專利名稱：：利用可溶性淋巴毒素β受體的脫髓鞘病的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：普通技術(shù)人員通常理解的意思相同。下文將描述優(yōu)選的方法和材料，但是在本發(fā)明的實施或測試中可以使用與本文所述的方法和材料類似或等同的那些。將全部本文提及的公開文獻、專利申請、專利和其它參考文獻通過引用全文并入。本文公開的材料、方法和實例僅用作說明，并且不旨在進行限制。從以下描述、從附圖和從權(quán)利要求書看，本發(fā)明的其它特性和優(yōu)勢將使顯而易見的。圖1是描述在Cuprizone處理過程中野生型小鼠中LtfiRmRNA表達水平的圖示。圖2是描述在Lt!3R一和野生型小鼠中脫髓鞘化(demyelination)的嚴重性的圖示。按照描述脫髓鞘化嚴重性的等級(scale),如通過LFB-PAS染色的石蠟切片所測定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脫髓鞘化。每個圓圈代表一只單獨的小鼠空心圓圈，C57BL6野生型(wt);實心圓圈，Lti3R;小鼠。水平線表示每組的中位數(shù)得分。圖3是描述在用Cuprizone處理之后在中線胼胝體處檢測到的成熟少突膠質(zhì)細胞數(shù)的圖示。野生型小鼠用灰色條形圖表示；L化Ry—小鼠用黑色條形圖表示。圖4是描述在用Cuprizone處理之后在中線胼胝體處檢測到的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞數(shù)的圖示。野生型小鼠用灰色條形圖表示；Lt!3R;小鼠用黑色條形圖表示。圖5是描述在施用hLt!3R-Ig或人Ig對照之后野生型C57BL6小鼠中脫髓鞘化的嚴重性的圖示。按照描述脫髓鞘化嚴重性的等級，如通過LFB-PAS染色的石蠟切片所測定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脫髓鞘化。每個圓圏代表一只單獨的小鼠空心圓圈，用人Ig處理的小鼠；實心圓圈，用hUI3R-Ig處理的小鼠。水平線表示每組的中位數(shù)(median)得分。圖6是描述在施用mLt!5R-Ig或小鼠Ig對照之后野生型C57BL6小鼠中脫髓鞘化的嚴重性的圖示。按照描述脫髓鞘化嚴重性的等級，如通過LFB-PAS染色的石蠟切片所測定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脫髓鞘化。每個圓圈代表一只單獨的小鼠空心圓圈，小鼠Ig處理的小鼠；實心圓圈，用mLtfiR-Ig處理的小鼠。水平線表示每組的中位數(shù)得分。詳述本文所述的可溶性LtJ3R是淋巴毒素(LT)途徑抑制劑，并且被證明促進髓鞘再生。因此，可溶性Ltl3R可用于治療脫髓鞘病。脫髓鞘病可以包括，例如，多發(fā)性硬化(例如復發(fā)性/間歇性多發(fā)性硬化、繼發(fā)性進行性多發(fā)性硬化、進行性復發(fā)性多發(fā)性硬化、原發(fā)性進行性多發(fā)性硬化和急性暴發(fā)性多發(fā)性硬化)，中心性腦橋髓鞘破壞，急性散播性腦脊髓炎，進行性多病灶腦白質(zhì)病；亞急性硬化性全腦炎，傳染后腦脊髓炎，慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病，歸-伯二氏綜合征，進行性多病灶腦白質(zhì)病，德維克氏病，白洛氏同心性硬化，和腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(例如，異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉貝氏病，腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥，佩-邁二氏病，卡納萬氏病，伴有中心性髓鞘形成不足的兒童共濟失調(diào)，亞歷山大氏病或雷弗素姆氏病)。本文所述的劑和方法尤其適合于治療多發(fā)性硬化。多發(fā)性硬化是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自發(fā)性疾病，其中機體的免疫系統(tǒng)攻擊攻擊腦和脊髓中的髓磷脂。無論所述疾病表現(xiàn)為炎癥的反復發(fā)作還是表現(xiàn)為慢性癥狀，其通常導致髓磷脂鞘上的多處瘢痕(硬化)，導致神經(jīng)功能的缺損或喪失。多發(fā)性硬化可以在任何年齡的患者中出現(xiàn)，盡管主要影響青壯年。多發(fā)性硬化的癥狀包括，例如，視力或認知功能的損傷，麻木，肢無力，震顫或痙攣，熱耐受不良，語言障礙，失禁，或本體感覺損傷。患有多發(fā)性硬化的患者通常還患有抑郁癥(depression)。在向受試者(例如，人患者)施用含有可溶性LTI3R(例如，LT卩R-Fc)的組合物之后，可以評定所述治療對脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)的效力(即，因所述治療產(chǎn)生的髓鞘再生)，例如，通過將患者在治療之前和之后的脫髓鞘病的程度進行比較。治療后的評定可以立即進行，或在治療之后不久(例如，治療后1小時，治療后2小時，治療后3小時，治療后6小時，治療后12小時，或治療后18小時)進行，或者可以在治療后至少一天(例如，至少1天，至少2天，至少3天，至少5天，至少l周，至少2周，至少3周，至少5周，至少2個月，至少6個月，或至少1年)進行。在有待評估于一次或多次LT卩R-Fc治療(例如，一次或多次誘導髓鞘再生的治療)之后多發(fā)性硬化改善的進展的情況下，可以在LT(3R-Fc治療之后的多個時間點評估或測量患者的癥狀和認知能力(例如，一日、兩日和一周評估；一周、一個月和六個月評估；一個月、六個月和一年評估)。脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)的改善的進展可以包括測量或評定，例如，患者中脫髓鞘病灶大小或數(shù)量的改變，或神經(jīng)功能的改變(即，改善)。合適的用于評估脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化或任何其它本文所述的脫髓鞘病)的程度或嚴重性的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，患者中多發(fā)性硬化的出現(xiàn)、程度或嚴重性可以藉由多種定量試驗和評估的使用來評定。例如，可以對患者進行腰推穿刺(即，腰推穿刺)以獲得腦脊液樣品。其后測試腦脊液中例如以下各項的存在(i)異常蛋白諸如髓磷脂的微小片段，(ii)淋巴細胞水平的升高或特殊類型的淋巴細胞，和/或(iii)免疫球蛋白(IgG)分子的異常水26平。脫髓鞘病定量測試的另一實例是誘發(fā)電位測試，其將神經(jīng)活性作為神經(jīng)沖動從眼、耳或皮膚到達腦所用時間的函數(shù)來測量。脫髓鞘病也可使用數(shù)種成像方法中的任一種通過評估存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性病灶(即，硬化)的大小和/或數(shù)量來評定，所述成像方法包括，但不限于，^磁共振成像(MRI)掃描、正電子發(fā)射斷層成像術(shù)(PET)掃描、彌散加權(quán)成像(DW-I，或DW-MRI)、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、磁化轉(zhuǎn)移。對患者的診斷也可以使用對患者神經(jīng)心理學(例如，多種能力狀態(tài)，諸如記憶力、運算能力、注意力、判斷力和推理能力)或由患者表現(xiàn)的癥狀(臨床癥狀)包括例如任何上述多發(fā)性硬化的癥狀的多種半定量或定性評定來進行。此外，脫髓鞘病的程度或進展可以通過測試患者尿的髓磷脂堿性蛋白樣物質(zhì)(MBPLM)水平的升高來檢測，所述物質(zhì)因疾病進展中產(chǎn)生的軸突損傷而開始增加(參見，例如，Whitaker等(1995)Ann.Neurol.38(4):635-632)。對色盲的某些測試也可以有助于跟蹤脫髓鞘病對眼的影響。任何上述診斷方法也可用于評估用可溶性LT卩R(例如，LT(3R-Fc)治療之后受試者中髓鞘再生的增加。例如，髓鞘再生可能與藉由任何本文所述成像方法測定的患者中存在的硬化的大小或數(shù)量的減少同時發(fā)生。同樣，受試者中的髓鞘再生可以根據(jù)如基因誘發(fā)電位測試所測定的眼、耳或皮膚向腦傳導信號速度的增加來測量。在一些情況下，髓鞘再生可以根據(jù)白質(zhì)體積(例如，脊柱或腦的神經(jīng)物質(zhì))的增加來評估，尤其是在脫髓鞘病導致神經(jīng)萎縮的情況下。在一些情況下，受試者中髓鞘再生的程度和出現(xiàn)可以通過使用例如磁共振波譜掃描直接測量受試者中髓磷脂的厚度來評定。給定的治療在脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)治療中的效力(即，髓鞘再生的程度)可以定義為脫髓鞘病的一種或多種癥狀(例如，任何上述癥狀)改善至少5%(例如，至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%或更多)。