專利名稱：：抗組織增生(血管再狹窄)組合物及應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及治療血管再狹窄或其他組織增生的組合物及其應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：冠狀動(dòng)脈疾病冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病是一種由血管內(nèi)膜組織增生導(dǎo)致的慢性的冠狀動(dòng)脈堵塞或變窄。從1900年起它已成為危害西方社會(huì)的頭號(hào)疾病，近年代，盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有著顯著的進(jìn)步,該病不僅在西方國(guó)家，在中國(guó)也成為患者死亡的最常見原因。在美國(guó)有接近1400萬(wàn)的美國(guó)人患有冠心病，其中約50萬(wàn)人死于急性的心肌梗塞；每年用在治療該疾病的費(fèi)用超過(guò)1120億。目前廣泛存在的冠心病危險(xiǎn)因素如肥胖，糖尿病和吸煙均表明在今后相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，該疾病將繼續(xù)嚴(yán)重的危害到人類的健康。冠狀動(dòng)脈搭橋手術(shù)是治療冠心病的常用方法，然而其較高死亡率和術(shù)后并發(fā)癥,以及昂貴的手術(shù)費(fèi)用限制了該方法的廣泛應(yīng)用。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)和冠狀動(dòng)脈支架植入(Stenting)術(shù)這兩種治療方法，是近20年里才發(fā)展起來(lái)的治療冠心病有效的方法，近幾年內(nèi)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)是將帶有可擴(kuò)張球囊的導(dǎo)管插入到原發(fā)性冠狀動(dòng)脈粥狀斑塊或繼發(fā)性的血管再狹窄內(nèi)，從而提高阻塞血管的通暢性和增加心肌血流量。冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)后的主要問(wèn)題是術(shù)后冠脈突發(fā)性閉合。為了解決這一問(wèn)題，臨床心臟病醫(yī)生于1986年引進(jìn)了支架植入術(shù)，即在球囊擴(kuò)張后的血管內(nèi)植入金屬支架，以保持血管的永久通暢。支架植入術(shù)的引入是介入心臟病學(xué)的一次革命。在冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)中，支架(細(xì)小金屬支架)的作用是支撐血管壁和減少血管成形手術(shù)后再狹窄的風(fēng)險(xiǎn)。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈內(nèi)成形術(shù)及/或支架術(shù)的通常適應(yīng)癥為直徑大于2.5mm的血管內(nèi)(發(fā)生)阻塞而引起的心絞痛或急性心肌梗塞。根據(jù)美國(guó)心臟醫(yī)學(xué)會(huì)的調(diào)査，在1997年約有130萬(wàn)的病人做了冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)，其中一半患者需要放置支架。這種支架植入術(shù)和冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)的結(jié)合已成為一種趨勢(shì)，尤其隨著藥物釋放支架的出現(xiàn)，這種趨勢(shì)以每年20%的速率增長(zhǎng)。每年花費(fèi)在這方面的直接醫(yī)療費(fèi)用超過(guò)20億美元。血管再狹窄血管再狹窄是指支架植入術(shù)或冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)后的血管再狹窄，是由于血管內(nèi)膜內(nèi)由結(jié)締組織和平滑肌細(xì)胞組成的一層血管內(nèi)壁細(xì)胞的增生反應(yīng)所引起的。在血管再狹窄的病人中，血管內(nèi)膜的增生導(dǎo)致動(dòng)脈阻塞和心臟供氧不足，并致使心率不齊或心搏停止。