專利名稱：：自組裝兩性分子聚合物為抗病毒劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：樹形分子容易與靶向部分結(jié)合，并且也具有在活體內(nèi)靶向特定細胞的能力(Singhetal.(1994)Clin.Chem，40:1845)，并且將病毒和細菌性病原體嵌段粘合到生物基底(substrate)。與多唾液酸接合的梳狀支鏈和支化接枝(dendrigraft)聚合物對于其在體外抑制病毒血細胞凝集和嵌段感染哺乳動物細胞的能力已被評估(Reuteretal.(1999)BioeonjugateChem.10:271)。最有效的病毒抑制劑是才危狀支鏈和支化接枝大分子，對這些病毒其示出多達50,000-倍增加的活性。近來，制藥公司Starpharma宣布成功地開發(fā)了樹形分子-基(dendrimer-based)殺生物劑(VivaGel(TM))，其通過與病毒表面的受體結(jié)合來預防HIV感染(Halford(2005)Chem.&Eng.News83(24):30)。Chen等(2000)(Biomacromolecules.l:473)已經(jīng)報道季銨功能化的聚丙烯亞胺(聚曱基吖丙啶)樹形分子是非常有效力的殺生物劑。配體Z是對病毒表面具有特異性結(jié)合親和力的配體。"特異性結(jié)合親和力，，指在存在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的許多細胞表面和大分子的情況下，配體能在體內(nèi)結(jié)合到病毒的表面?；鶊Fs是鍵或間隔部分，并且當s是間隔區(qū)時，每個s可攜帶1到4個基團Z。n的值的范圍是3到大約100;p的平均值的范圍為l到2,r的平均值的范圍為l到4,本發(fā)明也提供如上描述的生物相容的梳型聚合物分子，其甚者在不存在小分子治療劑的情況下具有固有的抗病毒性。該抗病毒活性被認為是由于兩性分子聚合物的洗滌劑樣能力破壞病毒顆粒的外包衣。在優(yōu)選的實施方式中，通過連接對靶病毒表面具有結(jié)合親和力的靶向部分，增強抗病毒活性。聚合物嵌段A最優(yōu)選具有在20和50單體單位之間的平均長度。聚乙二醇鏈可以用適合用作對其它部分的連接子的官能團在一側(cè)或兩側(cè)末端取代，其包括但不限于氨基、巰基、丙烯酸酯、丙烯酰胺、馬來酸酯、馬來酰亞胺等。n的值的范圍是1到1000，并且優(yōu)選在3和100之間。Ti-聚合物的總的分子量的范圍可以是1000到100,000道爾頓或更多；優(yōu)選在2,000道爾頓以上，更優(yōu)選在7,000道爾頓以上。分支點部分B典型衍生自具有多個反應(yīng)基團的多功能分子，其兩個適于連接親水聚合物單元A,其兩個適于連接疏水部分C。部分B可任選具有上述的反應(yīng)基團X。作為一個具體的實例，式2的聚合物——其中X-OH并且r-2，被通過將聚乙二醇與馬來酸酐反應(yīng)形成聚酯7，然后與二硫蘇糖醇反應(yīng)形成8而制備。然后酸7與n-十八胺酰胺化形成期望的梳狀聚合物9(方案2)。式9表示的DTT-衍生的酰胺梳狀聚合物在本文被稱為"7i-聚合物A";在方案2中具體的聚合物9被稱為"C『tt-聚合物A"。0方案2如上制備的某些7i-聚合物具有適合用于進一步衍生的反應(yīng)基團X,以連接靶向部分如小分子、肽、核苷酸、糖、抗體等，或者經(jīng)由雙功能或多功能交聯(lián)劑實現(xiàn)聚合物鏈的交聯(lián)。在特定的實施方式中，在聚合物鏈上反應(yīng)基團的部分衍生被進行以產(chǎn)生具有多種不同反應(yīng)基團的7T-聚合物，其允許將多種靶向和藥物部分連接到單一聚合物鏈。因此，將化學計算量下的丙烯酰氯(或馬來酸酐)加入到實施例1的兀-聚合物中將提供既具有丙烯酰(或馬來酰)基團又具有殘留羥基基團的聚合物?；瘜W計算量下的巰基-羧酸例如HS-(CH2)3-COOH的接下來的邁克爾加成將提供具有羥基基團、丙烯?；鶊F和羧基基團的聚合物。除了化學計算量下的試劑留下的任何殘留反應(yīng)基團以外，加入半胱氨酸引入氨基和羧基。50多功能的7T-聚合物的另一種方法包括故意省略疏水鏈C的部分。例如，A量使用未反應(yīng)的羧:基團J制備。