專利名稱：：治療疼痛和瘙癢的方法、組合物和試劑盒的制作方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明的特征是通過小分子量藥物分子選擇性抑制疼痛-和癢感(itch)感覺神經(jīng)元(sensingneuron)(傷害感受器(nociceptors)和瘙癢感受器(pruriceptors))，同時(shí)將對非疼痛(non-pain)感覺神經(jīng)元或其它類型細(xì)胞的影響最小化的方法、組合物和試劑盒。根據(jù)本發(fā)明方法，小的親水性藥物分子通過進(jìn)入穿過存在于疼痛-和癢感-感覺神經(jīng)元但在其他類型神經(jīng)元或其它類型組織中存在較少或根本不存在的受體而進(jìn)入到疼痛-感覺神經(jīng)元的細(xì)胞內(nèi)隔室中。局部麻醉藥(例如利多卡因和阿替卡因)通過抑制神經(jīng)元中的電壓依賴性(voltage-dependent)鈉通道而發(fā)揮作用。這些麻醉藥阻滯鈉通道并由此阻滯所有神經(jīng)元的興奮性，而不僅僅是疼痛感覺神經(jīng)元(傷害感受器)。因此，雖然局部或區(qū)域麻醉的目的是阻滯傷害感受器中的信號傳遞以防止疼痛，但施用局部麻醉藥還會產(chǎn)生不希望有的或不良的(deletrious)影響，例如由低閾壓和觸覺感受器的阻滯造成的全身麻木、由運(yùn)動軸突(motoraxons)的阻滯造成的運(yùn)動缺陷以及由自主纖維的阻滯造成的其他并發(fā)癥。局部麻醉藥是相對疏水性的分子，通過擴(kuò)散進(jìn)入或擴(kuò)散透過細(xì)胞膜而進(jìn)入它們在鈉通道上的阻滯位點(diǎn)。這些化合物的永久帶電(Permanently-charged)衍生物(例如QX-314，利多卡因的季氮(quaternarynitrogen)衍生物)不可透過細(xì)胞膜，當(dāng)施用于神經(jīng)膜的外表面時(shí)對神經(jīng)元鈉通道無影響，但如果以某種方式(例如通過用于對分離的神經(jīng)元進(jìn)行全細(xì)胞電生理學(xué)記錄的微量移液管)將其引入細(xì)胞內(nèi)部則可阻滯鈉通道。疼痛感覺神經(jīng)元在受到痛苦的熱或辣椒素(辣椒中的刺激性成分)激活而表達(dá)(大多數(shù)情況下)TRPV1受體/通道方面與其他類型的神經(jīng)元不同。在多種類型的疼痛感覺和瘙癢感覺(瘙癢感受器)神經(jīng)元中選擇性表達(dá)的其它類型的受體包括但不限于TRPA1、TRPM8和P2X(2/3)受體。神經(jīng)源性疼痛、炎性疼痛和傷害感受性(nociceptive)疼痛在病因?qū)W、病理生理學(xué)、診斷和治療方面均不同。響應(yīng)于強(qiáng)烈的或傷害性的刺激物對特定亞組(subset)的外周感覺神經(jīng)元(傷害感受器)的激活而出現(xiàn)傷害感受性疼痛。這種疼痛一般是急性和自我限制性的，通過警告可能的或正在進(jìn)行的組織損害來發(fā)揮保護(hù)性生物學(xué)功能。通常這種疼痛限于局部(well-localized)。傷害感受性疼痛的例子包括但不限于創(chuàng)傷(traumatic)或手術(shù)疼痛、分娩痛、扭傷、骨折、燒傷、撞擊痛(bumps)、挫傷(bruises)、注射造成的疼痛(injections)、牙科程序造成的疼痛(dentalprocedures)、皮膚活檢造成的疼痛(skinbiopsies)和阻塞造成的疼痛(obstructions)。炎性疼痛是存在組織損傷或炎癥時(shí)發(fā)生的疼痛，包括手術(shù)后疼痛、創(chuàng)傷后疼痛、關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性或骨關(guān)節(jié)炎)疼痛和與關(guān)節(jié)、肌肉和肌腱的損傷相關(guān)的疼痛(例如軸向下腰痛(axiallowbackpain)。神經(jīng)源性疼痛是一種常見的慢性、非惡性疼痛，其是由外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損傷或功能障礙造成的，這種疼痛沒有保護(hù)性生物學(xué)功能。據(jù)估計(jì)，這種疼痛在美國影響超過160萬人。神經(jīng)源性疼痛有多種不同的病因?qū)W，并可以由于以下原因而發(fā)生這種疼痛，例如創(chuàng)傷、手術(shù)、椎間盤突出、脊髓損傷、糖尿病、帶狀皰疹感染、HIV/AIDS、晚期癌癥、切斷術(shù)(包括乳房切除術(shù))、腕管綜合征、長期飲酒(chronicalcoholuse)、暴露于輻射，也可能是毒害神經(jīng)的治療藥劑(例如某些抗-HIV的藥物和化療藥物)的非有意的(unintended)副作用。與傷害感受性疼痛相反，神經(jīng)源性疼痛常常被描述為性質(zhì)上有“灼燒感(burning)”、“電擊感(electric)”、“麻刺感”或“刺痛感(shooting)”。其特征常常是慢性的異常性疼痛(定義為由通常不引起疼痛反應(yīng)的刺激(例如輕觸)引起的疼痛)和痛覺過敏(定義為對正常的疼痛刺激的敏感性增加)，在任何受損組織外觀痊愈之后還可持續(xù)數(shù)月或數(shù)年。由于多種原因，疼痛可發(fā)生在癌癥患者中炎癥、壓迫(compression)、侵襲、轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散到骨或其它組織中。有一些病癥，在沒有有害刺激物、組織損傷或神經(jīng)系統(tǒng)損害的情況下發(fā)生疼痛，這些病癥稱為功能障礙性(dysfunctional)疼痛，包括但不限于纖維肌痛、壓力型頭痛、腸易激紊亂(irritableboweldisorders)和紅斑性肢痛。偏頭痛是與支配腦膜活動(innervatingthemeningesofthebrain)的感覺纖維活化相關(guān)的頭疼。癢感(瘙癢)是一種皮膚學(xué)病癥，其可以是局部或全身性的，可與皮膚損害(皮疹、特應(yīng)性濕疹、風(fēng)團(tuán))相關(guān)。癢感伴隨著多種病癥，包括但不限于，應(yīng)激、焦慮、陽光紫外輻射、代謝和內(nèi)分泌紊亂(例如，肝臟或腎臟疾病，甲狀腺功能亢進(jìn))、癌癥(例如淋巴瘤)、對藥物或食品的反應(yīng)、寄生蟲和真菌感染、過敏性反應(yīng)、血液疾病(例如真性紅細(xì)胞增多癥)和皮膚學(xué)病癥。癢感是由一亞組小直徑初級感覺神經(jīng)元(瘙癢感受器)介導(dǎo)的，這些神經(jīng)元具有傷害感受器神經(jīng)元的很多特點(diǎn)，包括但不限于表達(dá)TRPV1通道。某些癢感介質(zhì)(mediators)-例如花生酸類物質(zhì)、組胺、緩激肽、ATP和各種神經(jīng)營養(yǎng)蛋白具有內(nèi)源性香草素(endovanilloid)功能。局部施用辣椒素抑制組胺誘導(dǎo)的癢感。因此，像傷害感受器一樣，瘙癢感受器是遞送離子通道阻斷劑的本方法的合適靶標(biāo)。盡管已開展了針對疼痛和癢感的多種療法，仍然需要另外的藥劑。發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明的特征是通過給予患者第一化合物和任選的第二化合物治療患者的疼痛和癢感(itch)(例如神經(jīng)源性疼痛、炎性疼痛、傷害感受性疼痛、特發(fā)性疼痛、癌癥疼痛、偏頭痛、功能障礙性疼痛或操作性疼痛(proceduralpain)(例如由牙科操作、注射、骨折固定(settingfractures)、活檢造成的疼痛))以及瘙癢的方法，所述第一化合物施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面(internalface)時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面(externalface)時(shí)基本上不抑制所述通道，其中當(dāng)受體被激活時(shí)，第一化合物能夠通過膜結(jié)合受體/離子通道進(jìn)入神經(jīng)元；所述第二化合物激活所述第一化合物可通過的受體。某些實(shí)施方式中，第二化合物激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體，所述第一化合物可通過這些受體。可使用任何標(biāo)準(zhǔn)疼痛或癢癥指標(biāo)(例如本文描述的那些)來確定疼痛或癢癥的治療，或可基于患者的主觀疼痛或癢感評價(jià)來確定疼痛或癢癥的治療。如果報(bào)告疼痛減少、或?qū)δ芤鹛弁吹拇碳さ姆磻?yīng)減少以及癢感減少，則認(rèn)為患者得到了“治療”。某些實(shí)施方式中，希望給予第二化合物以確保受體(例如TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體)被激活，從而允許第一化合物進(jìn)入。其它實(shí)施方式中，由于受體(例如TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體)已經(jīng)被激活，不給予第二化合物。因此，第一化合物僅進(jìn)入具有內(nèi)源性激活的受體的神經(jīng)元。其它實(shí)施方式中，受體(例如TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體)通過感應(yīng)激活這些受體的生理狀態(tài)而被激活，從而允許第一化合物進(jìn)入。如果需要，可使用激活TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體的兩種或更多種化合物，也可使用抑制一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的兩種或更多種化合物。理想地，第一化合物(一種或多種)和第二化合物(一種或多種)可在彼此(間隔)4小時(shí)內(nèi)、2小時(shí)內(nèi)、1小時(shí)內(nèi)、30分鐘內(nèi)或15分鐘內(nèi)給予患者，或基本上同時(shí)給藥。重要的是，這兩種化合物中的每一種均可首先給藥。因此，一種實(shí)施方式中，首先給予激活TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體的一種或多種化合物，而另一種實(shí)施方式中，首先給予當(dāng)施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道的一種或多種化合物。這些化合物可共同配制入單一組合物中或可分別配制。可通過例如以下方式給予各化合物口服給藥、胃腸外給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、直腸給藥、皮膚(cutaneous)給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥、或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸。TRPV1受體的激活劑包括但不限于辣椒素(capsaicin)、丁香酚、arvanil(N-花生四烯酰香草胺(arachidonoylvanillamine))、花生四烯乙醇胺(anandamide)、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(aminoethoxydiphenylborate)(2APB)、AM404、樹脂毒素(resiniferatoxin)、佛波醇12-苯基乙酸酯13-乙酸酯20-高香草酸酯(phorbol12-phenylacetate13-acetate20-homovanillate)(PPAHV)、奧伐尼(NE19550)、OLDA(N-油酰多巴胺)、N-花生四烯酸基多巴胺(arachidonyldopamine)(NADA)、6′-碘代樹脂毒素(iodoresiniferatoxin)(6′-IRTX)、C18N-?；掖及?acylethanolamines)、脂氧合酶衍生物例如12-氫過氧化廿碳四烯酸(hydroperoxyeicosatetraenoicacid)、抑制劑半胱氨酸結(jié)(inhibitorcysteineknot)(ICK)肽(香草毒素(vanillotoxins))、胡椒堿、MSK195(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基(pivaloyloxy))丙基]-2-[4-(2-氨基乙氧基)-3-甲氧苯基]乙酰胺)、JYL79(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基)丙基]-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)、羥基-α-山椒素(sanshool)、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-姜烯酚(shogaol)、油烯基姜辣素(oleylgingerol)、油烯基姜烯酚(oleylshogaol)和SU200(N-(4-叔丁基芐基)-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)。TRPV1受體的其他激活劑描述于O′Dell等，BioorgMedChem(2007)156164-6149和Sexton等，F(xiàn)ASEBJ(2007)212695-2703中。TRPA1受體的激活劑包括但不限于肉桂醛、異硫氰酸烯丙酯、二硫化二烯丙基、icilin、肉桂油、冬青油、丁香油、丙烯醛、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、4-羥基壬烯醛(hydroxynonenal)、對羧基苯甲酸甲酯、芥子油和3′-氨基甲酰聯(lián)苯-3-基環(huán)己基氨基甲酸酯(URB597)。TRPA1受體的其它激活劑描述于Taylor-Clark等，MolPharmacol(2007)PMID18000030；Macpherson等，Nature(2007)445541-545；和Hill等，JBiolChem(2007)2827145-7153中。P2X受體的激活劑包括但不限于ATP、2-甲硫基-ATP、2′和3′-O-(4-苯甲?；郊柞；?-ATP以及ATP5′-O-(3-硫代三磷酸鹽(thiotriphosphate))。TRPM8受體的激活劑包括但不限于薄荷醇、icilin、桉樹腦、芳樟醇、香葉醇和羥基香茅醛。某些實(shí)施方式中，第一化合物抑制電壓門控性鈉通道。該類的示例性抑制劑是QX-314、N-甲基-普魯卡因、QX-222、N-辛基-胍、9-氨基吖啶和泮庫溴銨(pancuronium)。其它實(shí)施方式中，第一化合物抑制電壓門控性鈣通道。該類的示例性抑制劑是D-890(季甲氧維拉帕米(quaternarymethoxyverapamil))和CERM11888(季芐普地爾(quaternarybepridil))。其它實(shí)施方式中，第一化合物是選自以下的化合物的季胺(quarternaryamine)衍生物或其他帶電衍生物利魯唑、美西律(mexilitine)、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因(bupivicaine)、甲哌卡因(mepivicaine)、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺(diisopyramide)、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨(bretylium)、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪(flunarizine)和氟司必林(fluspirilene)。本文描述了示例性衍生物。本發(fā)明的特征還在于選自以下的化合物的季胺衍生物或其他帶電衍生物利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。在相關(guān)方面，本發(fā)明的特征是藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的賦形劑和選自以下的化合物的季銨衍生物或其他帶電衍生物利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。本發(fā)明的特征還在于組合物，其包含(i)第一化合物，其激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制這些離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體被激活時(shí)，第二化合物能夠通過這些受體進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元。