在一些情況下，可溶性LT(3R(例如，LT卩R-Fc)治療的效力可以根據(jù)一種或多種與多發(fā)性硬化有關(guān)的正在惡化癥狀的穩(wěn)定化(即，所述治療減輕了多發(fā)性硤化的一種或多種癥狀的惡化)來測定。也可使用任何本文所述的診斷方法(例如，Mgl或PET)來評估對患者的治療效力或患者中的髓鞘再生程度。例如，用LT卩R-Fc治療之后脫髓鞘病灶(硬化)大小或數(shù)量的改善可以使用MRI監(jiān)控。聯(lián)合治療本文所述的方法和組合物可以與其它用于治療脫髓鞘病的治療聯(lián)用。例如，可溶性LT(3R(例如，LT(3R-Fc)組合物可以與針對多發(fā)性硬化的直接治療聯(lián)用，所述直接治療諸如，但不限于，干擾素pla(Avonex(干擾素卩l(xiāng)a粉針劑))、干擾素(3lb(Rebif)、醋酸格拉默(Copaxone)、米托蒽醌(Novantrone(諾消靈))、硫唑嘌呤(Imuran(依木蘭))、環(huán)磷酰胺(Cytoxan(環(huán)磷酰胺制劑)或Neosar(環(huán)磷酰胺注射劑))、環(huán)孢菌素(Sandimmune(山地明))、氨曱喋呤、克拉屈濱(Leustatin)、曱潑尼龍(Depo-Medrol或Solu-Medrol(甲強龍制劑))、潑尼松(Deltasone),潑尼松龍(Delta-Cortef)、地塞米松(Medrol(美卓樂)或Decadron)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)或促皮質(zhì)素(Acthar(促皮質(zhì)素注射劑))。本文提供的方法和組合物(例如，可溶性LT卩R諸如LT(3R-Fc)也可以與設(shè)計用于治療與脫髓鞘病相關(guān)的癥狀的治療聯(lián)用。在脫髓鞘病是多發(fā)性硬化的情況下，例如，可以將可溶性LT卩R(例如，LT(3R-Fc)與針對與多發(fā)性硬化相關(guān)的疼痛的一種或多種治療聯(lián)合施用，所述治療包括，例如，卡馬西平(carbamazepine)、力口巴噴丁(gabapentin)、4乇p比酉旨(topiramate)、哇尼沙胺(zonisamide)、笨妥英(phenytoin)、己酉同可可石成(pentoxifylline)、布〉各芬(ibuprofen)、阿司匹林(aspirin)或樸熱息痛(acetaminophen)?？扇苄訪T(3R(例如，LT(3R-Fc)也可以與針對與多發(fā)性硬化有關(guān)的焦慮癥或抑郁癥的一種或多種治療聯(lián)合施用，所述治療包括，例如，氟西汀(fluoxetine)、舍區(qū)林(sertraline):文拉法辛(vanlafaxine)、西酞普蘭(citalopram)、巾自羅西汀(parocetine)、曲峻酮(trazodone)、安非4也酉同(buproprion)、；也西泮(diazepam)、或阿米替4木(amitriptyline)。此外，可溶性LT(3R(例如，LT(3R-Fc)可以與針對多發(fā)性硬化的其它癥狀的一種或多種治療聯(lián)合施用，包括，針對失禁(例如，奧西布寧(oxybutynin)、bethane或丙米,(imipramine))，震顫或痙攣(例如，巴氯芬(baclofen)、丹曲林鈉(dantrolenesodi腿)或替扎尼定(tizanidine))，或睹暈(vertigo)(例如，美克洛口秦(meclizine)、茶苯海明(dimenhydrinate)、丙氯拉口秦(prochlorperazine)或東莨菪械(scopolamine))。本發(fā)明還包括將本文所述的方法和組合物與能夠引起脫髓鞘狀態(tài)的治療或藥物聯(lián)合使用。例如，用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的抗TNF治療的副作28用能夠?qū)е履撤N類型的脫髓鞘癥狀。因此，可以將可溶性LT(3R(例3口'，LTpR-Fc)與抗TNF治療聯(lián)合施用(例如，共同施用)以預(yù)防、改善或逆轉(zhuǎn)脫髓鞘副作用并促進髓鞘再生?？筎NF治療包括，但不限于，阿達木單抗(adalimumab)(Humira)、依那西普(etanercept)(Enbrel)或英夫利昔單抗(infliximab)(Remicade)。任何本文所述的方法或組合物概括而言可以用在任何增加髓鞘再生將是有利的情況下。在一些情況下，將可溶性LT卩R(例如，LTPR-Fc)用作二線治療(secondlinetherapy)。例如，被測定為對脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)的一種或多種治療無響應(yīng)的患者將停止接受所述一種或多種治療，并且將開始用可溶性LT(3R，例如，LT卩R-Fc治療。或者，該患者將繼續(xù)接受所述一種或多種對脫髓鞘病的治療，同時接受用可溶性LT(3R的治療。.藥物組合物可以將可溶性LT卩R例如LTPR-Fc配制成藥物組合物，例如，用于向受試者施用以制療脫髓鞘病，諸如多發(fā)性硬化。通常，藥物組合物包含可藥用載體。如用于本文，"可藥用載體，，包括任何以及所有生理上兼容的溶劑、分散介質(zhì)(dispersionmedia)、包衣(coating)、抗細菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。所述組合物可以包括可藥用鹽，例如，酸加成鹽或堿加成鹽(參見例如，Berge等，J.Pharm.Sci.66:1-19，1977)?？梢詫⒖扇苄訪T(3R根據(jù)標準方法配制。藥物配制是發(fā)展成熟(well-established)的4支術(shù),并且在例如Gennaro(ed.),Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,20thed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2000)(ISBN:0683306472);Ansel等，PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,7thEd.,LippincottWilliams&WilkinsPublishers(1999)(ISBN:0683305727);和Kibbe(ed.)，HandbookofPharmaceuticalExcipientsAmericanPharmaceuticalAssociation,3rded.(2000)(ISBN:091733096X)中有進一步的描述。在一種實施方案中，可以將可溶性LT(3R(例如，LT卩R-Fc)與賦形物質(zhì)一起配制，所述賦形物質(zhì)諸如氯化鈉、七水合磷酸氬二鈉、磷酸二氫鈉和穩(wěn)定劑?？梢詫⑵湟院线m的濃度在例如緩沖溶液中提供，并且可以貯藏在2-8。C。藥物組合物可以是多種形式。這些包括，例如，液體、半固體和固體劑量形式，諸如液態(tài)纟容液(例如，可注射和可專命注溶液(injectableandinfUsiblesolution))、分散齊寸或懸液(dispersionorsuspension)、片齊寸(tablet)、丸齊'J(pill)、粉末(powder)、脂質(zhì)體(liposome)和栓劑(suppository)。優(yōu)選的形式可以依賴于預(yù)期的施用和治療應(yīng)用模式。用于本文所述的劑的組合物通常是可注射或可輸注溶液的形式。這樣的組合物可以通過胃腸外模式施用(例如，靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射)。短語"胃腸外施用"和"胃腸外地施用"用于本文的意思是除了腸內(nèi)(enteral)和局部(topical)施用之外的施用模式，通常通過注射，并且包括，但不限于，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、被膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外、腦內(nèi)、顱內(nèi)、頸動脈內(nèi)和胸骨內(nèi)注射和Mr注。所述組合物可以配制為溶液、微乳劑(microemulsion)、分散劑、脂質(zhì)體或適合以高濃度穩(wěn)定貯藏的其它有序結(jié)構(gòu)。無菌注射溶液可以這樣來制備，將所需量的本文所述的劑按照需要與上述成分之一或上述成分的組合一起并入適當溶劑中，接著進行過濾滅菌。分散劑通常通過將本文所述的劑并入無菌運載體(vehicle)來制備，所述無菌運載體含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)(basicsuspensionmedium)和來自上文列舉的那些的其它所需成分。