專利名稱：：治療胃腸疾病的組合物的制作方法治療胃腸疾病的組合物本發(fā)明涉及預(yù)防和治療胃腸疾病，和具體地，涉及用源自可食用植物的提取物預(yù)防和治療胃腸疾病。胃炎包括多種不同的病癥，所有這些病癥均導(dǎo)致胃部的炎癥。炎癥可以由細(xì)菌感染引起，但其他因素，包括外傷性損傷和經(jīng)常使用某些鎮(zhèn)痛藥，也可以造成胃炎。盡管有許多與胃炎有關(guān)的病癥，但是這些疾病的征兆和癥狀非常相似:上腹部的灼燒痛和偶爾脹氣、打嗝、惡心或嘔吐。在一些情形中，胃炎可以導(dǎo)致潰瘍和增高的胃癌風(fēng)險(xiǎn)。胃潰瘍是胃或十二指腸襯層上的瘡。胃潰瘍的一個(gè)原因是細(xì)菌感染，但是一些漬瘍是由長(zhǎng)期使用非類固醇消炎藥劑(NSAIDs)，如阿司匹林和布洛芬引起的。在少數(shù)情形中，胃或胰腺中的癌性腫瘤可以導(dǎo)致潰瘍。幽門螺桿菌(Fe"co6ac^p_y/oW(i/.;;;/on'))是這樣的一種細(xì)菌類型，其是慢性胃炎的主要原因，并且在胃和十二指腸潰瘍的發(fā)展中起關(guān)鍵作用(1)。幽門螺桿菌削弱胃和十二指腸的保護(hù)粘膜層，這容許酸穿過到達(dá)下面的敏感襯層。酸和細(xì)菌二者刺激襯層并導(dǎo)致瘡，或潰瘍。幽門螺桿菌能夠在胃酸中生存，因?yàn)樗置谥泻退岬拿?。這種機(jī)制容許幽門螺桿菌設(shè)法到達(dá)"安全"的區(qū)域；即保護(hù)性粘膜襯層。一旦到達(dá)那里，該細(xì)菌的螺旋形狀幫助其鉆入襯層。這種生物體的慢性感染與增高的發(fā)展胃腺癌和胃淋巴瘤的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)(2)。已經(jīng)表明幽門螺桿菌對(duì)胃上皮的附著影響疾病的嚴(yán)重性(3)。其促進(jìn)細(xì)胞毒素-相關(guān)抗原A(CagA)經(jīng)由由IV型分泌系統(tǒng)(TFSS)編碼的c"g致病島易位進(jìn)入宿主細(xì)胞，由此導(dǎo)致宿主細(xì)胞功能的顛覆并增加胃癌發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)(4)。同樣地，附著于宿主胃粘膜的能力是最初建群和隨著宿主病理學(xué)的后繼發(fā)展繼續(xù)生存和增殖的先決條件。幽門螺桿菌感染的治療通常遵循7或IO天的三重治療方案，包括質(zhì)子泵抑制劑諸如奧美拉唑或雷貝拉唑，以及普遍使用的抗生素諸如克拉霉5素、甲硝唑和阿莫西林(5)。盡管有效，但是這樣的方案從成本觀點(diǎn)以及還有當(dāng)已知發(fā)生副作用影響諸如腹瀉、金屬味道和過敏反應(yīng)時(shí)，可以是不理想的。對(duì)克拉霉素和甲硝唑的耐藥性也是10-20%患者在治療后未能成功根除該生物體的治療失敗的主要原因(6)。該高失敗率導(dǎo)致了將大量非-抗生素治療法考慮作為治療幽門螺桿菌感染的潛在備選方案。若干報(bào)告描述了植物提取物和它們分離的成分針對(duì)幽門螺桿菌的活性。例如，蔬菜諸如花椰菜(broccoli)用于制備胃炎的用途是公知的(8)。另外，花椰菜的活性成分，萊菔硫垸異硫氰酸鹽(isothiocyanatesulforaphane)，顯示出針對(duì)幽門螺桿菌包括抗生素耐藥性品系的活性(9)。此外，還顯示了由蔥火蔥(Alliumascalonicum)(10)的醇提取物和由牛至(oregano)和蔓越桔(cranberry)(11)引起的幽門螺桿菌的生長(zhǎng)抑制和脲酶生成。已經(jīng)表明表現(xiàn)出針對(duì)幽門螺桿菌的毒性的其他植物是北美草藥血根草(Sanguinariacanadensis)禾口白毛賞(HydrastisCanadensis)(12)、亞洲藥草百花丹(Plumbagozeylanica)(13)、一定范圍的希臘傳統(tǒng)藥物(14)、和綠茶提取物(15)。更近期，報(bào)告描述了肉豆蔻、香芹(parsley)、龍蒿、蓽撥(longpepper)、鼠尾草屬和肉桂針對(duì)幽門螺桿菌的抗細(xì)菌活性(16)。然而，許多這些烹調(diào)用和醫(yī)藥藥草表現(xiàn)出針對(duì)革蘭士-陽(yáng)性和革蘭士-陰性細(xì)菌二者顯示出的具有毒性的廣譜活性(17)。因此，消費(fèi)這樣的藥草和它們的產(chǎn)品也可以對(duì)益生菌微菌群具有副作用，所述益生菌微菌群中的許多已知是有益的(18)。因此，為了有效，天然抗-幽門螺桿菌試劑應(yīng)該表現(xiàn)出窄譜活性并且理想地是僅對(duì)幽門螺桿菌選擇性的。本發(fā)明的目的是提供有效用于預(yù)防或治療胃腸疾病，具體地胃和十二指腸潰瘍的備選非-抗生素組合物。按照本發(fā)明的第一方面，提供制備用于預(yù)防或治療胃腸疾病的組合物的方法，所述方法包括下列步驟將醇添加到馬鈴薯汁中形成醇可溶性級(jí)分和醇不可溶性沉淀，和回收所述醇可溶性級(jí)分。由所述方法制備的組合物是可以用于預(yù)防或治療胃腸疾病的醇可溶性級(jí)分。優(yōu)選地，使用乙醇沉淀。優(yōu)選地，所述級(jí)分包括治療有效量的可源自馬鈴薯汁的大于或等于3kDa的可溶性級(jí)分，最優(yōu)選地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級(jí)分。按照本發(fā)明的第二方面，提供可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分用于制備預(yù)防或治療胃腸疾病的藥物的用途。按照本發(fā)明的第三方面，提供用于治療胃腸疾病的方法，其包括向需要所述治療的受試者施用治療有效量的可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分。按照本發(fā)明的第四方面，提供包括醇和可源自馬鈴薯汁的可溶性級(jí)分的級(jí)分，其中所述可源自馬鈴薯汁的級(jí)分包括大于或等于3kDa的可溶性級(jí)分，最優(yōu)選地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級(jí)分。