一種實(shí)施方式中，所述第二化合物在施加于外表面時(shí)活性或部分活性降低，但在施加于內(nèi)表面時(shí)活性更大?？膳渲平M合物以用于例如口服給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、直腸給藥、皮膚給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥、或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸給藥。如果需要，該組合物可含有激活TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和/或TRPM8受體的兩種或更多種化合物，和/或抑制一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的兩種或更多種化合物。本發(fā)明的特征還在于通過將細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸來抑制該細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的方法(i)第一化合物，其激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述受體進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元。上文提供了合適的化合物。本發(fā)明的特征還在于鑒定有用于治療疼痛和癢感的化合物的方法。該方法包括以下步驟(a)使表達(dá)TRPV1、TRPA1、TRPM8和/或P2X(2/3)的神經(jīng)元的外表面接觸(i)第一化合物，其激活TRPV1、TRPA1、TRPM8或P2X(2/3)受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，以及(b)確定所述第二化合物是否抑制這些神經(jīng)元中的電壓門控性離子通道。第二化合物對電壓門控性離子通道的抑制將所述第二化合物鑒定為有用于治療疼痛和/或癢癥的化合物。這些方法、組合物和試劑盒還可用來選擇性阻滯表達(dá)TRPV、TRPA、TRPM和P2X受體家族中的不同成員的其它類型神經(jīng)元中的神經(jīng)元活性，其中第一化合物是存在于那些類型的神經(jīng)元中的具體TRPV、TRPA、TRPM和P2X受體的激動劑，第二化合物是正常情況下不可透過膜的鈉或鈣通道阻斷劑。應(yīng)理解，可存在其他受體，其允許化合物進(jìn)入(神經(jīng)元細(xì)胞)，如果沒有該受體則所述化合物不能進(jìn)入。激活這些受體中的一種或多種的化合物聯(lián)合施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述通道但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道的一種或多種化合物的共同給藥也是本發(fā)明的一個(gè)方面。本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒能夠阻抑疼痛或癢感而不改變輕觸或運(yùn)動控制。例如，接受硬膜外給藥的患者將不會完全喪失感覺輸入。術(shù)語“疼痛”在本文使用其廣義含義，指所有類型的疼痛，包括急性和慢性疼痛，例如傷害感受性疼痛，如軀體疼痛(somatic)和內(nèi)臟疼痛；炎性疼痛；功能障礙性疼痛；特發(fā)性疼痛；神經(jīng)源性疼痛，例如中樞產(chǎn)生的疼痛和外圍產(chǎn)生的疼痛，偏頭痛和癌癥疼痛。術(shù)語“傷害感受性疼痛”用于包括所有由威脅或?qū)嶋H傷害身體組織的有害刺激引起的疼痛，所述有害刺激包括但不限于割傷(cut)、擦傷、骨折、擠壓傷害(crushinjury)、燒傷等等。組織傷害的疼痛受體(傷害感受器)主要位于皮膚、肌骨胳系統(tǒng)或內(nèi)臟中。術(shù)語“軀體疼痛”用于指骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚或結(jié)締組織產(chǎn)生的疼痛。通常這類疼痛限于局部(well-localized)。術(shù)語“內(nèi)臟疼痛”在本文用于指內(nèi)臟器官(例如呼吸器官、胃腸道和胰腺、泌尿道和生殖器官)產(chǎn)生的疼痛。內(nèi)臟疼痛包括由器官囊(capsule)的腫瘤牽涉(tumorinvolvement)而引起的疼痛。通常由中空內(nèi)臟的阻塞引起的另一種類型的內(nèi)臟疼痛，其特征為間歇痙攣性(cramping)并且不太限于局部的(poorlylocalized)疼痛。內(nèi)臟疼痛可與炎癥相關(guān)，如在膀胱炎或反流性食管炎中那樣。術(shù)語炎性疼痛包括與活動性炎癥相關(guān)的疼痛，所述炎癥可由創(chuàng)傷、手術(shù)、感染和自身免疫疾病引起。術(shù)語“神經(jīng)源性疼痛”在本文用于指源自外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)對由對這些系統(tǒng)的損害所引起的感覺輸入的異常加工的疼痛。術(shù)語“操作性疼痛”在本文用于指由醫(yī)療(medical)、牙科或手術(shù)操作引起的疼痛，其中所述操作通常預(yù)期有急性創(chuàng)傷或與急性創(chuàng)傷相關(guān)。術(shù)語“癢感”在本文用其廣義含義，指所有類型的局部和全身(generalized)性、急性間歇性和持久性的癢和刺痛(stinging)的感覺。癢感可以是由于肝病、腎病或癌癥而引起的原發(fā)性、過敏性、代謝性、傳染性、藥物誘導(dǎo)性癢感。“瘙癢(pruritus)”是嚴(yán)重的癢感?！盎颊摺敝溉魏蝿游?。一種實(shí)施方式中，患者是人?？墒褂帽景l(fā)明的方法、組合物和試劑盒治療的其他動物包括但不限于非人靈長類動物(例如，猴子、大猩猩、黑猩猩)、家畜(例如馬、豬、山羊、兔、綿羊、牛、羊駝)和伴侶動物(例如豚鼠、大鼠、小鼠、蜥蜴、蛇、狗、貓、魚、倉鼠和鳥)。有用于本發(fā)明的化合物包括但不限于任何藥學(xué)上可接受形式的本文所述化合物，所述藥學(xué)上可接受的形式包括本文所述化合物的異構(gòu)體(例如非對映體和對映體)、鹽、酯、酰胺、硫酯、溶劑合物和多晶形，以及外消旋混合物和純的異構(gòu)體。“低分子量”指小于約500道爾頓。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”表示在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適合用于與人和較低等動物的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)等并與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的?？稍诒景l(fā)明化合物的最后分離和純化期間原位制備所述鹽，或通過將游離堿官能團(tuán)與合適的有機(jī)酸反應(yīng)來單獨(dú)制備所述鹽。代表性的酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽(camphorate)、樟腦磺酸鹽(camphersulfonate)、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽(heptonate)、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate)、甲磺酸鹽(methanesulfonate)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽(pamoate)、果膠酯酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等等。代表性的堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括但不限于鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，包括但不限于銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等等。在本發(fā)明化合物的一般描述中，取代基中具體類型的原子的數(shù)目通常以某一范圍給出，例如，含有1-4個(gè)碳原子的烷基或C1-4烷基。提及此類范圍時(shí)，意在包括具體提及具有指定范圍內(nèi)的各整數(shù)原子的基團(tuán)。例如，1-4個(gè)碳原子的烷基包括C1、C2、C3和C4中的每一個(gè)。C1-12雜烷基例如包括1-12個(gè)碳原子以及一個(gè)或多個(gè)雜原子?？梢园搭愃品绞奖硎驹雍推渌愋驮拥钠渌麛?shù)目。本文所用的術(shù)語“烷基”和前綴“烷(alk-)”包括直鏈和支鏈基團(tuán)以及環(huán)狀基團(tuán)，即環(huán)烷基。環(huán)狀基團(tuán)可以是單環(huán)或多環(huán)的，優(yōu)選具有3-6(包括3和6在內(nèi))個(gè)環(huán)碳原子。示例性環(huán)狀基團(tuán)包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、和環(huán)己基。“C1-4烷基”指具有1-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。C1-4烷基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素(halide)、羥基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基(quaternaryamino)、羥烷基、羧基烷基和羧基。C1-4烷基包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、異丙基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和環(huán)丁基?！癈2-4烯基”指含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵并具有2-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。C2-4烯基可任選地包括單環(huán)或多環(huán)，其中各環(huán)理想地為3-6元。C2-4烯基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羥烷基、羧基烷基和羧基。C2-4烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、2-環(huán)丙基-1-乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基和2-甲基-2-丙烯基?！癈2-4炔基”指含有一個(gè)或多個(gè)三鍵并具有2-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。C2-4炔基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地為5或6元。C2-4炔基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羥烷基、羧基烷基和羧基。C2-4炔基包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。“C2-6雜環(huán)基”指穩(wěn)定的5-7元單環(huán)或7-14元雙環(huán)雜環(huán)，其為飽和、部分不飽和或不飽和(芳族)的，由2-6個(gè)碳原子和獨(dú)立地選自N、O和S的1、2、3或4個(gè)雜原子組成，包括其中任何以上定義的雜環(huán)與苯環(huán)融合的任何二環(huán)基團(tuán)。雜環(huán)基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羥烷基、羧基烷基和羧基。氮和硫雜原子可任選地被氧化。雜環(huán)可經(jīng)由產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任何雜原子或碳原子而共價(jià)連接，例如，咪唑啉基環(huán)可在環(huán)碳原子位置或氮原子處連接。雜環(huán)中的氮原子可任選地季銨化。優(yōu)選當(dāng)雜環(huán)中S和O原子的總數(shù)超過1時(shí)，這些雜原子不彼此毗鄰。雜環(huán)包括但不限于1H-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4aH-咔唑、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基(thiadiazinyl)、吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(benzothiofuranyl)、苯并苯硫基(benzothiophenyl)、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑酮基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4aH-咔唑基、b-咔啉基(carbolinyl)、苯并二氫吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、亞吲哚基(indolenyl)、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、異苯并呋喃基(isobenzofuranyl)、異苯并二氫吡喃基、異吲唑基、異二氫氮雜茚基(isoindolinyl)、異氮雜茚基(isoindolyl)、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、1，5二氮雜萘基、八氫異喹啉基(octahydroisoquinolinyl)、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基萘嵌間二氮雜苯基(oxazolidinylperimidinyl)、菲啶基、菲咯啉基、吩砒嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、phenoxathiinyl、吩噁嗪基、2，3-二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基(pteridinyl)、哌啶酮基、4-哌啶酮基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并噁唑基(pyridooxazole)、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、咔啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫噸基。優(yōu)選的5-10元雜環(huán)包括但不限于吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、四唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、1H-吲唑基、噁唑烷基、異噁唑烷基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基(oxindolyl)、苯并噁唑啉基、喹啉基和異喹啉基。優(yōu)選的5-6元雜環(huán)包括但不限于吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基和四唑基。“C6-12芳基”指具有由帶有共軛π電子的碳原子組成的環(huán)狀系統(tǒng)的芳基(例如苯基)。芳基具有6-12個(gè)碳原子。芳基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地具有5或6個(gè)成員。芳基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、氟代烷基、羧基、羥烷基、羧基烷基、氨基、氨基烷基、單取代的氨基、二取代的氨基和季氨基。“C7-14烷芳基”指被芳基(例如芐基、苯乙基或3，4-二氯苯乙基)取代的烷基，其具有7-14個(gè)碳原子?！癈3-10烷雜環(huán)基”指被雜環(huán)基取代的烷基，其具有3-10個(gè)碳原子以及一個(gè)或多個(gè)雜原子(例如3-呋喃基甲基、2-呋喃基甲基、3-四氫呋喃基甲基或2-四氫呋喃基甲基)。