專利名稱：：使用組蛋白脫乙酰酶(hdac)抑制物的細(xì)胞免疫增強(qiáng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及通過使用組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制物提高主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類抗原在細(xì)胞表面上的表達(dá)水平而增強(qiáng)細(xì)胞免疫能力的方法。也即，本發(fā)明涉及用于使用HDAC抑制物增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法。另外，本發(fā)明涉及此類方法用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫以預(yù)防癌發(fā)生或癌復(fù)發(fā)的用途、現(xiàn)有癌癥的免疫療法或致病微生物感染的治療。技術(shù)背景.頓丁機(jī)仵廠日、J斧儀凡夂，口W觀胞靶向細(xì)胞損傷的細(xì)胞免疫。細(xì)胞免疫是在抵抗細(xì)胞內(nèi)感染的致病孩t生物或細(xì)胞疾病如癌癥中最重要的免疫力。因此，增強(qiáng)這種細(xì)胞免疫能力預(yù)計(jì)在廣泛領(lǐng)域如預(yù)防或治療癌癥和治療致病微生物(如病毒及細(xì)菌)感染中發(fā)揮效力。在細(xì)胞免疫中，淋巴細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞，如癌細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞，并且在這些機(jī)制中，MHCI類抗原分子發(fā)揮重要作用。人MHC稱作人白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)。例如，作為癌細(xì)胞中來自癌抗原蛋白降解產(chǎn)物的抗原肽或作為病毒等感染細(xì)胞中來自毒力因子衍生蛋白降解產(chǎn)物的抗原肽分別與HLAI類分子結(jié)合并在細(xì)胞表面上出現(xiàn)。在免疫活性細(xì)胞中，T細(xì)胞通過其細(xì)胞表面上的T-細(xì)胞抗原受體識(shí)別靶細(xì)胞表面上的抗原肽/HLA復(fù)合體并區(qū)分正常細(xì)胞和癌細(xì)胞/感染細(xì)胞。這意味當(dāng)HLAI類分子的表達(dá)被抑制時(shí)，借助T細(xì)胞的耙細(xì)胞識(shí)別機(jī)制將無法正常作用。在人的例子下，MHCI類抗原包括兩個(gè)分子的異二聚體，所述的分子是主要由三種基因即HLA-A、HLA-B和HLA-C編碼的重鏈和由一個(gè)基因編碼的稱作(32-微J求蛋白(B2M)的輕鏈。當(dāng)B2M未正常表達(dá)時(shí)，則成熟HLA復(fù)合體的形成和至細(xì)胞膜表面的運(yùn)輸受到破壞，導(dǎo)致降低全部HLA-A、HLA-B和HLA-C遺傳基因座的產(chǎn)物表達(dá)。MHCI類抗原在除睪丸細(xì)胞之外的幾乎全部體細(xì)胞的細(xì)胞表面上表達(dá)。然而，在某些癌細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞中，細(xì)胞表面MHCI類抗原的表達(dá)往往降低。就MHCI類抗原表達(dá)降低的機(jī)制而言，因重鏈或輕鏈中基因突變所致的下降調(diào)節(jié)機(jī)制是已知的(非專利文件1)，不過其細(xì)節(jié)未知。另一方面在多種病毒感染中，抑制I類抗原的表達(dá)也是已知的并且已經(jīng)報(bào)道了其各種機(jī)制。有趣地，已知每種病毒具有多種復(fù)雜策略以抑制I類表達(dá)。例如，細(xì)胞巨化病毒表達(dá)可干擾MHCI類途徑的4種基因(US3、US2、US11和US6):US3抑制MHCI類復(fù)合體從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出，US2和US11誘導(dǎo)由蛋白酶體迅速破壞MHCI類復(fù)合體，并且US6抑制肽輸送至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，這4種基因均千擾MHCI類的功能(非專利文件2)。HIV病毒不僅通過Tat抑制B2M基因和I類基因的轉(zhuǎn)錄(非專利文件3)，還通過Nef改變I類產(chǎn)物的運(yùn)輸途徑而千擾MHCI類功能(非專利文件4)。以這種方式，癌組織和病毒感染細(xì)胞通過靈巧地抑制HLAI類抗原分子表達(dá)而逃避免疫監(jiān)視。因此，若這些組織和細(xì)胞中I類分子表達(dá)得到增加，則預(yù)期宿主的細(xì)胞免疫能力將升高，從而為癌癥和感染的預(yù)防及治療提供明顯療效。另一方面，最近已知不改變基因堿基序列的外遺傳調(diào)節(jié)作用廣泛參與癌發(fā)生等。將可調(diào)節(jié)染色質(zhì)活性的組蛋白乙?；暈樵谕膺z傳調(diào)節(jié)作用中發(fā)揮重要作用的因素之一，并且可調(diào)節(jié)組蛋白乙酰化水平的組蛋白脫乙酰酶(HDAC)作為癌癥等的分子靶正在引起人們關(guān)注(非專利文件5)。抑制HDAC發(fā)揮作用的多種HDAC抑制物是已知的(非專利文件5和非專利文件6)。這些HDAC抑制物對(duì)從屬各類別的HDAC的特異選擇性實(shí)際上不是嚴(yán)格的，不過，例如，已經(jīng)報(bào)道曲古抑菌素A(tricostatinA,TSA)抑制I類和II類HDAC,而與II類HDAC相比，丙戊酸(VPA)優(yōu)選地抑制II類HDAC等(非專利文件5和非專利文件6)。非專利引用文獻(xiàn)l:Seliger，B.等，癌癥生物學(xué)研究(SeminCancerBiol.)2002,12:3-13。非專利引用文獻(xiàn)2:Mirandola，R等，傳染病雜志(JInfectDis.)2006年4月1曰；193(7):917-26。非專利引用文獻(xiàn)3:Carroll,IR.等，分子免疫學(xué)(MolImmunol.),1999年12月；35(18):1171畫8。非專利引用文獻(xiàn)4:Lubben，NB.等，分子生物學(xué)與細(xì)胞(MolBiolCell.)，2007。非專利引用文獻(xiàn)5:Kim,DH.等，生物化學(xué)與分子生物學(xué)雜志(JBiochem固Biol.),2003年1月31日；36(1):110-9。非專利引用文獻(xiàn)6:Gottlicher,M.等，歐洲分子生物學(xué)雜志(EMBO丄)2001年11月17日；20(24):6969-78。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題在癌細(xì)胞和致病微生物感染細(xì)胞中，MHCI類抗原分子的表達(dá)經(jīng)常P爭(zhēng)低。因此，病毒感染細(xì)胞和癌細(xì)胞逃脫了宿主的免疫監(jiān)視，并且認(rèn)為這是不能通過活體的免疫能力消除病毒和癌癥的原因。