專利名稱：：一種抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種保健藥品，特別是一種抗疲勞及增強(qiáng)人體免疫力的保健藥品。(二)
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，社會競爭的加劇，疲勞、免疫力低下成為人們經(jīng)常遇到的問題。疲勞是一種生理性現(xiàn)象，對人來說是一種保護(hù)性的機(jī)制。這是身體向我們發(fā)出應(yīng)該休息的信號。如果對它不管不顧，身體就會受到損害，最后積勞成疾。免疫力低下者則容易感到疲勞，但是査不出器質(zhì)性病變；經(jīng)常感冒傷口容易感染，愈合慢；腸胃功能差(這里主要是指稍微吃得不合適就上吐下瀉)。從國家食品藥品監(jiān)督管理局基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫査詢得知，申報(bào)保健功能為緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力的保健品有23個(gè)，其中20個(gè)為中藥材組方的中藥保健品。中藥保健品多為藥材經(jīng)過適當(dāng)?shù)墓に囂崛≈苽涠?，藥材提取后的浸膏大多沒有經(jīng)過進(jìn)一步的精制，因而其服用量較大，再者由于藥材的來源不同，因而產(chǎn)品功能療效可能會有差異，其質(zhì)量不能達(dá)到完全控制，由于中藥材成分復(fù)雜，還存在某些功效成分不明確的缺點(diǎn)。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種療效可靠，成份簡單的緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力的保健藥品。本發(fā)明是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，是由以下重量份數(shù)的藥用原料制成輔酶Qu)15-60維生素C12.5-200維生素E1.5-50葉酸0.04-0.56本發(fā)明所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，所述的藥用原料重量配比可優(yōu)選為輔酶Q,。20維生素C50維生素E7.5葉酸0.15本發(fā)明抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，所述藥物可做成散劑、丸劑、片劑膠囊等不同的劑型。本發(fā)明所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力保健藥品，可由以下重量份數(shù)的輔用原料制成大豆油90-1500蜂蠟5-150本發(fā)明所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力保健藥品，可由以下重量份數(shù)的原料制成3輔酶Qw20維生素C50維生素E7.5葉酸0.15大豆油307蜂蠟16如上所述的本發(fā)明保健藥品軟膠囊的制備方法，包括以下步驟a)稱取輔酶Q,。、維生素C、維生素E、葉酸、大豆油、蜂蠟，備用；b)將所述重量配比的大豆油加熱后，加入所述重量配比的蜂錯(cuò)；c)將所述重量配比的輔酶Qw、維生素E，加入到上述油液中，攪拌使溶解，降溫到適度后，加入所述重量配比的葉酸、維生素C，攪拌混合均勻，用膠體磨研磨均勻，灌裝，即得。本處方中功效成分為輔llQw、維生素E、維生素C、葉酸，其中輔瞎Q,。、維生素C、維生素E，均為抗氧劑，能淸除自由基，提高免疫力，葉酸能清除自由基，保護(hù)細(xì)胞膜，各種成分相互配合，通過控制自由基，保護(hù)人體免疫系統(tǒng)，便可以緩解人們心理和生理的壓力，從而達(dá)到緩解體力疲勞，增強(qiáng)免疫力的保健功能。本產(chǎn)品組方中，以輔酶Q,。為主，配以其他三種成分，他們相互沒有配伍禁忌，且能協(xié)同作用。所述的輔酶Qw,它是細(xì)胞自身產(chǎn)生的天然的抗氧劑和細(xì)胞代謝激活劑，具有保護(hù)和恢復(fù)生物膜完整性、穩(wěn)定膜電位作用，是機(jī)體的非特異性免疫增強(qiáng)劑，因此顯示出極好的抗疲勞作用，輔瞎Q,。使細(xì)胞保持良好健康的狀態(tài)，因而機(jī)體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛，此外，它還能促進(jìn)熱量轉(zhuǎn)化為能量，在人體熱量轉(zhuǎn)化(為能量)過程中發(fā)揮重要作用。所述的維生素E是一種天然的脂溶性維生素，其基本生理作用是抗氧化功能，增強(qiáng)細(xì)胞膜免受自由基的侵襲，主要作用為保護(hù)細(xì)胞，避免其受氧化作用的侵害，從而達(dá)到抗疲勞的效果，此外還能提髙機(jī)體免疫力，對體液免疫和細(xì)胞免疫均有明顯的促進(jìn)作用。