“C1-7雜烷基”指支鏈或直鏈的烷基、烯基或炔基基團(tuán)，其具有1-7個(gè)碳原子以及1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自N、O、S和P的雜原子。雜烷基包括但不限于叔胺、仲胺、醚、硫醚、酰胺、硫代酰胺、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、腙、亞胺、磷酸二酯、氨基磷酸酯(phosphoramidates)、氨磺酰和二硫化物。雜烷基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地具有3-6個(gè)成員。雜烷基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羥烷基、羥烷基、羧基烷基和羧基。C1-7雜烷基的例子包括但不限于甲氧基甲基和乙氧基乙基?！胞u素”指溴、氯、碘或氟。“氟代烷基”指被氟原子取代的烷基?！叭榛敝竷H由碳和氟原子組成的烷基。“羧基烷基”指具有式-(R)-COOH的化學(xué)部分，其中R選自C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-7雜烷基?！傲u基烷基”指具有式-(R)-OH的化學(xué)部分，其中R選自C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-7雜烷基?！巴檠趸敝妇哂惺?OR的化學(xué)取代基，其中R選自C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-7雜烷基?！胺佳趸敝甘?OR的化學(xué)取代基，其中R是C6-12芳基。“烷硫基”指式-SR的化學(xué)取代基，其中R選自C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-7雜烷基?！胺剂蚧敝甘?SR的化學(xué)取代基，其中R是C6-12芳基。“季氨基”指式-(R)-N(R’)(R”)(R’”)+的化學(xué)取代基，其中R、R’、R”和R’”各自獨(dú)立地是烷基、烯基、炔基或芳基基團(tuán)。R可以是烷基，其將作為取代基的季氨基氮原子與另一部分連接。氮原子N共價(jià)連接于烷基、雜烷基、雜芳基和/或芳基基團(tuán)的四個(gè)碳原子，導(dǎo)致氮原子處帶一個(gè)正電荷?！皫щ姴糠帧敝冈谏韕H下獲得質(zhì)子從而變?yōu)閹д姾傻牟糠?例如銨、胍鎓(guanidinium)或脒鎓(amidinium))或包含凈正電荷形式(netformalpositivecharge)而無質(zhì)子化的部分(例如季銨)。所述帶電部分可以是永久帶電的或瞬時(shí)帶電的。本文所用和術(shù)語“母體(parent)”指通道阻斷化合物，其可通過存在于母體化合物中的胺氮原子的季銨化或鳥苷酸化(guanylation)作用而被修飾。季銨化和鳥苷酸化的化合物是母體化合物的衍生物。本文所述的胍基衍生物以它們的不帶電的堿形式存在。這些化合物可作為鹽(即，酸加成鹽)施用，或以其不帶電的堿形式(經(jīng)原位質(zhì)子化而形成帶電部分)施用。通過下文的發(fā)明詳述和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將非常明顯。附圖簡述圖1.共同給予胞外QX-314(5mM)和辣椒素(1μM)來選擇性阻斷辣椒素響應(yīng)性(capsaicin-responsive)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)感覺神經(jīng)元中的鈉電流。(a)在培養(yǎng)的小的(24μm)辣椒素-敏感性成人(adult)DRG神經(jīng)元中，單獨(dú)的5mMQX-314(紅色痕跡)、單獨(dú)的1μM辣椒素(綠色痕跡)以及共同施用的5mMQX-314和1μM辣椒素(藍(lán)色痕跡)的10分鐘洗進(jìn)(wash-in)對鈉電流(通過-70至-5mV的步驟來引發(fā))的影響。上欄(toppanel)短暫(brief)施用辣椒素在該神經(jīng)元中誘導(dǎo)了延長的向內(nèi)電流(保持電壓-70mV)。(b)相同系列的藥物施用對大的(52μm)辣椒素-不敏感性神經(jīng)元的鈉電流的影響。(c)作為試驗(yàn)脈沖的函數(shù)的峰值向內(nèi)電流，所述試驗(yàn)脈沖在對照(黑色符號)、僅存在5mMQX-314(紅色符號)、僅1μM辣椒素(綠色符號)和共同施用的5mMQX-314和1μM辣椒素(藍(lán)色符號)中記錄。符號顯示對25個(gè)小的辣椒素敏感性神經(jīng)元的試驗(yàn)的平均值±SEM。通過20ms去極化步驟，即以5mV增量從-70mV的保持電位(holdingpotential)(變化)至測試電位范圍，引發(fā)電流。(d)辣椒素和QX-314的組合對峰值鈉電流影響的時(shí)間過程。柱形代表相對于對照歸一化的峰值鈉電流的平均值±SEM(n＝25)。圖2.共同施用QX-314和辣椒素阻斷傷害感受樣(nociceptive-like)DRG神經(jīng)元的興奮性。(a)施加于小的(23μm)DRG神經(jīng)元的去極化電流步驟(250pA，4ms)引發(fā)傷害感受器樣寬泛動作電位，在下降階段有突出的偏轉(zhuǎn)(deflection)(箭頭)。QX-314(5mM)的2分鐘洗進(jìn)沒有影響(第二欄)。辣椒素(1μM)減少了動作電位振幅(第三欄)，這可能是如圖1中所示的辣椒素對鈉電流的適度降低和辣椒素產(chǎn)生的去極化作用繼發(fā)的鈉電流鈍化的組合的結(jié)果(probablyduetoacombinationofthemodestreductionofsodiumcurrentproducedbycapsaicinasinFigure1andinactivationofsodiumcurrentsecondarytothedepolarizationproducedbycapsaicin)。即使用大得多的刺激電流注入，共同施用的QX-314和辣椒素仍然完全消除了動作電位的產(chǎn)生。(b)動作電位振幅的平均值±SEM(對QX-314而言，n＝25；對辣椒素和辣椒素+QX-314而言，n＝15)。圖3.足底內(nèi)注射辣椒素(10μg/10μL)連通QX-314(2％，10μL)導(dǎo)致對機(jī)械(vonFrey絲(vonFreyfilaments))和熱有害刺激的延長的局部麻醉。(a)足底內(nèi)僅注射QX-314(2％，10μL；綠色符號)、僅注射辣椒素(10μg/10μL；黑色符號)或QX-314和辣椒素一起施用(紅色符號)之后，響應(yīng)于增加強(qiáng)度的vonFrey絲(hairs)的縮爪機(jī)械閾。對最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對最高值(57g，箭頭)根本不應(yīng)答的動物數(shù)目。(＊＝p＜0.05，各組n＝6)。(b)與(a)中相同組別的縮爪熱(輻射熱)閾值(Sameforthermal(radiantheat)thresholdforpawwithdrawal)。箭頭指示截?cái)嘀?cutoff)，對最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對最強(qiáng)刺激不應(yīng)答的動物數(shù)目。(＊＝p＜0.05，各組n＝6)。圖4.鄰近坐骨神經(jīng)注射QX-314然后注射辣椒素麻醉了動物的后肢對有害機(jī)械和熱刺激(的反應(yīng))而沒有產(chǎn)生任何運(yùn)動缺陷。(a)對坐骨神經(jīng)僅注射QX-314(0.2％，100μL)、僅注射辣椒素(0.5μg/μL，100μL)或在注射辣椒素之前10分鐘注射QX-314之后，響應(yīng)于增加強(qiáng)度的vonFrey絲的縮爪機(jī)械閾。對最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對最高值(57g，箭頭)根本不應(yīng)答的動物數(shù)目。(＊＝p＜0.05，＊＊＝p＜0.01，各組n＝6)。(b)與(a)中相同組別的縮爪熱(輻射熱)閾值。(c)坐骨神經(jīng)注射利多卡因(2％；0.2％)、QX-314(0.2％)、辣椒素(5μg/10μL)和注射QX-314然后注射辣椒素之后評價(jià)的運(yùn)動功能變化(評分2＝完全麻痹；1＝部分麻痹；0＝?jīng)]有損害)。各柱上示出了受注射影響的動物數(shù)目。圖5.小的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中鈉通道電流的電壓鉗(Voltageclamp)記錄。數(shù)據(jù)說明，單獨(dú)的丁香酚對鈉電流有適度的抑制效果(10-20％抑制)。共同施用丁香酚和QX-314產(chǎn)生累進(jìn)性阻斷，可在7分鐘后完成。示出了兩個(gè)例子，其代表結(jié)果類似的10個(gè)試驗(yàn)。圖6.共同施用TRPA激動劑芥子油(MO)(50μM)和QX-314(5mM)。單獨(dú)的MO使鈉電流減少了20-30％，約在3分鐘后達(dá)到平臺期(plateau)。共同施用MO和QX-314顯著減少了鈉電流。發(fā)明詳述目前在開發(fā)治療疼痛的藥物中對疼痛感覺神經(jīng)元中的電壓依賴性離子通道十分感興趣。阻斷疼痛感覺神經(jīng)元中的電壓依賴性鈉通道可通過妨礙動作電位的起始和傳送來阻斷疼痛信號，阻斷鈣通道可阻止疼痛信號神經(jīng)傳遞至脊髓中的二級(thesecondorder)神經(jīng)元。迄今，設(shè)計(jì)阻斷鈉通道或鈣通道的小有機(jī)分子的局限是當(dāng)這些分子外部施加于靶細(xì)胞時(shí)必須有活性。這些外部施加的分子絕大多數(shù)是疏水性的并可穿過膜。因此，它們將進(jìn)入所有細(xì)胞并因此沒有僅影響疼痛感覺神經(jīng)元這種選擇性。然而，已知一些阻斷劑，例如QX-314，僅當(dāng)存在于細(xì)胞內(nèi)時(shí)有效。迄今為止，主要用電生理學(xué)記錄技術(shù)(例如通過以機(jī)械方式使膜破裂而允許細(xì)胞內(nèi)部透析的完整細(xì)胞膜片鉗技術(shù))來研究此類阻斷劑。機(jī)械破裂而不殺死細(xì)胞的難度以及后續(xù)將阻斷劑可逆性施加于細(xì)胞內(nèi)部的難度排除了發(fā)展對可能在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的藥物分子的高通量篩選試驗(yàn)(的可能性)。我們已發(fā)現(xiàn)了將電壓門控性離子通道的抑制劑遞送入傷害感受性神經(jīng)元的方法。通過為這些抑制劑提供進(jìn)入傷害感受性神經(jīng)元的手段，本發(fā)明允許在篩選和治療中使用在細(xì)胞內(nèi)部有活性作為藥物阻斷劑，但不必可透過膜的所有類型的分子。此外，限制此類阻斷劑僅進(jìn)入到處于治療狀況下的疼痛感覺神經(jīng)元中，允許使用未必對疼痛感覺神經(jīng)元(相對于其他類型的細(xì)胞)中的離子通道具有固有選擇性的藥物，而是通過允許這些阻斷劑相對于神經(jīng)和心血管系統(tǒng)中的其他細(xì)胞優(yōu)先進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元，來獲得對疼痛感覺神經(jīng)元的選擇性作用。另外，由于特別是TRPV1受體往往在與疼痛(例如炎癥)相關(guān)的組織狀況中活性更大，因此更有利于進(jìn)入與產(chǎn)生疼痛的組織最為相關(guān)的特定感覺神經(jīng)元中。癢感敏感性初級感覺神經(jīng)元也表達(dá)TRP通道，特別是TRPV1，也可適應(yīng)于本方法。下文更詳細(xì)地描述了本發(fā)明。電壓門控性離子通道的抑制劑適合用于本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒的電壓門控性離子通道的抑制劑理想地是帶正電荷的親水性化合物。一種實(shí)施方式中，所述化合物是永久性帶電的(即，帶有的電荷不是瞬時(shí)的)。另一種實(shí)施方式中，所述化合物是瞬時(shí)帶電的。電壓門控性鈉通道的合適抑制劑包括但不限于QX-314、N-甲基-普魯卡因(QX-222)、N-辛基-胍、9-氨基吖啶和泮庫溴銨。電壓門控性鈣通道的合適抑制劑包括但不限于D-890(季甲氧維拉帕米)和CERM11888(季芐普地爾)。另外，有多種大小適用于本發(fā)明方法(例如約100-4,000Da、100-3,000Da、100-2,000Da、150-1,500Da、或甚至200-1,200Da)并具有胺基團(tuán)或可被修飾以具有胺基團(tuán)的電壓門控性離子通道的已知抑制劑，所述胺基團(tuán)容易被修飾而帶電荷(例如帶正電的季胺，或瞬時(shí)帶電的鳥苷酸化化合物)。此類抑制劑包括但不限于利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因和氟司必林?？捎糜诒景l(fā)明組合物、試劑盒和方法中的化合物包括如下式I-X的化合物。式I中，R1A、R1B和R1C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、OR1H、NR1IR1J、NR1KC(O)R1L、S(O)R1M、SO2R1NR1O、SO2NR1PR1Q、SO3R1R、CO2R1S、C(O)R1T和C(O)NR1UR1V；R1H、R1I、R1J、R1K、R1L、R1M、R1N、R1O、R1P、R1Q、R1R、R1S、R1T、R1U和R1V各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；X1選自-CR1WR1X-、-NR1YC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR1Z-、-CO2-和-OC(S)-；R1W、R1X、R1Y和R1Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R1D選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R1E、R1F和R1G各自獨(dú)立地選自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；或R1D和R1G一起形成具有至少一個(gè)氮原子的雜環(huán)。優(yōu)選實(shí)施方案中，X1是-NHC(O)-。示例性的式I化合物包括麻醉藥的甲基化季銨衍生物，例如N-甲基利多卡因、N，N-二甲基丙胺卡因、N，N，N-三甲基妥卡尼、N-甲基依替卡因、N-甲基羅哌卡因、N-甲基布比卡因、N-甲基左旋布比卡因(levobupivacaine)、N-甲基甲哌卡因。可使用與方案1中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式I化合物包括QX-314(CAS21306-56-9)和QX-222(CAS21236-55-5)(如下)。式II中，R2A、R2B和R2C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、OR2I、NR2JR2K、NR2LC(O)R2M、S(O)R2N、SO2R2OR2P、SO2NR2QR2R、SO3R2S、CO2R2T、C(O)R2U和C(O)NR2VR2W；R2I、R2J、R2K、R2L、R2M、R2N、R2O、R2P、R2Q、R2R、R2S、R2T、R2U、R2V、R2W各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；X2選自-CR2XR2Y-、-NR2ZC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR2AA-、-CO2-和-OC(S)-；R2X、R2Y、R2Z和R2AA各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R2D選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R2E是H或C1-4烷基；R2F、R2G和R2H各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；或R2F和R2G一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R2F和R2G形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R2H是H或CH3。理想地，R2F和R2G結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選實(shí)施方式中，X2是-NHC(O)-。