專利名稱：：冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及冬凌草甲素在制藥中的應(yīng)用，尤其涉及冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景近年來，腫瘤的發(fā)病率明顯增高，隨著傳染病的減少，腫瘤和心腦血管病己上升為第一、二位的疾病，其中腫瘤成為引起死亡的首位疾病。目前治療腫瘤的常用方法有外科手術(shù)、放射治療、化療和專利治療等，其治療方法各有特點。近年的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是腫瘤治療失敗的主要原因,其過程是一個多步驟、多分子參與的癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞間相互作用的復(fù)雜連續(xù)過程，包括原發(fā)瘤增殖、腫瘤新生血管生長、侵襲基底膜，在循環(huán)系統(tǒng)形成瘤栓并轉(zhuǎn)移到靶器官等。腫瘤的生長有2個明顯不同的階段，即從無血管的緩慢生長階段轉(zhuǎn)變?yōu)橛醒艿目焖僭鲋畴A段。無血管的腫瘤通過組織間液獲取從毛細(xì)血管滲透的營養(yǎng)物質(zhì)，細(xì)胞增殖緩慢，原發(fā)腫瘤的體積不會超過l2mm，這種狀態(tài)稱血管前期；腫瘤細(xì)胞團(tuán)從宿主基質(zhì)中建立自身的血液供應(yīng)系統(tǒng)，即為血管生成，己長成的瘤體從宿主中獲取新的血管成分亦屬同樣的過程。腫瘤血管生成是一個受多種不同層次調(diào)節(jié)的過程，很顯然，針對腫瘤血管生成的治療措施可以成為一種新穎的抗癌途徑。近來隨著人們對實體瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖動力學(xué)研究的不斷深入，針對腫瘤血管的治療措施也迅速發(fā)展起來。腫瘤組織血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速度比正常組織要快得多，所以抗內(nèi)皮細(xì)胞增殖療法(Antiproliferatingendothelialtherapy,APET)有間接的抗癌作用，APET這一概念現(xiàn)己擴(kuò)展到包括任何針對腫瘤血管的治療措施，稱之為抗血管治療(Anti-vasculartherapy)。冬凌草甲素是從唇形科(Labtea)香茶菜屬(Rabdosia)植物中分離出的一種貝殼杉烯二萜類(ent2kau2renediterpenoid)天然有機(jī)化合物，主要植物來源有香茶菜(Rabdosiaamethystoides)，顯脈葉香茶菜(Rabdosianervosa),毛葉香茶菜(Rabdosiajabdsia)，道孚香茶菜(Rabdosiadownsis)和冬凌草或碎米亞(Rabdosiarubescens),延命草(Isodonjaponicus)。冬凌草甲素屬貝殼杉烯二萜類化合物，性狀為無色棱柱狀結(jié)晶，味道極苦，不溶于水,可溶于乙醚、甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑。冬凌草甲素的結(jié)構(gòu)中與環(huán)外亞甲基共軛的環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)為抗癌活性中心,裂環(huán)或亞甲基飽和則作用消失。冬凌草甲素是己知的對腫瘤特別是肝癌、食管癌、賁門癌有抑制作用的化合物(冬凌草甲素的藥學(xué)研究進(jìn)展，張典瑞，任天池著，中國藥學(xué)雜志2003年11月第38巻第11期)，關(guān)于冬凌草甲素抑制腫瘤活性的專利也有報道，但是，經(jīng)檢索將冬凌草甲素應(yīng)用于制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物的研究還未見報道。
