專利名稱：：蛇葡萄素堿性氨基酸助溶體系及其抗腫瘤活性研究的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域。更具體而言，本發(fā)明涉及具有提高的溶解性和穩(wěn)定性的蛇葡萄素制劑。
背景技術(shù)：
：蛇葡萄素(Ampel叩sin，AMP)為蛇葡萄屬植物的提取物，屬多酚羥基雙氫黃酮醇類，相對(duì)分子量356，分子式為(^15111208'2H20，其純品為淡黃色顆粒狀。AMP分子中含有6個(gè)酚羥基，具有弱酸性，等電點(diǎn)接近pH值5.0左右(孫文基等主編，《天然活性成分簡(jiǎn)明手冊(cè)》，中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)出版社，1993:564)。AMP具有毒性低、來(lái)源廣泛、提取率高的優(yōu)點(diǎn)，但其穩(wěn)定性較差，易發(fā)生氧化反應(yīng)，不溶于氯仿、乙醚，易溶于乙醇、甲醇、二氯甲烷和二甲基亞砜(DMSO)(劉德育等，蛇葡萄素微囊的制備，中藥材，2003，26(5):355-357.)。AMP微溶于水，25。C時(shí)在水溶液中的溶解度僅為0.2mg/ml(Li-PingRuan等，Improvingthesolubilityofampelopsinbysoliddispersionsandinclusioncomplexes(通過(guò)固體分散和包埋復(fù)合物改善蛇葡萄素的溶解性)，尸/za，所omed*a/，38(2005):457-464)。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)蛇葡萄素在小鼠體內(nèi)有抑制B16黑色素瘤生長(zhǎng)的作用(劉德育等，無(wú)棘根中蛇葡萄素的提取及其對(duì)黑色素瘤的抑制作用，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，20(2):127-129)，在體外可顯著抑制腫瘤細(xì)胞人鼻煙癌HK-1、人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖(劉德育等，蛇葡萄素的抗腫瘤作用癌癥，ChineseJournalofCancer,2001，20(12):1372-1375)、人早幼粒細(xì)胞白血病HL-60、K562細(xì)胞(周寧寧等，無(wú)刺根中蛇葡萄素體外抗腫瘤作用研究，廣東藥學(xué)，2000，10(4):7-8)。蛇葡萄素對(duì)人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤具有顯著的抑制作用，提示AMP可能是一種廣譜抗腫瘤藥物，并且AMP是一種低毒的抗腫瘤藥物，具有較好的開發(fā)前景(曾颯等，蛇葡萄素對(duì)人肺癌GLC282裸鼠移植瘤的抑制作用，中藥材，2004，27(11):842-844.)。4雖然已證實(shí)了蛇葡萄素有極強(qiáng)的抗腫瘤作用，但其在水中極微溶解，這使其難用于臨床。如何提高AMP溶解性和溶解穩(wěn)定性，制備適于臨床應(yīng)用的藥物劑型，是目前蛇葡萄素研究中亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明正是針對(duì)上述的問(wèn)題，提供了一種具有提高的穩(wěn)定性和溶解性的蛇葡萄素注射劑和粉針劑。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種蛇葡萄素組合物，其包含如下組分a)蛇葡萄素；和b)堿性氨基酸，其選自L-精氨酸、L-賴氨酸或它們的組合；其中，組分a)與組分b)的重量比為i:ii:io，優(yōu)選i:ii:8，更優(yōu)選i:卜i:6。在一個(gè)優(yōu)選例中，組分a)與組分b)的摩爾比為i:2.51:io，優(yōu)選i:31:8，更優(yōu)選i:31:6。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物選自蛇葡萄素注射液或蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物為蛇葡萄素注射液，其中以注射液的體積為基準(zhǔn)計(jì)，蛇葡萄素的濃度為0.01500mg/ml，優(yōu)選0.03400mg/ml，更優(yōu)選0.05300mg/ml。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述注射液中的溶劑為注射用水、磷酸鹽緩沖液、丙二醇水溶液、枸櫞酸緩沖液、醋酸緩沖液或它們的組合。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物為蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包括組分c)pH調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組分C)選自枸櫞酸、鹽酸、磷酸鹽緩沖液、醋酸緩沖液或它們的組合，從而使得組合物溶液的pH為59，優(yōu)選pH為5.08.5。在-一個(gè)優(yōu)選例中，所述溶液的pH為5.58.0，優(yōu)選6.07.5，更優(yōu)選6.57.2。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組分c)為枸櫞酸，且組分b)堿性氨基酸與組分c)枸櫞酸的重量比為i:o.05i:i，優(yōu)選i:o.ii:0.8，更優(yōu)選i:0.151:o.5。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組分b)堿性氨基酸與組分c)枸櫞酸的摩爾比為i:o.08i:l，優(yōu)選i:o.ii:0.8，更優(yōu)選i:o.i5i:0.5，最優(yōu)選i:o.2i:0.4。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包括d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑選自注射用水、磷酸鹽緩沖液、丙二醇水溶液、乳糖、枸櫞酸緩沖液、甘露醇、蔗糖或葡萄糖。在本發(fā)明的第二方面提供了一種蛇葡萄素組合物，其包括a)l-5重量份的蛇葡萄素；b)l-50重量份的堿性氨基酸，其選自L-精氨酸或L-賴氨酸；C)0.05-l重量份的pH調(diào)節(jié)劑，其選自枸櫞酸、磷酸鹽緩沖液、醋酸或它們的組合；和d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。所述組合物的水溶液中蛇葡萄素濃度為0.01500mg/ml，且pH為59。在本發(fā)明的第三方面提供了本發(fā)明蛇葡萄素組合物的制備方法，所述方法包括步驟混合組分a)蛇葡萄素、組分b)堿性氨基酸以及任選的組分c)pH調(diào)節(jié)劑和組分d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑D在一個(gè)優(yōu)選例中，所述步驟是在無(wú)菌條件下進(jìn)行的。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述方法還包括對(duì)得到的溶液進(jìn)行冷凍干燥以獲得注射用無(wú)菌粉末。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述蛇葡萄素組合物是蛇葡萄素注射液，且該方法包括(i)混合組分a)蛇葡萄素；b)堿性氨基酸；以及d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，以形成蛇葡萄素溶液；(ii)加入c)pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)溶液pH至59;和(iii)對(duì)步驟(ii)所得的溶液進(jìn)行去除熱原和滅菌，從而獲得蛇葡萄素注射液，其中以注射液的總體積為基準(zhǔn)計(jì)，蛇葡萄素的濃度為0.01300mg/ml。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述蛇葡萄素組合物是蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末，所述方法包括(i)混合a)蛇葡萄素；b)堿性氨基酸；以及d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，形成蛇葡萄素溶液；(ii)任選地加入C)pH調(diào)節(jié)劑；(iii)對(duì)步驟(ii)所得的溶液進(jìn)行去除熱原和滅菌；和(iv)對(duì)步驟(iii)的溶液進(jìn)行干燥，從而獲得蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末，其中，所述無(wú)菌粉末在使用前可配制為pH為59的注射液。在另一優(yōu)選例中，所述蛇葡萄素組合物是蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末，所述方法包括(i)充分混合a)蛇葡萄素；b)堿性氨基酸；C)堿性氨基酸；以及任選的d)pH調(diào)節(jié)劑；(ii)在無(wú)菌條件下將步驟(i)所得混合物制成無(wú)菌粉末；(iii)分裝所述無(wú)菌粉末，其中，所述無(wú)菌粉末在使用前可配制為pH為59的注射液。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種對(duì)腫瘤治療具有協(xié)同作用的藥盒，所述藥盒中包括A)治療有效量的本發(fā)明的蛇葡萄素組合物；B)治療有效量的卡鉑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述藥盒中蛇葡萄素組合物與卡鉑的重量比為l:10io:i，優(yōu)選i:88:i，更優(yōu)選i:55:i。