所述的維生素C作為天然的自由基清除劑，可以直接或間接消除自由基，從而可保護(hù)生物膜完整性，改善機(jī)體工作能力，推遲或減輕疲勞發(fā)生，加快疲勞恢復(fù)，提髙機(jī)體內(nèi)氧的利用，對提高有氧運(yùn)動能力具有一定的作用。此外，維生素C還能促進(jìn)免疫球蛋白(抗體〉的形成以及增強(qiáng)體液免疫與細(xì)胞免疫功能，從而提髙機(jī)體免疫力。所述的葉酸是人體所需的重要維生素，參與核酸、蛋白質(zhì)和磷脂的代射，同細(xì)胞的分化、增殖密切相關(guān)。葉酸能改善細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)，減少同型半胱氨酸的產(chǎn)生；加強(qiáng)B仏與eN0S結(jié)合并有直接的抗自由基作用。葉酸在抗自由基，保護(hù)細(xì)胞功能，提高免疫力等方面起著重要作用。本發(fā)明的有益效果是成份簡單，療效可靠，具有緩解體力疲勞，增強(qiáng)免疫力的保健功能。(四)圖1為小鼠血清中S0D活力和MDA含量示意2為輔酶Q,n高效液相色譜3為小鼠血漿及組織中輔酶Q,n含量示意圖具體實(shí)施方式實(shí)施例l:稱取輔酶輔酶Q,。20g，維生素C50g,維生素E7.5g,葉酸O.15g,備用，稱取307g大豆油加熱適當(dāng)溫度，稱取16g的蜂蠟加入油中.，使緩緩溶解呈透明狀；將所述重量的輔酶Qm、維生素E，加入到上述油液中，攪拌使全部溶解，溫度降后，加入所述重量的葉酸、維生素C,攪拌使混合均勻，用膠體磨研磨均勻，灌裝到的膠囊中，即得軟膠囊。實(shí)施例2:稱取輔酶Q,。5g,維生素C15g，維生素E2g，葉酸0.5g,加以適量輔料混合均勻，壓制成片，即得片劑。實(shí)施例3:稱取輔酶Q,。55g，維生素C180g，維生素E50g，葉酸0.04g，加以輔料，充分?jǐn)嚢?，制粒，干燥，整粒，包裝成袋即可，即得一種顆粒劑。為證明本發(fā)明的效果，用本發(fā)明軟膠囊作樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析試驗(yàn)一本發(fā)明的保健藥品對小鼠的抗疲勞作用本試驗(yàn)通過小鼠試驗(yàn)研究了本發(fā)明的保健藥品的抗疲勞作用，同時(shí)研究了輔酶Q,c在小鼠血漿、肝臟和心臟組織中的分布，旨在為開發(fā)本發(fā)明的保健藥品提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.1試劑與儀器輔酶(31。(98.0%~101.0%):日清制藥；輔酶Q,。標(biāo)準(zhǔn)品Sgima公司；生理鹽水國營張家港制藥廠；肝素生化試劑，中國醫(yī)藥凍團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司；VCXSO型超聲處理器美國SONICS&MATERIALS公司；Nano-ZS90型粒徑分析儀英國Mavlern公司；7170A全自動生化分析儀日本R立公司；超氧化物歧化酶(s叩eroxdiedsimutase，SOD)、丙二醛(mlaondaildehyde,MDA)、肝糖元、血乳酸試劑盒購自南京建成生物工程研究所；高效液相色譜系統(tǒng)(配有1525二元泵，2996二極管陣列檢測器和Empower色譜工作站)美國Waters公司。1.2試驗(yàn)動物及飼料雄性昆明種小鼠體重(20土2)g,80只購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司，許可證號SCXK(滬)2003-0003;普通大小鼠生產(chǎn)繁殖飼料中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動物中心研制，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司生產(chǎn)。1.3試驗(yàn)制劑制備方法本發(fā)明的保健藥品的制備將大豆油加熱，加入適量的蜂蠟，使溶解呈透明狀，然后將處方量輔酶Q,。、維生素E，加入到上述油液中，攪拌使全部溶解，溫度降低后，加入葉酸、維生素c，攪拌使混合均勾，用研磨均勾，灌裝，即得。陽性對照LiquidCoQ,。(輔酶Q,。含量為10mg/ml):NurittionalSpecaliites公司生產(chǎn)。1.4試驗(yàn)方法1.4.1血漿、心臟和肝臟中輔酶Qw含量的測定(1)色譜條件色譜儀Waters2690;檢測器Waters996紫外檢測器；色譜柱SunFrieCl8ODS(150X4.6mm，5um);流速lml/min;檢測波長UV275nra;柱溫35";進(jìn)樣量20ul。