專(zhuān)利名稱(chēng)：：虎杖苷用于制備抗癡呆產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥和食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)是涉及一種中藥提取物即虎杖提取物用于制備抗癡呆產(chǎn)品的用途，更具體地說(shuō)是涉及虎杖提取物虎杖苷用于制備抗血管性癡呆和抗老年性癡呆產(chǎn)品的用途，再具體地說(shuō)是涉及中藥提取物虎杖苷即白藜蘆醇-3-0-P-D-葡萄糖苷(piceid，polydatin,以下簡(jiǎn)稱(chēng)虎杖苷)用于制備抗血管性癡呆和抗老年性癡呆產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
：(一)虎杖的研究概況1、概述虎杖為蓼科(Polygonaceae)蓼屬植物Po/少gom/附cw^W加wwSieb.etZucc.的根莖。多生于山谷、溪旁或岸邊，為多年生灌木狀草本，高達(dá)1米以上?；⒄仁寝た浦蟹浅Ｖ闹兴帯Ｖ嗅t(yī)認(rèn)為，虎杖性味苦、平，具有祛風(fēng)，利濕，破瘀，通經(jīng)的功效；能治風(fēng)濕，筋骨疼痛，濕熱黃疸，淋濁帶下，婦女經(jīng)閉，產(chǎn)后惡露不下，瘡漏下血，跌撲損傷，燙傷，惡瘡癬疾等疾病?；⒄确植加诮K、浙江、江西、福建、山東、河南、陜西、湖北、云南、四川、貴州等中部及南部地區(qū)，春秋均可采挖。由于近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)虎杖具有良好的臨床應(yīng)用，已逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。近代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明虎杖具有較好的抗病毒活性，在體外對(duì)多種細(xì)菌及病毒有抑制和滅活作用。例如其對(duì)單純皰疹病毒、流感亞洲甲型京科68-l病毒及埃可II型等均有抑制作用(陰健，郭力弓.^遂綴/f研究與游腐l)[M].北京學(xué)苑出版社.1993,434-439;NambaT,KurokawaMKadotaS,ShirakiK.Developmentofantiviraltherapeuticagentsfromtraditionalmedicines.K^wgabZa^W，1998，118(9):383-400)，虎杖與黃芪聯(lián)用對(duì)單純皰疹病毒有很好的協(xié)同抑制作用(王志潔，程仲敏，方學(xué)韞.虎杖黃芪聯(lián)用抗I型皰疹病毒藥效分析.^腐^^^,吉,1999,24(3):176-180.)?；⒄却继嵛锖退嵛矬w外顯示了較強(qiáng)的抗HBV活性(ChangJS，LiuHW，^WangKC,ChenMC,ChiangLCetal.EthanolextractofPolygonumcuspidatuminhibitshepatitisBvirusinastableHBV-producingcellline.AntiviralResearch,2005，66:29-34.)。虎杖水提液在體外可以抑制HIV-1表面的gpl20與細(xì)胞表面的CD4結(jié)合，抑制HIV-1感染MT-4細(xì)胞，而且對(duì)HIV-1的逆轉(zhuǎn)錄酶具有顯著的滅活作用(JiangY,SanoK，MolimatoS，etal.Anti-HIV-1activityofcws;/i/fl/w加extractJrc/Veso/Sexwa//^rram附/從c/1994，5(1):138-146.);在體內(nèi)虎杖水提液可以抑制LP-BM5病毒導(dǎo)致的艾滋病模型鼠的脾腫大、免疫抑制及病毒血癥等(蔣巖，王紅霞，鮑作義，等.用鼠艾滋病模型評(píng)價(jià)虎杖水提液的抗病毒作用.W;^瘋泰學(xué)，1998,13(4):306-311.)?；⒄戎兄饕卸揭蚁╊?lèi)(stilbene，g卩蔵類(lèi))化合物、蒽醌類(lèi)化合物、黃酮類(lèi)化合物等化學(xué)成分，并具有廣泛的生理活性。發(fā)明人曾經(jīng)對(duì)于虎杖的水溶性部位進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分離得到了一系列新的化學(xué)成分。新化合物包括帶硫酸酯基的二苯乙烯類(lèi)化合物的鈉或鉀鹽(XiaoK.，XuanL.，XuY.，BaiD.Stilbeneglycosidesulfatesfrom戶(hù)o/少gcwwwcw^/cfcrrwOT./iVa/1.iVorf.2000，63(10):1373-1376)，二苯乙烯苷類(lèi)二聚體(XiaoK.,XuanL.，XuY.，BaiD.，ZhongD.，WuH.，WangZ.;ZhangN.Dimericstilbeneglycosidesfrom/Wygo做附c^//d"加w./2002:564-568)，苯丙素類(lèi)成分(XiaoK.,XuanL.，XuY.，BaiD.，ZhongD.Constituentsfrom尸o/ygo"wwQ^肌在尸Aflr肌5"http://.2002,50(5):605-608)。另外還包括一些已知的化合物等(肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的化學(xué)成分研究.W^^F^^,志2003，38(1):12-14;肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的水溶性成分研究，W^"秀2003,34(6):496-498)。其中的化合物1-10為從虎杖中分離得到的二苯乙烯苷類(lèi)化合物，是10種天然化合物，其分子式皆為CMHuOnSNa或者C^H^OuSK,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下RiR2RR，R41S03MHHHH2HS03MHHHHS03MHH3H4H5HHHS03MHHHHSO3M6S03MHHHH7HS03MHHHHS03MHH8H9H10HHHS03MHHHHS03MM=Na+orK+2、虎杖苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)與制備方法虎杖苷(polydatin)是二苯乙烯類(lèi)化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)為3，4，，5-三羥基葳-3-0-P-D-葡萄糖苷(3，4',5-trihydroxy-3-0-(3-D-glucoside)，苷元是白藜戸醇，故虎杖苷又稱(chēng)白藜蘆醇苷(piceid)，即(^)-白藜蘆醇-3-0-(i-D-葡萄糖苷((巧-resveratrol-3-O-P-D-glucopyranside)，最早是由日本學(xué)者在20世紀(jì)60年代從虎杖(戶(hù)o/嫂wwmcwwzWfl/wmSieb.et.Zucc.)中發(fā)現(xiàn)的(Nonomura,S.;Kanagawa，H.;Shin，H.;Makimoto，A.YakugakuZasshi1963，83，988-9%.)?；⒄溶諡閺幕⒄戎蟹蛛x得到的一種二苯乙烯類(lèi)化合物，其分子式為C2cH220"，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下HO^_1該化合物為白色結(jié)晶，易溶于甲醇、95%乙醇、丙酮等極性較大的溶劑，微溶于水。分子式(:2必2208，MW:390;mp.245246。C，白色針晶，易溶于甲醇、丙酮；[a]D20=+34.5°;UV(onax):217，307，302nm;IR(KBr)vmax3375，3020，2924，1606，1310，1174，1075，1019,839cm—1;!HNMR(400MHz，CD3COCD3)S(ppm):7.42(2Hd,J=8.6Hz，H-2',6')，7.09(lHd，J=16.4Hz，H-p)，6.91(1Hd,J=16.4Hz,H-a)，6.84(2Hd，J=8.7Hz,H-3',5')，6.79(lHt,J=2Hz，H-2)，6.68(1Ht,H-6)，6.51(1Ht，J=2Hz,H-4)，4.94(1Hd,J=7.6Hz,H-l")，3.94(lHdd，J=11.8,2.5Hz,H-6"a)，3.72(1Hdd,J=11.8，5.9Hz，H-6"{3)，3.6-3.4(4H,H-2",3"，4",5");HRESI-MS(m/z):391.1376;與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)一致(①Nonomura，S.;Kanagawa,H.;Shin,H.;Makimoto,A.YakugakuZasshi1963,83，988-990;②ChuX，SunAL,LiuRM.PreparativeisolationandpurificationoffivecompoundsfromtheChinesemedicinalherb尸o/ygow,c啤油f,Sieb.etZucc,byhigh-speedcounter-current.J.Chromatogr.A,2005，1097:33-39)。另外，虎杖苷還存在于葡萄等植物中(WaterhouseAL，Lamuda-RaventbsRM.Theoccurrenceofpiceid，astilbeneglucoside,ingrapeberries.Phytochemistry1994，37,571-573.)分離提純方法如高速逆流色譜法(①High-speedcounter-currentchromatographyseparationandpurificationofresveratrolandpiceidfromPolygonumcuspidatum.JournalofChromatographyA,2001，907(1-2):343-346;②ChuX,SunAL,LiuRM.PreparativeisolationandpurificationoffivecompoundsfromtheChinesemedicinalherbPolygonumcuspidatumSieb.etZucc,byhigh-speedcounter-current.J.Chromatogr.A,2005,1097:33-39)、大孔樹(shù)脂法等。3、虎杖苷的藥理研究進(jìn)展虎杖苷在心血管方面顯示了顯著的藥理活性。例如，阻止鼠的肝臟吸收甘油三酯與膽固醇，能降低血清中甘油三酯與LDL-ch(復(fù)合物)的水平及致動(dòng)脈粥樣硬化的參數(shù)(Arichi,H.;Kimura,Y.;Okuda,H.;Baba,K.;Kozawa，M.;Arichi，S.Chem.Pharm.Bull.1982，30,1766-1770.)，虎杖苷能防止動(dòng)脈內(nèi)皮損傷性血栓的形成(①Wang,Y,Z.;Luo,S.-F.;Zhang，P,W.;Yu,C,L.ActaPharmacol.Sin.1995，16(2):159-162;②朱智明，劉伊麗，萬(wàn)華印，瞿文生，高曉，黃祖漢.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1995,15(2):149-151;③余傳林，張佩文，羅盛泉?jiǎng)⑶锞?，李銳松.中藥藥理與臨床1994,10(2):33-35;張佩文，王躍忠，余傳林，駱蘇芳.中藥藥理與臨床1994，10(3):23-26.)、抑制血小板聚集和TXA2的產(chǎn)生(①Shan,C,W.;Yang，S.-Q.;He,H,D.;Shao,S.-L.;Zhang，P,W.ActaPh,acologicaSinica1990,11，527-530;②駱蘇芳，余傳林，張莉莎，張佩文.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志1993，7(2):130-132;③楊素琴，單春文第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1992，12(1):57;④朱智明，劉伊麗，張榮華.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合雜志1996,9(4):202.)。虎杖苷抑制血小板聚集的途徑是通過(guò)前列腺系統(tǒng)，還可能與增加前列環(huán)素(簡(jiǎn)稱(chēng)PGI2)的釋放(Zhang，P,W.;Yu，C.-L;Wang，Y.-Z.;etal.Acta,Pharmacol.Sin.1995，16(3):265-268.)、抑制Ca2+內(nèi)流(駱蘇芳，余傳林，張莉莎，張佩文.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志1993,7(2):130-132.)及抑制組胺釋放等作用有關(guān)(王躍忠，黃子揩，張佩文.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1994，14(3):164-166.)。它可舒張兔離體肺動(dòng)脈(駱蘇芳，張佩文，李銳松.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1992，12(1):10-13.)，有利于腦和肺循環(huán)的改善。它還能恢復(fù)縮窄的細(xì)動(dòng)脈口徑，增加毛細(xì)管開(kāi)放面積(羅盛康，羅力生.中華整形燒傷外科雜志1994,10(3):222-225.),促使微循環(huán)中出現(xiàn)動(dòng)脈血流，減輕燒傷后的微血栓形成。虎杖苷還能抗脂質(zhì)過(guò)氧化(童平，張振濤.中國(guó)藥學(xué)雜志1991,26(6):363-364.)，降低腦組織的過(guò)氧化脂質(zhì)含量，提高超氧化物歧化酶(簡(jiǎn)稱(chēng)SOD)、過(guò)氧化氫酶和谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(簡(jiǎn)稱(chēng)GSH-PX)的活性，降低腦含水量，減輕自由基反應(yīng)對(duì)腦組織的損害，保護(hù)缺血腦組織(梁榮能，莫志賢.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)1996,12(2):126-129.)。它對(duì)再灌注損傷有保護(hù)作用(謝忠琳，王靜珍，金麗娟.中國(guó)病理生理雜志1995,11(5):528-531.)，對(duì)02—，OH，H202等自由基均有清除作用(金偉軍，陳樹(shù)元，錢(qián)忠秀，石興華.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)1993,11(5):355-357.)。對(duì)內(nèi)毒素休克大鼠的損傷器官也具有保護(hù)作用(張曼，金麗娟，金春華.中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)1995,7(5):352-354.)。4、虎杖苷有關(guān)的專(zhuān)利申請(qǐng)情況有多項(xiàng)關(guān)于虎杖苷的專(zhuān)利申請(qǐng)，具體內(nèi)容如下.-中國(guó)授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利《白藜蘆醇和白藜蘆醇甙分離方法及其應(yīng)用》(專(zhuān)利號(hào)00121100.5，申請(qǐng)日2000.07.20)涉及從中藥虎杖分離白藜蘆醇和白藜蘆醇甙的方法和白藜蘆醇和白藜蘆醇甙作為藥品、保健品或食品、飲料、保健添加劑的應(yīng)用。專(zhuān)利中介紹將虎杖根莖用有機(jī)溶劑提取，經(jīng)萃取、濃縮、硅膠柱層析、結(jié)晶、重結(jié)晶，得到純度高達(dá)97%以上的白藜蘆醇和白藜蘆醇甙，且收率高(各為70%以上和60%以上)，所得產(chǎn)物可直接作為藥品、保健品使用。中國(guó)授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利《含虎杖甙或其鹽的藥用組合物及其在藥物制備中的用途》(專(zhuān)利號(hào)02134928.2，申請(qǐng)日2002.10.08)公開(kāi)了一種具有改善微循環(huán)作用的含虎杖甙或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥用組合物，以及這些組合物在制備改善微循環(huán)的藥物中的用途，該組合物為胃腸外注射給藥制劑，組合物制劑為pH7.010.0水溶液，溶液中含有550%丙二醇，組合物劑型為凍干粉針劑、口服給藥劑型、直腸內(nèi)給藥的栓劑以及局部給藥的制劑，包括軟膏劑、膏劑、貼劑、涂膜劑等，將組合物用作治療和/或預(yù)防與微循環(huán)障礙有關(guān)的疾病的藥物，單位劑型中含有虎杖甙或其衍生物11000mg，解決了虎杖甙用于改善微循環(huán)的藥物應(yīng)用問(wèn)題，可用于治療括休克、心腦血管疾病、感覺(jué)器官疾病、糖尿病并發(fā)癥、血管閉塞性脈管炎、血循環(huán)障礙性外痔、皮膚創(chuàng)傷或灼傷等。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利《一種含虎杖苷的藥物組合物及其應(yīng)用》(申請(qǐng)?zhí)?00510082697.2，申請(qǐng)日2005.07.08)涉及一種含虎杖苷的藥物組合物及其應(yīng)用，該組合物包含虎杖苷，以及用于溶解虎杖苷的溶劑，以體積計(jì)，所述溶劑包含40%95%的乙醇，0%60%的丙二醇和水。所述組合物中，虎杖苷的濃度可不低于6mg/ml。低溫貯存時(shí)，該組合物的穩(wěn)定性較好。該組合物可通過(guò)靜脈滴注、肌肉注射等胃腸外途徑給藥，也可用于口服給藥，或用于制備噴霧劑或氣霧劑。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利《一種含高濃度虎杖苷的藥物組合物》(申請(qǐng)?zhí)?00610076175.6，申請(qǐng)日2006.04.28)涉及一種含高濃度虎杖苷的藥物組合物及其制備方法，該組合物含有虎杖苷、葡甲胺和/或環(huán)糊精，以及其它藥學(xué)上可接受的輔料和載體。所述組合物為虎杖苷水溶液，或者是使用前配制成水溶液的凍干制品；在所述水溶液中，虎杖苷的濃度可不低于5mg/ml。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利《心腦血管藥物——虎杖苷滴丸、膠囊、顆粒、片劑制備方法》(申請(qǐng)?zhí)?00510103267.4，申請(qǐng)日2005.09.21)公開(kāi)了一種以虎杖苷作為有效成分治療心腦血管類(lèi)疾病的藥物。劑型為滴丸、軟膠囊、膠囊、顆粒劑、片劑等。粉碎的虎杖根和根莖經(jīng)過(guò)乙醇浸提，適當(dāng)濃縮、上大孔吸附樹(shù)脂，乙醇洗脫、濃縮成虎杖苷，經(jīng)過(guò)添加輔料制備成相應(yīng)的滴丸、軟膠囊、膠囊、顆粒劑、片劑。本發(fā)明用大孔吸附樹(shù)脂分離純化虎杖苷，得以大大簡(jiǎn)化，具有操作方便、易于自動(dòng)化控制且維修方便，生產(chǎn)效率高、成本低，產(chǎn)品品質(zhì)優(yōu)異。利用本方法制備的虎杖苷滴丸、軟膠囊、膠囊、顆粒劑、片劑，心血管疾病藥效學(xué)作用明顯，具有服用量少，利于吸收，攜帶方便，利于儲(chǔ)藏等特點(diǎn)。中國(guó)授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利《虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法》(專(zhuān)利號(hào)200310112538.3，申請(qǐng)日2003.12.12)涉及一種虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法，它包括用已知的常規(guī)技術(shù)流程自含虎杖苷和/或白藜戸醇的植物和/或其提取物中提取，層析分離、純化，其特征在于用聚酰胺層析法分離純化虎杖苷和/或白藜蘆醇。該工藝過(guò)程安全、經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)便，并且易于實(shí)現(xiàn)從所有含有虎杖苷和/或白藜蘆醇的植物和/或其提取物中規(guī)?；a(chǎn)制備虎杖苷和/或白藜盧醇。(二)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料(需適當(dāng)粉碎)中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過(guò)細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其極性小而疏于水。各類(lèi)溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過(guò)對(duì)中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計(jì)它們的此類(lèi)性質(zhì)和選用的溶劑?？偟恼f(shuō)來(lái)，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì)相當(dāng)，就會(huì)在其中有較大的溶解度，即所謂"相似相溶"的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一。(2)溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來(lái)。