示例性的式II化合物包括麻醉藥的N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)，例如，脫乙基(desethyl)-N-胍基利多卡因、N-胍基丙胺卡因、N-胍基妥卡尼、脫乙基-N-胍基依替卡因、脫丁基(desbutyl)-N-胍基羅哌卡因、脫丁基-N-胍基布比卡因、脫丁基-N-胍基左旋布比卡因、脫甲基(desmethyl)-N-胍基甲哌卡因?？墒褂门c方案2-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物。本文所描述的胍基衍生物(例如式II化合物)以其不帶電的堿形式存在。這些化合物可作為鹽(即，酸加成鹽)施用，或以其不帶電的堿形式(經(jīng)原位質(zhì)子化而形成帶電部分)施用。式I和式II的母體藥物的合成描述在文獻(xiàn)中。參見，例如美國專利No.2,441,498(利多卡因的合成)、美國專利No.3,160,662(丙胺卡因的合成)、德國專利No.2235745(妥卡尼的合成)、德國專利No.2162744(依替卡因的合成)、PCT公開號WO85/00599(羅哌卡因的合成)，美國專利No.2,955,111(布比卡因和左旋布比卡因的合成)和美國專利No.2,799,679(甲哌卡因的合成)。式III中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R3A、R3B和R3C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR3L、NR3MR3N、NR3OC(O)R3P、S(O)R3Q、SO2R3RR3S、SO2NR3TR3U、SO3R3V、CO2R3W、C(O)R3X和C(O)NR3YR3Z；R3L、R3M、R3N、R3O、R3P、R3Q、R3R、R3S、R3T、R3U、R3V、R3W、R3X、R3Y、R3Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；Y3選自-CR3AAR3AB-、-NR3ACC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR3AD-、-CO2-和-OC(S)-；R3AA、R3AB、R3AC和R3AD各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R3D、R3E、R3F和R3G各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；R3H、R3J和R3K各自獨(dú)立地選自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基。式III中的季氮在本文識別為N′。示例性的式III化合物包括麻醉藥的甲基化季銨衍生物，例如N’-甲基普魯卡因、N’-甲基丙美卡因、N’-甲基阿羅卡因(allocain)、N’-甲基恩卡尼(encainide)、N’-甲基普魯卡因胺、N’-甲基甲氧氯普胺、N’-甲基斯妥乏因(stovaine)、N’-甲基丙氧卡因(propoxycaine)、N’-甲基氯普魯卡因、N’，N’-二甲基氟卡尼(flecainide)和N’-甲基丁卡因?？墒褂门c方案1中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式IV中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R4A和R4B各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR4L、NR4MR4N、NR4OC(O)R4P、S(O)R4Q、SO2R4RR4S、SO2NR4TR4U、SO3R4V、CO2R4W、C(O)R4X和C(O)NR4YR4Z；R4L、R4MR4N、R4O、R4P、R4Q、R4R、R4S、R4T、R4U、R4V、R4W、R4X、R4Y和R4Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；Y4選自-CR4AAR4AB-、-NR4ACC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR4AD-、-CO2-和-OC(S)-；R4AA、R4AB、R4AC和R4AD各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R4C、R4D、R4E和R4F各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；X4選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和NR4JR4KR4J和R4K各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R4G、R4H和R4I各自獨(dú)立地選自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基。式IV中的季氮在本文中識別為N″。示例性的式III化合物包括麻醉藥的甲基化季銨衍生物，例如N”，N”，N”-三甲基普魯卡因、N”，N”，N”-三甲基丙美卡因、N”，N”，N”-三甲基普魯卡因胺、N”，N”，N”-三甲基甲氧氯普胺、N”，N”，N”-三甲基丙氧卡因、N”，N”，N”-三甲基氯普魯卡因、N”，N”-二甲基丁卡因、N”，N”，N”-三甲基苯佐卡因和N”，N”，N”-三甲基氨苯丁酯。可使用與方案1中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式V中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R5A、R5B和R5C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR5M、NR5NR5O、NR5PC(O)R5Q、S(O)R5R、SO2R5SR5T、SO2NR5UR5V、SO3R5W、CO2R5X、C(O)R5Y和C(O)NR5ZR5AA；R5M、R5N、R5O、R5P、R5Q、R5R、R5S、R5T、R5U、R5V、R5W、R5X、R5Y、R5Z和R5AA各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；Y5選自-CR5ABR5AC-、-NR5ADC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR5AE-、-CO2-和-OC(S)-；R5AB、R5AC、R5AD和R5AE各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R5D、R5E、R5F和R5G各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；R5H是H或C1-4烷基；R5J、R5K和R5L各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；或R5J和R5K一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R5J和R5K形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R5L是H或CH3。理想地，R5J和R5K結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。式V中的鳥苷酸化(guanylated)氮在本文識別為N′。示例性的式V化合物包括麻醉藥的N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)，例如，脫乙基-N’-胍基普魯卡因、脫乙基-N’-胍基丙美卡因、脫乙基-N’-胍基阿羅卡因、脫甲基-N’-胍基恩卡尼、脫乙基-N’-胍基普魯卡因胺、脫乙基-N’-胍基甲氧氯普胺、脫甲基-N’-胍基斯妥伐因、脫乙基-N’-胍基丙氧卡因、脫乙基-N’-胍基氯普魯卡因、N’-胍基氟卡尼和脫乙基-N’-胍基丁卡因。可使用與方案2-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物。VI中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R6A和R6B各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR6K、NR6LR6M、NR6NC(O)R6O、S(O)R6P、SO2R6QR6R、SO2NR6SR6T、SO3R6U、CO2R6V、C(O)R6W和C(O)NR6XR6Y；R6K、R6L、R6M、R6N、R6O、R6P、R6Q、R6R、R6S、R6T、R6U、R6V、R6W、R6X和R6Y各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；Y6選自-CR6ZR6AA-、-NR6ABC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR6AC-、-CO2-和-OC(S)-；R6Z、R6AA、R6AB和R6AC各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R6C、R6D、R6E和R6F各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；X6選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和NR6ADR6AE；R6AD和R6AE各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R6G是H或C1-4烷基；R6H、R6I和R6J各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；或R6H和R6I一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R6H和R6I形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R6J是H或CH3。理想地，R6H和R6I結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。式V中的鳥苷酸化氮在本文識別為N″。示例性的式VI化合物包括麻醉藥的N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)，例如，N”-胍基普魯卡因、N”-胍基丙美卡因、N”-胍基普魯卡因胺、N”-胍基甲氧氯普胺、N”-胍基丙氧卡因、N”-胍基氯普魯卡因、N”-胍基丁卡因、N”-胍基苯佐卡因和N”-胍基氨苯丁酯。可使用與方案2-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式III-VI的母體藥物的合成描述在文獻(xiàn)中。參見，例如，美國專利No.812,554(普魯卡因的合成)、Clinton等，J.Am.Chem.Soc.74592(1952)(丙美卡因的合成)、美國專利No.2,689,248(丙氧卡因的合成)、Hadicke等，Pharm.Zentralh.94384(1955)(氯普魯卡因的合成)、美國專利No.1,889,645(丁卡因的合成)、SalkowSki等，Ber.281921(1895)(苯佐卡因的合成)、Brill等，J.Am.Chem.Soc.431322(1921)(氨苯丁酯的合成)、美國專利No.3,931,195(恩卡尼的合成)、Yamazaki等，J.Pharm.Soc.Japan73294(1953)(普魯卡因胺的合成)、美國專利No.3,177,252(甲氧氯普胺的合成)、美國專利No.3,900,481(氟卡尼的合成)和Fourneau等，Bull.Sci.Pharmacol.35273(1928)(斯妥乏因的合成)。式VII中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R7A、R7B和R7C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR7L、NR7MR7N、NR7OC(O)R7P、S(O)R7Q、SO2R7RR7S、SO2NR7TR7U、SO3R7V、CO2R7W、C(O)R7X和C(O)NR7YR7Z；R7L、R7M、R7N、R7O、R7P、R7Q、R7R、R7S、R7T、R7U、R7V、R7W、R7X、R7Y和R7Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；X7選自-CR7AAR7AB-、-NR7ACC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR7AD-、-CO2-和-OC(S)-；R7AA、R7AB、R7AC和R7AD各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R7D、R7E、R7F和R7G各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；R7H、R7J和R7K各自獨(dú)立地選自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基。優(yōu)選實(shí)施方式中，X7是-C(O)NH-。示例性的式VII化合物包括麻醉藥的甲基化季銨衍生物，例如N′-甲基辛可卡因(dibucaine)。可使用與方案1中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式VIII中，n＝0-3，m＝0-3，且(n+m)＝0-6；R8A、R8B和R8C各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、OR8L、NR8MR8N、NR8OC(O)R8P、S(O)R8Q、SO2R8RR8S、SO2NR8TR8U、SO3R8V、CO2R8W、C(O)R8X和C(O)NR8YR8Z；R8L、R8M、R8N、R8O、R8P、R8Q、R8R、R8S、R8T、R8U、R8V、R8W、R8X、R8Y和R8Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；X8選自-CR8AAR8AB-、-NR8ACC(O)-、-OC(O)-、-SC(O)-、-C(O)NR8AD-、-CO2-和-OC(S)-；R8AA、R8AB、R8AC和R8AD各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；R8D、R8E、R8F和R8G各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-4雜烷基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基和C3-10烷雜環(huán)基；R8H是H或C1-4烷基；R8I、R8J和R8K各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；或R8I和R8J一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R8I和R8J形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R8K是H或CH3。理想地，R8I和R8J結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。式V中的鳥苷酸化氮在本文識別為N′。優(yōu)選實(shí)施方式中，X8是-C(O)NH-。示例性的式VIII化合物包括麻醉藥的N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)，例如脫乙基-N-胍基辛可卡因。可使用與方案2-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式IX中，n＝0-6；R9A、R9B、R9C、R9D和R9E各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、OR9I、NR9JR9K、NR9LC(O)R9M、S(O)R9N、SO2R9OR9P、SO2NR9QR9R、SO3R9S、CO2R9T、C(O)R9U和C(O)NR9VR9W；R9I、R9J、R9K、R9L、R9M、R9N、R9O、R9P、R9Q、R9R、R9S、R9T、R9U、R9V和R9W各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；X9選自-CR9XR9Y-、-O-、-S-和-NR9Z-；R9X、R9Y和R9Z各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基；Y9是NR9AANR9ABNR9AC或NR9ADZ9；R9AA、R9AB和R9AC各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基；R9AD是H或C1-4烷基；Z9是R9F、R9G和R9H各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基；或R9F和R9G一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R9F和R9G形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R9H是H或CH3。