更優(yōu)選地，所述醇加馬鈴薯汁級(jí)分在8kDa—14kDa,特別地10kDa一12kDa的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，所述級(jí)分在pH8帶正電荷。該級(jí)分優(yōu)選地包括至少部分蛋白質(zhì)，或多肽。該級(jí)分優(yōu)選地包含下列各項(xiàng)中的一種或多種還原糖、蛋白質(zhì)或具有伯氨基基團(tuán)的成分。應(yīng)該理解按照本發(fā)明的可溶性提取物可以處于純的形式或備選地，其也可以與其他化合物混合，條件是那些化合物不抑制按照本發(fā)明的提取物的抗菌性質(zhì)。發(fā)現(xiàn)醇，優(yōu)選地乙醇可溶性級(jí)分具有針對(duì)幽門螺桿菌的殺菌活性，并且因此具有預(yù)防或治療胃和十二指腸潰瘍的功效。此外，方便地，所述提取物對(duì)一定范圍的其他細(xì)菌物種的生存能力不具有可檢測(cè)的作用，因此說明按照本發(fā)明的治療對(duì)其他正常宿主消化區(qū)細(xì)菌群落應(yīng)該不具有副作用和與藥物耐藥性的發(fā)展和傳播相關(guān)的問題。因此，本發(fā)明的第五方面提供抗菌劑，其包括可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分。該抗菌劑對(duì)幽門螺桿菌特別有效。按照本發(fā)明的醇可溶性提取物可以通過下列步驟以其最簡(jiǎn)單形式制備勻漿馬鈴薯汁，傾析出水性上清液，和離心上清液。該提取物可以通過，例如，標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如減壓下蒸發(fā)進(jìn)行濃縮、富集或凝聚。濃縮物的實(shí)例是至少2-倍，更通常地，至少4-倍，例如至少8-倍，或至少20-倍，或至少100-倍，或至少200-倍，或至少1000-倍濃縮的那些。所述濃縮的馬鈴薯汁優(yōu)選地用醇進(jìn)行多于1次的沉淀，更優(yōu)選地至少4次沉淀，所述醇優(yōu)選是乙醇。優(yōu)選地，使用至少70%的乙醇，特別是96%的乙醇。優(yōu)選地，l體積的濃縮馬鈴薯汁用4體積的乙醇進(jìn)行沉淀?？梢允褂萌魏魏线m的方法將活性水溶液與不可溶性沉淀分開，包括，7例如，離心或分子量過濾。按照本發(fā)明的粗馬鈴薯汁可以通過下列步驟中的一步或多步從馬鈴薯汁制備而來(a)浸漬馬鈴薯塊莖，任選地，新鮮剝皮的；和(b)離心過濾由此生成的水性汁。適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑可以用于協(xié)助純化所述醇可溶性級(jí)分，所述適當(dāng)?shù)娜軇┛梢杂糜趯游龇ú襟E，諸如離子交換樹脂和還有在例如SuperdexTM上的尺寸排阻。優(yōu)選地，所述醇可溶性級(jí)分進(jìn)一步通過HPLC分離來純化，具體地，在pH8時(shí)進(jìn)行陰離子HPLC以結(jié)合帶負(fù)電荷的成分，收集未-結(jié)合的成分，并在pH8用陽(yáng)離子HPLC處理所述未-結(jié)合的成分，從而結(jié)合帶正電荷的成分，將所述帶正電荷的成分從柱中洗脫下來，并收集洗脫的級(jí)分作為純化的提取物。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，提供制備抗-菌劑的方法，所述方法包括下列步驟制備馬鈴薯汁的水提物；將醇加入到該水提物中，以形成醇可溶性級(jí)分和醇可溶性沉淀；回收所述醇可溶性級(jí)分；用陰離子交換樹脂處理所述級(jí)分，從而結(jié)合帶負(fù)電荷的成分，并從該樹脂中收集未-結(jié)合的成分；用陽(yáng)離子交換樹脂處理所述未-結(jié)合的成分，從而使帶正電荷的成分與所述樹脂結(jié)合；用洗脫溶液將所述帶正電荷的成分從所述樹脂上洗脫下來，從而獲得具有抗-菌性質(zhì)的洗出液；收集并且，任選地濃縮所述洗出液。所述醇可溶性級(jí)分可以任選地冷凍或噴霧干燥，從而生成按照本發(fā)明的粉末狀級(jí)分。粗制品可以基本"純的"或甚至"稀釋"使用。當(dāng)是這種情形時(shí)，該上清液(無論稀釋與否)可以與為了營(yíng)養(yǎng)原因、醫(yī)學(xué)原因或甚至為了調(diào)節(jié)接受治療的受試者消費(fèi)該提取物的適口性而添加的許多其他試劑相混合。例如，可以用食品或飲料產(chǎn)品配制該提取物，從而提供具有這樣的特征的預(yù)防或緩解胃炎癥狀的功能性食品，所述特征是包含馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分。例如，可以使用奶(例如，奶、奶昔、酸乳酪、酸乳酪飲料或奶增補(bǔ)劑)作為原料將所述提取物配制成奶產(chǎn)品，從而生成具有添加的益處的美味飲料(drink)/飲品(beverage),所述益處是其包含所述活性級(jí)分并因此應(yīng)該高度適合作為胃炎患者的點(diǎn)心。應(yīng)該理解所述提取物可以配制成備選的飲品，諸如果汁，盡管這樣的選擇未必是患有胃炎的人的理想選擇。備選地，所述粗制品可以包含在用于腸喂食的營(yíng)養(yǎng)液中。例如，所述醇可溶性級(jí)分可以與用于受試者腸喂食的鹽或水溶液(可以包括其他維生素、礦物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)物)相混合。應(yīng)該理解可能需要濃縮所述粗制品，或備選地，粉末狀組合物可能是理想的。當(dāng)是這種情形時(shí)，將需要對(duì)粗提取物進(jìn)行濃縮/脫水。所述醇可溶性級(jí)分可以配制為粉末、顆?；虬牍腆w，以引入膠囊中。為了以半固體的形式介紹，所述提取物可以溶解或混懸在粘性液體或半固體賦形劑(vehicle)諸如聚乙二醇，或液體載體諸如二元醇，例如丙二醇、或甘油或植物油或魚油，例如選自橄欖油、向日葵油、紅花油、月見草油、大豆油、冷肝油、鯡魚油等中的一種油中。