專利名稱：：華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及華佗再造丸在制備防治心肌缺血、心肌梗死缺血性心臟病藥物方面的新用途。技術(shù)背景華佗再造丸與云南白藥一樣，是申請(qǐng)人獨(dú)家生產(chǎn)的我國的中藥保密品種。具有活血化瘀、化痰通絡(luò)、行氣止痛的功能。用于痰瘀阻絡(luò)之中風(fēng)恢復(fù)期和后遺癥，癥見半身不遂，拘攣麻木、口月l歪斜、言語不清。該藥療效確切，在國內(nèi)外相關(guān)患者中享有較高聲譽(yù)。但迄今為止，未見華佗再造丸在制備防治心肌缺血、心肌梗死等缺血性心臟病藥物方面應(yīng)用的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明就是為了提供華佗再造丸在制備防治心肌缺血、心肌梗死等缺血性心臟病藥物方面的新用途。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以大鼠心肌缺血再灌注所致心肌梗死模型試驗(yàn)，結(jié)果表明華挖再造丸對(duì)心肌梗死程度明顯減輕，梗死面積減少，梗死區(qū)重量減輕，梗死區(qū)占心室及心臟百分比降低，同時(shí)血清SOD活性升高，MDA含量降低，與模型組比較均有顯著性差異。對(duì)麻醉犬的試驗(yàn)期，華佗再造丸具有明顯改善犬急性心肌缺血和心肌梗死的作用，明顯減輕由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心^L缺血程度G-ST);減小由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血范圍(N-ST);縮小經(jīng)N-BT染色所顯示的梗死區(qū)；對(duì)心肌缺血及心肌梗死引起的血清乳酸脫氫酶(LDH)的釋放、肌酸激酶(CK)活性升高及血漿內(nèi)皮素(ET)的活性有明顯抑制作用，同時(shí)升高心肌缺血時(shí)血漿6-酮-前列環(huán)素F^(6-Keto-PGFJ和6-Keto_PGFla/TXB2的比值。華佗再造丸對(duì)正常麻醉犬心臟血流動(dòng)力學(xué)、心肌耗氧量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示華佗再造丸對(duì)動(dòng)脈血壓、心率、標(biāo)準(zhǔn)II心電圖PR間期、QRS間期、QT間期及T波等參數(shù)均無明顯影響；可明顯擴(kuò)張冠脈，增加冠脈血流量，增加心肌供血能力；可增加心臟左室作功，增加LVSP和dp/dtmax，提高心肌活動(dòng)能力，對(duì)心臟具有正性調(diào)節(jié)作用；同時(shí)可增加心輸出量和心搏出量，降低總外周阻力；可明顯增加心肌耗氧量，這與藥物增加冠脈血流，增加心室作功，對(duì)心臟的正性調(diào)節(jié)有關(guān)。采用Born氏比濁法，觀察華佗再造丸對(duì)家兔血小板聚集的影響。結(jié)果表明連續(xù)7日給家兔灌胃給藥，華佗再造丸明顯降低二磷酸腺苷(M)P)、花生四烯酸OU)及膠原誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率(P<0.01~0.001)。提示華挖再造丸具有抑制血小板聚集的作用。華佗再造丸對(duì)大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響。結(jié)果顯示，連續(xù)7日給大鼠灌胃給藥，華佗再造丸明顯縮短血栓長度(P〈0.05-0.001)、減輕血栓濕重及千重(P<0.05~0.001);明顯降低切變率60S-1、5S^下的全血粘度(P<0.05~0.01)。表明華挖再造丸具有抑制血栓形成及降低血液粘度的作用。總之，多項(xiàng)藥理試驗(yàn)表明，華佗再造丸在心血管領(lǐng)域，具有多項(xiàng)藥理作用，在制備防治心肌缺血、心肌缺血再灌注損傷、心肌梗死等缺血性心臟病藥物治療方面具有臨床應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，相同配方的華佗再造丸的其他劑型具有相近似的療效。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，華佗再造丸可以與三七、丹參、山楂等藥物制成復(fù)方制劑或4關(guān)合應(yīng)用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。[實(shí)施例1]華佗再造丸對(duì)大鼠心肌缺血再灌注所致心肌梗死的影響。試驗(yàn)材料動(dòng)物Wistar種大鼠56只，II級(jí)，雄性，體重240260g。藥物華佗再造丸，實(shí)驗(yàn)用其提取物，黑褐色稠膏，每克稠膏約相當(dāng)于0.63g生藥，批號(hào)060320,由廣州奇星藥業(yè)有限公司提供，藥效學(xué)給藥劑量以生藥量計(jì)算(g生藥/kg)。合心爽片，30mg/片，批號(hào)0501017，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)。通心絡(luò)膠嚢，0.38g/粒，1.4g生藥/g粉，批號(hào)060109,石家莊以呤藥業(yè)股份有限/>司生產(chǎn)。