在藥物涂層支架出現(xiàn)之前，血管成形手術(shù)后再狹窄一直是介入治療中最大的問(wèn)題。對(duì)于經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈內(nèi)成形術(shù)，最初經(jīng)球囊擴(kuò)張6個(gè)月再狹窄復(fù)發(fā)率高達(dá)50%;支架植入術(shù)將這一數(shù)字降低到20-30%;而西羅莫司(CYPHER,CordisInc，MiamiLakes,Florida)和紫杉醇(TAXUS,BostonScientificInc，Natick,MA)藥物釋放支架能夠顯著降低再狹窄復(fù)發(fā)率至小于5%。然而，對(duì)于患有小血管或糖尿病以及彌漫性血管病變的病人，手術(shù)后再狹窄的風(fēng)險(xiǎn)仍然相當(dāng)高。(金屬裸支架是30%-60%，藥物涂層支架是6%-18%)支架內(nèi)再狹窄是一個(gè)多方面的，循序漸進(jìn)的過(guò)程。盡管動(dòng)脈血管組織的結(jié)構(gòu)對(duì)于新植入的支架的反應(yīng)機(jī)理仍在研究中，通常認(rèn)為這個(gè)過(guò)程包括三個(gè)階段1)血栓形成階段(支架置入0-3天后)這個(gè)階段是動(dòng)脈血管組織對(duì)新植入支架的最初反應(yīng)，其特征為血小板和中性顆粒細(xì)胞的快速激活，黏附，凝聚和沉積以在受損害的位置形成血栓?？寡ㄖ委熦灤┲倦A段，其目的預(yù)防支架植入后引起的血栓問(wèn)題。2)恢復(fù)階段此階段是在術(shù)后3-8天,其特征是漸進(jìn)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。本階段包括粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞被激活，并進(jìn)而浸潤(rùn)到受損害的血管壁。隨后，受損血管壁新生成的炎癥細(xì)胞刺激引發(fā)了平滑肌細(xì)胞增生、轉(zhuǎn)移。然而該些炎癥細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子、化學(xué)因子及生長(zhǎng)因子又進(jìn)一步促進(jìn)了損傷部位炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致新內(nèi)膜的增生。3)增生階段這個(gè)階段持續(xù)l-3個(gè)月，其依賴于剩余血栓的厚度和生長(zhǎng)速度。在這一階段，炎癥細(xì)胞轉(zhuǎn)移至殘余血栓，在附壁血栓上形成一個(gè)"帽狀結(jié)構(gòu)"。細(xì)胞漸進(jìn)性增殖，吸收殘余血栓，并最終被新生組織替代。新內(nèi)膜生長(zhǎng)過(guò)程與腫瘤組織的生長(zhǎng)過(guò)程極為相似。該相似性導(dǎo)致了目前抗腫瘤藥物紫杉醇和雷帕霉素藥物支架的發(fā)明。-藥物釋放支架包括三個(gè)基本的組成部分金屬支架、聚合物和生物活性劑。金屬支架是藥物釋放支架的藥物載體。聚合物則是用來(lái)儲(chǔ)存藥物。金屬支架、聚合物、藥物及血管壁的兼容性是藥物釋放支架是否成功的關(guān)鍵因素。金屬支架是向病變的動(dòng)脈輸送藥物的裝置，理想的藥物輸送裝置應(yīng)該有比較大的表面積，一定的支撐力和柔性。目前所有商業(yè)途徑可獲得的或正在研究中的藥物洗脫支架都是用傳統(tǒng)的支架作為載體。盡管今天使用的傳統(tǒng)的冠狀支架比十年前的支架有更強(qiáng)的柔韌度，彎曲性，更易到達(dá)分支血管，更小的金屬覆蓋等優(yōu)點(diǎn)，但是它作為藥物運(yùn)輸?shù)墓ぞ哌€是有局限性的。聚合物是由很多小的重復(fù)單元組成的長(zhǎng)鏈分子。他們形成藥物儲(chǔ)存槽并且有利于延長(zhǎng)藥物的輸送。通常，用于藥物釋放支架的聚合體可以分為有機(jī)的、無(wú)機(jī)的、可降解的、不可降解的、合成的、天然的物質(zhì)。涂層基體包括聚合物和抗再狹窄物質(zhì)，是藥物輸送支架的重要組成部分。藥物保存于涂層內(nèi)，藥物釋放速率通過(guò)聚合物調(diào)節(jié)。藥物涂層物質(zhì)在殺菌后必須保持其物理化學(xué)性質(zhì)不變，并且在支架擴(kuò)張后能夠伸展而不是脫落，分離。在支架置入后的4周內(nèi)，藥物緩慢釋放以阻止平滑肌細(xì)胞的增生或移植。