在另一優(yōu)選例中，藥盒中還使用說(shuō)明書。在另一實(shí)施方式中，提供了本發(fā)明的蛇葡萄素組合物在制備用于協(xié)同治療腫瘤的藥盒中的用途，其特征在于，所述藥盒還包含卡鉑。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。圖l所示為酸葡萄素(AMP)和蛇葡萄素-精氨酸-枸櫞酸(AAC)對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞增殖的抑制作用。其中，橫坐標(biāo)為用藥濃度，縱坐標(biāo)為抑制率(IR%),細(xì)胞濃度為5.5Xl()4個(gè)細(xì)胞/ml。圖2所示為蛇葡萄素-精氨酸-枸櫞酸(AAC)與卡鉑在治療荷有人肺癌GLC-82的Balb/cnu.nu裸鼠時(shí)的協(xié)同作用。圖3所示為在蛇葡萄素-精氨酸-枸櫞酸(AAC)與卡鉑協(xié)同治療下的荷有人肺癌GLC-82的Balb/cnu.nu裸鼠腫瘤照片。其中，第一組為對(duì)照組；第二組為卡鉬40mg/kg組；第三組為AAC200mg/kg組；第四組為卡鉑40mg/kg+AAC200mg/kg組。具體實(shí)施例方式蛇葡萄素有極強(qiáng)的抗腫瘤作用，但其在水中的溶解度僅為0.2mg/ml，這使其難以應(yīng)用于臨床。本發(fā)明人通過(guò)長(zhǎng)期而深入的研究發(fā)現(xiàn)采用堿性氨基酸助溶可提高蛇葡萄素在水中的溶解性，并能使其溶液保持一定的溶解和化學(xué)穩(wěn)定性。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)在堿性氨基酸助溶的蛇葡萄素溶液中進(jìn)一步加入諸如枸櫞酸等的pH調(diào)節(jié)劑不僅可將pH調(diào)整至更適于生理應(yīng)用的范圍，還可進(jìn)一歩提高蛇葡萄素的溶解穩(wěn)定性。在此基礎(chǔ)上申請(qǐng)人完成了本發(fā)明。具體而言，本發(fā)明的目的在于選擇有效的助溶劑，并通過(guò)調(diào)整有效助溶劑的用量和液體的pH值，從中篩選出適宜的助溶劑配方，從而獲得溶解度高、穩(wěn)定性好且適于臨床用藥的蛇葡萄素組合物。為此，本發(fā)明人在蛇葡萄素溶液的配制中加入不同摩爾比例的堿性氨基酸，室溫下觀察AMP溶解性與溶解穩(wěn)定性。通過(guò)該試驗(yàn)觀察到L-Arg和L-Lys對(duì)AMP均有助溶作用，而L-Arg對(duì)AMP的助溶作用優(yōu)于L-Lys。本發(fā)明人還進(jìn)一步選用溶解性高，溶解穩(wěn)定的氨基酸作為助溶劑，用不同pH值的磷酸鹽緩沖液配制高濃度的AMP-氨基酸溶液，觀察溶解性、溶解穩(wěn)定性及其pH值，并用不同pH值的磷酸鹽緩沖液稀釋，觀察稀釋液的溶解性、溶解穩(wěn)定性及其pH值。通過(guò)比較顯示，本發(fā)明的AMP-L-Arg的溶解性、溶解穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性均由于現(xiàn)有的AMP-Na。此外，本發(fā)明人還制備了蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液，并觀察其溶解穩(wěn)定性，用高效液相法測(cè)定其化學(xué)成分穩(wěn)定性，確定其溶解及藥效的穩(wěn)定性，為人體用藥提供依據(jù)，由此獲得了終濃度和pH更符合動(dòng)物試驗(yàn)及臨床應(yīng)用的制劑。經(jīng)腫瘤細(xì)胞模型和荷瘤裸鼠模型試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了本發(fā)明蛇葡萄素組合物的細(xì)胞毒作用和體內(nèi)抑瘤作用，以及其與卡鉑聯(lián)用時(shí)的協(xié)同抗腫瘤作用。蛇葡萄素本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"蛇葡萄素"、"本發(fā)明的活性物質(zhì)"和"活性藥物"可互換使用，均指作為組合物中活性成分的蛇葡萄素化合物。本發(fā)明所用的蛇葡萄素，可從蛇葡萄屬或其它含有該物質(zhì)的植物中提取獲得，也可通過(guò)化學(xué)合成的方法合成。堿性氨基酸本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)堿性氨基酸可用于蛇葡萄素的助溶中。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"堿性氨基酸"、"本發(fā)明的助溶劑"可互換使用，其加入可提高蛇葡萄素溶液中活性物質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性。本發(fā)明所用的堿性氨基酸包括但不限于L-精氨酸、L-賴氨酸或它們的組合，優(yōu)選L-精氨酸。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的"成分是指適用于人和/或動(dòng)物而無(wú)過(guò)度不良副反應(yīng)(如毒性、剌激和變態(tài)反應(yīng))即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。雖然本發(fā)明不希望受限于理論，但本發(fā)明中所用助溶劑的助溶機(jī)理可能是由于AMP等電點(diǎn)接近pH值5.0左右，其分子中含有6個(gè)羥基，呈弱酸性；而堿性氨基酸為兩性電解質(zhì)，賴氨酸的等電點(diǎn)為9.74，精氨酸的等電點(diǎn)為IO.76，可在酸性溶液中與質(zhì)子(H+)結(jié)合成帶正電荷的陽(yáng)離子(-NH3+)。AMP分子中羥基上的H+與堿性氨基酸結(jié)合，從而使得蛇葡萄素的溶解度增加。選用堿性氨基酸，尤其是精氨酸作為助溶劑具有如下優(yōu)點(diǎn)l.堿性氨基酸性質(zhì)穩(wěn)定，在水中溶解不產(chǎn)氣(C02);2.本發(fā)明所用的堿性氨基酸不含鈉離子，而且對(duì)患心臟病、高血壓、腎病、肝腹水等需要限制鈉離子攝入的患者使用更安全；3.堿性氨基酸，尤其是精氨酸在人體內(nèi)參予很多的生理作用例如肝臟中氨的代謝、精子的形成、傷口的愈合與免疫系統(tǒng)的維持等，因此補(bǔ)充堿性氨基酸還具有相關(guān)營(yíng)養(yǎng)作用。pH調(diào)節(jié)劑為了使本發(fā)明組合物的pH更符合動(dòng)物試驗(yàn)和臨床應(yīng)用的要求，可在本發(fā)明用堿性氨基酸助溶的蛇葡萄素組合物中進(jìn)一步加入藥學(xué)上可接受的pH調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"pH調(diào)節(jié)劑"和"酸性pH調(diào)節(jié)劑"可互換使用。所述pH調(diào)節(jié)劑優(yōu)選不僅可調(diào)節(jié)pH，還可進(jìn)一步起到助溶和穩(wěn)定溶液的作用?？捎糜诒景l(fā)明的pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于枸櫞酸、鹽酸、憐酸鹽、醋酸或它們的混合物，優(yōu)選枸櫞酸。選用枸櫞酸作為pH調(diào)節(jié)劑，并同時(shí)起到助溶和穩(wěn)定作用，具有很多優(yōu)點(diǎn)首先，枸櫞酸化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，對(duì)其液體制劑進(jìn)行高溫滅菌也不會(huì)破壞其化學(xué)結(jié)構(gòu)；其次，枸櫞酸在常用注射用溶劑中較易溶解；此外，當(dāng)與堿性氨基酸配合使用時(shí)，還可加速堿性氨基酸的溶解。助溶劑組合本發(fā)明還提供了一種"助溶劑組合"。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"助溶劑組合"和"助溶體系"可互換使用，均指由本發(fā)明中堿性氨基酸與具有助溶作用的酸性pH調(diào)節(jié)劑組成的助溶組合，其助溶效果優(yōu)于單用堿性氨基酸或酸性pH調(diào)節(jié)劑本身。不希望受限于任何理論，本發(fā)明助溶劑組合可獲得更好的助溶效果可能是因?yàn)殡m然本發(fā)明助溶劑組合中的兩種成分各自具有助溶作用，但單用本發(fā)明的堿性氨基酸會(huì)導(dǎo)致溶液pH偏高，而單用酸性pH調(diào)節(jié)劑則會(huì)導(dǎo)致溶液pH偏低，將兩者組合使用可在助溶的同時(shí)獲得可使活性成分穩(wěn)定于溶液中的PH范圍；并且，本發(fā)明酸性pH調(diào)節(jié)劑還可進(jìn)一步促進(jìn)堿性氨基酸的溶解，以形成更穩(wěn)定的溶液體系。雖然本發(fā)明中采用蛇葡萄素來(lái)證明本發(fā)明助溶體系的優(yōu)異助溶作用，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，該助溶體系也可用于其它類似的活性成分的助溶中。本發(fā)明的助溶劑組合中，堿性氨基酸與酸性pH調(diào)節(jié)劑的比例優(yōu)選使得所得溶液的pH為5.08.5，優(yōu)選5.58.0'更優(yōu)選6.07.5，最優(yōu)選6.57.2。其中，優(yōu)選的組合為L(zhǎng)-精氨酸或L-賴氨酸與枸櫞酸的組合，其重量比為l:0.051:i，優(yōu)選i:o.ii:0.8，更優(yōu)選i:o.i5i:0.5。就蛇葡萄素溶液而言，雖然單獨(dú)采用本發(fā)明的堿性氨基酸，可對(duì)人參皂苷-Rd注射液起到一定的助溶作用，但更為優(yōu)選的是采用堿性氨基酸與酸性pH調(diào)節(jié)劑的助溶劑組合?？稍诒景l(fā)明的蛇葡萄素中按比例先加入堿性氨基酸或PH調(diào)節(jié)劑，或同時(shí)加入這兩種物質(zhì)。蛇葡萄素組合物本發(fā)明提供了一種蛇葡萄素組合物，其至少包含活性成分蛇葡萄素和作為助溶劑的堿性氨基酸。