試驗(yàn)方法動(dòng)物分為7組假手術(shù)組(穿線后不結(jié)扎，給予等量生理鹽水)，模型組(給予等量生理鹽水)，合心爽10mg/kg組，通心絡(luò)1.2g生藥/kg組，華佗再造丸7、3.5、1.75g生藥/kg組。藥物以生理鹽水配至所需濃度，給藥途徑為十二指腸，給藥體積為4.8ml,其中華佗再造丸由于原提取浸膏藥物濃度較低，7.Og/kg組給藥體積為9.6ml/kg(未經(jīng)稀釋)。動(dòng)物以戊巴比妥鈉腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，切開氣管，插入氣管插管，接呼吸機(jī)行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1:3);開胸，斷3—4肋，打開心包膜，暴露心臟，于冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線(O號(hào)縫合線)，備結(jié)扎用，開腹，分離十二指腸，備給藥用；穿線后穩(wěn)定10分鐘結(jié)扎，給入受試藥物后關(guān)腹；40分鐘后剪斷結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，#逢合胸壁，動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸。再灌注120分鐘后結(jié)束試驗(yàn)，腹主動(dòng)脈取血，測(cè)定血清SOD活性、MDA含量；心臟結(jié)扎線以下橫切5片，N-BT染色(染色后色斑不明顯者淘汰)，采用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)，以固定象距測(cè)量總心肌面積及梗死心肌面積，觀察心肌梗死程度；結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。試驗(yàn)結(jié)果1.對(duì)心肌梗死程度的影響。結(jié)果見表l。表1.華佗再造丸對(duì)心肌梗死程度的影響(X土SD)分組劑量生線n心月幾總面積mm2梗死心肌面積腿2梗死區(qū)重量g梗死區(qū)占心室％梗死區(qū)占心臟y。模型8323.21±19.1798.63±14.650.244±0.04030.5±3.626.0±3.1合心爽組l(kg8324.41±21.1073.52±9.34**0.175±0.029"22.6±3.2**19.6±2.7**通心絡(luò)組1.2g8323.91±23."66.40±14.01**0.155土0.033"20.5±4.2**17-3±3.5**華佑再造丸8328.25±15.4079.73±13.94*O.l"士O.038"24.2±3.9**20.8±3.3**華杭再造九3.5g8332.65±24.1275.83±12.23**0.174±0.027"22.8±3.1**19.5±2.7**華乾再造九7g8319.39±12.1159.42±12.88**0.143土0.036"18.7±4.4**15.8±3.7**注*、**與模型組比較，P<0.05、P<0.01.試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，模型組梗死區(qū)占心室及心臟百分比分別為30.5及26.0%;合心爽10mg/kg組及通心絡(luò)1.2g/kg組心肌梗死程度減輕，梗死面積減小，梗死區(qū)重量減輕，梗死區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01);華佗再造丸7、3.5、1.75g生藥/kg組，心肌梗死程度有明顯減輕，梗死面積減小，梗死區(qū)重量減輕，梗死區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較有顯著性差異(P〈0.05~P<0.01)。2.對(duì)血清SOD活性、MDA含量的影響試驗(yàn)觀察到，模型組血清SOD活性降低，MDA含量升高，與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.05~P<0.01);合心爽及通心絡(luò)組SOD活性升高，MDA含量降低，與模型組比較有顯著性差異(P〈0.05);華佗再造丸1.75、3.5g/kg組SOD活性升高，MDA含量降低，7g/kg組SOD活性升高，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)果見表2.。表2.華佗再造丸對(duì)血清S0D活性、MDA含量的影響分組劑量/kgnSOD(NU/ml)MDA(nmol/ml)假手術(shù)組8238.2±9.95.28±0.75模型8203.4±12.0##6.53±1.61#合心爽組10mg8216.8±12.3*5.41±0.30*通心絡(luò)1.2g生藥8214.6±8.3*5.33±0.80*華佗再造丸1.75g生藥8215.9±9.4*5.00±0.70*華佗再造丸3.5g生藥8215.8±9.1*5.29±0.78*華佗再造丸7g生藥8214.9±10.2*6.18±1.19注#、##與〗艮手術(shù)組比專交，P<0.05、P復(fù)01.*與模型組比較，P<0.05.結(jié)論心肌缺血后再灌注損傷，臨床常發(fā)生于冠脈搭橋術(shù)后及溶栓術(shù)治療心梗后。