發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用。研究證實實體瘤周邊的瘤細(xì)胞伸縮，將緊鄰的宿主毛細(xì)血管靜脈端的基底膜降解,導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的迅速增殖并向腫瘤遷徙，逐步發(fā)育成熟并形成有功能的管狀結(jié)構(gòu)(毛細(xì)血管袢)，繼而與宿主血管發(fā)生吻合，由此構(gòu)成腫瘤的血液循環(huán)系統(tǒng)。盡管化療己廣泛使用，但對實體瘤的治療療效仍相對較弱。(抗癌化療藥物的研究進(jìn)展簡介，張歧等著，中國藥物化學(xué)雜志)。目前對于實體瘤的血管療法己有進(jìn)展，大多為抗血管生成方法，主要原理為抗內(nèi)皮細(xì)胞增殖及遷徙，阻止腫瘤細(xì)胞分泌TAFs,阻斷TAFs的效應(yīng)，即通過抗TAFs抗體或抗TAFs受體的抗體來中和或阻斷其生物學(xué)效應(yīng)，抑制血管平滑肌細(xì)胞的生長，干擾內(nèi)皮細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(EMC)的相互作用，阻止血管網(wǎng)的形成。.本發(fā)明的冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用。其中所述藥物指含有冬凌草甲素的制劑。進(jìn)一步優(yōu)選的是所述冬凌草甲素的制劑指冬凌草甲素注射劑；其中冬凌草甲素以C加H280e計為30mg。上述周圍血管是指與實體瘤治療相關(guān)的周圍血管；其中所述實體瘤指有形瘤，即可通過臨床檢査如X線攝片，CT掃描，B超，或觸診捫及到的有形腫塊稱為實體瘤，本發(fā)明主要指乳腺癌、直腸癌、肺癌、子宮癌。本發(fā)明所述冬凌草甲素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為其中本發(fā)明所述冬凌草甲素注射劑主藥分子量364.43，主藥分子式C2。H2806,主藥CA號28957-04-2,規(guī)格30mg(以CaoH^A計)。本發(fā)明通過靜脈推注注射用冬凌草甲素使實體瘤患者周圍血管內(nèi)膜增厚，導(dǎo)致血管腔道狹窄乃至堵塞，停止實體瘤的血液供應(yīng)，最終實現(xiàn)抑瘤目的。試驗顯示本發(fā)明所述冬凌草甲素在促進(jìn)周圍血管中膜與內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞生長增殖的同時，對間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞有促進(jìn)生長作用，同時促使中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移，在內(nèi)膜繼續(xù)大量增殖(血管內(nèi)膜細(xì)胞凋亡率低，過低的凋亡水平不足以抗衡平滑肌細(xì)胞增殖)，使血管內(nèi)膜增厚，導(dǎo)致血管腔道狹窄乃至堵塞，實體瘤的血液供應(yīng)量減少或停止，使實體瘤萎縮、壞死，最終消失。通過動物試驗對注射用冬凌草甲素抑制腫瘤的促周圍血管內(nèi)膜增厚的藥理機(jī)制進(jìn)行詳細(xì)的研究證實，注射用冬凌草甲素可促使實體瘤患者血管內(nèi)膜與中膜的平滑肌細(xì)胞大量增殖，中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移，在內(nèi)膜繼續(xù)大量增殖，有效抑制了實體瘤的生長，以此，為冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。具體實施方式在一個優(yōu)選的實施方案中觀察具有移植性S180實體瘤的荷瘤小鼠在靜脈推注注射用冬凌草甲素7d后，試驗組實體瘤治療總有效率86.5%，對照組瘤體未見縮小，為PD級別，光鏡觀察對照組與試驗組實體瘤瘤內(nèi)血管及宿主血管的結(jié)構(gòu)試驗組內(nèi)膜明顯增生，新生內(nèi)膜中可見局灶性細(xì)胞增殖，內(nèi)膜呈進(jìn)行性彌漫性增厚，增厚的內(nèi)膜中以VSMC為主，因此造成內(nèi)膜增厚，血管腔狹窄乃至堵塞；對照組瘤內(nèi)血管及宿主血管內(nèi)膜VSMC排列整齊，血管內(nèi)膜完好，血管腔未見狹窄。具體動物試驗1.動物模型及試驗方法的確定選取健康昆明種小鼠20只，體重1822g。每只小鼠右側(cè)腋部皮下接種S-180腫瘤細(xì)胞生理鹽水混懸液(lX10'個/ml)0.2m1,次日稱重后隨機(jī)分成2組，即試驗組與對照組，試驗組10只，尾靜脈注射給藥(冬凌草甲素，規(guī)格30mg)，劑量為4mg/kg(f1,每日l次，連續(xù)給藥10天，給藥結(jié)束后次日處死小鼠，然后剝其瘤塊并稱重，計算其抑瘤率，并按照實體瘤的療效評價標(biāo)準(zhǔn)(ResponseEvaluationCriteriainSolidTumors,RECIST)對治療效果進(jìn)行評價,在S-180實體瘤宿主血管相同部位取血管lcm，4%多聚甲醛固定24h,乙醇梯度脫水，石蠟垂直定向包埋，每段血管間斷均勻切片810張后，常規(guī)HE染色。