然后，可以將其填入到這樣的膠囊中，所述膠囊是硬明膠或軟明膠類型的或由硬或軟明膠等價(jià)物制成的，對(duì)于粘性液體或半固體填充物優(yōu)選的是軟明膠或明膠-等價(jià)物膠囊。包括按照本發(fā)明的醇可溶性級(jí)分的粉末特別有效用于制備可以用于預(yù)防或治療胃腸疾病，具體地，胃和十二指腸潰瘍的藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品。冷凍-干燥或噴霧干燥代表用于生產(chǎn)包括按照本發(fā)明提取物的粉末的優(yōu)選方法。噴霧干燥導(dǎo)致具有良好流動(dòng)性質(zhì)和快速溶解特征的自由-流動(dòng)顆粒狀粉末混合物。粉末狀提取物可以重構(gòu)為清澈/透明的低粘性飲料/飲品。如上討論地，可以重構(gòu)到水、乳制品或果汁中。應(yīng)該理解所述粉末可以包裝到小袋中，并且在需要或希望時(shí)由受試者重構(gòu)為飲料。粉末混合物代表本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。所述混合物包括與其它成分混合的所述粉末狀提取物(如上所述)。所述成分可以為了營(yíng)養(yǎng)或醫(yī)學(xué)原9因或?yàn)榱烁纳七m口性而添加。粉末狀提取物可以與不同顆粒尺寸的砂糖相混合，從而獲得不同甜度的自由-流動(dòng)的粉末混合物。備選地，天然甜味劑或人造甜味劑(例如，天冬甜素、糖精等)可以與所述粉末狀提取物混合，從而重構(gòu)為低卡路里/減少卡路里的甜飲料。所述粉末混合物可以包括礦物質(zhì)增補(bǔ)劑。礦物質(zhì)可以是鈣、鎂、鉀、鋅、鈉、鐵、和它們多種組合物中的任意一種。粉末混合物還可以包含緩沖劑諸如檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液，和由碳酸鹽，例如碳酸氫鹽諸如碳酸氫鈉或碳酸氫銨形成的發(fā)泡劑，和固體酸，例如檸檬酸或酸式檸檬酸鹽。所述醇可溶性級(jí)分可以作為食品增補(bǔ)劑或食品添加劑存在，或可以被引入到食品，例如功能性食品或營(yíng)養(yǎng)藥中。這樣的產(chǎn)品可以用作主食以及在可能存在臨床需要的情況下使用?？梢詫⑺龇勰┮氲礁恻c(diǎn)或谷物產(chǎn)品，諸如點(diǎn)心棒例如水果棒、堅(jiān)果棒和谷物棒中。為了以點(diǎn)心棒的形式出現(xiàn)，粉末可以與選自干果諸如曬干的番茄、葡萄干和淡黃葡萄干(sultanas)、花生(groundnuts)或谷物諸如燕麥和小麥中的任何一種或多種成分混合。應(yīng)該理解所述醇可溶性級(jí)分可以方便地配制用作藥劑的藥物(需要處方或相反)。粉末狀級(jí)分或濃縮的液體級(jí)分也可以引入到片劑、錠劑、糖果或其他用于口服攝取的食品中。也應(yīng)該理解所述粉末狀級(jí)分或濃縮的液體級(jí)分可以引入到緩慢-釋放膠囊或裝置中，所述膠囊或裝置可以被咽下并能夠長(zhǎng)期釋放該級(jí)分到腸中。還可以將所述級(jí)分包封入微膠囊。例如，包封可以通過藻酸鈣凝膠膠囊的形成。k-角叉藻聚糖、吉蘭糖膠、明膠和淀粉可以用作微膠囊包封的賦形劑。粗制品、液體濃縮物、粉末等可以與治療胃炎的已知治療劑組合。同樣地，按照本發(fā)明的提取物可以用在非常有效的組合治療中。應(yīng)該理解溶液中的提取物纖維可以起治療胃炎的其他治療劑的理想賦形劑(vehicle)的作用。所述醇可溶性級(jí)分還可以包括在包括益生菌部分的組合/合生素(synbiotic)治療劑中。許多益生菌混合物中包含的細(xì)菌不具有附著性質(zhì)，所以不會(huì)受到內(nèi)含活性級(jí)分的影響。本發(fā)明的組合物可以以包含確定濃度的所述提取物的單位劑型存在。可以選擇所述單位劑型，以獲得理想水平的生物學(xué)活性。受試者需要的提取物的量由生物學(xué)活性和生物利用率確定，其又依賴于制劑、施藥模式、該提取物的物理化學(xué)性質(zhì)和其是作為單一治療還是組合治療使用。通常，成年人的每日劑量可以是0.1g-100g冷凍-干燥或噴霧-干燥的粉末(不管用何種方法配制的)，更優(yōu)選地，每日劑量是lg-30g(例如，如所需地，約5g、10g、或15g)。所述提取物在包括在藥物制劑，諸如片劑或膠囊中時(shí)是特別有效的。所述制劑可能需要有腸溶衣，如果生物利用率指示如此。己知的程序，諸如制藥工藝常規(guī)使用的那些(例如，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、臨床試驗(yàn)等)，可以用于構(gòu)建特定的藥物組合物制劑和準(zhǔn)確的治療方案(諸如化合物的每日劑量和施藥頻率)。應(yīng)該理解常規(guī)"營(yíng)養(yǎng)藥"程序可以用于制造包括所述醇可溶性級(jí)分的液體飲料、粉末混合物和食品。每日劑量可以作為單次施藥提供(例如，用于口服消費(fèi)的每日片劑或作為單次液體飲料)。備選地，使用的提取物可以需要在一天內(nèi)施用2次或更多次。作為實(shí)例，包含0.1-20g噴霧干燥的提取物，優(yōu)選0.3-10g噴霧干燥的提取物和更優(yōu)選0.5-3.0g的100ml橙味飲料可以用于全天內(nèi)每隔一定間隔緩和口渴并由此遞送建議的劑量。應(yīng)該理解增補(bǔ)了所述醇可溶性馬鈴薯提取物的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品代表向患有或處于發(fā)展胃炎或其其他胃腸疾病風(fēng)險(xiǎn)中的受試者提供按照本發(fā)明的提取物的理想方法。因此，按照本發(fā)明的第五方面，提供用于預(yù)防或治療胃腸疾病的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品，其包括治療有效量的可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分。