理想地，R9F和R9G結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選實(shí)施方式中，X9＝-O-。示例性的式IX化合物包括N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)(例如N-胍基氟西汀)以及甲基化季銨衍生物(例如N，N-二甲基氟西汀)?？墒褂门c方案1-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物。式X中，W3是O、NH、NCH2R10J、NC(O)CH2R10J、CHCH2R10J、C＝CHR10J或C＝CHR10K；W1-W2是S、O、OCHR10K、SCHR10K、N＝CR10K、CHR10L-CHR10K或CR10L＝CR10K；R10A、R10B、R10C、R10D、R10E、R10F、R10G、和R10H各自獨(dú)立地選自H、OH、鹵素、C1-4烷基和C2-4雜烷基；R10J是CH2CH2X10A或CH(CH3)CH2X10A；R10L是H或OH；R10K是H、OH或基團(tuán)X10A是NR10MR10NR10P或NR10QX10C；X10B是NR10RR10S或NX10C；R10M、R10N、R10P、R10R和R10S各自獨(dú)立地選自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C2-4雜烷基，或R10R和R10S一起形成具有至少一個(gè)氮原子的雜環(huán)；R10Q是H或C1-4烷基；X10C是R10T、R10U和R10V各自獨(dú)立地選自H、C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基，或R10T和R10V一起形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)。當(dāng)R10T和R10V形成具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)時(shí)，所得的胍基理想地選自其中R10U是H或CH3。理想地，R10T和R10V結(jié)合形成2-4個(gè)碳原子的亞烷基或亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。示例性的式X化合物包括N-胍基衍生物(例如-C(NH)NH2衍生物)和甲基化季銨衍生物。式X的N-胍基衍生物包括但不限于N-胍基阿莫沙平、脫甲基-N-胍基曲米帕明、脫甲基-N-胍基度硫平、脫甲基-N-胍基多塞平(doxepin)、脫甲基-N-胍基阿米替林、N-胍基普羅替林、N-胍基地昔帕明、脫甲基-N-胍基氯米帕明、脫甲基-N-胍基氯氮平、脫甲基-N-胍基洛沙平、N-胍基去甲替林、脫甲基-N-胍基環(huán)苯扎林、脫甲基-N-胍基賽庚啶、脫甲基-N-胍基奧洛他定(olopatadine)、脫甲基-N-胍基異丙嗪、脫甲基-N-胍基阿利馬嗪(trimeprazine)、脫甲基-N-胍基氯普噻噸、脫甲基-N-胍基氯丙嗪、脫甲基-N-胍基丙酰馬嗪、脫甲基-N-胍基丙氯拉嗪(prochlorperazine)、脫甲基-N-胍基硫乙拉嗪(thiethylperazine)、脫甲基-N-胍基三氟拉嗪、脫乙基-N-胍基乙胺噻嗪(ethacizine)和脫甲基-N-胍基丙米嗪。式X的甲基化季銨衍生物包括但不限于N，N-二甲基阿莫沙平、N-甲基曲米帕明、N-甲基度硫平、N-甲基多塞平、N-甲基阿米替林、N，N-二甲基普羅替林、N，N-二甲基地昔帕明、N-甲基氯米帕明、N-甲基氯氮平、N-甲基洛沙平、N，N-二甲基去甲替林、N-甲基環(huán)苯扎林、N-甲基賽庚啶、N-甲基奧洛他定、N-甲基異丙嗪、N-甲基阿利馬嗪、N-甲基氯普噻噸、N-甲基氯丙嗪、N-甲基丙酰馬嗪、N-甲基莫雷西嗪(moricizine)、N-甲基丙氯拉嗪、N-甲基硫乙拉嗪、N-甲基氟奮乃靜(fluphenazine)、N-甲基奮乃靜(perphenazine)、N-甲基氟哌噻噸(flupenthixol)、N-甲基乙酰奮乃靜(acetophenazine)、N-甲基三氟拉嗪、N-甲基乙胺噻嗪和N-甲基丙米嗪?？墒褂门c方案1-5中所述方法類似的方法制備這些衍生物?？珊锌扇绫疚乃霰圾B苷酸化或季銨化的胺氮的其它離子通道阻斷劑包括但不限于奧芬那君、安妥根(phenbenzamine)、芐普地爾、匹莫齊特、五氟利多、氟桂利嗪、氟司必林、丙哌維林、丙吡胺、美沙酮、托特羅定、tridihexethyl鹽、曲吡那敏(tripelennamine)、美吡拉敏、溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、卡比沙明、左醋美沙朵(levomethadylacetate)、戈洛帕米、維拉帕米、地伐帕米、噻帕米、依莫帕米、達(dá)克羅寧、普莫卡因(pramoxine)、拉莫三嗪、米貝拉地爾、加巴噴丁、阿米洛利(amiloride)、地爾硫(diltiazem)、硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、可卡因、美西律、普羅帕酮、奎尼丁、奧昔卡因、阿替卡因、利魯唑、芐環(huán)烷、利法利嗪和士的寧。其它離子通道阻斷劑可經(jīng)修飾，以并入適于季銨化或鳥苷酸化的氮原子。這些離子通道阻斷劑包括但不限于磷苯妥英、乙苯妥英(ethotoin)、苯妥英、卡馬西平、奧卡西平、托吡酯(topiramate)、唑尼沙胺和丙戊酸的鹽。合成電荷修飾(charge-modified)的離子通道阻斷劑的合成可涉及對母體離子通道阻斷劑的醇、胺、酮、巰基或羧基官能團(tuán)、接頭(linker)、巨大的基團(tuán)(bulkygroup)和/或帶電基團(tuán)進(jìn)行選擇性保護(hù)和脫保護(hù)。例如，用于胺的常用保護(hù)基包括氨基甲酸酯(carbamates)，例如叔丁基、芐基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、9-芴基甲基、烯丙基和間硝基苯基。用于胺的其它常用保護(hù)基包括酰胺，例如甲酰胺、乙酰胺、三氟乙酰胺、磺酰胺、三氟甲磺酰胺(trifluoromethanesulfonylamides)、三甲基甲硅烷基乙磺酰胺(trimethylsilylethanesulfonamides)和叔丁基磺酰胺。用于羧基的常用保護(hù)基的例子包括酯，例如甲基、乙基、叔丁基、9-芴基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、芐基、二苯基甲基、O-硝基芐基、原酸酯(ortho-esters)以及鹵代酯(halo-esters)。用于醇類的常用保護(hù)基的例子包括醚，例如，甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、四氫吡喃基、乙氧基乙基、芐基、2-萘基(napthyl)甲基、O-硝基芐基、P-硝基芐基、P-甲氧基芐基、9-苯基呫噸基、三苯甲基(包括甲氧基-三苯甲基)和甲硅烷基醚。用于巰基的常用保護(hù)基的例子包括很多用于羥基的相同保護(hù)基。此外，巰基可以其還原形式(例如，作為二硫化物)或氧化形式(例如，作為磺酸、磺酸酯或磺酰胺)被保護(hù)。可選擇保護(hù)基從而實(shí)現(xiàn)脫除分子中的每一種保護(hù)基而不去除其他保護(hù)基所需要的選擇性條件(例如酸性條件、堿性條件、通過親核試劑催化、通過路易斯酸催化、或氫化)。向胺、醇、巰基和羧基官能團(tuán)上添加保護(hù)基所需要的條件以及脫除這些保護(hù)基所需要的條件詳細(xì)提供于T.W.Green和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(第2版)，JohnWiley&Sons，1991以及P.J.Kocienski，ProtectingGroups，GeorgThiemeVerlag，1994中。可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)來制備電荷修飾的離子通道阻斷劑。例如可使用以下文獻(xiàn)中描述的技術(shù)通過使母體離子通道阻斷劑烷基化來產(chǎn)生修飾J.March，AdvancedOrganicChemistryReactions，MechanismsandStructure，JohnWiley&Sons，Inc.，1992，617頁?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)的合成規(guī)程來實(shí)現(xiàn)氨基向胍基的轉(zhuǎn)化。例如，Mosher描述了通過氨基亞氨基甲磺酸(aminoiminomethanesulfonicacid)和胺的反應(yīng)制備單取代胍的一般方法(Kim等，TetrahedronLett.293183(1988))。Bernatowicz開發(fā)了一種使伯胺和仲胺鳥苷酸化的更方便的方法，其中使用1H-吡唑-1-甲脒(carboxamidine)鹽酸鹽、1-H-吡唑-1-(N，N′-雙(叔丁氧羰基))甲脒、或1-H-吡唑-1-(N，N′-雙(芐氧基羰基))甲脒。這些試劑與胺反應(yīng)產(chǎn)生單取代胍(參見Bernatowicz等，J.Org.Chem.572497(1992)；Bernatowicz等，TetrahedronLett.343389(1993))。此外，已顯示硫脲和S-烷基-異硫脲在取代胍的合成中是有用的中間體(Poss等，TetrahedronLett.335933(1992))。某些實(shí)施方式中，胍是具有兩個(gè)氮原子的雜環(huán)的一部分(參見例如以下結(jié)構(gòu))。環(huán)系統(tǒng)可包括亞烷基或2-4個(gè)碳原子的亞烯基，例如5、6和7-元環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。例如可通過Schlama等，J.Org.Chem.，624200(1997)公開的方法制備此類環(huán)系統(tǒng)?？赏ㄟ^母體化合物中胺氮的烷基化來制備電荷修飾的離子通道阻斷劑，如方案1所示。方案1或者，可通過引入胍基來制備電荷修飾的離子通道阻斷劑。母體化合物可與氰胺(cynamide)(例如甲基氰胺)反應(yīng)(如方案2所示)或與吡唑-1-甲脒衍生物反應(yīng)(如方案3所示，其中Z是H或合適的保護(hù)基)?；蛘?，母體化合物可與溴化氰反應(yīng)，然后與甲基氯化鋁胺(methylchloroaluminumamide)反應(yīng)(如方案4所示)。也可用諸如2-(甲硫基)-2-咪唑啉的試劑制備合適官能化的衍生物(方案5)。方案2方案3方案4方案5可如方案1-5所示修飾含有胺氮原子的任何離子通道阻斷劑。TRPV1激動劑可用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒中的TRPV1激動劑包括但不限于激活傷害感受器上的TRPV1受體并允許至少一種電壓門控性離子通道抑制劑進(jìn)入的任何物質(zhì)。合適的TRPV1激動劑包括但不限于辣椒素、丁香酚、arvanil(N-花生四烯酰香草胺)、花生四烯乙醇胺、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2APB)、AM404、樹脂毒素、佛波醇12-苯基乙酸酯13-乙酸酯20-高香草酸酯(PPAHV)、奧伐尼(NE19550)、OLDA(N-油酰多巴胺)、N-花生四烯酸基多巴胺(NADA)、6′-碘代樹脂毒素(6′-IRTX)、C18N-?；掖及贰⒅鹾厦秆苌锢?2-氫過氧化廿碳四烯酸、抑制劑半胱氨酸結(jié)(ICK)肽(香草毒素)、胡椒堿、MSK195(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基)丙基]-2-[4-(2-氨基乙氧基)-3-甲氧苯基]乙酰胺)、JYL79(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基)丙基]-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-姜烯酚、油烯基姜辣素、油烯基姜烯酚和SU200(N-(4-叔丁基芐基)-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)。TRP1A激動劑可用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒中的TRP1A激動劑包括激活傷害感受器或瘙癢感受器上的TRP1A受體并允許至少一種電壓門控性離子通道抑制劑進(jìn)入的任何物質(zhì)。合適的TRP1A激動劑包括但不限于肉桂醛、異硫氰酸烯丙酯、二硫化二烯丙基、icilin、肉桂油、冬青油、丁香油、丙烯醛、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、4-羥基壬烯醛、對羧基苯甲酸甲酯、芥子油和3′-氨基甲酰聯(lián)苯-3-基環(huán)己基氨基甲酸酯(URB597)。P2X激動劑可用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒中的P2X激動劑包括激活傷害感受器或瘙癢感受器上的P2X受體并允許至少一種電壓門控性離子通道抑制劑進(jìn)入的任何物質(zhì)。合適的P2X激動劑包括但不限于2-甲硫基-ATP、2′和3′-O-(4-苯甲酰基苯甲?；?-ATP以及ATP5′-O-(3-硫代三磷酸鹽)。TRPM8激動劑可用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒中的TRPM8激動劑包括激活傷害感受器或瘙癢感受器上的TRPM8受體并允許至少一種電壓門控性離子通道抑制劑進(jìn)入的任何物質(zhì)。合適的TRPM8激動劑包括但不限于薄荷醇、icilin、桉樹腦、芳樟醇、香葉醇和羥基香茅醛。另外的藥劑本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒可用于治療疼痛(例如，神經(jīng)源性疼痛、傷害感受性疼痛、特發(fā)性疼痛、炎性疼痛、功能障礙性疼痛、偏頭痛或操作性疼痛)和癢感(例如，皮膚病癥例如特應(yīng)性濕疹或牛皮癬、寄生蟲和真菌感染中的瘙癢、藥物引發(fā)的癢感、過敏性癢感、代謝性癢感、癌癥或肝臟和腎衰竭中的癢感)。如果需要，在本文所述的方法、組合物和試劑盒中，通常用于治療疼痛的一種或多種其他藥劑可與本發(fā)明聯(lián)用。此類藥劑包括但不限于NSAIDs、阿片樣物質(zhì)、三環(huán)類抗憂郁藥、胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑、抗驚厥藥。如果需要，在本文所述的方法、組合物和試劑盒中，通常用于治療癢感的一種或多種其他藥劑可與本發(fā)明聯(lián)用。此類藥劑包括局部用或口服的類固醇和抗組胺藥。組合物制劑可通過導(dǎo)致目標(biāo)區(qū)域的痛覺降低的任何合適方法給予本發(fā)明的組合。電壓門控性離子通道的抑制劑(一種或多種)和TRPV1/TRPA1/P2X/TRPM8受體激動劑(一種或多種)可以任何合適的量含于任何合適的載體物質(zhì)中，其總存在量通常是組合物總重量的1-95重量％?？赏ㄟ^適于以下方式的劑型提供本發(fā)明組合物口服給藥、胃腸外給藥(例如靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥)、直腸給藥、皮膚給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸給藥。因此，所述組合物可以是例如以下形式片劑、膠囊、丸劑、散劑、顆粒、混懸劑、乳液、溶液、凝膠(包括水凝膠)、糊劑、軟膏劑、霜劑、膏藥、獸用頓服藥(drenches)、滲透遞送裝置、栓劑、灌腸劑、注射劑、植入物、噴霧劑或氣溶膠?？