在用于制備無菌注射溶液的無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是從之前經(jīng)無菌過濾的下述物質(zhì)的溶液生成本文所述的劑與任何附加的期望成分的粉末的真空干燥和冷凍干燥。例如，溶液的適當流動性可以通過使用包衣諸如磷脂酰膽堿來保持，在分散劑的情況下通過維持所需的顆粒大小來保持，和通過使用表面活劑(例如，單硬脂酸鹽和明膠)來實現(xiàn)。在某些實施方案中，可以將可溶性LT(3R與將會保護化合物不被迅速釋放的載體一起配制，諸如控釋劑型，包括植入物，和微嚢化的遞送系統(tǒng)?？梢允褂蒙锟山到獾摹⑸锵嗳菪跃酆衔?，諸如乙烯乙酸乙烯酯(ethylendvinylacetate)、聚酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolicacid)、膠原(collagen)、聚正酯類(polyorthoester)和聚乳酸(polylacticacid)。許多用于制備這些劑型的方法已有專利或是公知的。參見，例如，SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson,ed.,MarcelDekker，Inc.,NewYork,1978?？梢詫扇苄訪T(3R(例如，LTPR-Fc)進行修飾，例如，使用將其在循環(huán)中(例如，血液、血清或其它組織中)的穩(wěn)定性和/或保持力(retention)改進例如至少1.5、2、5、10或50倍的模塊來修飾?？梢詫?jīng)修飾的劑進行評估以評定其是否能夠達到炎癥部位(例如，病灶或硬化)，諸如是否能夠在脫髓鞘病(諸如多發(fā)性硬化)中出現(xiàn)(例如，通過使用所述劑的標記形式)。例如，可以將可溶性LT(3R與聚合物結(jié)合，例如，基本上無抗原性的聚合物，諸如聚環(huán)氧烷(polyalkyleneoxide)或聚環(huán)氧乙烷(polyalkyleneoxide)。，合適的聚合物在重量上將顯著不同。可以使用分子序數(shù)平均重量范圍在約200至約35000Daltons(或約1000至約15000,和2000至約12500)的聚合物。例如，可以將可溶性LT卩R與水溶性聚合物偶聯(lián)，例如，親水聚乙烯聚合物，例如，聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。這類聚合物的非限定性列表包括聚環(huán)氧烷均聚物諸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化多元醇，它們的共聚物和它們的嵌段共聚物，只要所述嵌段共聚物的水溶性得到保持。其它有用的聚合物包括聚氧化烯諸如聚氧乙烯，聚氧丙烯，和聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(Pluronics);聚曱基丙烯酸酯；卡波姆；和支鏈或直鏈多糖。在將可溶性LT(3R(例如，LT(3R-Fc)與第二種劑(例如，任何本文所述的針對多發(fā)性硬化和其它脫髓鞘病的治療)聯(lián)合使用時，可以將所述兩種劑單獨配制或配制在一起。例如，可以將各藥物組合物混合，例如，在施用之前即刻混合，再共同施用；或者可以分開施用，例如，在同時或不同時間分開'施用。施用可以通過多種方法向受試者(例如，人受試者)施用可溶性LTPR(例如，LT卩R-Fc)。對于多種應(yīng)用，施用途徑是下列之一靜脈內(nèi)注射或輸注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜內(nèi)方式(IP)或肌內(nèi)注射。在一些情況中，施用可以直接進入CNS,例如，鞘內(nèi)、腦室內(nèi)(ICV)、大腦內(nèi)或顱內(nèi)施用。可以將所述劑作為固定的劑量施用或按照mg/kg的劑量施用。也可以對劑量進行選擇以降低或避免針對所述劑產(chǎn)生抗體?？扇苄訪T卩R的施用途徑和/或模式也可以針對個體情況調(diào)整(tailor),例如，通過測定受試者中硬化的位置、數(shù)量或大小，例如，使用磁共振成像(MRI)掃描，正電子發(fā)射斷層成像術(shù)(PET)掃描、彌散加權(quán)成像(DW-I,或DW-MRI)、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、磁化轉(zhuǎn)移。脫髓鞘病的嚴重性或程度也可根據(jù)腰推穿刺(例如，檢查腦脊液中白細胞的升高)、測量神經(jīng)功能的誘發(fā)電位測試、和/或任何與脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)相關(guān)的其它標準參凄t(例如，任何本文所述的評定標準)來測定。調(diào)整給藥方案(dosageregimen)以提供期望的響應(yīng)，例如，治療響應(yīng)或組合治療效果。例如，給藥方案將引起髓鞘再生的增加。通常，任選地單獨配制或與適當劑量的第二治療劑共同配制的可溶性LT卩R(例如，LT(3R-Fc)劑量可用于向受試者提供可溶性LT(3R。用于可溶性LTPR的合適的劑量和/或劑量范圍包括足以引起受試者中髓鞘再生增加的量。合適的劑量可以是任何本文所述的那些，并且包括，例如，每kg受試者(例如，人患者)體重至少約0.001mg可溶性LT卩R的劑量。''增加髓鞘再生所需的可溶性LT卩R(例如，LT(3R融合多肽，諸如LT卩R-Fc)劑量可能依賴于多種因素，包括，例如，待治療受試者的年齡、性別和重量。其它影響施用于受試者的劑量的因素包括，例如，脫髓鞘病的類型或嚴重性。例如，患有急性暴發(fā)性多發(fā)性硬化的患者可能需要施用不同于患有較輕形式多發(fā)性硬化的可溶性LTJ3R劑量。其它因素可以包括，例如，并發(fā)的或曾經(jīng)影響該患者的其它疾病，患者的一般健康狀況(generalhea他)，患者的遺傳因素(geneticdisposition),飲食，施用時間，排泄速率，藥物組合，和向該患者施用的任何其它附加的治療。還應(yīng)該理解針對任何具體患者的特定劑量和治療方案將依賴于治療醫(yī)生的判斷。活性成分的量也將依賴于具體描述的化合物，以及組合物中附加抗病毒劑的存在與否和性質(zhì)。劑量單位形式或"固定劑量"用于本文指適合作為單位劑量用于待治療',受試者的物理上離散的單位；每單位含有經(jīng)計算可產(chǎn)生期望治療效果(例如，受試者中髓鞘再生的增加)的預(yù)定量的活性化合物，連同所需藥用載體，并且任選地連同其它劑。合適的施用頻率在本文其它地方描述。藥物組合物可以包括治療有效量的本文所述的可溶性LT(3R。這樣的有效量可以基于施用的劑的效果測定，或者如果使用多于一種劑，那么可以基于劑與第二種劑的組合效果測定。劑的治療有效量也可根據(jù)多種因素變化，所述因素諸如個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和重量，以及化合物在個體中引起期望的響應(yīng)的能力，例如，至少一種疾病參數(shù)的改善，例如，脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化)的至少一種癥狀的改善。例如，治療有效量的可溶性LT(3R將增加髓鞘再生并且還能夠減緩和/或改善脫髓鞘化。治療有效量還是一種所述組合物的治療有益效果超過任何毒性或有害效果的量。裝置和試劑盒包括可溶性LT卩R(例如，LT(3R-Fc)的藥物組合物可以用醫(yī)療設(shè)備施用。可以將所迷設(shè)備設(shè)計為具有諸如便攜、室溫貯藏和易于使用等特性，從而使其能夠在緊急情況下使用，例如，由未經(jīng)訓練的受試者或由專業(yè)急救人員(emergencypersonnelinthefield)使用，能夠移至醫(yī)療設(shè)施和其它醫(yī)療器材。所述設(shè)備可以包括，例如，一個或多個用于貯藏包括可溶性LTpR的藥物制備物的殼體(housing),并且能夠被配置成遞送一個或多個單位劑量的所述劑。例如，可以將所述藥物組合物用經(jīng)皮遞送裝置諸如注射器(包括皮下或多腔注射器)來施用。其它合適的遞送裝置包括支架、導管、經(jīng)皮貼片(transcutaneouspatch)、孩史型針(microneedle)和才直入式控釋設(shè)備(implantablecontrolledreleasedevice)。設(shè)備(例如，注射器)可以包括干燥或液體形式的可溶性LTPR,其劑量足以引起髓鞘再生。所述設(shè)備也可以是雙腔設(shè)備，其中一個腔含有足以引起受試者中髓鞘再生增加的單位劑量的凍干可溶性LTPR(例如，LTj3R-Fc)，而第二個腔含有液體(例如，緩沖液)，用于重建所述凍干的單位劑量的可溶性LT(3R。在其它實例中，可以使用無針皮下注射設(shè)備施用所述藥物組合物，諸如US5,399,163;5,383,851;5,312,335;5,064,413;4,941,880;4,790,824;或4,596,556中描述的設(shè)備。