所述營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品可以包括(a)清澈、低粘性、水樣、穩(wěn)定、易于使用、瓶裝、碳酸或非-碳酸飲料；或用于重構(gòu)的濃縮清澈液體，其包括可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分；(b)待用水或任何其他可口服攝取的液體重構(gòu)為可飲用液體的粉末/顆粒混合物，其包括可源自馬鈴薯汁的醇可溶性級(jí)分；或(C)混合在食品(例如，谷物或巧克力棒，錠劑等)中的粉末狀或顆粒狀混合物。營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品可以如上所述，并可以或可以不包含水溶性維生素、另外的礦物質(zhì)增補(bǔ)劑、營(yíng)養(yǎng)化合物、抗氧化劑或調(diào)味劑。本發(fā)明將進(jìn)一步通過下述實(shí)施例并且參考附圖進(jìn)行舉例說明，在所述附圖中圖1是舉例說明馬鈴薯汁殺菌活性的圖表；圖2是顯示馬鈴薯汁對(duì)不同細(xì)菌具有的影響的圖表；圖3是舉例說明pH對(duì)粗馬鈴薯汁提取物針對(duì)幽門螺桿菌的抗-菌活性的影響的圖表；圖4是舉例說明模擬的消化對(duì)馬鈴薯汁活性的影響的圖表；圖5是舉例說明用乙醇處理后的馬鈴薯汁(PJ)活性的圖表；圖6是EtOH可溶性級(jí)分的陰離子交換HPLC層析圖；圖7是顯示陰離子交換HPLC后EtOH可溶性級(jí)分的活性特征的圖表；圖8是大量分離的EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液的陽(yáng)離子交換HPLC層析圖9是顯示EtOH可溶性級(jí)分的陰離子交換流出液的陽(yáng)離子交換分離的活性特征的圖表；圖IO是舉例說明HPLC陽(yáng)離子交換分級(jí)的EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液的抗菌活性和碳水化合物濃度的圖表；圖11是舉例說明HPLC陽(yáng)離子交換分級(jí)的EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液的抗菌活性和蛋白質(zhì)濃度的圖表；圖12是陽(yáng)離子交換分級(jí)的EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液的級(jí)分1-15的TLC點(diǎn)檢測(cè)；圖13a是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的級(jí)分在GeminiC18反相柱上的HPLC層析圖。在280nm處UV檢測(cè)，1、2:峰1和2;圖13b是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的級(jí)分在GeminiC18反相柱上的HPLC層析圖。在350nm處UV檢測(cè)；圖14a是280nm處峰1的UV光譜；12圖14b是280nm處峰2的UV光譜；圖15是14-17分鐘洗脫的成分在350nm處檢測(cè)的放大圖。A-C:峰A-C;圖16a是350nm處峰A的UV光譜；圖16b是350nm處峰B的UV光譜；圖16c是250nm處峰C的UV光譜；圖17a是350nm處綠原酸標(biāo)記的HPLC層析圖；禾口圖17b是350nm處綠原酸標(biāo)記的UV光譜。本發(fā)明人進(jìn)行研究來確定馬鈴薯汁是否包含針對(duì)幽門螺桿菌和一定范圍其他細(xì)菌物種的細(xì)菌活性。制備提取物粗馬鈴薯汁稱重剝皮并清洗了的馬鈴薯，在攪拌器中碾碎，篩濾，并在8，000-13，000rpm離心5-20分鐘。然后，經(jīng)由0.22pm的膜過濾可溶性提取物，并將該提取物保存在S(TC直至需要進(jìn)一步分析時(shí)。實(shí)施例l一針對(duì)一定范圍的不同細(xì)菌測(cè)定馬鈴薯汁，從而評(píng)估其具有窄譜或廣譜活性。使用了下列細(xì)菌幽門螺桿菌、大腸桿菌(&C&Wc/H'flC0//)、嗜酸乳桿菌(丄actoZa"'〃wsac油/Mw)、金黃色葡萄球菌(加//2少/ococcwsawews),表皮葡萄球菌(Wop/^/ococa^,單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(丄/Wen'awowoqytogewes)禾口腸sv.鼠傷寒沙門氏菌(5"a/mowe〃aewfen'casv.Typhiiuurium)。在微好氧條件下，37°C，在包含5%v/v去纖維蛋白馬血(TCS生物科學(xué)(TCSBiosciences)HB035)和0.25%v/v幽門螺桿菌選擇性增補(bǔ)齊U(OXOIDSRO147E)的哥倫比亞(Columbia)瓊脂(OXOIDCM331)上培養(yǎng)幽門螺桿菌。每4天將培養(yǎng)物傳代到新鮮培養(yǎng)基上。在50%甘油中，由在微好氧條件下MRS培養(yǎng)液(OXOIDCM0359)中起始的培養(yǎng)物制備嗜酸乳桿菌儲(chǔ)用培養(yǎng)物，并利用MRS培養(yǎng)液和MRS瓊脂(OXOIDCM0361)進(jìn)行測(cè)定。在有氧條件下37°C，在Luria-Bertani培養(yǎng)液/瓊脂或在Mueller-Hinton培養(yǎng)液/瓊脂(OXOIDCM405)上培養(yǎng)所有其他細(xì)菌，并由實(shí)驗(yàn)室甘油儲(chǔ)備培養(yǎng)物開始。瓊脂孔擴(kuò)散測(cè)定將幽門螺桿菌細(xì)胞重新混懸在PBS(pH8)中至OD6G()nm=0.25(107cfo/mL)。用PBS將所有其他細(xì)菌調(diào)節(jié)至IJOD625nm=0,l(107-108cfo/mL)。用lmL微生物混懸液充滿各個(gè)瓊脂測(cè)定板，去除過量的接種體并容許該板在在所述瓊脂中切割孔(6.5mm直徑)之前完全干燥，向所述孔中加入測(cè)量體積(50-100)LiL)的樣品提取物。包括5pL0.00021M四環(huán)素對(duì)照。