研究證實(shí)，心肌缺血一定時(shí)間造成心肌損傷后，可引起心臟功能的抑制，再灌注不僅無益于心臟功能的恢復(fù)，反而加重已有的心肌損傷，從而導(dǎo)致心肌梗死的發(fā)生或進(jìn)一步加重。心肌缺血再灌注機(jī)制一般認(rèn)為與心肌能量代謝障礙、氧自由基的大量產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載及血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一系列內(nèi)皮因子等因素有關(guān)。SOD是機(jī)體氧化及抗氧化平衡的重要因素，MDA則反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，SOD活性降低，MDA含量增高，間接反映了氧自由基的形成及對(duì)心肌損傷的參與，前者反應(yīng)機(jī)體清除氧自由基的能力，后者則反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。本試驗(yàn)以大鼠心肌缺血再灌注損傷模型觀察藥物作用，試驗(yàn)觀察到，心肌缺血再灌注損傷導(dǎo)致心肌梗死發(fā)生，N-BT染色后心梗斑塊明顯，占心室及心臟總面積的30.5%及26.0%;華佗再造丸7、3.5、1.75g生藥/kg組心肌梗死程度有明顯減輕，梗死面積減小，梗死區(qū)重量減輕，梗死區(qū)占心室及心臟百分比降低，血清S0D活性，MDA含量降低，與才莫型組比較有顯著性差異(P<0.05~P<0.01)試驗(yàn)結(jié)果表明，華佗再造丸對(duì)心肌缺血所致心肌梗死有明確的保護(hù)作用，可能的機(jī)制之一為增加機(jī)體清除氧自由基的能力。[實(shí)施例2]華佗再造丸對(duì)麻醉犬心肌缺血、心肌梗死及相關(guān)冠脈血流量、心肌耗氧量和血液生化指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)材料1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年犬36只，雌雄兼用，體重13.50±2.19kg。2.實(shí)驗(yàn)藥物華佗再造丸，同實(shí)施例l;合心爽(鹽酸地爾硫卓片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)0501017);通心絡(luò)膠嚢，0.38g/粒，1.4g生藥/g粉，批號(hào)060109,石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；0.9%氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(批號(hào)n^n"41、實(shí)驗(yàn)共分六組(l)空白對(duì)照組，生理鹽水3ml/kg,n-6;("P日性對(duì)照藥合心爽組，5mg/kg,n=6;(3)中藥對(duì)照藥通心絡(luò)膠嚢0.24g生藥/kg劑量組，n=6;(4)華佗再造丸0.5g生藥/kg劑量組，n=6;(5)華佗再造丸1.0g生藥/kg劑量組，n=6;(6)華佗再造丸2.0g生藥/kg劑量組，n=6。上述實(shí)驗(yàn)藥物，均在實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成等體積(3ml/kg)，經(jīng)十二指腸給藥。實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物經(jīng)戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接SC-3型電動(dòng)呼吸機(jī)(上海)；左側(cè)第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動(dòng)脈左旋支，放置SAGE-300型超聲多普勒血流計(jì)(美國CBI公司)才果頭(Cuff-E，cD=2.4mm,20MHz)，測(cè)定心臟冠脈血流量(CABF);分離冠狀動(dòng)脈前降支中段，穿線以備結(jié)扎，造成急性實(shí)驗(yàn)性心肌缺血模型；縫置多點(diǎn)固定式心外膜電極(30個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn))，描記心外膜電圖(EECG)[1]，結(jié)果記錄于MP-100多導(dǎo)生理記錄儀(美國BIOPAC)。結(jié)扎冠脈15分鐘，進(jìn)行記錄，作為給藥前對(duì)照值，經(jīng)十二指腸給予實(shí)驗(yàn)藥物或生理鹽水，于藥后15、30、45、60、90、120、180分鐘記錄EECG,以S-T,爻升高大于2mv為判斷標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算心肌缺血程度(S-ST:S-T段升高總mv數(shù))及心肌缺血范圍(N-ST:S-T段升高總點(diǎn)數(shù))。