專利名稱：：加減玉女煎在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及口服中藥經(jīng)典復(fù)方加減玉女煎的新的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：甲狀腺功能亢進(jìn)癥，簡(jiǎn)稱"甲狀腺功能亢進(jìn)"，一般是指由于甲狀腺自身病變所引起的基礎(chǔ)代謝率(BMR)增高、自主神經(jīng)系統(tǒng)失常等一系列綜合征。甲狀腺功能亢進(jìn)癥是由于各種原因引起甲狀腺激素分泌增多，造成機(jī)體多系統(tǒng)的興奮性增高及代謝亢進(jìn)的臨床綜合征，其臨床表現(xiàn)主要有煩躁易怒、心悸多汗、易饑消瘦、手指震顫、甲狀腺腫大或眼球突出等。甲狀腺功能亢進(jìn)是現(xiàn)代社會(huì)的多發(fā)病、難治病之一，嚴(yán)重危害了現(xiàn)代人的身體健康，目前，臨床中所用抗甲狀腺藥物以硫脲類化合物為主，其作用機(jī)制為抑制甲狀腺激素的合成，臨床使用中起效較慢，療程較長(zhǎng)，且副作用多，甚至有部分患者無(wú)法耐受。隨著社會(huì)、工作壓力的增大，生活節(jié)奏的加快，甲狀腺功能亢進(jìn)的發(fā)病率明顯增加。流行病學(xué)調(diào)査發(fā)現(xiàn)，我國(guó)甲狀腺功能亢進(jìn)的總發(fā)病率竟高達(dá)3%。由于新陳代謝率增高，甲狀腺功能亢進(jìn)患者有怕熱、多汗、心慌、心率快、多食、消痩、大便次數(shù)增多等癥狀；由于交感神經(jīng)興奮性增高，還常表現(xiàn)有神經(jīng)過(guò)敏、容易激動(dòng)、手抖、失眠等。90%左右的患者伴有甲狀腺增大，部分病人還有突眼。甲狀腺功能亢進(jìn)病人的5%10%在甲狀腺功能亢進(jìn)病的基礎(chǔ)上出現(xiàn)心律失常、心臟增大、心力衰竭等一系列心臟病癥狀，出現(xiàn)甲狀腺功能亢進(jìn)性心臟病。有研究表明，甲狀腺功能亢進(jìn)患者的發(fā)病率還在繼續(xù)增加。甲狀腺功能亢進(jìn)在傳統(tǒng)中醫(yī)藥古籍中并沒(méi)有相應(yīng)的病名記載，根據(jù)其主要臨床表現(xiàn)，該病歸屬于中醫(yī)"肝火"、"癭病"等范疇。隨著現(xiàn)代對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)研究的不斷深入，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為，先天稟賦不足(素體陰虛)和情志剌激是導(dǎo)致甲狀腺功能亢進(jìn)的主要發(fā)病原因。對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)的病機(jī)，有學(xué)者強(qiáng)調(diào)該病是"以肝郁為中心，與五臟失調(diào)相關(guān)"，并認(rèn)為"痰濁瘀血之形成在于臟腑之失調(diào)，雖以肝郁為中心，但又必影響到心肺脾腎諸臟"，因此甲狀腺功能亢進(jìn)的病機(jī)特點(diǎn)屬"本虛標(biāo)實(shí)"，以"肝腎心脾虧虛"為本，"肝郁胃熱、化火生風(fēng)、痰瘀停滯"為標(biāo)。亦有學(xué)者認(rèn)為甲狀腺功能亢進(jìn)的病機(jī)重點(diǎn)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛以氣陰虧虛為主，標(biāo)實(shí)為燥熱、痰濁及瘀血為主。發(fā)病初期多以心肝火郁(旺)，燥熱熾盛，陰津灼傷為主；病久則以氣陰兩傷，陰虛火旺為主要特點(diǎn)。盡管各家眾說(shuō)紛紜，但甲狀腺功能亢進(jìn)之病機(jī)總離不開(kāi)"本虛標(biāo)實(shí)"之癥結(jié)所在，本虛總以陰虛為其最根本立足點(diǎn)，標(biāo)實(shí)則以氣結(jié)、郁火、痰濁、瘀血為主。中醫(yī)在臨床治療中則多從病機(jī)出發(fā)，標(biāo)本兼顧，采用益氣養(yǎng)陰、理氣、化痰、活血等治療方法。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，許多單味中藥如龜版、龍膽草、知母、生地等都具有一定降低甲狀腺功能亢進(jìn)動(dòng)物模型升高的T3、L的作用，并可緩解因甲狀腺功能亢進(jìn)所引起的各種癥狀。