專利名稱：：兩個生物堿類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及兩個生物堿類化合物ws—4和ll-O-甲基文殊蘭胺在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景腫瘤是引起人類死亡的主要原因之一。中國衛(wèi)生部日前公布2006年城鄉(xiāng)居民主要死亡原因。統(tǒng)計顯示，惡性腫瘤已成為首要死因?？梢娔[瘤的預(yù)防和治療十分迫切。藥物治療是腫瘤的主要治療手段之一。目前，雖然開發(fā)出了幾十種抗腫瘤藥物，有效的延長了患者的生命或者提高了患者的生存質(zhì)量。其中有些抗腫瘤的藥物治療療效非常顯著，如藥物治療小兒急性白血病等。但腫瘤的藥物研究和開發(fā)還面臨巨大挑戰(zhàn)，如抗腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，其副作用明顯，限制了這些藥物療效的發(fā)揮。著名腫瘤病因?qū)W家、中國工程院院士程書鈞認(rèn)為當(dāng)今醫(yī)學(xué)對于腫瘤的防治依然處于初級階段。中藥有幾千年的人體毒性實驗的基礎(chǔ)，也許中藥會在抗腫瘤方面走在世界的前列。從天然產(chǎn)物中尋找高效低毒的抗腫瘤活性的先導(dǎo)化合物一直是新藥研究的熱點。石蒜科(Amaryllidaceae)有100多屬1200余種，其中文殊蘭屬(Crinum)是重要的藥用植物來源之一，該屬在我國僅有兩種一西南文殊蘭和文殊蘭。從文殊蘭屬分離得到的天然產(chǎn)物石蒜堿，具有抗腫瘤、抗炎活性，在臨床上用作吐根代用品；加蘭他敏和力可拉敏在臨床上作為治療小兒麻痹后遺癥的要藥。文殊蘭(CWm/w^n'aricwmL.var.sinicumBaker)為石蒜科(Amaryllidaceae)多年生草本，植株粗壯。常生于海濱地區(qū)或河旁沙地，亦栽植于庭院。主要分布于福建、臺灣、湖南、廣東等地。文殊蘭味辛、苦、性涼，有毒。清熱解毒，祛瘀止痛。主治熱瘡腫毒，淋巴結(jié)炎，咽喉炎，頭痛，痹痛麻木，跌打瘀腫，骨折，毒蛇咬傷。(《中華本草》編委會，《中華本草》，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社.1999,第8分冊，201-202)。目前從藥用植物中分離具有抗腫瘤的活性成分是化學(xué)工作者的熱點之一。而目前對文殊蘭和西南文殊蘭的化學(xué)成分研究不多，我們對西南文殊蘭進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到幾個具有抗腫瘤活性的生物堿類化合物(已申請專利，申請?zhí)?00710046506.6)。同時我們也對我國的另一種文殊蘭屬植物文殊蘭進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，以期從其中分離得到具有良好的抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提出兩個生物堿類化合物文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步還提供一組以此生物堿類化合物為活性成分的，用于治療腫瘤的藥物組合物。本發(fā)明所說的文殊蘭新堿(Benzo[g]-l，3-benzodioxolo[5，6-a]quinolizinium)、11-0-甲基文殊蘭胺(ll-O-Methylcrinamine)的結(jié)構(gòu)式為本發(fā)明提出的文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺可從文殊蘭、西南文殊蘭或其他植物中提取，經(jīng)分離純化得到，也可以是經(jīng)化學(xué)合成的方法制備得到。從文殊蘭或西南文殊蘭中提取上述兩種化合物的步驟如下將文殊蘭(07'咖m爿w'aft'cwwL.var.sinicumBaker)或西南文殊蘭的干燥鱗莖50Kg粉碎，以95%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮得浸膏。浸膏均勻分散于水中，分別用石油醚(15Lx3)、氯仿(15Lx3)、乙酸乙酯(15Lx3)、水飽和正丁醇萃取，得到各部位萃取物。氯仿和乙酸乙酯萃取部位經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析(石油醚一乙酸乙酯、氯仿一甲醇)、SephadexLH-20凝膠柱層析(氯仿_甲醇、甲醇、水)和C18半制備液相(乙腈一水)對單體成分進(jìn)行分離純化，得到文殊蘭新堿3.65g和11-O-甲基文殊蘭胺0.87g。文殊蘭新堿(Benzo[g]-l,3-benzodioxolo[5，6-a]quinolizinium)為黃色無定形粉末，溶于甲醇；碘化鉍鉀反應(yīng)陽性。ESI/MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z336[M+H]+，結(jié)合碳譜、DEPT譜和氫譜確定分子式為C2CH18N04。