經(jīng)頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇，并行頸總動(dòng)脈插管，于缺血前、缺血15分鐘(藥前)、藥后15、30、60、120、180分鐘取動(dòng)、靜脈血，血氧分析儀(OMNIS2,Roche,德國)分別測(cè)定冠狀靜脈竇血氧含量(V02)及動(dòng)脈血氧含量(A02),并通過冠脈血流量(CABF)計(jì)算心肌耗氧量(MOC):M0C=(A02-V02)xCABF/100。RA-1000型全自動(dòng)生化分析儀(美國TECHNICON)測(cè)定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氬酶(LDH);放免法測(cè)定血漿內(nèi)皮素(ET)、血栓素(TXB2)和6-酮-前列環(huán)素Fla(6-Keto-PGFla)(GC-911-y記數(shù)儀，中國科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司)。藥后180分鐘記錄完畢，立即取下心臟，NS液沖洗，稱重，心臟結(jié)扎線下，平行于冠狀溝均勻地將心室部分切成5片，置于硝基四氮唑蘭(N-BT)染液中，常溫染色15分鐘。HPIAS-1000型醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)(北京)。測(cè)量每片心肌雙側(cè)的梗死區(qū)(N-BT非染色區(qū))與非梗死區(qū)(N-BT染色區(qū))，計(jì)算每片心肌的面積，心室總面積和梗死區(qū)總面積。計(jì)算梗死區(qū)占心室及占全心臟的百分比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以t檢驗(yàn)判斷其顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果(一).對(duì)犬心肌缺血(心外膜電圖標(biāo)測(cè))的影響1.對(duì)犬心^I幾缺血程度(S-ST)的影響結(jié)果表明，經(jīng)十二指腸給藥，華佗再造丸1.0和2.0g生藥/kg劑量組均有明顯減輕心肌缺血程度(i:-ST)的作用，其中2.0g/kg組藥后60分鐘藥物發(fā)揮明顯作用，并持續(xù)至藥后180分鐘。藥后120分鐘—180分鐘，動(dòng)物i:-ST由藥前514.00±118.40mV降至410.67±160.34mV及375.83±168.75mV，分別下降了22.20%及28.31%，與藥前及與對(duì)照組比較均差異非常顯著(P〈0.05)。2.對(duì)犬心肌缺血范圍(N-ST)的影響結(jié)果表明，對(duì)照組給入生理鹽水后，心肌缺血范圍(N-ST)無明顯改變。華佗再造丸三個(gè)劑量組有不同程度的減小心肌缺血范圍(N-ST)的作用，其中2.Og/kg劑量組藥后90、120分鐘，N-ST分別由藥前29.67±0.82個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)，降至27.83±1.94和26.67±3.39個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)，與對(duì)照組相比有明顯差異(P〈0.05-0.01)。以上結(jié)果表明，華佗再造丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性犬心肌缺血有明顯的改善作用，可顯著減輕心肌缺血程度(S-ST)、縮小心肌缺血范圍(N-ST)。(二).對(duì)犬急性心M^死范圍(N-BT染色法測(cè)定)的影響表3.各給藥組對(duì)犬急性心月幾梗死范圍的影響(n=6，X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果見表3，以定量組織學(xué)N-BT染色法顯示心肌梗死范圍，生理鹽水對(duì)照組動(dòng)物心月幾梗死區(qū)分別占心臟及心室的9.99±5.11%和21.26±7.10%;華佗再造丸三個(gè)劑量組可減少動(dòng)物心月幾梗死區(qū)面積，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P〈0.05或P〈0.01)，其中2.Og/kg組心肌梗死區(qū)面積分別占心臟及心室的4.08±2.49%、9.42±6.08%,分別較生理鹽水對(duì)照組降低59.16%和55.69%(均P<0.05)。(三).對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血犬冠脈血流量的影響結(jié)果表明，結(jié)扎麻醉犬冠狀動(dòng)脈形成心力幾缺血后，冠脈血流量有短時(shí)間代償性增加，增加幅度10%左右。合心爽組藥后有顯著增加缺血心臟冠脈血流量的作用；華佗再造丸三個(gè)劑量組藥后均有增加缺血心臟冠脈血流量的趨勢(shì)，與生理鹽水組比較，無明顯差異(均P〉0.05)。(四).對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血犬動(dòng)、靜脈血氧含量及心肌耗氧量的影響結(jié)果表明，對(duì)照組生理鹽水給藥前后動(dòng)脈、冠狀靜脈竇血氧含量及心肌耗氧量均無顯著變化；合心爽藥后15-60分鐘時(shí)可明顯升高靜脈竇血氧含量；降低120分鐘時(shí)心肌耗氧量。華佗再造丸1.Og/kg和2.Og/kg劑量組給藥后冠狀靜脈竇血氧含量有升高趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比無明顯差異。