熟知的植入物和模塊的實例在例如以下專利文獻中描述US4,487,603,其公開了一種以受控速率分配藥物的植入式微型輸注泵；US4,486,194，其公開了一種用于經(jīng)由皮膚施用藥物的治療設(shè)備；US4,447,233,其公開了一種以精確輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；US4，447，224，其公開了一種用于持續(xù)遞送藥物的可變流速植入式輸注裝置;US4,439,196,其公開了一種具有多腔區(qū)室的滲透壓藥物遞送系統(tǒng)；和US4,475,196,其公開了一種滲透壓藥物遞送系統(tǒng)。許多其它設(shè)備、植入物、遞送系統(tǒng)和模塊也是已知的?？梢詫⒖扇苄訪T(3R(例如，LTPR-Fc)在試劑盒中提供。在一種實施方案中，所述試劑盒包括(a)含有組合物的容器，所述組合物包括一個或多個單位劑量的可溶性LT(3R;和任選地(b)信息材料?？扇苄訪T(3R的單^f立劑量足以引起受試者中髓鞘再生增加。所述信息材料可以是說明性的、指導性的、市述試劑盒還可以包括用于測試(測定)髓鞘再生的試劑和說明書。這些測定髓鞘再生的方法包括，但不限于，任何本文所述的測試方法。在一種實施方案中，所述試劑盒包括一種或多種用于治療脫髓鞘病的附加的劑，諸如一種或多種治療多發(fā)性硬化的劑。例如，所述試劑盒包括第一容器，其含有包括可溶性LT卩R的組合物，以及第二容器，其包括一種或多種附加的劑。所述試劑盒的信息材料不受限于它的形式。在一種實施方案中，所述信息材料可以包括有關(guān)化合物的生產(chǎn)、化合物的分子量、濃度、有效期、批次或生產(chǎn)地的信息等。在一種實施方案中，所述信息材料涉及施用可溶性LT卩R(例如，LT(3R-Fc)，例如，以合適的劑量、劑量形式或施用才莫式施用，以治療患有脫髓鞘病、或有風險患上、或正在經(jīng)歷與脫髓鞘病相關(guān)的發(fā)作的受試者的方法。所述信息可以以多種形式提供，包括印刷文本、計算才幾可讀的材料、影像記錄或錄音，或提供實質(zhì)材料的鏈接或地址的信息。除了所述劑，試劑盒中的組合物可以包括其它成分，諸如溶劑或緩沖液，穩(wěn)定劑，或防腐劑。所述劑可以以任何形式提供，例如，液體，干燥的或凍干的形式，優(yōu)選基本上純的和/或無菌的。在將所述劑提供在液態(tài)溶液中時，所述液態(tài)溶液優(yōu)選是水溶液。在將所述劑作為干燥形式提供時，重建通常通過添加合適的溶劑進行。所述溶劑(例如，無菌水或緩沖液)可以^f壬選地在試劑盒中提供。試劑盒可以包括用于一種或多種含有所述劑的組合物的一個或多個容器。在一些實施方案中，所述試劑盒含有分別用于組合物和信息材料的容器、分隔器(divider)或區(qū)室。例如，所述組合物可以包含在并瓦、小瓶或注射器中，而信息材料可以包含在塑料套或包中。在其它實施方案中，試劑盒中的各元件可以包含在單一的、非分隔的容器內(nèi)。例如，所述組合物包含在瓶、小瓶或注射器中，在所述瓶、小瓶或注射器上以標簽的形式附有信息材料。在一些實施方案中，所述試劑盒包括多個(例如，一包)單獨的容器，每個含有一34個或多個單位劑量形式(例如，本文所述的劑量形式)的所述劑。所述容器可以包括組合單位劑量，例如，包括可溶性LT(3R和第二種劑二者的單位，例如，以期望的比例包括上述二者的單位。例如，所述試劑盒包多個注射器、安瓿、錫箔包(foilpacket)、泡包裝(blisterpack)或醫(yī)療設(shè)備，例如，每個含有單一組合單位劑量。所述試劑盒的容器可以是氣密的、防水的(例如，濕度的變化或蒸發(fā)無法滲透)和/或不透光的。所述試劑盒任選地包括適合于施用所述組合物的設(shè)備，例如，注射器或其它合適的遞送裝置。提供的所述設(shè)備可以預(yù)先裝載有所述劑中的一種或全部兩種，或者可以是空的，但是適合進行裝載。制備可溶性LT0R的方法制備可溶性LT(3R的合適方法是本領(lǐng)域已知的，并且在例如WO97/03687、WO98/17313、WO00/21558、WO99/38525、WO00/36092中描述。例如，可以在降低的溫度在細胞培養(yǎng)物(例如，哺乳動物細月包培養(yǎng)物c^如猴COS細胞或中國倉鼠卵巢細胞)或酵母培養(yǎng)物)中表達LT卩R免疫球蛋白融合蛋白以產(chǎn)生更大量的正確折疊的融合蛋白?？梢詫⒈磉_的融合蛋白純化，例如，通過親和或常規(guī)層析技術(shù)(參見，例如，WO00/36092)。將所有上述PCT申請通過引用全文并入本文。以下實施例意在說明本發(fā)明，而非限制。實施例實施例1.材津牛和方法動參。C57BL6小鼠購自JacksonLaboratories(BarHarbor,Maine)，并且飼養(yǎng)在北卡羅來納大學(NC)動物實驗室(animalfacility)的動物房中。將Lt(3R;小鼠飼養(yǎng)在UNC動物實驗室的動物房中。全部規(guī)程按照國立衛(wèi)生研究'所(NIH)的進4亍，并且經(jīng)過InstitutionalGw/cfe/or//zeCareL/5e丄a^rator少爿m'ma/s(實馬全動物飼養(yǎng)和使用管理手冊)AnimalCareandUseCommitteeofUNCatChapelHill的批準。全部小鼠在開始Cuprizone處理之前均為8-10周齡。^理V、it。為雄性Lt(3R一和C57BL6野生型小鼠任意(ad/A^m)喂食混合在磨碎的食物(milledchow)中的0.2%Cuprizone[雙環(huán)己酮草酰二腙(oxalicbis(cyclohexylidenehydrazide))](Aldrich，St.Louis，MO)。對小鼠進行3、3.5、4或5周的處理以研究脫髓鞘化過程。對于髓鞘再生，使小鼠在6整周的Cuprizone處理之后回歸正常粒狀食物飲食1、2或4周。未處理小鼠保持正常粒狀食物飲食。人和小鼠Lt(3R-Ig以及它們的對照均由J.Browning博士(BiogenIdee,Cambridge,MA)友情提供，并且在Gommerman等(2003)J.Clin.Invest.112:755-767中有描述。為了研究脫髓鞘化，在第-1天和之后的每周用腹膜內(nèi)注射的5mg/kg人Ltf3R-人Ig(hLt卩R-IgG-lFc)或人-Ig對照預(yù)處理小鼠。處理后的范例由6整周的Cuprizone處理組成。在5周零2天的Cuprizone處理之后(接近脫髓鞘化的最高值(height)),為小鼠提供腹膜內(nèi)注射的小鼠Lt卩R-小鼠IgG-l或匹配的對照MOPC-21,繼而每周進行注射，進行到第10周(followedbyweeklyinjectionsoutto10weeks)。已經(jīng)i正明了這種Lt卩R-Ig的鼠類版本在小鼠中抗原性較低。邀織斜備和遂織病理夢為V(用石蠟包埋的頭冠腦切片(coronalbrainsection)制備自胼胝體的f窿區(qū)。通過三位雙盲讀數(shù)者對勒克司監(jiān)牢藍-過石典酸希夫(Luxolfastblue-periodicacidSchiff)(LFB-PAS)染色的切片進行讀數(shù)，并且按照從0(完全髓鞘化)到3(完全脫髓鞘化)的等級分級，如Arnett等(2'001)Nat.Neurosci.4:1116-1122和Plant等(2005)Glia49:1-14中所述。龍瘦邀織^夢。對成熟少突膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞和星形膠質(zhì)細胞的檢測通過免疫組織化學來進行(Plant等(2005)Glia49:1-14)。對GST兀和RCA-1陽性細胞的定量分析限定于中線胼胝體處的0.033mm2區(qū)域。僅將具有可觀察到的DAPI染色核的免疫陽性細胞包括在定量中。細胞計數(shù)是每個時間點至少9只且多至14只小鼠的平均值。通過免疫組織化學來4全測有髓鞘的纖維，其中使用髓磷脂堿性蛋白的一抗(primaryantibody)(SternbergerMonoconalsInc.Lutherville,MD)，繼之以1:1000稀釋的焚光素偶聯(lián)的抗小鼠IgG(Invitrogen，Carlsbad,CA)。/^位染it。在Cuprizone處理之后，為小鼠灌注不含RNA酶的PBS，然后再灌注4。/。多聚曱醛(paraformaldehyde)。取出腦并且在固定劑中溫育直至封固可用于冷凍切片為止。對Lt(3RmRNA的檢測通過原位雜交如Schmid等(2002)J.Neurochem.83:1309-1320中所述進行。Tr-PCW和定#《秒/r-尸C7。在Cuprizone處理過程中和處理之后的幾個點，從含有野生型和LtpR-、鼠胼胝體的腦解剖區(qū)分離總RNA。RNA分離使用QiagenRNeasy試劑盒在不含RNA酶的條件下進行(Qiagen,Valencia,CA)。對LIGHT的RT-PCR在20pl反應(yīng)中使用以下引物進行5，引物CTGGCATGGAGAGTGTGGTA(SEQIDNO:3);3，引物GATACGTCAAGCCCCTCAAG(SEQIDNO:4)。