專利名稱：：一種環(huán)孢菌素a眼用乳劑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥品及其制備領(lǐng)域，尤其是一種環(huán)孢菌素A的眼用乳劑制劑和復(fù)合乳劑制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：環(huán)孢菌素A是一種具有免疫抑制活性的非極性環(huán)狀低聚肽，主要用于自身免疫性疾病和器官抑制的抗排異治療。環(huán)孢素可以選擇性抑制免疫活性細胞，尤其是T淋巴細胞。具有抑制淋巴因子、Y—干擾素的產(chǎn)生、白介素一2、T細胞生長因子的釋放的作用；如美國專利US4，839，342所述；環(huán)孢菌素在治療患有免疫調(diào)節(jié)性原因的干性角膜結(jié)膜炎(KCS或干眼病)患者的這一病癥有效。環(huán)孢素A是環(huán)孢素一組環(huán)狀地聚肽類的主要成分，一般說來市售的環(huán)孢菌素可能含有多個環(huán)孢素的混合成分，他們?nèi)烤哂衛(wèi)1個氨基酸殘基組成的環(huán)狀肽結(jié)構(gòu)，總分子量l200;應(yīng)該說明環(huán)孢素一詞，用以指明本發(fā)明組合物種的環(huán)孢素組分，但是這個特定的稱呼是用來包括環(huán)孢素組的各個成員以及多個環(huán)孢素的混合物的總稱?？傊h(huán)孢素的活性是作為免疫抑制劑在臨床試用，并有增強或者恢復(fù)淚腺功能作用。環(huán)孢素A作為一種局部免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用于眼部，抑制淚腺內(nèi)T淋巴細胞的活性，從而增強或恢復(fù)淚腺功能(PCT專利申請WO8901772)。另外，將環(huán)孢菌素A制成眼用制劑，可避免其全身給藥后引起的毒副作用。遺憾的是環(huán)孢素在水中溶解度極低，幾乎不溶于水。至今，市售的環(huán)孢菌素A制劑多為含乙醇的油溶性制劑，而且多為口服制劑；為了提高環(huán)孢菌素A在水中的溶解度，注射制劑中需添加表面活性劑(聚氧乙烯蓖麻油)增溶，靜脈注射給藥時容易引起安全性問題；如果以注射用水稀釋，導(dǎo)致藥物析出，不適合作靜脈注射用途。此外，油溶液中環(huán)孢菌素A容易發(fā)生構(gòu)型變化，在油質(zhì)制劑中常呈現(xiàn)物理不穩(wěn)定性，如結(jié)晶析出(美國專利USP5474979)，從而嚴(yán)重影響其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定及其療效。環(huán)孢素A油制劑不適合臨床直接應(yīng)用于眼部疾病的治療，將環(huán)孢菌素A的含油制劑直接滴入眼部，會對眼部產(chǎn)生刺激作用并引起眼視覺模糊和粘稠不適感，還會加重某些眼表面疾病，例如干眼病。此外，眼制劑內(nèi)添加過多表面活性劑也被認(rèn)為是不合適的，例如聚氧乙烯蓖麻油(聚氧乙烯蓖麻油由環(huán)氧乙垸和蓖麻油反應(yīng)制得)不適于眼用用途。另外，中藥菊花其性味甘、苦、微寒，入肺、肝經(jīng)，能疏風(fēng)除熱、清肝明目、解毒；金銀花則具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。菊花和金銀花有效成份的提取方法已經(jīng)成熟。目前，國外報道的用于眼部給藥的環(huán)孢菌素A制劑主要為水溶性乳劑(US243279),已有商品上市，ALLEGAN公司開發(fā)成功，該普通乳劑解決了長期放置藥物穩(wěn)定性問題，進行了工業(yè)化生產(chǎn)，通過了各期臨床試驗；該專利使用蓖麻油為油相溶劑，Tween80(即聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯)為增溶劑乳化劑，基本解決了眼部舒適度和剌激性藥物組合的問題。證明了乳液作為眼用溶液劑性的可行性。申請?zhí)枮?0510024644.5的中國專利"一種環(huán)孢菌素A眼用乳劑劑及其制備方法"公開了一種由環(huán)孢素A、油相、乳化劑、增粘劑、甘油、抑菌劑、氫氧化鈉、純化水配制，經(jīng)剪切-高壓均質(zhì)工藝制備而成的環(huán)孢菌素A眼用乳劑劑。該制備方法是剪切-高壓均質(zhì)工藝，工藝要求比較高，無附加效果。
發(fā)明內(nèi)容為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的是提供一種新的環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑及其制備方法，包括增加效果，提高應(yīng)用的舒適性等。本發(fā)明的技術(shù)方案是環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，以100ml乳劑制劑中的含量計，其組分為環(huán)孢素A:0.05~0.5%;纖維素增稠劑(羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素等):0.3~2%;菊花或/與金銀花提取液0.3~6%;油相0.25~7.0%;增溶劑乳化劑0.1~5.0%;甘油1~4%;pH調(diào)節(jié)劑適量；余量是純化水，以上比例是重量比。該純化水可以是注射用水。可以同時添加菊花和金銀花提取液添加達到0.3~6%，兩種提取液可以大到等量或不等量。