LOg/kg動(dòng)物心肌耗氧量15-120分鐘均明顯下降，其中120分鐘時(shí)與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。(五).對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血犬血液生化學(xué)指標(biāo)的影響1.對(duì)犬血清肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性的影響結(jié)果表明，心肌缺血前血清CK、LDH含量分別為240.06±75.76u/L和53.70±27.03u/L(n=36),結(jié)扎冠脈形成急性心肌缺血后，血中CK、LDH含量明顯升高,分別為333.69±153.57u/L和68.95±38.25u/L。與缺血前比較CK含量增加了39.00%,LDH含量增加了28.39%;CK、LDH釋放隨著冠脈結(jié)扎時(shí)間的延長進(jìn)一步增加，生理鹽水組藥后30、60、120、180分鐘與藥前相比較，CK分別增加68.22°/"123.37%、248.54%、344.07%;LDH分別增加9.12%、35.79°/。、65.72°/。及96.08%;合心爽能明顯抑制心肌缺血、心肌梗死引起的CK、LDH活性升高，與對(duì)照組生理鹽水比較有顯著性差異(P<0.05)。華佗再造丸1.Qg/kg也可明顯抑制120-180分鐘時(shí)LDH釋放(P<0.01);2.Og/kg可明顯抑制120分鐘時(shí)CK釋放(P<0.05)，同時(shí)可明顯抑制120-180分鐘時(shí)LDH釋》文(P<0.05)。2.對(duì)犬血漿內(nèi)皮素(ET)、血栓素(TXB》及6-酮-前列環(huán)素(6-Keto-PGFia)活性的影響結(jié)果表明，持續(xù)結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈過程中，生理鹽水對(duì)照組動(dòng)物血漿6-酮-前列環(huán)素(6-Keto-PGF,a)及6-酮-前列環(huán)素/血栓素B2比值明顯下降，血漿內(nèi)皮素釋放明顯增加。華佗再造丸組對(duì)心肌缺血、心肌梗死引起的血漿內(nèi)皮素(ET)活性有明顯抑制作用，可明顯抑制血栓素B2的釋放，同時(shí)可明顯升高6-酮-前列環(huán)素(6-Keto-PGFta)及6-酮-前列環(huán)素/血栓素B2的比值。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用心外膜電圖標(biāo)測(cè)心肌缺血范圍及程度，定量組織學(xué)(N-BT染色法)測(cè)定心肌梗死范圍，同時(shí)測(cè)定冠脈血流量、心肌耗氧量及血清CK、LDH和血漿ET、TXB2、6-Keto-PGF^活性的變化，研究了華佗再造丸消化道給藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性犬急性心肌缺血、心肌梗死及相關(guān)指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，華佗再造丸具有明顯改善犬急性心肌缺血和心肌梗死的作用，減輕由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血程度(S-ST)，減小通過N-BT染色所顯示的梗死區(qū)。由不同病因造成局部冠狀動(dòng)脈狹窄或冠狀動(dòng)脈閉塞形成心肌缺血或心肌梗死時(shí)，其它冠狀動(dòng)脈分支代償性擴(kuò)張和開放，可使心肌缺血或心肌梗死得到緩解。當(dāng)心肌發(fā)生大面積缺血和廣泛性梗死，這種代償能力有限，造成心肌壞死和不可逆損傷，發(fā)生生命危險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)顯示華佗再造丸對(duì)心肌缺血和心肌梗死時(shí)的冠脈血流量無明顯增加作用，可能與模型動(dòng)物心肌損傷過于嚴(yán)重，冠脈擴(kuò)張代償機(jī)制不足所致。CK廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)膜中，尤以心肌細(xì)胞為多，當(dāng)心肌細(xì)胞損傷時(shí)CK溢出，使其在血液中活性升高，血清CK活性越高，反映心肌損傷程度越重。本實(shí)驗(yàn)以CK的釋放為指標(biāo)表明，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支中段，造成麻醉犬急性心肌損傷的模型是成功的。本實(shí)驗(yàn)觀察到華佗再造丸可明顯抑制實(shí)驗(yàn)性急性心肌缺血犬心肌損傷時(shí)的CK溢出，降低血清CK活性，保護(hù)心肌細(xì)胞膜。LDH在心肌梗死時(shí)從組織細(xì)胞內(nèi)大量釋放于體液中，測(cè)定冠狀靜脈竇血中LDH活性，也可反映心肌損傷的程度。實(shí)驗(yàn)證明華佗再造丸可部分抑制犬實(shí)驗(yàn)性心肌損傷時(shí)血清CK、LDH的溢出，降低血清CK、LDH的活性。