TaqMan5'核酸酶定量實時PCR測定法使用ABIPrism7900序列檢測系統(tǒng)(PEAppliedBiosystems,FosterCity，CA)在15(il含有通用總混合物(Invitrogen)、200nMLt卩R靶引物和100nM探針的反應(yīng)中進行。將Lt(3R特異性引物設(shè)計為跨越內(nèi)含子-夕卜顯子連接處以區(qū)別cDNA和基因組DNA。用于檢測小鼠Lt卩R的引物和探針如下5'引物，GTACTCTGCCAGCCTGGCACAGAAGCCGAGGTCACAGATG(SEQIDNO:5);3'引物，GGTATGGGGTTGACAGCGGGCTCGAGGGGAGG(SEQIDNO:6);探針，F(xiàn)am-ACGTCAACTGTGTCCC-Tamra(SEQIDNO:7)。用于小鼠18S核糖體RNA的引物和探針是5'引物，GCTGCTGGCACCAGACTT(SEQIDNO:8);3'引物，CGGCTACCACATCCAAGG(SEQIDNO:9);探針，F(xiàn)am-CAAATTACCCACTCCCGACCCG-Tamra(SEQIDNO:10)。將熱循環(huán)參數(shù)優(yōu)化為50°C2分鐘，95°C2分鐘，和包含95°C15秒變性和56。C1.5分鐘退火-延伸的40個循環(huán)。在每個實驗過程中將18S的反應(yīng)與LtpR的平行迷行，并且用于標準化cDNA的量。婉^為Vf。使用不成對斯氏t檢驗以統(tǒng)計學評估顯著差異。將數(shù)據(jù)表示為平i勾^f直土s.e.m。實施例2.腦中的Ltl3R定位和LIGHT表達Lta和Ltp存在于多種造血細胞中，而Lt(3R在樹突細胞和單核細胞以及非造血細胞、小結(jié)樹突細胞和毛細血管后微靜脈的大多數(shù)譜系中表達(Gommerman等(2003)Nat.Rev.Immunol.3:642-655)。Lta和Lt(3也已經(jīng)在星形膠質(zhì)細胞上檢出，同時Lt|3R已經(jīng)在星形膠質(zhì)細胞和單核細月包來源的細胞上檢測到(Cannella等(1997)J.Neuroimmunol,78:172-179和Plant等Glia49:1-14)。為了在Cuprizone模型中評定Lt(3R的表達，我們進行了定量實時RT-PCR來檢驗未經(jīng)處理的和經(jīng)Cuprizone處理的小鼠的腦中LtpR的水平。從用Cuprizone處理了3、3.5、4或5周的小鼠獲得了脫髓鞘化時間點，同時從處理了6周的小鼠和隨后取消Cuprizone1、2或4周(對應(yīng)于7、8和10周)的小鼠獲得了髓鞘再生時間點。使用LtpR基因和核糖體18S特異性的Taqman探針來檢測從腦RNA樣品生成的cDNA中的轉(zhuǎn)錄物。如圖1中所示，在Cuprizone處理期間(直到第6周)(整個脫髓鞘階段)野生型小鼠中的LtBRmRNA表達穩(wěn)步升高。在髓鞘再生階段(第7-10周)Lt!3RmRNA表達水平回落至正常水平。在未經(jīng)處理的對照小鼠中檢測到了低水平的Lt卩R。為了確定表達Lt(3R的細胞類型，使用原位雜交來定位未經(jīng)處理的和經(jīng)Cuprizone處理的小鼠腦中的LtpR。在處理之前Lt(3R不在腦中表達。通過3周的Cuprizone處理，在胼胝體區(qū)檢測到了小量的Lt(3R，然而，通過5周的'處理，在該炎性區(qū)中檢測到了Lt(3R的顯著上調(diào)。為了測定哪種細胞類型表達LtpR，將原位雜交與免疫組織化學分析偶聯(lián)。使用生物素化的番茄凝集素使腦冷凍切片中的小膠質(zhì)細胞和巨噬細胞顯影，使用GFAP特異性抗體使星形膠質(zhì)細胞顯影，使用CNP特異性抗體使少突膠質(zhì)細胞顯影，并使用NeuN特異性抗體使神經(jīng)元顯影。僅在凝集素陽性的細胞中能夠檢測到Lt(3R表達。這些結(jié)果表明活化的小膠質(zhì)細胞和/或巨噬細胞在Cuprizone誘導的炎癥和脫髓鞘化過程中表達Lt(3R，而非星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞或神經(jīng)元。盡管不受限于任何特定理論或機制，但是考慮到前述的發(fā)現(xiàn)，即星形膠質(zhì)細胞是Lta的來源(Plant等(200"Glia49:1-14),這些數(shù)據(jù)提出星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞之間的Lta(3-Lt(3R信號傳導主要參與了發(fā)生在Cuprizone處理期間的炎性脫髓鞘過程。除了Lta(3，LtpR與膜結(jié)合配體LIGHT(與淋巴毒素同源，呈現(xiàn)誘導型表達，并且與單純皰滲病毒糖蛋白D竟爭皰滲病毒輸入介質(zhì)(herpes-vimsentrymediator)(HVEM)，一種由T、淋巴細月包表達的受體)相互作用(Granger等(2001)J.Clin.Invest.108:1741-1742)。LIGHT似乎主要定位在T細胞、未成熟的樹突細胞、粒細胞和單核細胞(Gommerman等Nat.Rev.Immunol.3:642-655)，但是在腦中尚未得到充分表征。為了測定LIGHT表達在Cuprizone處理期間是否有變化，通過RT-PCR分析了腦組織的LIGHT表達。盡管LIGHT以高水平存在于對照脾和胸腺中，但是在未經(jīng)處理的或經(jīng)Cuprizone處理的小鼠的腦中存在的水平極低可以忽略。此外，LIGHT不因Lt(3R存在受到調(diào)節(jié)，因為缺乏Lt(3R的小鼠在腦中表達相似水平的LIGHT。盡管不受限于任何特定理論或機制，這些數(shù)據(jù)提示了LIGHT在Cuprizone誘導的炎癥過程中不扮演重要角色。實施例3.LtPR一小鼠中延遲的脫髓鞘化'Lta的存在加重了由Cuprizone處理誘導的脫髓鞘化(Plant等(2005)Glia49:1-M)。此外，Lta的缺乏未改變從飲食中去掉Cuprizone之后的髓鞘再生過程和少突膠質(zhì)細胞祖先的增殖。Lta能夠作為同源三聚分子通過TNF受體進行信號傳導來發(fā)揮作用，也能夠作為與Ltp—起的異源三聚分子通過Lt卩R進行信號傳導來發(fā)揮作用。盡管之前分析過TNF受體在Cuprizone模型中的功能(Arnett等(20(H)Nat.Neurosci.4:1116-1122)，但是Lt卩R在這種模型中的功能尚為未知。為了分析LtpR的功能，用小鼠飲食中0.2%Cuprizone對缺乏這種基因的小鼠和野生型對照進行3、3.5、4或5周的處理。與野生型對照小鼠相比，如通過LFB-PAS染色所評定的，Lt(3R一小鼠展現(xiàn)出脫髓鞘化的顯著延遲(圖2)。由三位雙盲調(diào)查者評定了用LFB-PAS染色的石蠟切片。在3周(p0.02)、3.5周(pO.01)和4周(pO.001)時觀察到了野生型和LT卩R-、J、鼠在脫髓鞘化上的顯著差異。盡管不受限于任何特定理論或機制，這些數(shù)據(jù)表明通過Lt(3R的信號傳導加重了炎性脫髓鞘化過程。這種延遲早在第3周時即可見(p〈.02),但是在處理3.5周(p〈.01)和4周(p〈.001)時最顯著，并且由處理4周時野生型和LtpR一小鼠的代表性LFB-PAS圖像清楚地揭示。Lt卩R一小鼠中脫髓鞘化的延遲類似于在Lta一小鼠中觀察到的脫髓鞘化的延遲(Plant等(2005)Glia49:1-14)，因此，盡管不受限于任何特定的理論或機制，這些結(jié)果說明了通過Lt(3R的膜結(jié)合Ltap信號傳導參與了脫髓鞘化過程。實施例4.Lt!3R一小鼠中延遲的髓鞘再生研究了LFB-PAS染色的來自野生型和Lt(3R一小鼠的石蠟切片中成熟的少突膠質(zhì)細胞使胼胝體髓鞘再生的能力。在7周(p<.OOl)和10周(p<.02)時，在野生型和Ltj3R一小鼠之間觀察到中等程度但具有顯著性的差異(圖2)。經(jīng)39過12周，LtpR^小鼠與野生型對照的髓鞘再生程度相同(p^.11)。髓鞘過程中的這些差異根據(jù)我們對脫髓鞘化嚴重性的分級小于0.5,而在TNFa;相對于野生型小鼠的研究中觀察到的差異根據(jù)所述分級則大于1.5(Arnett等(2001)Nat.Neurosci.4:1116-1122)，并且持續(xù)至14周。盡管不受限于任何特定理論或機制，盡管髓鞘再生似乎在Lt(3R一小鼠中延遲，但是最終得以實現(xiàn)(resolved)。實施例5.脫髓鞘化期間Lt3R;小鼠中少突膠質(zhì)細胞損失的延遲為了證實通過LFB-PAS觀察到的脫髓鞘化的延遲伴隨著少突膠質(zhì)細胞的變化，進行了免疫組織化學來檢測與用于LFB染色的那些相鄰的石蠟切片中的成熟少突膠質(zhì)細胞。使用GST兀+作為少突膠質(zhì)細胞的標記物，并且對中線胼胝體處的細胞進行定量。在野生型和Ltl3R-、鼠二者中，均在未處理的小鼠中檢測到了豐富的少突膠質(zhì)細胞。然而，在處理3周和3.5周之后，在LtpR—A小鼠中檢測到了比野生型小鼠中更多的少突膠質(zhì)細胞(3.5周；p<.01)。在4周時，在野生型和LtpR一小鼠之間未發(fā)現(xiàn)少突膠質(zhì)細胞數(shù)上的差異。