藥物和支架表面的連接可以是共價(jià)鍵(e.g.,C國(guó)Cbonds，sulfiirbridges)或是非共價(jià)鍵(e.g.,ionic,hydrogenbonds)。聚合物材料應(yīng)為生物惰性物質(zhì)，植入人體后不應(yīng)引起組織的炎癥反應(yīng)。目前市場(chǎng)上還沒有任何聚合物能滿足類似要求。到目前為止，實(shí)驗(yàn)最成功的藥物釋放支架雷帕霉素和紫杉醇藥物釋放支架，均采用不可降解的生物材料為藥物的聚合物雷帕霉素藥物支架是采用聚甲基丙烯酸丁酯和聚乙烯醋酸乙烯(polyethylene-co-vinylacetate(PEVA)/polyn-butylmethacrylate(PBMA)共聚物包載西羅莫司，而紫杉醇藥物支架系采用(styrene-b畫isobutylene國(guó)b國(guó)styrene凍合物包載紫杉醇。生物活性物質(zhì)。尋找一有效抑制內(nèi)膜增生的藥物是藥物洗脫支架成功的關(guān)鍵。理想的抗再狹窄的藥物應(yīng)對(duì)組織的再生具有高度的抑制作用，其非但對(duì)細(xì)胞沒有毒害，而且應(yīng)能允許支架植入后血管再次內(nèi)皮化。紫杉醇藥物涂層支架作用機(jī)理紫杉醇，太平洋的紅豆杉和短葉紅豆杉的樹皮中的提取物，是通常用于治療乳腺癌和卵巢癌的抗腫瘤藥物。紫杉醇的抗增生性能體現(xiàn)出濃度依賴性和與微管結(jié)合的可選擇性，尤其對(duì)N末端的微管蛋白的beta組。這種結(jié)合通過(guò)減少聚合和阻止解聚時(shí)所需要的微管蛋白臨界濃度來(lái)促進(jìn)微管蛋白的聚合以形成穩(wěn)定的微管。微管的結(jié)構(gòu)通過(guò)捆綁和成倍增加數(shù)量來(lái)穩(wěn)定。紫杉醇在細(xì)胞內(nèi)體現(xiàn)出明顯的劑量依賴效果低劑量通過(guò)誘導(dǎo)P53和P21腫瘤抑制基因使細(xì)胞分裂間期停留在Gl階段，從而引起細(xì)胞凋亡。高劑量被認(rèn)為影響細(xì)胞周期的G2到M期從G2期到M期的轉(zhuǎn)變要求微管解聚，而紫杉醇可以穩(wěn)定微管的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致有絲分裂停止。另一方面，高劑量紫杉醇影響M到G1期過(guò)程，引起有絲分裂后停止甚至有可能是細(xì)胞凋亡。除此之外，某些蛋白酶和絲氨酸蛋白磷酸化都跟微觀的結(jié)局有關(guān)，因而這些作用也會(huì)被紫杉醇所抑制。紫杉醇涂層支架的功效紫杉醇涂層支架是在金屬支架上涂上紫杉醇(lug/mm2)和不可降解聚合物(styrene畫b-isobutylene-b-styrene)。短期內(nèi)(<2年)紫杉醇涂層支架(TAXUSI,TAXUSIIandTAXUSIV)和裸金屬支架相比,具有明顯的抑制血管再狹窄的作用。但其長(zhǎng)期效果有待觀察。雷帕霉素藥物涂層支架作用機(jī)理。雷帕霉素是一種新型大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑，在1999年作為器官移植后的抗排斥藥物獲得美國(guó)FDA的核準(zhǔn)。其應(yīng)用于心血管藥物支架的基礎(chǔ)是通過(guò)其抑制組織增生的機(jī)制從而控制支架植入后的血管再狹窄。雷帕霉素的生物作用機(jī)制是首先進(jìn)入組織細(xì)胞，與組織細(xì)胞內(nèi)的免疫親和蛋白FK-12結(jié)合，形成RAPA-FK12復(fù)合物，這種復(fù)合物能阻止信號(hào)傳導(dǎo)，從而選擇性的阻止蛋白質(zhì)合成。在與免疫親和蛋白FK-12結(jié)合后，雷帕霉素通過(guò)抑制哺乳動(dòng)物的RAPA靶蛋白(mTOR)的活性和細(xì)胞周期依賴性激酶(cdk)及細(xì)胞周期蛋白(cyclin)復(fù)合物激酶的活性，以及眼癌(有遺傳性的)的蛋白質(zhì)的磷酸化，從而阻止細(xì)胞周期從G1期到S期的轉(zhuǎn)化。雷帕霉素藥物釋放支架的功效和注意事項(xiàng)雷帕霉素藥物涂層支架的組成包含一個(gè)金屬支架，雷帕霉素(1.40pg/mm2)和50Q/。的聚甲基丙烯酸丁酯和50y。的聚乙烯醋酸纖維素的混合物組成的聚合物。藥物層表面覆蓋一層遮蓋層，以控制藥物的釋放數(shù)度。支架植入后，藥物在大約30天內(nèi)通過(guò)聚合體慢慢的釋放到血液中去。