本發(fā)明中術(shù)語(yǔ)"蛇葡萄素組合物"和"含有蛇葡萄素的組合物"可互換使用。活性成分和堿性氨基酸的重量比為i:ii:io，優(yōu)選i:11:8，更優(yōu)選i:11:6。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，活性成分和堿性氨基酸的的摩爾比為i:2.51:10,優(yōu)選i:31:8，更優(yōu)選i:31:6。本發(fā)明的蛇葡萄素組合物還可包含上文所述的pH調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選為具有助溶作用的pH調(diào)節(jié)劑，最優(yōu)選枸櫞酸，從而使得組合物溶液的pH為5.08.5，優(yōu)選5.58.0，更優(yōu)選6.07.5，最優(yōu)選6.57.2。堿性氨基酸與pH調(diào)節(jié)劑的重量比為l:o.051:i，優(yōu)選i:o.11:o.8，更優(yōu)選i:o.151:o.5。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，堿性氨基酸與pH調(diào)節(jié)劑的摩爾比為i:o.08i:i，優(yōu)選i:o.ii:o.8，更優(yōu)選i:o.151:o.5，最優(yōu)選i:o.21:o.4。本發(fā)明的蛇葡萄素組合物還可包括除pH調(diào)節(jié)劑以外的藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，包括但不限于藥學(xué)上常用的溶劑，如水、丙二醇、乙醇、聚乙二醇等，優(yōu)選水、丙二醇或它們的組合；滲透壓調(diào)節(jié)劑，例如葡萄糖等；抑菌劑，例如苯甲醇、羥苯丁酯等；抗氧化劑，例如硫脲等。在《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPub.Co.，N.J.1991年)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的載體的充分討論。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，所述藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑不會(huì)阻礙活性物質(zhì)的藥學(xué)活性和藥效，并可根據(jù)具體需要選擇適當(dāng)?shù)妮d體和/或稀釋劑，并確定它們的用量。本發(fā)明的組合物在水中的溶解濃度可提高到50500mg蛇葡萄素/ml溶液，優(yōu)選75400mg蛇葡萄素/ml溶液，更優(yōu)選100300mg蛇葡萄素/ml溶液。當(dāng)然，在使用中也可根據(jù)需要配制蛇葡萄素的稀溶液，例如配制濃度為0.0150mg蛇葡萄素/ml溶液，優(yōu)選O.0330mg蛇葡萄素/ml溶液，更優(yōu)選O.0520mg蛇葡萄素/ml溶液的蛇葡萄素稀溶液。在使用前，本發(fā)明組合物中的各組分可單獨(dú)或相互組合地置于不同容器中，例如將蛇葡萄素和堿性氨基酸置于一個(gè)容器中，而將pH調(diào)節(jié)劑與藥學(xué)上可接受的稀釋劑(如與水配制成溶液)置于另一容器中。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)具體需要和應(yīng)用來(lái)確定組合物的具體形式和分配。因此，本發(fā)明還包括包含本發(fā)明組合物各組分的藥盒。本發(fā)明的組合物可以本領(lǐng)域已知的制劑形式存在，優(yōu)選以注射液形式和注射用無(wú)菌粉末形式存在。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述組合物為蛇葡萄素注射液，其中以注射液的體積為基準(zhǔn)計(jì)，蛇葡萄素的濃度為O.01500mg/ml，優(yōu)選O.03400mg/ml，更優(yōu)選O.05300mg/ml，且pH為59,優(yōu)選6.07.5。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中提供了一種蛇葡萄素組合物，其中包括1-5重量份的蛇葡萄素；l-50重量份的堿性氨基酸，其選自L-精氨酸或L-賴氨酸；0.05-1重量份的pH調(diào)節(jié)劑，例如選自枸櫞酸、磷酸鹽緩沖液、或它們的組合；和藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，所述組合物的水溶液中蛇葡萄素濃度為0.01300mg/ml'且pH為59。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了蛇葡萄素組合物的制備方法，所述方法包括將蛇葡萄素與堿性氨基酸以及任選的其它組分混合。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)具體需要和制備條件選擇具體的制備工藝和步驟以及各組分加入的先后順序，這并不超出本發(fā)明的范圍。蛇葡萄素組合物與卡鉑抑制腫瘤的協(xié)同作用本發(fā)明的蛇葡萄素組合物具有提高的溶解度和穩(wěn)定性，以及適宜的pH，可方便地用于臨床腫瘤的治療。此外，本發(fā)明人通過(guò)研究還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的蛇葡萄素組合物與抗腫瘤藥物卡鉑聯(lián)用可更為有效地抑制腫瘤生長(zhǎng)，兩者具有協(xié)同作用。由此，本發(fā)明還提供了蛇葡萄素組合物和卡鉑在聯(lián)合治療腫瘤中的用途，以及這兩種藥物在制備治療腫瘤的藥盒中的用途。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中還提供了一種對(duì)腫瘤治療具有協(xié)同作用的藥盒，所述藥盒中包括治療有效量的本發(fā)明蛇葡萄素組合物和治療有效量的卡鉑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述藥盒中蛇葡萄素組合物與卡鉑的重量比為i:ioio:i，優(yōu)選i:88:i，更優(yōu)選i:55:i。所述藥盒中還可包括說(shuō)明書、容器、緩沖液等，這可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)具體用途和需要確定。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合使用蛇葡萄素組合物和卡鉑的治療方案可為先給予首劑卡鉑和本發(fā)明的蛇葡萄素組合物，然后每日給予蛇葡萄素組合物和隔日給予卡鉑。具體的治療方案可由臨床醫(yī)師根據(jù)病人的情況(例如年齡、體重、病狀等)、治療的需要等確定。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)提供了具有提高溶解度和穩(wěn)定性，以及適宜pH范圍的蛇葡萄素組合物，可將其作為臨床用藥用于腫瘤的治療；(2)提供了一種助溶體系，所述系統(tǒng)包括堿性氨基酸和酸性pH調(diào)節(jié)劑，其可用于提高蛇葡萄素或類似活性物質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性，并獲得適宜的pH;(3)提供了一種臨床治療腫瘤的方法和藥盒，其中采用了本發(fā)明的蛇葡萄素組合物和常用抗腫瘤藥物卡鉑，獲得了協(xié)同效果。實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)12明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。本發(fā)明實(shí)施例以及前文描述中的"室溫"均指2030'c的溫度。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。藥品、試劑及儀器蛇葡萄素(Ampel叩sin，AMP)由廣東泰禾醫(yī)藥科技有限公司提供，純度98.8°/0。蛇葡萄素鈉(AMP-Na)由廣東泰禾醫(yī)藥科技有限公司提供，規(guī)格為lg/支，批號(hào)061218;50mg/支，批號(hào)051U5。L-賴氨酸(L-Lys)上?？颠_(dá)氨基酸廠產(chǎn)品，批號(hào)8701。L-精氨酸(L-Arg)上海山蒲化工有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20050302，紙色譜合格。枸櫞酸為國(guó)產(chǎn)分析純，上海試劑一廠生產(chǎn)，批號(hào)80-06-06?？ㄣK(O.1g/支)齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)5090061DA。NaJHV2H20為國(guó)產(chǎn)分析純，北京紅星化工廠生產(chǎn)，批號(hào)781225-1。NaHA*12H"為國(guó)產(chǎn)分析純，西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)920216。0.2mol/L的pH5.0磷酸鹽緩沖液、0.1mol/L的pH6.0、6.8的磷酸鹽緩沖液按中華人民共和國(guó)藥典2005版二部(化學(xué)出版社，附錄XVD緩沖液，2005.1)和《醫(yī)用試劑與常用手冊(cè)》(吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1985年3月第1版)配制。枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)、磷酸鹽緩沖液(pH2.0):按中華人民共和國(guó)藥典2005版二部(化學(xué)出版社，附錄XVD緩沖液，2005.1)(同上)配制。Delta320pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品。高效液相色譜儀，島津公司LC-10AT。實(shí)施例l.