這些數(shù)據(jù)類似于LFB染色的結(jié)果，除了4周的lt據(jù)點，其中LFB染色顯示在Lt(3RZ-小鼠中脫髓鞘化降低。相反，GST兀+染色在LtpR,和野生型小鼠之間沒有區(qū)別。盡管不受限于任何特定理論或機制，GST兀+和LFB染色間的差異很可能是因為GST兀+細胞的消失和髓磷脂的實際喪失之間的延遲。通過5周的Cuprizone處理，在野生型和LtpR-、鼠的胼胝體中檢測到少數(shù)GST兀+少突膠質(zhì)細胞。盡管不受限于任何特定理論或機制，同樣，這些數(shù)據(jù)與兩種小鼠品系的嚴重脫髓鞘化一致。實施例6.未改變髓鞘再生期LtBR一小鼠中胼胝體少突膠質(zhì)細胞群體的恢復通過在7、8、10和12周(從飲食中去掉Cuprizone之后1、2、4和6周)檢查石蠟切片，研究了LtpR對修復性髓鞘再生過程的參與。為了檢測髓鞘再生期間胼胝體中成熟少突膠質(zhì)細胞的存在，對來自野生型和LtpR一小鼠的石蠟切片進行了使用GST?？贵w的免疫組織化學，繼而對GST兀陽性細胞定量。如圖3中所示，在3周時在Lti3R-、鼠中比在野生型小鼠中發(fā)現(xiàn)了更多的GST兀+細胞(p=.09)，在3.5周時在LtfiR;小鼠中發(fā)現(xiàn)的GST兀+細胞顯著地更多(p<.(B)，而在Cuprizone處理4和5周時在少突膠質(zhì)細胞方面沒有差異。在去掉Cuprizone之后，在野生型和LtfiR^小鼠之間未觀察到胼胝體少突膠質(zhì)細胞群體恢復(repopulation)上的差異。因此，即^f吏在脫髓鞘化的頂點(5周)處在這些腦中檢測到的少突膠質(zhì)細胞極少，但是在去掉Cuprizone僅一周之后(7周)，胼胝體恢復了其原始成熟少突膠質(zhì)細胞數(shù)約75%的群體。在第10周，在野生型和Lt(3R一小鼠二者中，胼胝體中存在的成熟少突膠質(zhì)細胞均恢復至處理前水平。盡管不受限于特定的理論或機制，這些數(shù)據(jù)表明Lt(3R不是髓鞘再生期間少突膠質(zhì)細胞祖先增殖和成熟所必需的。實施例7.未改變Lt(3R^小鼠中小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的聚集Cuprizone誘導腦中的慢性炎性狀態(tài)，包括活化的小膠質(zhì)細胞和巨噬細胞聚集至損傷部位(Matsushima等(2001)BrainPathol.11:107-116)。用凝集素RCA-1染色來自Lt(3R^和野生型小鼠的石蠟切片，并且定量中線胼胝體處的小膠質(zhì)細胞/巨嗟細胞。如圖4中所示，小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞在中線胼胝體的積累未受Ltl3R存在的影響。在這種模型脫髓鞘化或髓鞘再生期的任何時間點未觀察到RCA-1+細胞數(shù)的顯著差異。實施例8.抑制功能性LtfiR使脫髓鞘化減少盡管不受限于任何特定理論或機制，這些研究提出Lt(3R對脫髓鞘化具有顯著的加重效果，但是在髓鞘再生期間具有潛在的適度的有益效果。然而，缺乏LtpR的小鼠從出生開始具有嚴重的發(fā)育問題。例如，LtpR一小鼠沒有腸系膜淋巴結(jié)、淋巴集結(jié)和結(jié)腸相關(guān)的淋巴樣組織，并且因此不具有功能完善的免疫系統(tǒng)(Futterer等(1998)Immunity9:59-70)。此外，本領(lǐng)域已知趨化因子和細胞因子合成的水平受到Lt卩R調(diào)控(Chin等(2003)Immuno.Rev.195:190-201)，但是LtpR對趨化因子和細胞因子的調(diào)控對CNS的全面影響是未知的。此外，Lt(3R一小鼠中的天然殺傷細胞表面沒有NK1.1受體的表達，原因是編碼基因靠近丄Ar基因(Wu等(2001)J.Immunol.166:1684-1689)?？梢允褂萌诤险T何蛋白對野生型小鼠中的Lt(3R進行功能抑制。為了評定Lt(3R一小鼠中上述數(shù)據(jù)的有效性，所述數(shù)據(jù)證明了Lt(3R在Cuprizone誘導的脫髓鞘化過程中的有害作用，在Cuprizone處理過程中用Lt(3R-Ig(人IgGFc，小鼠Lt(3R)融合誘飾蛋白或多克隆人IgG對照處理C57BL6小鼠。在第-l天預(yù)處理小鼠，其后每周進行腹膜內(nèi)注射(5mg/kg),并且保持任意的0.2%Cuprizone的飲食3.5周。3.5周之后，灌注小鼠并且通過LFB-PAS法染色石蠟?zāi)X切片以評定中線駢胝體處的脫髓鞘化程度。用人Ig對照處理的小鼠比接受Lt(3R-Ig抑制誘斜蛋白的小鼠脫髓鞘化顯著地更嚴重(p<.02)(圖5)。3.5周之后，接受對照Ig注射的小鼠的平均脫髓鞘化得分非常類似于用Cuprizone處理4周的野生型小鼠，同時接受Lt(3R-Ig注射的小鼠的平均脫髓鞘化等分非常類似于用Cuprizone處理4周的LtJ3R,小鼠。對髓磷脂堿性蛋白質(zhì)(MBP)進行的免疫組織化學確認了在用人Ig對照處理的小鼠中與用Lt卩R-Ig處理的小鼠相比缺乏有髓鞘的纖維?？偠灾?，這些結(jié)果說明對Lt卩R的抑制顯著延遲了用Cuprizone處理的小鼠中的脫髓鞘化。實施例9.對LtBR的抑制增強髓鞘再生接下來，檢查了在已經(jīng)發(fā)生顯著脫髓鞘化之后Lt(3R-IgGl處理改變髓鞘再生程度的能力。Cuprizone模型的一個優(yōu)勢在于檢查影響髓鞘再生的事件的能力。為了研究Lt(3R在髓鞘再生過程中的作用，用0.2%Cuprizone處理C57BL6小鼠6周。這種Cuprizone處理期可再現(xiàn)地導致了目前為止研究的全部小鼠中的完全脫髓鞘化，包括野生型C57BL6小鼠(Arnett等(2001)Nat.Neurosci.4:1116-1122和Plant等(2005)Glia49:1-14)。在5周零2天的Cuprizone處理之后，為小鼠注射小鼠Lt|3R-IgG-l或?qū)φ招∈驣gG-l。在此之后每周進行小鼠Lt(3R-IgGl或?qū)φ招∈?IgGl的注射直至第10周，當髓鞘再生清晰可見時。由于考慮到人Fc可能在這種長時間的實驗中引發(fā)免疫應(yīng)答，所以在此實驗中使用了由小鼠Lt卩R和小鼠IgGlFc組成的融合蛋白。如上所述分析了LFB染色的切片。引人注目且令人驚訝的是，用mLtpR-mlgGl處理的小鼠比用對照mlgGl處理的小鼠顯示出顯著地更多的髓鞘再生(p<.007)(圖6)。此外，對MBP進行的免疫組織化學確認了用人Ig對照處理的小鼠與用Lt(3R-Ig處理的小鼠相比髓鞘再生降低。為了驗證這些數(shù)據(jù)，對10周時胼胝體內(nèi)成熟少突膠質(zhì)細胞數(shù)進行了定量。與對照的用小鼠Ig處理的對照相比，在mLt(3R-IgGl處理的小鼠胼胝體中GST兀陽性少突膠質(zhì)細胞更豐富(p〈.04)。總而言之，用Cuprizone處理的小鼠中的髓鞘再生通過用LtpR信號傳導抑制劑進行后處理(post-treatment)顯著增強。已經(jīng)描述了本發(fā)明的多種實施方案。然而，應(yīng)該理解可以在不背離本發(fā)明宗旨和范圍的前提下進行多種修改。因此，其它實施方式也在權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種治療人的脫髓鞘病的方法，所述方法包括(i)向人施用足以促進髓鞘再生的可溶性LTβR劑量，和(ii)監(jiān)控人的髓鞘再生。2.權(quán)利要求1的方法，其中向人施用可溶性LT卩R直至在人體內(nèi)檢測到髓鞘再生。3.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量每3-10天施用1次；施用至少2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31天1次。4.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量每周施用1次。5.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量每兩周施用1次。6.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量每個月施用1次。7.權(quán)利要求l的方法，其中將所述劑量在歷時至少4周期間每周施用1次。8.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量在歷時至少6周期間每兩周施用1次。9.權(quán)利要求1的方法，其中將所述劑量在歷時至少3個月期間每個月施用1次。10.權(quán)利要求1的方法，其中所述可溶性LT(3R是人LTPR或其LT結(jié)合片段。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述可溶性LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT卩R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的LT結(jié)合片段。