為了通過這種免疫能力預(yù)防和治療感染、癌癥等，重要的是提高在致病微生物感染細(xì)胞或癌細(xì)胞中被降低的細(xì)胞表本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在眾多癌細(xì)胞中抵達(dá)細(xì)胞表面的MHCI類的表達(dá)水平被降低，盡管在MHCI類重鏈和輕鏈基因中均無突變性改變。他們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在某些癌細(xì)胞中，MHCI類抗原表達(dá)抑制的原因歸咎于與B2M基因結(jié)合的組蛋白脫乙?；ｋS后，證實(shí)HDAC抑制物在添加至其中B2M表達(dá)被降低的細(xì)胞時(shí)，提高了MHCI類在細(xì)胞表面上的表達(dá)水平以及B2M蛋白的水平。換而言之，已經(jīng)證實(shí)在其中誘導(dǎo)了MHCI類抗原表達(dá)抑制的細(xì)胞中，HDAC抑制物的使用提升了與B2M基因結(jié)合的組蛋白的乙?；⑻岣連2M蛋白的水平，從而導(dǎo)致MHCI類在細(xì)胞表面上的表達(dá)水平提高。另一方面，就病毒感染中MHCI類表達(dá)水平降低而言，已知涉及多個(gè)且復(fù)雜的如上所述系統(tǒng)。出乎意料地，由于本發(fā)明的發(fā)明人的深入研究，已經(jīng)證實(shí)組蛋白脫乙酰化抑制物的使用在多種病毒感染系統(tǒng)中均一地引起MHCI類抗原表達(dá)水平才是高，并且這有助于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。技術(shù)方案換句話說，本發(fā)明的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子的特征在于，其包含具有組蛋白脫此外，在本發(fā)明的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子中，具有HDAC抑制活性的物質(zhì)優(yōu)選地是丙戊酸。另外，本發(fā)明的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子優(yōu)選地用于治療或預(yù)防其中卩2-微球蛋白(B2M)的表達(dá)在患病部位^皮抑制的疾病?？蛇x地，本發(fā)明的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子優(yōu)選地用于在遭受因細(xì)胞侵入性致病微生物/因子所致的感染或存在這種感染風(fēng)險(xiǎn)的受試者中、或在患有疾病或存在患有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者中治療或預(yù)防疾病。所述的致病微生物優(yōu)選地是細(xì)胞侵入性細(xì)菌。另外，所述致病因子優(yōu)選地是病毒。進(jìn)一步，所述病毒更優(yōu)選地是選自由皰滲病毒科、乳多空病毒科、慢病毒科和副粘病毒科成員所組成的組中的一種或多種病毒。所述疾病優(yōu)選地是癌癥，更優(yōu)選地是前列腺癌或口腔癌，并且還更優(yōu)選地是乳腺癌。其次，本發(fā)明的HLAI類表達(dá)的增強(qiáng)子以包含具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分為特征。此外，在本發(fā)明的HLAI類表達(dá)的增強(qiáng)子中，具有HDAC抑制活性的物質(zhì)優(yōu)選地是丙戊酸。隨后，本發(fā)明的B2M表達(dá)的增強(qiáng)子以包含具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分為特征。此外，在本發(fā)明的B2M表達(dá)的增強(qiáng)子中，具有HDAC抑制活性的物質(zhì)優(yōu)選地是丙戊酸。隨后，本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法以包括給予受試者組合物的步驟為此外，在本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法中，具有HDAC抑制活性的物質(zhì)優(yōu)選地是丙戊酸。此外，本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法優(yōu)選地用于治療或預(yù)防其中卩2-微球蛋白(B2M)的表達(dá)在患病部位被抑制的疾病?？蛇x地，在本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法中，受試者優(yōu)選地被致病微生物感染，并且所述的致病微生物更優(yōu)選地是病毒，并且所述病毒還更優(yōu)選地是選自由皰滲病毒科、乳多空病毒科、慢病毒科和副粘病毒科成員所組成的組中的一種或多種病毒。另外，在本發(fā)明中，所述疾病優(yōu)選地是癌癥，并且所述癌癥更優(yōu)選地是前列腺癌或口腔癌，并且該癌癥還更優(yōu)選地是乳腺癌。也即，本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法可以用于在遭受因包括任意病毒的患癌癥(如乳腺癌、前列腺癌、口腔癌等)或存在所述患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者中預(yù)防或治療疾病。其次，用于篩選其細(xì)胞免疫將通過使用本發(fā)明具備HDAC抑制活性的物質(zhì)而得以增強(qiáng)的受試者的方法以包括以下步驟為特征.'從所述受試者獲得感染組織或癌組織的步驟，從所述組織提取B2M或編碼B2M的mRNA的步驟，以及將所述B2M或所述編碼B2M的mRNA的量與對(duì)照的量比較的步驟。另外，用于篩選其細(xì)胞免疫將通過使用本發(fā)明具備HDAC抑制活性的物質(zhì)而得以增強(qiáng)的受試者的方法以包括以下步驟為特征從所述受試者獲得感染組織或癌組織的步驟，用所述組織進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀以獲得沉淀物，并從所述沉淀中實(shí)施B2M的DNA片段的PCR擴(kuò)增以獲得擴(kuò)增的DNA片段的步驟，以及確定所述擴(kuò)增片段是否存在的步驟。此外，在本發(fā)明的篩選方法中，具有HDAC抑制活性的物質(zhì)優(yōu)選地是丙戊酸。有利的發(fā)明借助本發(fā)明所述細(xì)胞免疫增強(qiáng)子、HLAI類表達(dá)的增強(qiáng)子、B2M表達(dá)的增強(qiáng)子或用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，可以提高靶細(xì)胞中MHCI類抗原的表達(dá)水平。結(jié)果，增強(qiáng)了宿主中細(xì)胞毒T細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效果。