又一個方法是用胺的混合物酰胺化r所述胺的部分含有反應(yīng)基團X。同樣，在適當?shù)臈l件(在步驟A中過量的馬來酸酐，在步驟中B中過量的DTT)下，具有期望數(shù)量的游離硫醇基團的聚合物制備物可,皮產(chǎn)生。具有反應(yīng)性羥基基團的7t-聚合物，在干燥后，可與馬來酸酐酯化以連接到馬來酸酯基團，邁克爾接納體，同時產(chǎn)生游離氛基。在所形成的聚合物中，順丁烯雙鍵對于邁克爾加成是可行的，特別是與硫醇，例如殘留在蛋白質(zhì)、酶、肽、抗體、Fab'2片段或Fab'片段，或其它靶向部分中的半胱氨酸的硫醇(方案8)，并且羧基是可行的用于偶聯(lián)到藥物或配體的氨基，或蛋白和肽中的賴氨酸殘基。[53不同的部分經(jīng)由酰胺化可進一步被連接到新引入的(或先前可獲得的)羧基。因此，至少兩個不同的把向部分甚至在飽和反應(yīng)條件(即，待被連接的部分以化學計算過量存在)下可以被連接。OH具有側(cè)鏈羧基化基團的聚合物可以用胺在典型偶聯(lián)條件下酰胺化，并且它們也可以經(jīng)由庫爾修斯(Curtius)重排被轉(zhuǎn)化為異氰酸酯基團，然后與胺或醇偶聯(lián)以分別形成尿素和氨基甲酸酯。這樣的反應(yīng)可被用來引入疏水基團C，或連接靶向部分。通過至少使反應(yīng)基團的一個與二胺部分反應(yīng)，游離胺可被引入聚合物。必須選擇二胺，以便胺基團中的一個在反應(yīng)條件下或者被保護或者不反應(yīng)。后者可通常通過使用1，2-乙二胺在大約7.5的pH下完成，這是因為兩個氛基的pKa's極大不同。優(yōu)選地，該酰胺化作為單獨步驟在引入疏水側(cè)鏈基團后被進行。然后，通過酰胺化具有羧基的肽或另一種分子可被連接在游離胺。將配體連接到本發(fā)明的聚合物的重復單元提供聚合物鏈上和納米顆粒表面上的配體的多價顯示。多價顯示通常導致對目標的親和性的更大增加。例如，多價抗體在清除它們的乾方面比正常二價抗體有效的多。糖結(jié)合蛋白和糖類在性質(zhì)上已知是多價的，并且如果是單價是無效的。相似地，多價肽和糖類靶向部分比單獨的單體更有效。在MW上的增加，由于連接到聚合物導致肽和其它配體的減少的腎清除率。另外，PEG主鏈提供的肽的益處與PEG化的肽的益處相似，包括避免免疫監(jiān)督。62此外，多價靼向部分將修飾多價乾(塞(say)、病毒顆粒)和對其中和，這比單體靶向部分有效得多。在多價形式中，展示(display)多種(不同)肽的能力將導致增強的特異性。例如，真實的HIV-特異性(HIV病毒-結(jié)合)聚合物可通過與病毒的CCR5或CXCR-4結(jié)合區(qū)相應(yīng)的另一種肽、以及可能的與其它受體(分別為CXCR-4或CCR-5)相應(yīng)的第三種肽來建立。這樣的聚合物可完全掩蔽病毒結(jié)合區(qū)域，并導致病毒不能連接到細胞并因而是非傳染性的。另外，聚合物的表面活性劑性能將導致病毒結(jié)構(gòu)本身在結(jié)合后失去穩(wěn)定性。代替肽，干擾相同結(jié)合模式的小分子(CD4，CCR-5，CXCR-4)或肽和小分子的混合物——優(yōu)選具有互補活性，可被使用。所形成的聚合物將致使游離病毒無效，并且因此通過使用它們作為避孕套潤滑劑等的成分對于停止感染的傳播是理想的。另外，這類聚合物可被注射入患者以減少HIV負擔(burden)。[63一般而言，當多功能試劑如DTT被使用時，也可經(jīng)由羧酸與DTT的酯化或相似的副反應(yīng)將聚合物鏈部分交聯(lián)。在PEG鏈的中心區(qū)域的仲羥基——例如那些與雙酚A二縮7jc甘油醚殘基相連的，也可以促進交聯(lián)——如果它們存在于PEG起始材料中。所形成的交聯(lián)的水凝膠結(jié)構(gòu)也是有用的材料。例如，通過適當增加該交聯(lián)的范圍或者通過使用可選的交聯(lián)劑(如諸如雙環(huán)氧乙烷)清楚的(explicit)交聯(lián)，可制造為柔韌的水凝膠的材料，其可作為藥物的容器貯存藥劑(repositoryd印ots)。通過適當?shù)?多飾該材料(例如，更小PEG長度、更大的開放羧基和摻入適當?shù)谋┧峄鶊F)，可制造線性或交聯(lián)的水凝膠材料，其可作為可以或者固定在儀器如支架上或吸附在儀器如用于粘合貼劑或皮下插入貼劑的墊上而被支撐的貯物器(repositories)。