更多的學(xué)者則從復(fù)方中藥出發(fā)，將臨床中行之有效的復(fù)方，如復(fù)方甲狀腺功能亢進(jìn)膠囊、消癭顆粒劑、亢心寧膠囊等，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，探討其對(duì)實(shí)驗(yàn)性甲狀腺功能亢進(jìn)動(dòng)物模型的藥效，以便為甲狀腺功能亢進(jìn)治療提供一些新的依據(jù)。更有學(xué)者從甲狀腺功能亢進(jìn)患者的陰虛火旺體質(zhì)出發(fā)，研究其陰虛火旺證的實(shí)質(zhì)所在，認(rèn)為甲狀腺功能亢進(jìn)陰虛火旺與交感一腎上腺髓質(zhì)功能、cAMP和胃泌素水平及免疫系統(tǒng)、微量元素、血流動(dòng)力學(xué)等都有密切關(guān)系，從而為甲狀腺功能亢進(jìn)的中醫(yī)分型治療及中藥抗甲狀腺功能亢進(jìn)的機(jī)制研究提供了思路。加減玉女煎乃清代名醫(yī)吳鞠通所著《溫病條辨》中的一張名方，全方由石膏、知母、玄參、生地、麥冬五味藥組成，功能清氣涼血、滋陰潤(rùn)燥，可用于治療太陰溫病之口渴、脈數(shù)等癥。該方是從《景岳全書(shū)》之玉女煎化裁而成，又名玉女煎去牛膝熟地加生地玄參方，全方以石膏之辛涼清熱，合知母、生地、麥冬之甘寒滋陰，又加玄參之涼血解毒，共奏滋陰、清熱、解毒、涼血之效。石膏，味辛甘，性大寒，歸肺、胃經(jīng)，功能清熱瀉火、除煩止渴、收斂生肌。《別錄》謂.."除時(shí)氣頭痛身熱，三焦大熱，皮膚熱，腸胃中膈熱……"為臨床常用之清熱瀉火要藥?，F(xiàn)代藥理研究表明，生石膏對(duì)發(fā)熱具有明顯的解熱效果，并可減輕發(fā)熱所引起的口渴狀態(tài)。知母，味苦甘，性寒，歸肺、胃、腎經(jīng)，功能清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥。《本經(jīng)》云"主消渴熱中，除邪氣，肢體浮腫，下水，補(bǔ)不足，益氣。"現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明，知母主要成分菝葜皂苷元能使甲狀腺素所致大鼠升高的肝、腎、小腸粘膜^+-1(+47酶恢復(fù)正常水平，從而使產(chǎn)熱減少，實(shí)現(xiàn)解熱作用。另有相關(guān)報(bào)道，甲狀腺功能亢進(jìn)模型e受體一cAMP系統(tǒng)對(duì)P受體激動(dòng)劑異丙腎上腺素的反應(yīng)性顯著增強(qiáng)，腎臟P受體最大結(jié)合容量也顯著增加，知母水提液能使兩者降至正常水平，但對(duì)3受體的親和力無(wú)影響，而且，知母還可降低甲狀腺功能亢進(jìn)模型動(dòng)物的耗氧量。玄參，味苦甘咸，性寒，歸肺、胃、腎經(jīng)，功能清熱涼血、滋陰解毒。《別錄》載"下水，止煩渴，散頸下核，癰腫。"現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，玄參能夠增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)小鼠的耐缺氧能力，同時(shí)，其對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)亦有一定的抑制作用。生地，味甘苦，性寒，歸心、肝、肺經(jīng)，功能清熱涼血、養(yǎng)陰生津。《珍珠囊》有云"涼血，生血，補(bǔ)腎水真陰。"現(xiàn)代藥理研究實(shí)驗(yàn)表明，鮮地黃汁、鮮地黃水煎液能使甲狀腺素誘發(fā)的類陰虛小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)能力明顯增強(qiáng)，還可以增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提示其對(duì)B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞功能有促進(jìn)作用。麥冬，味甘微苦，性微寒，歸心、肺、腎經(jīng)，功能養(yǎng)陰潤(rùn)肺、益胃生津、清心除煩?！秳e錄》載"療虛勞客熱，口干燥渴。"