因而，通過使用本發(fā)明的方法，可以進(jìn)行直接治療或可以提高現(xiàn)有療法在疾病如微生物感染、癌癥等中的治療效果。另外，借助用于篩選其細(xì)胞免疫將通過使用本發(fā)明具備HDAC抑制活性的物質(zhì)而得以增強(qiáng)的受試者的方法，可以選出其I類抗原表達(dá)因HLAI類輕鏈(B2M)蛋白水平降低而降低的靶細(xì)胞，并且因此可以篩選出這樣的受試者，該受試者患有其中B2M的表達(dá)在患病部位被抑制的疾病或具有發(fā)生或復(fù)發(fā)這種疾病的風(fēng)險(xiǎn)。類似地，可以對(duì)疾病(如微生物感染、癌癥等)進(jìn)行治療并且可以提高現(xiàn)有療法的治療效果。圖1是顯示通過染色質(zhì)沉淀使結(jié)合細(xì)胞內(nèi)B2M基因的組蛋白被脫乙?；膱D。左側(cè)組是其中在TSA存在下培養(yǎng)MCF-7人乳腺癌細(xì)胞的實(shí)例，并且右側(cè)組是其中在VPA存在下培養(yǎng)HMC-1人乳腺癌細(xì)胞系的實(shí)例。由于B2M基因在這兩種情況中在不處理狀態(tài)下的抗乙酰化組蛋白抗體免疫沉淀物中幾乎檢測(cè)不到，發(fā)現(xiàn)在B2M基因區(qū)中組蛋白是脫乙?；?。已經(jīng)通過TSA或VPA作用在相同的免疫沉淀物中檢測(cè)到B2M基因。圖2是顯示細(xì)胞內(nèi)B2M蛋白水平因HDAC抑制物而提高的圖。左側(cè)組是其中HMC-1人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)例并且右側(cè)組是其中MCF-7人乳腺癌細(xì)胞系培養(yǎng)的實(shí)例，兩組分別在TSA存在下培養(yǎng)24小時(shí)。在這兩種細(xì)胞中，證實(shí)在未處理狀態(tài)下處于極低水平的B2M蛋白因HDAC抑制物TSA的作用而明顯增加。相反，甚至在未處理狀態(tài)下以較高水平表達(dá)的HLAI類重鏈和肌動(dòng)蛋白的水平則沒有巨大改變。圖3是顯示細(xì)胞表面上MHCI類抗原的水平因HDAC抑制物TSA而提高的圖。左側(cè)組是其中HMC-1人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)例并且右側(cè)組是其中MCF-7人乳腺癌細(xì)胞系培養(yǎng)的實(shí)例，兩組分別在TSA存在下培養(yǎng)24小時(shí)。在這兩種細(xì)胞中，顯示在未處理狀態(tài)下處于極低水平的在細(xì)胞表面上的MHCI類抗原因HDAC抑制物TSA的作用而增加約十倍?？v軸表示細(xì)胞計(jì)^t,并且水平軸表示熒光強(qiáng)度。圖4是顯示細(xì)胞表面上MHCI類抗原的水平因HDAC抑制物VPA而提高的圖，其中已經(jīng)在人中建立所述VPA的安全性。HMC-1人乳腺癌細(xì)胞在4mMVPA存在下培養(yǎng)48小時(shí)。證實(shí)在未處理狀態(tài)下處于較低水平的在細(xì)胞表面上的MHCI類抗原因HDAC抑制物VPA的作用而增加約十倍。縱軸表示細(xì)胞計(jì)數(shù)，并且水平軸表示熒光強(qiáng)度。圖5是這樣的圖，顯示其中細(xì)胞表面上的HLAI類抗原(重鏈和輕鏈B2M蛋白)表達(dá)為陽性的癌癥病例(上半部分的兩組，病例A)和陰性癌癥病例(下半部分的兩組，病例B)。左上和左下兩組是其中乳腺癌樣品用抗HLAI類重鏈抗體(EMR8-5抗體)進(jìn)行免疫染色的圖，并且右上和右下兩組是其中相同乳腺癌樣品用抗B2M抗體(EMRB6抗體)進(jìn)行免疫染色的圖。所述圖顯示在人乳腺癌組織中存在HLAI類陽性癌(病例A)和陰性癌(病例B)。圖6用與圖5中的抗體類似的抗HLAI類重鏈抗體(EMR8-5抗體)進(jìn)行免疫染色，并且研究了多種類型的人癌組織中HLAI類抗原的細(xì)胞表面表達(dá)。如該表中所示，表明表達(dá)頻率根據(jù)癌癥類型而不同，但是相對(duì)于全部癌癥類型而言存在其中HLAI類抗原為陽性的癌癥和表達(dá)為陰性或降低的癌癥。應(yīng)當(dāng)注意其中HLAI類抗原表達(dá)降低的頻率尤其在乳腺癌和前列腺癌中較高。圖7是顯示HLAI類抗原的表達(dá)水平與對(duì)照組(VPA(-))相比在VPA給藥小鼠(VPA(+))的腫瘤中提高的圖。圖8是顯示B2M的表達(dá)水平與對(duì)照組(VPA(-))相比在VPA給藥小鼠(VPA(+))的胂瘤中提高的圖。圖9是顯示與對(duì)照組(VPA(-))相比，在VPA(VPA(+))存在下人免疫缺陷病毒(MV)持續(xù)性感染T細(xì)胞中HLAI類抗原的表達(dá)水平提高的圖。圖IO是顯示與對(duì)照組(VPA(-))相比，在VPA(VPA(+))存在下乳頭瘤病毒持續(xù)性感染上皮細(xì)胞系(HeLa細(xì)胞)中HLAI類抗原的表達(dá)水平提高的圖。圖ll是顯示與對(duì)照組(VPA(-))相比，在VPA(VPA(+))存在下伯基特淋巴瘤病毒(EBvirus)持續(xù)性感染圖11B纟田胞(LG2EBV纟田月包)中HLAI類抗原的表達(dá)水平提高的圖。圖12是顯示與對(duì)照組(VPA(-))相比，在VPA(VPA(+))存在下腮腺炎病毒持續(xù)性感染B細(xì)胞(Akata-MPl細(xì)胞)中HLAI類抗原的表達(dá)水平提高的圖。圖13是顯示與對(duì)照組(VPA(-))相比，在VPA(VPA(+))存在下麻滲病毒持續(xù)性感染B細(xì)胞(Raji-ZH細(xì)胞)中HLAI類抗原的表達(dá)水平提高的圖。實(shí)施本發(fā)明的最佳模式此后，解釋本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。本發(fā)明的第一實(shí)施方式涉及含有具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性組分的組合物。"具備HDAC抑制活性的物質(zhì)"可以是任意物質(zhì)，只要它是能夠給藥給人或動(dòng)物的HDAC抑制物。例如，具有HDAC抑制作用的藥物(agent)之一是丙戊酸(VPA)，其安全性已經(jīng)在人中充分建立。在VPA的例子中，盡管可能以約1000mg-2400mg每日劑量口服給藥至人，不過該劑量可以根據(jù)體重和年齡、藥代動(dòng)力學(xué)、安全性、效果、目的、給藥方法等進(jìn)行調(diào)整。作為具備HDAC抑制活性的物質(zhì)，還可以等效地使用除VPA之外任意HDAC抑制物。例如，在本申請(qǐng)?zhí)岢鲋畷r(shí)，所述藥物如苯基丁酸、FK228(酯肽)、SAHA(辛二酰苯胺異羥坊酸(suberoylanilidehydroxamicacid))、PXD101、CI-994(N-乙酰地那林)、MGCD0103、匹維耐克斯(Pivanex)、CRA-024781、MS-275、LBH589、MG989、LAQ-824和NVP-LAQ824已經(jīng)就不同于本發(fā)明的另一個(gè)用途處在臨床試驗(yàn)中，此外，眾多HDAC抑制物如TSA、楚普辛(Trapoxin)、CHAP、阿匹西丁(Apicidin)和地普迪辛(Depudecin)是已知的。