一般而言，這類交聯(lián)材料將適合用于受控釋放，而不是增強的靶釋放。[64本發(fā)明的梳狀聚合物可用于在水溶劑系統(tǒng)中溶解微水溶性材料。在水溶劑中溶解物質(zhì)的方法包括將微溶物質(zhì)與本發(fā)明的梳型聚合物在水存在下接觸，以便形成該物質(zhì)和聚合物的水溶性復合體?；蛘?，聚合物和待被溶解的物質(zhì)可被結(jié)合在兩相的水-有機乳狀液中，并且通過蒸發(fā)除去有機溶劑.示例性的方法被描述于美國專利第6,838,089號，該美國專利被引入本文作為參考。相信，在大多數(shù)情況下，聚合物自組裝成納米顆粒，其在疏水C鏈中具有溶解的微溶物質(zhì)，所述疏水C鏈在顆粒的核聚結(jié)，同時A嵌段(塊)形成親水殼，其具有足夠低的界面自由能以使顆粒的水懸浮液保持穩(wěn)定。[65]在一些情況中，微溶物質(zhì)不可能在核中完全溶解，但是可存在為被在顆粒的核的C鏈包圍或懸浮在顆粒的核的C鏈中的固體納米顆粒。對于本發(fā)明，這是程度的差別，因為本發(fā)明的實踐不依賴于C鏈與微溶物質(zhì)的任何特定的混合程度。在一些情況中，在C鏈中物質(zhì)可以以分子水平溶解，但是在其它情況下，其可展示與C-鏈環(huán)境的任何程度的相分離。在一些情況中，可期望系統(tǒng)將作為溫度函數(shù)從一種狀態(tài)移到另一種狀態(tài)，將反應(yīng)混合物酸化到pH大約3.0到大約4.5，并且在室溫下攪拌大約24小時，以破壞未反應(yīng)的EDC，然后使用1NNaOH將其滴定至pH7.0。最終的反應(yīng)混合物在大約800xg下離心1到3小時，以除去固體污染物和副產(chǎn)物。離心后，在GPC柱(ToyopearlTM、Sq>hadexTM、SqihacrylTM、Biogel等)上可對上清液色鐠分析。然而，7T聚合物是兩性分子的物質(zhì)，并且將對大多數(shù)GPC柱填充物表現(xiàn)親和性，這使除去污染物變復雜。可選的，可在大孔疏水相互作用柱(例如TOYOPEARLPhenyl650CToshohBiosciences,Montgomeryville，PA，U.S.A.)上對聚合物色鐠分析，用水中甲醇梯度進行洗脫。優(yōu)選地，反應(yīng)混合物針對數(shù)種酸化的和中性的水的變化進行透析，以除去低分子量起始材料和反應(yīng)副產(chǎn)物。反應(yīng)混合物也可用丁酮、異丙醇、丁醇或其它極性有機溶劑洗提，以除去有機雜質(zhì)，但是大量的兩性分子聚合物^皮損失在洗脫溶劑中。優(yōu)選地，反應(yīng)混合物經(jīng)過使用適當膜的超濾以將產(chǎn)物分餾為分子量等級，如5kDa到10kDa;10kDa到30kDa;30kDa到50kDa等，這取決于使用的濾過膜的截流(cutoff)。聚合物的水溶液可經(jīng)過死端式過濾，以^使產(chǎn)生無菌或無病毒的溶液，這取決于濾過膜或介質(zhì)的選擇。2.7T-聚合物的合成實施例1:PEG-二(烷基酰胺基琥珀酰)二硫醚中等分子量聚合物(C16-;r-聚合物A)80在真空中80'C下，干燥聚乙二醇(PEG-1500,SigmaChemicalCo.)，直到氣泡停止產(chǎn)生(8-12小時，這取決于PEG的質(zhì)量)。干燥的PEG可被不確定地儲存在氬氣中。用兩體積的水稀釋粗制的PEG馬來酸氫酯。然后，在攪拌下，將二硫蘇糖醇(DTT，每當量PEG，1.01當量)和N，N,N'，N'-四甲基乙二胺(TEMED，1.02當量)的水溶液(每體積TEMED，2體積水)加入到反應(yīng)混合物中。在70。C下、氬氣中攪拌反應(yīng)2.5hrs,留在室溫下過夜，然后再次在7(TC下攪拌2小時。TLC監(jiān)控反應(yīng)，并且在DTT完全消失后完成反應(yīng)。將水加入到上述反應(yīng)混合物以減少粘度，直到混合物可以被攪拌(大約25%固體)，在65。C下、氬氣中攪拌混合物，并且加入N-羥基丁二酰亞胺(在PEG-馬來酸氳酯-DTT聚合物中，每摩爾羧酸基團O.l摩爾)，然后加入十六烷胺(在聚合物中，每摩爾羧錄團1.05摩爾)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺(EDC，在聚合物中每摩爾羧酸基團0.56摩爾)。