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，血癡證的形成與血液成分、血液狀態(tài)和血管壁因素即血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷等病理變化密切相關(guān)。當(dāng)結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈時(shí)，由于機(jī)械刺激，持續(xù)、嚴(yán)重的缺血、缺氧，均可致血管壁內(nèi)皮細(xì)胞受損，內(nèi)皮損傷可激活血小板并相互聚集粘附于血管局部，并激活凝血酶系統(tǒng)，促進(jìn)纖維蛋白形成和內(nèi)皮素的大量釋放，引起血管痙攣，血液凝固性增加，粘稠度增高，易于形成血栓，而致血流緩慢，形成或加重心肌缺血，甚或發(fā)生心肌梗死。因此，內(nèi)皮素是重要的致瘀因素之一，而抑制內(nèi)皮素的釋放是抗心肌缺血藥物的重要評(píng)判指標(biāo)。本試驗(yàn)顯示華佗再造丸具有明顯的抑制內(nèi)皮素釋放的作用，這有利于血管的擴(kuò)張。前歹'J環(huán)素(prostacyclin,PGI2)、血^全素A2(thromboxaneA2，TXA2)均為內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管活性物質(zhì)，其中PGL為舒血管物質(zhì)，TXA2為縮血管物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定PGl2的終末代謝產(chǎn)物6-酮-前列環(huán)素Fla(6-keto-PGFla)及TXA,的代謝產(chǎn)物TXB2等活性物質(zhì)，觀察持續(xù)結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈形成心肌缺血和心肌梗死過程中的變化以及觀察藥物對(duì)其影響。結(jié)果表明，華佗再造丸對(duì)心肌缺血、心肌梗死引起的血漿內(nèi)皮素(ET)活性升高有明顯抑制作用，同時(shí)可提高血漿6-酮-前列環(huán)素(6-Keto-PGF,a)的水平。本實(shí)驗(yàn)所用的陽性對(duì)照藥合心爽為鉀拮抗劑，有很好的擴(kuò)冠、增加冠脈流量、降低心肌耗氧量、阻止急性心肌缺血狀態(tài)下心肌CPK,LDH,ET，從而減輕和延緩了缺血所引起的心肌損傷過程。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，華佗再造丸具有明顯改善犬急性心肌缺血和心肌梗死的作用，明顯減輕由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血程度(S-ST);減小由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血范圍(N-ST);縮小經(jīng)N-BT染色所顯示的梗死區(qū)；對(duì)心肌缺血及心肌梗死引起的血清乳酸脫氫酶(LDH)的釋放、肌酸激酶(CK)活性升高及血漿內(nèi)皮素(ET)的活性有明顯抑制作用，同時(shí)升高心肌缺血時(shí)血漿6-酮-前列環(huán)素Fla(6-Keto-PGFJ和6-Keto-PGF,a/TXB2的比值。華佗再造丸對(duì)犬心臟血流動(dòng)力學(xué)及心肌耗氧量的影響。實(shí)驗(yàn)材料1.藥物華佗再造丸，同實(shí)施例l;合心爽(鹽酸地爾硫卓片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)0501017);通心絡(luò)膠嚢，0.38g/粒，1.化生藥/g;盼，批號(hào)060109,石家莊以嶺藥業(yè)股<分有限7>司生產(chǎn)；0.9%氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(批號(hào)0603141)。2.動(dòng)物健康成年雜種犬36只，體重15.22±2.59kg,雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接電動(dòng)人工呼吸機(jī)(SC-3型，上海)。施左側(cè)第四肋間開胸術(shù)，暴露心臟，剪開心包，做心包束，分離冠狀動(dòng)脈左旋支，放置SAGE-300型超聲多普勒血流計(jì)(美國TRITON公司)探頭(Cuff-E,F=2.4mm,20MHz),測(cè)定心臟冠月永血流量(CABF);分離主動(dòng)脈根部，放置電磁流量計(jì)(MF-1100型，日本光電)探頭，測(cè)量心輸出量。心輸出量(CO);左心室尖部插管，連接壓力換能器(MPU-O.5A),經(jīng)載波放大器(AP-601G)測(cè)定左室內(nèi)壓(LVSP),再經(jīng)微分器(ED-601G)計(jì)算左室內(nèi)壓上升最大速率(dp/dtmax);頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇，頸動(dòng)脈插管，藥前、藥后15、30、60、120、180分鐘取動(dòng)、靜脈血，血氧分析儀(OMNIS2，Roche,德國)分別測(cè)定冠狀靜脈竇血氧含量(V02)及動(dòng)脈血氧含量(A02),并通過冠脈血流量(CABF)計(jì)算心肌耗氧量(MOC):MOC=(A02-V02)xCABF/100。