蠖箲腋∫旱膰婌F速率，從而使得顆粒不發(fā)生凝結(jié)，并且因此，使用的顆粒的顆粒大小由于包被層僅發(fā)生微不足道的變化。所述懸浮液典型的噴霧速率約5-15mlmiiT1。一個雙注噴嘴凈皮用來加入和施用10Vo(w/w)的樹:?；蠖箲腋∫骸０粚油ǔＪ撬妙w粒的干質(zhì)量的10%(w/w);然而，也可介于5和30%(w/w)之間。實施例2:進(jìn)行熱負(fù)載試驗被"微?；蠖?，，包覆的產(chǎn)品中所含的蛋白，尤其是酶，可根據(jù)以下方法試驗它們的熱穩(wěn)定性。被包覆的產(chǎn)品因此根據(jù)下述方法之一進(jìn)行熱負(fù)載。這些方法示例性地涉及對含酶顆粒的熱穩(wěn)定性進(jìn)行的試驗。含有其他生物活性蛋白的顆粒的熱穩(wěn)定性可被類似地試驗。在以下方法中被添加到所產(chǎn)生的終產(chǎn)品中的酶活性可通過一種測量方法確定，該試驗方法專門用于待測試的試驗熱負(fù)載前后的酶(見參考實施例1-3)。在熱負(fù)載后恢復(fù)的酶活性以恢復(fù)百分?jǐn)?shù)的形式表示為所用酶的活性的百分比。進(jìn)行熱負(fù)栽以說明和比較包覆的和未包覆的材料中包被層的功效。方法A:在一家中試制粒廠中試驗所述熱穩(wěn)定性(在丹麥科靈的食品和分子生物技術(shù)研究所的生物技術(shù)研究所內(nèi)進(jìn)行；所述試驗也可在其他相應(yīng)的制粒廠內(nèi)進(jìn)行)。將根據(jù)實施例1的方法A)或者B)生產(chǎn)的含有真菌或者細(xì)菌植酸酶，酸性磷酸酶或者內(nèi)切葡聚糖酶的包覆的或者未包覆的顆粒與550型小麥粉預(yù)混合以獲得300g含酶預(yù)混料。將此預(yù)混料與15kg動物飼料在丹麥科靈食品和分子生物技術(shù)研究所的生物技術(shù)研究所內(nèi)混合，以保證該預(yù)混料在285kg動物飼料中最佳的混合稀釋度以及在?；牧现锌蓽?zhǔn)確測定的酶活性。在大多數(shù)試驗中包覆顆粒的用量為0.1-10g/kg動物祠料，取決于包覆的材料中所含的酶的活性高度，并因此導(dǎo)致植酸酶的酶活性大約為5單位(U)/g動物飼料，或者酸性磷酸酶的酶活性大約為6單位(U)g-1或者內(nèi)切葡聚糖酶的酶活性大約為230-270單位(U)g-1。在制粒廠中處理的300kg動物飼料成分如表1所示。表l:待制粒的動物祠料的成》<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*與真菌或細(xì)菌植酸酶、酸性磷酸酶或者內(nèi)切葡聚糖酶混合制粒條件如下700L容量的臥式攪拌機，48rpm(0.8赫茲)；混合量為80-300kg。水平螺旋輸送機連接在攪拌機上以清空攪拌機，其傳送速度按照下列步驟調(diào)節(jié)。所述攪拌機是長度為130cm，直徑為30cm,155rpm和37室的Kahl階式攪拌機(調(diào)節(jié)器)。生產(chǎn)能力為300kg/小時。將本發(fā)明的飼料和含酶顆粒與濕蒸汽接觸約30s。(涉及蒸汽和溫度的條件見表2)。DanStoker高壓鍋爐產(chǎn)生的蒸汽流經(jīng)壓力調(diào)節(jié)閥進(jìn)入過壓為2bar(200kPa)的階式攪拌機。所述調(diào)節(jié)閥控制流入階式攪拌機的蒸汽量從而加熱其中的含酶飼料。經(jīng)調(diào)整處理的物質(zhì)經(jīng)過SimonHeesen壓力機(Press)粒化，隨后在多孔盒中以1，500m"h的流速進(jìn)行空氣冷卻。