在氬氣中，攪拌混合物1小時，加入第二份EDC(在聚合物中每摩爾羧g團0.56摩爾)。另一個小時后，進一步加入第三份EDC(在聚合物中每摩爾羧酸基團0.28摩爾，總共每摩爾羧酸1.4molEDC)，以補充EDC水解的損失。當加入的固體使懸浮液很難攪拌時，如果需要保持流動性，加入另外的水，并且當需要時通過加入lNNaOH將pH保持在8到IO之間。在65。C下、氬氣中攪拌混合物過夜，TLC監(jiān)控(二氧化硅、乙醇)，直到烷基胺表現(xiàn)達到穩(wěn)定的濃度，然后攪拌另外4小時。然后，用1NHC1酸化反應(yīng)混合物至pH大約4.5，攪拌24小時以破壞未反應(yīng)的EDC,并且通過逐滴加入lNNaOH,調(diào)節(jié)到pH7.0。含有十二烷胺，該反應(yīng)可在大約40-45°C下進行，反之含有十八烷胺，溫度優(yōu)選在55。C-57。C。丙胺實施例2:PEG-二(烷基酰胺基琥珀酰)二硫醚高分子量聚合物按照在實施例1中列出的方法，除了使用每摩爾馬來酸酐0.55molDTT和0.55molTEMED。因為粘度增長很快，需要強力攪拌。表明大部分反應(yīng)在5-10分鐘內(nèi)完成，然后，隨著溫度從55'C被升高到80'C，通過接下來4小時，緩慢完成反應(yīng)。實施例3:PEG-二(烷基酰胺基琥珀酰)二硫醚聚合物在0。C下、氬氣中，冷卻干燥的乙醚(10ml)中的PEG(6.66mmol)和三乙胺(2.32ml，16.65mmol)的溶液，并且用曱磺酰氯(1.03ml，13.32mmol)對其逐滴處理。在0。C下，連續(xù)攪拌l小時，然后在室溫下攪拌2小時。蒸發(fā)醚，并將干燥的丙酮(15ml)加入到剩余物中，以4更沉淀三乙胺鹽酸鹽，其被從溶液過濾。將濾液用溴化鋰(2.31g,26.64mmol)處理，并加熱至回流20小時。然后用己烷稀釋混合物，并通過覆蓋有CeliteTM(0.5cm)的二氧化硅(3cm)短柱過濾，并用己烷洗脫。干燥濾液，過濾并蒸發(fā)以留下a，co-二溴-PEG，一種油狀物。通過實施例1中描述的方法，將干燥PEG與1，2-乙二胺四乙酸二酐反應(yīng)，然后，如在實施例1用十二烷胺或如在實施例3用十六烷胺或者用實施例3a-3k中的胺對其酰胺化。根據(jù)實施例6B的方法，按照在實施例8A中描述獲得的取代的PEG琥珀酰酯與1,4-二M丁烷共聚合。以相似的方式，下列酐與C16-7t-聚合物A結(jié)合。當使用低溶解度的酐時，在滲析之前，可將作為純化助劑的pH調(diào)節(jié)到4.5和6.5之間。如果需要，對O.lNHC1的第二次滲析提供聚合物的酸性形式。實施例llc:琥珀酸酐實施例lid:戊二酸酐實施例lie:鄰苯二甲酸酐通過與馬來酸酐或順式烏頭酸酐的酯化引入的反應(yīng)雙鍵也可被用來將含硫醇的配體加入到聚合物，如在下面實施例12所描述的。實施例12:C16-tt-聚合物A馬來酸氬酯的半胱氨酸加合物二氯熒光黃的熒光光譜在聚合物溶液(濃黃/橙)中對在水(黃綠)中的改變是視覺上可察覺的，并且給出如此提示染料不是在水環(huán)境中，而是i皮封裝在自組裝的聚合物顆粒核的有機環(huán)境中。實際上，熒光光i普的變化沒有被用作確定微環(huán)境(例如"脂質(zhì)探針，，)的極性變化的方法。在聚合物中的SudanIV溶液的顏色是紅棕色的，相對的，在乙醇溶液中是紅色的，當懸浮在水中是棕色粉末。EosinY沒有示出明顯的視覺改變(在水中粉色，在聚合物溶液中偏紅粉色(reddishpink))。實施例2:醫(yī)學相關(guān)物質(zhì)的增溶(溶解)如果需要用水、加熱、攪拌和聲波處理將千燥的聚合物重建。當溶液粘度太大時，將其稀釋。C16-ti-聚合物A在10%w/v下使用，葉酸的C16-tt-聚合物A在5%Wv下使用，C18-3t-聚合物B在2%w/v下使用。將C16《-聚合物A二甘醇酸酯(參見，"jt-聚合物的合成"，實施例lla)(1.23mmols重復單位，2.46mmols-COOH)的水溶液調(diào)節(jié)到pH4.5-6.5。