然后培養(yǎng)該板3天，并以mm測(cè)量抑制區(qū)。一式三份地測(cè)定樣品。在所有情形中均包括合適的陰性對(duì)照。生存計(jì)數(shù)測(cè)定按照下列方法，通過生存計(jì)數(shù)定量評(píng)估樣品提取物的活性。如上所述地制備微生物混懸液，與樣品提取物以1:1的比例混合，并然后在它們各自的生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)卯分鐘。關(guān)于陽(yáng)性對(duì)照，所述微生物混懸液與PBS混合。然后，利用標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)悠愤M(jìn)行生存計(jì)數(shù)。一式兩份/一式三份(3次)地測(cè)定樣品。在所有情形中均包括合適的陰性對(duì)照。結(jié)果顯示在殺死幽門螺桿菌的同時(shí)，所述提取物表現(xiàn)出一些針對(duì)革蘭士-陰性菌大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌(S.typhiiuurium)的毒性，但是對(duì)革蘭士-陽(yáng)性微生物包括益生菌嗜酸乳桿菌沒有明顯影響(圖2)。對(duì)幽門螺桿菌的高度選擇性說明該活性成分可以提供作為有效抗-幽門螺桿菌試劑的潛力；在對(duì)其他消化道微細(xì)菌群落沒有顯著副作用的同時(shí)殺死幽門螺桿菌。實(shí)施例2—研究pH對(duì)馬鈴薯汁殺菌活性的影響。幽門螺桿菌在某種意義上是獨(dú)特的，即它是已知的唯一能夠有效定居在胃中的酸性胃環(huán)境的微生物體(19)。為了作到這一點(diǎn)，細(xì)菌必須在定居到更適中pH范圍可以波動(dòng)的酸性胃粘液前首先穿過表現(xiàn)出1.4上下的pH值的酸性內(nèi)腔(20)。因此為了進(jìn)一步將馬鈴薯汁的功效定義為有效的14抗-幽門螺桿菌試劑，確定該提取物在暴露于較低pH值時(shí)是否能夠維持其殺菌活性非常重要。用濃縮的HC1將10mL馬鈴薯汁等分試樣調(diào)節(jié)為pH1.0,3.0和5.0，并在持續(xù)搖動(dòng)下，在37。C培養(yǎng)4小時(shí)。然后，用5MNaOH中和溶液，經(jīng)由0.22pm的膜過濾，并通過生存計(jì)數(shù)方法測(cè)定針對(duì)幽門螺桿菌的抗菌活性。陰性對(duì)照由以與分析樣品相同的方式處理的10mL水等分試樣組成。一式兩份地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中每份包含3次重復(fù)。結(jié)果顯示與陰性對(duì)照相比，該提取物在pH1.0和3.0處喪失其相對(duì)活性，而在pH5.0處，該提取物仍然非?；钴S(見圖3)。SMll—模擬的消化對(duì)馬鈴薯汁殺菌活性的影響。盡管確定了所述活性可以在pH5.0時(shí)存在(見實(shí)施例2)，但是決定研究該活性是否能夠在暴露于更接近地模擬胃環(huán)境的系統(tǒng)后維持。為了做到這一點(diǎn)，使用了具有一些改進(jìn)的公開的程序(21)。對(duì)lOmL馬鈴薯汁增補(bǔ)37mMNaCl,0.03MHC1和32mg胃蛋白酶，并隨著持續(xù)搖動(dòng)在37°C培養(yǎng)2小時(shí)。然后，用5MNaOH中和溶液，經(jīng)由0.22pm的膜過濾，并通過生存計(jì)數(shù)方法測(cè)定針對(duì)幽門螺桿菌的活性。以與分析樣品相同方式處理的lOmL水等分試樣起陰性對(duì)照的作用。一式三份地測(cè)定各樣品。結(jié)果顯示當(dāng)對(duì)馬鈴薯汁增補(bǔ)37mMNaCl,0.03MHC1和32mg胃蛋白酶，并隨著持續(xù)搖動(dòng)在37。C培養(yǎng)2小時(shí)時(shí)，在與相應(yīng)的陰性對(duì)照相比較時(shí)，活性保持(圖4)。胃蛋白酶是在胃中由HC1活化的消化酶，且其優(yōu)選地在芳族氨基酸諸如苯丙氨酸和色氨酸的羧基基團(tuán)處裂解。應(yīng)該注意到，在馬鈴薯汁的情形中暴露比在公幵的研究中的更極端，因?yàn)樵诤笳咔樾沃校瑢?。/。w/v藥草極叉開拉瑞阿(Z^rea^Vahcato)加入到100mL包括以上增補(bǔ)劑的模擬胃液中。實(shí)施例4—進(jìn)行粗馬鈴薯汁提取物的EtOH沉淀和EtOH可溶性級(jí)分的陰離子和陽(yáng)離子HPLC分級(jí)，從而純化該級(jí)分的抗菌活性粗產(chǎn)物的EtOH沉淀粗馬鈴薯汁提取物是深色的和更確切地臟的，這歸因于由馬鈴薯組織中的充分確定活性的多酚氧化酶(PPO)形成的較高分子量聚合物的存在(22)。這導(dǎo)致HLPC柱上增高的被壓，因此決定進(jìn)行粗提取物的EtOH沉淀，其目的是為了(a)進(jìn)一步定義活性和(b)獲得更清澈的級(jí)分以分離抗菌成分。遵循由Bui等所述的程序(23)。EtOH沉淀是在從生物基質(zhì)中分離較高分子量成分諸如蛋白質(zhì)或多糖的常用程序，其中在大多數(shù)情形中，它們隨著向水提物中加入數(shù)倍體積的醇，從溶液中沉淀出來。如前所述，從10.2Kg材料中制備粗馬鈴薯汁，以提供2,441mL提取物。將該提取物凍干和重新混懸在水中，以提供360mL濃縮的粗馬鈴薯汁。為了沉淀，將4體積的96。/。EtOH加入到1體積的汁中，并靜置30分鐘。然后在2,500rpm離心該溶液20分鐘，這提供EtOH-水溶性級(jí)分和EtOH不可溶性沉淀。重復(fù)該程序4次，并將組合的EtOH可溶性級(jí)分(5.2L)在士40。C真空中，濃縮到干燥，重新混懸在水中，凍干并再重新混懸在水中，以提供190mL濃縮的提取物。用水重復(fù)清洗EtOH不可溶性沉淀，并將組合的上清液(1.18L)凍干并重新混懸在50mL水中。將所有樣品保存在-8(TC直至需要進(jìn)一步分析。獲得的結(jié)果顯示當(dāng)與粗馬鈴薯汁比較時(shí)，大部分活性處于乙醇可溶性級(jí)分中(見圖5)。