制粒壓力機在7.5kW的輸入功率下以500rpm(8.33赫茲)運行，由此生產(chǎn)出3x20mm的顆粒。表2:在丹麥科靈食品和分子生物技術(shù)研究所的生物技術(shù)研究所的工廠中，為在使含有本發(fā)明顆粒動物飼料制粒時獲得不同的溫度而具有的蒸汽條件<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>對包被層顆粒的熱穩(wěn)定性進(jìn)行試驗的熱負(fù)載也可在其他工廠中相應(yīng)地進(jìn)行。接下來，根據(jù)參考實施例l-3確定粒化動物飼料中包覆的和未包覆的顆粒中剩余的酶活性。方法B:在實驗室設(shè)備-實驗室蒸鍋上進(jìn)行熱負(fù)載試驗在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行的熱負(fù)載試驗，筒稱熱穩(wěn)定性試驗至多是儲存穩(wěn)定性增加的指示，因為它們以加速的儲存試驗進(jìn)行。但是，為了試驗在飼料制粒條件下增強的熱穩(wěn)定性，建立了一種實驗室方法，其可以可靠地確定加入飼料中的酶的熱穩(wěn)定性以及在飼料研磨機中的條件(見方法A)下的負(fù)載。已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)含酶飼料遭受溫度和濕度的增加時，即發(fā)生在蒸汽調(diào)節(jié)祠料期間的條件下，大部分酶會失活。為測定這種失活的程度，在一個實驗室規(guī)模的設(shè)備中用蒸汽加熱動物飼料中的酶顆粒。所述方法被控制在一個限定的溫度(75-85X:)。進(jìn)行這種試驗的設(shè)備示于圖1，由一個黃銅容器和一個多孔插入物組成，飼料在所述插入物上被引入，所述設(shè)備還具有一個將蒸汽引入飼料的機械裝置。蒸汽從一個常規(guī)的蒸汽發(fā)生器(Euroflex)中釋放，壓力為4.7bar(470kPa)。進(jìn)入所述容器的蒸汽量由兩個控制閥門調(diào)節(jié)，其也調(diào)節(jié)由所述插入物下面的容器部分除去的冷凝水和飼料。重要地，蒸汽管不含冷凝水并且在連接到所述黃銅容器之前就已經(jīng)達(dá)到操作溫度。將待試驗的飼料(50-100g，通常為50g,成分見表1)裝入所述容器中，所述飼料包含本發(fā)明的含酶顆粒，并將蒸汽引入所述容器中。所述樣品用一個末端具有熱電偶的長柄攪拌，或者將熱電偶作為探針單獨引入動物飼料中。通過將所述探針與數(shù)據(jù)記錄器(DrDAQ，companyPicoTechnology,UK)連接，從而在測量信號A/D轉(zhuǎn)換后用個人電腦連續(xù)地記錄飼料樣品的溫度。當(dāng)獲得所需溫度(通常為80或85匸)時，將溫度保持30-60秒，然后將飼料從容器中取出并在一個扁平塑料容器中冷卻。這些試驗在80匸的典型溫度曲線示于圖2中(在對應(yīng)于方法A中sot:條件下的蒸汽中的飼料/酶樣品的溫度曲線)。所獲得的最大溫度和在此溫度下保持的時長可通過開關(guān)閥門和/或調(diào)節(jié)蒸汽的分配量來控制。熱負(fù)載實驗常常在實驗儀器以至少兩次的測量進(jìn)行。溫度曲線下的面積被積分以確定重復(fù)樣品是否經(jīng)歷了同樣的總熱負(fù)載。然而，在80或85*C的限定溫度下的暴露時間是很重要的?；旌衔镏邪驳暮臀窗驳念w粒中剩余的酶活性根據(jù)參考實施例1-3測定。