加入碳二亞胺(EDCHC1，3.86mmols)和N-羥基丁二酰亞胺(2.6mmols)并在室溫下攪拌混合物大約60分鐘。加入NANA單馬來酸酯(2.49mmoles)的溶液-^上述制備，并且用TEMED調(diào)節(jié)pH到pH6-7。在室溫下，繼續(xù)攪拌多達26小時。通過透析純化產(chǎn)物，首先對pH4.5的20mmolar乙酸鈉，然后對水。移走保留物并儲存用于應(yīng)用。實施例3c:將N-乙酰神經(jīng)氨酸(NANA)經(jīng)由間隔區(qū)連接到C16-;r-聚合物A將半胱胺(2-氨基乙硫醇)鹽酸鹽(0.93mmol在水中)加入到等摩爾量的NANA單馬來酸酯(按上面描述制備溶液)，然后加入等摩爾量的TEMED以幫助將硫醇加成到雙鍵。該反應(yīng)后，用硅石(i-PrOH-EtOAc-水,4:3:2)上的TLC,直到反應(yīng)完成(用苔黑酚/H2S04或尿素/HCl試劑檢測，沒有O-馬來?；?NANA)以給出靶向部分D。通it^目同的方法，將半胱氨酸和谷胱甘肽加入到NANA和DANA的馬來酸單酯。上述實施例(3a-3g)中的所有聚合物結(jié)合物在透析后當用TLC上苔黑酚/硫酸或尿素/HCL試劑顯色時，對于神經(jīng)氨酸存在具有陽性反應(yīng)。實施例4:將扎那米韋連接到C16-;r-聚合物B將C16-;t-聚合物B(920mg)分散入30mL水中，并且向其中加入EDCHC1(1.2mmol)和N-羥基丁二酰亞胺(l.lmmol)。在環(huán)境溫度下，攪拌該混合物20分鐘，加入1ml水的5-乙酰氨基-7-(6'-氨基己基)-氨基甲酰氧(carbamyloxy)-4-胍基-2,3,4,5-四脫氧-D-甘油基-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸(enopyranosonicacid)(美國專利號6,242,582和6,680,054)(0.39g，0.67mmol)和TEMED(0.67mmols)的三氟乙酸鹽的溶液，將溶液在室溫下攪拌，并且反應(yīng)后，進行TLC。對3x1000ml去離子水透析反應(yīng)混合物(3500kDa截流膜)以除去低分子量反應(yīng)物和副產(chǎn)物。移出保留物并在6(TC下干燥至恒定重量。糖摻入的水平可以通過對胍基的比色分析檢測(Can.J.Chem.，36:1541(1958))。依照Potieretal，AnalBiochem.,29287(1979)的方法，可實行神經(jīng)氨酸酶分析。實施例5:連接含羞草堿用于半胱氨酸和含半胱氨酸的肽的一般過程:使用三乙胺作為催化劑，將tt-聚合物A的丙烯酸酯或馬來酸酯與半胱氨酸殘基反應(yīng)。向水中的聚合物二丙烯酸酯(0.3mmols重復單位，0.6mmols丙烯酸酯)懸液中，加入半胱氨酸(0.66mmol)和三乙胺(1.32mmol)。用氬氣沖洗該瓶，并在周圍溫度下攪拌過夜(大約18h)。珪石上TLC的反應(yīng)混合物(i-PrOH-乙酸乙酯-水，4:3:2)示出聚合物中半胱氨酸不存在和茚三酮-陽性點，這暗示將半胱氨酸加成到丙烯酸酯雙鍵。實施例6a:將抗狂犬病抗體片段連接到C16-7t-聚合物A二甘醇酸酯制備C16-;r-聚合物A馬來酸氫酯，開始用分子量4500的PEG。將BayRabTM人狂犬病免疫球蛋白(hlgG)用胃蛋白酶以通常的方式在酸性pH緩沖液中處理以產(chǎn)生F(ab，)2片段，其使用50KD濾器通過超濾進行純化。通過在上面實施例5中描述的EDC方法，將F(ab')2片段連接到PEG4500C16-;r-聚合物A二甘醇酸酯。實施例6b:將抗狂犬病抗體片段連接到C16-7t-聚合物A馬來酸氫酯對于高劑量治療組增加的存活時間為5.93小時(+M).48hSD),與之相比，陽性對照僅2.94小時(+/-0.751180)(圖l和2)。在配體質(zhì)量的基礎(chǔ)上，高劑量治療最多相應(yīng)于配體的0.03%,這假設(shè)最大聚合物-結(jié)合物取代比率為0.2w/w。因此，相比于未結(jié)合的配體對照，聚合物結(jié)合物示出明顯高水平的功效。[166在高劑量聚合物B-MNA結(jié)合物治療組中，一些小鼠的總組織學以及微觀檢測示出正常圖案，除了在骨髓部分治療的小鼠示出白細胞的水平輕微減少，這可歸因于流行性感冒感染的影響。