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)①溶劑對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)雜質(zhì)溶解度小；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。常見(jiàn)的提取溶劑可分為以下三類(lèi)①水水是一種強(qiáng)的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、分子不太大的多糖類(lèi)、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及苷類(lèi)等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。②親水性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇(又稱(chēng)酒精)、甲醇(又稱(chēng)木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對(duì)中草藥細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時(shí)間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來(lái)源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來(lái)最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低(64°C),但有毒性，使用時(shí)應(yīng)注意。③親脂性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類(lèi)溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價(jià)格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類(lèi)溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時(shí)，直接應(yīng)用這類(lèi)溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡(jiǎn)稱(chēng)浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤脒m宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡(jiǎn)單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎＂跐B漉提取法(簡(jiǎn)稱(chēng)滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過(guò)藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉、溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過(guò)程中隨時(shí)自藥面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時(shí)，便可認(rèn)為基本上巳提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。③煎煮提取法(簡(jiǎn)稱(chēng)煎煮法)煎煮法是中國(guó)最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過(guò)管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎浸。④加熱回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶?jī)?nèi)裝藥材約為容量的20%60%，溶劑浸過(guò)藥材表面約12cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3~6小時(shí)，放冷過(guò)濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實(shí)驗(yàn)或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或稱(chēng)索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全。提取成分受熱時(shí)間較長(zhǎng)，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分離并進(jìn)行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡(jiǎn)稱(chēng)萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時(shí)如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類(lèi)成分時(shí)，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強(qiáng)的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過(guò)，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因?yàn)槟苁馆^多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大。②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時(shí)的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢査。(D逆流分配法逆流分配法又稱(chēng)逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱(chēng)液滴逆流層析法。為近年來(lái)在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的溶劑萃取法。對(duì)溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時(shí)間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動(dòng)相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹(shù)脂法大孔吸附樹(shù)脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一類(lèi)有機(jī)高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來(lái)逐漸被應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開(kāi)發(fā)研制。大孔吸附樹(shù)脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理，有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹(shù)脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開(kāi)。這使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡(jiǎn)化。大孔吸附樹(shù)脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹(shù)脂的極性發(fā)生改變，按照樹(shù)脂的表面性質(zhì)，吸附樹(shù)脂一般分為非極性、中極性和極性三類(lèi)。非極性吸附樹(shù)脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹(shù)脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹(shù)脂，如D101、XAD-1、DiaionHP-lO大孔吸附樹(shù)脂。中極性吸附樹(shù)脂指含酯基的吸附樹(shù)脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類(lèi)共聚物。它是在非極性大孔吸附樹(shù)脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國(guó)國(guó)內(nèi)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹(shù)脂。極性吸附樹(shù)脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹(shù)脂。此外，有時(shí)把含氮、氧、硫等配體基團(tuán)的離子交換樹(shù)脂稱(chēng)作強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂，強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂與離子交換樹(shù)脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹(shù)脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類(lèi)縮聚而成，如日本三菱化工的DiaionHP2MG、美國(guó)Rohm-hass公司的XAD-IO，XAD-9大孔吸附樹(shù)脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹(shù)脂具有很多的優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹(shù)脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹(shù)脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來(lái)關(guān)于大孔吸附樹(shù)脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報(bào)道越來(lái)越多。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)中草藥化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類(lèi)成分都有一定的吸附作用。對(duì)糖的吸附能力很差，對(duì)色素的吸附能力較強(qiáng)。(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過(guò)半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過(guò)半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。一般地說(shuō)，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來(lái)達(dá)到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點(diǎn)降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時(shí)提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用，中國(guó)也開(kāi)發(fā)和引進(jìn)了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對(duì)流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內(nèi)相對(duì)缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點(diǎn)，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、干燥費(fèi)用也相對(duì)較低。(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來(lái)的色香味，且易溶解。利用噴霧千燥來(lái)制備微囊的研究正在進(jìn)行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中，所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對(duì)某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報(bào)道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮?dú)庾鳛榻橘|(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時(shí)間短、均勻、流動(dòng)性好，并具良好的速溶性。近年來(lái)，對(duì)膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進(jìn)展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機(jī)、熱噴射氣流干燥機(jī)、惰性載體干燥機(jī)均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項(xiàng)新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)，導(dǎo)致物體變熱，經(jīng)過(guò)熱擴(kuò)散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20%50%，效果較好。(5)微波干燥法是一項(xiàng)20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)，微波干燥實(shí)際上是通過(guò)感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國(guó)生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和2450mhz兩個(gè)頻率。(三)血管性癡呆的研究概況癡呆(dementia)是由于腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性和持續(xù)性智能障礙綜合癥，智能障礙包括不同程度的記憶、語(yǔ)言、視空間功能、人格異常及認(rèn)知能力降低。癡呆的主要類(lèi)型是包括血管性癡呆癥(vasculardementia,簡(jiǎn)稱(chēng)VD)、老年癡呆癥中的老年性癡呆癥(Alzheimer'sDisease,或稱(chēng)阿爾茲海默癥，或稱(chēng)阿爾茨海默癥，簡(jiǎn)稱(chēng)AD)等。老年癡呆癥包括老年性癡呆癥、多重梗塞型癡呆癥(MultimfarctDementia)、酒精性癡呆癥(AlcoholicDementia)及正常腦壓水腦癥(NormalPressureHychocephalus)，其中老年性癡呆癥為老年癡呆癥中的主要類(lèi)型。由于AD好發(fā)病于60歲以上老年人，所以習(xí)慣被稱(chēng)為老年性癡呆癥或早老性癡呆癥。血管性癡呆者早期僅表現(xiàn)近記憶障礙，遠(yuǎn)記憶相對(duì)保持較好；隨病程的增加，遠(yuǎn)記憶能力逐漸喪失，智能衰退呈漸進(jìn)性加重。而老年性癡呆早期就表現(xiàn)出遠(yuǎn)近記憶障礙，智能衰退呈現(xiàn)出一種緩慢的進(jìn)展過(guò)程(郭明英，韓國(guó)玲，等.老年性癡呆與血管性癡呆智能障礙的比較研究.青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2007，28(2):125-127.)。血管性危險(xiǎn)因素在血管性癡呆和阿爾茨海默病的發(fā)病中均扮演著重要角色，所以有理論認(rèn)為阿爾茨海默病與血管性癡呆可能并非兩個(gè)獨(dú)立疾患。阿爾茨海默病與血管性癡呆的共性研究已經(jīng)在危險(xiǎn)因素、發(fā)病機(jī)制、病理生理、影像學(xué)改變等各個(gè)方面廣泛地開(kāi)展。血管性癡呆是由多次腦卒中或長(zhǎng)期慢性腦缺血所致的大腦皮層獲得性高級(jí)功能的進(jìn)行性衰退性疾病。在歐美調(diào)查表明，55歲以上的老人中癡呆發(fā)生率約1.1%，其中Alzheimer病占首要位置(發(fā)生率約7.7%。)，約為癡呆總?cè)藬?shù)的50%60%，而VD居次(發(fā)生率約1.5%。)，占10%20%，而隨著年齡增長(zhǎng)，VD所占比例顯著增加(①OttA,BretelerMMB,HarskampF，StijnenT,HofmanA.Incidenceandriskofdementia:theRotterdamstudy.Am.J.Epidemiol"1998,147(6):574~580.;②DiCarloA，BaldereschiM，AmaducciL,etal.Incidenceofdementia,Alzheimer'sdisease,andvasculardementiainItaly.TheILSAStudy.J.Am.Geriatr.Soc.，2002;50:41-48.)。中國(guó)最近的研究也表明，65歲以上的老人中AD發(fā)生率約3.5%,VD發(fā)生率U%(ZhangZX，ZahnerGE，RomanGC,etal.DementiasubtypesinChina:prevalenceinBeijing,Xi叫Shanghai,andChengdu.ArchNeurol.2005;62(3):447-453.)。由于目前還缺乏適用于診斷VD的認(rèn)知損害模式，對(duì)于AD和VD的診斷的鑒別以及"混合型"癡呆(AD+腦血管病，簡(jiǎn)稱(chēng)AD+CVD)的診斷仍然具有一定的挑戰(zhàn)性(①丁素菊，李云霞，血管性癡呆的臨床診斷和治療.國(guó)外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊(cè).2005，13(9):676-680;②ErkinjunttiT:Vasculardementia:challengeofclinicaldiagnosis.IntPsychogeriatr.1997;9:51-58.)，所以有人認(rèn)為血管性癡呆可能是老年人中最為常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型，主要是因?yàn)楹芏?混合型"癡呆(AD+CVD)可能被診斷為AD(①Rom6nGC.Vasculardementiamaybethemostcommonformofdementiaintheelderly.JNeurolSci.2002,203-204:7-10;②丁素菊.血管性癡呆.中國(guó)老年學(xué)雜志.2003;23(4):200-202.)。VD的發(fā)生率在男女無(wú)明顯差異(AndersonK，LaunerLJ,DeweyME,etal.GenderdifferencesintheincidenceofADandvasculardementia:theEURODEMstudies.Neurology.1999;53:1992—1997.)，其最顯著的危險(xiǎn)因子是年齡[HebertR.，LindsayJ"VerreaultR.,RockwoodK.,HillG.,DuboisMF.Vasculardementia:incidenceandriskfactorsintheCanadianstudyofhealthandaging.Stroke,2000;31(7):1487-1493.]，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，在大于60歲的人群中，年齡每增加5歲VD的發(fā)病率就增加1倍。引起VD的兩個(gè)主要原因是腦卒中和缺血性心臟病(ischemicheartdisease,簡(jiǎn)稱(chēng)IHD)，而在老年人中這兩者都是常見(jiàn)病。僅就腦卒中而言，現(xiàn)在每年全球新增加卒中患者1000萬(wàn)，其中中國(guó)就有200萬(wàn)(①FeiginVL,LawesCMM,BennettDA，etal.Strokeepidemiology:areviewofpopulation-basedstudiesofincidence,prevalence,andcase-fatalityinthelate20thcentury.LancetNeurol.,2003,2(1):43-53;②吳兆蘇，姚崇華，趙冬.中國(guó)人群腦卒中發(fā)病率、死亡率的流行病學(xué)研究.中華流行病學(xué)雜志,2003;24(3):236-239.)，在老年人中發(fā)病率尤高，從而造成很多患者并發(fā)VD。