實施例3:絲狀真菌的植酸酶的溫度穩(wěn)定性A部分由重組里氏木霉(7Wc/^^femm及mm/)菌林按照例如WO94/03612生產(chǎn)的黑曲霉變種泡盛曲霉(Js/7e/^///ws/f/gwv"/:mv"附w7')的植酸酶的UF濃縮物在APV噴霧制粒機中^L干燥，所述UF濃縮物中溶解有不同的添加劑(參見實施例1，方法B)，然后才艮據(jù)實施例1，方法B的方法凈皮包覆。以頂部噴霧法包覆的顆粒含有的檸檬酸為所述UF濃縮物干質(zhì)量的15%(w/w),且其pH值被調(diào)節(jié)到pH3。用底部噴霧法包覆的顆粒還含有10%(w/w)的麥芽糖糊精，其在干燥前溶解于UF濃縮物。所有以此方法調(diào)節(jié)的UF濃縮物都#:注入APV干燥器中，噴霧壓力為80-180bar(8000至18000kPa)。由此產(chǎn)生的顆粒的顆粒大小介于200-300nm之間。進(jìn)行熱負(fù)載試驗(簡稱熱穩(wěn)定性試驗)根據(jù)實施例2，方法A進(jìn)行。結(jié)果示于表3中。表3:被10。/。(w/w)"微?；蠖?包覆的顆粒中曲霉(爿印e/^7/"s)植酸酶熱穩(wěn)定性增加。在噴霧制粒之前，使用檸檬酸來調(diào)節(jié)UF濃縮物的pH值。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>通過馬爾文(Marvern)設(shè)備上的激光衍射測量，所有未包覆的和包覆的產(chǎn)品的顆粒大小都在200-300pm之間。表3中的結(jié)果顯示封閉在被包覆顆粒中的酶在制粒過程中的熱負(fù)載下熱穩(wěn)定性的增加與UF濾液中選定的添加劑無關(guān)。另外，同樣影響所形成的噴霧顆粒(具有酶活性的顆粒)的大小和形狀的噴霧壓力對在制粒過程中待觀察到的封閉于被包覆顆粒中的酶的熱穩(wěn)定性的增加沒有影響。本發(fā)明的顆粒(粒料)可由頂部噴霧法及底部噴霧法生產(chǎn)，其中被封閉的酶在熱負(fù)載下的失活程度較未處理的顆豐立要{氐。B部分向A部分的UF濃縮物中加入干質(zhì)量的50%(w/w)的脫脂奶粉(30%乳糖)，并加入檸檬酸鈉將pH值調(diào)節(jié)至pH5.1，之后將UF濃縮物在ProCell5，Glatt中干燥以噴霧制造無核心的顆粒。該過程如下發(fā)生，將上面提到的干質(zhì)量約為15-20%的溶液在頂部噴霧法中相對用ProCel15中通過兩注噴嘴的氣流以超過間歇法的6-25g/min的速率進(jìn)行噴霧。加入的空氣的溫度為70-95。C，噴霧時所加入的空氣的量為90-100m3/h,從而4吏產(chǎn)品溫度保持在50x:。當(dāng)全部溶液都被噴霧時，加入的空氣的溫度增加到最大為ioot:并持續(xù)5分鐘，從而產(chǎn)品溫度不超過55x:以在所得到的顆粒中獲得所需的>95%的干質(zhì)量。在間歇法中，大約2L的上面提到的溶液被加工以噴霧制粒。所述噴霧制粒的顆粒大小為300jim以下。這樣獲得的噴霧顆粒用10。/。(w/w)的"微?；蠖?均勻懸浮液根據(jù)實施例l的方法A包覆，從而使包被層的量為所述噴霧顆粒干質(zhì)量的10%(w/w)。根據(jù)實施例2，方法A進(jìn)行熱負(fù)載試驗(熱穩(wěn)定性試驗)。活性恢復(fù)的結(jié)果示于表4。表4:用10。/。(w/w)"微粒化大豆"包覆的顆粒中的曲霉植酸酶熱穩(wěn)定性增加，其中在進(jìn)行噴霧制粒之前將脫脂奶粉溶解在UF濃縮物中。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表4的結(jié)果顯示干燥過程中除檸檬酸以外的其他添加到曲霉植酸酶中的添加物也有利于酶的穩(wěn)定性，特別是脫脂奶粉的添加。然而，通過使用"微?；蠖?