因此，作為"具備HDAC抑制活性的物質(zhì)"，可以在本發(fā)明的實(shí)施中使用與VPA具有等同作用和/或特異性的HDAC抑制物。此類HDAC抑制物可以稱作針對(duì)I類和/或II類HDAC的抑制物。另外，使用含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物以治療或預(yù)防其中B2M表達(dá)在患病部位被抑制的疾病。例如，當(dāng)疾病是癌癥時(shí)，前述患病部位意指癌細(xì)胞；若該疾病是感染，意指致病微生物感染的細(xì)胞。此外，雖然不特別地限制待以含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物給藥的受試者，不過所述受試者包括癌癥患者、具有癌癥發(fā)生或復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的受試者，或受致病微生物(如病毒和其他致病微生物)感染的受試者，或具有所述感染風(fēng)險(xiǎn)的受試者。在本發(fā)明中由致病微生物所致的感染沒有特別的限制，并且它包括例如病毒所致感染，其中所述的病毒包含皰滲病毒科的病毒，包括EB病毒、細(xì)胞巨化病毒、人合胞體病毒(HSV)、第七種人類皰滲病毒(HHV-7)等；乳多空病毒科的病毒，包括乳頭瘤病毒等；細(xì)小病毒科的病毒；腺病毒科的病毒；嗜肝DNA病毒科的病毒，包括乙型肝炎病毒(HBV)等；痘病毒科的病毒，小RNA病毒科的病毒，包括屬于腸病毒屬的柯薩奇病毒、曱型肝炎病毒(HAV)等；冠狀病毒科的病毒，包括SARS病毒；披膜病毒科的病毒；黃病毒科的病毒，包括丙型肝炎病毒(HCV)、西尼羅河熱病毒等；狂犬病毒科的病毒；絲狀病毒(filovirus)科的病毒；副粘病毒科的病毒，包括麻療病毒、流行性腮腺炎病毒(腮腺炎病毒)、副流感病毒等，沙粒病毒科的病毒；布尼亞病毒科，包括漢坦病毒等；正粘病毒科的病毒，包括流感病毒；逆轉(zhuǎn)錄病毒科的病毒，包括慢病毒亞科的fflV-l/2、貓免疫缺陷病毒(FIV)和腫瘤病毒亞科的人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒(HTLV-1/2)等；呼腸孤病毒科的病毒，包括輪狀病毒；和其他多種病毒，以及由細(xì)菌、支原體、立克次氏體、真菌、寄生蟲(如原蟲)等所致的感染，并且還是包括其中毒力因子實(shí)際上可以不指明的任意感染。換而言之，不特別地限制前述感染，但是這有可能施用于患有如下疾病或具有這些疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者，其中所述的疾病例如是呼腸孤病毒感染、SARS、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、黃熱病、日本腦炎、登革熱、西尼羅河熱、牛病毒性腹瀉粘膜病、豬霍亂、邊界病、丙型肝炎、口蹄疫、脊髓灰質(zhì)炎(急性脊髓灰質(zhì)炎)、曱型肝炎、感冒、風(fēng)疹、辛德比斯病毒感染、馬病毒性動(dòng)脈炎、猴出血熱、諾如病毒感染、禮幌病毒(sapovirus)感染、兔出血癥、貓杯狀病毒病、豬水泡瘆、戊型肝炎、馬爾堡病、埃博拉出血熱、狂犬病、水皰性口炎、麻疹、小反芻獸疫、犬瘟熱、牛瘟、流行性腮腺炎、梅那哥病毒(Menanglevirus)感染、新城疫病、呼吸道合胞病毒(RSvirus)感染、人偏肺病毒感染、尼帕病毒感染、流感、赤羽病、漢坦病毒肺綜合征、腎綜合征出血熱、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎、拉沙熱、阿根廷出血熱、玻利維亞出血熱、艾滋病(AIDS)、成人T-細(xì)胞白血病，或水痘、天花、帶狀皰滲、細(xì)胞巨化病毒感染、腺病毒感染、乙型肝炎和其他疾病。此外，含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物可以在治療或預(yù)防致病微生物感染中單獨(dú)使用或用作輔藥以補(bǔ)充針對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他感染的治療和預(yù)防作用。另外，含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物可以在治療或預(yù)防癌癥中用作抗癌藥和/或用作輔藥以補(bǔ)充其他抗癌療法。在癌癥預(yù)防中最優(yōu)選的實(shí)施方式是預(yù)防癌復(fù)發(fā)。盡管不特別地限制作為本發(fā)明中治療或預(yù)防主題的癌癥，不過可以列出多種癌癥如肺癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌和膀胱癌，優(yōu)選前列腺癌或口腔癌，更優(yōu)選乳腺癌。另一方面，本發(fā)明的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子可以優(yōu)選地在個(gè)體病例中應(yīng)用，只要B2M表達(dá)受到抑制，實(shí)際上不必是其中經(jīng)常觀察到B2M表達(dá)被抑制的疾病(例如乳腺癌和前列腺癌)。另外，不特別限制抗癌治療的方法，但是這些方法包括多種療法，如放療法、熱療法，化療法(例如抗癌藥，如阿那曲唑、環(huán)磷酰胺、伊立替康、阿糖胞苷、紫杉醇、多西他賽、白消安、卡波醌、二溴甘露醇、達(dá)卡巴嗪、美法侖、甲基節(jié)肼、去氧氟尿苷、氟尿嘧咬、卡莫氟(camofur)、巰嘌呤、曱氨蝶呤、阿糖胞苷十八烷基磷酸鈉、替加氟、卡鉑、順鉑、塞替派、多柔比星、表柔比星、阿柔比星、L-天冬酰胺酶、絲裂霉素C、曱羥孕酮、云芝多糖、他莫昔芬、托瑞米芬、長(zhǎng)春瑞濱和鬼臼乙叉苷，或使用其藥學(xué)上可接受鹽的那些療法等)、基因療法(導(dǎo)入腫瘤抑制基因如p53的那些基因療法，使用隨免疫刺激細(xì)胞因子一起所導(dǎo)入的肺瘤細(xì)胞的那些基因療法等)、外科療法和營(yíng)養(yǎng)療法，并且優(yōu)選地是免疫療法。在所述免疫療法中包括使用腫瘤抗原肽的癌癥疫苗療法、通過介體/載體如病毒導(dǎo)入肽抗原或胂瘤-細(xì)胞基因至活體的DNA疫苗、利用腫瘤細(xì)胞中RNA的RNA疫苗、聯(lián)合使用細(xì)胞因子和樹突狀細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞的療法、單克隆抗體療法等。此外，含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物也可以用于產(chǎn)生藥物用來增強(qiáng)細(xì)胞免疫。除了用于治療之外，此類細(xì)胞免疫增強(qiáng)子還用于預(yù)防、復(fù)發(fā)預(yù)防等，以及改善與本發(fā)明的多種疾病相關(guān)的疾病狀態(tài)。另外，不特別地限制給藥含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物的方法，不過，可以向受試者口服給藥或胃腸道外給藥(例如，靜脈內(nèi)給藥(包括靜脈內(nèi)輸注給藥)、動(dòng)脈內(nèi)給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、局部給藥等)。