流動相甲醇乙醇=30:70(V:V)(血漿、心臟)，甲醇乙醇=50:50(V:V)(肝臟)，(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取輔酶QM)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(108.9ug/m1)0,0.02，0.05，0.1,0.3，0.5，1.0，2.0，3.0,5.0ml置于10ml容量瓶中，用乙醇定容至刻度得標(biāo)準(zhǔn)系列，分別進(jìn)樣20ul，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，得回歸方程A=18959C-5776.2(R-0.9990)流動相甲醇乙醇=30:70(V:V);A二16987C+422.45(IM).9997)流動相甲醇乙醇=50:50(V:V)。(3)樣品預(yù)處理參考文獻(xiàn)方法并改進(jìn)取肝素抗凝的血漿樣品500ul，加無水乙醇lml,渦旋振蕩lmin,加入正己烷3ml，渦旋振蕩3min后再加入正己烷0.5ml,靜置5min，高速離心15min(2500r/min)，轉(zhuǎn)移上層清液于離心管中，(45±0.5)T水浴通&吹干，殘留物連同離心管于-20'C冰箱避光冷凍保存，待測。測定前用lOOwl無水乙醇溶解，進(jìn)樣20lU作HPLC分析。記錄輔酶Q,。的峰面積，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。因輔酶Q,。結(jié)構(gòu)中6含有異戊烯基，見光易降解，故樣品的預(yù)處理均在避光條件下進(jìn)行。取心臟和肝臟組織勻漿液2nd,處理和測定方法同上述血漿樣品。1.4.2受試小鼠分組與灌胃劑量試驗(yàn)小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為5組，即陰性對照組、陽性對照組、低劑量試驗(yàn)組、中劑量試驗(yàn)組、高劑量試驗(yàn)組，每組16只。試驗(yàn)期間各組小鼠基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，自由飲用自來水。采用定量灌胃方式直接將樣品灌入，灌胃量為0.lral/10g，每天定時(shí)灌胃1次。陰性對照組以生理鹽水灌胃，陽性對照組及低、中、高劑量組小鼠混合飲料灌胃總量為0.lml/10g/d,見表l。表1小鼠灌胃劑量表+組別生理鹽水/mlLjquidCoQio/mL本發(fā)明的保健藥品/mL運(yùn)動型飲料/mL輔酶Qw劑量/(mgkg畫1d')陰性對照組0.10——-0陽性對照組—0.02—0.0820低劑量組——0.02(LC=100.084.3中劑量組——0.02(LC=200.088.6高劑量組—-0.02(LC=30%)0.0812.9+小鼠灌胃劑量(0.lmL/10g*d)考慮到磷酯也具有抗疲勞作用，因此低、中、高3個(gè)劑量是在保證磷酯等輔料濃度相同的前提下用3個(gè)載量水平的本發(fā)明的保健藥品進(jìn)行試驗(yàn)，進(jìn)一歩研究輔酶Q，。的抗疲勞作用。連續(xù)灌胃第30天時(shí)每組分為3個(gè)亞組進(jìn)行運(yùn)動耐力試驗(yàn)并測定相應(yīng)指標(biāo)。1.4.3運(yùn)動耐力試驗(yàn)以負(fù)重游泳的方式建立疲勞模型,于末次灌胃30min后，在小鼠尾根部負(fù)重5%(g/g)體重的鉛絲，放入水溫為25土11C、水深不低于30cm的游泳箱中，每箱一次放入4只小鼠。以秒表記時(shí)，游泳開始至死亡的時(shí)間為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間(s)。1.4.4肝糖原、血清尿素氮含量、血清中SOD活力、MDA含量及組織中輔酶Q,。的含量的測定末次灌胃30min后，將小鼠置于水溫為30r的游泳箱中不負(fù)重游泳90min后，摘眼球采血，分離血清，采用7170A全自動生化分析儀測定血清尿素氮；SOD活力、MDA含量測定按試劑盒說明書操作。同時(shí)立即脫頸椎處死取肝臟和心臟，以生理鹽水沖洗，用濾紙吸干。精確稱取肝臟50mg,按試劑盒說明書操作測定肝糖原含量；將剩余肝臟及心臟組織稱總重后分別加入適量冷生理鹽水，在冰浴中用玻璃勻漿器制備一定濃度的組織勻漿，采用1.4.1中樣品預(yù)處理方法測定并計(jì)算肝臟和心臟中輔酶Q,。的含量。1.4.5血乳酸含量變化及血漿中輔酶Q,。含量的測定末次灌胃30min后，小鼠眼眶取血，測定基礎(chǔ)乳酸含量，再將小鼠放人游泳箱中(水深30cm，水溫3(TC)中負(fù)重4^(g/g)體重的鉛絲游泳10min,分別于游泳后立即對小鼠眼眶取血和休息20min后摘眼球取血，按試劑盒說明測定全血乳酸含量。