雷帕霉素涂層支架(CYPHERTM)是第一個(gè)被美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的藥物支架，目前在五十個(gè)國(guó)家得到廣泛應(yīng)用。與紫杉醇類似，其短期抑制再狹窄的效果明顯，但長(zhǎng)期效果有待進(jìn)一步觀察。在臨床上，介入心血管醫(yī)生在選擇藥物釋放支架時(shí)往往很難決定，因?yàn)槟壳皟H有的雷帕霉素和紫杉醇藥物支架，雖然作用機(jī)制不同,但臨床效果不分伯仲。在很多的情況下,醫(yī)生在同一病人血管內(nèi)即植入雷帕霉素支架又植入紫杉醇支架.，此可被視為二者聯(lián)合用藥治療再狹窄的前奏。最新的臨床研究也表明，在同一病人的血管內(nèi)植入不同藥物的血管支架(雷帕霉素和紫杉醇)末見有任何副作用。早期的血栓聚集是導(dǎo)致再狹窄發(fā)生的一大誘因，臨床上控制早期血栓形成的主要方法是在支架植入后靜脈或口服給于大量的抗凝血藥物如肝素，阿斯匹林等。但系統(tǒng)給于抗血栓藥物的最大問(wèn)題是用藥后引發(fā)的出血。定義"細(xì)胞增生狀態(tài)"是指與動(dòng)脈硬化，再狹窄，增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變和銀屑病相關(guān)的病態(tài)細(xì)胞生長(zhǎng)。這個(gè)詞并不意指和癌狀態(tài)相關(guān)的細(xì)胞增生。"病態(tài)細(xì)胞增生"是指平滑肌細(xì)胞或原纖維細(xì)胞之非正常分裂。"病態(tài)細(xì)胞增生之抑制"則是指抑制此類細(xì)胞之病態(tài)生長(zhǎng)。"組合物"是指用于抑制再狹窄的所有藥物混合物,比如包括紫杉醇和雷帕霉素的組合物。"給藥"在此包括給藥途徑，它包括能讓組合物發(fā)揮作用(有效抑制細(xì)胞增生)的所有途徑.包括通過(guò)系統(tǒng)給藥(如靜脈注射)和局部的或是特殊部位給藥，如皮下、非胃腸道、腹膜內(nèi)等)、口服、透皮，或通過(guò)藥物運(yùn)輸導(dǎo)管或是植入載藥裝置。"有效劑量"是指能對(duì)病態(tài)細(xì)胞增生發(fā)揮充分抑制作用的藥物劑量。有效劑量視具體情況而改變，比如細(xì)胞生長(zhǎng)的類型，給藥方式和部位，患者的體重，細(xì)胞生長(zhǎng)的程度等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能有效抑制血管再狹窄或動(dòng)脈硬化形成的組合物，其中再狹窄是發(fā)生在血管，膽管，食道,和氣管等管腔類組織。用于抑制細(xì)胞增生的組合物主要包括微管穩(wěn)定劑和免疫抑制劑，還包括抗凝血?jiǎng)?。其中微管穩(wěn)定劑是紫杉醇或其衍生物，免疫抑制劑是雷帕霉素或其衍生物，抗凝血?jiǎng)┦歉嗡鼗蚱溲苌?。組合物的使用方法是全身系統(tǒng)給藥的，其通過(guò)藥物輸送導(dǎo)管，導(dǎo)絲或支架輸送到局部。一方面，應(yīng)用方法為局部使用。給藥方法，包括一方面采用導(dǎo)管局部給藥，另一方面，通過(guò)支架緩慢釋放。其中所述支架噴涂有組合物的有效成分。支架,是噴涂有組合物的支架一即藥物涂層支架，進(jìn)一步講，藥物涂層的方式包括多層逐級(jí)噴涂；或是藥物預(yù)混后再噴涂于支架表面上。支架的種類包括但不局限于一方面為可降解藥物支架--將本發(fā)明組合物加入到可降解聚合物支架上。另一方面，金屬支架,即在金屬支架表面覆蓋著該組合物。在另一方面，本發(fā)明包括抑制再狹窄有效劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，局部給藥物時(shí),本發(fā)明中的藥物配方組和比任何單一用藥組更能有效的抑制支架植入后血管再狹窄的發(fā)生。另外一個(gè)發(fā)現(xiàn)是本發(fā)明的組合物比單一用藥在同樣劑量情況下對(duì)細(xì)胞的拜性更低。本發(fā)明的組合物，用于血管，膽管，食道和支氣管等人體管腔組織發(fā)生的組織增生或再狹窄。本發(fā)明的生物機(jī)制及臨床基礎(chǔ)血管再狹窄的發(fā)生機(jī)制與腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制類似，都是以內(nèi)膜增生為特征。聯(lián)合用藥在日常腫瘤的臨床治療中，是一種有效的、眾所周知的方法。