在保護組(高劑量-8.9%，低劑量-6.2%)以及治療組(高劑量-9.0%,低劑量-9.4%)中的體重的減少小于陽性對照(-9.8%),這暗示與配體本身而不是聚合物的結(jié)合(圖3)。在未治療的小鼠中，0.7%的小重量增加發(fā)生。實施例2:對狂犬病的功效[167十只白色瑞士小鼠的組——^只大約20g、混合性別——被用于體內(nèi)保護分析。通過注射3x狂犬病病毒的LD50，攻擊小鼠。注射物是0.03mlCVS(攻擊病毒標準)狂犬病毒林，106的稀釋(1000>5()/1111)。一天到一天地監(jiān)控存活率、癱瘓和才幾體質(zhì)量。在25、48和72hr腹腔內(nèi)施用藥物，并且在25和48小時，大腦內(nèi)施用藥物，被研究。結(jié)果被表示在表1和2中。<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>*在第1-3天注射藥劑<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>權(quán)利要求1.用于治療或預防動物被病毒感染的方法，其包括給所述動物施用基本上由下列結(jié)構(gòu)組成的梳型聚合物其包含由交替的分支點部分B和親水的水溶性聚合物嵌段A形成的主鏈；以及具有疏水側(cè)鏈C和被連接到所述分支點部分的配體Z，其中每一疏水側(cè)鏈C獨立地選自以下所組成的組C6-C30直鏈的或支鏈的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；C6-C30環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；和疏水氨基酸、肽和聚合物；每一配體Z獨立地是對所述病毒表面具有特異性結(jié)合親和力的配體；s是鍵或間隔部分；n的值的范圍是3到大約100；p的平均值的范圍為大于1到4；和r的平均值的范圍為1到8。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種配體是N-乙酰神經(jīng)氨酸或其衍生物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述配體選自N-乙酰神經(jīng)氨酸、神經(jīng)氨酸P-曱基糖苷和4-胍基-2，4-二脫氧-2，3-脫氫-N-乙酰神經(jīng)氨酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種配體Z是對所述病毒表面具有特異性結(jié)合親和力的抗體或抗體片段。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述配體是衍生自人抗狂犬病IgG免疫球蛋白的F(ab')2片段。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種配體Z是選自KDYRGWKHWVYYTC、KDYRGWKO曹YYTC、KGWKH群YC(NH2)和KGWKO群YC(NH2)的肽。7.根據(jù)權(quán)利要求l-6中任一項所述的方法，其中所述水溶性聚合物嵌段A選自聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯亞胺)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、多糖和它們的共聚物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述聚合物嵌段A選自聚(乙二醇)、聚(丙二醇)和它們的共聚物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述聚合物嵌段A是聚(乙二醇)。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述聚合物嵌段A的平均長度在4和700單體單位之間。11.