給藥的受試者可以是任意動(dòng)物，例如浙蜴、雞、家鴨、野鴨、小鼠、大鼠、犬、貓、綿羊、山羊、牛、馬、豬、猴、人和可以考慮對(duì)其給藥的其他動(dòng)物，并且優(yōu)選地是哺乳動(dòng)物，包括人。而且，含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物可以通過與經(jīng)常使用的藥用載體配制在一起而制備。例如，作為活性組分的HDAC抑制物可以制備為用于口服給藥的液體口服制劑如糖漿劑，或纟皮加工成提取物、粉末等并與藥學(xué)上可接受載體摻合以制備口服制劑，如片劑、膠嚢劑、糖漿劑、乳劑、顆粒劑和散劑。就藥學(xué)上可接受載體而言，采用通常使用的多種物質(zhì)，例如，可以在固體制劑中#^賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑，或在液體制劑中#^溶劑、賦形劑、增溶劑(solubilizingagent)、助溶劑(solubilizer)、乳化劑、懸浮劑、粘合劑等。此外，也可以根據(jù)需要添加制劑添加物如防腐劑、抗氧化劑、著色劑和甜p木劑。含有本發(fā)明中具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性成分的組合物可以單獨(dú)地使用，不過因?yàn)樵摻M合物用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫目的，故它可以優(yōu)選地與抗原特異性疫苗如癌抗原特異性疫苗和病毒的疫苗以及其他抗原非特異性免疫刺激物(例如細(xì)胞因子如干擾素)和多種佐劑組合使用?？稍诮M合中使用的藥用物質(zhì)可以或者通過與含有本發(fā)明中HDAC抑制物的藥用物質(zhì)混合的方式或者單獨(dú)地使用。其次，本發(fā)明的第二實(shí)施方式涉及用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其包括給藥含有具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性組分的組合物至受試者的步驟。即，此方法是一種用于增強(qiáng)受試者中細(xì)胞免疫的方法，所述的受試者患有因免疫力降低而衍生的疾病或存在患該疾病的風(fēng)險(xiǎn)，其中所述方法包括以增強(qiáng)細(xì)胞免疫的劑量給藥組合物至該受試者的步驟，其中所述的組合物含有藥學(xué)上可接受的載體和具備HDAC抑制活性的物質(zhì)。用于篩選受試者的方法也屬于本發(fā)明的范圍并且是第三實(shí)施方式，其中所述的受試者患有其中B2M表達(dá)在患病部位被抑制的疾病，從而適用于本發(fā)明中用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，或因此，所述受試者患有其中B2M表達(dá)在患病部位被抑制的疾病或具有發(fā)生或復(fù)發(fā)這種疾病的風(fēng)險(xiǎn)，從而適用于本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法。在這種篩選法中包括以下步驟1)從受試者獲得患病組織如癌組織的步驟；2)從上述組織提取B2M或編碼B2M的mRNA的步驟；和3)將B2M或編碼B2M的mRNA的量與對(duì)照量比較的步驟。除了通常針對(duì)每種器官^f吏用的活組織檢查之外，還可以通過洗出液、磨損收集物、體液如血液、脊液、淋巴液、尿、唾液、腹水、胸水和滲出物等獲得組織。隨后，可以通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如通過使用質(zhì)譜儀或免疫學(xué)方法(如ELISA、放射免疫測(cè)定法、熒光抗體法、蛋白質(zhì)印跡法、免疫組織化學(xué)染色法或等；遺傳方法如RNA印跡法、RT-PCR、孩t陣列等)或其他方法而進(jìn)行B2M或編碼B2M的mRNA的量比較。所述篩選法適用于初步篩選，通過此篩選法選出適用于本發(fā)明方法的受試者，然而，更嚴(yán)格地，優(yōu)選進(jìn)一步進(jìn)行包括以下步驟的篩選法，或通過從頭開始實(shí)施所述篩選法進(jìn)一步縮小待選出的受試者范圍。1)從受試者獲得患病組織如癌組織的步驟；2)用上述組織進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀以獲得沉淀物、并從所述沉淀物中進(jìn)行PCR擴(kuò)增B2M的DNA片段的步驟；以及3)評(píng)價(jià)縮擴(kuò)增DNA片段存在或不存在的步驟。存在這樣的可能性，即B2M基因表達(dá)抑制因其中B2M的DNA片段不由所述方法擴(kuò)增的受試者中存在HDAC活性所致，并且通過采用本發(fā)明的治療方法以及類似方法所實(shí)現(xiàn)的效果是期望的。本文中，"染色質(zhì)免疫沉淀法"是使結(jié)合于染色質(zhì)的DNA及所述該染色質(zhì)親和沉淀的方法，可以使用任意合適的方法，然而，例如可以通過如此方式維持染色質(zhì)與DNA之間的結(jié)合狀態(tài)，即以交聯(lián)劑如1%曱醛(例如在室溫10分鐘)預(yù)處理組織細(xì)胞，此后利用通常所用的放射免疫沉淀測(cè)定緩沖液(RIPAbuffer)等裂解所述細(xì)胞，并用超聲波均質(zhì)器等剪切所述DNA，隨后沉淀使染色質(zhì)和所結(jié)合的DNA片段沉淀(見AssamEl-Osta等，(2002)分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)(MOLECULARANDCELLULARBIOLOGY)22(6)第1844-1857頁)。此外，作為本發(fā)明第二實(shí)施方式的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法是用于增強(qiáng)受試者中HLAI類表達(dá)的方法，其包括給藥含有具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性組分的組合物至該受試者的步驟。這種組合物用于治療致病樣t生物(如病毒)感染或作為所述感染的預(yù)防藥或作為抗癌藥在治療其中B2M^皮抑制的疾病中(例如在治療癌癥中)^^用，或用于輔助該疾病的其他治療方法，但不限于此。另外，本發(fā)明用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法是用于增強(qiáng)受試者中B2M表達(dá)的方法，其包括給藥含有具備HDAC抑制活性的物質(zhì)作為活性組分的組合物至該受試者的步驟。這種組合物用于治療或預(yù)防癌癥，例如單獨(dú)地或與其他治療方法組合使用，^旦不限于此。除非另外說明，本文中所用的術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解和使用的意義。另外，除非另外說明，文中所用的方法和技術(shù)可以根據(jù)本