在本發(fā)明的混合物中，雷帕霉素或紫杉醇都是脂溶性，具有相同的釋放曲線，而二者又能獨(dú)立的通過(guò)不同的途徑有效的抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增生，因此，理論上，兩種藥物在藥物涂層支架的聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)防止再狹窄的發(fā)生應(yīng)具有協(xié)同效應(yīng)。同時(shí)由于二者的協(xié)同效應(yīng)，其抑制再狹窄的所需的劑量也比單一用藥時(shí)要低。雷帕霉素和紫杉醇主要作用于再狹窄發(fā)生的第二，三期。雷帕霉素和紫杉醇聯(lián)合用藥用于治療血管再狹窄的作用機(jī)制雷帕霉素是通過(guò)作用于細(xì)胞周期的S期而阻止內(nèi)皮細(xì)胞的增生，而紫杉醇則是通過(guò)選擇性的阻斷細(xì)胞生長(zhǎng)周期的M期而達(dá)到同樣的抑制效果。本發(fā)明中,通過(guò)將二者聯(lián)合,從不同的細(xì)胞生長(zhǎng)周期多方位的阻斷細(xì)胞的增生,從而提高治療效果。如前所述，早期的血小板的凝聚是誘發(fā)再狹窄的一主要因素。臨床上控制早期血栓形成的主要方法是在支架植入后靜脈或口服給于大量的抗凝血藥物如肝素，阿斯匹林等。但系統(tǒng)給于抗血栓藥物的最大問(wèn)題是用藥后引發(fā)的出血。在本混合物中的肝素，通過(guò)局部給藥時(shí)可解決此一問(wèn)題。如將混合物與聚合物一起覆膜在血管支架表面，因?yàn)楦嗡匾兹苡谒梢栽谥Ъ苤踩牒蟮臄?shù)小時(shí)到數(shù)天內(nèi)釋放出來(lái)(再狹窄發(fā)生的第一期，從而可以極大地抑制早期血栓的形成。而雷帕霉素與紫杉醇均為脂溶性，在血管內(nèi)釋放較慢(28天內(nèi)釋放完月80%)(再狹窄發(fā)生的第二，三期)。因而，本發(fā)明中的混合物藥物釋放支架一旦植入人體后可從不同的角度，不同的時(shí)期，多方位的阻斷再狹窄的發(fā)生。本發(fā)明中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)首次證實(shí)雷帕霉素+紫杉醇混合物，雷帕霉素+紫杉醇+肝素混合物比任何單一用藥時(shí)對(duì)支架植入后的血管內(nèi)皮增生均具有更顯著的抑制效果，這在后面附圖中有充分的數(shù)據(jù)證明。使用方法本發(fā)明的(使用)方法，本發(fā)明中的藥物組合物主要用于有可能或正患有增生性疾病的患者，經(jīng)一定的給藥途徑給與有效的劑量。在發(fā)明的組合物中所用到的首選藥物是紫杉醇和雷帕霉素和肝素或它們的衍生物。本發(fā)明組合物中的所有藥物都是市面上可得到的。在本發(fā)明中，上述描述組合物(雷帕霉素+紫杉醇或雷帕霉素+紫杉醇+肝素)被用來(lái)抑制血管再狹窄的形成。"抑制"在此包括降低，延遲或消除病態(tài)的細(xì)胞增生。"降低"意味著減少血管形成術(shù)后的平滑肌細(xì)胞增生所導(dǎo)致的血管內(nèi)膜增厚。"延遲"意思是在血管成形術(shù)后，推遲的血管內(nèi)膜增生發(fā)作的時(shí)間。"消除"意指完全降低或完全延遲內(nèi)膜增生以致于血管中有足夠的血流量并且不需要外科手術(shù)的介入。本發(fā)明之組合物可通過(guò)任何有效的途徑給于。這些途徑包括但又不限于系統(tǒng)給藥，如間斷地或是持續(xù)的靜脈注射，皮下組織，肌肉的，腹膜等的肌肉注射。其中一理想的給藥方法是導(dǎo)管給藥，導(dǎo)管通常有一個(gè)軟竿，在竿的頂部有一個(gè)氣囊。氣囊上打有多個(gè)微孔，將氣囊輸送到病變區(qū)后，再加壓而將藥物注入到病變的組織內(nèi)。也可將藥物用于聚合物內(nèi)，形成水凝膠，然后敷于氣囊表面，再將球囊倒入到病變區(qū)內(nèi)。另一理想的給藥方式是使用灌輸導(dǎo)管或藥物輸送導(dǎo)絲。將灌輸導(dǎo)管末端插入病變地點(diǎn)，將導(dǎo)管和注射泵相連接，導(dǎo)管的末端通常有通路，通過(guò)該通路將藥物注入到病變的組織。藥物輸送導(dǎo)絲，導(dǎo)絲是空的，并且為了藥物的灌輸，在它的末端有一個(gè)口子。給藥方式的另一選擇是將藥物覆蓋于醫(yī)療器械內(nèi)比如血管支架，然后植入病變區(qū)內(nèi)。用于血管球囊成形術(shù)的血管內(nèi)支架已是比較成熟的技術(shù)。用于給藥的支架可以是金屬支架。