專利名稱：一種藤黃酸聚乳酸納米粒制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種具有抗腫瘤作用的中藥提取物藤黃酸的新 劑型，特別涉及一種藤黃酸納米級制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
藤黃酸(Gambogic acid，GA)是藤黃科植物藤黃所分泌的干燥樹脂。主 要產(chǎn)于印度、柬埔寨、泰國和越南。在水中的溶解度較差，而在有機溶劑乙 醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等中較易溶解。藤黃酸具有消腫、化毒、止血、殺蟲等功用，用于治療癰疽腫毒等。其 主要的藥理作用有①抗腫瘤作用，藤黃對小鼠腹水型肝癌ECA， ARS， S18。， S37， MA737 ， U4， ARA4， 156抑制率為35% 38%，對體外培養(yǎng)的人癌細(xì)胞BEL-7402、 Hela、 S麗C-7721細(xì)胞株有程度不一的抑制或殺傷作用，并對小鼠腫瘤MA^ 有顯著的增敏效果。②抗微生物作用，藤黃酸具有較廣譜的抗菌活性，并能 抗原蟲和真菌。③瀉下作用，藤黃酸具有一定的瀉下作用。 其他作用， 藤黃酸具有抗炎、抗驚厥活性，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有興奮或抑制作用。目前 用于治療的藤黃酸劑型主要為注射劑。但是,藤黃酸注射劑穩(wěn)定性差，易發(fā) 生降解，因此，尋找新型載體材料，提高藤黃酸的溶解性和穩(wěn)定性以及提高 藥物的作用效果是對藤黃酸的劑型改進(jìn)首要解決的問題。發(fā)明內(nèi)容針對上述現(xiàn)有制劑存在的缺陷或不足，木發(fā)明的目的在于，提供一種藤 黃酸聚乳酸納米粒制劑。該藥物體系澄清，粒徑為在10 100nm之間，分散性及穩(wěn)定性良好，能顯著增溶藥物。同時，對網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞具有靶向作用， 能在病變部位濃集，提高了藥物的治療效果，減少了藥物的毒副作用。另外， 藥物具有緩釋效應(yīng)，能長時間維持恒定的血藥濃度或藥理效應(yīng)，延長了作用 時間，提高了藥物生物利用度。實現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案是， 一種藤黃酸納米粒制劑，其粒徑在10 100nm之間，由下列原料按質(zhì)量百分比制成藤黃酸 0.05% 1.5% 聚乳酸O. 05 1.5%表面活性劑0. 1% 1. 5% 有機溶劑33% 50%余量為水，上述原料的質(zhì)量百分比之和為100%; 所述的表面活性劑是泊洛沙姆F-68或土溫-80;所述的有機相為乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一種。本發(fā)明的優(yōu)選配比為藤黃酸0. 1% 1% 聚乳酸0. 1 1%、表面活性劑0. 5% 有機溶劑33% 50%余量為水，上述原料的質(zhì)量百分比之和為100%。本發(fā)明還一個目的是提供上述藤黃酸納米粒制劑^]制備方法，具體包括 下列步驟1) 稱取各原料藤黃酸、聚乳酸、水、機溶劑、表面活性劑，備用；2) 將所述量的藤黃酸與聚乳酸用有機溶劑溶解；2) 將所述量的波洛沙姆F-68溶于水中；3) 將有機相，含有藤黃酸和聚乳酸的有機溶液逐滴加入含表面活性劑的水溶液中，磁力攪拌器攪拌4h;4) 減壓蒸餾(溫度35 45°C)，除去一部分有機溶劑和水；5) 過濾即得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。納米材料的生物安全性是近年來備受關(guān)注的研究領(lǐng)域，良好的生物相容性是納米醫(yī)用材料的首要必備條件。本實驗使用的PLA是美國FDA ffi:準(zhǔn)可用于臨床試驗的生物可降解的合成性高分子物，它在體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物是C02和H20，對人體無毒，生物相容性極佳。在體內(nèi)無毒性及抗原反應(yīng)， 藥物經(jīng)納米粒包封后在體內(nèi)形成一種可控制的時間依賴性藥物釋放系統(tǒng)， 可延長藥物血漿半衰期，減少心、腎副毒作用。此外，納米粒還具有對淋巴 網(wǎng)狀系統(tǒng)的靶向作用，對肝、肺和淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤可提高藥物療效。靶向 給藥系統(tǒng)(targeted drugs delivery system, TDDS)，也稱靶向給藥制齊!]