股動(dòng)脈插管測(cè)定動(dòng)脈血壓(BP),以肢體導(dǎo)聯(lián)觀測(cè)標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)心電圖(ECG-II)計(jì)算心率(HR)及相關(guān)心電圖參數(shù)。公式計(jì)算其它血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)心搏出量(SO)、左室作功(LVW)、耗氧指數(shù)(MOCI)、冠脈阻力(CAVR)、總外周阻力(PVR)及氧利用率(MURO)等。將上述各項(xiàng)指標(biāo)同步記錄于MP-IOO型多導(dǎo)生理記錄儀(美國BIOPAC公司)。施腹部手術(shù)，分離十二指腸，插管，以備給予所試藥物。實(shí)驗(yàn)共分6組(l)空白對(duì)照組，生理鹽水3ml/kg,n=6;U)陽性對(duì)照藥合心爽組，5mg/kg,n=6;(3)中藥對(duì)照藥通心絡(luò)膠嚢O.24g生藥/kg劑量組,n=6;(4)華佗再造丸0.5g生藥/kg劑量組，n=6;(5)華佗再造丸1.Og生藥/kg劑量組，n=6;(6)華佗再造丸2.Og生藥/kg劑量組，n=6。手術(shù)完畢，待所觀察指標(biāo)穩(wěn)定后，記錄藥前值，十二腸給入所試藥物。并于藥后15、30、45、60、90、120、180分鐘進(jìn)行記錄。將各項(xiàng)7見測(cè)指標(biāo)及推導(dǎo)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以不同觀察時(shí)間的實(shí)測(cè)值進(jìn)行給藥前后自身比較，其變化百分率進(jìn)行組間比較，以t4企驗(yàn)判斷其顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果l.對(duì)犬動(dòng)脈血壓(SP、DP)、心率(HR)及心電圖的影響結(jié)果表明，合心爽藥后有明顯降低血壓和減慢心率的作用；華佗再造丸三個(gè)劑量組藥后股動(dòng)脈收縮壓(SP)、舒張壓(DP)均無明顯改變；各劑量組對(duì)心率無明顯影響。華佗再造丸各劑量組藥后動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)II心電圖PR間期、QRS間期、QT間期及T波等參數(shù)均無明顯改化。2.對(duì)犬冠脈血流量(CABF)及冠脈阻力(CAVR)的影響結(jié)果表明，生理鹽水給藥前后冠脈血流量、冠脈阻力均無明顯變化。4丐拮抗劑合心爽可明顯增加冠脈血流量和降低冠脈阻力；通心絡(luò)在60分鐘時(shí)也可明顯增加冠脈血流量；華佗再造丸三個(gè)劑量組均有明顯的增加冠脈血流量的作用，其中2.0g/kg劑量組在45-60分鐘是對(duì)冠脈血流量增加最為明顯，增加幅度在20%左右，與對(duì)照組相比有明顯差異(P<0.05)。這說明本品可以擴(kuò)張正常狀態(tài)下的冠l^血管，增加心月幾供血能力。與此同時(shí)，本品2.Og/kg劑量組可明顯降低冠脈阻力，其中30-60分鐘時(shí)間段內(nèi)與藥前相比有明顯差異(P<0.05)。3.對(duì)左室收縮力(LVCMT)、左室作功(LVW)的影響結(jié)果表明，合心爽可在45-60分鐘抑制心室的做功。本品對(duì)心月幾收縮力無明顯地影響，2.Og/kg劑量組具有增加心臟左室作功，提高心肌活動(dòng)能力的作用。4.對(duì)犬左室內(nèi)壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dt,)的影響結(jié)果表明，LVSP和dp/dt,都是評(píng)價(jià)心肌收縮性的重要指標(biāo)，華佗再造丸2.0g/kg劑量組藥后30分鐘有明顯增加LVSP和dp/dUx的作用，說明本品具有對(duì)心臟的正性調(diào)節(jié)作用。5.對(duì)犬心輸出量(CO)、心搏出量(SO)的影響結(jié)果表明，合心爽能明顯增加心輸出量和心搏出量，通心絡(luò)對(duì)心輸出量及心搏出量也有明顯增加作用。華佗再造丸O.5g/kg和2g/kg劑量組均可增加心輸出量和心搏出量(P<0.05-0.01),與合心爽相比起效相對(duì)較慢，但作用持續(xù)時(shí)間較長。6.對(duì)總外周阻力(PVR)的影響結(jié)果表明，合心爽可以降低動(dòng)物的總外周阻力，與對(duì)照組相比有明顯差異。華佗再造丸2g/kg在30-90分鐘時(shí)對(duì)總外周阻力有明顯的降低作用，與對(duì)照組相比有明顯差異(P復(fù)05)。7.對(duì)犬動(dòng)脈血氧含量(A0》、靜脈血氧含量(V02)的影響結(jié)果表明，各給藥組對(duì)動(dòng)物動(dòng)脈血氧含量無明顯影響，合心爽組動(dòng)物冠狀靜脈竇血氧含量15-60分鐘時(shí)均明顯增加，與生理鹽水對(duì)照組比較均有明顯差異(P〈0.05)。華佗再造丸l.0g/kg劑量組30-120分鐘冠狀靜脈竇血氧含量也明顯增加，與生理鹽水對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05)。8.