包被層，在A部分和B部分中封閉的酶的熱穩(wěn)定性都獲得了進(jìn)一步提高，而這與被包覆的含酶噴霧顆粒的成分無關(guān)。實施例4:微?；蠖沟陌渤潭葘z狀真菌植酸酶的熱穩(wěn)定性的作用在水中生產(chǎn)10%的"微粒化大豆"懸浮液，因為其在實施例3中也用于包覆。不溶的成分通過離心被分離。如此形成的水溶性片段被用于一個實驗以檢查封閉的植酸酶在熱負(fù)載試驗中熱穩(wěn)定性的增加是否是由"微粒化大豆"中所含的植酸(植酸酶的底物)所導(dǎo)致的。等分的量由于對在包覆中獲得10。/。w/w的"微粒化大豆"的包被層是必需的而被使用。使用ROALOY公司銷售的商品FINASEPC,其是由實施例3中的UF濃縮物產(chǎn)出的。FINASE⑧PC根據(jù)實施例1,方法A被包覆。熱負(fù)栽根據(jù)實施例2，方法B的方法在80C下進(jìn)行30秒，隨后確定被處理的材料中的殘余的酶活性。表5顯示了"微?；蠖?的水相提取物在熱負(fù)栽試驗中對顆粒中包含的酶的熱穩(wěn)定性的作用。表5:<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>如可從實施例1和2的比較中理解的，具有大豆水相提取物的包被層在制粒過程中對噴霧顆粒中的酶沒有穩(wěn)定作用。大豆面粉富含植酸酶的底物——植酸。據(jù)說，植酸對植酸酶具有穩(wěn)定作用(WO98/55599)。本實驗表明，可能在制粒過程的熱負(fù)載下顯現(xiàn)出的在實施例3中獲得的熱穩(wěn)定性的增加不能歸結(jié)于此作用。因此，可能在包覆時發(fā)生的植酸滲透到所述顆粒的邊緣層的現(xiàn)象也不足以解釋在制粒過程的條件下觀察到的熱穩(wěn)定性的增加。實施例5:在具有Glucidex核心^噴霧顆粒上用"微粒化大豆"對細(xì)菌(五.植酸酶的包覆在本實施例中，含有細(xì)菌(五.co//)植酸酶的具有Glucidex核心的噴霧顆粒被微粒化大豆包覆。制粒將800gGlucidex12(法國Roquette7>司的玉米淀粉水解物，含有1%的葡萄糖、2%的二糖和97%的更高級的多糖)置于STREA1(AeromaticFielder)中，然后用由重組里氏木霉(WO2006/042719)菌林產(chǎn)生的CW/植酸酶的500gUF濃縮物(pH2.5，以碌u酸調(diào)節(jié))噴霧。包覆然后所述噴霧顆粒4艮據(jù)實施例1方法A的方法,皮包覆(干質(zhì)量5%(w/w)的"微?；蠖?)，并且根據(jù)實施例2方法A的方法測試所述噴霧顆粒中植酸酶的熱穩(wěn)定性。結(jié)果示于表6。表6:噴霧制成的具有Glucidex12核心的顆粒用"微粒化大豆"包覆后E(^//植酸酶的熱穩(wěn)定性增加<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表6的數(shù)據(jù)表明，含酶噴霧顆粒中的五.CW/植酸酶在實施例2方法A的試驗條件下的熱穩(wěn)定性通過使用所述噴霧顆粒干質(zhì)量5%(w/w)的"微粒化大豆"包被層而增加。實施例6:含有細(xì)菌(Eco//)植酸酶的無核心的噴霧顆粒的包覆本實施例顯示了通過使用"微?；蠖?包被層，無核心噴霧顆粒中細(xì)菌植酸酶熱穩(wěn)定性的增加。制粒在另一實驗中，2kg的五.CW/植酸酶UF濃縮物在(見實施例5)ProCell5，Glatt中被用于產(chǎn)生無核心的噴霧顆粒(見實施例3,B部分)。向所述UF濃縮物中加入基于UF濃縮物總蛋白30%(w/w)的脫脂奶樹含30%乳糖)和4.4g丙酸鉀。