中國(guó)全國(guó)性癡呆流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)資料也顯示隨著人口的老齡化、飲食結(jié)構(gòu)的改變，VD的發(fā)病呈遞增趨勢(shì)。隨著人口老化，心腦血管病的發(fā)病率逐年升高，并發(fā)VD患者也逐漸增多。VD不僅嚴(yán)重?fù)p害患者健康，給患者帶來(lái)長(zhǎng)期痛苦，影響患者的生命質(zhì)量，也給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，引起了世界各國(guó)的普遍關(guān)注，它是老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題。普遍認(rèn)為年齡對(duì)VD的作用是通過(guò)多方面來(lái)影響的，例如腦的自身調(diào)節(jié)、細(xì)胞的新陳代謝、血腦屏障及自主功能方面的老化改變使腦血管易于受到損害，而腦損害的累計(jì)效應(yīng)也是原因之癡呆的診斷必須符合三個(gè)條件①癡呆；②腦血管??；③以上二者密切相關(guān)。癡呆和卒中在時(shí)間上密切聯(lián)系，通常卒中后3個(gè)月內(nèi)發(fā)生癡呆。主要癥狀為①腦組織病理形態(tài)改變；②記憶力下降。關(guān)于VD的治療，目前尚無(wú)肯定的治療方法可以改變整個(gè)病程，由于腦梗死后壞死的腦細(xì)胞不可能逆轉(zhuǎn)，主要是對(duì)供血不足的腦細(xì)胞的治療以緩解發(fā)作期癥狀、預(yù)防再損害等。常采用積極改善腦細(xì)胞供氧、改善微循環(huán)、預(yù)防新血栓與再梗死的方法等。改善腦循環(huán)治療常用的有雙氫麥角堿類(lèi)、鈣離子拮抗劑、煙酸類(lèi)、其他擴(kuò)血管藥物及抗血小板聚集藥物。膽堿酯酶抑制劑是近年發(fā)展較為迅速的癡呆治療藥物，如鹽酸多奈哌齊和重酒石酸卡巴拉汀。臨床上還經(jīng)常應(yīng)用腦保護(hù)治療藥物如鈣離子拮抗劑(尼莫地平和西吡靈)；自由基清除劑(維生素E、維生素C以及銀杏葉制劑)等。但從上述藥物目前臨床的應(yīng)用效果來(lái)看，療效一般，并且大部分都僅僅是對(duì)癥處理，并不能改善死亡率。目前一些中藥制劑如銀杏葉、燈盞花、刺五加等制劑大多存在活性成分不清、作用機(jī)制不明、質(zhì)量不穩(wěn)、毒副作用大等不足之處，難以滿(mǎn)足臨床需要。因此，目前世界各國(guó)對(duì)控制此病病程進(jìn)展尚無(wú)有效方法和藥物，VD的預(yù)防、治療和預(yù)后的藥物研究和開(kāi)發(fā)己成為各國(guó)非常重視的研究課題(①丁素菊.血管性癡呆.中國(guó)老年學(xué)雜志.2003;23(4):200-202;②陳春雷，邱智輝，蘇世鑫，鄭忠誠(chéng)，陳培芬，葉志平.血管性癡呆的治療進(jìn)展.中國(guó)新醫(yī)學(xué)論壇.2007,7(7):59-62.)。(四)老年性癡呆癥的研究_1、概述老年癡呆癥中最主要的疾病類(lèi)型是AD。AD是一種慢性原發(fā)的、以腦老化為基礎(chǔ)的、進(jìn)行性腦變性的老年中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是發(fā)生于老年期或老年前期的一種進(jìn)行性的神經(jīng)退行性疾病，是進(jìn)入暮年后的一種常見(jiàn)病態(tài)反應(yīng)，屬于非正常衰老狀態(tài)的早老性癡呆病癥。AD是一種嚴(yán)重的、退行性腦疾患。AD以記憶減退、認(rèn)知障礙、人格改變，行為異常和語(yǔ)言能力喪失為特征，主要表現(xiàn)為大腦皮層獲得性高級(jí)功能的全面障礙和認(rèn)知功能明顯受損，腦功能退化衰亡，即記憶功能迅速衰減及識(shí)別能力障礙，并伴有行為或人格方面的改變。其臨床特征是進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙，臨床表現(xiàn)為記憶衰退、認(rèn)知障礙、人格改變，其病理特征為神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)、細(xì)胞外老年斑沉積及神經(jīng)元數(shù)量減少。由于人或其它動(dòng)物衰老時(shí)，機(jī)體本身會(huì)發(fā)生許多退行性變化，因此，AD作為老年性疾病，其發(fā)生與衰老有密切關(guān)系。隨著全球人口老齡化，老年性癡呆的發(fā)病率也隨之增加。根據(jù)Rotterdarm研究結(jié)果，6569歲老年人每年的發(fā)病率是1.4%,7074歲者是3.9%,7579歲者是16.7%。，到85歲時(shí)增至45.4%。。該病的發(fā)生機(jī)理有各種學(xué)說(shuō)，但確切病因尚無(wú)定論。目前，全世界約有5000多萬(wàn)的老年人患有老年性癡呆，并且有不斷年輕化的趨勢(shì)，已成為不容忽視的社會(huì)問(wèn)題和家庭問(wèn)題(張均田.老年癡呆的發(fā)病機(jī)制及防治藥物.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2002，21(8):469.471)。而老年癡呆病人的平均生存期為5.5年，使該病成為現(xiàn)代社會(huì)老年人的主要致死疾病之一。但由于AD的病因不完全明確，迄今尚無(wú)有效的防治藥物，目前該疾病仍是全球較為棘手的病癥之一，AD的防治已經(jīng)成為一個(gè)突出的、亟待解決的醫(yī)療和社會(huì)問(wèn)題，積極研究開(kāi)發(fā)新的治療方法是一件刻不容緩的事情。該類(lèi)疾病病程一般較長(zhǎng)，約為320年。對(duì)AD患者常年的護(hù)理費(fèi)用是巨大的，不僅對(duì)整個(gè)社會(huì)的醫(yī)療保障系統(tǒng)有極大影響，對(duì)中國(guó)未來(lái)社會(huì)的小家庭模式也是極大的挑戰(zhàn)。因此，其發(fā)生給社會(huì)、家庭均帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)，也給患者自身帶來(lái)極大的痛苦。2、病理表現(xiàn)及發(fā)病機(jī)制AD的主要病理表現(xiàn)是在前腦基底、海馬和大腦皮層細(xì)胞外神經(jīng)炎斑的形成，細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)的出現(xiàn)以及祌經(jīng)細(xì)胞和突觸數(shù)目的減少。斑點(diǎn)主要由淀粉樣前體蛋白(簡(jiǎn)稱(chēng)APP)的蛋白水解產(chǎn)物e-淀粉樣蛋白(Beta-AmyloidProtein,簡(jiǎn)稱(chēng)AP)聚集組成。在正常情況下，APP水解產(chǎn)物是可溶性的Ae4Q，而在病理?xiàng)l件下，APP水解產(chǎn)物是長(zhǎng)的易形成纖維的Ae,42，它先以一種未成熟的、非纖維狀的分散的斑點(diǎn)形式存在，最終經(jīng)過(guò)構(gòu)象改變，聚合成一種有毒的纖維狀物質(zhì)，即形成斑點(diǎn)。神經(jīng)纖維纏結(jié)主要存在于錐狀神經(jīng)元的胞內(nèi)和異常的神經(jīng)軸突中，為一非水溶性結(jié)構(gòu)，其主要組成為直徑10nm的雙螺旋纖維結(jié)構(gòu)(簡(jiǎn)稱(chēng)PHF)，主要成分是一種微管結(jié)合蛋白，即to"蛋白，正常的to"蛋白能穩(wěn)定微管蛋白的相互作用，而PHFs中的tow蛋白則以超磷酸化的形式存在。AD的病因?qū)W復(fù)雜，目前主要有兩種假說(shuō)tow蛋白假說(shuō)和淀粉樣蛋白假說(shuō)。tow蛋白假說(shuō)的主要論點(diǎn)是由于tow蛋白的超磷酸化導(dǎo)致微管蛋白的不穩(wěn)定，引起高爾基體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而影響APP的代謝，產(chǎn)生過(guò)量的A0。該假說(shuō)還未在細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體水平得到證實(shí)。淀粉樣蛋白假說(shuō)的主要論點(diǎn)是在細(xì)胞外神經(jīng)病變發(fā)生的周?chē)矸蹣拥鞍椎木奂瑢?dǎo)致神經(jīng)炎斑的形成和隨后神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成。因此，淀粉樣蛋白是AD病理鏈形成的起因。支持淀粉樣蛋白假說(shuō)的證據(jù)很廣泛。e-淀粉樣蛋白異常沉積形成的老年斑是ad典型的病理特征。斑塊周?chē)@著的神經(jīng)退行性改變和膠質(zhì)細(xì)胞的活化提示Ae可能是引起AD中神經(jīng)元丟失和炎癥反應(yīng)的原因。在神經(jīng)退行性病變中，膠質(zhì)細(xì)胞的活化與神經(jīng)元的死亡具有同等重要的作用，且兩者之間存在一定聯(lián)系(參見(jiàn)BalesKR，DuY，etal.TheNF-kappaB/RelfamilyofproteinsmediatesAbeta陽(yáng)inducedneurotoxicityandglialactivation.BrainResMolBrainRes.1998;57(1):63-72.)。通過(guò)免疫注射清除e-淀粉樣蛋白斑塊后，與AD相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)病變可以修復(fù)。這一事實(shí)為e-淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)提供了有力的證據(jù)。e-淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)的其他證據(jù)包括2i三體綜合癥患者由于Ae產(chǎn)生過(guò)多，早期即可出現(xiàn)AD樣神經(jīng)系統(tǒng)病變，其年輕患者惟一的神經(jīng)系統(tǒng)病變?yōu)閺浡訟P沉積，說(shuō)明淀粉樣蛋白沉積可能是最早的神經(jīng)病理學(xué)改變；通過(guò)一些措施清除淀粉樣蛋白后，神經(jīng)系統(tǒng)病變?nèi)缟窠?jīng)元皺縮、小膠質(zhì)細(xì)胞激活可以逆轉(zhuǎn)。這些證據(jù)說(shuō)明淀粉樣蛋白沉積是AD發(fā)病的中心環(huán)節(jié)(參見(jiàn)周慧芳，薛冰，王曉民，Alzheimer病研究進(jìn)展一e-淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)與主要防治策略，自然科學(xué)進(jìn)展，2003,13(2):121-125.)。3、流行病學(xué)情況隨著發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家人均壽命的提高，患癡呆癥的老年人數(shù)迅速增加。在所有的癡呆癥中，以AD所占的比例最高(約50%~60%)。據(jù)資料報(bào)道，隨著年齡的增長(zhǎng)，在人體組織老化和基因的影響下，癡呆現(xiàn)象的發(fā)生率不斷升高；其中，AD隨年老急劇上升，從60歲起，每4年5年上升一倍；AD的發(fā)病率在65歲左右的老年人中約占10%，在85歲以上的老年人中約占47%，已經(jīng)成為人類(lèi)的第四號(hào)殺手。過(guò)去學(xué)術(shù)界曾認(rèn)為中國(guó)是AD低危險(xiǎn)性國(guó)家，然而，早前于安徽屯溪召開(kāi)的第二屆中國(guó)老年人癡呆癥和抑郁癥學(xué)術(shù)研討會(huì)暨國(guó)際老年癡呆學(xué)術(shù)研討會(huì)上，這一觀點(diǎn)受到挑戰(zhàn)。有5份研究報(bào)告表明，中國(guó)也是AD高危國(guó)家。目前全球的AD病人估計(jì)在1200萬(wàn)左右，中國(guó)現(xiàn)有老年癡呆患者大約為300萬(wàn)400萬(wàn)，且呈迅速上升趨勢(shì)，確診后一般約7年9年內(nèi)死亡。有資料表明，中國(guó)60歲以上人口早在1998年已達(dá)1.2億，并以年均3.2%的速度遞增，大大高于人口增長(zhǎng)速度。75歲以上的老人有2000萬(wàn)，80歲以上老人有800萬(wàn)，并以年均5.4%的速度增加，下世紀(jì)中葉可達(dá)4億左右，將成為世界上老齡人口最多的國(guó)家。1988年中美上海調(diào)査研究表明，中國(guó)65歲以上老年人的癡呆發(fā)生率為4.6%，其中AD的比重為63%，多發(fā)梗塞性癡呆為28%，腦組織損傷后遺癥、化學(xué)藥物中毒以及神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)或營(yíng)養(yǎng)缺乏導(dǎo)致的癡呆約占10%。上海的流行病學(xué)調(diào)査顯示，中國(guó)55歲、65歲以上癡呆的患病率分別為2.57%和4.6%。北京老年病醫(yī)療研究中心對(duì)北京地區(qū)2788名60歲以上老人的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有208名老人患有癡呆癥，患病率達(dá)7.5%。其中女性病人139人，患病率達(dá)9.7%，顯著高于男性的5.8%。他們的研究還表明，高齡、低教育水平、居住在農(nóng)村是老年癡呆癥的高危因素。而解放軍總醫(yī)院對(duì)1728名離退休老干部的調(diào)查表明，有癡呆家庭史、"文革"中受迫害、電磁場(chǎng)暴露、腦外傷亦是老年癡呆癥的危險(xiǎn)因素。在廣州城區(qū)75歲以上老年人癡呆患病率的調(diào)査中，AD患病率為7.49%。4、老年性癡呆癥的治療藥物AD是老年人的常見(jiàn)病之一，是一種漸進(jìn)性的神經(jīng)功能退化性失調(diào)癥，目前本病的病因尚未得到充分闡明，一直是治療上的一個(gè)棘手問(wèn)題?？拱V呆藥物的研究和開(kāi)發(fā)已引起世界各國(guó)醫(yī)藥界的高度重視。近年來(lái)，隨著對(duì)老年人神經(jīng)生理、生化、藥理等方面研究的不斷深入，導(dǎo)致相關(guān)藥物的開(kāi)發(fā)研究不斷取得進(jìn)展。2001年有1270多種產(chǎn)品投放市場(chǎng)，這些產(chǎn)品中90%是80年代發(fā)現(xiàn)、卯年代研究與開(kāi)發(fā)成功的，此類(lèi)藥物開(kāi)發(fā)的新產(chǎn)品數(shù)目超過(guò)了任何其它治療類(lèi)藥物開(kāi)發(fā)的數(shù)目。目前治療老年癡呆的藥物主要有膽堿酯酶抑制藥，腦血管擴(kuò)張藥，鈣拮抗藥，防止A(3沉積藥，抑制P、Y分泌酶藥和抗炎藥等。主要應(yīng)用膽堿能藥物或膽堿醋酶抑制劑來(lái)治療，美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市治療AD的藥物均為膽堿酯酶抑制藥?，F(xiàn)用于臨床的膽堿酯酶抑制藥有他克林、多奈哌齊(don印ezil)和石杉?jí)A甲等。此類(lèi)藥物對(duì)癡呆病早期以及改善認(rèn)知功能障礙有效，但也有一定副作用及作用短暫等缺點(diǎn)，尤其是他克林對(duì)肝臟損傷嚴(yán)重。臨床上還經(jīng)常應(yīng)用腦保護(hù)治療藥物如鈣離子拮抗劑(尼莫地平和西吡靈)；自由基清除劑(維生素E、維生素C以及銀杏葉制劑)等。但從上述藥物目前臨床的療效一般，并且大部分都僅僅是對(duì)癥處理，并不能改善死亡率，并且毒副作用大，效果往往不甚理想。經(jīng)過(guò)近10年的臨床表明，乙酰膽堿酯酶(簡(jiǎn)稱(chēng)AChE)抑制劑對(duì)AD具有一定的治療作用，其主要藥物他克林、利斯的明、多奈哌齊、加蘭他敏已是這一領(lǐng)域中的代表性品種，從而也推動(dòng)了癡呆治療藥品市場(chǎng)的發(fā)展進(jìn)程。(1)腦代謝激動(dòng)劑研究發(fā)現(xiàn)，老年癡呆癥患者存在有糖代謝及核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等代謝系統(tǒng)障礙，同時(shí)其腦血流量及耗氧量明顯低于同齡正常人。因此，腦代謝激動(dòng)劑和腦循環(huán)改善劑，特別是具有腦血管擴(kuò)張作用的腦代謝激動(dòng)劑就成為治療本病可供選用的藥物。此類(lèi)藥物有吡拉西坦、吡硫醇、氫化麥角堿、都可喜、長(zhǎng)春胺、長(zhǎng)效長(zhǎng)春胺、長(zhǎng)春乙酯、尼莫地平、桂利嗪、環(huán)扁桃酯、氯酯醒、己酮可可堿、麥角溴煙酯等。這些藥物對(duì)老年癡呆癥的某些癥狀如記憶力減退、適應(yīng)環(huán)境能力降低等，有程度不同的改善作用。(2)擬膽堿藥現(xiàn)已知腦內(nèi)乙酰膽堿含量與記憶密切相關(guān)，老年或癡呆病人腦內(nèi)乙酰膽堿量減少，補(bǔ)充膽堿類(lèi)藥物能改善其記憶和思維能力。但直接給予膽堿或卵磷脂并不能使乙酰膽堿增加。有人試以膽堿或卵磷脂與能通過(guò)血腦屏障的膽堿酯酶抑制劑毒扁豆堿合用于本病患者，可使其記憶力有提高，而單獨(dú)給予卵磷脂效果不明顯。另有人單用毒扁豆堿給本病患者靜注，記憶測(cè)定成績(jī)較安慰劑提高約20%，并發(fā)現(xiàn)對(duì)行為障礙也有效。研究認(rèn)為，膽堿酯酶抑制劑可延遲乙酰膽堿的代謝分解，從而延長(zhǎng)突觸后受體的興奮。另外，國(guó)內(nèi)研制的哈伯因(石杉?jí)A甲)，系中國(guó)學(xué)者從石杉屬植物千層塔中分離到的一種新生物堿，藥理實(shí)驗(yàn)證明，本品具有很強(qiáng)的擬膽堿活性，是一種高效、可逆的膽堿酯酶抑制劑。(3)乙酰膽堿酯酶抑制劑(AcetylcholinesteraseInhibitors)乙酰膽堿酯酶抑制劑包括毒扁豆堿(商品名Synapton，F(xiàn)orest實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn))、四氫氨基吖啶(他克林，商品名Cognex,Parke-Davis公司生產(chǎn))、donepezil(商品名Aricept，輝瑞/衛(wèi)材公司生產(chǎn))、metrifonate(拜耳公司生產(chǎn))和rivastigmine(商品名Exelon，諾華公司生產(chǎn))。這些化合物通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶在神經(jīng)腱內(nèi)濃縮乙酰膽堿，并能持續(xù)更長(zhǎng)的作用時(shí)間。四氫氨基吖啶是第一個(gè)通過(guò)FDA并在臨床上治療阿爾茨海默氏癥的膽堿酯酶抑制劑，但規(guī)定仍需作改進(jìn)。該品生物利用度要低于rivastigmine和donepezil，并有較大的副作用。多奈哌齊(Donopozil)是第二代也是第二個(gè)被美國(guó)FDA特許用于治療阿爾默海茨病(老年癡呆)的膽堿酯酶抑制劑，于1997年被FDA批準(zhǔn)用于臨床，可促進(jìn)輕、中度老年癡呆病人的認(rèn)知能力以及改善病人的精神狀態(tài)和保持腦功能活性等作用。與第一代膽堿酯酶抑制劑相比，該品有多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)①作用時(shí)間長(zhǎng)，每日只須口服一次；②藥效強(qiáng)、療效高；③安全性高、選擇性高，藥物不良反應(yīng)小。目前該品已進(jìn)入中國(guó)銷(xiāo)售，國(guó)內(nèi)也有廠家生產(chǎn)。SanochemiaPharmazeutikaAG公司(維也納、奧地利)宣布第一個(gè)在歐洲上市的乙酰膽堿酯酶抑制劑-ReminyI(加蘭他敏)。該品被批準(zhǔn)在瑞典上市，并報(bào)送歐盟以期獲準(zhǔn)進(jìn)入歐洲其它市場(chǎng)。丹麥的NeuroSearch公司最近利用NS2330進(jìn)行臨床研究開(kāi)發(fā)。NS2330增加多巴胺和去甲腎上腺素的活性，同時(shí)也激活其抑制機(jī)制以刺激乙酰膽堿在大腦皮層(包括感知部位)的釋放。這樣所有三個(gè)神經(jīng)傳遞素的功能都將受到阿爾茨海默氏癥的影響。該公司希望NS2330能夠具有較好的治療效果，目前該藥的I期臨床工作己經(jīng)完成，F(xiàn)DA也同意該公司繼續(xù)II期臨床工作。其它用來(lái)研究的化合物還包括xanomeline(諾和諾德/禮來(lái)公司生產(chǎn))、besperidine(赫司特公司生產(chǎn))和talsaclidine(勃林格殷格翰/法瑪西亞普強(qiáng)公司)。①他克林(簡(jiǎn)稱(chēng)THA)他克林的化學(xué)名為四氫氨基吖啶，商品名Cognex，該藥是美國(guó)華納一蘭伯特公司開(kāi)發(fā)并第一個(gè)上市的中樞系統(tǒng)的非競(jìng)爭(zhēng)、可逆性膽堿酯酶抑制劑，1993年獲得FDA批準(zhǔn)后首先在美國(guó)上市，是改善AD認(rèn)知癥新藥和老年益智藥物，同年在英國(guó)、法國(guó)、加拿大等國(guó)上市，其化合物專(zhuān)利于1996年到期，目前市場(chǎng)上主要是美國(guó)派德一戴維斯的產(chǎn)品。他克林尤其對(duì)女性AD癥具有顯著的療效，與卵磷脂合用可獲得理想的效果，能明顯改善患者的記憶力，因此他克林已被認(rèn)為是治療、預(yù)防早老性癡呆僅有的幾種藥物之一。他克林的不足之處是對(duì)肝功能及轉(zhuǎn)氨酶指數(shù)有較大影響，制約了市場(chǎng)的開(kāi)發(fā)，其銷(xiāo)售額的增長(zhǎng)也遠(yuǎn)不如其它AD藥物。經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的研究，在他克林母核的基礎(chǔ)上加成篩選，由德國(guó)赫斯特魯塞爾公司研制出維那克林。該藥是他克林1位羥基衍生物，其藥物作用機(jī)制得到相應(yīng)的改善，但仍有一些不良反應(yīng)，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，將被新一代乙酰膽堿酯酶抑制劑所替代。②多奈哌齊多奈哌齊是具有高度選擇性、可逆性治療AD的藥物，為第二代中樞性乙酰膽堿酯酶抑制劑，是日本衛(wèi)材制藥公司開(kāi)發(fā)的藥物，1996年11月25日獲得FDA的特許批準(zhǔn)用于臨床，商品名安理申。1997年初首先在美國(guó)上市，由衛(wèi)材/輝瑞共同開(kāi)發(fā)全球市場(chǎng)，1999年10月安理申在中國(guó)上市，目前已形成了世界50多個(gè)國(guó)家地區(qū)的銷(xiāo)售網(wǎng)絡(luò)。多奈哌齊是第二個(gè)獲準(zhǔn)治療老年癡呆癥的藥物，其最大優(yōu)勢(shì)是治療達(dá)標(biāo)劑量小、毒副作用低，耐受性好。專(zhuān)家普遍認(rèn)為，該藥在AD治療藥物中處于領(lǐng)先地位，在四個(gè)主要品種中占據(jù)了60%的市場(chǎng)份額，預(yù)計(jì)這一優(yōu)勢(shì)將延續(xù)到能夠?qū)膊≈委煯a(chǎn)生重要影響的新藥問(wèn)世為止。據(jù)PharmaBusiness雜志報(bào)道在2000年全球最暢銷(xiāo)500種藥品中，日本衛(wèi)材公司銷(xiāo)售額為4.31億美元，輝瑞公司的銷(xiāo)售額為1.19億美元，分別比上一年增長(zhǎng)了27.3%和30.8%。2001年多奈哌齊在全球排第101名，銷(xiāo)售額合計(jì)約6.83億美元，2002年在全球超過(guò)了1100億日元，已是AD市場(chǎng)中的佼佼者。2001年中國(guó)醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)中心、重慶桑田藥業(yè)開(kāi)發(fā)了多奈哌齊原料藥及其片劑產(chǎn)品，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)其以四類(lèi)新藥生產(chǎn)。③利斯的明利斯的明是氨基酸甲酸類(lèi)腦選擇性膽堿酯酶抑制劑，屬于該類(lèi)藥的第二代產(chǎn)品，由瑞士諾華制藥英國(guó)公司開(kāi)發(fā)，商品名艾斯能，1997年12月首先在瑞士上市，次年在英國(guó)上市。2000年4月21日獲得FDA批準(zhǔn)，同年6月底在美國(guó)上市，從而擴(kuò)展了阿爾茨海默癥治療藥物市場(chǎng)的格局。研究結(jié)果顯示該藥雖然半衰期相對(duì)較短，但對(duì)膽堿酯酶抑制作用可達(dá)10小時(shí)，該藥不經(jīng)肝臟及P450代謝，對(duì)輕、中度早老性癡呆癥耐受性較好，同時(shí)具有抑制腦內(nèi)的丁酰膽堿酯酶作用，在歐洲、美國(guó)等45個(gè)國(guó)家進(jìn)行的一項(xiàng)前瞻性、隨機(jī)多中心雙盲研究中獲得較高的評(píng)價(jià)。由于利斯的明在藥物市場(chǎng)中獲得越來(lái)越多的份額，2000年的銷(xiāo)售額比上一年增長(zhǎng)了83%，為1.195億美元，2001年利斯的明在全球銷(xiāo)售額增加101%，已達(dá)2.4億美元。④加蘭他敏加蘭他敏屬于第二代乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物，其藥物成份與歐洲山區(qū)水仙花鱗莖提取的生物堿相同，該植物藥在一些國(guó)家、地區(qū)己經(jīng)有過(guò)30多年的臨床應(yīng)用，用于治療逆轉(zhuǎn)神經(jīng)肌肉阻滯、重癥肌無(wú)力和幼兒腦型麻痹癥等。加蘭他敏是希雷與強(qiáng)生公司合作開(kāi)發(fā)的化學(xué)合成藥物，制劑有片劑、膠囊、口服液等，臨床用于改善AD患者總體功能。該藥具有雙重作用機(jī)制，能較好的刺激和抑制乙酰膽堿酯酶，并且能夠調(diào)節(jié)腦內(nèi)的煙堿受體位點(diǎn)，可顯著改善輕、中度早老性癡呆病人的認(rèn)知功能，延緩腦細(xì)胞功能減退的進(jìn)程。加蘭他敏于2000年7月被歐盟批準(zhǔn)后在英國(guó)、愛(ài)爾蘭首次上市，2001年獲美國(guó)FDA許可用于治療阿爾茨海默癥，現(xiàn)已在25個(gè)國(guó)家上市。希雷公司負(fù)責(zé)在英國(guó)、愛(ài)爾蘭的銷(xiāo)售，強(qiáng)生公司負(fù)責(zé)美國(guó)和其它歐洲國(guó)家的銷(xiāo)售。國(guó)外報(bào)道2001年加蘭他敏銷(xiāo)售額為1.36億美元。1998年上海申興制藥廠已生產(chǎn)加蘭他敏原料藥，1999年國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)蘇州第六制藥廠生產(chǎn)四類(lèi)新藥氫溴酸加蘭他敏膠囊，2001年上海申興產(chǎn)量同比增長(zhǎng)3倍，年產(chǎn)量達(dá)到30kg。該藥進(jìn)入市場(chǎng)后，臨床推廣長(zhǎng)足邁進(jìn)，2000年已在我國(guó)主要城市重點(diǎn)醫(yī)院抗癡呆藥品中嶄露頭角。近幾年，乙酰膽堿脂酶抑制劑已成為AD的一線(xiàn)治療藥物，確認(rèn)了其有效緩解認(rèn)知功能障礙的地位，產(chǎn)品銷(xiāo)售量占據(jù)了抗癡呆藥物中的最大份額，研究表明石杉?jí)A甲、毒扁豆堿、美曲磷脂對(duì)阿爾茨海默癥也有一定的治療作用，中科院上海藥物所開(kāi)發(fā)的石杉?jí)A甲化合物已申請(qǐng)了國(guó)際專(zhuān)利，其作用機(jī)制正在進(jìn)行深入的研究，北京四環(huán)制藥、寧波立華制藥、上海漢殷藥業(yè)和上海醫(yī)科大學(xué)紅旗藥廠獲得了新藥證書(shū)和生產(chǎn)文號(hào)。(4)鉀通道阻滯劑研究表明，非選擇性的鉀通道阻滯劑通過(guò)延遲去極化和延長(zhǎng)突觸前神經(jīng)末梢的鈣流入引起神經(jīng)遞質(zhì)(包括Ach)釋放增加。若要想這類(lèi)藥物用于治療老年癡呆，則所用藥物應(yīng)具備能增加乙酰膽堿的釋放而不減少膜磷脂酰膽堿組成的優(yōu)點(diǎn)，而減少膜磷脂酰膽堿的組成可能是AchE抑制劑存在的副作用。磷脂酰膽堿是膽堿的貯存庫(kù)，被神經(jīng)元用來(lái)合成Ach。膜磷脂酰膽堿的損失使乙酰膽堿的合成受到限制，導(dǎo)致膽堿輸出量減少。臨床研究已表明非選擇性鉀通道阻滯劑對(duì)改善患者的識(shí)別能力僅有中度作用，其作用不強(qiáng)可能是這些藥物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)穿透力低，選擇性差或活性不夠等，有待于進(jìn)一步研究加以完善。(5)谷氨酸受體調(diào)控劑在老年疾呆癥患者的大腦中，皮質(zhì)皮層和離皮層途徑的錐體細(xì)胞發(fā)生了神經(jīng)纖維混亂和退化。據(jù)報(bào)道，這些錐體細(xì)胞以谷氨酸為興奮遞質(zhì)。這些神經(jīng)元受損，功能喪失時(shí)會(huì)導(dǎo)致老年癡呆癥；但若功能過(guò)強(qiáng)，則會(huì)產(chǎn)生興奮性毒性，引起神經(jīng)元死亡，造成多種神經(jīng)退化性疾病。因此，調(diào)控退化的谷氨酸神經(jīng)元的突觸活性有望治療老年癡呆癥。研究表明，直接活化突觸后受體將有利于谷氨酸的傳遞，其部分激動(dòng)劑具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，即當(dāng)內(nèi)源性谷氨酸低于正常水平時(shí)起激動(dòng)劑作用，而當(dāng)谷氨酸釋放過(guò)量時(shí)起拮抗劑作用，因此，部分激動(dòng)劑會(huì)對(duì)興奮毒性情況產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。已有報(bào)道的藥物如美金剛胺(memantine)，當(dāng)谷氨酸以病理量釋放時(shí)，美金剛胺會(huì)減少谷氨酸的神經(jīng)毒性作用；當(dāng)谷氨酸釋放過(guò)少時(shí)，美金剛胺可以改善記憶過(guò)程所需谷氨酸的傳遞，臨床研究表明，美金剛胺用于老年癡呆癥患者具有較好的耐受性，在精神病理學(xué)和行為測(cè)定中產(chǎn)生溫和的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著改善。(6)5-羥色胺3受體拮抗劑5-羥色胺3(簡(jiǎn)稱(chēng)5-HT3)受體拮抗劑原用于止吐，現(xiàn)有研究根據(jù)5-HT3受體在大腦中的分布狀態(tài)，推測(cè)此類(lèi)拮抗劑應(yīng)有其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。如5-HT3拮抗劑昂丹司瓊樞復(fù)寧能改善膽堿能神經(jīng)功能正常和不足的動(dòng)物如鼠、狨等的識(shí)別能力；在50歲以上與老年有關(guān)的記憶力受損(AAMI)病人的臨床試驗(yàn)中，昂丹司瓊能使相當(dāng)于喪失6年的記憶力得到改善。因此，昂丹司瓊及其他5-HT3受體拮抗劑(托垸司瓊、格拉司瓊等有可能給老年癡呆患者帶來(lái)福音。(7)天然藥物方面的研究現(xiàn)今很多醫(yī)藥公司還把目光移向天然藥物，試圖從中開(kāi)發(fā)出有效的治療藥物。在這方面同樣也取得了一定的進(jìn)展。①阿樸脂蛋白E4(ApoE4)我們知道，阿爾茨海默氏癥的發(fā)病情況與遺傳基因有著較為緊密的聯(lián)系，阿樸脂蛋白E4ApoE4是特別值得讓我們?nèi)プ⒁獠⒊委熀皖A(yù)防阿爾茨海默氏癥的方向進(jìn)行研究。在藥物開(kāi)發(fā)中，ApoE4已經(jīng)進(jìn)行過(guò)人體藥物臨床試驗(yàn)，并極有可能成為療效比較確切的藥品。②e-淀粉素(體)(Beta-amyloid)e-淀粉素是一種不能溶解的多肽。該種物質(zhì)能夠有效防止激烈氧化過(guò)程中導(dǎo)致的二乙基溴乙酰胺的破壞。在從事阿爾茨海默氏癥研究理論中就是利用p-淀粉素限制自由基的產(chǎn)生以及清除自由基，以防止自由基所帶來(lái)的損害。這種類(lèi)型的化合物包括idebenone(武田公司、Osaka日本)，該化合物既是一種自由基的清道夫也是某種神經(jīng)增長(zhǎng)因子的刺激物。早期研究表明，idebenone能有效治療中度癡呆癥。盡管葛蘭素威康公司(英國(guó))和美國(guó)家用產(chǎn)品公司已經(jīng)在少數(shù)一些國(guó)家上市，但它已經(jīng)從日本退出市場(chǎng)，而且其III期臨床試驗(yàn)已經(jīng)被停止。(8)其它類(lèi)型藥物的研究進(jìn)展2000年上半年，一些研究表明，雌激素替代療法可以較明顯地延緩婦女阿爾茨海默氏癥的發(fā)作，并能降低阿爾茨海默氏癥的病情嚴(yán)重化。個(gè)別臨床研究也發(fā)現(xiàn)雌激素治療能夠提高感知度。雌激素對(duì)抗氧劑和抗炎藥的作用能力可以減少發(fā)病的機(jī)率，推動(dòng)乙酰膽堿的產(chǎn)生、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。2000年年中，日本的ToyamaChemical公司期望開(kāi)始在英國(guó)進(jìn)行T-588的II期臨床研究，并能在美國(guó)進(jìn)行較早的試驗(yàn)。在紐約大學(xué)的合作下，公司發(fā)現(xiàn)T-588可以保護(hù)大腦神經(jīng)細(xì)胞。日本藤澤制藥公司的FK-960在日本和美國(guó)進(jìn)行。該藥能夠提高感知度，具有新的作用機(jī)制。在最近有關(guān)研究報(bào)道是表明，咀嚼可以防止上年紀(jì)的人記憶力衰退，但其作用機(jī)制現(xiàn)在仍然沒(méi)有明確。研究人員通過(guò)研究小鼠的遺傳改變來(lái)研究人體老化的跡象。實(shí)驗(yàn)表明，拔除牙齒以防止咀嚼的小鼠的記憶力要遜于正常對(duì)照小組。此外，研究人員還研究了咀嚼時(shí)大腦的活動(dòng)情況，并發(fā)現(xiàn)下巴的活動(dòng)可以增強(qiáng)腦部海馬區(qū)的信號(hào)。來(lái)自肯塔基州立大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)減少食用量可以保護(hù)大腦避免因年齡引起紊亂，這種紊亂類(lèi)似于阿爾茨海默氏癥。最近出版的研究論文表明，通過(guò)喂養(yǎng)減少食物量的小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)它們大腦的損傷能減少。對(duì)熱量攝入量和人體神經(jīng)變性疾病的研究還沒(méi)有開(kāi)始，但有一些相關(guān)性研究顯示，相比于美國(guó)和加拿大，中國(guó)和日本由于攝入較少的熱量，因此相應(yīng)的阿爾茨海默氏癥的發(fā)病率也減少。加拿大的神經(jīng)生物技術(shù)公司在2000年上半年宣布了一個(gè)較為確切的產(chǎn)品memantine。該產(chǎn)品是一種非競(jìng)爭(zhēng)性N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸(簡(jiǎn)稱(chēng)NMDA)阻斷劑，在美國(guó)進(jìn)行了III期臨床試驗(yàn)，主要用于治療阿爾海默氏癥。5、老年性癡呆癥的市場(chǎng)發(fā)展前景2000年世界七大藥品市場(chǎng)表明，AD藥品市場(chǎng)己從卯年代中期的4億多美元增長(zhǎng)了近一倍，2001年全球AD市場(chǎng)價(jià)值已近12億美元；國(guó)外分析家預(yù)測(cè)在未來(lái)十年內(nèi)AD患者將會(huì)增加到20%左右，AD藥品市場(chǎng)的增長(zhǎng)速度將有較大幅度的上升。由于患者的不斷增多，AD治療藥物的市場(chǎng)銷(xiāo)售額也一直在穩(wěn)步增長(zhǎng)。90年代該類(lèi)藥物已成為暢銷(xiāo)藥物，1995年世界銷(xiāo)售額已達(dá)50億美元。21世紀(jì)初，該類(lèi)藥物的銷(xiāo)售額超過(guò)了排列在前三位的治療心血管病藥物、治療胃腸道病藥物和抗感染藥物市場(chǎng)的份額，其發(fā)展勢(shì)頭看好。目前，該類(lèi)疾病已越來(lái)越受到中國(guó)國(guó)家和社會(huì)的高度重視，而且由于該類(lèi)疾病類(lèi)似于糖尿病等富貴病，一樣需要長(zhǎng)期服用治療藥物，因此其用藥市場(chǎng)隨著人口老齡化而逐漸擴(kuò)大，市場(chǎng)前景看好?；诖?，為及時(shí)了解中國(guó)治療AD藥物的市場(chǎng)狀況，中國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所信息中心選取中國(guó)六個(gè)主要用藥城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)的百家抽樣醫(yī)院、60名醫(yī)生專(zhuān)家和120名消費(fèi)者，對(duì)中國(guó)國(guó)內(nèi)老年癡呆癥用藥市場(chǎng)(1999年及2000年)及其主要競(jìng)爭(zhēng)品種進(jìn)行了全面的市場(chǎng)調(diào)研活動(dòng)。(1)1999年2000年中國(guó)治療老年性癡呆藥物醫(yī)院用藥金額情況分析從1999年2000年六城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)抽樣醫(yī)院治療老年癡呆癥用藥金額構(gòu)成情況來(lái)看，2000年六城市抽樣醫(yī)院銷(xiāo)售總金額較1999年同比增長(zhǎng)28.49%。而在治療老年癡呆藥主要品種中，使用金額百分比較大的品種排名依次為吡拉西坦、銀杏葉制劑、氫化麥角堿、阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、石杉?jí)A甲、多奈哌齊、吡硫醇、長(zhǎng)春西汀、加蘭他敏、氯酯醒、艾地苯醌。其中前四位品種市場(chǎng)份額(金額百分比)較大。具體品種中，吡拉西坦的市場(chǎng)份額(金額百分比)2000年較1999年上升了8個(gè)百分點(diǎn)，仍居首位，金額增長(zhǎng)率達(dá)55.59%。銀杏葉制劑、氫化麥角堿保持較穩(wěn)定的市場(chǎng)份額，使用金額都保持一定的增長(zhǎng)。使用金額增長(zhǎng)較快的品種有石杉?jí)A甲、加蘭他敏，其中加蘭他敏增長(zhǎng)幅度最高。阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、長(zhǎng)春西汀和吡硫醇總體市場(chǎng)出現(xiàn)萎縮，而艾地苯醌基本退出市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)。多奈哌齊由于是較新的品種，在1999年未見(jiàn)銷(xiāo)售，但在2000年市場(chǎng)份額(使用金額百分比)占0.45%，顯示出一定的市場(chǎng)潛力。(2)1999年~2000年中國(guó)治療老年性癡呆藥物醫(yī)院用藥金額走勢(shì)分析從1999年2000年六城市老年癡呆用藥金額走勢(shì)情況來(lái)看，2000年整體用藥水平要明顯高于1999年整體用藥水平，出現(xiàn)上升趨勢(shì)。其中1999年用藥金額高峰期和2000年用藥金額高峰期均出現(xiàn)在二季度(2000年用藥量高峰期是第三季度)，表明在2000年二季度高價(jià)品種的使用量相對(duì)要高。從六城市用藥情況中可以反映出中國(guó)城市的一個(gè)用藥趨勢(shì)。(3)主要用藥城市醫(yī)院用藥情況分析從各品種在各城市的用藥金額排序情況來(lái)看，其銷(xiāo)售情況表現(xiàn)得較好的品種主要有銀杏葉制劑、吡拉西坦、氫化麥角堿和阿米三嗪/蘿巴新。其中銀杏葉制劑2000年在上海、廣州、杭州和成都地區(qū)排在第一位，在北京地區(qū)排名第二，南京地區(qū)排名第三，表現(xiàn)得相當(dāng)好，較1999年有所增長(zhǎng)，其幾個(gè)主打品牌達(dá)納康、銀杏天保、活血寧膠囊、百路達(dá)膠囊、天保寧、銀可絡(luò)的市場(chǎng)反應(yīng)有口皆碑；其次表現(xiàn)較好的則為吡拉西坦，該品2000年在北京和南京地區(qū)占據(jù)第一的位置，在其它幾個(gè)城市也是前三名之列，只有在杭州地區(qū)較弱(排名第5);氫化麥角堿總體情況排在第三位，不過(guò)2000年排名較1999年排名有所提高。氫化麥角堿在各城市的排名基本保持不變，并在個(gè)別城市如上海和成都地區(qū)排名上升，而在南京地區(qū)排名下降一個(gè)位置。(4)其它方面的市場(chǎng)評(píng)價(jià)隨著治療AD藥物臨床推廣的普及，AD已越來(lái)越受到社會(huì)和家庭的重視，從調(diào)查的醫(yī)生信息反饋來(lái)看，68%的醫(yī)生認(rèn)為社會(huì)大眾已經(jīng)開(kāi)始關(guān)心和重視AD，與此同時(shí)，8.16%的醫(yī)生認(rèn)為市場(chǎng)供給嚴(yán)重不足，63.2%的醫(yī)生認(rèn)為市場(chǎng)供給不足?？梢?jiàn)，AD用藥市場(chǎng)供給不足，市場(chǎng)仍有空間，有近八成醫(yī)生認(rèn)可市場(chǎng)前景較好。同樣，隨著近年來(lái)OTC市場(chǎng)的蓬勃發(fā)展，有相當(dāng)部份品種(口服劑型)也在零售藥店中進(jìn)行銷(xiāo)售，由于長(zhǎng)期服藥的特點(diǎn)，越來(lái)越多的患者選擇直接從藥店進(jìn)行購(gòu)藥治療。從中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所零售研究部對(duì)這類(lèi)藥品的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，銀杏葉制劑的市場(chǎng)份額(銷(xiāo)售金額百分比)約占市場(chǎng)的4成左右，中成藥較受零售市場(chǎng)的青睞，都可喜(阿米三嗪/蘿巴新)的市場(chǎng)份額約占3成左右，其余品種則占據(jù)余下的市場(chǎng)份額。從所調(diào)査的消費(fèi)者情況反映，有67.80%的消費(fèi)者是從醫(yī)院藥房獲得所需藥品的；而有27.97%的消費(fèi)者直接到藥店購(gòu)買(mǎi)；4.24%的病患者從所在單位門(mén)診部獲得；還有0.85%的病患者到批發(fā)商處購(gòu)買(mǎi)。這表明，目前來(lái)說(shuō)，醫(yī)院雖然是老年人用藥的主要銷(xiāo)售渠道，但也可以看出，零售渠道也占有不可忽視的比例。AD的治療占世界藥品市場(chǎng)的第七位，到2005年底價(jià)值61億美元。而目前抗AD藥物主要是緩解癥狀，并不遏制病情的發(fā)展。因此，研究出一種有效的治療方法來(lái)阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過(guò)程是很必要的，所以本發(fā)明認(rèn)為研制用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)和治療AD等方面的產(chǎn)品特別是藥物能夠具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。因此結(jié)合中國(guó)的傳統(tǒng)中草藥，從中發(fā)掘有效、低毒、價(jià)廉的治療血管性癡呆和老年性癡呆的藥物，具有非常重要的意義。經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有虎杖苷(polydatin,piceid)以及其組合物在直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆及其直接相關(guān)疾病方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)了一種中藥虎杖提取物抗血管性癡呆和抗老年性癡呆的新作用，即該提取物用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說(shuō)，本發(fā)明通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等研究和理論探索，意在明確一種虎杖提取物虎杖苷在抗血管性癡呆和抗老年性癡呆應(yīng)用方面的活性，即本發(fā)明涉及一種虎杖提取物虎杖苷的新用途。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有上述虎杖提取物虎杖苷的藥物組合物作為制備抗癡呆產(chǎn)品的應(yīng)用。在該組合物中，本發(fā)明的虎杖苷占10%~90%(重量百分比)，優(yōu)選占50%~90%(重量百分比)。(一)本發(fā)明所采用的定義本發(fā)明所述的抗癡呆產(chǎn)品是包括抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品；本發(fā)明所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。本發(fā)明所述的抗老年性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究老年性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。本發(fā)明所述的抗癡呆產(chǎn)品均是包括醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種，是包括藥物、試劑或食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。本發(fā)明所述的虎杖苷是指白藜蘆醇-3-0-p-D-葡萄糖苷(piceid，polydatin)?；⒄溶帐穷A(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆的活性成分，其使用方式是包括單獨(dú)使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用等中的一種，優(yōu)選單獨(dú)使用，均能夠用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品。供試樣品均是采取常規(guī)的制備方法獲得，所得到的虎杖粗提物中的虎杖苷含量一般<60%，但是通過(guò)對(duì)虎杖粗提物進(jìn)行純化，能夠得到純化后的虎杖提取物虎杖苷的純度能夠在95%以上，即本發(fā)明所定義的虎杖提取物。也就是說(shuō)，采用虎杖提取物的主要成分虎杖苷為原料，或者是直接采用含有虎杖苷的虎杖藥材為原料，或者直接采用含有虎杖苷的虎杖粗提物為原料，都能夠直接或間接用于制備抗癡呆產(chǎn)品。虎杖苷優(yōu)選以基本純的形式使用即本發(fā)明所定義的虎杖提取物，如虎杖苷的純度》95%。(二)技術(shù)構(gòu)思自主開(kāi)發(fā)創(chuàng)新藥物是中國(guó)目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，用中草藥預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此從中藥中尋找有效的活性成分或發(fā)現(xiàn)其新的用途均是有效的快捷途徑，也是中國(guó)快捷創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在。發(fā)明人通過(guò)對(duì)單味虎杖藥材的提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，篩選并證明該中藥提取物虎杖苷的活性和用途，發(fā)明人從而推測(cè)虎杖在預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆等方面活性的臨床藥效，也應(yīng)主要是通過(guò)活性部位該虎杖提取物特別是虎杖苷的藥效來(lái)發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實(shí)了該虎杖提取物特別是虎杖苷具有顯著的藥理活性。發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究的最新發(fā)現(xiàn)是虎杖苷能夠抵抗e—淀粉樣蛋白致腦細(xì)胞損傷的作用，能夠抵抗過(guò)氧化氫致腦細(xì)胞損傷作用，提高東茛菪堿致癡呆小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶功能，提高Ae致癡呆小鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力，抑制腦缺血再灌注小鼠模型腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化，增強(qiáng)腦缺血再灌注小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性和減低腦缺血再灌注小鼠模型腦片細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。癡呆特別是血管性癡呆和老年性癡呆嚴(yán)重影響中國(guó)人口的健康和生存質(zhì)量，研制預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆等方面的產(chǎn)品，特別是藥物、診斷試劑和保健品等，具有顯著的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益。(三)虎杖提取物虎杖苷的藥理活性本發(fā)明對(duì)虎杖提取物虎杖苷在預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆等方面的活性進(jìn)行了多方面的試驗(yàn)?，F(xiàn)有研究表明血管性癡呆的主要癥狀為①腦組織病理形態(tài)改變；②記憶力下降。發(fā)明人的研究表明虎杖苷(過(guò)去也稱(chēng)虎杖甙)能明顯改善血管性癡呆模型大鼠大腦的缺血性病理?yè)p傷、對(duì)癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能具有較強(qiáng)的保護(hù)和促進(jìn)作用。因此，虎杖苷及其組合物能夠用于制備抗癡呆產(chǎn)品。虎杖提取物虎杖苷在血管性癡呆、老年性癡呆預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究活性方面的作用及其體外試驗(yàn)本發(fā)明通過(guò)如下實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明虎杖甙具有防治血管性癡呆、老年性癡呆的作用。1、對(duì)血管性缺血損傷(多發(fā)性局部栓塞法造模)形成的癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶保護(hù)作用(參見(jiàn)張均田主編《現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》上冊(cè)第1243頁(yè))學(xué)習(xí)記憶是大腦的高級(jí)功能，是構(gòu)成人腦最高機(jī)能——智能的要素。學(xué)習(xí)記憶障礙是MID的早發(fā)癥狀之一。所以把學(xué)習(xí)記憶的改善作為評(píng)價(jià)智能提高的一個(gè)主要標(biāo)準(zhǔn)。(1)動(dòng)物Sprague-Dawley大鼠，80只，雄性，體重250—300g，由中國(guó)科學(xué)院上海分院動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(滬)2003—0003。(2)儀器與試劑Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)(上海吉量軟件科技有限公司和"DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)")；金納多(德國(guó)Schwabe藥廠)；羧甲基纖維素鈉、水合氯醛為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?3)配制方法本發(fā)明藥物及金納多在臨用前用0.5%羧甲基纖維素鈉碾磨均勻，配成所需濃度。(4)動(dòng)物模型的制備和分組-本法是取同種大鼠左心室采血，無(wú)菌37。C恒溫干燥成血凝塊，研碎后經(jīng)200—300目篩孔過(guò)篩備用，應(yīng)用時(shí)用6。/。右旋糖苷葡萄糖液每lmL加血凝塊lmg制成混懸液，顯微鏡下測(cè)量直徑為50100pm。然后將實(shí)驗(yàn)大鼠用水合氯醛腹腔麻醉(35mg/100g)，頸部正中切開(kāi)暴露分離右側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。臨時(shí)夾閉頸外動(dòng)脈，從頸總動(dòng)脈推注栓子右旋糖苷混懸液，在注入栓子的同時(shí)開(kāi)放頸總動(dòng)脈，利用頸總動(dòng)脈的血流將栓子通過(guò)頸內(nèi)動(dòng)脈送入顱內(nèi)至大腦各動(dòng)脈，造成多灶性腦梗死。第二天將造模成功的動(dòng)物分組，本發(fā)明藥物組分為高劑量組(100mg/kg)、低劑量組(50mg/kg)，每組16只。用本發(fā)明藥液分別灌胃給藥，每鼠每天10ml/kg，陽(yáng)性藥對(duì)照組每鼠每天灌胃金納多混懸液(2.5mg/ml)10ml/kg，模型對(duì)照組及假手術(shù)組每鼠每天給予0.5%羧甲基纖維素鈉10ml/kg，均連續(xù)2周。(5)術(shù)后10天，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)①實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一天，先讓大鼠在不含有平臺(tái)的水池中自由游泳2min，以熟悉環(huán)境。②定位航行實(shí)驗(yàn)連續(xù)訓(xùn)練4天，每天4次。每一次均隨機(jī)順序從不同等分水池的4個(gè)起點(diǎn)將大鼠投入水池中，放入時(shí)使大鼠面向池壁，記錄大鼠從入水到找到并爬上平臺(tái)的時(shí)間，這個(gè)時(shí)間稱(chēng)為逃避潛伏期。讓其在平臺(tái)上休息IO秒后再行下一次檢測(cè)。如果在120秒內(nèi)大鼠仍未找到平臺(tái)，則將其引導(dǎo)到平臺(tái)，潛伏期記為最高分120秒。每天4次潛伏期的算術(shù)均數(shù)作為這一時(shí)間段的成績(jī)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。③空間探索實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練第5天，在定向游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即將平臺(tái)撤掉，仍然隨機(jī)選取4個(gè)入水點(diǎn)中的一個(gè)放入大鼠，計(jì)錄大鼠在原平臺(tái)所在象限中的停留時(shí)間。表l、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物游泳潛伏期(秒)分組給藥劑量第l天第2天第3天第4天假手術(shù)組Omg/kg79.4±6.845.2±3.124.7土4.4**12.2±4.5****模型組Omg/kg84.7±6.566.1±6.158.0±5.248.9±8.1低劑量組50mg/kg78.4±5.959.4±6.237.0±4.1*21.1±3.4**高劑量組100mg/kg79.0±7.557.4±8.336.6±5.3*25.2±2.5*金納多組25mg/kg83.1±8.746.5±6.732.0±5.4*22.3±6.6*與模型組比較，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.005;****P<0.001表2、空間探索實(shí)驗(yàn)(訓(xùn)練第5天)分組給藥劑量平臺(tái)象限停留時(shí)間(秒)穿越平臺(tái)次數(shù)一假手術(shù)組Omg/kg55.4±4.0**5.2±1.2**模型組Omg/kg28.3土2.51.4±0.6低劑量組50mg/kg48.9±7.2*3.0±0.7*高劑量組100mg/kg50.6±2.1**3.5±0.6**金納多組25mg/kg_40,1±3.3_3.1±1.0*_~與模型組比較，PO.05;**P<0.01;(6)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表1及表2)。由表中可見(jiàn)Morris水迷宮游泳訓(xùn)練后，藥物各劑量組的游泳潛伏期較模型組顯著降低(P<0.05);在空間探索實(shí)驗(yàn)中，藥物組動(dòng)物在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間明顯多于模型組(PO.05)。上述結(jié)果表明，虎杖甙對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能具有保護(hù)作用。(7)形態(tài)學(xué)檢査術(shù)后14天，將大鼠斷頭處死，迅速分離取出前腦皮層、海馬，于中性福爾馬林液中固定，切片做HE染色。除假手術(shù)組外，各組均見(jiàn)不同程度的皮質(zhì)下各區(qū)域片狀腦實(shí)質(zhì)軟化壞死灶，范圍各組不等。①假手術(shù)組中樞神經(jīng)系統(tǒng)各部均未見(jiàn)明顯病變，大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞核未見(jiàn)明顯異常，染色質(zhì)分布均勻，血管內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)異常。海馬區(qū)錐體細(xì)胞核未見(jiàn)明顯異常，染色質(zhì)分布均勻，血管內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)異常。②模型組大腦皮質(zhì)實(shí)質(zhì)區(qū)片狀軟化灶，部分已液化，并形成不整形囊腔，范圍廣，大量神經(jīng)元空泡樣變，核膜變厚，染色體減少或消失，有的神經(jīng)細(xì)胞腫脹變性，核膜不清。血管內(nèi)皮腫脹現(xiàn)象。海馬區(qū)多處神經(jīng)細(xì)胞空泡樣變，核膜變厚，染色體減少或消失，有的神經(jīng)細(xì)胞腫脹變性，核膜不清。③虎杖甙低劑量組大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞染色質(zhì)分布不甚均勻，但軸突未見(jiàn)明顯異常，少量神經(jīng)細(xì)胞空泡樣變，血管內(nèi)皮輕度腫脹。海馬有范圍較小的軟化灶體液化。④虎杖甙高劑量組大腦皮質(zhì)有片狀軟化灶，范圍較大。海馬周?chē)行≡钚攒浕?伴有輕度鈣化，屬壞死后反應(yīng))。⑤金納多組大腦皮質(zhì)見(jiàn)有片狀軟化灶，但范圍較小。海馬錐體細(xì)胞染色質(zhì)分布均勻，軸突明顯，可見(jiàn)少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞核固縮，血管內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹。兩劑量給藥組及陽(yáng)性藥金納多組與模型組相比缺血性損傷的程度輕、范圍小以上試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明虎杖甙對(duì)血管性癡呆大鼠缺血性損傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用，改善模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。因此，虎杖甙可用于制備預(yù)防和治療血管性癡呆疾病的藥物。2、虎杖苷對(duì)抗P-淀粉樣蛋白致癡呆大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦夏晷园V呆一個(gè)特征病理改變是大腦皮層和海馬出現(xiàn)由于P-淀粉樣蛋白(Beta-AmyloidProtein,簡(jiǎn)稱(chēng)AP)沉積而形成的老年斑，越來(lái)越多的證據(jù)表明AP在AD的發(fā)生、發(fā)展中起到主導(dǎo)的作用，AP的神經(jīng)毒性涉及到復(fù)雜的分子機(jī)制，主要包括破壞細(xì)胞內(nèi)的鈣離子穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)自由基的形成，降低K離子通道的功能，增強(qiáng)致炎細(xì)胞因子引起的炎癥反應(yīng)等。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯^察虎杖苷對(duì)Ae致癡呆大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力的影響。(2)實(shí)驗(yàn)方法雄性Sprague-Dawley大鼠，體重250—300g，麻醉后在顱頂部正中切開(kāi)皮膚，暴露顱骨，參照《大鼠腦立體定位圖譜》(包新民，舒斯云.大鼠腦立體定位圖譜.第1版，北京人民衛(wèi)生出版社，1991,44-45.)，選擇雙側(cè)海馬CA1區(qū)為注射靶區(qū)，用牙科鉆鉆開(kāi)顱骨，用微量進(jìn)樣器將聚集態(tài)的Aew()緩慢注入(共5ial，l^il/min)，留針10分鐘以保證溶液充分?jǐn)U散，然后緩慢撤針，縫合傷口。生理鹽水組注入相同體積的生理鹽水。第二天將造模成功的動(dòng)物分組，本發(fā)明藥物組分為高劑量組(100mg/kg)、低劑量組(50mg/kg)，每組16只。用虎杖苷藥液分別灌胃給藥，每鼠每天10ml/kg，陽(yáng)性藥對(duì)照組每鼠每天灌胃金納多混懸液(2.5mg/ml)10ml/kg，模型對(duì)照組及假手術(shù)組每鼠每天給予0.5%羧甲基纖維素鈉10ml/kg，均連續(xù)2周。術(shù)后10天，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)①實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一天，先讓大鼠在不含有平臺(tái)的水池中自由游泳2min,以熟悉環(huán)境。②定位航行實(shí)驗(yàn)連續(xù)訓(xùn)練4天，每天4次。每一次均隨機(jī)順序從不同等分水池的4個(gè)起點(diǎn)將大鼠投入水池中，放入時(shí)使大鼠面向池壁，記錄大鼠從入水到找到并爬上平臺(tái)的時(shí)間，這個(gè)時(shí)間稱(chēng)為逃避潛伏期。讓其在平臺(tái)上休息IO秒后再行下一次檢測(cè)。如果在120秒內(nèi)大鼠仍未找到平臺(tái)，則將其引導(dǎo)到平臺(tái)，潛伏期記為最高分120秒。每天4次潛伏期的算術(shù)均數(shù)作為這一時(shí)間段的成績(jī)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。表3、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物游泳潛伏期(秒)分組給藥劑量第l天第2天第3天第4天生理鹽水組0mg/kg77.4±6.742.2±4.624.1±6.0**15.2+4.****模型組Omg/kg83.6±6.261.1±5.956.3±6.348.4±8.4低劑量組50mg/kg77.8±6.457.8±6.242.0±4.8*33.1±4.3**高劑量組100mg/kg78.9±7.555.3±8.139.5±6.2*30.5±7.6*金納多組25mg/kg79.1±8.957.5±6.940.0±6.4*30.3±8.6*與模型組比較，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.005;****P<0.001表4、空間探索實(shí)驗(yàn)(訓(xùn)練第5天)分組給藥劑量平臺(tái)象限停留吋間(秒)穿越平臺(tái)次數(shù)'生理鹽水組Omg/kg56.6±4.6**5.5±1.3**模型組Omg/kg34.5±5.81.5±0.7低劑量組50mg/kg49.8±7.7*2.9±0.6*高劑量組100mg/kg46.9±3.1**3.3±0.5**金納多組_25mg/kg_46.1±3.9**_3.3±0.9*_與模型組比較，PO.05;**P<0.01;③空間探索實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練第5天，在定向游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即將平臺(tái)撤掉，仍然隨機(jī)選取4個(gè)入水點(diǎn)中的一個(gè)放入大鼠，計(jì)錄大鼠在原平臺(tái)所在象限中的停留時(shí)間。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表3及表4)。由表中可見(jiàn)Morris水迷宮游泳訓(xùn)練后，藥物各劑量組的游泳潛伏期較模型組顯著降低(PO.05);在空間探索實(shí)驗(yàn)中，藥物組動(dòng)物在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間明顯多于模型組(P<0.05)。上述結(jié)果表明，虎杖甙可以改善AP致癡呆大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力。2、虎杖苷抵抗過(guò)氧化氫致神經(jīng)細(xì)胞損傷作用(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谘苄园V呆和血管性癡呆的發(fā)展過(guò)程中，自由基與活性氧起著很大的促進(jìn)作用。腦缺血可引起自由基及活性氧增高，自由基及活性氧進(jìn)而攻擊神經(jīng)細(xì)胞，造成細(xì)胞死亡，引起一系列病變，引發(fā)長(zhǎng)期損傷。這在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床上可能影響認(rèn)知功能，發(fā)展為癡呆。本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察虎杖苷對(duì)活性氧過(guò)氧化氫(H202)致神經(jīng)細(xì)胞損傷具有抵抗作用。(2)實(shí)驗(yàn)方法使用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系(形態(tài)與功能與神經(jīng)元相似)，傳代培養(yǎng)?；⒄溶张c祌經(jīng)細(xì)胞預(yù)孵育12小時(shí)或24小時(shí)，換培養(yǎng)液，加H202與細(xì)胞孵育2小時(shí)。取上清液測(cè)定乳酸脫氫酶(簡(jiǎn)稱(chēng)LDH)活性，用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率。表5、虎杖苷預(yù)孵育12小時(shí)對(duì)H202致SK-N-SH神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響組別NLDH漏出率(n/0)MTT(OD550nm)正常對(duì)照組62.50±0.42*0.5866±0.0209*H2O2模型組(500nM)381.22±2.290.0413±0.0100金納多組(50nM)349.91±6.01*0.2230±0.0269*虎杖苷5nM+H202363.40±2.45*0.1096±0細(xì)4*25jxM+H202362.31±2.61*0.1317±0.032〗*50岸+H202351.98±5.89*0.1439±0.0198*100一+H202352.01±6.21*0.2032±0惡1*200幽+H202346.22±2.23*0.2486±0.0291*400)iM+H202353.87±1.96*0.2165±0.0216*M±SD;*P<0.05，與^02模型組相比較。M±SD;*P<0.05，與H202模型組相比較。表6、虎杖苷預(yù)孵育24小時(shí)對(duì)H202致SK-N-SH神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響組別NLDH漏出率("/。)MTT(OD550nm)正常對(duì)照組63.22±0.49*0.8766±0.0463*H2O2模型組(500^M)377.56±6.410.1455±0.0478金納多組(50pM)38.91±5.23*0.5030±0.0256*虎杖苷5岸+恥2360.04±5.69*0.0711±0.0212*25|iM+H202333.53±0.79*0.1512±0.1742*50岸+H202318.72±4.32*0.2311±0細(xì)8*100|iM+H20238.56±2.01*0.5236±0.0211*200岸+H20236.16±1.10*0.6812±0,0440*400pM+H2。2361，5.02*0.2071±0.0380*M±SD;*P<0.05，與^02模型組相比較。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在H202致神經(jīng)細(xì)胞損傷模型上，發(fā)現(xiàn)虎杖苷可明顯拮抗H202引起的細(xì)胞存活率下降及LDH漏出增多，減低H202的神經(jīng)毒性，并且呈劑量依賴(lài)關(guān)系，提示虎杖苷具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞作用，即對(duì)血管性癡呆具有防治作用(見(jiàn)表5，表6)。3、虎杖苷提高東莨菪堿致癡呆小鼠模型學(xué)習(xí)記憶功能(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦夏晷园V呆以基底前腦膽堿能神經(jīng)元丟失最為嚴(yán)重，造成乙酰膽堿(acetylcholine,簡(jiǎn)稱(chēng)ACh)分泌不足。血管性癡呆和老年性癡呆有許多相似的病理學(xué)和癥狀特征，包括膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)ACh水平降低和與其相關(guān)的認(rèn)知障礙。東莨菪堿是乙酰膽堿酯酶M受體阻斷劑，能夠拮抗中樞神經(jīng)的ACh，導(dǎo)致記憶力下降，可以模擬ACh分泌不足的結(jié)果，是比較有效的癡呆動(dòng)物模型。(2)實(shí)驗(yàn)方法①M(fèi)orris水迷宮試驗(yàn)雄性昆明小鼠50只，體重22-28克，動(dòng)物隨機(jī)分5組，分別為正常對(duì)照組、模型組、虎杖苷低劑量組(50mg/kg)和高劑量組(100mg/kg)。實(shí)驗(yàn)前各組連續(xù)灌胃給藥10天后造模。試驗(yàn)當(dāng)天給藥1小時(shí)后，腹腔注射氫溴酸東莨菪堿注射液lmg/kg，對(duì)照組注射等量的生理鹽水。15分鐘后進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)，一天兩次，連續(xù)三天。數(shù)據(jù)處理均由圖像自動(dòng)監(jiān)視和處理系統(tǒng)完成。②避暗試驗(yàn)小鼠給藥與注射東莨菪堿方法同上，東莨菪堿劑量為20mg/kg。注射15分鐘后進(jìn)行避暗試驗(yàn)。本方法為被動(dòng)回避試驗(yàn)，小鼠有喜歡黑暗的習(xí)性，進(jìn)入暗室則遭電擊。第2、3、4天進(jìn)入暗室的潛伏期越長(zhǎng)、進(jìn)入次數(shù)越少，表明學(xué)習(xí)記憶功能越好。表7、虎杖苷對(duì)東茛菪堿致癡呆小鼠模型水迷宮游出時(shí)間及游泳距離的影響組別N游出時(shí)間(秒)游泳距離(cm)正常對(duì)照組1070.9±46.9*1151±840*模型組10跳2士39.2182±873虎杖苷50mg/kg1084.5±46.01522±1012虎杖苷100mg/kg1077.1±45.8*1377±923*M±SD;*P<0.05，與模型組相比較。表8、虎杖苷東莨菪堿致癡呆小鼠模型避暗試驗(yàn)潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)的影響組別N潛伏期(秒)錯(cuò)誤次數(shù)正常對(duì)照組10320士50.80.00±0.00*模型組10251.8±77.10.80±1.32虎杖苷50mg/kg10279.2±56,10.25士1,13虎杖苷100mg/kg10300.6±45.6*0.00±0.00*M±SD;*P<0.05,與模型組相比較。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)虎杖苷高劑量組組可以明顯縮短小鼠游出時(shí)間和游泳距離(表7)，表明虎杖苷可以改善改善東莨菪堿模型小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。避暗試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)虎杖苷高劑量組可明顯延長(zhǎng)潛伏期，減少進(jìn)入暗室的次數(shù)(表8)，表明虎杖苷可以改善小鼠被動(dòng)回避學(xué)習(xí)記憶功能，其機(jī)理與ACh能神經(jīng)功能增強(qiáng)有關(guān)。4、虎杖苷抑制腦缺血再灌注小鼠模型腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜毖竽X內(nèi)自由基的產(chǎn)生、氧化應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷是老年性癡呆和血管性癡呆引起認(rèn)知損害的一個(gè)重要因素。腦缺血后產(chǎn)生大量自由基的產(chǎn)生而引起的脂質(zhì)過(guò)氧和氧化應(yīng)激，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化。過(guò)氧化脂質(zhì)是生物膜和細(xì)胞中磷質(zhì)所含多元不飽和脂肪酸被自由基損傷、氧化而形成的過(guò)氧化產(chǎn)物，可引起膜損傷、酶抑制、溶酶體釋放、蛋白交聯(lián)、DNA和RNA結(jié)構(gòu)破壞等反應(yīng)，從而破壞細(xì)胞正常的生理功能，最終可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察虎杖苷對(duì)腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(簡(jiǎn)稱(chēng)MDA)含量增高的影響。(2)實(shí)驗(yàn)方法昆明小鼠，雄性，體重22~28克，隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)前各組連續(xù)灌胃給藥7天，對(duì)照組(假手術(shù)組)及缺血模型組分別給予自來(lái)水。手術(shù)當(dāng)日空腹給藥后lh，于小鼠麻醉后，用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈15分鐘，再灌注15分鐘后迅速斷頭取腦，去掉小腦。腦組織稱(chēng)重，1:10加入0.2M磷酸鹽緩沖液勻漿，3000轉(zhuǎn)/分離心IO分鐘，取上清0.5ml，用硫代巴比妥酸(簡(jiǎn)稱(chēng)TAB)法測(cè)定腦組織中MDA含量。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果虎杖苷灌服可降低急性腦缺血再灌注小鼠腦組織MDA含量(見(jiàn)表9)，表明該藥可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，其機(jī)理可能為減少自由基生成或增強(qiáng)自由基清除。虎杖苷的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有利于防治血管性癡呆和老年性癡呆。表9、虎杖苷對(duì)急性腦缺血再灌注小鼠腦組織MDA含量的影響組別NMDA(nmol/mg蛋白)對(duì)照組(假手術(shù)組)101.081±0.148*模型組(缺血再灌)10U86±0.192金納多25mg/kg+缺血再灌101.091±0.116*虎杖苷30mg/kg+缺血再灌101.169±0.156虎杖苷100mg/kg+缺血再灌101細(xì)±0.15**虎杖苷300mg/kg+缺血再灌101.021±0.139**M士SD;*P<0.05,**P<0.01，與缺血模型組相比較。5、增強(qiáng)腦缺血再灌注小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康某趸锲缁?SOD)對(duì)機(jī)體的氧化與杭氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。體內(nèi)過(guò)多的超氧陰離子可引起脂質(zhì)氧化，損害細(xì)胞，與多種疾病以及衰老等病理過(guò)程相關(guān)。此酶可催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，使之轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫和氧，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察虎杖苷對(duì)腦缺血再灌注小鼠模型腦組織SOD活性降低的影響，探討虎杖苷抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的機(jī)理。(2)實(shí)驗(yàn)方法昆明小鼠，雄性，體重2228克，隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)前各組連續(xù)灌胃給藥7天，假手術(shù)組及缺血模型組分別給予自來(lái)水。手術(shù)當(dāng)日空腹給藥后lh，于小鼠麻醉后，用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈15分鐘，再灌注15分鐘后迅速斷頭取腦，去掉小腦。腦組織稱(chēng)重，1:10加入0.2M磷酸鹽緩沖液勻漿，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清O.lml，用亞稍酸鹽法測(cè)定腦組織中SOD活性。(3)實(shí)臉結(jié)果虎杖苷灌胃口服可增高急性腦缺血再灌注小鼠腦組織SOD活性(見(jiàn)表IO)，表明該藥具有增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的作用，這可能是其抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的機(jī)理。虎杖苷促進(jìn)內(nèi)源性抗氧化酶活性的作用有利于防治血管性癡呆和老年性癡呆。表10、虎杖苷對(duì)急性腦缺血再灌注小鼠腦組織SOD活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>M±SD;*P<0.05，**P<0.01，與缺血模型組相比較。6、減低腦缺血再灌注小鼠模型腦片細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谘苄园V呆和老年性癡呆的發(fā)病機(jī)理中，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高、鈣超載起重要作用。腦缺血再灌注后發(fā)生一系列變化，包括鈣離子尤其是神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的異常增高、鈣超載，在缺血性腦損傷起重要作用，最終可使得神經(jīng)元細(xì)胞死亡。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察虎杖苷對(duì)模型動(dòng)物腦片細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高的影響。(2)實(shí)驗(yàn)方法雄性昆明小鼠，體重2228克，動(dòng)物隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)前各組連續(xù)灌胃給藥7天，假手術(shù)組及缺血模型組分別給予自來(lái)水。手術(shù)當(dāng)日空腹給藥后lh，在小鼠麻醉后，用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈15分鐘，再灌注15分鐘后迅速斷頭并取出全腦，迅速浸入4°C通有95%的C02和5%02的人工腦脊液(artificialcerebrospinalfluidsolution,簡(jiǎn)稱(chēng)ACSF，ACSF酉己方為(腿ol/L):NaC1124，KC13.3,KH2P041.2，NaHC0326，CaCl22,5，MgS042.4，葡萄糖10)，在振動(dòng)切片機(jī)上切出腦片，厚度400pm，放入C02培養(yǎng)箱中，37。C孵育30min，加入5uM的Fluo-3AM500ul，在(302培養(yǎng)箱中負(fù)載lh后，ACSF沖洗數(shù)次，在激光掃描共聚焦顯微鏡上進(jìn)行光學(xué)切片，觀察熒光強(qiáng)度。激光掃描共聚焦顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscope,簡(jiǎn)稱(chēng)LSCM)可用于對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)(生物膜、細(xì)胞器、染色體等)及分子(核酸、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等)、離子(Ca2+，K+等)進(jìn)行定位、定量、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)的觀測(cè)。光學(xué)切片是激光掃描共聚焦顯微鏡的特色之一，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)離體活腦片進(jìn)行連續(xù)無(wú)損切割，光切可以獲得樣品表面的和深層的信息，通過(guò)三維重建技術(shù)，能夠獲得三維圖象和立體結(jié)構(gòu)信息。鈣熒光指示劑Fluo-3AM本身無(wú)熒光，但它具有能與活細(xì)胞內(nèi)[C^+]特異性結(jié)合后發(fā)出熒光的特性，利用激光掃描共聚焦顯微鏡測(cè)定熒光強(qiáng)度，可以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離鈣的水平。圖象處理利用LaserSharp圖象處理系統(tǒng)，測(cè)定左右海馬區(qū)、皮層區(qū)的面積或體積和總的榮光強(qiáng)度，以單位面積或單位體積熒光強(qiáng)度及熒光強(qiáng)度分布中值(即Mean，系統(tǒng)給出)為指標(biāo)，觀察海馬、皮層的細(xì)胞內(nèi)游離鈣的水平。統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)表示，組間差異的顯著性用f檢驗(yàn)。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果虎杖苷各劑量組灌胃口服皆可降低腦缺血再灌注小鼠模型大腦皮層和海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度(見(jiàn)表11)，這對(duì)于保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、防治血管性癡呆和老年性癡呆具有重要意義。表11、對(duì)腦缺血再灌注小鼠模型神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)離子的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>M±SD;*P<0.05,**P<0.0，與缺血模型組相比較。(四)虎杖提取物虎杖苷的提取方法舉例說(shuō)明。本發(fā)明以中國(guó)江蘇所產(chǎn)的虎杖為原料，采用溶劑提取和多種層析方法，分離得到此種天然化合物。采用紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜等方法，確定了該化合物的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明所述的虎杖提取物虎杖苷能夠通過(guò)下述方法制備得到本發(fā)明所說(shuō)的虎杖苷的制備方法包括如下步驟(1)提取取虎杖原料若干，提取，得提取液，即虎杖粗提物；(2)分離純化將該粗提物分離純化，即得虎杖提取物虎杖苷。所述的提取方法包括溶劑提取法等本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法。上文所述的溶劑提取法的提取方法是本領(lǐng)域的常規(guī)提取方法，也就是說(shuō)包括常用的超聲提取法、浸漬提取法、滲漉提取法、煎煮提取法、加熱回流提取法或連續(xù)回流提取法等中的一種或多種，優(yōu)選加熱回流提取法或滲漉提取法；提取次數(shù)可以是一次或者是多次。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。各種提取方法包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料，均可以參見(jiàn)有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等。