計(jì)算血乳酸曲線下面積，用以判斷運(yùn)動后血乳酸變化情況血乳酸曲線下面積=5X(游泳前血乳酸值+3X游泳后即刻血乳酸值+2X游泳后休息20min血乳酸值)比較運(yùn)動前后血乳酸含量變化情況。同時(shí)采用1.4.1中樣品預(yù)處理方法測定血漿中輔酶Q,。的含量。1.4.7試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)用S士S.D.表示，用SPSS10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05為差異具有顯著性。2結(jié)果與討論2.1本發(fā)明的保健藥品對小鼠體重的影響由表2可知，灌胃飼養(yǎng)30d后各組小鼠體重均無顯著差異，這表明試驗(yàn)制劑不會對小鼠的正常生長產(chǎn)生明顯影響。表2各組小i鼠體重的變化(『5,x士S.D.)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.2本發(fā)明的保健藥品對小鼠運(yùn)動耐力與生化指標(biāo)的影響運(yùn)動耐力的提高是抗疲勞能力的直接體現(xiàn)。小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果顯示(見表3):試驗(yàn)組與陰性對照組相比均能延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高運(yùn)動耐力，且中、高劑量組與陰性對照組之間存在顯著差異(P<0.05)。疲勞的產(chǎn)生與高強(qiáng)度或長時(shí)間運(yùn)動后體內(nèi)能量物質(zhì)如糖原等減少，代謝產(chǎn)物如血清尿素氮、乳酸蓄積等因素有關(guān)。肝糖原是維持血液中葡萄糖正常水平的重要貯存物、也是肌纖維收縮時(shí)能量的來源。從表3可看出，3個(gè)劑量組肝糖原含量均高于陰性對照組，其中陽性對照組及中、高劑量組與陰性對照組之間存在顯著差異(P〈0.05)，說明本發(fā)明的保健藥品有助于小鼠負(fù)重游泳后肝糖原消耗量的減少。運(yùn)動后中、高劑量組血清尿素氮(BUN)水平明顯低于陰性對照組(P〈0.05)，中、高劑量組血乳酸曲線下面積與陰性對照組相比明顯降低(P〈0.05)。王啟榮等通過人體試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，含輔酶Q,。的復(fù)合抗氧化劑可降低血清BUN水平，有促進(jìn)運(yùn)動員對運(yùn)動負(fù)荷適應(yīng)以及提高身體機(jī)能恢復(fù)的作用。YanJ等研究認(rèn)為，輔酶Q,。的生物活性主要來自于其醌環(huán)的氧化還原特性和其側(cè)鏈的理化性質(zhì)，其醌環(huán)在氧化呼吸鏈中起傳遞電子和質(zhì)子的作用，這種作用不僅是所有生命形式必不可少的，而且還是形成ATP的關(guān)鍵。而ATP是機(jī)體能量的主要儲存形式，也是所有細(xì)胞功能賴以正常發(fā)揮的重要基礎(chǔ)。表3小鼠抗疲勞相關(guān)指標(biāo)(n-5，x土S.D)組別負(fù)重游泳時(shí)間/s肝糖原/Ong*g-1肝臟)血清尿素氮/(咖。1血乳酸曲線下面積/(mmoK'+min—1)陰性對照組457.75±91.7713.59±12.259.00±1.03334.62±37.60陽性對照組638.00±76.6817.96±1.78*8.80±0.77302.06±31.32低劑量組545.25±64.7516.75±2.638.64±0.89308.57±29.08中劑量組713.00±157.11.16.75±2.637.60±10.38*257.97±14.75**高劑量組1130.75±195.23*19.56±1.74*6.82±0.92種218.36±36.46**2.3本發(fā)明的保健藥品對SOD活力和MDA含量的影響SOD為體內(nèi)唯一直接特異性清除自由基的酶，其活性越高代表機(jī)體清除自由基的能力越強(qiáng)，該酶活性下降，導(dǎo)致機(jī)體自山基過剩和氧化損傷。過多的自由基攻擊細(xì)胞膜中不飽和脂肪酸，啟動脂質(zhì)過氧化反應(yīng)形成MDA，MDA含量可代表機(jī)體中脂質(zhì)過氧化程度。運(yùn)動中自由基的大量產(chǎn)生和血漿脂質(zhì)過氧化物的顯著升高，是導(dǎo)致運(yùn)動性疲勞產(chǎn)生的重要原因。圖2結(jié)果顯示，陽性對照組和低、中、高劑量組小鼠血清活性超氧化物歧化酶9(SOD)活力明顯高于陰性對照組(P〈0.05)，但只有高劑量組與陽性對照組之間存在顯著差異。