所述增溶劑乳化劑是Tween80，即聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯。油相是高級脂肪酸甘油酯。高級脂肪酸甘油酯與聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯的重量比為0.2~40。高級脂肪酸甘油酯是大豆油，芝麻油，棉籽油，橄欖油，花生油，核桃油，葵花籽油或玉米油。環(huán)孢素A與油相重量比為0.055.0。環(huán)孢素A與羥丙基甲基纖維素重量比為0.05-2.0。pH調(diào)節(jié)劑是氫氧化鈉。所述的環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑的制備方法，采用超聲剪切常壓均質(zhì)工藝制備，根據(jù)上述配比，其操作步驟為1)將纖維素增稠劑放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花或/與金銀花的提取物加入到纖維素溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入步驟3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)？11值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，得到制品。作為改進，步驟8)后還可以包括步驟所得產(chǎn)品用IO(TC流通蒸汽滅菌，時間15-45分鐘，再充分超聲剪切乳化1-5分鐘；步驟8)后也可以是歩驟所得產(chǎn)品使用Co60滅菌，時間15-60分鐘。一種環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，特征是組分與上述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑相同，乳滴平均粒徑小于300nm。所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑的制備方法，是把經(jīng)上述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑的制備方法得到產(chǎn)品，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得。乳滴平均粒徑小于300nm，乳劑粒徑均勻，形成穩(wěn)定的乳液體系。16000rpm，20min離心無沉淀產(chǎn)生。室溫放置12個月體系穩(wěn)定，未觀察到環(huán)孢素A結(jié)晶的析出。此外環(huán)孢素A乳液具有較高的熱力學(xué)穩(wěn)定性，可以反復(fù)加熱，保持穩(wěn)定狀態(tài)。重要的是，本發(fā)明的組合物可以提高環(huán)孢素A在眼睛淚腺內(nèi)的吸收。環(huán)孢素A在恢復(fù)淚腺功能活性方面作用得以保持和增強。本發(fā)明的有益效果下面通過實驗來說明本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑的眼用安全性和穩(wěn)定性一、本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑對家兔眼部的刺激性試驗1、試驗材料與條件試驗藥物按照實施例2所述的處方和方法制備的環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，該乳液制劑的環(huán)孢素濃度為0.05%，每次給藥量，每只實驗眼每曰兩次，每次50ul;對照組生理鹽水。試驗動物清潔級新西蘭白兔4只，雌雄各半，體重2-3kg/只(購自東南大學(xué)動物實驗中心)；動物詞養(yǎng)環(huán)境恒溫20-25攝氏度，家兔飼料來源未記錄；室溫20-250C;相對濕度(RH。/。30-70%);照明人工光線，12小時日光，12小時黑暗；實驗動物設(shè)施合格證號SYXK(蘇)2002-0012。2、試驗方法-輕輕拉開家兔眼結(jié)膜囊，將50ul試驗藥物滴入右側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，左側(cè)給予注射用水作為對照。給藥后使眼睛被動閉合5秒(動作輕)，使藥液與局部有充分接觸。每曰給藥2次，連續(xù)給藥一周。記錄給藥后6、24、48、72、96、120、144、168小時內(nèi)眼的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗評分表示(依據(jù)《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥理藥理學(xué)毒理學(xué))》眼刺激試驗第208頁)。觀察時用熒光素鈉檢査角膜損害，用裂隙燈檢査角膜透明度和虹膜紋理改變。3、試驗結(jié)果各試驗時間點家兔眼刺激分值見表1表i各試驗時間點家兔眼剌激分值<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>結(jié)果綜合值位于0-3.0之間，最終判斷為無刺激性。根據(jù)Dmiz眼刺激性評價標(biāo)準(zhǔn)，0-3分為無刺激性，從表l可以看出，在各試驗時間點的眼刺激分值均沒有超過值，因此本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑對家兔眼睛在各試驗時間點均無刺激性。