蛇葡萄素堿性氨基酸助溶體系的研究微，通過(guò)比較L-賴氨酸(L-Lys)和L-精氨酸(L-Arg)對(duì)AMP的助溶作用及生成溶液的溶解性和溶解穩(wěn)定性，以確定一種能使AMP充分溶解且溶解性穩(wěn)定并保留原抗腫瘤活性的AMP制劑的制備方法。13試邀方茲AMP等電點(diǎn)接近pH值5.0左右，其分子中含有6個(gè)羥基，呈弱酸性；同時(shí)L-Lys和L-Arg為堿性氨基酸，臨床可用于人體，安全性可靠，為兩性電解質(zhì)，等電點(diǎn)分別為9.74和10.76，可在酸性溶液中與質(zhì)子(H+)結(jié)合成帶正電荷的陽(yáng)離子(-NH3+)。為使AMP分子中羥基上的H與L-Lys或L-Arg結(jié)合，將AMP與L-Lys或L-Arg按不同的摩爾濃度比(AMP:L-Lys二l:1、1:2、1:3、1:4禾B1:5;或AMP:L-Arg=l:1、1:2和1:3)混合，加等體積的雙蒸水，旋渦震蕩使充分溶解。觀察在不同保存條件下，所制備的AMP溶液的溶解穩(wěn)定性和pH值。在上述試驗(yàn)的基礎(chǔ)上用不同pH的緩沖鹽(PBS)配制AMP-L-Arg溶液觀察其溶解穩(wěn)定性和pH，或采用鹽酸Arg配制AMP-鹽酸精氨酸溶液，觀察其水溶性的變化。試驗(yàn)茲菜1.以50mg/ml計(jì)算AMP的用量，將AMP與不同摩爾濃度比的L-Lys混合配制后，所得制劑在室溫和4'C下的溶解性和穩(wěn)定性如下表1中所示表l.不同濃度L-Lys對(duì)50mg/mlAMP的助溶作用及溶液的溶解穩(wěn)定性AMP:L-Lys_溶液溶解性_(M:M)室溫20室溫1.5h室溫24h室溫48h4°C24hTT1SSii未測(cè)1:2不溶不溶未測(cè)未測(cè)未測(cè)1:3不溶溶解少量藥物析出藥物析出藥物析出l:4溶解溶解未測(cè)未測(cè)未測(cè)i:5溶解溶解溶解溶解溶解表l顯示AMP以50mg/ml計(jì)算用量，AMP與L-Lys按摩爾濃度比1:1、1:2配制，室溫條件下不能完全溶解；AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:3配制，室溫條件下需1.5h才能溶解，室溫及4匸保存，易于析出結(jié)晶；AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:4配制時(shí)，室溫條件下20min完全溶解；AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:5配制，室溫條件下20min完全溶解，室溫及4'C保存，其溶解性穩(wěn)定。2.將AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:4混合配制，使溶液中AMP濃度為100、200或300mg/ml，所得制劑在室溫和4'C下的溶解性和穩(wěn)定性如下表2中所示表2.L-Lys對(duì)不同濃度AMP的助溶作用及溶液的溶解穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表2顯示當(dāng)AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:4配制時(shí)，溶液中AMP的濃度為100mg/ml、200mg/ml，室溫條件下20min完全溶解，室溫及4'C保存，其溶解性穩(wěn)定；溶液中AMP的濃度為300mg/ml，室溫條件下需20min完全溶解，室溫及4i:保存，易于析出結(jié)晶。3.以50mg/ml計(jì)算AMP用量，將AMP與不同摩爾濃度比的L-Arg混合配制后，所得制劑在室溫和4'C下的溶解性和穩(wěn)定性如下表3中所示表3.不同濃度L-Arg對(duì)50mg/mlAMP的助溶作用及溶液的溶解穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3顯示AMP與L-Arg按l:1、1:2摩爾比配制時(shí)，室溫條件下不能完全溶解；AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3配制，室溫條件下保存時(shí)其溶解性穩(wěn)定，所得溶液pH為8.89。4.將AMP與L-Arg按l:3摩爾比混合配制后，溶液中AMP濃度為50、100或200mg/ml，該溶液在室溫和4。C下的溶解性和穩(wěn)定性如下表2中所示表4.L-Arg對(duì)不同濃度AMP的助溶作用及溶液的溶解穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表4顯示AMP與L-Arg按l:3的摩爾比配制后，溶液中AMP的濃度為50、100和200mg/ml，室溫條件下20min完全溶解，室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定。5.用不同pH值的PBS配制l:3摩爾比的AMP:L-Arg，所得溶液的溶解穩(wěn)定性及pH值如表5所示表5.用不同pH的PBS配制的AMP:L-Arg(M/M)=l:3溶液的溶解穩(wěn)定性及pH成分ABCDAMP(mg)400400400400L-Arg(mg)588588588588用雙蒸水(ml)1—1—量PBS(pH2.0)——0.51.5PBS(pH5.0)0.51.5——溶液體積(ml)2.02.02.02.09.029.008.908.89室溫放置20min溶解溶解溶解溶解溶解穩(wěn)定性室溫放置4h溶解溶解溶解溶解室溫放置24h溶解溶解溶解溶解承溶液中AMP的濃度為200mg/ml，"一"為未加該成分，pH為25'C測(cè)定。由表5可見(jiàn)溶液中AMP的濃度為200mg/ml，室溫條件下20min完全溶解，室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定。不同pH的磷酸緩沖液對(duì)其溶解性無(wú)明顯影響，25'C時(shí)的pH均為9.0左右。6.配制AMP:鹽酸-Arg的摩爾比為l:3的溶液，以研究鹽酸-Arg對(duì)100mg/mlAMP水溶性的影響，結(jié)果如表6所示表6鹽酸-Arg對(duì)100mg/mlAMP水溶性的影響濃度溶液溶解性室溫20min室溫4h室溫24h室溫48hAMP100mg/ml不溶不溶不溶未測(cè)結(jié)果顯示室溫條件下，AMP在AMP:鹽酸-Arg(M:M)=l:3的溶液(AMP的濃度為100mg/ml)中不溶解。祭菜分叛與/!/訟蛇葡萄素(AMP)分子中含有6個(gè)酚羥基，具有弱酸性，AMP微溶于水，在水溶液中的溶解度僅為0.2mg/ml，研究顯示蛇葡萄素在堿性溶液中的溶解度較大，在水中溶解度較小，這可能是因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿形成鹽，從而增大溶解度。本發(fā)明人利用堿性氨基酸L-Lys、L-Arg的堿性性質(zhì)，研究其對(duì)AMP的助溶作用，結(jié)果顯示AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3配制，AMP濃度可達(dá)200mg/ml，室溫條件下20min完全溶解，室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定；AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:3配制，AMP濃度達(dá)50mg/ml，室溫條件下需1.5h才能溶解，室溫及4'C保存，易于析出結(jié)晶。但將AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:4配制，AMP濃度達(dá)200mg/ml時(shí)，AMP溶解完全且所得溶液儲(chǔ)存后溶解性穩(wěn)定。由上述可見(jiàn)，L-Arg與L-Lys對(duì)AMP均有助溶作用，但相比較而言，L-Arg對(duì)AMP的助溶作用優(yōu)于L-Lys。實(shí)施例2.用不同pH緩沖液稀釋的堿性氨基酸助溶蛇葡萄素溶液的溶解穩(wěn)定性試窗游注射液的pH值不能超過(guò)人的生理耐受范圍，一般pH可在49。小量靜脈注射液，由于血液有緩沖作用，pH可適當(dāng)放寬，一般可在310之間。而大量輸入時(shí)，如過(guò)酸過(guò)堿，將會(huì)引起酸堿中毒，故以接近血液pH(7.4)為宜。AMP與L-Lys按摩爾濃度比l:4配制，L-Arg按摩爾濃度比l:3配制，AMP濃度可達(dá)200mg/ml，pH值在9.0左右，堿度偏高，為了更符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用所需濃度及適宜的pH值，可對(duì)其進(jìn)行稀釋。因此，本實(shí)施例中通過(guò)比較L-賴氨酸(L-Lys)和L-精氨酸(L-Arg)對(duì)AMP助溶生成的溶液在不同pH值的磷酸緩沖液中的溶解穩(wěn)定性及pH值，以確定更符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)需要及臨床應(yīng)用的AMP制劑。"'-發(fā)才茲將AMP在L-Lys或L-Arg助溶作用下形成的溶液，用pH值5.0、6.0、6.8的磷酸鹽緩沖液稀釋，觀察在不同條件下保存，稀釋液的溶解穩(wěn)定性及25'C的pH值。微祭菜1.采用AMP:L-Lys二l:3或l:4配比的溶液，經(jīng)pH5.0、6.0或6.8的磷酸緩沖液稀釋后的溶解穩(wěn)定性及pH值如表7和表8所示表7.AMP丄-Lys二l:3(M/M)的AMP溶液經(jīng)稀釋后的溶解穩(wěn)定性及pH值稀釋液(磷酸鹽溶液的溶解性及pH值(25°C)緩沖液)的pH值室溫20min室溫2h室溫24h室溫48h4'C24hPHpH=5.0少量顆粒藥物析出藥物析出藥物析出藥物析出5.75pH=6.0少量顆粒藥物析出藥物析出藥物析出藥物析出6.26pH=6.8少量顆粒少量顆粒少量顆粒少量顆?