技術(shù)領(lǐng)域：
熟知方法的常規(guī)用途進(jìn)行。描述這些方法的參考文獻(xiàn)列出為，例如Sambrook等，分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1989和2001);Ausubel等，最新分子生物學(xué)實(shí)馬全方法(CurrentProtocolsinMolecularBiology),格4木出片反/^司(GreenePublishingAssociates)(1992禾口附錄)；和Harlow和Lane，4元體4吏用實(shí)-瞼室手冊(cè)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1999)等以及在本說明書中描述的供應(yīng)商所提供的指南手冊(cè)等。引用的文獻(xiàn)如本文中引用的科學(xué)文獻(xiàn)、專利、專利申請(qǐng)通過引用的方式完整并入。實(shí)施例此后，本發(fā)明在實(shí)施例中說明，但是本發(fā)明的范圍無^r如何不受所述實(shí)施例限制。本發(fā)明的模式1本實(shí)施例顯示，結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)B2M基因區(qū)的組蛋白是脫乙?；?，并且這種脫乙?；饔糜蒆DAC抑制物消除。下文顯示所述過程。使用人乳腺癌細(xì)胞系即MCF-7細(xì)胞和HMC-1細(xì)胞分別在100nMTSA(西格瑪(Sigma),USA)存在下培養(yǎng)24小時(shí)或在4mMVPA(Sigma，USA)存在下培養(yǎng)48小時(shí)，隨后根據(jù)制造商說明書(阿普斯得特公司(UpstateInc.)，USA)從所述的細(xì)胞提取染色質(zhì)并利用抗乙?；M蛋白H3抗體(UpstateInc.,USA)(見AssamEl-Osta等2002,分子及細(xì)胞生物學(xué)(MOLECULAR和CELLULARBIOLOGY).22(6).第1844-1857頁)使該染色質(zhì)免疫沉淀。使用PCR，用GACTAGC)擴(kuò)增與乙酰化組蛋白結(jié)合的基因，并在1%瓊脂糖凝膠上電泳，隨后用透照器(transilluminator)在溴化乙啶存在下檢測(cè)。結(jié)果顯示任意癌細(xì)胞中的B2M基因區(qū)域組蛋白是脫乙酰化的。當(dāng)促進(jìn)通過HDAC抑制物(如TSA和VPA)作用所致的組蛋白乙酰化時(shí)，檢測(cè)到與乙?；M蛋白在一起的B2M基因(圖1)。本發(fā)明的模式2本實(shí)施例證明細(xì)胞內(nèi)B2M蛋白的表達(dá)因HDAC抑制物增力口。下文顯示所述過程。(1)使用與實(shí)施例1中相同的細(xì)胞，將MCF-7細(xì)胞和HMC-1細(xì)胞在HDAC抑制物TSA(100nM)存在下分別培養(yǎng)24小時(shí)，隨后收獲細(xì)月包。(2)lxl(^個(gè)細(xì)胞在100ml細(xì)胞裂解液(RIPA緩沖液)中裂解，并且收獲可溶性部分作為為裂解物。向該裂解物添加十二烷基硫酸鈉上樣緩沖液(SDSsamplebuffer)。(3)將蛋白質(zhì)樣品上樣至7.5%十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯酰胺凝膠上并進(jìn)行電泳。(4)將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(密理博(Millipore))上。(5)所述轉(zhuǎn)移的膜浸沒于磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中的5%脫脂乳內(nèi)并封閉約1小時(shí)。(6)所述轉(zhuǎn)移的膜浸沒于第一抗體(抗泛-HLAI類重鏈抗體EMR8-5(北斗，札幌(Hokudo，Sapporo))或抗B2M抗體EMRB6(Hokudo，Sapporo)或抗肌動(dòng)蛋白抗體(達(dá)科(DAKO))中，并在室溫下溫育l小時(shí)。(7)所述轉(zhuǎn)移的膜用PBS-T洗液(0.05%吐溫(Tween)20/PBS,pH7.4)洗滌三次。(8)所述轉(zhuǎn)移的膜浸沒于第二抗體即過氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG抗體(KPL，USA)中，并在室溫下溫育l小時(shí)。(9)所述轉(zhuǎn)移的膜用PBS-T洗液(0.05%Tween20/PBS,pH7.4)洗滌三次。(10)所述轉(zhuǎn)移的膜浸沒于增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒(ECLkit)(阿莫仙(Amersham)，USA)的發(fā)光溶液中并進(jìn)行顯色反應(yīng)約1分鐘。(11)發(fā)光信號(hào)通過對(duì)X射線膠片曝光進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果證實(shí)盡管細(xì)胞內(nèi)HLA重鏈和肌動(dòng)蛋白的表達(dá)水平在TSA存在或不存在下沒有巨大差異，然而B2M蛋白的水平因TSA處理而顯著提高(圖2)。本發(fā)明的模式3使用與實(shí)施例1和實(shí)施例2中相同的細(xì)胞，將MCF-7細(xì)胞和HMC-1細(xì)胞分別在HDAC抑制物TSA(100nM)存在下培養(yǎng)24小時(shí)或在HDAC抑制物VPA(4mM)存在下培養(yǎng)48小時(shí)，并且通過流式細(xì)胞儀(碧迪公司(Becton述過程。(1)1xlo6個(gè)細(xì)胞懸浮在100mlPBS緩沖液中，添加第一抗體(抗泛-HLAI類抗體W6/32(Barnstable,CJ"Bodmer,W.J"Brown，G"Galfre,G.,Milstein，C，Williams,A.R，和Zeigler,A.(1978)《細(xì)月包》(Cell)14，9-20)并在4。C孵育40分鐘。(2)所述細(xì)^^用PBS洗滌兩次。(3)向所述懸浮的細(xì)胞添加第二抗體(異硫氰酸熒光素(FITC)一-標(biāo)記抗小鼠IgG抗體(KPL，USA))并溫育在4'C孵育40分鐘。(4)細(xì)胞用PBS洗滌兩次，并懸浮在添加1%福爾馬林的PBS中，隨后通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面的FITC水平。結(jié)果證實(shí)在TSA或VPA存在下，所述細(xì)胞表面的MHCI類水平提高約10倍(圖3,圖4)。本發(fā)明的模式4在本實(shí)施例中，對(duì)福爾馬林固定的人癌組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并且分析MHCI類抗原在真實(shí)的人癌組織中的表達(dá)水平。下文顯示所述過程。(1)用20。/o福爾馬林固定劑固定的人乳腺癌組織的石蠟包埋切片，通過乙醇進(jìn)行脫石蠟。