通常金屬支架應(yīng)具有良好的生物相容性。常用的支架材料包括鎳鈦合金和不銹鋼。具體使用時(shí)，可將藥物裝載于支架表面的刻槽內(nèi)或?qū)⑺幬锶苡诰酆衔锖笤賴娡坑谥Ъ鼙砻?。金屬支架的另一種情況是，將金屬支架作為平臺(tái)，在金屬支架表面覆蓋一層纖維聚合物或是其他生物材料，將藥物溶于聚合物內(nèi)。在此金屬支架充當(dāng)聚合物輸送藥物的平臺(tái)，為血管提供一機(jī)械支撐，聚合物則控制藥物的釋放。支架作為藥物載體的另種情況是可降解支架，可降解支架即可以是生物可降解材料比如聚乳酸或金屬可降解材料比如鎂合金支架。在聚乳酸支架中，可以直接將藥物加入到支架內(nèi)，藥物隨支架的講解而釋放出來(lái)。在鎂合金支架中，藥物可以則需要噴涂于支架表面，然后再緩慢釋放出來(lái)。為了證實(shí)該發(fā)明，我們將發(fā)明的藥物配方組合物噴涂于金屬支架表面，然后移植入大鼠頸動(dòng)脈和兔子的股動(dòng)脈內(nèi)。以后將對(duì)這些研究狀況進(jìn)行討論。研究中所用的金屬支架是不銹鋼金屬支架。將裝載藥物配方組合物的支架如實(shí)例3所示插入大鼠頸動(dòng)脈血管內(nèi)。同時(shí)作為對(duì)照，將沒有藥物裝載(裸支架)，只裝有紫杉醇，和只裝有雷帕霉素三組支架也一并植入大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)。在所有支架植入大鼠頸動(dòng)脈一個(gè)月后，將大鼠處死，用福爾馬林高壓灌注頸動(dòng)脈，仔細(xì)從組織中分離支架后再在顯微鏡下測(cè)量再狹窄的程度。計(jì)算再狹窄的公式(正常的內(nèi)膜面積-殘留的內(nèi)膜面積)/正常的內(nèi)膜面積X100計(jì)算得到的。本發(fā)明之藥物配方包裹的支架其狹窄率為5.8%。金屬裸支架的狹窄率為16%。只載有紫杉醇狹窄率為12%，只載有雷帕霉素的支架其狹窄率為11.9%。附圖5中是實(shí)驗(yàn)的總結(jié)。結(jié)果表明雷帕霉素和紫杉醇聯(lián)合用藥比任何單一用藥，在抑制血管再狹窄的發(fā)生方面有著更顯著的療效。在另一研究中，支架表面覆蓋有本發(fā)明的藥物組合物。其中第一層包裹著紫杉醇，第二層包裹著雷帕霉素，最外層涂有肝素。試驗(yàn)時(shí)，將三個(gè)金屬裸支架，三個(gè)聚合物覆膜支架，三個(gè)紫杉醇覆膜支架，三個(gè)雷帕霉素覆膜支架，三個(gè)肝素覆膜支架和三個(gè)混合藥物包裹支架植入兔子的股動(dòng)脈內(nèi)。植入后一個(gè)月內(nèi)，將兔子安樂死后，起出支架按上述的方法行病理切片觀察分析。組合物B包裹的支架其狹窄率為5.3%。金屬裸支架的狹窄率為18%。聚合物組為21%，只載有紫杉醇狹窄率為12%,只載有雷帕霉素的支架其狹窄率為11.9%。肝素包裹得支架為21%.附圖6中是實(shí)驗(yàn)的總結(jié)。結(jié)果表明，藥物混合物B(雷帕霉素+紫杉醇+肝素)包裹支架比任何單一用藥，在抑制血管再狹窄的發(fā)生方面有著更顯著的療效。試驗(yàn)中混合物中未見任何血管內(nèi)血栓形成.圖l闡明適用于各實(shí)施例的金屬網(wǎng)狀的金屬架。圖2闡明多層藥物涂層的過(guò)程和方法，其中1為紫杉醇，2為雷帕霉素，3為聚合體。圖3闡明預(yù)混和涂層藥物的過(guò)程和方法。圖4支架植入后一個(gè)月，本發(fā)明之藥物涂層支架和單一藥物涂層支架所引起的血管再狹窄的百分比。圖5支架植入后一個(gè)月，本發(fā)明預(yù)混和藥物之雷帕霉素、紫杉醇和其組合物涂層支架在兔子股動(dòng)脈所引起的再狹窄的百分比。圖6:組合物與單一藥物支架對(duì)抑制再狹窄的在體實(shí)驗(yàn)研究圖7:混合物中,不同比例的雷帕霉素與紫杉醇對(duì)血管再狹窄的抑制作用實(shí)施例l紫衫醇,雷帕霉素和肝素及其混合物混合物在PBMA/PEVA聚合物中的預(yù)混合涂層試驗(yàn)。為了確定混合劑型能否涂抹在金屬支架上，我們將四十個(gè)支架浸潤(rùn)在四種不同的藥物共聚物劑型中單一聚合體，單一雷帕霉素，單一紫衫醇，單一肝素組，雷帕霉素+紫衫醇組合物，雷帕霉素+紫杉醇+肝素組合物，每組有十個(gè)支架。高分子涂膜是由50%聚甲基丙烯酸丁酯和和50%聚乙烯醋酸乙烯。表格1是藥物分組及每組藥物的概括。表-'縱素.