該級(jí)分是黃色的并構(gòu)成自由流動(dòng)的液體。此外，它可以比粗汁更容易過濾。EtOH沉淀本身是深色的和結(jié)塊的，如同濃縮的粗馬鈴薯汁，這說明大部分較高分子量的深色聚合物存在于該級(jí)分中。該結(jié)果是有趣的，因?yàn)槎嗵窃贓tOH中傾向于是不可溶的，而某些蛋白質(zhì)諸如普洛馬林(promalines)在70%EtOH中是可溶性的。順便提及地，這種情形中的最終EtOH濃度是76%v/v。離子交換分離EtOH可溶性級(jí)分蛋白質(zhì)和其他生物學(xué)分子具有已知為PI值的性質(zhì)，所述PI值是該分子不攜帶凈電荷的pH。在高于PI值的pH下，分子帶負(fù)電荷，而在低于PI值的pH下，分子帶正電荷。這種性質(zhì)可以在離子交換層析過程中利用?；旧希x子交換涉及在帶正電荷的柱(陰離子交換)或在帶負(fù)電荷的柱(陽(yáng)離子交換)上洗脫提取物，最初使用緩沖液，諸如Tris或MES洗脫未結(jié)合的物質(zhì)，并且然后引入線性鹽梯度，從而在各自pH下，置換與柱16結(jié)合的分子。為了結(jié)合，在使用的pH下，所述分子必須具有與柱的凈電荷相反的凈電荷。所有的制備均在裝配UV檢測(cè)器(215,254和280nm)禾卩電導(dǎo)率記錄儀的ETTANLC(安瑪西亞生物科學(xué)(AmershamBiosciences))上進(jìn)行。利用Unicorn軟件分析結(jié)果。為了陰離子交換分級(jí)，使用的柱是MonoQHR5/5(lmL體積)，帶電基團(tuán)0-CH2-CHOH-CH2-0-CH2-CHOH-CH2-N+(CH3)3。流動(dòng)相緩沖液A:20mMTris-HCl(pH8)，緩沖液B:處于2MNaCl中的20mMTris(pH8)。用3.5倍柱體積的100。/。緩沖液A洗脫柱，從而去除未結(jié)合的物質(zhì)，之后，引入10倍柱體積的由0%B到100%B進(jìn)行的線性梯度模式，從而置換結(jié)合的物質(zhì)。流速為0.25-0.4mL.分鐘"。通過500pL注射環(huán)遞送10-20x250)^iL各種級(jí)分的等分試樣(在緩沖液A中)。對(duì)每次運(yùn)行收集30份0.5mL級(jí)分，并在測(cè)定抗-附著活性前將該級(jí)分的復(fù)制物匯集、凍干并混懸在500^L中。在測(cè)定前，通過離心過濾器(MWCO3kDa)中，按照制造商的說明(VIVASCIENCE)，對(duì)級(jí)分8-30進(jìn)行脫鹽。在MonoQ柱上分離20份250pL各種級(jí)分的等分試樣(在緩沖液A中)，組合級(jí)分2-7(陰離子交換流出液)，從而提供關(guān)于各種EtOH可溶性級(jí)分的60mL分離的陰離子交換流出液。將大多數(shù)分離的陰離子交換流出液凍干并重新混懸在3mL緩沖液A中。如下，通過陽(yáng)離子交換分離EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液(3mL):柱MonoQHR5/5(1mL)，帶電基團(tuán)-0-CH2-CHOH-CHrO-CH2-CHOH-CHrS03。流動(dòng)相與關(guān)于MonoQ柱所述的相同。流速0.5mL.分鐘—1。通過lmL注射環(huán)遞送樣品。對(duì)每次運(yùn)行收集30份0.5mL級(jí)分，且對(duì)來自EtOH可溶性級(jí)分的級(jí)分1-30和8-30脫鹽。如前所述，處理脫鹽的級(jí)分。陰離子交換分離EtOH可溶性級(jí)分發(fā)現(xiàn)大多數(shù)活性存在于流出液中，并且因此不粘在柱上(見圖6)。此外，一些程度的分離在該級(jí)分包含帶負(fù)電荷物質(zhì)時(shí)存在，級(jí)分10-17(圖7)，與級(jí)分l-3，6和7(圖7)充分分開，其表現(xiàn)出針對(duì)幽門螺桿菌的活性。該結(jié)果顯示在pH8.0，抗菌成分是中性或帶正電荷的。然而，大體積分離級(jí)分1-7(陰離子交換流出液)和通過陽(yáng)離子交換重新-分離后，活性成分似乎與柱結(jié)合，這因?yàn)榛钚源嬖谟诩?jí)分11-14中，其在引入鹽梯度后被洗脫出來(圖9)。在此，NaCl濃度是307-721mM。在相應(yīng)的HPLC層析圖(圖8)中，在級(jí)分12中存在215,254和280處吸收的小峰，這說明可能存在蛋白質(zhì)樣物質(zhì)。大體上，這些結(jié)果顯示在pH8.0時(shí)，抗菌活性攜帶凈正電荷。另外，這些結(jié)果還顯示所述成分似乎是基本純化的，因?yàn)樗鼈儾淮嬖谟趯?shí)際上排斥所有UV吸收物質(zhì)的流出液中(圖8)。SMMl—植物化學(xué)分析陽(yáng)離子交換分級(jí)的抗菌EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液在實(shí)施例4中預(yù)先確定了pH8時(shí)抗菌活性不粘著在MonoQ陰離子交換柱上，并且由此存在于流出液中。然后在MonoS陽(yáng)離子交換柱上，pH8，分級(jí)該流出液，由此該活性確實(shí)與柱結(jié)合。大多數(shù)活性存在于級(jí)分ll中，在級(jí)分12-15中存在活性的減少。分別通過苯酚-硫酸和BCA測(cè)定法分別測(cè)定級(jí)分1-15的還原糖和蛋白質(zhì)，并通過使用茚三酮的TLC點(diǎn)檢測(cè)測(cè)定其伯胺基團(tuán)。結(jié)果總結(jié)在下表l中，并在附圖的圖10-12中舉例說明。表1.植物化學(xué)分析陽(yáng)離子交換分級(jí)的抗菌EtOH可溶性級(jí)分陰離子交換流出液。-:未檢測(cè)，+:陽(yáng)性反應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>110.50.0170.031+1415-0.024—15210扁0.004-結(jié)果顯示抗菌級(jí)分，即級(jí)分ll對(duì)還原糖、蛋白質(zhì)測(cè)試陽(yáng)性，并包含具有伯胺基團(tuán)(-NH2)的成分。