， 是指能將藥物有目的的濃集于某些器官、組織或細(xì)胞的一類制劑。TDDS既 最大限度地發(fā)揮了藥物的療效，降低對其他正常器官、組織及全身的毒副作 用，還可增加藥物的穩(wěn)定性，減少藥物的用量，使制劑具有緩釋或控釋特 性。作為長循環(huán)藥物的納米粒，研究還發(fā)現(xiàn)，GA-PLA-NPs可能在血漿蛋白 及吞噬細(xì)胞的增殖中發(fā)揮一定的作用。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，有些蛋白在納米粒載 體的轉(zhuǎn)運中起一定的作用。本發(fā)明選用的藤黃酸(Gambogic acid， GA)是藤黃科植物藤黃所分泌 出的干燥樹脂。具有消腫、化毒、止血、殺蟲等功用，用于治療癰疽腫毒等。 近二十年來發(fā)現(xiàn)藥具有顯著的抗腫瘤活性。引起了廣大科學(xué)研究者的重視。 但是由于藤黃酸的水溶性差，現(xiàn)階段，市場上主要的劑型是注射劑，是利用 藤黃酸可溶于堿性溶液中的性質(zhì)制備的，藤黃酸的pKa為7.8，酸性很弱， 只能溶于強堿性水溶液。因此在對藤黃酸進(jìn)行制劑工藝研究時，首先嘗試了 以NaOH水溶液為溶劑的注射劑，但藤黃酸在堿性溶液中容易發(fā)生降解，制 劑的穩(wěn)定性差，藤黃酸易失活。因此尋找藤黃酸的新劑型是開發(fā)藤黃酸的新 領(lǐng)域。鑒于藤黃酸具有水溶性差而脂溶性好的特性，采用改良的自乳化溶劑揮發(fā)法制備藤黃酸聚乳酸納米粒(Gambogic acid-loaded polylacticacid nanoparticles, GA-PLA-NPs)，不但解決了藤黃酸水溶性差的缺點，而且制 備的納米粒具有靶向作用，提高了藥效，毒副作用小，具有較好的應(yīng)用前景。 本發(fā)明所述的藥物可以制成粉針劑、片劑、針劑或口服液。 本發(fā)明的藤黃酸納米粒乳液，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點1) 熱力學(xué)穩(wěn)定性高，制備時操作比較簡單，不分相、不沉淀，貯存穩(wěn) 定性提高；2) —般情況下，抗腫瘤藥物由于難溶于水相和油相，納米粒載藥量很 低，本發(fā)明的納米粒載藥量可達(dá)13. 3%。3) 本發(fā)明的藤黃酸聚乳酸納米粒本身具有肝被動靶向性能。降低對其 他正常器官、組織及全身的毒副作用，還可增加藥物的穩(wěn)定性，減少藥物的 用量，使制劑具有緩釋或控釋特性。4) 本實驗使用的PLA是美國FDA批準(zhǔn)可用于臨床試驗的生物可降解的 合成性高分子物，它在體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物是C02和HA對人體無毒，生物 相容性極佳。在體內(nèi)無毒性及抗原反應(yīng)，5) 藥物經(jīng)納米粒包封后在體內(nèi)形成一種可控制的時間依賴性藥物釋放 系統(tǒng)，可延長藥物血槳半衰期，減少心、腎副毒作用。6) 具有良好的增溶作用，可以有效的提高難溶性藥物的溶解度；7) 本發(fā)明的藤黃酸聚乳酸納米?？稍龃笏闹委熜Ч?，降低治療劑量， 增大對肝癌細(xì)胞的殺傷作用。8) 能提高藤黃酸的溶解度，延緩藤黃酸的消退時間，提高了藤黃酸的生 物利用度，-9)方法工藝簡單，適合規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施方式
本發(fā)明經(jīng)透射電子顯微鏡和激光粒度分析儀檢測，液滴直徑90%以上分 布在30 70nm之間，具體見

圖1、圖2，外觀為黃色液體，具有很好的穩(wěn)定 性1、 經(jīng)時穩(wěn)定性經(jīng)時穩(wěn)定性是指納米粒乳液在室溫自然變化條件下貯藏時，外觀隨時間 延長而發(fā)生變化的程度。該藤黃酸納米粒乳液持久透明，未發(fā)現(xiàn)渾濁或沉淀， 則說明經(jīng)時穩(wěn)定性好。這是評價納米乳液的一個重要指標(biāo)。2、 熱貯穩(wěn)定性將該藤黃酸納米粒乳液置于試管，密封，置于37'C恒溫水浴箱中貯存1 個月，該液熱貯后外觀透明。3、 光穩(wěn)定性將該藤黃酸納米粒乳液置于試管，密封置于日光下，室溫光照30d，定 期取樣。結(jié)果表明，藤黃酸納米粒乳液在光照條件下，各項指標(biāo)無明顯變化， 長時間保持澄清態(tài)，顏色無變化。4、 抗冷凍穩(wěn)定性將該藤黃酸納米粒乳液在冰箱中—4'C保存一個月后?；謴?fù)至室溫。如 果納米乳口服液在一4。C成固體，恢復(fù)至室溫，恢復(fù)至透明，且放置一周后 繼續(xù)透明，則認(rèn)為抗冷凍性好。