紫鲴鵬及其組S<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例2雷帕霉素，紫杉醇和肝素及其組合物A和B在PLA聚合物中的多層涂膜試驗(yàn)將PLA(聚乳酸)按6.7mg/ml的濃度溶于氯仿制得聚合物溶液。將溶液平均分為三部分，每一部分2ml。加5mg雷帕霉素到第一部分聚合物溶液中制得雷帕霉素-共聚體溶液(2.5mg/ml)。加5mg紫杉醇到第二部分聚合物溶液中制得紫杉醇-共聚物溶液(2.5mg/ml)。加5毫克肝素到第三部分中聚合物溶液中制得肝素-聚合物溶液.首先將裸金屬支架浸入第一部分的雷帕霉素涂層溶液30秒中制得第一層涂層，自然干燥后，再將其浸入第二部分溶液(紫衫醇涂層溶液)30秒，室溫下干燥后，最后再將支架浸入第三部分肝素涂層溶液30秒，完全晾干后,稱量支架重量，然后根據(jù)藥物溶液濃度計(jì)算藥物/共聚物涂層的總重量。表格2是通過(guò)此方法每種包裹于支架的藥物的總的數(shù)量的概要。表—雷'廳,紫練扭肝素及其組合躺物在繁乳咖i,層制條更組別聚合物雷柏霉素紫杉醇肝素組合物A組合物B雷隨素+繁繩雷隨f働肝素主激量(個(gè))101010101010噴涂重量(亳克)101415157.1/7.14.9/5.1/5.1實(shí)施例3雷帕霉素和紫杉醇藥物釋放測(cè)試。為了確定雷帕霉素，紫杉醇的穩(wěn)定性，我們?cè)谌齻€(gè)涂有混合物的支架上進(jìn)一步實(shí)施了生物體外藥物洗脫研究。實(shí)驗(yàn)中將每個(gè)支架放置在2.5ml生理鹽水中，然后在37°c水浴器中以每分鐘200轉(zhuǎn)的速度不停的搖晃。每天更換生理鹽水溶液以保持支架始終處于釋放狀態(tài)。在實(shí)驗(yàn)開始后的1，2，4周時(shí)，分別取出一個(gè)支架，將其置于1毫升的100%酒精中，然后用高壓液相色譜儀測(cè)量酒精中雷帕霉素和紫杉醇的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，雷帕霉素和紫杉醇在三個(gè)時(shí)間段均可被探測(cè)到，表明二種藥物在整個(gè)支架藥物釋放過(guò)程中是穩(wěn)定的。實(shí)例施4混合物藥物支架植入大鼠頸動(dòng)脈試驗(yàn)為了確定雷帕霉素/紫杉醇混合涂層(混合物A)在抑制支架內(nèi)再狹窄是否比單一雷帕霉素或紫杉醇涂層支架效果更好，我們進(jìn)一步將實(shí)例1中描述的12個(gè)支架植入大鼠頸動(dòng)脈。其中共聚物涂層支架(3個(gè)支架)，雷帕霉素(3個(gè)支架)，紫杉醇(3個(gè)支架)，雷帕霉素/紫杉醇混合物(3個(gè)支架)。支架置入后4周，將所有實(shí)驗(yàn)的大鼠安樂致死。然后除去支架進(jìn)行病理分析。附圖5描述了4組支架植入后血管內(nèi)再狹窄率發(fā)生率的區(qū)別。和聚合物相比，雷帕霉素和紫杉醇涂層支架能夠明顯的減少支架內(nèi)再狹窄率(分別是11.9%和12.1%vs.16.5%,P<0.05)。但是在紫杉醇單一涂層和雷帕霉素單一涂層組內(nèi)，沒有明顯的區(qū)別(11.9%vs.12.1%，p>0.05)，該結(jié)果與所有公開發(fā)表的有關(guān)雷帕霉素和紫杉醇單一涂層支架臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)相同。最顯著的發(fā)現(xiàn)是雷帕霉素/紫杉醇混合涂層能夠進(jìn)一步降低血管內(nèi)再狹窄率到5.8%，和單一雷帕霉素和單一紫杉醇涂層支架相比，再狹窄率降低了接近50%。實(shí)例5:混合物藥物B支架植入兔股動(dòng)脈試驗(yàn)研究將實(shí)例2中制得的聚乳酸-藥物覆膜支架，其中裸支架(3個(gè))，共聚物涂層支架(3個(gè)支架)，雷帕霉素(3個(gè)支架)，紫杉醇(3個(gè)支架)，肝素(3個(gè))，雷帕霉素/紫杉醇/肝素混合物(3個(gè)支架)。植入兔子股動(dòng)脈，4周后，將所有實(shí)驗(yàn)的兔子安樂致死。然后取出支架進(jìn)行病理分析。附圖6描述了6組支架植入后血管內(nèi)再狹窄率發(fā)生率的區(qū)別。和聚合物相比，雷帕霉素和紫杉醇涂層支架能夠明顯的減少支架內(nèi)再狹窄率。但是在紫杉醇單一涂層和雷帕霉素單一涂層組內(nèi)，沒有明顯的區(qū)別.肝素藥物涂層支架與裸支架或聚合物支架沒有顯著的差異,表明肝素藥物支架本身沒有顯著的抗再狹窄的作用，但可以防止血栓的形成.