；鞚?.01AMP受試液濃度50mg/ml，AMP終濃度為5mg/ml17表8.AMP:L-Lys=l:4(M/M)的AMP溶液經(jīng)稀釋后的溶解穩(wěn)定性及pH值稀釋液(磷酸鹽_溶液的溶解性及pH值(25'C)_緩沖液)的pH值室溫20min室溫6h室溫24h室溫48h4。C24hpHpH=5.0少量顆粒藥物析出藥物析出藥物析出藥物析出5.86pH=6.0少量顆粒藥物析出藥物析出藥物析出藥物析出6.38pH=6.8溶解溶解溶解溶解f^后認(rèn)^7'27AMP受試液濃度50mg/ml，AMP終濃度為5mg/ml表7的結(jié)果顯示AMP:L-Lys(M/M)=l:3配制的溶液，在pH值5.0、6.0、6.8緩沖液中稀釋，易于析出結(jié)晶。而表8則顯示AMP:L-Lys(M/M)=l:4配制的溶液，在pH值5.0、6.0的磷酸鹽緩沖液中易于析出結(jié)晶，在pH值6.8的緩沖液中溶解穩(wěn)定，且25T時(shí)的pH為7.27。2.將AMP與L-Arg摩爾比為l:3的助溶溶液用pH5.0、6.0或6.8的緩沖液稀釋后，所得終濃度5mg/ml或1Omg/ml的溶液的溶解穩(wěn)定性及pH值如表9所示表9.不同pH值緩沖液稀釋后的L-Arg助溶的AMP溶液的溶解穩(wěn)定性及pH值—^MPAMP稀釋稀釋液(磷酸鹽溶液的溶解性及pH值(25'C)=濃度后終濃度緩沖液)的pH值室溫20min室溫3h室溫5h室溫24hpHpH==5.0溶解溶解藥物析出藥物析出5.93200c/,,,5mg/mlmg/mltopH==6.0溶解溶解藥物析出藥物析出6.40pH==6.8溶解溶解溶解藥物析出7.26pH==5.0溶解少量顆粒藥物析出藥物析出6.162001Ah,■10mg/mlmg/mltopH==6.0溶解溶解藥物析出藥物析出6.74pH==6.8溶解溶解溶解藥物析出7.9表9顯示AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3配帝U，AMP的濃度為200mg/ml，在pH值5.0、6.0、6.8的磷酸鹽緩沖液中稀釋為AMP終濃度5mg/ml，在pH值5.0、6.0磷酸鹽緩沖液能溶解穩(wěn)定3小時(shí)，pH值為5.96.4(25。C)，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中能溶解穩(wěn)定5小時(shí)，pH值為7.26(25°C)。而AMP終濃度為10mg/ml時(shí)，在pH值5.0、6.0磷酸鹽緩沖液能溶解穩(wěn)定3小時(shí)，pH值6.16.8(25'C)，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中能溶解穩(wěn)定5小時(shí)，pH值7.91(25。C)。智榮分析與/!/論AMP:L-Lys(M/M)=l:4配制溶液，AMP受試液濃度50mg/ml，在pH值6.8緩沖液中稀釋，AMP終濃度為5mg/ml，在pH值6.8緩沖液中的溶解穩(wěn)定，pH7.27(25。C)，十分適合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用。AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3配制，AMP的濃度為200mg/ml，在pH值5.0、6.0、6.8磷酸鹽緩沖液中稀釋，AMP終濃度為5mg/ml，在pH值5.0、6.0磷酸鹽緩沖液能溶解穩(wěn)定3小時(shí)，pH值5.96.4(25。C);在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中能溶解穩(wěn)定5小時(shí)，pH值7.26(25'C)，適合臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要求；AMP終濃度為10mg/ml，在pH值5.0、6.0磷酸鹽緩沖液能溶解穩(wěn)定3小時(shí)，pH值6.16.8(25°C);適合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用要求。L-Arg與L-Lys相比較，AMP與L-Arg、L-Lys均按摩爾濃度比1:3配制的溶液，在pH值5.0、6.0、6.8磷酸鹽緩沖液中稀釋，AMP終濃度為5mg/ml時(shí)，AMP-L-Arg溶液比AMP-L-Lys溶液更符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的要求。不足之處是L-Arg對(duì)AMP助溶制成的稀釋溶液為AMP5mg/ml,只在數(shù)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，若要長(zhǎng)期保存，則可將高濃度的原液制成凍干制劑，臨用前用pH值5.0、6.0、6.8磷酸鹽緩沖液稀釋為所需濃度。實(shí)施例3.AMP-L-Arg與AMP-Na溶解性、溶解穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性的比較試邀贈(zèng)通過(guò)比較蛇葡萄素在L-精氨酸助溶形成的溶液(AMP-L-Arg，AA)與蛇葡萄素鈉(AMP-Na)的溶解性、溶解穩(wěn)定性及化學(xué)成分穩(wěn)定性，以便找到一種溶解性更好，溶解穩(wěn)定性更好的AMP制劑的制備方法，使AMP適宜進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)并為指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。微方法1.AMP-L-Arg與AMP-Na溶解性、溶解穩(wěn)定性的比較將AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3各自稱重混合，在pH值5.0的PBS中溶解得AMP-L-Arg(AA)溶液，將AMP-Na用pH值5.0的PBS溶解，比較兩者溶解性、溶解穩(wěn)定性。2.AMP-L-Arg與AMP-Na稀釋液的溶解穩(wěn)定性及pH值比較按AMP濃度為200mg/ml，AMP:L-Arg(M/M)=l:3，力口pH4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液1.5ml溶解，再按L-Arg:枸櫞酸(M/M)-1:0.2加入枸櫞調(diào)pH值得200mg/ml蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液，用NS分別稀釋200mg/m的AAC溶液與200mg/mlAMP-Na溶液(在pH值5.0的PBS中溶解)，比較兩者稀釋液室溫條件下的溶解穩(wěn)定性及pH值。3.AMP-L-Arg與AMP-Na的化學(xué)成分穩(wěn)定性按AMP濃度為200mg/ml，AMP:L-Arg(M/M)=l:3，力口pH4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液1.5ml溶解，再按L-Arg:枸櫞酸(M/M"1:0.2加入枸櫞酸調(diào)pH值為7.27.4，所得AAC溶液取40U1用NS3960yl稀釋為2mg/ml;取AMP-Nal支(50mg)用pH6.8的PBS稀釋為8mg/ml，再取lml加1mlpH6.8的PBS再力口2mlNS得2mg/ml。用高效液相法測(cè)定化學(xué)成分穩(wěn)定性。1.AA與AMP-Na的溶解性、溶解穩(wěn)定性表IO.AA與AMP-Na的溶解性、溶解穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表l的結(jié)果顯示AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3用pH值5.0的PBS溶解，AMP濃度可達(dá)200mg/ml，室溫條件下保存，48h溶解性穩(wěn)定；AMP-Na用pH值5.0的PBS溶解為50mg/ml室溫條件下保存，24h溶解性穩(wěn)定，100、200mg/ml配制時(shí)立即溶解，但室溫條件下保存，30min即有藥物析出。2.AAC與AMP-Na稀釋液的溶解穩(wěn)定性及pH值表l1.AMP-Na溶解穩(wěn)定性及pH值<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表12.AAC溶解穩(wěn)定性及pH值A(chǔ)AC(mg/ml)pH值30minHi^Tli8h24h如表11和12所示200mg/ml的AAC24h溶解穩(wěn)定，pH值7.37，200mg/mlAMP-Na用pH值5.0PBS溶解，當(dāng)時(shí)立即溶解，pH值8.59，但室溫條件下0.5h藥物析出；40mg/mlAAC室溫條件下8h溶解穩(wěn)定，pH值7.13，30mg/mlAMP-Na室溫條件下24h溶解穩(wěn)定，pH值8.55;30mg/ml以下的AAC與AMP-Na的稀釋液，室溫條件下保24h溶解性均穩(wěn)定；相同或相近濃度的AAC稀釋液與AMP-Na稀釋液比較，AAC稀釋液的pH值明顯低于AMP-Na稀釋液的pH值。3.AAC與AMP-Na化學(xué)成分穩(wěn)定性表13.AMP-Na、AAC溶液化學(xué)穩(wěn)定性比較p士S)測(cè)定時(shí)間AMP-Na(%)AAC(%)24h37.37±1.66**50.25±0.62**P<0.01表14.高效液相法測(cè)定AMP、AAC出峰時(shí)間(min)測(cè)定時(shí)間AMPAACOh24h13.64±0.0113.62±0.0513.76±0.0513.70±0.02如表13和14所示高效液相法測(cè)定24h后AMP含量為2mg/mlAAC溶液、AMP-Na2mg/ml分別降解為0h的50.25%和37.37%，化學(xué)成分穩(wěn)定性明顯降低，但AMP含量為2mg/ml的AAC溶液與AMP-Na2mg/ml比較AMP-Na2mg/ml下降程度更大(PO.01);經(jīng)高效液相法測(cè)定Oh、24h的AAC和AMP-Na的出峰時(shí)間，AAC與AMP-Na比較，無(wú)明顯變化(PX).05)。