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述可溶性LTPR包含SEQIDNO:l中所列序列。13.權(quán)利要求1的方法，其中通過磁共振成像、正電子發(fā)射斷層成像術(shù)、彌散加權(quán)成像、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、誘發(fā)電位測試或磁化轉(zhuǎn)移來監(jiān)控髓鞘再生。14.權(quán)利要求1的方法，其中通過脫髓鞘病癥狀的改善來監(jiān)控髓鞘再生。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述癥狀是視力損傷，麻木，肢無力，震顫，熱耐受不良，語言障礙，失禁，或本體感覺損傷。16.權(quán)利要求l的方法，其中所述脫髓鞘病是多發(fā)性硬化。17.權(quán)利要求l的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組復發(fā)性/間歇性多發(fā)性硬化、繼發(fā)性進行性多發(fā)性硬化、進行性復發(fā)性多發(fā)性硬化、原發(fā)性進行性多發(fā)性硬化和急性暴發(fā)性多發(fā)性硬化。18.權(quán)利要求l的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組中心性腦橋髓鞘破壞，急性散播性腦脊髓炎，進行性多病灶腦白質(zhì)病；亞急性硬化性全腦炎，傳染后腦脊髓炎，慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病，歸-伯二氏綜合征，進行性多病灶腦白質(zhì)病，德維克氏病，白洛氏同心性硬化，和腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述腦白質(zhì)營養(yǎng)不良是異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉貝氏病，腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥，佩-邁二氏病，卡納萬氏病，伴有中心性髓鞘形成不足的兒童共濟失調(diào)，亞歷山大氏病或雷弗素姆氏病。20.—種治療人的脫髓鞘病的方法，所述方法包括向人施用可溶性LT(3R劑量，其中治療的單位劑量、施用頻率和持續(xù)時間足以使人體內(nèi)出現(xiàn)髓鞘再生。21.權(quán)利要求20的方法，其中向人施用可溶性LTPR直至在人體內(nèi)檢測到髓鞘再生。22.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量每3-10天施用1次；施用至少2次，并且每5-20天不多于1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31天1次。23.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量每周施用。24.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量每兩周施用l次。25.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量每個月施用1次。26.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量在歷時至少4周期間每周施用1次。27.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量在歷時至少6周期間每兩周施用1次。28.權(quán)利要求20的方法，其中將所述劑量在歷時至少3個月期間每個月施用1次。29.權(quán)利要求20的方法，其中所述可溶性LT卩R是人LT(3R或其LT結(jié)合片段。''30.權(quán)利要求29的方法，其中所述LT(3R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT(3R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的重要部分。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述可溶性LT卩R包含SEQIDNO:1中所列序列。32.權(quán)利要求20的方法，其中通過^f茲共振成像、正電子發(fā)射斷層成像術(shù)、彌散加權(quán)成像、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、誘發(fā)電位測試或磁化轉(zhuǎn)移來監(jiān)控髓鞘再生。33.權(quán)利要求20的方法，其中通過脫髓鞘病癥狀的改善來監(jiān)控髓鞘再生。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述癥狀是視力損傷，麻木，肢無力，震顫，熱耐受不良，語言障礙，失禁，或本體感覺損傷。35.權(quán)利要求20的方法，其中所述脫髓鞘病是多發(fā)性硬化。，36.權(quán)利要求20的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組復發(fā)性/間歇性多發(fā)性硬化、繼發(fā)性進行性多發(fā)性硬化、進行性復發(fā)性多發(fā)性硬化、原發(fā)性進行性多發(fā)性硬化和急性暴發(fā)性多發(fā)性硬化。37.權(quán)利要求20的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組中心性腦橋髓鞘破壞，急性散播性腦脊髓炎，進行性多病灶腦白質(zhì)?。粊喖毙杂不匀X炎，傳染后腦脊髓炎，慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病，歸-伯二氏綜合征，進行性多病灶腦白質(zhì)病，德維克氏病，白洛氏同心性硬化，和腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述腦白質(zhì)營養(yǎng)不良是異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉貝氏病，腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥，佩-邁二氏病，卡納萬氏病，伴有中心性髓鞘形成不足的兒童共濟失調(diào)，亞歷山大氏病或雷弗素姆氏病。39.—種治療人的脫髓鞘病的方法，所述方法包括(i)向人施用足以促進髓鞘再生的可溶性LT(3R劑量；和(ii)將人歸類于具有預(yù)先選擇的髓鞘再生水平。40.權(quán)利要求39的方法，其中所述預(yù)先選^^的髓鞘再生水平是無髓鞘再生、中等水平的髓鞘再生或高水平的髓鞘再生。41.權(quán)利要求39的方法，其中向人施用可溶性LT(3R直至在人體內(nèi)檢測到髓鞘再生。42.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量每3-10天施用1次；施用至少2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31天1次。43.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量每周施用l次。44.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量每兩周施用l次。45.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量每個月施用l次。46.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量在歷時至少4周期間每周施用1次。47.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量在歷時至少6周期間每兩周施用1次。48.權(quán)利要求39的方法，其中將所述劑量在歷時至少3個月期間每個月施用1次。49.權(quán)利要求39的方法，其中所述可溶性LT(3R是人LT|3R或其LT結(jié)合片段。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述可溶性LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT卩R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的主要部分。51.權(quán)利要求50的方法，其中所述可溶性LT(3R包含SEQIDNO:1中所列序列。52.