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致，故確定其為Benzo[g]-l,3-benzodioxolo[5,6-a]quinolizinium，命名為文殊蘭新堿。ll-O-甲基文殊蘭胺為白色無定形粉末，溶于氯仿、甲醇；碘化鉍鉀反應(yīng)陽性。ESI/MS給出準(zhǔn)分子離子峰w/z316[M+H]+，結(jié)合碳譜、DEPT譜和氫譜確定分子式為d8l^N04。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致，故確定其為ll-O-Methylcrinamine，命名為11-0-甲基文殊蘭胺。本發(fā)明提出的抗腫瘤藥物組合物含有治療有效量兩個生物堿類化合物中的一種或兩種，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明可以組合物的形式通過口服，鼻吸入、直腸或者腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖槳、酏劑等；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。具體實施方式下面的實施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1文殊蘭(Q7'做w爿;y/加'cwwL.var.sinicumBaker.)鱗莖5kg，用95%乙醇10升滲漉提取，合并滲漉液，減壓濃縮得到浸膏80g，用2升水分散后，以8L氯仿分三次萃??；減壓濃縮萃取部位，得到粗品35g。將粗品與70g硅膠混合拌樣，加到己裝好的硅膠柱頂端，以氯仿甲醇(40:110:1)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤，合并含成分相同的洗脫液，減壓濃縮至干，得到11-0-甲基文殊蘭胺97mg，文殊蘭新堿412mg。實施例2文殊蘭鱗莖10kg,用70X乙醇40L回流提取3次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮得156g浸膏，用5L水分散后，以石油醚20L分三次萃取后，母液再以20L乙酸乙酯分三次萃取，減壓濃縮萃取部位得粗品43g。粗品以甲醇溶解后上硅膠柱進(jìn)行層析，以氯仿一甲醇梯度洗脫，用薄層層析檢査洗脫流分，合并具有相同斑點的流分，濃縮，得到ll-O-甲基文殊蘭胺192mg，文殊蘭新堿819mg。實施例3活性成分(兩種化合物或組合物)10g乳糖100g玉米淀粉25g硬脂酸鎂5g制成1000片制備方法將活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤制成軟材，把濕潤后的混合物制粒，過20目篩，80。C烘干，加入硬脂酸鎂，再過篩，然后將混合物壓片，每片重140mg，活性成分含量為10mg。實施例4取活性成分(二種化合物或組合物)20g，藥用淀粉180g，用90%乙醇濕法制粒，整粒，裝2#膠囊，每粒200mg。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2005年版膠囊劑項下的規(guī)定。實施例5取活性成分(二種化合物或組合物)2.5g，加入丙二醇和乙醇各200ml，攪拌使溶解，加注射用水稀釋至10000ml，過0.22pm的微孔濾膜，灌封，20ml/支，流通蒸汽滅菌30min，檢驗、包裝，得注射液。實施例6文殊蘭新堿和11-0-甲基文殊蘭胺的細(xì)胞毒活性實驗1、實驗材料1.1、受試樣品文殊蘭新堿和11-0-甲基文殊蘭胺用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000|ag/ml的溶液或均勻的混懸液，然后用含DMSO的PBS(-)稀釋。1.2、細(xì)胞株A549(人肺癌細(xì)胞)LOVO(人腸癌細(xì)胞)6T-CEM(人T細(xì)胞白血病細(xì)胞)HL-60(人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞)PANC-1(人胰腺癌細(xì)胞)HepG-2(人肝癌細(xì)胞)1.3、培養(yǎng)液RPMI1640+15%NBS+雙抗1.4、其他材料全自動酶標(biāo)儀型號WellscanMK-2，生產(chǎn)廠商Labsystems進(jìn)口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗方法MTT法96孔板每孔加入濃度為34X1()4個/ml的細(xì)胞懸液lOO(il，置37°C,5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后，加入樣品液，10pl/孔，設(shè)雙復(fù)孔，37°C，5。/。C02作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20pl，作用4h后加入溶解液，100|al/L，置培養(yǎng)箱內(nèi)，溶解后用MK-2全自動酶標(biāo)儀測570nmOD值。