用硫酸或氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)節(jié)到pH5。包覆隨后所述噴霧顆粒根據(jù)實施例1方法A的方法被包覆(干質(zhì)量10%(w/w)的"微?；蠖?)，并且根據(jù)實施例2方法A的方法進(jìn)行熱負(fù)載，然后測量所述噴霧顆粒中植酸酶的熱穩(wěn)定性。結(jié)果示于表7。表7:無Glucidex核心的噴霧顆粒中^//植酸酶的熱穩(wěn)定性溫度[x:活性恢復(fù)[%]未包覆活性恢復(fù)[%10%包覆7085.799.97549.682.18019.341.6854.518.3卯0.39.7950.34.7如結(jié)果所示，這些被"微?；蠖?包覆的噴霧顆粒所含的植酸酶的熱穩(wěn)定性在制粒實驗的條件下有所增加。實施例5和實施例6中未包覆和包覆的噴霧顆粒的數(shù)據(jù)的比較表明，熱穩(wěn)定性增加不是因為Glucidex核心，而是通過4吏用"微農(nóng)化大豆"包被層而獲得的。實施例5和6的未包覆顆粒的活性恢復(fù)顯示了在選定的實驗條件下所述酶的熱穩(wěn)定性的不同分布；然而，所述結(jié)果處于相似水平上，每次都遠(yuǎn)低于用"微?；蠖?包覆所獲得的結(jié)果。無法證明在例如WO98/54980和WO00/24877中所假定的由核心產(chǎn)生的影響。WO98/54980特別地將熱負(fù)栽中獲得的酶的穩(wěn)定作用歸因于酶溶液在碳水聚合物中的吸收和隨后的干燥，如在動物銅料的制粒條件下發(fā)生的。此穩(wěn)定作用不能在本發(fā)明中的將酶溶液噴霧——而非吸收——在碳水聚合物上的條件下獲得。本實施例的結(jié)果還表明，所述作用不限于特定種類的植酸酶，盡管在實施例3和6中使用了植酸酶。在實施例3中使用了絲狀真菌的植酸酶，在實施例6中使用了細(xì)菌來源的植酸酶，然而它們在氨基酸水平上只顯示出18%的同源性，因此被認(rèn)為是兩種完全無關(guān)的蛋白。實施例7:含絲狀真菌的酸性磷酸酶的顆粒的包覆在本實施例中通過用"微?；蠖梗?，對顆粒進(jìn)行包覆檢測了絲狀真菌酸性磷酸酶熱穩(wěn)定性的增加。制粒由重組里氏木霉菌林根據(jù)例如WO94/03612產(chǎn)生的200mlpH2.5的黑曲霉酸性磷酸酶UF濃縮物在用HC1或H2S04將pH值調(diào)整至pH4后，在STREA1(AeromaticFielder)中噴霧干燥于500gGlucidex12上。用硫酸調(diào)整pH值時沉淀出來的CaS04在噴霧制粒之前通過離心分離。包覆才艮據(jù)實施例1方法A的方法，用不同量的"微?；蠖?對所述噴霧顆粒進(jìn)行包覆。熱負(fù)載才艮據(jù)實施例2方法B所述的方法在85'C下對噴霧顆粒中酸性磷酸酶進(jìn)行60秒，并通過測量之后殘存的活性來測定熱穩(wěn)定性。結(jié)果示于圖3。圖3所示的結(jié)果表明，在實施例2方法B的制粒過程的條件下，包覆的噴霧顆粒中所獲得的酸性磷酸酶熱穩(wěn)定性增加與使用的微粒化大豆的量直接相關(guān)。此外，通過酸的選擇還可能表明，被噴霧制粒的UF濃縮物中游離鈣的量對所述酶的熱穩(wěn)定性沒有影響，這與植酸酶相反，植酸酶是一種與酸性磷酸酶密切相關(guān)的酶，如在WO97/05245、US5，972，669、US5,827,709以及EP0，758,018中所示的酶，其中在噴霧制粒過程中向UF濃縮物中添加二價陽離子如釣、鎂或鋅，尤其以無機鹽形式進(jìn)行添加，會導(dǎo)致在某些熱負(fù)載試驗中植酸酶熱穩(wěn)定性的增加。