權(quán)利要求39的方法，其中通過^f茲共振成像、正電子發(fā)射斷層成像術(shù)、彌散加權(quán)成像、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、誘發(fā)電位測試或磁化轉(zhuǎn)移來監(jiān)控髓鞘再生。53.權(quán)利要求39的方法，其中通過脫髓鞘病癥狀的改善來監(jiān)控髓鞘再生。54.權(quán)利要求53的方法，其中所述癥狀是視力損傷，麻木，肢無力，震顫，熱耐受不良，語言障礙，失禁，或本體感覺損傷。55.權(quán)利要求39的方法，其中所述脫髓鞘病是多發(fā)性硬化。56.權(quán)利要求39的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組復發(fā)性/間歇性多發(fā)性硬化、繼發(fā)性進行性多發(fā)性硬化、進行性復發(fā)性多發(fā)性硬化、原發(fā)性進行性多發(fā)性硬化和急性暴發(fā)性多發(fā)性硬化。57.權(quán)利要求39的方法，其中所述脫髓鞘病選自下組中心性腦橋髓鞘破壞，急性散播性腦脊髓炎，進行性多病灶腦白質(zhì)?。粊喖毙杂不匀X炎，傳染后腦脊髓炎，慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病，歸-伯二氏綜合征，進行性多病灶腦白質(zhì)病，德維克氏病，白洛氏同心性硬化，和腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。58.權(quán)利要求57的方法，其中所述腦白質(zhì)營養(yǎng)不良是異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉貝氏病，腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥，佩-邁二氏病，卡納萬氏病，伴有中心性髓鞘形成不足的兒童共濟失調(diào)，亞歷山大氏病或雷弗素姆氏病。59.—種促進髓鞘再生的方法，所述方法包括(i)向接受抗TNF治療的人施用足以促進人體內(nèi)髓鞘再生的可溶性LT(3R劑量，和(ii)監(jiān)控人的髓鞘再生。60.權(quán)利要求59的方法，其中所述人患有自身免疫病。61.權(quán)利要求60的方法，其中所述自身免疫病是類風濕性關(guān)節(jié)炎。62.權(quán)利要求59的方法，其中所述抗TNF治療是Humira、Enbrel或R6micads。63.權(quán)利要求59的方法，其中向人施用可溶性LTPR直至在人體內(nèi)檢測到髓鞘再生。64.權(quán)利要求59的方法，其中所述可溶性LT卩R是人LT(3R或其LT結(jié)合片段。65.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量每3-10天施用1次；施用至少2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31天1次。66.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量每周施用l次。67.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量每兩周施用l次。68.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量每個月施用l次。69.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量在歷時至少4周期間每周施用1次。70.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量在歷時至少6周期間每兩周施用1次。71.權(quán)利要求59的方法，其中將所述劑量在歷時至少3個月期間每個月施用1次。72.權(quán)利要求64的方法，其中所述可溶性LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT(3R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的主要部分。73.權(quán)利要求72的方法，其中所述可溶性LTPR包含SEQIDNO:l中所列序列。74.權(quán)利要求59的方法，其中通過磁共振成像、正電子發(fā)射斷層成像術(shù)、彌散加權(quán)成像、彌散張量成像、脊髓造影術(shù)、誘發(fā)電位測試或磁化轉(zhuǎn)移來監(jiān)控髓鞘再生。75.權(quán)利要求59的方法，其中通過脫髓鞘病癥狀的改善來監(jiān)控髓鞘再生。76.權(quán)利要求75的方法，其中所述癥狀是視力損傷，麻木，肢無力，震顫，熱耐受不良，語言障礙，失禁，或本體感覺損傷。77.—種設(shè)計用于向患有脫髓鞘病的人皮下或肌內(nèi)施用可溶性LTPR的遞送裝置，其中所述施用足以使人體內(nèi)出現(xiàn)髓鞘再生。78.權(quán)利要求77的遞送裝置，其中所述遞送裝置包含凍干的可溶性LT(3R。79.權(quán)利要求77的遞送裝置，其中所述可溶性LT(3R是人LTpR或其LT結(jié)合片段。80.權(quán)利要求79的遞送裝置，其中所述可溶性LT|3R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT(3R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的主要部分。81.權(quán)利要求80的遞送裝置，其中所述可溶性LT(3R包含SEQIDNO:l中所列序列。82.權(quán)利要求77的遞送裝置，其中所述遞送裝置是注射器。83.權(quán)利要求77的遞送裝置，其中所述脫髓鞘病是多發(fā)性硬化。84.—種試劑盒，其包含(i)一個或多個單位劑量的可溶性LT(3R和(ii)試劑和關(guān)于如何測定髓鞘再生的說明書。85.權(quán)利要求84的試劑盒，其中所述試劑盒用于治療多發(fā)性硬化。86.權(quán)利要求84的試劑盒，其中所述可溶性LT卩R是人LT卩R或其LT結(jié)合片段。87.權(quán)利要求86的試劑盒，其中所述可溶性LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT卩R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的主要部分。88.權(quán)利要求87的試劑盒，其中所述可溶性LT卩R包含SEQIDNO:l中所列序列。89.—種包含兩個區(qū)室的遞送裝置，其中第一區(qū)室包含單位劑量的凍干的可溶性LT(3R，其中所述單位劑量足以使人體內(nèi)出現(xiàn)髓鞘再生；并且第二區(qū)室包含用于在向人施用之前重建可溶性LT(3R的液體。90.權(quán)利要求88的遞送裝置，其中所述可溶性LTpR是人LTpR或其LT結(jié)合片段。91.權(quán)利要求90的遞送裝置，其中所述LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT卩R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的重要部分。92.權(quán)利要求91的遞送裝置，其中所述可溶性LTpR包含SEQIDNO:l中所列序列。93.—種指導患有脫髓鞘病的患者治療該患者的脫髓鞘病的方法，所述方法包括(i)為患者提供至少兩個單位劑量的可溶性LT(3R;和(ii)指導該患者皮下自我施用該單位劑量，一次一劑，其中所述單位劑量的可溶性LT(3R足以誘導患者體內(nèi)的髓鞘再生。94.權(quán)利要求93的方法，進一步包括指導所述患者自我監(jiān)控髓鞘再生。95.權(quán)利要求93的方法，其中指導所述患者在歷時至少4周期間每兩周自我施用一次所述單位劑量。96.權(quán)利要求93的方法，其中指導所述患者在歷時至少2個月期間每個月自我施用一次所述單位劑量。97.權(quán)利要求93的方法，其中所述脫髓鞘病是多發(fā)性硬化的形式。98.權(quán)利要求93的方法，其中所述可溶性LT(3R是人LT卩R或其LT結(jié)合片段。99.權(quán)利要求98的方法，其中所述可溶性LT卩R包含與Ig的Fc區(qū)連接的人LT卩R(SEQIDNO:2)胞外區(qū)的主要部分。100.權(quán)利要求99的方法，其中所述可溶性LTI3R包含SEQIDNO:l中所列序列。全文摘要本發(fā)明涉及使用淋巴毒素β受體(LTβR)作為淋巴毒素途徑抑制劑治療脫髓鞘病諸如多發(fā)性硬化。文檔編號A61K38/17GK101600450SQ200780047865公開日2009年12月9日申請日期2007年10月18日優(yōu)先權(quán)日2006年10月20日發(fā)明者杰弗里·布朗寧,珍妮·P-y·廷申請人:比奧根艾迪克Ma公司;北卡羅來納查佩爾山大學