3、試驗結(jié)果結(jié)果見表1,結(jié)果顯示，文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺對人肺癌細(xì)胞，人腸癌細(xì)胞，人T細(xì)胞白血病細(xì)胞，人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞、人胰腺癌細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞均有較好的抑制活性，表明文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺有很好的抗腫瘤作用，具有良好的開發(fā)前學(xué)實施例7:文殊蘭新堿和11-0-甲基文殊蘭胺對小鼠S180肉瘤(實體型)的療效實驗1、實驗材料1.1受試樣品文殊蘭新堿和11-O-甲基文殊蘭胺用少量吐溫一80助溶后用0.5。/。CMC配成溶液。1.2動物品系昆明種小鼠來源第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供。合格證號滬動合證字107號體重18_20g性別雌性。1.3移植性腫瘤小鼠S180肉瘤，由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院傳代維持。2、實驗方法取生長良好的小鼠S180肉瘤腹水，用生理鹽水以1:4稀釋，每只小鼠腋皮下接種0.2ml，隨機(jī)分組，分為對照組、環(huán)磷酰胺組(CTX組，20mg/kg，ipX7)、文殊蘭新堿(5mg/kg)、ll-O-甲基文殊蘭胺(5mg/kg)組，接種后次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)灌胃7天。接種后10日脫頸處死動物，稱動物體重后解剖取瘤塊，稱瘤重。結(jié)果判定根據(jù)以下公式對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重腫瘤抑制率％=-"00%對照組平均瘤重3、實驗結(jié)果文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺有顯著的抑瘤作用。實驗結(jié)果見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2文殊蘭新堿和ll-O-甲基文殊蘭胺對小鼠S180肉瘤的抑制作用劑量給藥動物數(shù)動物體重(g)瘤重(g)抑瘤率組別(mg/kg)方案始終(去瘤后)±SD%空白對照(溶劑)poX7151526.02±3.241.59±1.08CTX20ipX7151526.08±3.000.69±0.3856.72文殊蘭新堿5poX7101027.35±1.980.64±0.35*59.7511-0-甲基文殊5poX7101055.3526.71±2.740.71±0.42*與對照組比較*P<0.05,**P<0.01。權(quán)利要求1、兩個生物堿類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述化合物為文殊蘭新堿和11-O-甲基文殊蘭胺，其結(jié)構(gòu)式如下id="icf0001"file="S2008100345389C00011.gif"wi="126"he="27"top="47"left="44"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>文殊蘭新堿11-O-甲基文殊蘭胺2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的生物堿類化合物從植物中提取或者化學(xué)合成得到。3、一種抗腫瘤的藥物組合物，其特征在于含有如權(quán)利要求1中所述的二個生物堿類化合物中的一種或幾種，以及藥學(xué)上可以接受的載體。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為兩個生物堿類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。兩個化合物為文殊蘭堿和11-O-甲基文殊蘭胺，從文殊蘭、西南文殊蘭或其他植物中提取獲得或者用化學(xué)合成得到。經(jīng)實驗表明，這兩種化合物對人的多種癌細(xì)胞均有良好的抑制活性。因此，可用于制備抗腫瘤藥物，該藥物含有有效治療量上述兩種化合物中的一種或2種，以及藥學(xué)上可以接受的載體。文檔編號A61P35/00GK101244061SQ200810034538公開日2008年8月20日申請日期2008年3月13日優(yōu)先權(quán)日2008年3月13日發(fā)明者倩孫,張衛(wèi)東,徐?？?李慧梁,柳潤輝,沈云亨,娟蘇申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)