茲榮分析與^訟本發(fā)明人在前期已成功地將AMP制備成鈉鹽(AMP-Na)，使AMP的溶解性明顯提高，溶解可達(dá)25mg/ml(24°C)，室溫及4'C條件保存溶解性穩(wěn)定。通過(guò)解溶解解少量顆粒解溶解解溶解解溶解解溶解溶溶溶溶溶溶萍萍揮萍萍牟溶溶溶溶溶溶早軍軍軍庫(kù)軍M溶溶溶溶摔萍摔萍摔萍角龜龜命角角溶溶溶溶激溶73164rTTlc/^7.7-241o21AMP堿性氨基酸助溶體系的研究，發(fā)現(xiàn)AMP在堿性氨基酸助溶作用下，可大大提高AMP的溶解性，溶解可達(dá)200mg/ml。用pH5.0的PBS分別溶解AMP-L-Arg和AMP-Na，結(jié)果顯示AMP在L-Arg的助溶作用下，溶解性明顯提高，可達(dá)200mg/ml，且溶解性穩(wěn)定，而AMP-Na溶解性穩(wěn)定只能溶解50mg/ml。通過(guò)比較AAC與AMP-Na的NS稀釋液的溶解穩(wěn)定性及pH值，結(jié)果顯示兩者溶解穩(wěn)定性沒(méi)有明顯差別，但與AMP-Na稀釋液相同或相近濃度的AAC稀釋液的pH值明顯低于AMP-Na稀釋液的pH值，AAC不同濃度稀釋液pH值范圍為7.047.37，符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的要求，AMP-Na不同濃度稀釋液pH值范圍為7.998.59，酸堿度偏高，不甚符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的要求。作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的制劑，還需藥物的有效化學(xué)成分穩(wěn)定，因此對(duì)2mg/mlAAC溶液與2mg/mlAMP-Na溶液作了比較，結(jié)果顯示兩者24h分別降解為Oh的50.25%和37.37%，化學(xué)成分穩(wěn)定性均明顯降低，但AMP-Na2mg/ml下降程度更大，已通過(guò)將AMP-Na作成凍干劑型克服了溶液化學(xué)不穩(wěn)定的不足，同樣地，可以將AAC制備成凍干劑型克服此不足之處。實(shí)施例4.蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液的穩(wěn)定性微諸AMP-L-Arg(AA)溶液的pH值在9.0左右(25。C)，通過(guò)在AMP-L-Arg溶液中加入枸櫞酸，使形成的AAC溶液的pH值在7.27.4左右(25。C)，符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的要求。再觀察其溶解穩(wěn)定性，用高效液相法測(cè)定其化學(xué)成分穩(wěn)定性，以確定其溶解及藥效的穩(wěn)定性，從而為人體用藥提供依據(jù)。試驗(yàn)方茲1.不同濃度枸櫞酸對(duì)AMP-L-Arg(AA)溶液穩(wěn)定性及pH的影響將AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3各自稱重混合，在pH4.0的枸櫞酸-磷酸二氫鈉緩沖液溶解，得到AMP-L-Arg(AA)溶液；然后在其中加入不同量的枸櫞酸，使形成的AAC溶液的pH值在7.27.4左右，室溫下觀察其溶解穩(wěn)定性，用生理鹽水NS稀釋，室溫下觀察稀釋液穩(wěn)定性及pH值(25'C)。2.不同濃度蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液的溶解穩(wěn)定性和pH按AMP濃度為200mg/ml，AMP:L-Arg(M/M)=l:3，力口pH4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液1.5ml溶解，再按L-Arg:枸櫞酸(M/M)-1:0.2加入枸櫞酸71.7mg調(diào)pH值，所得AMP濃度為200mg/ml的AAC溶液的配制方法，同比例稱取AMP2220mg，L-精氨酸29.4mg，加入1.5ml枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)20倍稀釋液，溶解后得1.5ml，再加枸櫞酸7.17mg，加入0.5mlNS溶液，得2mlAAC溶液，AMP濃度為10mg/ml，用NS稀釋成不同濃度在室溫條件下保存，觀察其溶解穩(wěn)定性及pH值(25'C)。3.用高效液相測(cè)定其化學(xué)成分穩(wěn)定性。色譜柱為島津VP-ODSC18(150X4.6mm，5iim)柱，流動(dòng)相為乙腈-2%乙酸(l:9)，流速l.Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)2卯nm，柱溫25。C，室溫22-23°C，進(jìn)樣量IOu1。4.高濃度ACC對(duì)大鼠肌肉的刺激性將200mg/ml的ACC和對(duì)照NS分別注射到大鼠肌肉中，一段時(shí)間后肉眼觀察和顯微鏡下觀察肌肉有無(wú)異常。試盈茲菜1.不同濃度枸櫞酸對(duì)AMP-L-Arg(AA)溶液穩(wěn)定性及pH的影響AMP含量為200mg/ml，AMP:L-Arg(M/M)=l:3，力口pH4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液溶解，再按L-Arg:枸櫞酸(M/M)-1:0.2加入枸櫞酸調(diào)pH值，所得含AMP200mg/ml的AAC溶液在室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定，pH值為7.27.4(見(jiàn)表15)。表15.不同濃度的枸櫞酸對(duì)AA溶液pH值的影響aaaac(amp:枸櫞酸aac(amp:枸櫞酸aac(amp:枸櫞酸溶液m/m=i:0.1)m/m=l:0.15)m/m=l:0.2)pH值(25°c)9.138.508.047.372.不同濃度蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液的溶解穩(wěn)定性和pH含AMP200mg/ml的AAC溶液，用NS稀釋成AMP2mg/ml以下的AAC水溶液，在室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定，pH值為7.057.06(25。C);AMP40mg/ml、AMP10mg/ml的AAC水溶液，在室溫條件下保存，分別在8h和24h后易析出結(jié)晶(見(jiàn)表16)。表16.不同濃度AAC溶液的溶解穩(wěn)定性及pH值^溶液溶解性及pH(mg/ml)pH值(25。C)室溫4h室溫8h室溫24h室溫48h解溶解溶解解微量藥物析出藥物析出解溶解藥物析出溶溶溶摔萍率溶溶溶731311oo2oo41按含AMP200mg/ml的AAC溶液的配法，同比例配制AMP10mg/mlAAC水溶液，室溫條件下保存2h溶解性穩(wěn)定，用NS稀釋為AMP5mg/ml室溫條件下保存4h溶解穩(wěn)定；而稀釋為AMP2mg/ml(包括2mg/ml)以下室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定，pH值為6.446.53(25'C)(見(jiàn)表17)。表17.AMP10mg/mlAAC溶液稀釋為不同濃度溶液溶解穩(wěn)定性及pH值體溶液溶解性及pH(mg/ml)pH值(25。C)~~室溫2h室溫4h室溫24h室溫48h3.AAC水溶液的化學(xué)成分穩(wěn)定性高效液相法測(cè)定，AMP含量為40mg/mlAAC溶液在6h內(nèi)化學(xué)成分穩(wěn)定。見(jiàn)(表18)。_表18.AAC水溶液的化學(xué)成分穩(wěn)定性_時(shí)間(h)0126峰面積:495卯38607410659192734861542穩(wěn)定性(％)100122.4856119.363398.03397高效液相法測(cè)定24h后AMP含量為2mg/mlAAC下降為Oh的50.25%，與AMP2mg/ml比較穩(wěn)定性明顯下降，差別有顯著性(PO.01)(見(jiàn)表19)表19.AMP、AAC溶液化學(xué)穩(wěn)定性比較(^士S)—測(cè)定時(shí)間AMP(%)AAC(%)一24h116.23士0.8750.25士0.62****P<0.01經(jīng)高效液相法測(cè)定Oh、24h時(shí)AMP和AAC的出峰時(shí)間，AAC與AMP比較，差別無(wú)顯著性(PX).05)(見(jiàn)表20)。106.64未觀lj2未測(cè)16.530.56.530.256.520.1256.510.06256.510.031256.44微小顆粒藥物析出藥物析出溶解藥物析出藥物析出溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解溶解早軍率溶溶溶萍萍萍溶溶溶率軍軍溶溶溶淬萍早溶溶溶645o刀力2o萍萍萍軍萍軍萍萍軍溶溶溶溶溶溶溶溶溶24表20.高效液相法測(cè)定AMP、AAC出峰時(shí)間(min)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>4.高濃度ACC對(duì)大鼠肌肉的刺激性肉眼觀察結(jié)果注射NS的大鼠肌肉無(wú)異常。而注射200mg/mlAAC大鼠肌肉中有色素沉著，部分肌肉顏色發(fā)黑。顯微鏡下觀察結(jié)果注射NS對(duì)照的大鼠肌肉肌束規(guī)則，緊密相接，細(xì)胞核呈梭形，位于細(xì)胞邊緣。而注射200mg/mlAAC的大鼠肌束不規(guī)則，組織間隙水腫、增寬，有少量炎性細(xì)胞。結(jié)果提示高濃度AAC對(duì)肌肉有刺激性，不宜用其進(jìn)行肌肉注射。祭菜W訟與分^f通過(guò)蛇葡萄素堿性氨基酸助溶體系的研究，發(fā)現(xiàn)AMP與L-Arg按摩爾濃度比l:3配制，AMP濃度可達(dá)200mg/ml，室溫條件下20min完全溶解，室溫條件下保存，其溶解性穩(wěn)定，雙蒸水、磷酸鹽緩沖液對(duì)其溶解性無(wú)明顯影響，pH值均在9.0左右(25。