雷帕霉素/紫杉醇/肝素混合涂層能夠進(jìn)一步降低血管內(nèi)再狹窄率到5.5%，和單一雷帕霉素和單一紫杉醇涂層支架相比，再狹窄率降低了接近50%。實(shí)施例6:混合物藥物B中,不同比例的雷帕霉素與紫杉醇對(duì)血管再狹窄的影響。為了確定不同藥物在混合物中的最佳比例，我們進(jìn)一步按上述方法制得不同比例成分的混合物，其中包括雷帕霉素紫杉醇=50:50,60:40和70:30三說(shuō)明書第15/15頁(yè)組。在所有制得混合物中,肝素濃度不變。將制得的不同比例的混合物噴涂于支架表面，干燥后,如上所述植入大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)，28天取出支架,進(jìn)行病理切片分析。結(jié)果顯示三種不同比例的組合物對(duì)血管再狹窄均有抑制作用,但以在50:50的比例成分組效果最好。見圖7。實(shí)施例7:混合物B中，不同比例的肝素對(duì)血管內(nèi)血栓形成的影響。為了確定混合物中不同肝素濃度對(duì)血栓形成的影響，我們進(jìn)一步按上述方法制得不同肝素比例的混合物，其中雷帕霉素紫杉醇=50:50固定不變，肝素在總組合物中的比例分為10%,20%，和30%三組。將制得的不同比例的混合物噴涂于支架表面，干燥后,如上所述植入大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)，28天取出支架，進(jìn)行病理切片分析。結(jié)果顯示肝素濃度在組合物中占30%時(shí),血管內(nèi)幾乎沒有血栓的形成。1權(quán)利要求1.用于抑制細(xì)胞增生的組合物，其特征是所述組合物主要包括微管穩(wěn)定劑和免疫抑制劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征是所述組合物包括微管穩(wěn)定劑和免疫抑制劑和抗凝血?jiǎng)?.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征是所述微管穩(wěn)定劑是紫杉醇，所述免疫抑制劑是雷帕霉素，所述抗凝血?jiǎng)┦歉嗡亍?.根據(jù)權(quán)利要求13中任意一項(xiàng)所述的組合物的使用方法，其特征是組合物是全身系統(tǒng)給藥的。5.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任意一項(xiàng)所述的組合物的使用方法，其特征是組合物是通過(guò)藥物輸送導(dǎo)管，導(dǎo)絲或支架輸送到局部。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的使用方法，其特征是所述支架噴涂有組合物的有效成分。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的使用方法，其特征是所述組合物藥物支架涂層過(guò)程是多層逐級(jí)噴涂的，其中肝素在最外層。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的使用方法，其特征是所述組合物藥物支架涂層方法是涂上一層預(yù)混合的組合物。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物,其中,雷帕霉素與紫杉醇的比例范圍為從50%:50%到30%:70%，肝素在組合物中的總比例從1%-30%。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及治療血管再狹窄或其他組織增生的組合物及其應(yīng)用方法。組合物中包括雷帕霉素(Rapamycine)和紫杉醇(Paclitaxol)和肝素(Heparin)，組合物的應(yīng)用不僅包括系統(tǒng)給藥，也包括局部的藥物緩慢釋放到病變的組織中。該組合物能夠以預(yù)混和/或者多層噴涂的方法涂抹于支架或平臺(tái)上。本發(fā)明中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)首次證實(shí)雷帕霉素+紫杉醇混合物，雷帕霉素+紫杉醇+肝素混合物比任何單一用藥時(shí)對(duì)支架植入后的血管內(nèi)皮增生均具有更顯著的抑制效果。文檔編號(hào)A61P1/00GK101496813SQ200810014140公開日2009年8月5日申請(qǐng)日期2008年2月3日優(yōu)先權(quán)日2008年2月3日發(fā)明者昊吳申請(qǐng)人:昊吳