同時經(jīng)裂隙燈和熒光素鈉檢査，角膜和虹膜均正常。由于該試驗系統(tǒng)比人眼刺激反應(yīng)敏感，因此刺激反應(yīng)陰性可確定對人眼無刺激性。此外通過眼內(nèi)藥動學(xué)試驗考察本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑在兔眼組織中的分布結(jié)果，證實該眼部給藥體系中的環(huán)孢菌素可以用于治療干眼病。二、本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑的穩(wěn)定性試驗(一)按照實施例1所述的處方和方法制備環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，包裝10ml安瓿，丁基橡膠膠塞，鋁蓋封口；溫度400C士20C;時間6個月。定時抽樣檢查外觀、藥物含量、有關(guān)物質(zhì)、pH值和乳滴粒徑等指標(biāo)。其試驗結(jié)果見表3:表3含量領(lǐng)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>澄明半透明黃綠色乳液，有乳光。從表3可以看出，在擬上市包裝條件下，溫度4(TC的加速試驗條件下放置6個月，本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑液制劑的外觀性狀、藥物含量、pH值及粒徑等各項指標(biāo)均未發(fā)生明顯改變，質(zhì)量穩(wěn)定。本發(fā)明有益效果還包括-1、本發(fā)明環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑采用安全、無剌激性的非離子表面活性劑聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯(Tween80)為乳化劑，適合應(yīng)用到眼部敏感部位，具有舒適度高、無刺激性的優(yōu)點，體現(xiàn)了環(huán)孢素A的作用與菊花和金銀花提取液的協(xié)同作用明顯。且制劑內(nèi)添加表面活性劑的量少。2、本發(fā)明采用普通剪切和超聲剪切工藝制備得到的環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑乳滴平均粒徑小于300nm，制備工藝簡單，重復(fù)性良好；配料比例得當(dāng)，可獲得粒徑均一范圍在100nm粒徑微粒；該體系具有相當(dāng)好的熱力學(xué)穩(wěn)定性，可以反復(fù)滅菌；既適合于實驗研究，又適合于大工業(yè)生產(chǎn)。3、經(jīng)過其他藥物實驗表明該體系適合于作為難溶性藥物的傳遞體及載體應(yīng)用(紫杉醇、尼莫地平、曲尼斯特等)，從而解決上述藥物的難溶性難題。圖1:0.05%環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試圖圖2:0.10%環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試圖圖3:0.15M環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試圖圖4:0.20%環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試圖圖5:0.25%環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試圖具體實施方式以下實施例進一步說明本發(fā)明，其中所有的份數(shù)和百分?jǐn)?shù)均指重量。實例中使用的環(huán)孢素A，為華北制藥有限公司產(chǎn)品。純化水采用注射用水。實施例1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>制備方法按處方組成稱取各組分，按照操作步驟為1)將菊花100g或金銀花60g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至7,27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>制備方法按處方組成稱取各組分，按照步驟l)將菊花50g、金銀花20g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)？11值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。實施例3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>PH7.2-7.87.2-7.87.2-7.87.2-7.8制備方法按處方組成稱取各組分，按照步驟l)將菊花50g、金銀花20g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。