使用硫酸調(diào)整pH會產(chǎn)生硫酸釣沉淀，因此，與使用鹽酸調(diào)整pH值的UF濃縮物相比，鈣濃度降4氐。實施例8:Glucidex或脫脂奶粉對用具有和不具有微?；蠖拱矊拥暮嵝粤姿崦割w粒的熱穩(wěn)定性的影響在本實施例中，試驗了向酶的噴霧制粒UF濃縮物中添加Glucidex和脫脂奶粉的影響與微?；蠖拱粚酉啾葘Π驳乃嵝粤姿崦竾婌F顆粒的熱穩(wěn)定性的作用的比較。制粒由重組里氏木霉菌抹產(chǎn)生的pH2.5的黑曲霉酸性磷酸酶的UF濃縮物(見實施例6)，在ProCel15，Glatt中被噴霧制粒成大至300^im的顆粒，其中有不同的添加物溶解在UF濃縮物中(30%Glucidex或50%脫脂奶粉[SMP)(見實施例3B部分)。每種用于噴霧制粒的溶液的pH值都為pH4。包覆根據(jù)實施例1方法A進(jìn)行包覆。"微?；蠖?的用量以干質(zhì)量計為10%(w/w)。結(jié)果示于表8中。表8:未包覆和包覆的噴霧顆粒的酸性磷酸酶熱穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>n.d.:未確定的比較表8的數(shù)據(jù)表明，在制粒試驗中，噴霧制粒前向酸性磷酸酶的UF濃縮物中添加Glucidex或脫脂奶粉對黑曲霉變種泡盛曲霉的酸性磷酸酶也具有穩(wěn)定作用。關(guān)于在制粒實驗中酶的熱穩(wěn)定性，在噴霧制粒前在酶的UF濃縮物中添加脫脂奶粉被證明不僅對E.Coli植酸酶而且對酸性磷酸酶和黑曲霉變種泡盛曲霉的植酸酶也是有利的。然而，在所有情況下，噴霧顆粒中的酶的熱穩(wěn)定性(表示為活性恢復(fù)％)都可通過在制粒試驗中使用"微?；蠖?包被層被進(jìn)一步加強。與含酶噴霧顆粒所用的構(gòu)造或成分無關(guān)，"微?；蠖?的使用導(dǎo)致整個顆粒的酶的熱穩(wěn)定性增加。實施例9:具有和不具有"微?；蠖?包被層的具有Glucidex核心的內(nèi)切-l，4-P-葡聚糖酶顆粒的熱穩(wěn)定性在本實施例中，在用"微粒化大豆"包覆后的具有Glucidex核心的顆粒中測定了來源于里氏木霉的酶——內(nèi)切-l,4-p-葡聚糖酶I的熱穩(wěn)定性。此酶表現(xiàn)了兩種不同的酶活性，即內(nèi)切-l，4-P-葡聚糖酶活性和一個同樣高的內(nèi)切-P-l，4-木聚糖酶活性。制粒使用由重組里氏木霉菌林(Karhimenetal.，MolGenGenet1993，241:515-522)產(chǎn)生的里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶1(內(nèi)切-l，4-j3-葡聚糖酶)的UF濃縮物，以在STREA1(AeromaticFielder)中生產(chǎn)不同的噴霧顆粒。噴霧顆粒通過在500gGlucidex12(Roquette，F(xiàn)rance)核心材料上噴霧干燥200mlUF濃縮物獲得，或者通過在噴霧干燥到Glucidex核心之前噴霧干燥額外溶解有以干質(zhì)量計為10%(w/w)的Glucidex12的200mlUF濃縮物而獲得。包覆通過噴霧干燥獲得的顆粒根據(jù)實施例1方法A的方法使用10%的"微?；蠖?懸浮液進(jìn)行包覆。包覆材料的量基于包覆顆粒的干質(zhì)量為10%(w/w)。根據(jù)實施例2方法B所述方法確定顆粒中所含的內(nèi)切葡聚糖酶的熱穩(wěn)定性增加。圖4顯示在實驗室設(shè)備(實驗室蒸鍋)中進(jìn)行熱負(fù)載后，在使用和沒使用10%"微?；蠖?，，包被層的顆粒中內(nèi)切葡聚糖酶I的活性恢復(fù)。