C)，不能很好地滿足動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用的要求。按AMP含量為200mg/ml，AMP:L-Arg(M/M)=l:3，用pH4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液溶解，再按L-Arg:枸櫞酸(M/M"1:0.2加入枸櫞酸，所得AMP含量為200mg/ml的AAC溶液，pH值在7.27.4(25'C)，符合臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的要求。將200mg/ml的AAC溶液用NS稀釋為40mg/ml,用高效液相法測(cè)定化學(xué)成份穩(wěn)定性，結(jié)果顯示在6h內(nèi)其化學(xué)成分穩(wěn)定，pH值7.13(25'C)，符合臨床應(yīng)用及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)肌肉注射給藥時(shí)濃度及pH值的要求。研究表明高濃度體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)及臨床大輸液需要低濃度藥物，因此將200mg/ml的AAC溶液用NS稀釋為2mg/ml。室溫條件下保存，該稀釋溶解性穩(wěn)定，pH〗直6.46.5(25'C)，符合體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)和臨床大輸液應(yīng)用要求，但用高效液相法測(cè)定其化學(xué)成份24h降解為0h時(shí)的50.25%，建議將200mg/ml的AAC溶液制成凍干制劑，臨用時(shí)用NS稀釋為2mg/ml使用即可克服此不足之處。實(shí)施例5.蛇葡萄素(AMP)與蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液體外抗腫瘤作用的比較微諸比較AAC與AMP對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞的增殖抑制作用，初步探討AAC與AMP對(duì)SPCA-1細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用的細(xì)胞濃度，以考察AMP在制備成AAC后其抗腫瘤活性有無(wú)明顯變化。試發(fā)方茲1.藥物配制AMP配制AMP粉末用5。/。DMSO溶解并配成應(yīng)用液濃度。AAC酉己制稱取AMP20mg，L-精氨酸29.4mg，加入1.5ml枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)20倍稀釋液，溶解后得.5ml，再加枸櫞酸7.17mg，加入0.5mlNS溶液得2ml，AMP濃度為10mg/ml,用NS稀釋成應(yīng)用液濃度。2.細(xì)胞及培養(yǎng)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞，購(gòu)自中科院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞來(lái)源于人原發(fā)性肺腺癌，為1980年培養(yǎng)并建系，形態(tài)為多形上皮樣，群體倍增時(shí)間約30小時(shí)。細(xì)胞用含IO°/。小牛血清和青、鏈霉素各IOOU/ml的RPMI1640培養(yǎng)液，置37°C、5%(]02的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3.比較試驗(yàn)采用MTT法比較相同劑量AAC和AMP對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞增殖的抑制作用。實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組、AMP組、AMP空白對(duì)照組、AAC組、AAC空白對(duì)照組。每組中的各濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。各組處理為，陰性對(duì)照組加細(xì)胞不加藥物；空白對(duì)照組加RPMI1640不加細(xì)胞；AMP組細(xì)胞+AMP;AMP空白對(duì)照組RPMI1640十AMP;AAC組細(xì)胞+AAC;AAC空白對(duì)照組RPMI1640+AAC。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SPCA-1細(xì)胞，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至5.5X10MVml(5000個(gè)/孔)，在96孔培養(yǎng)板中以90yl/孔加入細(xì)胞懸液，10"l/孔加入藥物，培養(yǎng)48h。于實(shí)驗(yàn)終止前4h加入MTT(10lU/孔)，實(shí)驗(yàn)終止時(shí)加入IO%SDS(IOOyl/孔)，放置12h,震蕩10分鐘，于波長(zhǎng)570nm處測(cè)定吸光值。根據(jù)下式計(jì)算抑制率(IR)，比較AMP和AAC對(duì)SPCA-l細(xì)胞的IR和ICso值。抑制率(，。"陰性0，^^gOD均值x證。陰性O(shè)D均值各組數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，用S士S表示，采用t-檢驗(yàn)進(jìn)行分析，用Excel-200326進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。微淑細(xì)胞濃度為5.5X10"個(gè)/ml，等劑量AMP和AAC對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞增殖的抑制作用結(jié)果如圖1和表21所示。表21.AMP和AAC對(duì)人肺癌SPCA-1細(xì)胞增殖的抑制作用(48h，n=3)藥物含量△OD570IR(%)昭/mlAMPAACAMPAAC陰性0.442±0.0900.453±0.010一一250.411±0.0140.426±0.0057.165.96500.387±0.0070.376±0.03712.9416.941000.177±0.0100.173±0.00659.9861.86ic50——94.84pg/ml86,74嗎/ml結(jié)果表明AMP和AAC對(duì)SPCA-1細(xì)胞均有明顯地增殖抑制作用，處理時(shí)間為48h時(shí)，100嗎/ml濃度時(shí)抑制作用最明顯，AMP與AAC對(duì)SPCA-1細(xì)胞的IR。/。分別為59.98%、61.86%,ICs。分別為96.18和86.74叱/ml，且在濃度為25100pg/ml的劑量范圍內(nèi)呈明顯的劑量依賴性。相同劑量的AMP與AAC在570nm處的吸光值比較，無(wú)明顯差異^<0.05)。祭菜分^與/l/論在本實(shí)施例中考察了將AMP制成AAC后，其抗腫瘤活性是否發(fā)生明顯變化，結(jié)果顯示SPC-A-l細(xì)胞濃度為5.5Xl()4個(gè)/ml時(shí)，AMP、AAC濃度為IOO嗎/ml時(shí)，對(duì)SPC-A-1細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，AMP單獨(dú)應(yīng)用IR為59.980/0，1(〕5。為96.18(ig/ml，AMP在制備成AAC后，IR為61.68%，1(:5()為86,74(ig/ml，其抗腫瘤的藥理活性無(wú)明顯變化，且在25100嗎/ml劑量范圍內(nèi)的AAC單獨(dú)應(yīng)用，對(duì)SPC-A-1細(xì)胞的增殖抑制作用存在量效關(guān)系。實(shí)施例6.蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)溶液體內(nèi)抗腫瘤作用研究"邀諸研究AAC單獨(dú)應(yīng)用及與化療藥合用對(duì)人肺癌GLC-82細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，確定AAC單獨(dú)用藥及與化療藥聯(lián)合應(yīng)用的體內(nèi)抗腫瘤作用。試驗(yàn)力一法1.移植瘤種植收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的GLC-82細(xì)胞(購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù))，用不含血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1.0X1()7個(gè)/ml，按1.0乂106個(gè)細(xì)胞/只，在裸鼠(Balb/cnu.nu裸鼠，雌性，體重1723g,購(gòu)自上海安本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠)右側(cè)背部皮下接種(O.lml/只)。2.藥物配制200mg/mlAAC的配制稱取AMP200mg，L-精氨酸294mg,加入0.75ml枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)溶解后得lml，再加枸櫞酸71.7mg，pH值在7.2-7.4(25。C)。40mg/mlAAC的配制取200mg/mlAAC1ml+4mlNS，0.22um微孔濾器過(guò)濾除菌，pH值7.13(25。C)?？ㄣK的配制取注射用卡鉑l支，加NS到25ml，即4.0mg/ml。對(duì)照緩沖液的配制稱取L-精氨酸294mg，加入0.75ml枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)，再加枸櫞酸107.5mg(L-精氨酸枸櫞酸M::M=1:0.3)溶解后加4mlNS，0.22wm微孔濾器過(guò)濾除菌，pH值7.0左右(25。