陽性對照組和低、中、高劑量組血清中丙二醛(MDA)的含量也顯著低于陰性對照組(P〈0.05)，但低、中、高劑量組與陽性對照組之.間無顯著差異。這表明，補(bǔ)充外源性輔酶Q,。有減少組織氧化損傷的趨勢，避免脂質(zhì)過氧化，從而延緩疲勞的產(chǎn)生或有助于運(yùn)動后疲勞的消除。有研究表明含輔酶Q,。的復(fù)合抗氧化劑可降低運(yùn)動員訓(xùn)練后血清MDA水平，提高血清SOD活力，這可能是運(yùn)動后身體機(jī)能的恢復(fù)與抗氧化作用密切相關(guān)。研究認(rèn)為，輔酶Q，。作為氧自由基清除劑可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)非特異地與細(xì)胞各個(gè)部位相結(jié)合，減少氧自由基的生成，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)SOD活性中心及其結(jié)構(gòu)免受自由基氧化損傷，提高S0D活性。2.5本發(fā)明的保健藥品對血漿及組織中輔酶Qw的影響樣品分析方法專屬性測定結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，在試驗(yàn)確定的色譜條件下分析，當(dāng)流動相條件為甲醇乙醇=30:70(V:V)時(shí)，新能原的保健藥品輔酶Q,。的保留時(shí)間約為7.7min;當(dāng)流動相條件為甲醇乙醇=50:50(V:V)時(shí)，輔酶Q皿。的保留時(shí)間約為12.8min,無雜質(zhì)峰干擾。與陰性對照組相比，陽性對照組、3個(gè)劑量組血漿和心臟中輔酶Q,。的含量均有升高但無顯著差異(見圖3a和圖3b)。陽性對照組、3個(gè)劑量組肝臟中輔酶Q,。的含量與陰性對照組相比均顯著升高(P〈0.05),并且中、高劑量組與陽性對照組肝臟中輔酶Q,。的含量相比顯著升高(P〈0.05)(見圖3c),說明以的保健藥品為載體能提高輔酶Q,。在血漿、肝臟和心臟中的含量。有研究表明與人類不同，小鼠內(nèi)生輔酶Qw的含量低于另一種醌的同系物輔酶Q9，但通過長期補(bǔ)充外源性輔酶Qu)可顯著提高其在小鼠線粒體和組織中的含量，大部分輔酶Q,。進(jìn)入血液循環(huán)后被肝臟吸收并蓄積，也能分布于心臟、肌肉等部位。外源性輔酶Q,。可被細(xì)胞膜上的氧化還原酶和硫辛酰胺脫氫酶轉(zhuǎn)化為還原形式防止運(yùn)動引起的細(xì)胞氧化損傷，體內(nèi)的氧化磷酸化反應(yīng)可能使輔酶Qw的消耗量增加，導(dǎo)致血漿中含量降低，心臟、肝臟組織中輔酶Qw與運(yùn)動產(chǎn)生的自由基反應(yīng)，因此，其含量在一定程度上降低有可能是血漿、心臟中輔酶Qu)濃度無顯著差異的原因之一。值得注意的是，肝臟中輔酶Q，。含量受攝取量的影響很大其含量顯著升高。3結(jié)論本發(fā)明的保健藥品能延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，維持游泳小鼠肝糖原水平，抑制蛋白質(zhì)分解，降低血清中血乳酸含量，具有一定的抗疲勞作用。輔酶Q,。作為生物抗氧化劑，可通過消除體內(nèi)因運(yùn)動而產(chǎn)生的過氧自由基，提高血清中SOD活力，降低血清中MDA含量，從而延緩疲勞的產(chǎn)生，有助于運(yùn)動后疲勞的消除。與陽性對照組(國外乳狀液產(chǎn)品)相比，本發(fā)明的保健藥品能有效提高了輔酶Q10在小鼠肝臟中的蓄積量。試驗(yàn)二本發(fā)明的保健藥品對小鼠的增強(qiáng)免疫力作用本試驗(yàn)通過小鼠試驗(yàn)研究了本發(fā)明的保健藥品的增強(qiáng)免疫力作用。1.實(shí)驗(yàn)動物ICR種小白鼠，許可證號SCXK(滬)2002-0010，體重1822克，雌性，由中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動物中心提供清潔級動物。實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)室溫20—251C,相對濕度40—70%，實(shí)驗(yàn)動物許可證號SYXK(滬)2004-0011,動物飼養(yǎng)料，由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動物飼料科技服務(wù)有限公司提供，登記證號:蘇E飼生字(2002)006。2.劑量設(shè)計(jì)本發(fā)明人體推薦劑量每閂0.8g/60kg,本試驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，另設(shè)蒸餾水空白對照組。3.給樣途徑:灌胃。4.