伯胺基團(tuán)是氨基酸和因此在蛋白質(zhì)以及在氨基糖中存在的基本官能團(tuán)。在消費(fèi)原始馬鈴薯汁可以減輕胃炎癥狀的同時(shí)，以該方式最大化健康益處顯然是不可能的，這歸因于需要消費(fèi)馬鈴薯汁的頻率和量。確定和分離EtOH可溶性級(jí)分容許將濃縮量的所述汁的生物學(xué)活性部分引入到適合的產(chǎn)品("功能性食品")中，從而容許以必需量消耗所述汁的活性部分。實(shí)施例6—制備馬鈴薯汁EtOH可溶性級(jí)分的粉末。如上所述地制備勻漿的馬鈴薯汁的EtOH可溶性級(jí)分，并對(duì)其進(jìn)行冷凍-干燥，以形成按照本發(fā)明的粉末狀提取物。實(shí)施例7—制備EtOH可溶性溶液的粉末混合物。將3.0g冷凍干燥的粉末狀提取物(實(shí)施例2)與0.5g粉末狀擰檬酸、26.3g砂糖和0.2g標(biāo)準(zhǔn)噴霧-干燥的調(diào)味劑混合物相混合。該混合物代表自由-流動(dòng)的粉末制劑(包括3.0g活性級(jí)分)，其適合于包裝在小袋中。當(dāng)患有胃炎的受試者需要時(shí)，該粉末混合物可以按口味稀釋并飲用。實(shí)施例8-制備按照本發(fā)明使用的橙味飲料(a)將100ml粗制品與100ml兩倍濃縮的橙汁(在水中稀釋為2倍濃度的橙汁濃縮液)相混合；(b)將3.5g冷凍-干燥的粉末溶解在100ml橙汁(或備選地，用橙汁濃縮液和水)。橙味飲料(a或b)可以被受試者立即消費(fèi)，冷凍以用于隨后消費(fèi)或封裝在瓶或硬紙盒中以獲得更長(zhǎng)的保存期。19應(yīng)該理解橙汁可以方便地被替換為美味的備選物質(zhì)，諸如奶飲料。實(shí)施例9-小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級(jí)分的HPLC指紋分析通過反相HPLC分析抗-附著級(jí)分，即具有小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級(jí)分，從而提供在不存在鹽的條件下直接適合于LC-MS分析的分離，如具有HPAECHPLC層析圖的情形。使用的HPLC柱是GeminiC18250x4.6mmi.d柱，其具有粒子尺寸5|im，使用設(shè)計(jì)用于分離馬鈴薯中的游離酚類化合物的程序(24)。在返回到初始條件前，流動(dòng)相由A二水甲醇乙酸(88:10:2)和B二水甲醇乙酸(8:90:2)組成，且涉及經(jīng)過9分鐘增高到10%B，以及隨后在9-13分鐘之間劇增至100%B的梯度。以下結(jié)果顯示關(guān)于小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級(jí)分(即SlkDA—^500Da)獲得的典型蹤跡(圖13a)。當(dāng)在280nm處監(jiān)測(cè)時(shí)，存在若干吸收峰，但是明顯地，存在2個(gè)，即似乎分開的1和2(圖13a)。峰1和2的UV光譜分別顯示在圖14a和b中。這兩種成分性質(zhì)上均是芳族的，且可以是嘌呤、嘧啶或芳族氨基酸殘基。在350nm處，在14-17分鐘之間洗脫的成分的HPLC層析圖不同(圖13b)。該區(qū)域的放大圖(圖15)顯示若干峰。盡管沒有完全解析，峰A-C具有指示咖啡酸衍生物(圖16a-c)、與綠原酸屬于同一家族的酚類類苯基丙烷(phenolicphenylpropanoids)(圖17a禾口b)的UV光譜，所述phenolicphenylpropanoids是馬鈴薯中主要的酚。在15分鐘時(shí)，即當(dāng)綠原酸標(biāo)記被洗脫下來時(shí)，沒有觀察到明顯的峰(圖17a，b)。因此，總而言之，所述小于或等于lkDa—大于或等于500道爾頓級(jí)分范圍內(nèi)(SlkDA—^500Da)的級(jí)分中存在至少3種以微小濃度存在的咖啡酸衍生物，其中沒有一種是綠原酸。此外，所述級(jí)分中存在若干芳族成分，其中兩種似乎已被分離。參考文獻(xiàn)1.Blaser，MJ.(1998)幽門螺桿菌和胃病(Helicobacterpyloriandgastricdiseases)生物醫(yī)學(xué)雜志(BiomedJ.)316:1507-1510.2.Uemura，N.,Okamoto，S.，Yamamoto,S.，Matsumura，N.,Yamaguchi,S.,Yamakido，M"Taniyama，K.,禾口Sasaki,N"Schlemper,RJ.(2001)幽門螺桿菌感染禾口胃癌的發(fā)展(Helicobacterpyloriinfectionandthedevelopmentofgastriccancer).新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(N.Engl.J.Med.)345:784-789.3.Gumge，J丄.，F(xiàn)alk,P.G.，Lorenz,R,G.，Dans,M.，Wirth,H.P.，Blaser，M丄，Berg,D.E.,和Gordon,J丄(1998)上皮附著改變幽門螺桿菌感染的結(jié)果(EpithelialattachmentalterstheoutcomeofHelicobacterpyloriinfection).美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc，Natl,Acad,Sci.USA)95:3925-39304.Censini，S.,Stein，M.，禾BCovacci,A.(2001)與幽門螺桿菌接觸后誘導(dǎo)的細(xì)胞響應(yīng)(CellularresponsesinducedaftercontactwithHelicobacterpylori).當(dāng)前微生物學(xué)觀點(diǎn)(Curr.Opin.Microbiol.)4:41-465.Calvert,X.,Ducons，J.，Bujanda，L.，Bory,F,,Montserrat,A.，禾口Gisbert,J.P.