筛鶕?jù)常規(guī)藥學(xué)實(shí)踐來配制所述組合物(參見，例如RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy，第20版，2000，A.R.Gennaro編，LippincottWilliams&Wilkins，Philadelphia，以及EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology，J.Swarbrick和J.C.Boylan編，1988-1999，MarcelDekker，紐約)。可用本領(lǐng)域已知的各種方式配制所述組合中的各化合物。例如，所述第一藥劑和第二藥劑可配制在一起或單獨(dú)配制。理想地，所述第一藥劑和第二藥劑配制在一起用于同時(shí)給予或近乎同時(shí)給予這些藥劑。可將分別或單獨(dú)配制的藥劑包裝在一起作為試劑盒。非限制性例子包括但不限于容納例如兩種丸劑、丸劑和散劑、栓劑和小瓶中的液體、兩種局部用霜劑等的試劑盒。試劑盒可包含有助于將單位劑量給予患者的任選組分，例如用于重建粉末形式的小瓶、用于注射的注射器、定制的IV遞送系統(tǒng)、吸入器等等。另外，單位劑量試劑盒可容納關(guān)于所述組合物的制備和給藥的說明書。試劑盒可制造為針對一個(gè)患者的單次使用的單位劑量；針對具體患者的多次使用劑量(恒定劑量，或其中各化合物的效力隨著治療的進(jìn)展而變化)；或試劑盒可容納適于多個(gè)患者給藥的多劑量(大包裝(“bulkpackaging”))。試劑盒組分可組裝在紙盒(cartons)、泡罩包裝(blisterpacks)、瓶、管等等中。用于口服使用的固體劑型用于口服使用的制劑包括片劑，其含有與無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑可以是例如，惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖和山梨糖醇)、潤滑劑、助流劑和抗粘著劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化硅、氫化植物油或滑石)。兩種或更多種化合物可以在片劑、膠囊或其它載體中混合在一起，或可以是分開的。一個(gè)實(shí)例中，第一化合物含在片劑內(nèi)側(cè)上，第二化合物在片劑外側(cè)上，從而在第一化合物釋放之前釋放大部分的第二化合物?？诜褂玫闹苿┻€可作為咀嚼片，或作為硬明膠膠囊(其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合)，或作為軟明膠膠囊(其中活性成分與水或油介質(zhì)混合)提供。通常，給予人時(shí)，本發(fā)明組合中的任何化合物的口服劑量將取決于該化合物的性質(zhì)，并可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。通常，此類劑量一般是約0.001mg-2000mg/天，理想地約1mg-1000mg/天，更理想地是約5mg-500mg/天。多達(dá)200mg/天的劑量可能是必要的。給予激活TRPV1/TRPA1/P2X/TRPM8受體所需的最小治療劑量可能是有用的，可用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)確定該劑量。本發(fā)明組合中各藥物的給藥可獨(dú)立地是每天1次至4次，持續(xù)1天-1年，甚至可持續(xù)患者終生。很多情況下將需要不斷地(chronic)、長期給藥。局部制劑也可用含有0.0001％-25％(w/w)或更多的活性成分的局部用載體使組合物適合于局部使用。優(yōu)選組合中，活性成分優(yōu)選各自為0.0001％-10％(w/w)，更優(yōu)選是0.0005％-4％(w/w)活性劑。霜劑可每天施用1-4次，或根據(jù)需要施用。例如，對于適合局部施用的潑尼松龍，局部載體將含有0.01％-5％(w/w)，優(yōu)選0.01％-2％(w/w)，更優(yōu)選0.01％-1％(w/w)。實(shí)施本文所述的方法時(shí)，優(yōu)選將含有本發(fā)明組合的載體施用于對象的不適部位。例如，可將霜劑施用于對象的手指罹患關(guān)節(jié)炎的手上。偶聯(lián)物(conjugates)如果需要，本文所述的任何組合中所用的藥物可彼此共價(jià)連接以形成式(XI)的偶聯(lián)物。(A)-(L)-(B)(XI)式(XI)中，(A)是化合物，其激活存在于傷害感受器和/或瘙癢感受器上的通道形成(channel-forming)受體；(L)是接頭；和(B)是化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，且其在所述受體被激活時(shí)能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。本發(fā)明的偶聯(lián)物可以是前藥，該偶聯(lián)物例如被細(xì)胞內(nèi)酶和細(xì)胞外酶(例如，酰胺酶、酯酶和磷酸酶)裂解時(shí)，釋放藥物(A)和藥物(B)。還可將本發(fā)明的偶聯(lián)物設(shè)計(jì)，使其在體內(nèi)很大程度上保持完整，抵抗細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外酶的裂解作用，只要當(dāng)通道形成受體被激活時(shí)該偶聯(lián)物能夠通過這些受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器?？赏ㄟ^設(shè)計(jì)接頭(L)和在偶聯(lián)物合成期間與化合物(A)和化合物(B)形成的共價(jià)鍵來控制偶聯(lián)物的體內(nèi)降解?？捎帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)制備所述偶聯(lián)物?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的技術(shù)制備偶聯(lián)物。例如，可使用G.Hermanson，BioconjugateTechniques，AcademicPress，Inc.，1996中公開的方法制備所述偶聯(lián)物。偶聯(lián)物的合成可涉及藥物(A)、接頭和/或藥物(B)的醇、胺、酮、巰基或羧基官能團(tuán)的選擇性保護(hù)和脫保護(hù)。例如，用于胺的常用保護(hù)基包括氨基甲酸酯，例如叔丁基、芐基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、9-芴基甲基、烯丙基和間硝基苯基。用于胺的其他常用保護(hù)基包括酰胺，例如甲酰胺、乙酰胺、三氟乙酰胺、磺酰胺、三氟甲磺酰胺、三甲基甲硅烷基乙磺酰胺和叔丁基磺酰胺。用于羧基的常用保護(hù)基的例子包括酯，例如甲基、乙基、叔丁基、9-芴基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、芐基、二苯基甲基、O-硝基芐基、原酸酯以及鹵代酯。用于醇類的常用保護(hù)基的例子包括醚，例如甲基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、四氫吡喃基、乙氧基乙基、芐基、2-萘基甲基、O-硝基芐基、P-硝基芐基、P-甲氧基芐基、9-苯基呫噸基、三苯甲基(包括甲氧基-三苯甲基)和甲硅烷基醚。用于巰基的常用保護(hù)基的例子包括很多用于保護(hù)羥基的相同的保護(hù)基。此外，巰基可以其還原形式(例如，作為二硫化物)或氧化形式(例如，作為磺酸、磺酸酯或磺酰胺)被保護(hù)?？蛇x擇保護(hù)基從而實(shí)現(xiàn)脫除分子中的每一種保護(hù)基而不去除其他保護(hù)基所需要的選擇性條件(例如酸性條件、堿性條件、通過親核試劑催化、通過路易斯酸催化、或氫化)。向胺、醇、巰基和羧基官能團(tuán)上添加保護(hù)基所需要的條件以及脫除這些保護(hù)基所需要的條件詳細(xì)提供于T.W.Green和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(第2版)，JohnWiley&Sons，1991以及P.J.Kocienski，ProtectingGroups，GeorgThiemeVerlag，1994中。以下提供另外的合成細(xì)節(jié)。接頭最簡單形式的本發(fā)明的接頭成分是化合物(A)和化合物(B)之間的鍵，但接頭通常提供線形、環(huán)狀或分支的分子骨架，該骨架具有側(cè)基(pendantgroups)，將化合物(A)共價(jià)連接于化合物(B)。因此，通過共價(jià)方式(包括與位于化合物(A)和化合物(B)上的一種或多種官能團(tuán)形成鍵)來實(shí)現(xiàn)將化合物(A)連接于化合物(B)?？捎糜谠撃康牡幕瘜W(xué)反應(yīng)性官能團(tuán)的例子包括但不限于氨基、羥基、巰基、羧基、羰基、烴基(carbohydrategroups)、鄰二醇(vicinaldiols)、硫醚、2-氨基醇、2-氨基硫醇、胍基、咪唑基和酚基?？捎媒宇^實(shí)現(xiàn)化合物(A)和化合物(B)的共價(jià)連接，所述接頭含有能夠與化合物(A)和化合物(B)中存在的這些官能團(tuán)反應(yīng)的反應(yīng)性部分。例如，化合物(A)的胺基可與接頭的羧基或其活化衍生物反應(yīng)，生成連接該兩者的酰胺。能夠與巰基反應(yīng)的部分的例子包括XCH2CO-型(其中X是Br、Cl或I)的α-鹵代乙酰基化合物，其對巰基顯示出特別的反應(yīng)性，但也可用于修飾咪唑基、硫醚、酚和氨基，如Gurd，MethodsEnzymol，11532(1967)所述。N-馬來酰亞胺衍生物也被認(rèn)為對巰基有選擇性，但還可另外用于在在一定條件下與氨基偶聯(lián)。例如2-亞氨基硫烷(iminothiolane)(Traut等，Biochemistry123266(1973))的試劑，通過氨基的轉(zhuǎn)化而引入硫醇基，如果通過形成二硫橋而發(fā)生連接，則其可被認(rèn)為是巰基試劑(sulfhydrylreagent)。能夠與氨基反應(yīng)的反應(yīng)性部分的例子包括例如烷化劑和?；瘎４硇缘耐榛瘎┌?i)α-鹵代乙?；衔?，其在不存在反應(yīng)性硫醇基的情況下顯示出對氨基的特異性，其為XCH2CO-型(其中X是Cl、Br或I)，例如WongBiochemistry245337(1979)所述；(ii)N-馬來酰亞胺衍生物，其可通過邁克爾型反應(yīng)或通過加成到環(huán)羰基的酰化作用(acylationbyadditiontotheringcarbonylgroup)與氨基反應(yīng)，例如Smyth等J.Am.Chem.Soc.824600(1960)和Biochem.J.91589(1964)所述；(iii)芳基鹵，例如反應(yīng)性硝基鹵代芳族化合物；(iv)烷基鹵，例如McKenzie等，J.ProteinChem.7581(1988)所述；(v)能夠與氨基形成希夫堿的醛和酮，所形成的加合物通常通過還原以得到穩(wěn)定的胺而穩(wěn)定。(vi)環(huán)氧化物衍生物，例如環(huán)氧氯丙烷和bisoxiranes，其可與氨基、巰基或酚羥基反應(yīng)；(vii)s-三嗪的含氯衍生物，其對親核體例如氨基、巰基和羥基有很大反應(yīng)性；(viii)基于以上詳述的s-三嗪化合物的氮丙啶(aziridines)，例如如Ross，J.Adv.CancerRes.21(1954)所述，其可通過開環(huán)與親核體(例如氨基)反應(yīng)；(ix)方形酸(squaricacid)二乙酯，如Tietze，Chem.Ber.1241215(1991)所述；和(x)α-鹵代烷基酯，由于醚氧原子導(dǎo)致的活化，它們是比通常的烷基鹵反應(yīng)性更大的烷化劑，如Benneche等，Eur.J.Med.Chem.28463(1993)所述。代表性的氨基反應(yīng)性?；瘎┌?i)異氰酸酯和異硫氰酸酯，特別是芳族衍生物，其分別形成穩(wěn)定的脲和硫脲衍生物；(ii)磺酰氯，已由Herzig等Biopolymers2349(1964)記載；(iii)?；u；(iv)活性酯，例如硝基苯基酯或N-羥基琥珀酰亞胺基酯；(v)酸酐，例如混合的、對稱的(symmetrical)或N-羧酸酐(carboxyanhydrides)；(vi)用于形成酰胺鍵的其他有用試劑，例如M.Bodansky，PrinciplesofPeptideSynthesis，Springer-Verlag，1984所述；(vii)酰疊氮(acylazides)，例如，其中從使用亞硝酸鈉預(yù)先形成的酰肼衍生物產(chǎn)生疊氮基，如Wetz等，Anal.Biochem.58347(1974)所述；和(viii)亞氨酸酯(imidoesters)，與氨基反應(yīng)形成穩(wěn)定的脒，例如Hunter和Ludwig，J.Am.Chem.Soc.843491(1962)所述。醛和酮可與胺反應(yīng)形成希夫堿，可通過還原性胺化來有利地使其穩(wěn)定。烷氧基氨基部分容易與酮和醛反應(yīng)產(chǎn)生穩(wěn)定的烷氧基胺，例如，Webb等，BioconjugateChem.196(1990)所述。能夠與羧基反應(yīng)的反應(yīng)性部分的例子包括重氮化合物，例如重氮基乙酸酯和重氮基乙酰胺，其高度專一性反應(yīng)產(chǎn)生酯基，例如Herriot，Adv.ProteinChem.3169(1947)所述。還可使用羧基修飾試劑(例如碳二亞胺)，其通過形成O-?；迦缓笮纬甚０锋I來進(jìn)行反應(yīng)。應(yīng)理解，如果需要，化合物(A)和/或化合物(B)中的官能團(tuán)可在反應(yīng)前轉(zhuǎn)化為其他官能團(tuán)，以例如賦予其另外的反應(yīng)性或選擇性。用于該目的的方法的例子包括使用諸如二羧基酸酐的試劑將胺轉(zhuǎn)化為羧基；使用諸如N-乙?；甙腚装彼崃虼鷥?nèi)酯(N-acetylhomocysteinethiolactone)、S-乙?；鶐€基琥珀酸酐(acetylmercaptosuccinicanhydride)、2-亞胺基硫烷(imino-thiolane)或含有硫醇的琥珀酰亞胺基衍生物的試劑將胺轉(zhuǎn)化為硫醇；使用諸如α-鹵代乙酸酯的試劑將硫醇轉(zhuǎn)化為羧基；使用諸如氮丙啶或2-溴乙胺的試劑將硫醇轉(zhuǎn)化為胺；使用試劑例如碳二亞胺然后用二胺將羧基轉(zhuǎn)化為胺；使用例如甲苯磺酰氯的試劑，然后用硫代乙酸酯進(jìn)行酯交換并用乙酸鈉水解為硫醇來將醇轉(zhuǎn)化為硫醇。如果需要，可根據(jù)本發(fā)明使用所謂的零長度接頭，所述接頭涉及將化合物(A)的反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)與化合物(B)的反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)直接共價(jià)連接而不引入另外的連接材料。然而，最普遍地，所述接頭將包括通過間隔基元素(spacerelement)連接的兩個(gè)或更多個(gè)反應(yīng)性部分(如上所述)。此類間隔基(spacer)的存在允許雙官能接頭與化合物(A)和化合物(B)中的特定官能團(tuán)反應(yīng)，導(dǎo)致在兩者之間形成共價(jià)鍵。接頭中的反應(yīng)性部分可相同(同基雙功能接頭)或不同(異基雙功能接頭，或其中存在幾種不相似的(dissimilar)反應(yīng)性部分，即異基多功能接頭)，提供多種可能的試劑，所述試劑可在化合物(A)和化合物(B)之間形成共價(jià)連接。接頭中的間隔基元素通常由直鏈或支鏈組成，可包括C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-10雜烷基。某些情況下，接頭由式(XII)表示G1-(Z1)o-(Y1)u-(Z2)s-(R30)-(Z3)t-(Y2)v-(Z4)p-G2(XII)式(XII)中，G1是化合物(A)和接頭之間的鍵；G2是接頭和化合物(B)之間的鍵；Z1、Z2、Z3和Z4各自獨(dú)立地選自O(shè)、S和NR31；R31是氫、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-7雜烷基；Y1和Y2各自獨(dú)立地選自羰基、硫代羰基、磺?；蛄柞；籵、p、s、t、u和v各自獨(dú)立地選自0或1；R30是C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C2-6雜環(huán)基、C6-12芳基、C7-14烷芳基、C3-10烷雜環(huán)基或C1-10雜烷基、或連接G1-(Z1)o-(Y1)u-(Z2)s-與-(Z3)t-(Y2)v-(Z4)p-G2的化學(xué)鍵。有用于制備本發(fā)明偶聯(lián)物的同基雙功能接頭的例子包括但不限于二胺和二醇，它們選自乙二胺、丙二胺和己二胺，乙二醇、二甘醇、丙二醇、1，4-丁二醇、1，6-己二醇、環(huán)己二醇和聚己內(nèi)酯二醇。