在熱負(fù)栽試驗中，由里氏木霉獲得的內(nèi)切葡聚糖酶I的熱穩(wěn)定性還與噴霧干燥前向UF濃縮物中添加麥芽糊精有關(guān)。圖4表明，除了含酶顆粒所用構(gòu)造或者生產(chǎn)含酶顆粒時向UF濃縮物中加入的添加物以外，在包覆方法中使用"微?；蠖?導(dǎo)致實驗條件下包覆的顆粒所含的酶的熱穩(wěn)定性增加。而且，通過使用包被層獲得的熱穩(wěn)定性的增加比在噴霧干燥中通過向UF濃縮物中添加10%的Glucidex12而獲得的熱穩(wěn)、定性的增加要大。實施例10:具有和不具有"微?；蠖?包被層的內(nèi)切-l，4-P-葡聚糖酶的熱穩(wěn)定性在本實施例中，無Glucidex核心的噴霧顆粒中的內(nèi)切-l，4-j3-葡聚糖酶(內(nèi)切葡聚糖酶I)的熱穩(wěn)定性在用"微?；蠖?包覆后被檢測。制粒在由重組里氏木霉菌林(Karhunenetal"MolGenGenet1993，241:515-522)產(chǎn)生的里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶I的UF濃縮物中，以干質(zhì)量計為的20%的Glucidex12(w/w)被溶解且用H2S04/NaOH將pH調(diào)節(jié)到pH4.5。所述濃縮物在ProCel15，Glatt中干燥，以噴霧制成尺寸最高達(dá)300^m的顆粒(見實施例3，B部分)。包覆所述噴霧顆粒根據(jù)實施例1方法A被包覆。使用的"微粒化大豆"層以干質(zhì)量計為10%(w/w)。進(jìn)行實施例1方法A的熱負(fù)載后的活性恢復(fù)的結(jié)果示于表9中。表9:無Glucidex核的具有和不具有包被層的顆粒中來源于里氏木霉的內(nèi)切葡聚糖酶I的熱穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表9的數(shù)據(jù)表明被封閉在顆粒中的來源于里氏木霉的內(nèi)切葡聚糖酶I的熱穩(wěn)定性在缺少Glucidex核心時也可通過用"微?；蠖?包覆而改善。碳水化合物材料的核心并不是使用"微?；蠖?包被層使熱穩(wěn)定性增加的先決條件。權(quán)利要求1.一種熱穩(wěn)定性增加的物質(zhì)，包括核心和包被層，其特征在于所述核心包含至少一種生物活性蛋白而所述包被層包含一種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1的物質(zhì)，其特征在于所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品是一種微?；拇蠖巩a(chǎn)品。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項的物質(zhì)，其特征在于所述核心還包括麥芽糊精。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項的物質(zhì)，其特征在于所述核心還包括脫脂奶粉。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項的物質(zhì)，其特征在于所述生物活性蛋白是一種酵。6.根據(jù)權(quán)利要求5的物質(zhì)，其特征在于所述酶選自植酸酶、內(nèi)切葡聚7.根據(jù)權(quán)利要求l-6任一項的物質(zhì)，其特征在于所述包被層為所述物質(zhì)的總干質(zhì)量的2-50%(w/w)。8.