(2)作為抗原活化的處理，將所述切片浸沒在O.Olmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)中并進(jìn)行高壓滅菌(ll(TC,5分鐘)。(3)0.5ml的5mg/ml抗HLAI類重鏈抗體(EMR8-5)或0.5ml的5mg/ml抗b2微球蛋白(B2M)抗體(EMRB6)作為第一抗體逐滴添加在所述切片上并在室溫下溫育1小時(shí)。(4)所述切片以PBS-T洗液(0.05%Tween20/PBS，pH7.4)洗滌3次。(5)將第二抗體過氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG抗體(SimpleStainMAX-PO，NICHIREI)滴在所述切片上并在室溫下溫育30分鐘。(6)所述切片以PBS-T洗液(0.05%Tween20/PBS,pH7.4)洗滌3次。(7)所述切片浸沒在過氧化氫水溶液和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)底物的混合溶液(單純?nèi)旧玀AX-PO(SimpleStainMAX-PO)，日冷(NICHIREI))中，并且顯色1至2分鐘。(8)所述切片用流水洗滌1分鐘。(9)實(shí)施蘇木精核染色法(1至2分鐘)。蘇木精核染色法按照以下步驟進(jìn)行。1.將切片置于水中。2.將切片置于(濾過的)邁爾斯蘇木精(Mayershaematoxylin)中5分鐘。3.在自來水中洗滌。4.在自來水中"染藍(lán)(blue)"切片。5.將切片置于1°/。酸醇(70%乙醇99ml外加lml濃鹽酸)持續(xù)幾秒。6.在自來水中洗滌。7.將切片置于伊紅溶液(100ml蒸餾水中的微黃色伊紅1.0g)5分鐘。8.在自來水中洗滌。9.脫水，透明(clear)。10.在Immumount或DPX中封片。結(jié)果顯示存在其中HLAI類重鏈和B2M蛋白為陽性的癌，如圖5上半部分兩個(gè)表格顯示(病例A)和其中HLAI類重鏈和B2M蛋白為陰性的癌，如圖5下半部分兩個(gè)表格顯示(病例B)。本發(fā)明的模式5通過類似于實(shí)施例5的免疫染色方法分析MHCI類抗原在人的多種癌組織中的表達(dá)水平。如圖6中所示，在41個(gè)乳腺癌病例中有35個(gè)病例(85%)的HLAI類抗原表達(dá)減少或消失，并且每種HLAI類抗原的表達(dá)在35個(gè)肺癌病例中7個(gè)病例(20%)內(nèi)、57肝癌病例中24個(gè)病例(42%)內(nèi)、15個(gè)結(jié)腸癌病例中4個(gè)病例(27%)內(nèi)、45個(gè)腎細(xì)胞癌病例中16個(gè)病例(35%)內(nèi)、53個(gè)膀胱癌病例中18個(gè)病例(34%)內(nèi)、78個(gè)口腔癌病例中的45個(gè)病例內(nèi)(58%)內(nèi)、49個(gè)前列腺癌病例中的40個(gè)病例(82%)內(nèi)降低或呈陰性。應(yīng)當(dāng)指出表達(dá)降低的頻率在乳腺癌和前列腺癌中明顯較高。本發(fā)明的模式6人乳腺癌細(xì)胞系MCF7細(xì)胞移植至嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)小鼠中。兩周后，獲得直徑約5mm的皮下腫瘤。向一只小鼠供以含有0.4%丙戊酸(VPA，Sigma)的水持續(xù)10日，并且向另一只小鼠供應(yīng)無添加物的水作為對(duì)照。十日后，將腫瘤以外科方式切下，并使用10%福爾馬林(因?yàn)閳F(tuán)塊小，因此將濃度設(shè)置在低于實(shí)施例4中的濃度上以防止過度固定)在室溫下固定過夜，并且獲得石蠟包埋的切片。按照實(shí)施例4的方法，用抗HLAI類抗體(EMR8-5)和抗B2M抗體(EMR-B6)處理組織切片以及進(jìn)行免疫染色。結(jié)果，如圖6和圖7中顯示，與對(duì)照組相比，HLAI類抗原和B2M的表達(dá)水平在給藥VPA的小鼠中的肺瘤內(nèi)提高。從該實(shí)驗(yàn)中，證實(shí)可以通過口服給藥HDAC抑制物VPA提高人乳腺癌組織的MHCI類抗原表達(dá)。本發(fā)明的模式7fflV感染系統(tǒng)的模型HIV感染的T細(xì)胞(從美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心(ATCC)購買的克隆8E5)在添加4mM丙戊酸的培養(yǎng)基(RPMI1640)和無添加物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，并且分別與抗泛-HLAI類抗體、W6/32抗體并與FITC標(biāo)記抗小鼠IgG抗體反應(yīng)40分鐘，并且將細(xì)胞在O.l。/o福爾馬林/PBS中固定。熒光強(qiáng)度由流式細(xì)胞儀(FACScan，碧迪公司(BecktonDickinson))測(cè)量。在細(xì)胞表面上HLAI類水平于所述HDAC抑制物存在下降低的感染細(xì)胞組中觀察到表達(dá)的恢復(fù)。本發(fā)明的模式8乳頭瘤病毒持續(xù)性感染的細(xì)胞(海拉細(xì)胞(HeLa))在添加4mM丙戊酸的培養(yǎng)基(RPMI1640)和無添加物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，并且分別與抗泛-HLAI類抗體、W6/32抗體并與FITC標(biāo)記抗小鼠IgG抗體反應(yīng)40分鐘，并且將細(xì)胞在0.1。/。福爾馬林/PBS中固定。熒光強(qiáng)度由流式細(xì)胞儀(FACScan，BecktonDickinson)測(cè)量。在細(xì)胞表面上HLAI類水平于所述HDAC抑制物存在下降低的感染細(xì)胞組中觀察到表達(dá)的恢復(fù)。本發(fā)明的模式9EB病毒持續(xù)性感染的B細(xì)胞(LG2EBV細(xì)胞)在添加4mM丙戊酸的培養(yǎng)基(RPMI1640)和無添加物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，并且分別與抗泛-HLAI類抗體、W6/32抗體并與FITC標(biāo)記抗小鼠IgG抗體反應(yīng)40分鐘，并且將細(xì)胞在O.l。/。福爾馬林/PBS中固定。熒光強(qiáng)度由流式細(xì)胞儀(FACScan,BecktonDickinson)測(cè)量。在細(xì)胞表面上HLAI類水平于所述HDAC抑制物存在下降低的感染細(xì)胞組中觀察到表達(dá)的恢復(fù)。本發(fā)明的模式10腮腺炎病毒持續(xù)性感染的B細(xì)胞(Akata-MPl細(xì)胞)在添加4mM丙戊酸的培養(yǎng)基(RPMI1640)和無添加物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，并且分別與抗泛-HLAI類抗體、W6/32抗體并與FITC標(biāo)記抗小鼠IgG抗體反應(yīng)40分鐘，并且將細(xì)胞在0.1。/。福爾馬林/PBS中固定。菱光強(qiáng)度由流式細(xì)胞儀(FACScan，BecktonDickinson)測(cè)量。