實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果4.1體重:動物稱重，按體重隨機(jī)分組，分為20組，每組10只，每四組唯一實(shí)驗(yàn)組，按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)30天，每周稱一次，計(jì)算實(shí)驗(yàn)初、中和實(shí)驗(yàn)?zāi)w重。免疫一組進(jìn)行NK細(xì)胞和淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)，免疫二組進(jìn)行DTH、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)試驗(yàn)，免疫三組進(jìn)行溶血空斑和溶血素試驗(yàn)，免疫四組進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)，免疫五組進(jìn)行吞噬試驗(yàn)。本發(fā)明(免疫一組)對動物體重(克)的影響組別動物數(shù)(只)初期體重中期體重終期體重增重對照1019.3±0.828.4±1.035.5±1.216.2±1.7低劑量1019.7±0.428.5±0.935.6±0.815.9±1.0中劑量1019.5±0.528.4±0.635.4±1.215.9±1.2高劑1019.2±0.729.5±1.136.0±1.516.8±2.0由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著差異。本發(fā)明(免疫二組)對動物體重(克)的影響組別動物數(shù)(只)初期體重中期體重終期體重增重對照1019.5±0.528.6±0.635.2±1.915.7±1.7低劑量1019.7±0.529.2±0.635.8±1.116.1±1.3中劑量1019.2±0.628.3±0.835.3±1.116.1±1.0高劑1019.5±0.728.3±0.735.4±1.215.9±1.2由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著差異。本發(fā)明(免疫三組)對動物體重(克)的影響組別動物數(shù)(只)初期體重中期體重終期體重增重對照1019.2±0.428.6±0.835.2±1.416.0±1.4低劑量1019.3±0.328.4±1.035.3±0.516.0±0.7中劑量1019.6±0.528.7±0.935.2±1.415.6±1.4高劑1019.3±0.628.6±0.735.9±1.216.6±1.3由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著差異。本發(fā)明(免疫四組)對動物體重(克)的影響組別動物數(shù)(只)初期體重中期體重終期體重增重對照1019.4±0.628.6±1.135.5±1.616.1±1.6低劑量1019.7±0.728.8±0.935.8±1.916.1±2.3中劑量1019.1±0.728.7±0.635.8±1.116.7±1.1高劑1019.1±0.828.8±0.735.9±1.116.8±0.9由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著差異。本發(fā)明(免疫五組)對動物體重(克)的影響組別動物數(shù)(只)初期體重中期體重終期體重增重對照1019.4±0.628.7±1.135.7±1.316.3±1.5低劑量1019.4±0.928.9±0.935.2±1.015.8±1.7中劑量1019.5±0.629.2±0.635.5±1.416.0±1.6高劑1019.3±0.629.1±0.834.8±1.415.5±1.7由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著差異。4.2血清溶血素試驗(yàn)動物連續(xù)給樣30天，用2%(v/v)SRBC免疫動物五天后，眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在96孔微量血凝板上加25ul血清，以后各排作對倍稀釋，每孔加1WSRBClOOul,震蕩后37"放置3小時(shí)，當(dāng)血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落后觀察結(jié)果。血清溶血素試驗(yàn)組別動物數(shù)(只)抗體積數(shù)對照1049.0±9.42低劑量1049.8±8.45中劑量1091.1±19.72*高劑量10138.7±25.70**&<0.05與對照組相比(經(jīng)方差分析)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明中劑量、高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異。