實施例4<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>制備方法按處方組成稱取各組分，按照步驟l)將菊花50g、金銀花20g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>pH7.2-7.87.2-7.87.2-7.87.2-7.8制備方法按處方組成稱取各組分，按照步驟l)將菊花50g、金銀花20g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備方法按處方組成稱取各組分，按照步驟l)將菊花50g、金銀花20g水蒸氣蒸餾，收集餾出液1000ml，分離上部油狀液后，將剩余液體濃縮至400ml，與油狀液混合均勻，；2)將羥丙基甲基纖維素(HPMC)放入適量水中(纖維素增稠劑還可用羥甲基纖維素等)，加熱至80-90'C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花、金銀花濃縮液適量加入到HPMC溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用？11調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)？11值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾后制得產(chǎn)品。如圖1一圖6所示，環(huán)孢素A眼用乳液粒徑測試結(jié)果。測試儀器型號為MalvernNanoZS90;90度角，激光波長532nm;介質(zhì)水；折光系數(shù)1.33;粘度0.8872。權(quán)利要求1、一種環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是組分及含量重量比為環(huán)孢素A0.05～0.5％；纖維素增稠劑0.3～2％；菊花或/與金銀花的提取物0.3～6％；油相0.25～7.0％；增溶劑乳化劑0.1～5.0％；甘油1～4％；pH調(diào)節(jié)劑適量；余量是純化水。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是增溶劑乳化劑是聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是油相是高級脂肪酸甘油酯，高級脂肪是大豆油，芝麻油，棉籽油，橄欖油，花生油，核桃油，葵花籽油或玉米油。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是環(huán)孢素A與油相重量比為0.05-5.0。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是環(huán)孢素A與纖維素增稠劑的重量比為0.05-2.0。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，其特征是pH調(diào)節(jié)劑是氫氧化鈉或碳酸鈉。7、環(huán)孢菌素A用于眼用乳劑制劑的制備方法，其特征是以下述配比環(huán)孢素A:0.050.5%;纖維素增稠劑0.3~2%;菊花或/與金銀花的提取物0.3~6%;油相0.257線增溶劑乳化劑0.15線甘油14%;pH調(diào)節(jié)劑適量；采用超聲剪切常壓均質(zhì)工藝制備，其操作步驟為l)將纖維素增稠劑放入適量水中，加熱至80-90°C，攪拌，分散后冷卻至室溫；3)將菊花或/與金銀花的提取物加入到纖維素溶液中，混勻備用；4)將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；5)與乳化劑和甘油混合均勻；6)在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入步驟3)中所得混合液，超聲剪切乳化，15分鐘；7)用？11調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)？11值至7.27.8;8)加入處方量的純化水補至足量，得到制品。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的環(huán)孢菌素A用于眼用乳劑制劑的制備方法，其特征是所得制品用IO(TC流通蒸汽滅菌，時間1545分鐘，再充分超聲剪切乳化15分鐘；乳滴平均粒徑小于300nm。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述的環(huán)孢菌素A用于眼用乳劑制劑的制備方法，其特征是所得制品用Co60滅菌，時間1560分鐘。10、根據(jù)權(quán)利要求7所述的環(huán)孢菌素A用于眼用乳劑制劑的制備方法，其特征是得到的制品再用0.45um滅菌微孔濾膜過濾。全文摘要一種環(huán)孢菌素A眼用乳劑制劑，組分及含量重量比為，環(huán)孢素A0.05～0.5％；纖維素增稠劑0.3～2％；菊花或/與金銀花的提取物0.3～6％；油相0.25～7.0％；增溶劑乳化劑0.1～5.0％；甘油1～4％；pH調(diào)節(jié)劑適量；余量是純化水。制備方法是，將纖維素增稠劑放入適量水中，加熱至80-90℃，攪拌，分散后冷卻至室溫；將菊花或/與金銀花的提取物加入到纖維素溶液中，混勻備用；將環(huán)孢菌素A溶解于油相中；在所得環(huán)孢菌素A混合液中緩慢加入混合液，超聲剪切乳化，1～5分鐘；用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至7.2～7.8；加入處方量的純化水補至足量，得到制品。文檔編號A61K38/12GK101244035SQ20081002067公開日2008年8月20日申請日期2008年2月21日優(yōu)先權(quán)日2008年2月21日發(fā)明者肖大偉,薇錢申請人:南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京第一醫(yī)院