在細(xì)胞表面上HLAI類水平于所述HDAC抑制物存在下降低的感染細(xì)胞組中觀察到表達(dá)的恢復(fù)。本發(fā)明的模式ll庥滲病毒持續(xù)性感染的B細(xì)胞(Raji-ZH細(xì)胞)在添加4mM丙戊酸的培養(yǎng)基(RPMI1640)和無添加物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，并且分別與抗泛-HLAI類抗體、W6/32抗體并與FITC標(biāo)記抗小鼠IgG抗體反應(yīng)40分鐘，并且將細(xì)胞在O.l。/。福爾馬林/PBS中固定。熒光強(qiáng)度由流式細(xì)胞儀(FACScan,Beckton低的感染細(xì)胞組中觀察到表達(dá)的恢復(fù)。在上述的全部病毒感染系統(tǒng)中，盡管沒有觀察到因給藥所述HDAC抑制物所至的B2M表達(dá)升高，然而以相似方式觀察到MHCI類表達(dá)升高。與癌組織中的觀察結(jié)果相比，所述結(jié)果是完全出乎意料的。權(quán)利要求1.細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其包含具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)作為活性成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)是丙戊酸。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，用于治療或預(yù)防其中P2-微球蛋白表達(dá)在患病部位被抑制的疾病。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述的疾病是由致病微生物引起的感染。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述致病^f故生物是病毒。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述病毒是選自由皰滲病毒科、乳多空病毒科、慢病毒科和副粘病毒科成員所組成的組中的一種或多種病毒。7.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述的疾病是癌癥。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述的癌癥是乳腺癌。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞免疫增強(qiáng)子，其中，所述的癌癥是前列腺癌或口腔癌。10.人白細(xì)胞抗原I類表達(dá)的增強(qiáng)子，其包含具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)作為活性成分。11.(32-微球蛋白表達(dá)的增強(qiáng)子，其包含具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)作為活性成分。12.用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其包括給予受試者組合物的步驟，所述的組合物含有具備組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)作為活性成分。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)是丙戊酸。14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，用于治療或預(yù)防其中P2-微球蛋白表達(dá)在患病部位被抑制的疾病。15.根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的受試者被致病^:生物感染。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的致病微生物是病毒。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的病毒是選自由皰疹病毒科、乳多空病毒科、慢病毒科和副粘病毒科成員所組成的組中的一種或多種病毒。18.根據(jù)權(quán)利要求12至14所述的任一項(xiàng)用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的疾病是癌癥。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的癌癥是乳腺癌。20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫的方法，其中，所述的癌癥是前列腺癌或口腔癌。21.用于篩選其細(xì)胞免疫將通過使用具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)得以增強(qiáng)的受試者的方法，其包括1)從所述受試者獲得感染組織或癌組織的步驟，2)從所述組織提取02-微球蛋白或編碼P2-微球蛋白的mRNA的步驟，以及3)將所述P2-微球蛋白或所述編碼|32-微球蛋白的mRNA的量與對(duì)照量比較的步驟。22.用于篩選其細(xì)胞免疫將通過使用具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)得以增強(qiáng)的受試者的方法，其包括1)從所述受試者獲得感染組織或癌組織的步驟，2)用所述組織進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀以獲得沉淀物，并且從該沉淀物中實(shí)施PCR擴(kuò)增P2-微球蛋白的DNA片段以獲得擴(kuò)增的DNA片段的步驟，以及3)確定所述擴(kuò)增片段是否存在的步驟。23.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的方法，其中，所述具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)是丙戊酸。全文摘要[技術(shù)問題]本發(fā)明提供細(xì)胞免疫增強(qiáng)子并且提供針對(duì)癌發(fā)生的應(yīng)用或針對(duì)癌復(fù)發(fā)的預(yù)防性療法、用于癌癥的免疫療法、對(duì)致病微生物感染的治療等。[技術(shù)方案]本發(fā)明包含具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制活性的物質(zhì)作為活性組分。文檔編號(hào)A61K31/19GK101626763SQ200780044958公開日2010年1月13日申請(qǐng)日期2007年12月6日優(yōu)先權(quán)日2006年12月6日發(fā)明者佐藤升志,淺沼廣子,石野正穗,藤井暢弘,鳥越俊彥申請(qǐng)人:北海道公立大學(xué)法人札幌醫(yī)科大學(xué);獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu)