專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種咖啡酸聚乳酸共聚物納米微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬抗氧化藥物微球制備領(lǐng)域，特別是涉及一種咖啡酸聚乳酸共聚物微球的制備方法。
背景技術(shù)：
：咖啡酸(FerulicAcid)的化學(xué)名稱(chēng)為3，4-二羥基苯丙烯酸，是酚酸類(lèi)化合物的一種代表性化合物，廣泛存在于當(dāng)歸、川芎等中藥中；在食品原料如咖啡、香蘭豆、谷殼、庶渣、甜菜粕、麥麩和米糠中咖啡酸含量也較高。近來(lái)，咖啡酸及其衍生物已在食品等多個(gè)領(lǐng)域被廣泛的研究與應(yīng)用。這主要是因?yàn)榭Х人岵坏哂泻芎玫目寡趸?，而且有著廣泛的生理活性，如抗炎、止痛、調(diào)節(jié)人體免疫力，同時(shí)能活血通絡(luò)、疏肝解郁、健脾養(yǎng)胃，促進(jìn)血液循環(huán)等多種作用。而且咖啡酸也是近年來(lái)國(guó)際認(rèn)知的防癌物質(zhì)，引起世人注目。除廣泛用于醫(yī)藥行業(yè)外，咖啡酸在食品行業(yè)的應(yīng)用也日益擴(kuò)大?？Х人峥勺鳛楹铣上闾m素的前體物質(zhì)，通過(guò)微生物酶將咖啡酸轉(zhuǎn)化成香蘭素；由于咖啡酸具有抗氧化活性和抑菌作用，咖啡酸亦可作為食品的防腐保鮮劑，且安全無(wú)毒；咖啡酸也作為交聯(lián)劑逐漸地應(yīng)用于制備食品膠和可食性包裝膜；此外，它作為抗氧化劑和機(jī)能促進(jìn)物質(zhì)可應(yīng)用于運(yùn)動(dòng)食品中。但由于其具有比較強(qiáng)的親水性，導(dǎo)致進(jìn)入人體后在短暫的時(shí)間內(nèi)藥物釋放完畢，因此很大程度上限制了其生理活性的應(yīng)用。納米微球作為藥物載體，可以延緩藥物在人體釋放速度，可以延長(zhǎng)效用時(shí)間，而且具有良好的生物相容性，可以改變藥物的體內(nèi)分布，提高藥物治療指數(shù)，降低毒副作用，因此受到廣泛的重視，并得到深入的研究。研究報(bào)道，將抗氧化藥物制成微球后可顯著地提高藥物的抗氧化能力。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法。該方法以美國(guó)FDA認(rèn)證的可用于人體的降解性生物相容材料——聚乳酸共聚物(PLA)作為載體來(lái)制備咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球，該微球可用作抗氧化藥物的藥物載體，可以改變藥物的體內(nèi)分布，提高藥物治療指數(shù)，降低毒副作用。本發(fā)明的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，包括下列步驟(1)將聚乳酸共聚物(PLA)溶于有機(jī)溶劑中，再加入咖啡酸，超聲溶解，作為有機(jī)相；(2)在攪拌^[牛下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇(PVA)水溶液中，然后加入電解質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球。所述的聚乳酸共聚物規(guī)格是乳酸(LA):羥乙酸(GA)的重量比為50:50，分子量Mr為20000;LA:GA=50:50，Mr=40000;LA:GA=75:25，Mr=20000;LA:GA=75:25，Mr=40000，聚乳酸共聚物PLA在有機(jī)相中的濃度是40~60mg/ml。所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑是乙醇。所述咖啡酸在有機(jī)相中的濃度是5~20mg/ml。所述步驟(2)中的聚乙烯醇的規(guī)格是PVA-124，醇解度的摩爾百分?jǐn)?shù)為98~99%，平均聚合度n為2400~2500，聚乙烯醇水溶液質(zhì)量濃度是0.5%1.5%。所述步驟(2)中的電解質(zhì)是氯化鈉，在聚乙烯醇PVA水溶液中的質(zhì)量濃度為2。/0^5。/。。所述有機(jī)相與作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液的體積比為1:20~1:30。所述步驟(2)中的攪拌速度為600~1000rpm。所述咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的平均粒徑在10nm以下。本發(fā)明的有益效果(1)本發(fā)明的用的聚乳酸共聚物PLA具有良好的生物相容性和生物可降解性，植入人體能夠達(dá)到較好的緩釋效果；(2)制備的微球通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀(guān)察，形態(tài)圓整，分布均勻，微球的藥物包封率在85%左右，藥物含量可達(dá)17%;(3)實(shí)驗(yàn)表明，咖啡酸微球具有良好的抗氧化能力。圖1是制備的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的顯微鏡照片；圖2咖啡酸乙醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。實(shí)施例1(1)咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備精確稱(chēng)取聚乳酸共聚物PLA(LA:GA=50:50，Mr=20000)lOOmg，溶于2ml乙醇中，再加入咖啡酸20mg，超聲溶解，作為有機(jī)相；配制60ml0.5%PVA水溶液，再加入1.5gNaCl，作為水相。在攪拌條件下(800rpm)，緩慢的(lml/min)把有機(jī)相加入到水相中，室溫下繼續(xù)攪拌24h，然后離心分離，用雙蒸水洗滌3次，冷凍干燥即得咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球。(2)微球的形態(tài)和粒徑尺寸通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍攝的微球照片(圖l)，可以看到，研究所得的微球具有很好的圓形形態(tài)。用激光粒徑測(cè)定儀測(cè)得微球的平均粒徑為8.3微米。(3)藥物含量及包封率測(cè)定a.咖啡酸最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定為確定用紫外分光光度法測(cè)定咖啡酸含量的測(cè)定波長(zhǎng)，研究中用UV-2102PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)咖啡酸的最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行了測(cè)定，測(cè)定步驟為精密稱(chēng)取20mg咖啡酸，用95%的乙醇溶液溶解，以95%的乙醇溶液為空白，在200400nm間作紫外掃描，便可得到最大吸收波長(zhǎng)為310nm。取空白微球5mg，加入95%的乙醇溶液定容，按上述條件掃描，在300nra左右無(wú)紫外吸收，因此，選擇310nm作為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。b.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備精密稱(chēng)取50mg咖啡酸，用95%的乙醇溶液溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中定容，得1.000mg/ml的咖啡酸對(duì)照液。精密吸取對(duì)照液0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3ml，在試管中分別用95%的乙醇定容至5ml。按照分光光度法在咖啡酸的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。并以咖啡酸濃度為縱坐標(biāo)、吸光度為橫坐標(biāo)作圖得到咖啡酸乙醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖2示。通過(guò)線(xiàn)性回歸得到吸光度A對(duì)咖啡酸濃度C的回歸方程為A49.347X+0.2147,R^0.9988。c.藥物含量及包封率的計(jì)算精密稱(chēng)取10mg咖啡酸PLA微球，并加10ml95%乙醇于試管中，超聲加熱破壞lh后，用微孔濾膜抽濾，精密吸取濾液lml，以95%乙醇為空白，在310nm處測(cè)得，代入回歸方程并計(jì)算，便可得到咖啡酸含量為17%。然后根據(jù)下列公式便可以計(jì)算得到微球制備過(guò)程中咖啡酸的包封率是85%。包封率=微球中咖啡酸的實(shí)際含量/微球中咖啡酸的理論含量(4)咖啡酸體外抗氧化性評(píng)價(jià)將咖啡酸微球及咖啡酸以不同的比例加入至50g大豆油中，按照Schaal烘箱法，定期測(cè)定過(guò)氧化值(POV)值，結(jié)果見(jiàn)表1。添加抗氧化劑的大豆油樣品的誘導(dǎo)時(shí)間均大于空白樣品的誘導(dǎo)時(shí)間。每組添加量咖啡酸微球和咖啡酸的保護(hù)系數(shù)(PF值)均大于l，說(shuō)明他們都對(duì)大豆油具有抗氧化作用。但是咖啡酸微球?qū)Υ蠖褂偷目寡趸饔酶鼜?qiáng)。表1是咖啡酸微球及咖啡酸對(duì)大豆油抗氧化能力的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，包括下列步驟(1)將聚乳酸共聚物PLA溶于有機(jī)溶劑中，再加入咖啡酸，超聲溶解，作為有機(jī)相；(2)在攪拌條件下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入電解質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述的聚乳酸共聚物規(guī)格是乳酸LA:羥乙酸GA的重量比為50:50，分子量Mr為20000;LA:GA=50:50，M產(chǎn)40000;LA:GA=75:25，Mr=20000;LA:GA=75:25，Mr=40000;聚乳酸共聚物PLA在有機(jī)相中的濃度是40~60mg/ml。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑是乙醇。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述咖啡酸在有機(jī)相中的濃度是5~20mg/ml。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的聚乙烯醇的規(guī)格是PVA-124，醇解度的摩爾百分?jǐn)?shù)為98~99%，平均聚合度n為2400~2500,聚乙烯醇水溶液質(zhì)量濃度是0.5%~1.5%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的電解質(zhì)是氯化鈉，在聚乙烯醇PVA水溶液中的質(zhì)量濃度為2。/。5。/c。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述有機(jī)相與作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液的體積比為1:20~1:30。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的攪拌速度為600~1000rpm。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的制備方法，其特征在于所述咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球的平均粒徑在10pm以下。全文摘要本發(fā)明涉及一種咖啡酸聚乳酸共聚物微球的制備方法，包括1)將聚乳酸共聚物PLA溶于有機(jī)溶劑中，再加入咖啡酸，超聲溶解，作為有機(jī)相；2)在攪拌條件下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入電解質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得咖啡酸聚乳酸共聚物PLA微球。該微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在10微米以下，載藥量可達(dá)17％，包封率在85％左右，作為藥物載體具有良好的生物相容性。文檔編號(hào)A61P39/00GK101305985SQ200810038659公開(kāi)日2008年11月19日申請(qǐng)日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日發(fā)明者朱利民,靜權(quán),波蔣,妍鄭,馬宗會(huì)申請(qǐng)人:東華大學(xué)