上文所述的溶劑提取法所使用的提取溶劑是本領(lǐng)域的常規(guī)提取溶劑，也就是說(shuō)包括常見(jiàn)的水、親水性的有機(jī)溶劑或親脂性的有機(jī)溶劑等三類(lèi)提取溶劑的一種或多種；所述的水是包括水、酸水或堿水等中的一種；所述的親水性的有機(jī)溶劑是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶劑，包括乙醇、乙醇水溶液、甲醇或丙酮等中的一種或多種，優(yōu)選乙醇或不同濃度的乙醇水溶液等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選不同濃度的乙醇水溶液；所述的親脂性的有機(jī)溶劑是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，包括石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙垸等中的一種或多種，優(yōu)選石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙垸等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲垸等中的一種或多種。上述提取方法所得到的虎杖粗提物，需進(jìn)一步分離純化。所述的分離純化方法是本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法，包括溶劑分離法，溶劑萃取法(包括萃取法、逆流連續(xù)萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一種或多種)，大孔吸附樹(shù)脂法，沉淀法，鹽析法，柱層析法或結(jié)晶與重結(jié)晶和分步結(jié)晶法等中的一種或多種；這些方法均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等查閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。為了使產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定，便于使用和保存，還可增加一個(gè)優(yōu)化的歩驟，即步驟三(3)干燥。所述的干燥方法是本領(lǐng)域公知的可以使用的方法，包括常壓干燥法如經(jīng)烘箱烘干、減壓干燥法、真空干燥法、噴霧干燥法、冷凍干燥法、遠(yuǎn)紅外加熱干燥法或微波干燥法等中的一種或多種。在具體實(shí)施時(shí)，需要根據(jù)現(xiàn)有的資金、技術(shù)和有關(guān)的要求，采用其中合適的方法，并選取合適的條件等必要的措施以達(dá)到預(yù)期的目標(biāo)。而這些方法也均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，都是很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等査閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。(五)虎杖提取物虎杖苷的用途1、概述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。通過(guò)藥理活性篩選證明，虎杖提取物為其預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的活性部位。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，虎杖提取物虎杖苷體外能夠顯著延緩血管性癡呆癥和老年性癡呆癥的發(fā)展。已完成的急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠灌胃給藥對(duì)該活性部位的最大耐受量超過(guò)1.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的200倍以上，表明該有效部位安全可靠，解決了中藥復(fù)方中成分復(fù)雜、有效成分含量低且含有有毒成分的問(wèn)題。綜上所述，發(fā)明人對(duì)虎杖提取物虎杖苷進(jìn)行了理論探索，經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究特別是長(zhǎng)期的藥理學(xué)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所述及的虎杖提取物有顯著的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的活性。因此，虎杖提取物及其組合物可用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品，優(yōu)選以本發(fā)明虎杖提取物為原料制備而成的藥物。2、虎杖提取物虎杖苷及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明虎杖提取物虎杖苷可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑或食品等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發(fā)明所述的虎杖提取物虎杖苷能夠單獨(dú)使用，例如以活性部位、其衍生物或藥用鹽的形式應(yīng)用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無(wú)論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解虎杖苷的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類(lèi)用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們?cè)鰪?qiáng)了該虎杖提取物的有效期或效力。從具體的分類(lèi)上看，所說(shuō)的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括潤(rùn)滑劑，如滑石粉、聚乙二醇或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉、糊精或乳糖等中的一種或多種；粘合劑，如預(yù)膠化淀粉、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯垸酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如氯化鈉、葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；pH調(diào)節(jié)劑，如鹽酸、氫氧化鈉等酸或堿中的一種或多種；溶劑，如水、緩沖液、乙醇或丙二醇等中的一種或多種等；抗氧劑和絡(luò)合劑，如亞硫酸鈉、EDTA等中的一種或多種；表面活性劑，如季銨化合物、十六垸醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；高分子骨架劑，如環(huán)糊精、聚乙二醇、泊洛沙姆等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑、防腐劑或甜味劑等中的一種或多種。例如，將活性組分虎杖苷溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有增溶劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚維酮、環(huán)糊精、泊洛沙姆、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，鹽酸普魯卡因或利多卡因等中的一種或多種)等。本發(fā)明所述及的虎杖提取物還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類(lèi)似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明虎杖提取物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明虎杖提取物和藥學(xué)上可接受的載體?；⒄忍崛∥锏慕M合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說(shuō)的藥物組合物包括治療有效量的虎杖提取物為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明所述的虎杖苷或其藥物組合物能夠可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成任何一種適合于實(shí)驗(yàn)、研究或臨床上應(yīng)用的劑型，包括固體制劑如膠囊、片劑、顆粒制劑等，液體制劑如口服液或者注射劑等。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療或科學(xué)研究。藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.5%~99%的活性成分虎杖提取物，進(jìn)一步優(yōu)選含有重量比為1%~95%的活性成分虎杖提取物虎杖苷，最優(yōu)選含有重量比為5%~90%的活性成分虎杖提取物虎杖苷。虎杖提取物的藥物組合物一般必須無(wú)菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過(guò)將所需量的該虎杖提取物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過(guò)濾制備無(wú)菌注射液。一般而言，通過(guò)將該虎杖提取物加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無(wú)菌溶媒中制備分散液。在用于制備無(wú)菌注射液的無(wú)菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過(guò)諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過(guò)保持所需顆粒大小和通過(guò)使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。該組合物中可包括延遲吸收的藥劑，例如單硬脂酸鹽或明膠，以達(dá)到注射組合物的延長(zhǎng)吸收；可包括高分子聚合物載體，如羥丙甲基纖維素或聚氧乙烯，以達(dá)到口服組合物的延長(zhǎng)釋放。用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的虎杖提取物劑量為5~20mg/kg，d，可以分一次或多次使用，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來(lái)決定。本發(fā)明虎杖提取物及其藥用組合物可以包括"治療有效量"或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明虎杖提取物。"治療有效量"是指在必要的劑量和時(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。虎杖提取物的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該虎杖提取物在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該虎杖提取物的有益治療效果超過(guò)其任何毒性或有害效果的量。"預(yù)防有效量"是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明虎杖提取物的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是520mg/kg，更優(yōu)選為510mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類(lèi)型和嚴(yán)重性變化，也就是說(shuō)用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的虎杖提取物劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來(lái)決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專(zhuān)業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。也就是說(shuō)，需要根據(jù)治療的對(duì)象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明虎杖提取物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動(dòng)物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述虎杖提取物的單劑量約為501200mg，優(yōu)選約100mg，優(yōu)選每日給藥13次。可以調(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時(shí)間內(nèi)給予幾個(gè)均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動(dòng)物受治療者的單元?jiǎng)┝康奈锢矸蛛x單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的計(jì)算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物虎杖提取物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該虎杖提取物的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個(gè)體敏感性虎杖提取物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。3、虎杖提取物及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護(hù)和治療血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾??；按照醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物，可以用本領(lǐng)域己知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會(huì)理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實(shí)施中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請(qǐng)專(zhuān)利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson編輯，MarcelDekker,Inc.,纟丑纟勺，1978)。本發(fā)明所述的虎杖苷或其藥物組合物中，可以含有本領(lǐng)域公知的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體和其它任選成分。載體包括羧甲基淀粉、淀粉、纖維素、明膠、碳酸氫鈉、丙二醇或吐溫80等。任選成分例如是著色劑、甜味劑、抗氧劑等。本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物，通常通過(guò)口服、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。本發(fā)明所述的虎杖苷、其衍生物或藥用鹽、組合物特別是藥物組合物可以制成任何一種適合于臨床上應(yīng)用的劑型，包括固體制劑，如膠囊、片劑、顆粒制劑等，半固體制劑如軟膏等，液體制劑如口服液、混懸劑、乳劑等，或者注射劑。采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行血管性癡呆和老年性癡呆及其直接相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療或科學(xué)研究。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實(shí)施時(shí)，本發(fā)明虎杖提取物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該虎杖提取物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述虎杖提取物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖槳或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明虎杖提取物，可能需要用防止其失活的材料對(duì)該虎杖提取物包衣或與該虎杖提取物一同給予。亦可以將補(bǔ)充的活性化合物加入該組合物中。在具體實(shí)施時(shí)，將本發(fā)明虎杖提取物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以?xún)?yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿、酊劑或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。以上藥物或藥物組合物能夠使用各種途徑，在所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是口服制劑(如片劑、包衣片劑、膠囊、溶液或混懸液等中的一種或多種)、非腸道給予劑型(如注射劑、軟膏或貼劑等中的一種或多種)等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選片劑或注射劑中的一種。此外，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等在某些情況下也能夠單獨(dú)直接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。例如，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末用于制備用于血管性癡呆癥和老年性癡呆癥預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療產(chǎn)品特別是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔料用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品尤其是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，如片劑、膠囊劑或混懸劑等中的一種或多種，優(yōu)選膠囊劑。所述的方法之一是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末灌裝為膠囊劑，方法之二是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起灌裝為膠囊劑，方法之三是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起灌裝為膠囊劑；方法之四是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔料一起按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之五是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之六是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關(guān)的輔助藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑等。除上述的六種基本方法外，還能夠選擇虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的其他形式或?qū)⒄忍崛∥锼褂玫乃幉脑线M(jìn)行本領(lǐng)域公知的方法處理后，制備各種劑型的含有虎杖提取物所使用的藥材原料的產(chǎn)品如藥物。但是，需要注意的是，在上述直接使用虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的時(shí)候，應(yīng)先根據(jù)所使用的虎杖提取物的劑量要求，換算得到所需要使用的虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的用量。綜上所述，本發(fā)明虎杖提取物及其組合物可用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。(六)技術(shù)特長(zhǎng)本發(fā)明對(duì)以二苯乙烯苷為主要成分的虎杖提取物拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來(lái)源。本發(fā)明的虎杖提取物安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來(lái)源豐富、價(jià)廉，制備工藝簡(jiǎn)單，得率高，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。