C)。3.分組及給藥實(shí)驗(yàn)設(shè)PBS對(duì)照組，卡鉑40mg/kg(0.1ml/10g)組，單用AAC200mg/kg組和AAC200mg/kg與卡鉬40mg/kg，0.1ml/10g聯(lián)合用藥組。裸小鼠于接種后瘤體積平均長(zhǎng)至100-300mg時(shí)隨機(jī)分組并給予藥物治療，給藥方法為單用AAC200mg/kg，0.05ml/10g，im;聯(lián)合用藥時(shí)，給予化療藥卡鉑40mg/kg，0.1ml*10g-l，ip后30分鐘再給AAC200mg'kg-l，0.05ml'10g-l，im，卡鉑隔日給藥，AAC每日給藥。每隔2日稱體重1次。AAC配制后2h內(nèi)使用，同時(shí)觀察裸鼠有無(wú)異常反應(yīng)。4.觀察指標(biāo)和有效判定標(biāo)準(zhǔn)抑瘤率(IR)及藥物相互作用指數(shù)(CDI)的計(jì)算于末次給藥后次日稱體重，處死動(dòng)物，解剖剝?nèi)×鰤K，稱瘤重。按下式計(jì)算抑瘤率和藥物相互作用指數(shù)(CDI)。抑瘤率(IR)%=,細(xì)糊g(gH合,翻,x!00%、J陰性對(duì)照組平均瘤重(g)藥物相互作用指數(shù)(CDI):」5式中，AB為兩藥聯(lián)合用藥組與對(duì)照組瘤重的比值，A或B是各藥單獨(dú)用藥組與對(duì)照組瘤重的比值。當(dāng)CDK1時(shí)，兩藥有協(xié)同作用；當(dāng)CDK0.7時(shí)，協(xié)同28作用非常顯著。抑瘤率<30%為無(wú)效；抑瘤率〉30%并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理？<0.05為有效。各組數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，用；士S表示，采用t-檢驗(yàn)進(jìn)行分析，用Excel-2003進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。試驗(yàn)錄菜AAC的體內(nèi)抗腫瘤作用研究結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3以及表22:表22.AAC與卡鉑在治療Balb/cnu.nu荷人肺癌GLC-82時(shí)的協(xié)同作用p士S，n=7)組另寸SIS瘤重(g)IR(%)CDI對(duì)照——卡鈾40mg/kgAAC200mg/kgAAC200mg/kg+卡鉬40mg/kg與對(duì)照組比*P<0.05，與卡鉑比AAP<0.01。1.10±0.770.58±0.1447,780.93±0.6015.840.32±0.06*AA70.780.66結(jié)果顯示AAC200mg/kg單獨(dú)用藥組抑瘤率為15.84%，與對(duì)照組比可使腫瘤重量減輕，但差別無(wú)顯著性(pX).05)。卡鉑組的抑瘤率為47.78%，AAC與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組抑瘤率為70.78%，AAC與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組與對(duì)照組比較可使腫瘤重量明顯減輕(p〈0.05);與卡鉑組相比可使腫瘤重量減輕(p〈0.01)，根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)AAC200mg'kg-l單獨(dú)用藥無(wú)效，但AAC200mg*kg-l與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用具有明顯協(xié)同抗腫瘤作用，CDI為0.66。已有研究結(jié)果顯示蛇葡萄素對(duì)人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤具有顯著的抑制作用。本實(shí)施例研究了AAC單獨(dú)應(yīng)用及與化療藥合用對(duì)人肺癌GLC-82細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，結(jié)果顯示AAC200mg/kg單獨(dú)用藥可使腫瘤重量減輕，抑瘤率為15.84%，根據(jù)判斷標(biāo)準(zhǔn)，抑瘤率<30%為無(wú)效，但是AAC200mg/kg與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用可使腫瘤重量明顯減輕，抑瘤率為70.78%，CDI為0.66，提示二者聯(lián)合用藥具有明顯協(xié)同抗腫瘤作用，可將AAC作為抗腫瘤藥在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用中與其他抗腫瘤藥聯(lián)合使用。實(shí)施例7.蛇葡萄素-L-精氨酸(AMP-L-Arg)以及蛇葡萄素-L-精氨酸-枸櫞酸(AAC)注射劑以及凍干制劑的制備配方AMP200mgL-精氨酸294mg加入0.75ml枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)溶解后得lml加枸櫞酸71.7mg，pH值在7.2-7.4按照以上配方制得的澄清溶液，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾除菌，以l毫升為一個(gè)裝量單位，分裝于容積為5毫升的管制瓶，置于冷凍干燥機(jī)中作脫水處理。凍干時(shí)間為24-32小時(shí)。經(jīng)凍干后的藥品密封保存，注射前用無(wú)菌水溶解后直接使用。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。權(quán)利要求1.一種蛇葡萄素組合物，其包含如下組分a)蛇葡萄素；和b)堿性氨基酸，其選自L-精氨酸、L-賴氨酸或它們的組合；其中，組分a)與組分b)的重量比為1∶1～1∶10，優(yōu)選1∶1～1∶8，更優(yōu)選1∶1～1∶6。2.如權(quán)利要求l所述的蛇葡萄素組合物，其特征在于，所述組合物選自蛇葡萄素注射液或蛇葡萄素注射用無(wú)菌粉末。3.如權(quán)利要求l所述的蛇葡萄素組合物，其特征在于，所述組合物還包括組分c)pH調(diào)節(jié)劑。4.如權(quán)利要求3所述的蛇葡萄素組合物，其特征在于，所述組分c)選自枸櫞酸、鹽酸、磷酸鹽緩沖液、醋酸緩沖液或它們的組合，從而使得組合物溶液的pH為59，優(yōu)選pH為5.0-8.5。5.如權(quán)利要求3所述的蛇葡萄素組合物，其特征在于，所述組分c)為枸櫞酸，且組分b)堿性氨基酸與組分c)枸櫞酸的重量比為i:o.05i:i，優(yōu)選i:o.ii:0.8，更優(yōu)選i:o.i5i:0.5。6.如權(quán)利要求l所述的蛇葡萄素組合物，其特征在于，所述組合物還包括d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。7.—種蛇葡萄素組合物，其包括a)l-5重量份的蛇葡萄素；b)l-50重量份的堿性氨基酸，其選自L-精氨酸或L-賴氨酸；c)0.05-l重量份的pH調(diào)節(jié)劑，其選自枸櫞酸、磷酸鹽緩沖液、醋酸或它們的組合；和d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，所述組合物的水溶液中蛇葡萄素濃度為0.01500mg/ml，且pH為59。8.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)所述的蛇葡萄素組合物的制備方法，所述方法包括步驟混合組分a)蛇葡萄素、組分b)堿性氨基酸以及任選的組分c)pH調(diào)節(jié)劑和組分d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述蛇葡萄素組合物是蛇葡萄素注射液，且該方法包括(i)混合組分a)蛇葡萄素；b)堿性氨基酸；以及d)除pH調(diào)節(jié)劑以外的其它藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，以形成蛇葡萄素溶液；(ii)加入c)pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)溶液pH至59;和(iii)對(duì)步驟(ii)所得的溶液進(jìn)行去除熱原和滅菌，從而獲得蛇葡萄素注射液，其中以注射液的總體積為基準(zhǔn)計(jì)，蛇葡萄素的濃度為0.01300mg/ml。10.—種對(duì)腫瘤治療具有協(xié)同作用的藥盒，所述藥盒中包括A)治療有效量的權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)所述的蛇葡萄素組合物；B)治療有效量的卡鉑。全文摘要本發(fā)明提供了一種蛇葡萄素組合物及其制備方法，其包含a)蛇葡萄素；和b)堿性氨基酸，其中，組分a)與組分b)的重量比為1∶1～1∶10。本發(fā)明的組合物中還可進(jìn)一步包括c)pH調(diào)節(jié)劑；和/或d)藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明蛇葡萄素組合物和卡鉑的藥盒。本發(fā)明的蛇葡萄素組合物具有提高的溶解度和穩(wěn)定性以及適宜的pH范圍，適合臨床應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P35/00GK101513400SQ20081003377公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2008年2月22日優(yōu)先權(quán)日2008年2月22日發(fā)明者余劍橋,劉達(dá)清,吳勇杰,李志成,梁健儀,范富林申請(qǐng)人:蘭州大學(xué);廣東泰禾醫(yī)藥科技有限公司