每只大鼠標(biāo)本不同時間點各隨機(jī)取1片進(jìn)行光鏡觀察、照相和圖像分析，按組織學(xué)劃分，內(nèi)彈力膜以內(nèi)為內(nèi)膜，內(nèi)彈力膜與外彈力膜之間為中膜。以MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分別測量宿主血管和瘤內(nèi)血管內(nèi)彈力膜內(nèi)面積，外彈力膜內(nèi)面積，管腔面積，外彈力膜周徑，內(nèi)彈力膜周徑以及管腔周徑。并在此基礎(chǔ)上計算出中膜面積、內(nèi)膜面積、中膜厚度、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜面積增生比率、內(nèi)膜厚度增生比率、內(nèi)膜/中膜面積比、內(nèi)膜/中膜厚度比。以上試驗結(jié)果均與對照組進(jìn)行對比分析。2.試驗結(jié)果及分析注射用冬凌草甲素對小鼠S-180實體瘤的抑制效果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>對照組平均瘤重-試驗組平均瘤重*抑瘤率a)=xioo%對照組平均瘤重光鏡觀察對照組與試驗組實體瘤瘤內(nèi)血管及宿主血管的結(jié)構(gòu)試驗組內(nèi)膜明顯增生，新生內(nèi)膜中可見局灶性細(xì)胞增殖，內(nèi)膜呈進(jìn)行性彌漫性增厚，增厚的內(nèi)膜中以VSMC為主,因此造成內(nèi)膜增厚，血管腔狹窄乃至堵塞；對照組瘤內(nèi)血管及宿主血管內(nèi)膜VSMC排列整齊，血管內(nèi)膜完好，血管腔未見狹窄。MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分析結(jié)果表明實驗組內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜面積增生比率、內(nèi)膜厚度增生比率、內(nèi)膜/中膜面積比、內(nèi)膜/中膜厚度比均顯著高于對照組。由以上試驗結(jié)果可見，注射用冬凌草甲素對小鼠S180實體瘤具有明顯抑制作用，冬凌草甲素可引起實體瘤宿主血管及瘤內(nèi)血管細(xì)胞內(nèi)膜增生，使血管腔變狹窄乃至堵塞，切斷實體瘤的血液供應(yīng)，使實體瘤逐漸萎縮乃至死亡脫落。權(quán)利要求1.冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用。2.按照權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征是所述冬凌草甲素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:3.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,圍血管。4.按照權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，子宮癌。5.按照權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，6.按照權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,射劑。其特征是所述周圍血管指與實體瘤治療相關(guān)的周其特征是所述實體瘤指乳腺癌、直腸癌、肺癌、其特征是所述藥物指含有冬凌草甲素的制劑。其特征是所述冬凌草甲素的制劑指冬凌草甲素注全文摘要本發(fā)明公開了一種冬凌草甲素在制備促周圍血管內(nèi)膜增厚藥物中的應(yīng)用。其中所述周圍血管指與實體瘤治療相關(guān)的周圍血管；所述藥物指含有冬凌草甲素的制劑。本發(fā)明通過靜脈推注注射用冬凌草甲素使實體瘤患者周圍血管內(nèi)膜增厚，導(dǎo)致血管腔道狹窄乃至堵塞，停止實體瘤的血液供應(yīng)，最終實現(xiàn)抑瘤目的。文檔編號A61P9/00GK101244054SQ20081001446公開日2008年8月20日申請日期2008年3月11日優(yōu)先權(quán)日2008年3月11日發(fā)明者田久,厲保秋,黃山英申請人:山東大學(xué)