4.3抗體生成檢測試驗(yàn)動物連續(xù)給樣30天，將腿纖維羊細(xì)胞免疫五天后，動物頸椎脫臼處死，去脾臟制脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度5Xl(T個(gè)/ml，將表面培養(yǎng)基加熱溶解，放451C水保溫，與等量pH7.2—7.4、2倍濃度的Hanks液混合，分成O.5ml每試管，再加入50ull00KSRBC,20ul脾細(xì)胞懸液，速混勻，傾于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，放入C02培養(yǎng)箱溫育1.5h，再用緩沖稀釋的補(bǔ)體(1:10)加到平皿，溫育1.5h,計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)，結(jié)果用方差分析統(tǒng)計(jì)。抗體生成檢測試驗(yàn)組別動物數(shù)(只)溶血空斑數(shù)對照109.5±2.17低劑量109.6±2.59中劑量1012.0±3.16髙劑量1022.3±3.80統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異。4.4胸腺指數(shù)脾指數(shù)測定動物連續(xù)給樣30天，稱重，頸椎脫臼處死，取胸腺、脾稱重，計(jì)算胸腺指數(shù)脾指數(shù)。13胸腺指數(shù)、脾指數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明各劑量組與對照組相比均無顯著性差異.4.5小鼠碳廓清試驗(yàn)動物連續(xù)給樣30天，為靜脈注射1:3稀釋的印度墨汁,2分鐘后從眼靜脈取20ul加Na^0:，溶液中，測0D值。計(jì)算吞噬指數(shù)，結(jié)果用方差分析統(tǒng)計(jì)。碳廓清試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>tpO.05與對照組相比(經(jīng)方差分析)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明中劑量、高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異。4.6ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)動物連續(xù)給樣30天，頸椎脫臼處死，取脾臟制脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度2X106個(gè)/ml,將細(xì)胞懸液分兩空加入24孔培養(yǎng)板，每孔1ml，一孔加50ulConA，另一孔對照，于37"、5%C02培養(yǎng)72h,培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔吸取上清液0.7ml，加入不含小牛血清的PRMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT(5mg/ml)50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，待紫色結(jié)晶溶解，以570nm波長比色，結(jié)果用方差分析統(tǒng)計(jì)。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*<0.05與對照組相比(經(jīng)方差分析)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明中劑量、高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異。4.6DTH測定動物連續(xù)給樣30天，去毛，將l%DNFT50ul涂抹致敏。五R后用19tDNFT10ul抹于小鼠右耳。24小時(shí)后脫臼處死，取8mm左右二耳，稱重，計(jì)算腫脹度。