示例性應(yīng)用本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒可用于治療與多種病癥中的任一種相關(guān)的疼痛，包括背部和頸部疼痛、癌癥疼痛、婦科疼痛和分娩疼痛、纖維肌痛、關(guān)節(jié)炎及其他風(fēng)濕病疼痛、矯形疼痛、皰疹后神經(jīng)痛及其他神經(jīng)源性疼痛、鐮狀細(xì)胞危象(sicklecellcrises)、間質(zhì)性膀胱炎、尿道炎及其他泌尿疼痛、牙痛、頭痛、手術(shù)后疼痛和操作性疼痛(即，與注射、囊腫導(dǎo)液(draininganabcess)、手術(shù)、牙科操作、眼科操作、關(guān)節(jié)鏡檢查和使用其他醫(yī)療儀器、美容手術(shù)操作、皮膚學(xué)操作、骨折固定(settingfractures)、活檢等有關(guān)的疼痛)。因?yàn)橐粋€(gè)亞類的傷害感受器介導(dǎo)癢感，本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒還可用來治療患者的癢感，所述患者患有例如以下的病癥皮炎、感染、寄生蟲、蟲咬、懷孕、代謝失調(diào)、肝臟或腎衰竭、藥物反應(yīng)、過敏性反應(yīng)、濕疹和癌癥。疼痛與功能指標(biāo)為了檢測本發(fā)明方法、組合物或試劑盒中任何一種的效力，可使用檢測指標(biāo)。用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒并用來檢測與肌肉骨骼性(musculoskeletal)、免疫炎性和神經(jīng)源性紊亂相關(guān)的疼痛的指標(biāo)包括視覺模擬評分(visualanalogscale)(VAS)、Likert評分、分類(categorical)疼痛評分、描述信息(descriptors)、Lequesne指數(shù)、WOMAC指數(shù)和AUSCAN指數(shù)，這些指標(biāo)均是本領(lǐng)域公知的。這些指標(biāo)可用于檢測疼痛、癢感、功能、僵硬或其它變量。視覺模擬評分(VAS)提供一維數(shù)量的檢測。VAS通常利用距離表示，例如，一副圖，畫有線，線上有規(guī)律間隔(例如10個(gè)1cm間隔)的散列符號。例如，可要求患者通過選擇線上與其疼痛或癢的感覺最相應(yīng)的點(diǎn)來對其疼痛或癢感分級，其中線的一端對應(yīng)于“無疼痛”(評分為0cm)或“無癢感”，線的另一端對應(yīng)于“不能忍受的疼痛”或“不能忍受的癢感”(評分為10cm)。該程序?yàn)楂@得關(guān)于患者如何經(jīng)歷疼痛或癢感的定量信息提供了一種簡單而快速的方法。VAS評分及其應(yīng)用描述于例如美國專利6,709,406和6,432,937中。類似地，Likert評分提供一維數(shù)量的檢測。通常，Likert評分具有從低值(例如，0，表示沒有疼痛)到高值(例如，7，表示極端疼痛)的離散整數(shù)值。要求正經(jīng)歷疼痛的患者選擇低值和高值之間的數(shù)值以代表所經(jīng)歷的疼痛程度。Likert評分及其應(yīng)用描述于例如美國專利6,623,040和6,766,319中。Lequesne指數(shù)和WesternOntario以及McMasterUniversities(WOMAC)骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)利用自制的(self-administered)問卷來評價(jià)OA患者的膝蓋和臀部的疼痛、功能和僵硬。WOMAC中涵蓋了膝蓋和臀部，而一種Lequesne問卷關(guān)于膝蓋，另一種單獨(dú)的Lequesne問卷關(guān)于臀部。因?yàn)檫@些問卷與VAS或Likert相比包括了更多的信息量，所以這些問卷是有用的。WOMAC指數(shù)和Lequesne指數(shù)問卷兩者均已在OA包括手術(shù)處理(settings)(例如膝蓋和臀部關(guān)節(jié)成形術(shù))中得到了廣泛驗(yàn)證。它們的度量特征沒有顯著差別。AUSCAN(澳大利亞人-加拿大人手關(guān)節(jié)炎)指數(shù)使用有效的、可靠的和響應(yīng)的(responsive)患者自我報(bào)告問卷。一種情況中，該問卷包括三維空間中的15個(gè)問題(疼痛，5個(gè)問題；僵硬，1個(gè)問題；和軀體功能，9個(gè)問題)。AUSCAN指數(shù)可利用例如Likert或VAS評分。有用于本發(fā)明方法、組合物和試劑盒并用來檢測疼痛的指標(biāo)包括疼痛描述信息評分(PainDescriptorScale)(PDS)、視覺模擬評分(VAS)、口頭描述信息評分(VerbalDescriptorScales)(VDS)、數(shù)字疼痛強(qiáng)度評分(NumericPainIntensityScale)(NPIS)、神經(jīng)源性疼痛評分(NeuropathicPainScale)(NPS)、神經(jīng)源性疼痛癥狀測驗(yàn)表(NeuropathicPainSymptomInventory)(NPSI)、當(dāng)前疼痛測驗(yàn)表(PresentPainInventory)(PPI)、老人病學(xué)疼痛檢測(GeriatricPainMeasure)(GPM)、McGill疼痛問卷(McGillPainQuestionnaire)(MPQ)、平均疼痛強(qiáng)度(描述信息差異評分(DescriptorDifferentialScale))、數(shù)字疼痛評分(NPS)總體評價(jià)評分(globalevaluationscore)(GES)、簡短的McGill疼痛問卷(Short-FormMcGillPainQuestionnaire)、明尼蘇達(dá)多元個(gè)性測驗(yàn)表(MinnesotaMultiphasicPersonalityInventory)、疼痛特征譜和多維疼痛測驗(yàn)表(PainProfileandMultidimensionalPainInventory)、兒童健康問卷(ChildHeathQuestionnaire)和兒童評價(jià)問卷(ChildAssessmentQuestionnaire)?？赏ㄟ^主觀檢測(VAS、Lickert、描述信息)來檢測癢感。另一種方法是用振動傳感器(vibrationtransducer)或運(yùn)動敏感計(jì)量器來檢測抓撓，抓撓是癢感的客觀關(guān)聯(lián)。篩選我們的發(fā)現(xiàn)(傷害感受器和瘙癢感受器上表達(dá)并存在的某些通道允許抑制電壓門控性離子通道的化合物進(jìn)入靶細(xì)胞中)提供了用于鑒定有用于治療疼痛和癢感的化合物的方法。一個(gè)實(shí)例中，使傷害感受器或瘙癢感受器與激活TRPV1、TRPA1、TRPM8和/或P2X(2/3)受體的一種、兩種或更多種化合物接觸。還使同樣的傷害感受器或瘙癢感受器與第二化合物接觸，所述第二化合物當(dāng)施加于傷害感受器內(nèi)表面時(shí)(例如，用完整細(xì)胞膜片鉗技術(shù)通過微量移液器將其施加于細(xì)胞內(nèi))抑制一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道，但當(dāng)施加于所述細(xì)胞外表面時(shí)不抑制(因?yàn)樵摶衔锊荒芸邕^細(xì)胞膜)。傷害感受器或瘙癢感受器中離子通道的抑制將抑制細(xì)胞產(chǎn)生動作電位和/或抑制向二級神經(jīng)元的信號傳遞，兩種情況中都阻斷了疼痛信號的傳遞，因此，第二化合物抑制傷害感受器中電壓門控性離子通道的能力將該化合物鑒定為可與激活TRPV1、TRPA1、TRPM8和/或P2X(2/3)受體的化合物聯(lián)用以治療疼痛或癢感的化合物。以下實(shí)施例意在說明本發(fā)明而無意限制本發(fā)明。實(shí)施例1我們使用完整細(xì)胞電壓鉗(voltageclamp)記錄技術(shù)記錄了成年大鼠DRG神經(jīng)元中通過電壓依賴性鈉通道的電流。為選擇傷害感受器，我們記錄了小(24±5μm；n＝25)神經(jīng)元并通過短時(shí)(1秒)施用1μm辣椒素測試了這些神經(jīng)元中TRPV1受體的表達(dá)。在所測試的25/25小神經(jīng)元中，辣椒素產(chǎn)生了延長的(10±3秒)向內(nèi)電流(圖1A，上欄)，與作為傷害感受器的神經(jīng)元一致。通過保持電位為-70mV的去極化步驟引發(fā)鈉電流。單獨(dú)浸泡(Bath)施用5mMQX-314對鈉電流的影響最小(5分鐘施用后，減少3±0.5％，n＝25)(圖1A，左欄；b)。單獨(dú)施用辣椒素(1μm，1-10分鐘)使鈉電流適度減少(31±9％抑制(n＝25))。然而，QX-314與辣椒素一起施用時(shí)，幾乎完全消除了鈉電流(抑制98±0.4％，n＝25)(圖1A，左欄；b)。如所預(yù)期，如果鈉電流的阻斷是QX-314通過TRPV1受體逐漸進(jìn)入造成的，則抑制在幾分鐘內(nèi)發(fā)展并在15分鐘后接近完成(圖1C)。為測試共同施用辣椒素和QX-314來抑制鈉電流的能力是否對表達(dá)TRPV1受體的細(xì)胞有選擇性，我們還記錄了大DRG神經(jīng)元(細(xì)胞體(soma)直徑＞40μm)(圖1A，右欄)。這些神經(jīng)元中，辣椒素不引發(fā)向內(nèi)電流(10/10)。對小直徑神經(jīng)元而言，單獨(dú)施用QX-314對鈉電流影響極小或沒沒有影響(10分鐘施用之后，電流增加8±4％，n＝10)。與小直徑神經(jīng)元不同，辣椒素對大直徑神經(jīng)元中的鈉電流沒有影響(10分鐘施用后平均增加3±2％，n＝10。更值得注意的是，共同施用QX-314和辣椒素對大直徑神經(jīng)元中的鈉電流影響極小或沒有影響(10分鐘施用后減少9±5％，n＝10)。因此，如所預(yù)期，如果QX-314通過TRPV1受體進(jìn)入神經(jīng)元，則共同施用的QX-314和辣椒素抑制鈉電流的能力對表達(dá)TRPV1受體的神經(jīng)元具有高度選擇性。我們還使用生理內(nèi)部和外部溶液在電流鉗中檢測了共同施用的QX-314和辣椒素的效果。如從電壓鉗結(jié)果所預(yù)期的那樣，QX-314和辣椒素的共同施用抑制了小直徑神經(jīng)元的興奮性，完全阻斷了動作電位的產(chǎn)生(圖2，15/15個(gè)神經(jīng)元)。下一步，我們檢測了辣椒素和QX-314的組合是否能在體內(nèi)減少疼痛行為(painbehavior)。如vonFrey絲所測定，將QX-314單獨(dú)(10μL的2％溶液)注射入成年大鼠的后爪中對引發(fā)縮爪反應(yīng)的機(jī)械閾無顯著影響(p＝0.33)(圖3A)。如所預(yù)期，單獨(dú)的辣椒素(10μg/10μL)引發(fā)了自發(fā)退縮(5分鐘內(nèi)40±6次退縮)，反映出辣椒素對傷害感受器的直接刺激作用，15和30分鐘后顯著降低了機(jī)械閾(p＜0.05)(圖3a)。注射后頭5分鐘內(nèi)，辣椒素和QX-314一起注射未顯著改變退縮數(shù)目(30±7，p＝0.24)。然而，這種組合后來完全消除了正常情況下單獨(dú)的辣椒素對機(jī)械閾的降低(p＝0.14，15分鐘時(shí)檢測)。而且，辣椒素和QX-314聯(lián)合注射后60分鐘，實(shí)際上機(jī)械閾增加到兩倍于基線值，注射后2小時(shí)(46±5gvs.24±3g，p＜0.05)。三只動物中，爪子甚至對最高值的vonFrey絲(57g)都不敏感。增加的機(jī)械閾持續(xù)約3小時(shí)，然后通過4小時(shí)逐漸回歸到基礎(chǔ)水平(圖3A)。在檢測對歸一化的有害輻射熱刺激的敏感性時(shí)觀察到相似的影響。出乎意料地，注射后30分鐘，單獨(dú)的QX-314短暫地減少了熱響應(yīng)潛伏期(30分鐘時(shí)，p＜0.01；所有其他時(shí)間點(diǎn)，p＞0.05)(圖3B)。如所預(yù)期，單獨(dú)的辣椒素(10μg/10μL)也減少了熱響應(yīng)潛伏期(15和30分鐘，p＜0.01)(圖3B)。然而，雖然單獨(dú)的QX-314和單獨(dú)的辣椒素均增加了熱敏感性，但共同施用QX-314和辣椒素一起逐漸麻醉了動物對有害熱刺激的反應(yīng)，從而在注射后2小時(shí)，沒有動物對施加25秒的輻射有害熱做出反應(yīng)。這種效果在注射后持續(xù)4小時(shí)(圖3B)。然后，我們測試了共同施用辣椒素和QX-314是否可用于產(chǎn)生區(qū)域性神經(jīng)阻斷，而沒有用利多卡因進(jìn)行局部麻醉時(shí)觀察到的運(yùn)動效應(yīng)(motoreffects)。根據(jù)0(無效果；正常步態(tài)和肢體放置)、1(肢體運(yùn)動，但肢體放置和運(yùn)動異常)或2(完全喪失肢體運(yùn)動)的量表(scale)對運(yùn)動效應(yīng)進(jìn)行評分。在非?？拷巧窠?jīng)的位置注射2％利多卡因(用于局部神經(jīng)阻斷的標(biāo)準(zhǔn)濃度)，15分鐘檢測時(shí)，造成下肢完全麻痹(6只動物中的6只)，30分鐘檢測時(shí)，完全或部分麻痹依然存在(平均運(yùn)動評分1.67±0.2，p＜0.01；圖4C)。在所有動物中，觸覺刺激引起的位置反射的完全喪失持續(xù)了至少30分鐘，通過45分鐘這些感覺和運(yùn)動缺陷完全恢復(fù)(圖4)。在麻痹期間，不可能檢測感覺靈敏度。在用QX-314進(jìn)行的現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)(pilotexperiment)中，很明顯的是，當(dāng)與辣椒素一起施用時(shí)，可用比利多卡因濃度低得多的QX-314來產(chǎn)生有效的局部麻醉。單獨(dú)注射QX-314(0.2％，100μL)對運(yùn)動功能無影響(6只動物中的6只；圖4C)，且對機(jī)械閾(p＝0.7)或熱反應(yīng)潛伏期(p＝0.66)也沒有顯著影響(圖4A、4B)。在靠近該神經(jīng)處單獨(dú)注射辣椒素(0.5μg/μL，100μL)，注射后30分鐘內(nèi)，減少了機(jī)械閾(p＜0.05)和熱潛伏期(p＜0.05)兩者(圖4A、4B)。這期間，6只動物中的4只顯示，經(jīng)注射的肢體持續(xù)彎曲(sustainedflexion)，導(dǎo)致對運(yùn)動力的輕微損害(平均運(yùn)動評分0.7±0.2，p＜0.01)，但膝蓋和臀部的運(yùn)動以及位置反射未改變。我們將靈敏度和運(yùn)動的改變解釋為傷害感受器軸突的反射性活化產(chǎn)生了持續(xù)的彎曲反射。對于共同施用QX-314和辣椒素入坐骨神經(jīng)旁側(cè)(para-sciaticnerve)區(qū)域而言，我們首先注射QX-314，10分鐘后注射辣椒素，我們的想法是，QX-314將存在于細(xì)胞外，一旦TRPV1通道被激活，QX-314即可進(jìn)入TRPV1通道。實(shí)際上，當(dāng)先注射QX-314再注射辣椒素時(shí)，對辣椒素沒有或幾乎沒有行為反應(yīng)，所述行為反應(yīng)表示對有害刺激的有效麻醉。機(jī)械閾非常顯著地增加，以至于所有動物對最硬的vonFrey絲沒有反應(yīng)(vonFrey絲57g；vs.注射前對刺激的縮爪反應(yīng)為平均15.2±3.4；p＜0.01，n＝6)，熱反應(yīng)潛伏期也顯著增加(22.3±2.3svs.14.9±0.4s，p＜0.05，n＝6)。對機(jī)械刺激而言，這些改變在注射辣椒素后15分鐘是明顯的，對熱刺激而言，這些改變在注射辣椒素后30分鐘是明顯的，這些改變持續(xù)90分鐘(圖4A、4B)。6只動物中的5只沒有任何運(yùn)動缺陷(平均運(yùn)動評分0.17±0.17，p＝0.34)(圖4C)，位置反射無變化。一只動物表現(xiàn)出與單獨(dú)注射辣椒素時(shí)觀察到的類似的持續(xù)彎曲，但更加短暫。方法電生理學(xué)取出6-8周齡Sprague-Dawley大鼠的背根神經(jīng)節(jié)，置入含有1％青霉素-鏈霉素(Sigma)的Dulbecco極限必需培養(yǎng)基(Dulbecco′sMinimumEssentialMedium)中，然后用5mg/ml膠原酶、1mg/ml分散酶(Dispase)II(Roche，Indianapolis，IN)處理90分鐘，用0.25％胰蛋白酶處理7分鐘，然后加2.5％胰蛋白酶抑制劑。在DNA酶I抑制劑(50U)的存在下研碎細(xì)胞，通過15％BSA(Sigma)離心，在1ml神經(jīng)基礎(chǔ)(Neurobasal)培養(yǎng)基(Sigma)、10μMAraC、NGF(50ng/ml)和GDNF(2ng/ml)中重懸浮，涂布在涂敷有聚賴氨酸(500μg/ml)和層粘連蛋白(5mg/ml)的35mm組織培養(yǎng)皿(BectonDickinson)上，8000-9000/孔。