5、 加速穩(wěn)定性將該藤黃酸納米乳液置于試管，密封，在13 000r'mir^的轉(zhuǎn)速下離心20 分鐘，沒有分層，仍澄清透明制備的該制劑平均粒徑為51. 36 nm，其中90%以上粒徑分布于30 70nm 之間，粒徑分布較窄，可以注射、口服，能增強藤黃酸的吸收，維持恒定的 血藥濃度或藥理效應(yīng)，延長作用時間，降低藥物的用量，降低副作用，提高 藥物生物利用度。同時具有靶向作用，使藥物在病變部位聚集，達(dá)到更々子的 治療效果。實施例l:1) 稱取藤黃酸20 mg、聚乳酸75mg，溶于20 mL乙腈，制成有機相；2) 稱取一定量波洛沙姆F-68 0.2g溶于20mL水中，制成水相；3) 將有機相逐滴加入水相中，磁力攪拌4h;減壓蒸餾，除去有機溶劑 及一部分水；用0.22pm的微孔濾膜過濾，即得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米 粒溶液。測得的平均粒徑為52. 6nm。實施例2:1) 精密稱取藤黃酸20mg、聚乳酸50mg，溶于20mL丙酮。2) 稱取波洛沙姆F-68 0. 4g，溶于40 mL水中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。經(jīng)測量得 平均粒徑為51.2nm。超速冷凍離心(4 °C， 50 000 r*min-1) 1.5 h。得 藤黃酸聚乳酸納米粒粉劑。實施例3:1) 精密稱取藤黃酸20mg、聚乳酸75mg，溶于20mL丙酮。2) 稱取波洛沙姆F-68 0. 2g，溶于40mL乙醇水溶液(乙醇水二l : 1)中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。經(jīng)測量得 平均粒徑為50. 6nm。1) 精密稱取藤黃酸25mg、聚乳酸90mg，溶于20mL乙酸乙酯中。2) 稱取波洛沙姆F-68 0. 2g，溶于40 mL乙醇水溶液(乙醇水二l : 1)中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。經(jīng)測量得 平均粒徑為50. 3nm。超速冷凍離心(4 °C， 50 000 r.min-1) 1.5 h。得 藤黃酸聚乳酸納米粒粉劑。實施例5:1) 精密稱取藤黃酸18mg、聚乳酸75mg，溶于20mL丙酮。2) 稱取土溫-80 0.2g，溶于40 mL乙醇水溶液(乙醇水=1 : 1)中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。經(jīng)測量得 平均粒徑為51.6nm。實施例6:1) 精密稱取藤黃酸15 mg、聚乳酸75mg，溶于20mL乙酸乙酯。2) 稱取土溫-80 0. 2g，溶于40 mL乙醇水溶液(乙醇水二l : 1)中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。實施例7:1) 精密稱取藤黃酸18 mg、聚乳酸75mg，溶于20mL乙腈。2) 稱取土溫-80 0. 2g，溶于20 mL水中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。超速冷凍 離心(4 。C， 50 000 r.min-l) 1.5 h。得藤黃酸聚乳酸納米粒粉劑。 實施例8:1)精密稱取藤黃酸23 mg、聚乳酸IOO mg，溶于20mL乙腈。2) 稱取F68 0. 2g，溶于20 mL乙醇水溶液(乙醇水=1 :1)中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。 實施例9:1) 精密稱取藤黃酸25 mg、聚乳酸125mg，溶于20mL丙酮。2) 稱取土溫-80 0.25g，溶于50 mL水溶液中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。超速冷凍 離心(4 。C， 50 000 r.min-1) 1.5 h。得藤黃酸聚乳酸納米粒粉劑。實施例10:1) 精密稱取藤黃酸20 mg、聚乳酸125mg，溶于20mL乙酸乙酯。2) 稱取F68 0. 25g，溶于50 mL水溶液中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。實施例11:1) 精密稱取藤黃酸25 mg、聚乳酸125mg，溶于20mL乙腈。2) 稱取F68 0. 20g，溶于40 mL水溶液中。3) 方法同實施例1. 3)，得乳黃色的藤黃酸聚乳酸納米粒。 以下通過試驗例來iS—步闡述本發(fā)明所述的藤黃酸聚乳酸納米粒的良好品質(zhì)和有益效果，這些試驗例包括了藥物對動物急性毒性試驗、對肝癌細(xì)胞H印G2活性試驗。試驗例l:急性毒性試驗昆明小鼠50只，4 5周齡，體重18 22g，雌雄各半。