DTH測定<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明各劑量組與對照組相比均無顯著性差異.4.7NK細(xì)胞活性測定動物連續(xù)給樣30天，頸椎脫臼處死，取脾臟，制脾細(xì)胞懸液(效應(yīng)細(xì)胞)，去傳代后24hYAC-1細(xì)胞加1640完全培養(yǎng)液，使細(xì)胞濃度為1Xl()5個(gè)/ml(靶細(xì)胞)，取靶細(xì)胞、效應(yīng)細(xì)胞各lOOul,加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自動釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各lOOul,最大釋放孔加耙細(xì)胞和1%NP40各100ul，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)復(fù)孔,于371C、(X培養(yǎng)箱中四小時(shí)，每孔吸取上清液100ul至平地96孔培養(yǎng)板，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100ul，反應(yīng)3分鐘，每孔加lmol/L的HCL30ul終止，用酶標(biāo)儀在490mm處測光密度值(OD)。NK細(xì)胞活性擁定組別動物數(shù)(只)NK細(xì)胞活性(%)對照1026.99±1.73低劑量1029"±1.75中劑量1033.04±4.74*離劑量1033.44±3,18**p<0.05與對照組相比(經(jīng)方差分析〉統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明中劑且、高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異，4.7小鼠腹腔巨睡細(xì)胞吞瞎雞紅細(xì)胞試驗(yàn)動物連續(xù)給樣30天，每鼠腹腔注射2W雞紅細(xì)胞ft液l，隔30分鐘，頸椎股臼處死，固于鼠板，剪開腹壁&K，注射生理鹽水2轉(zhuǎn)動鼠板l分鐘，吸出旗腔洗液l，分滴于2篇玻片，37"解箱濕孵加分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以hl丁翻甲醉溶液固定，戰(zhàn)~酸緩沖%&^分鐘，用蒸館水漂洗瞎干，油鏡鎮(zhèn)檢，計(jì)算吞《%^吞曬指數(shù)，巨瞎細(xì)胞吞瞎試驗(yàn)組別動物數(shù)(只〉吞鵬吞鵬數(shù)對照1011.0±1.80.164±0.03低劑量1010.9±2.00.161±0,03中劑量1013.4±2.3*0.加5±0.04*離劑量1017.6±2.0*0296±0.04**])<0.05與對照組相比(經(jīng)方差分析)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明中劑量、高劑量組與對照組相比均具有顯著性差異.5.結(jié)論:動物經(jīng)口給予本發(fā)明具有坩強(qiáng)免疫力的作用，1權(quán)利要求1.一種抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，其特征在于它主要是由以下重量份數(shù)的藥用原料制成輔酶Q105-60維生素C12.5-200維生素E1.5-50葉酸0.04-0.6。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，其特征在于所述的藥用原料重量配比為輔酶Q,"20維生素C50維生素E7.5葉酸0.15。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力的保健藥品，其特征在于所述藥物的劑型為軟膠囊、片劑、顆粒劑或膠S4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力保健藥品，其特征在于包括以下以下重量份數(shù)的輔用原料大豆油90-1500蜂蠟5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗疲勞及增強(qiáng)免疫力保健藥品重量份數(shù)的原料輔酶Q1(>20維生素C維生素E7.5葉酸大豆油307蜂蠟6.—種如權(quán)利要求4或5所述的保健藥品的制備方法，包括以下歩驟a)稱取輔酶Ch。、維生素C、維生素E、葉酸、大豆油、蜂蠟，備用；b)將所述重量配比的大豆油加熱后，加入所述重量配比的蜂蠟；C)將所述重量配比的輔酶Q,。、維生素E，加入到上述油液中，攪拌使溶解，降溫到適度后，加入所述重量配比的葉酸、維生素C，攪拌混合均勻，用膠體磨研磨均勻，灌裝到膠囊中，即得軟膠囊。全文摘要本發(fā)明公布了一種抗疲勞及增強(qiáng)人體免疫力的保健藥品及其制備方法。它主要是由以下重量份數(shù)的藥用原料制成輔酶Q105-60、維生素C12.5-200、維生素E1.5-50、葉酸、0.04-0.6，本發(fā)明成份簡單，療效可靠，具有緩解體力疲勞，增強(qiáng)免疫力的保健功能。文檔編號A61K31/122GK101322711SQ20081001372公開日2008年12月17日申請日期2008年1月9日優(yōu)先權(quán)日2008年1月9日發(fā)明者祺董申請人:濟(jì)南老來壽生物技術(shù)有限公司