培養(yǎng)物在37℃、5％二氧化碳中培養(yǎng)。涂板后48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行記錄。選作可能的傷害感受器的小神經(jīng)元的平均大小是23±6μm(n＝50)，大神經(jīng)元的是48±8μm(n＝10)。使用Axopatch200A放大器(amplifier)(AxonInstruments，UnionCity，CA)和電阻為1-2MΩ的膜片移液管(patchpipettes)進(jìn)行全細(xì)胞電壓鉗或電流鉗記錄。對電壓鉗記錄而言，通過用石蠟?zāi)?Parafilm)包裹脛(shank)或用Sylgard(DowCorning，Midland，MI)涂敷脛來降低移液管電容。用放大器線路抵償細(xì)胞電容，用P/4程序減去線性滲漏電流(Cellcapacitancewascompensatedforusingtheamplifiercircuitry，andlinearleakagecurrentssubtractedusingaP/4procedure)。串聯(lián)電阻(通常3-7MΩ，總是小于10MΩ)補(bǔ)償約80％。電壓鉗記錄中使用的溶液設(shè)計(jì)為通過阻斷鉀和鈣電流來分離鈉電流，并減少外部的鈉來改善電壓鉗。移液管溶液(Pipettesolution)是110mMCsCl、1mMCaCl2、2mMMgCl2、11mMEGTA和10mMHEPES，用約25mMCsOH將pH調(diào)節(jié)至7.4。外部溶液是60mMNaCl、60mM氯化膽堿、4mMKCl、2mMCaCl2、1mMMgCl2、0.1mMCdCl2、15mM四乙基氯化銨、5mM4-氨基吡啶、10mM葡萄糖和10mMHEPES，用NaOH調(diào)pH至7.4。對于小的液體接界電位(-2.2mV)未進(jìn)行修正。用Axopatch200A放大器的快速電流鉗模式進(jìn)行電流鉗記錄。移液管溶液是135mM葡糖酸鉀(Kgluconate)；2mMMgCl2；6mMKCl；10mMHEPES；5mMMgATP；0.5mMLi2GTP；(用KOH調(diào)節(jié)pH＝7.4)。外部溶液是145mMNaCl；5mMKCl；1mMMgCl2；2mMCaCl2；10mMHEPES；10mM葡萄糖；(用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.4)。用-15mV的液體接界電位修正膜電位。使用帶有pCLAMP8.2軟件的Digidata1200A/D界面(AxonInstruments，UnionCity，CA)產(chǎn)生命令規(guī)程(Commandprotocols)并將數(shù)據(jù)數(shù)字化(digitized)。電壓鉗電流記錄在2kHz低通濾過(lowpassfiltered)，電流鉗記錄為10kHz(-3dB，4電極貝塞耳濾波器(4poleBesselfilter))。用專門設(shè)計(jì)的多管式快速藥物遞送系統(tǒng)在離神經(jīng)元約200-250μm處施加QX-314(5mM)、辣椒素(1μM或500nM)或它們的組合。少于1秒鐘之內(nèi)完成溶液交換。行為對于足底內(nèi)注射而言，首先使大鼠習(xí)慣于實(shí)驗(yàn)者進(jìn)行的處理和測試，實(shí)驗(yàn)者不知道所進(jìn)行的治療。足底內(nèi)注射載體(20％乙醇，鹽水中的5％吐溫20，10μL)、辣椒素(1μg/μL)、QX-314(2％)或辣椒素和QX-314的混合物至左后爪，分別用vonFrey絲和輻射熱測定機(jī)械和熱敏感性。對于坐骨神經(jīng)注射，首先用10天時(shí)間使動物習(xí)慣于處理。注射利多卡因(0.2％或2％，100μL)；單獨(dú)的QX-314(0.2％，100μL)；單獨(dú)的辣椒素(50μg，在100μL中)；或QX-314，然后注射辣椒素(10分鐘間隔)至髖關(guān)節(jié)下面的坐骨神經(jīng)區(qū)。用vonFrey絲和輻射熱確定機(jī)械閾和熱閾。使用以下評分每隔15分鐘評價(jià)經(jīng)注射的腿的運(yùn)動功能0＝?jīng)]有；1＝部分阻斷；2＝完全阻斷。檢查走、爬高、在竿上走和位置反射。當(dāng)步態(tài)正常，無可見的肢體衰弱時(shí)，運(yùn)動阻斷的等級為“無”；當(dāng)肢體可以動但運(yùn)動異常并且不能支持正常的姿勢時(shí)，運(yùn)動阻斷的等級為“部分阻斷”；當(dāng)肢體癱軟、對肢體伸展無抵抗時(shí)，運(yùn)動阻斷等級為“完全阻斷”。實(shí)驗(yàn)者在不知情的情況下進(jìn)行所有試驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)分析用學(xué)生t檢驗(yàn)(Studentsttest)或單向ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，然后根據(jù)情況進(jìn)行杜奈特(Dunnett’s)檢驗(yàn)。對于運(yùn)動評分，注射0.2％利多卡因后獲得的數(shù)據(jù)用作杜奈特檢驗(yàn)的對照。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。實(shí)施例2我們還顯示，丁香酚(C10H12O2)，一種烯丙基鏈取代的愈創(chuàng)木酚(guaiacol)、2-甲氧基-4-(2-丙烯基)苯酚(丁香油中的活性成分，TRPV1受體的非刺激性激動劑)，通過激活TRPV1通道而促進(jìn)QX-314進(jìn)入背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中。圖5示出了小的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中鈉通道電流的電壓鉗記錄。數(shù)據(jù)說明，單獨(dú)的丁香酚對鈉電流有適度的抑制效果(10-20％抑制)。共同施用丁香酚和QX-314產(chǎn)生累進(jìn)性阻斷，可在7分鐘后完成。示出了兩個(gè)例子，其是結(jié)果類似的10個(gè)試驗(yàn)的代表。如上文所示，單獨(dú)的外部QX-314沒有作用，而內(nèi)部QX-314阻斷了鈉通道。因此，這些實(shí)驗(yàn)表明，丁香酚通過激活TRPV1通道來促進(jìn)QX-314進(jìn)入背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中。實(shí)施例3圖6顯示共同施用TRPA激動劑芥子油(MO)(50μM)和QX-314(5mM)的結(jié)果。單獨(dú)的MO使鈉電流減少了20-30％，約在3分鐘后達(dá)到平臺期。共同施用MO和QX-314顯著減少了鈉電流。其它實(shí)施方式對本發(fā)明所述方法和系統(tǒng)的各種改進(jìn)和變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的而未脫離本發(fā)明的范圍和精神。雖然結(jié)合具體的所需實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但應(yīng)理解，所主張的本發(fā)明并不過分限于這些具體實(shí)施方式。實(shí)際上，對醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、藥理學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)領(lǐng)域或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言顯而易見的、對本發(fā)明實(shí)施方式的各種改變均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本說明書中提及的所有出版物均通過參考納入本文，如同各獨(dú)立的出版物具體地和單獨(dú)地通過參考納入本文一樣。權(quán)利要求1.治療患者的疼痛或癢感的方法，所述方法包括給予所述患者(i)第一化合物，其激活存在于傷害感受器和/或瘙癢感受器上的通道形成受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一化合物激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的通道形成受體。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一化合物是TRPV1受體的激活劑，所述激活劑選自辣椒素、丁香酚、arvanil(N-花生四烯酰香草胺)、花生四烯乙醇胺、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2APB)、AM404、樹脂毒素、佛波醇12-苯基乙酸酯13-乙酸酯20-高香草酸酯(PPAHV)、奧伐尼(NE19550)、OLDA(N-油酰多巴胺)、N-花生四烯酸基多巴胺(NADA)、6′-碘代樹脂毒素(6′-IRTX)、C18N-酰基乙醇胺、脂氧合酶衍生物例如12-氫過氧化廿碳四烯酸、抑制劑半胱氨酸結(jié)(ICK)肽(香草毒素)、胡椒堿、MSK195(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基)丙基]-2-[4-(2-氨基乙氧基)-3-甲氧苯基]乙酰胺)、JYL79(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基)丙基]-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-姜烯酚、油烯基姜辣素、油烯基姜烯酚和SU200(N-(4-叔丁基芐基)-N′-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)。4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一化合物是TRPA1受體的激活劑，所述激活劑選自肉桂醛、異硫氰酸烯丙酯、二硫化二烯丙基、icilin、肉桂油、冬青油、丁香油、丙烯醛、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、4-羥基壬烯醛、對羧基苯甲酸甲酯、芥子油和3′-氨基甲酰聯(lián)苯-3-基環(huán)己基氨基甲酸酯(URB597)。5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一化合物是P2X受體的激活劑，所述激活劑選自ATP、2-甲硫基-ATP、2′和3′-O-(4-苯甲?；郊柞；?-ATP以及ATP5′-O-(3-硫代三磷酸鹽)。6.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一化合物是TRPM8受體的激活劑，所述激活劑選自薄荷醇、icilin、桉樹腦、芳樟醇、香葉醇和羥基香茅醛。7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二化合物抑制電壓門控性鈉通道。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述第二化合物是QX-314、N-甲基-普魯卡因、QX-222、N-辛基-胍、9-氨基吖啶、泮庫溴銨或當(dāng)存在于細(xì)胞內(nèi)時(shí)抑制電壓門控性鈉通道的其他低分子量的帶電分子。9.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二化合物抑制電壓門控性鈣通道。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述化合物是D-890(季甲氧維拉帕米)、CERM11888(季芐普地爾)或當(dāng)存在于細(xì)胞內(nèi)時(shí)抑制電壓門控性鈣通道的其他低分子量的帶電分子。11.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二化合物是選自以下的化合物的季胺衍生物或其他帶電衍生物利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、妥卡尼、丙胺卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疼痛是神經(jīng)源性疼痛。13.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疼痛是炎性疼痛。14.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疼痛是傷害感受性疼痛。15.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疼痛是操作性疼痛。16.組合物，其包含(i)第一化合物，其激活存在于傷害感受器和/或瘙癢感受器上的通道形成受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述第一化合物激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體。18.如權(quán)利要求16或17所述的組合物，所述組合物配制用于口服給藥、胃腸外給藥(例如靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥)、直腸給藥、皮膚給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥、或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸給藥。19.抑制細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸(i)第一化合物，其激活存在于傷害感受器和/或瘙癢感受器上的通道形成受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。20.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述第一化合物激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體。21.鑒定有用于治療疼痛或癢感的化合物的方法，該方法包括以下步驟(a)使表達(dá)TRPV1、TRPA1、TRPM8和/或P2X(2/3)的神經(jīng)元的外表面接觸(i)第一化合物，其激活TRPV1、TRPA1、TRPM8或P2X(2/3)受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，以及(b)確定所述第二化合物是否抑制所述神經(jīng)元中的所述電壓門控性離子通道，其中，所述第二化合物對所述電壓門控性離子通道的抑制將所述第二化合物鑒定為有用于治療疼痛或癢感的化合物。22.選自以下的化合物的季銨衍生物或其他永久或瞬時(shí)帶電的衍生物利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。23.如權(quán)利要求22所述的季胺衍生物或其他帶電衍生物，其中所述化合物具有式(I)-(X)中的任意一種。24.藥物組合物，其包含(i)選自以下的化合物的季胺衍生物或其他永久或瞬時(shí)帶電的衍生物利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林；和(ii)藥學(xué)上可接受的賦形劑。25.如權(quán)利要求24所述的組合物，其中所述化合物具有式(I)-(X)中的任意一種。全文摘要本發(fā)明的特征在于一種通過將細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸來抑制細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控離子通道電壓門控性離子通道的方法(i)第一化合物，其激活存在于傷害感受器和/或瘙癢感受器上的通道形成受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。本發(fā)明的特征還在于化合物的季胺衍生物或其他永久帶電或瞬時(shí)帶電的衍生物，所述化合物施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道。文檔編號A61K31/167GK101610789SQ200780050131公開日2009年12月23日申請日期2007年11月19日優(yōu)先權(quán)日2006年11月20日發(fā)明者B·P·比恩,C·J·伍爾夫申請人:哈佛大學(xué)校長及研究員協(xié)會,綜合醫(yī)院公司