根據(jù)權(quán)利要求7的物質(zhì)，其特征在于所述包被層為2-30%(w/w)。9.根據(jù)權(quán)利要求8的物質(zhì)，其特征在于所述包被層為5-25%(w/w)。10.—種動物飼料組合物，特征在于其包括權(quán)利要求1-9的物質(zhì)或由權(quán)利要求1-9的物質(zhì)構(gòu)成。11.一種食品組合物，特征在于其包括權(quán)利要求1-9的物質(zhì)或由權(quán)利要求1-9的物質(zhì)構(gòu)成。12.—種藥物組合物，特征在于其包括權(quán)利要求1-9的物質(zhì)或由權(quán)利要求l-9的物質(zhì)構(gòu)成。13.—種生產(chǎn)權(quán)利要求1-9任一項的物質(zhì)的方法，其特征在于將含有一種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品的溶液施用于包含至少一種生物活性蛋白的核心上，然后將如此獲得的包覆的顆粒干燥。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其特征在于所述含有一種來源于豆科植物的微粒化產(chǎn)品的溶液的施用和干燥在一個流化床干燥器上進(jìn)行。15.根據(jù)權(quán)利要求13或14任一項的方法，其特征在于所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品是一種微?；拇蠖巩a(chǎn)品。16.—種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品用于在生產(chǎn)一種顆粒狀產(chǎn)品的方法中增加生物活性蛋白熱穩(wěn)定性的用途。17.—種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品用于在生產(chǎn)動物飼料的方法中增加生物活性蛋白熱穩(wěn)定性的用途。18.—種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品用于在生產(chǎn)一種食品的方法中增加生物活性蛋白熱穩(wěn)定性的用途。19.一種來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品用于在生產(chǎn)一種藥物組合物的方法中增加生物活性蛋白熱穩(wěn)定性的用途。20.根據(jù)權(quán)利要求16、17、18或19任一項的用途，其特^t在于所述來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品是一種微粒化的大豆產(chǎn)品。全文摘要本發(fā)明涉及一種熱穩(wěn)定性增加的物質(zhì)，包括核心和包被層，其特征在于所述核心包含至少一種生物活性蛋白而所述包被層包含來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品，還涉及一種生產(chǎn)這種物質(zhì)的方法以及來源于豆科植物的微?；a(chǎn)品在顆粒狀產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中增加生物活性蛋白的熱穩(wěn)定性的用途，以及在生產(chǎn)動物飼料、食品和藥物的方法中的用途。文檔編號A61K9/50GK101534801SQ200780041773公開日2009年9月16日申請日期2007年11月2日優(yōu)先權(quán)日2006年11月10日發(fā)明者B·溫特,S·科爾申請人:Ab酶有限公司