本發(fā)明有針對(duì)性地研究虎杖提取物，虎杖提取物藥理作用較強(qiáng)，其使用安全，一物多用，最大限度地發(fā)揮了作用；虎杖提取物性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，更適于抗血管性癡呆癥和老年性癡呆癥產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)；預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病的效果明顯，且使用范圍特別廣，因此容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。總之，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，本發(fā)明為研究開(kāi)發(fā)新的抗血管性癡呆癥產(chǎn)品和抗老年性癡呆癥產(chǎn)品提供了新的來(lái)源，對(duì)幵發(fā)利用中國(guó)的藥用植物資源具有重要價(jià)值，是用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆癥和老年性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病等方面的安全原料。具體實(shí)施例方式本發(fā)明研究了現(xiàn)有的虎杖提取物虎杖苷的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備血管性癡呆癥和老年性癡呆癥預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療等產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用。(一)虎杖提取物虎杖苷的制備方法為進(jìn)一步闡述上述的虎杖提取物虎杖苷的提取方法，下面通過(guò)舉例來(lái)說(shuō)明。例如，本發(fā)明所說(shuō)虎杖提取物的制備方法可以為(l)提取按常規(guī)將虎杖藥材粉碎成粗粉，以10~95%乙醇滲漉提取，收集5~30倍藥材體積量滲漉液，即為提取液。或按常規(guī)將粉碎的虎杖藥材用20~95%乙醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的48倍；或?qū)⒎鬯榈幕⒄人幉挠?0~95%乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4~12倍；得提取液；將提取液過(guò)濾、濃縮，濃縮液離心或過(guò)濾；(2)分離純化提取液濃縮到濃度為0.5~10:1(藥材重量溶液體積)，即為樣品液。將樣品液通過(guò)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂吸附(非極性或弱極性大孔樹(shù)脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹(shù)脂，如D10KD201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹(shù)脂等)或MCIgelCHP20P柱層析或SephadexLH-20柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等C,C5醇類(lèi)，其濃度為10~70%，體積用量為樹(shù)脂床體積的524倍，收集低級(jí)醇洗脫液，濃縮至合適體積；進(jìn)一步用MCIgelCHP20P柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等Q~C5醇類(lèi)，其濃度為10~70%,體積用量為樹(shù)脂床體積的524倍，收集10%~50%洗脫部位，濃縮至合適體積；再進(jìn)一步用ToyopearlHW-40F柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等dC5醇類(lèi)，其濃度為1060%，體積用量為樹(shù)脂床體積的5~24倍，收集10%~30%洗脫部位，濃縮至合適體積，即為主要含有虎杖苷的虎杖提取物；再進(jìn)一步柱層析，能夠分別得到分離出的虎杖苷。(二)虎4丈提取物的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明綜合應(yīng)用質(zhì)譜(簡(jiǎn)稱(chēng)MS)、核磁共振氫譜(簡(jiǎn)稱(chēng)^-NMR)、核磁共振碳譜(簡(jiǎn)稱(chēng)13C-NMR)以及核磁共振二維譜(簡(jiǎn)稱(chēng)2D-NMR)等分析技術(shù)對(duì)虎杖提取物中的虎杖苷進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定?；⒄溶站哂腥缦吕砘再|(zhì)該化合物為白色結(jié)晶，分子式C2oH220s,MW:390;易溶于甲醇、95%乙醇、丙酮等極性較大的溶劑，微溶于水；mp.245246。C;[a]D20=+34.5°;UV(anax):217，307，302nm;IR(KBr)vmax3375，3020，2924，1606，1310，1174，1075，1019，839cm";'HNMR(400MHz,CD3COCD3)S(ppm):7.42(2H(!，/=8.6Hz,H-2',6'),7.09(1Hd,/=16.4Hz,H-(3),6.91(1Hd,</=16.4Hz,H-a),6.84(2Hd，8.7Hz，H-3',5')，6.79(1Ht，J=2Hz，H-2),6.68(1Ht，H-6)，6.51(1Ht，《/=2Hz，H-4)，4.94(1Hd，《/=7.6Hz,H-l"),3.94(1Hdd,/=11.8,2.5Hz,H-6"a),3.72(1H(1(1，/=11.8,5.9Hz，H-6"|3),3.6-3.4(4H,H-2"，3"，4",5");HRESI-MS(m/z):391.1376;光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)一致(①Nonomura，S.;Kanagawa，H.;Shin，H.;Makimoto,A.Za^/n'1963,W，988-9%;②ChenL，HanY,YangF，ZhangT.ChuX，SunAL，LiuRMPreparativeisolationandpurificationoffivecompoundsfromtheChinesemedicinalherb尸o/ygo"wmc啤油Z謡Sieb.etZucc,byhigh-speedcounter-current.J.Chromatogr.A，2005，1097:33-39)。(三)虎杖苷及其組合物的常用藥物制劑的制備方法本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖苷，加入賦形劑，加水溶解，調(diào)節(jié)pH,加入活性炭，過(guò)濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、白蛋白、pH調(diào)節(jié)劑等中的一種或幾種。每瓶含虎杖苷l(shuí)-100mg。本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖提取物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過(guò)濾除菌，噴霧干燥，無(wú)菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含虎杖提取物10~100mg。本發(fā)明制備小針劑時(shí)，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸、二甲基乙酰胺、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、環(huán)糊精、抗氧劑、金屬離子絡(luò)合劑、抑菌劑中的一種或幾種。注射劑可以配制成溶液、微乳液、乳液、脂質(zhì)體、微球、微囊或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)，其中可包括延遲吸收的藥劑，例如單硬脂酸鹽、明膠、乙烯乙酸乙酯、聚酑、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等，以達(dá)到注射組合物的延長(zhǎng)吸收。每支含虎杖苷l(shuí)~100mg。本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸、二甲基乙酰胺、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、抗氧劑、環(huán)糊精、金屬離子絡(luò)合劑、抑菌劑中的一種或幾種。每瓶含虎杖苷l(shuí)~100mg。本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備?？砂ǜ叻肿泳酆衔镙d體，如羥丙甲基纖維素或聚氧乙烯等，以達(dá)到口服組合物的延長(zhǎng)釋放。在本發(fā)明中，以上所述的具體實(shí)施方式和以下所述的實(shí)施例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來(lái)限制發(fā)明的范圍。下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。實(shí)施例l、虎杖苷的制備方法一購(gòu)自上海市藥材公司的中藥虎杖藥材10Kg，用60%的丙酮滲漉提取三遍，濃縮蒸去丙酮，沉淀，過(guò)濾，除掉大部分脂溶性物質(zhì)。剩余部分經(jīng)濃縮至適當(dāng)體積后，再加水沉淀部分脂溶性物質(zhì)，濃縮至小體積后，分次上MCIgelCHP20P柱層析，先用水洗脫以去除相當(dāng)部分的糖，后用10~60%甲醇(或者乙醇)洗脫，洗脫液合并，回收至無(wú)醇味，放置析晶，得到虎杖苷。經(jīng)理化性質(zhì)分析，波譜解析(主要是紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜)確定結(jié)構(gòu)。再用80%~100%甲醇洗脫以除去大量的大黃素-8-0^-0-葡萄糖苷等物質(zhì)，使層析柱再生。實(shí)施例2、虎杖苷的制備方法二購(gòu)自上海市藥材公司的中藥虎杖藥材10Kg，用60%的丙酮滲漉提取三遍，濃縮蒸去丙酮，沉淀，過(guò)濾，除掉大部分脂溶性物質(zhì)。剩余部分經(jīng)濃縮至適當(dāng)體積后，再加水沉淀部分脂溶性物質(zhì)，濃縮至小體積后，分次上聚酰胺柱層析，先用水洗脫，后用10-60%甲醇(或者乙醇)洗脫，洗脫液合并，回收至無(wú)醇味，放置析晶，得到虎杖苷。經(jīng)理化性質(zhì)分析，波譜解析(主要是紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜)確定結(jié)構(gòu)。再用80%-100%甲醇洗脫以除去大量的大黃素-8-0-(3-0-葡萄糖苷等物質(zhì)，使層析柱再生。實(shí)施例3、虎杖苷的制備方法三在超聲破碎下，虎杖根的干燥粉末用氯仿萃取三次，除去蒽醌，然后殘留物以類(lèi)似方式用乙醇萃取3次。合并乙醇萃取物并濃縮干燥。干燥的萃取物溶解在HsCCC(高速逆流色譜法)分離的流動(dòng)相中。HSCCC用北京新技術(shù)應(yīng)用研究所制造的GS10AZ多層盤(pán)旋行星式離心機(jī)進(jìn)行。在各分離中，盤(pán)旋柱首先完全填充上層有機(jī)固定相。然后儀器在80Orpm下旋轉(zhuǎn)，同時(shí)下層含水流動(dòng)相泵入到柱中.在流動(dòng)相前面出現(xiàn)和體系建立穩(wěn)定狀態(tài)的流體動(dòng)力平衡之后，樣品溶液經(jīng)注射閥注入。來(lái)自柱的出口的流出物用在254nm的UV檢測(cè)器連續(xù)監(jiān)控，峰級(jí)分根據(jù)色譜圖收集，獲得了98%的高純度。實(shí)施例4、虎杖苷的制備方法四購(gòu)自上海市藥材公司的中藥虎杖藥材10Kg,用60%的丙酮滲漉提取三遍，濃縮蒸去丙酮，沉淀，過(guò)濾，除掉大部分脂溶性物質(zhì)。剩余部分經(jīng)濃縮至適當(dāng)體積后，再加水沉淀部分脂溶性物質(zhì)，濃縮至小體積后，分次上大孔樹(shù)脂柱層析，先用水洗脫，后用20~50%甲醇(或者乙醇)洗脫，洗脫液合并，回收至無(wú)醇味，放置析晶，得到虎杖苷。經(jīng)理化性質(zhì)分析，波譜解析(主要是紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜)確定結(jié)構(gòu)。再用80%~100%甲醇(或者乙醇)洗脫以除去大量的大黃素-8-0-p-D-葡萄糖苷等物質(zhì)，使層析柱再生。實(shí)施例5、虎杖苷粉針劑的制備取虎杖苷10g，加入右旋糖苷30g,加1500ml注射用水，調(diào)節(jié)pH至9.0,攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實(shí)施例6、虎杖苷粉針劑的制備取虎杖苷50g，加入甘露醇60g，加5000ml注射用水，調(diào)節(jié)pH至8.0，攪拌使其溶解；加注射用水至6000ml，加lg針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實(shí)施例7、虎杖苷粉針劑的制備取虎杖苷l(shuí)g，加入葡萄糖50g，加900ml注射用水，調(diào)節(jié)pH至8.5，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實(shí)施例8、虎杖苷小針劑的制備取虎杖苷5g，加900ml注射用水，調(diào)節(jié)pH至9.0，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22nm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶10ml。實(shí)施例9、虎杖苷小針劑的制備取虎杖苷10g，加入乙醇600ml，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加0.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶5ml。實(shí)施例IO、虎杖苷葡萄糖輸液的制備取虎杖苷2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加4500ml注射用水，攪拌使其溶解；加5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；加注射用水至5000ml;用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶500ml，熱壓滅菌。實(shí)施例11、虎杖苷氯化鈉輸液的制備取虎杖苷l(shuí)g，加入氯化鈉卯g，加卯00ml注射用水，攪拌使其溶解；加10g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；加注射用水至10000ml;用0.22|Lim微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶250ml，熱壓滅菌即可。實(shí)施例12、虎4大苦片劑的制備(1)處方虎杖苷1000.0g1170.0g690.0g125.0g適量15.0g微晶纖維素預(yù)膠化淀粉乳糖5%PVP無(wú)水乙醇硬脂酸鎂共制成10000片包衣液處方胃溶薄膜衣料85G61235,上?？?lè)康包衣技術(shù)有限公司(2)制備工藝按以上處方分別稱(chēng)取處方量的主藥與輔料，按等量遞加法混合均勻，5。/。PVP無(wú)水乙醇制軟材、干燥、整粒，加入硬脂酸鎂混勻，測(cè)定含量，計(jì)算片重后壓片，控制裸片硬度57kg，共制得片劑9698片，成品率為96.98%。采用常規(guī)高效包衣鍋包衣，工藝如下將裸片(硬度57kg)放入包衣鍋中，啟動(dòng)攪拌裝置和鼓風(fēng)加熱裝置，待裸片溫度升至4(TC時(shí)，開(kāi)始打開(kāi)噴槍對(duì)準(zhǔn)片床的上1/3處噴入包衣液包衣，控制片床溫度3842'C，氣磅壓力6kg，包衣液流速為50mL/min,包衣膜重占包衣片重的3%。實(shí)施例13、虎4丈苦片劑的制備(1)處方虎杖苷乳糖淀粉羧甲基淀粉鈉10%PVP水溶液硬脂酸鎂跳Og80.0g60.0g15.0g適量3.0g共制成10000膠囊(2)制備工藝分別取原料藥虎杖苷及處方中其它輔料分別過(guò)100目篩，置6(TC烘干，稱(chēng)取處方量虎杖苷與微晶纖維素、淀粉等量遞加法混合均勻，用適量無(wú)水乙醇制軟材，30目篩制粒，506(TC干燥2小時(shí)，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉混合均勻，填充。共制成1000片(2)制備工藝取原輔料分別過(guò)80目篩，混合均勻，用適量10%PVP溶液制軟材，干燥，加入硬脂酸鎂3g，整粒，壓片，制成1000片。實(shí)施例14、虎杖苷膠囊劑的制備(1)處方苷1000.0g纖維素1000g140g乙醇適量粉80g杖晶粉水石虎微淀無(wú)滑權(quán)利要求1.虎杖苷在制備抗癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎杖苷的組合物在制備抗癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎杖苷的藥材原料在制備抗癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖苷的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎杖苷的藥材原料的組合物在制備抗癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖苷的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。7.根據(jù)權(quán)利要求16任一項(xiàng)所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗癡呆產(chǎn)品是包括抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，抗老年性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究老年性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。10.根據(jù)權(quán)利要求16任一項(xiàng)所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗癡呆產(chǎn)品是包括藥物、試劑或食品中的一種。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗癡呆產(chǎn)品是藥物。12.根據(jù)權(quán)利要求16任一項(xiàng)所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，該虎杖苷是指白藜戸醇-3-0-p-D-葡萄糖苷，結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖苷的純度》95%。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的虎杖苷的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖苷的使用方式是包括單獨(dú)使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用中的一種。全文摘要本發(fā)明涉及虎杖提取物虎杖苷的用途。經(jīng)體外研究試驗(yàn)顯示，虎杖苷對(duì)大鼠多發(fā)性梗塞性腦缺血損傷等造成的病理?yè)p傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用，能夠顯著改善癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，因而虎杖苷可用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品和抗老年性癡呆產(chǎn)品，特別是藥物；其使用方式包括單獨(dú)使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用。癡呆是影響老年人健康的主要疾病之一，特別是血管性癡呆和老年性癡呆的發(fā)病頻率顯著上升，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和生命，本發(fā)明為臨床治療老年性癡呆和血管性癡呆提供了一種新的藥物來(lái)源，對(duì)開(kāi)發(fā)利用我國(guó)的藥用植物資源具有重要價(jià)值。文檔編號(hào)A61K31/7028GK101411716SQ200810040338公開(kāi)日2009年4月22日申請(qǐng)日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日發(fā)明者丁雪鷹,姜遠(yuǎn)英,曹永兵,凱肖,藺紅偉,陳萬(wàn)生,黃金靈申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)