余隨機分為5組， 每組10只。試驗前禁食12 h，不禁水。取藤黃酸納米粒溶液按照O. 16 mL/20g、 0.21 mL/20g、 0.26 mL/20g、 0.32 mL/20g和0. 40 mL/20g的劑量腹腔注射， 連續(xù)7d,自由飲水和進(jìn)食，記錄各組動物給藥后的癥狀、體征、死亡數(shù)目和時間，用Bliss法計算LD50。用Bliss法計算LD50軟件程序(華西醫(yī)科大學(xué)編制)進(jìn)行處理。結(jié)果 表明制備出的藤黃酸納米粒溶液的LD50二26. 3mg/Kg。比資料顯示的藤黃 酸無納米粒包封時LD50 (20mg/kg)大。試驗例2: MTT法檢測藤黃酸聚乳酸納米粒對肝癌細(xì)胞H印G2增殖的影響。取對數(shù)生長期的H印G2細(xì)胞，胰蛋白酶消化，培養(yǎng)基重懸為5X104/ml， 細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加180 uL 。細(xì)胞貼壁后加入不同濃 度藤黃酸聚乳酸納米粒20 uL，使其終濃度分別為0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0、 8.0、 10.0 ug/mL,每個濃度設(shè)6個平行孔，同時設(shè)置空白對 照組、溶劑對照組和調(diào)零孔。培養(yǎng)48h后，加入20 uL/孔MTT，孵育4 h 后，吸去培養(yǎng)液后，加入150 uL/孔DMS0。震蕩5min，使結(jié)晶充分溶解， 自動酶標(biāo)儀測570 nm波長處吸光度(D)值,計算藤黃酸聚乳酸納米粒的中 效濃度(IC50)。經(jīng)實驗，藤黃酸聚乳酸納米粒能明顯抑制細(xì)胞的增殖，細(xì) 胞數(shù)目明顯減少。經(jīng)計算，藤黃酸聚乳酸納米粒的中效濃度IC50為4. 0 u g/mL。
權(quán)利要求
1.一種藤黃酸納米粒制劑，其粒徑在10～100nm之間，由下列原料按質(zhì)量百分比制成藤黃酸 0.05％～1.5％聚乳酸0.05％～1.5％表面活性劑 0.1％～1.5％ 有機溶劑 33％～50％余量為水，上述原料的質(zhì)量百分比之和為100％；所述的表面活性劑是泊洛沙姆F-68或土溫-80。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藤黃酸聚乳酸納米粒制劑，其特征在于，由下 列原料按質(zhì)量百分比制成藤黃酸O. 1% 1% 聚乳酸0. 1% 1%表面活性劑0. 5% 有機溶劑38% 45o/o余量為水，上述原料的質(zhì)量百分比之和為100%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藤黃酸聚乳酸納米粒制劑，其特征在于，所述 的有機相為乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藤黃酸聚乳酸納米粒制劑，其特征在于，包 括下列步驟 1) 稱取各原料藤黃酸、聚乳酸、水、有機溶劑、表面活性劑，備用； 2) 將所述量的藤黃酸與聚乳酸用有機溶劑溶解； 3) 將所述量的表面活性劑溶于水中； 4) 將含有藤黃酸和聚乳酸的有機溶液滴加入含表面活性劑的水溶液中， 磁力攪拌器攪拌4h; 5) 在35 45。C減壓蒸餾除去一部分有機溶劑和水，過濾即得乳黃色的 藤黃酸聚乳酸納米粒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藤黃酸納米粒制劑，由原料藤黃酸0.05％～1.5％、聚乳酸0.05％～1.5％、表面活性劑0.1％～1.5％、有機溶劑33％～50％余量為水按下列步驟制成將聚乳酸溶于有機溶劑中，并將藤黃酸分散于其中，然后加入含有表面活性劑的水相中，磁力攪拌4h，減壓蒸餾，蒸掉有機溶劑及一部分水，用0.22μm的微孔濾膜過濾即得。該藥物體系澄清，粒徑為在10～100nm之間，分散性及穩(wěn)定性良好，能顯著增溶藥物，對網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞具有靶向作用，能在病變部位濃集，提高了藥物的治療效果，減少了藥物的毒副作用。另外，藥物具有緩釋效應(yīng)，能長時間維持恒定的血藥濃度或藥理效應(yīng)，提高了藥物生物利用度。
文檔編號A61P35/00GK101229130SQ200810017490
公開日2008年7月30日 申請日期2008年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月3日
發(fā)明者李樹珍, 歐陽五慶 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)