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚合物具有下列的結(jié)構(gòu)其中m是4-700，以及Y和Y'獨立地選自R、OR、COOR、SR、NHR、NRR，、ONHR、NHOR、NRNH2、NHNHR、NRNHR，和NHNRR，，其中R和R'獨立地選自以下所組成的組C6-C加支鏈的或直鏈的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；CVC3o環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；以及疏水氬基酸、肽和聚合物。12.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚合物具有下列的結(jié)構(gòu)其中m是4-700，W是O或NH，以及Y和Y'獨立地選自R、COR、COOR、CONHR、CONRR'、CONHOR、CONRNH2、CONHNHR、CONRNHR'和CONHNRR';其中R和R，獨立地選自以下所組成的組0<:3((支鏈的或直鏈的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；CVC3o環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親7jc取代基取代；以及疏水氨基酸、肽和聚合物。13.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚合物具有下列的結(jié)構(gòu):其中所述部分D衍生自具有下列通式的二胺'::』.,》,其中，每個X獨立為活性官能團，p是O-4，m是4-7005以及其中R和R，獨立地選自以下所組成的組C6-C鄧支鏈的或直鏈的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；0<:3。環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；以及疏水氨基酸、肽和聚合物。14.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚合物具有下列的結(jié)構(gòu):'(cx5H2CH2)1其中m是4-700，W是O或NH，以及R和R，獨立地選自以下所組成的組(VC3。支鏈的或直鏈的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；Q-C3o環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親7jc取代基取代；以及疏水氨基酸、肽和聚合物。15.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚合物具有下列的結(jié)構(gòu)其中m是4-700,L是亞苯基、CrC6亞烷基或笨二亞甲基，W是O或NH，以及R和R'獨立地選自以下所組成的組Q-C:M)支鏈的或直鏈的烴，其任選地用一個或多個親K取代基取代；C6-C30環(huán)狀或多環(huán)的烴，其任選地用一個或多個親水取代基取代；以及疏水氨基酸、肽和聚合物。16.根據(jù)權(quán)利要求l-4中任一項所述的方法，其中所述病毒是流行性感冒病毒。17.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一項所述的方法，其中所述病毒是狂犬病病毒。18.—種肽，其選自以下所組成的組KDYRGWKOWVYYTC、KGWKHWVYC(NH2)和KGWKOWVYC(NH2)。全文摘要本發(fā)明提供雙親分子可生物降解的共聚物，其含有具有側(cè)鏈脂肪族基團作為疏水成分的親水性主鏈。該聚合物在水環(huán)境中形成納米大小分子聚集物，其具有疏水內(nèi)部，其能溶解不溶的有機化合物并且破裂病毒包衣蛋白。聚合物任選地表現(xiàn)活性官能團的特征，其提供抗體、配體和其它調(diào)節(jié)聚集物粘附到病毒目標的靶向部分的連接點。文檔編號A61K31/795GK101636169SQ200780050316公開日2010年1月27日申請日期2007年1月22日優(yōu)先權(quán)日2007年1月22日發(fā)明者A·L·安頓,A·迪萬,J·G·塔塔克申請人:阿列克斯塞爾公司