(2005)關(guān)于幽門螺桿菌根除的7天對(duì)比IO天雷貝拉唑三重治療:多中心隨禾幾"f七實(shí)驗(yàn)(SevenversustendaysofrabeprrazoletripletherapyforHelicobacterpylorieradiction:amulticenterrandomisedtrial).美國(guó)腸胃病學(xué)雜志(Am.J.Gastroenterol)100:1696-17016.Goh，K丄.(2002)關(guān)于幽門螺桿菌感染包括藥物耐藥性生物體管理的更新(UpdateonthemanagementofHelicobacterpyloriinfection,includingdrugresistantorganisms).腸胃病學(xué)和肝臟學(xué)雜志(JGastroenterolHepatol)17:482-487.7.Kamiji，M.M.,和deOliveiraR.B.(2005)關(guān)于幽門螺桿菌感染的非-抗生素治療法(Non-antibiotictherapiesforHelicobacterpyloriinfection).歐洲腸胃病學(xué)和肝臟學(xué)雜志(EurJGastroenterolHepatol)17:973-981.8.Galan,M.V,，Kishan,A.A.，Silverman,A丄.，2004.用于治療幽門螺桿菌感染的口服花椰菜芽初步報(bào)告(OralBroccolisproutsforthetreatmentofHelicobacterpyloriinfection:aprelimaryreport).消化系統(tǒng)疾病禾口禾斗學(xué)(DigestiveDiseasesandSciences)49，1088-1090.9.Fahey，J.W.，Haristoy，X.,Dolan，P.M.,Kensler，T.W"Scholtus，L，Stephenson，K.K.，Talalay，P.,Lozneiwski,A.,2002.l-異硫氰基-4R-丁烷抑制21幽門螺桿菌胞外、胞內(nèi)、和抗生素-耐藥性菌株并預(yù)防benzo[a]pyrene誘導(dǎo)的胃瘤(Sulforaphaneinhibitsextracellular,intracellular,andantibiotic-resistantstrainsofHelicobacterpyloriandpreventsbenzo[a]pyreneinducedstomachtumors).PNAS99，7610-7615.10.Adeniyi,B.A.,Anyiam,F.M.，2004.火蔥(百合科)葉甲醇提取物的體外抗-幽門螺桿菌潛力對(duì)脲酶活性的易感性和作用(Invitroanti-HelicobacterpyloripotentialofmethanolextractofAlluimascalonicumLinn.(Liliacaea)leaf:susceptibilityandeffectonureaseactivity).植物療法石JT究(PhytotherapyResearch)18,358-361.11.Lin，Y.T.,Kwon,Y.I"Labbe,R.G.,Shetty，K.,2005.由牛至和蔓越桔植物化學(xué)協(xié)同作用引起的幽門螺桿菌和相關(guān)脲酶的抑制(InhibitionofHelicobacterpyloriandassociatedureasebyoreganoandcranberryphytochemicalsynergies).71,8558-8564.12.Mahady，G.B.,Pendland,S丄.,Stoia，A"Chadwick,L.R.,2003.幽門螺桿菌對(duì)來自北美草藥血根草和白毛茛的異喹啉生物堿的體外易感性(InvitrosusceptibilityofHelicobacterpyloritoisoquinolinealkaloidsfromSanguinariaCanadensisandHydrastiscanadensis).植物療法石開究(PhytotherapyResearch)17,217-221.13.Wang，Y-C,Huang,T-L.，2005.白花丹的抗-幽門螺桿菌活性(Anti-HelicobacterpyloriactivityofPlumbagozeylanicaL).FEMS免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)微生物學(xué)(FEMSImmunologyandMedicalMicrobiology)43,407-412.14.StamatisG.,Kyriazopoulos,R，Golegou，S.,Basayiannis，A.,Skaltsas，S.，Skaltsa,H.,2003.希臘草藥的體外抗-幽門螺桿菌活性(Invitroanti-HelicobacterpyloriactivityofGreekherbalmedicines).禾中族藥理學(xué)(JournalofEthnopharmacology)88，175-179.15.Matsubara,S.,Shibata,H.,Ishikawa,F.,Yokokura,T.，Takahashi,M.,Sugimura,T.,Wakabayashi，K.，2003.在蒙古沙鼠中由綠茶提取物抑制幽門螺桿菌-誘導(dǎo)的胃炎(SupressionofHelicobacterpylori-inducedgastritisbygreenteaextractinMongoliangerbils).生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通信2216.O'Mahony,R.，Al-Khtheeri，H.，Weerasekera,D.，F(xiàn)ernando,N.，Vairi,D.,Holton，J.,Basset,C，2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