對(duì)犬心肌耗氧量(MOC)、耗氧指數(shù)(MOCI)及氧利用率(MURO)的影響結(jié)果表明，陽性對(duì)照藥合心爽經(jīng)十二指腸給藥后，心肌耗氧量、耗氧指凝:和氧利用率均明顯降低。華佗再造丸2.Og/kg劑量組的心^L耗氧量升高，與對(duì)照組相比有顯著的差異(P<0.05)，這可能與藥物增加冠脈血流，增加心室作功，對(duì)心臟的正性調(diào)節(jié)有關(guān)。本品l.0g/kg可降低30-120分鐘時(shí)對(duì)心臟的氧利用率，30分鐘與對(duì)照組相比有顯著的差異(P<0.05),而對(duì)心肌的耗氧指數(shù)無明顯地影響。實(shí)施例2表明，華佗再造丸對(duì)心肌缺血和心肌梗死時(shí)的冠脈血流量無明顯增加作用，可能與模型動(dòng)物心肌損傷過于嚴(yán)重，冠脈擴(kuò)張代償機(jī)制不足所致,但可降低缺血心臟的耗氧量。而本試驗(yàn)表明本品可以增加正常心臟的冠脈血流，增加心室作功，增加心肌耗氧量，對(duì)心臟的正性調(diào)節(jié)有關(guān)。上述結(jié)果表明，華佗再造丸對(duì)不同狀態(tài)心臟血流供應(yīng)和心肌耗氧量作用不同，降低缺血心臟的耗氧量更有潛在臨床價(jià)值。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)觀察了華佗再造丸對(duì)正常麻醉犬心臟血流動(dòng)力學(xué)、心肌耗氧量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示華佗再造丸對(duì)動(dòng)脈血壓、心率、標(biāo)準(zhǔn)II心電圖PR間期、QRS間期、QT間期及T波等參數(shù)均無明顯影響；可明顯擴(kuò)張冠脈，增加冠脈血流量，增加心肌供血能力；可增加心臟左室作功，增加LVSP和dp/dtmax，提高心肌活動(dòng)能力，對(duì)心臟具有正性調(diào)節(jié)作用；同時(shí)可增加心輸出量和心4專出量，降低總外周阻力；可明顯增加心肌耗氧量，這與藥物增加冠脈血流，增加心室作功，對(duì)心臟的正性調(diào)節(jié)有關(guān)。[實(shí)施例4]華佗再造丸對(duì)家兔血小板聚集的影響。本試驗(yàn)采用Born氏比濁法，觀察華佗再造丸對(duì)家兔血小板聚集的影響。結(jié)果表明連續(xù)7日給家兔灌胃給藥，華佗再造丸明顯降低二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)及股原誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率(P〈0.01~0.001)。提示華佗再造丸具有抑制血小板聚集的作用。結(jié)果表明連續(xù)7日給家兔灌胃給藥，華佗再造丸明顯降低二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)及膠原誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率(P<0.01~0.001)。提示華佗再造丸具有抑制血小板聚集的作用。[實(shí)施例5]華佗再造丸對(duì)大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響。華佗再造丸對(duì)大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響。結(jié)果顯示，連續(xù)7日給大鼠灌胃給藥，華佗再造丸明顯縮短血栓長度(P〈0.05~0.001)、減輕血栓濕重及干重(P〈0.05~0.001);明顯降低切變率60S-1、5S-1下的全血粘度(P<0.05~0.01)。表明華佗再造丸具有抑制血栓形成及降低血液粘度的作用?？傊景l(fā)明通過多種動(dòng)物種類、多種試驗(yàn)表明，華佗再造丸作為一種中風(fēng)恢復(fù)期和后遺癥的治療藥，具有制備預(yù)防、治療心肌缺血、心肌梗死等缺血性心臟病的藥物方面的新用途。權(quán)利要求1、華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，其特征在于制備防治心肌JA血的藥物方面的用途。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，其特征在于防治心肌缺血再灌注損傷的藥物方面的作用。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，其特征在于心肌梗死的藥物方面的作用。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，其特征在于華佗再造丸采用相同配方的其他劑型代替。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，其特征在于華佗再造丸與其他藥物共同制成復(fù)方制劑。全文摘要華佗再造丸在制備防治缺血性心臟病藥物方面的用途，華佗再造丸也可采用相同配方的其他劑型代替，也可以與其他藥物一起共同制成復(fù)方制劑。文檔編號(hào)A61P9/10GK101229197SQ20081002580公開日2008年7月30日申請(qǐng)日期2008年1月15日優(yōu)先權(quán)日2008年1月15日發(fā)明者劉聲波,徐文流,鄧祝玲,顏美婷,黃夏敏申請(qǐng)人:廣州奇星藥業(yè)有限公司