現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究表明，用山麥冬水煎醇沉法制備的注射液對(duì)小鼠進(jìn)行耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，在常壓下小鼠耐缺氧時(shí)間分別延長(zhǎng)15.4%和31.7%;在減壓下，小鼠存活時(shí)間亦顯著延長(zhǎng)。文獻(xiàn)中未見(jiàn)加減玉女煎具有防治甲狀腺功能亢進(jìn)的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提出經(jīng)典方加減玉女煎在制藥中的新用途。本發(fā)明涉及加減玉女煎在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)的藥物中的甩途。本發(fā)明還涉及加減玉女煎在制備治療與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物中的用途。本發(fā)明以經(jīng)典古方加減玉女煎為對(duì)象，采用國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界已廣泛應(yīng)用的皮下注射左旋甲狀腺素鈉造模及觀察吸碘率和促甲狀腺素實(shí)驗(yàn)等方法、及可靠的藥效學(xué)檢測(cè)手段，按本領(lǐng)域公知技術(shù)，小鼠皮下注射甲狀腺素鈉350ug/kg/d。造模與給藥同時(shí)進(jìn)行，每日1次。連續(xù)給藥8d，觀察加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率、自發(fā)活動(dòng)的影響，連續(xù)給藥lld，觀察吸1251率的變化，連續(xù)給藥12d，觀察耗氧量，T3、T4的變化，肌肉注射促甲狀腺激素(促甲狀腺激素)IIU測(cè)量吸碘率。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)口服加減玉女煎顆粒劑可緩解甲狀腺功能亢進(jìn)模型動(dòng)物體重減輕癥狀，減慢其心率，降低心臟重量指數(shù)，并能減少模型動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)，降低耗氧量，降低模型動(dòng)物體內(nèi)血清T3、T4水平。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示加減玉女煎能夠緩解甲狀腺功能亢進(jìn)癥的臨床癥狀，如煩躁多動(dòng)、心率加快、代謝增加、體重減輕等，與模型組比較，陽(yáng)性藥他巴唑組和加減玉女煎小鼠體重明顯高于模型組(代0.05);心臟重量指數(shù)，心率、自發(fā)活動(dòng)，耗氧量，血清T3、T,水平顯著性降低(代0.05)，進(jìn)而產(chǎn)生改善甲狀腺功能亢進(jìn)的作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)加減玉女煎對(duì)實(shí)驗(yàn)性甲狀腺功能亢進(jìn)癥具有明顯的抑制作用，能夠明顯改善甲狀腺功能亢進(jìn)動(dòng)物模型的癥狀表現(xiàn)，并能顯著降低甲狀腺功能亢進(jìn)模型動(dòng)物體內(nèi)的甲狀腺素水平。其作用機(jī)制可能主要是通過(guò)拮抗甲狀腺激素的作用或抑制甲狀腺激素的釋放，從而改善甲狀腺功能亢進(jìn)癥的各種臨床表現(xiàn)，降低甲狀腺激素水平。因此，加減玉女煎在甲狀腺功能亢進(jìn)的治療機(jī)制上可與現(xiàn)有化學(xué)藥物互相補(bǔ)充，在臨床應(yīng)用中可與化學(xué)藥物互相協(xié)同，以減少化學(xué)藥物的用量，同時(shí)對(duì)無(wú)法耐受化學(xué)藥物不良反應(yīng)的患者，亦可能成為有價(jià)值的替代治療手段。因此，本發(fā)明為治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥、與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的中藥新藥開(kāi)發(fā)提供了新的有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。另外，加減玉女煎方中的五味中藥均價(jià)廉、易得，未見(jiàn)明顯急性毒性。知母總皂苷作為加減玉女煎中的有效成分之一，在一定劑量范圍內(nèi)，亦具有一定程度的抗甲狀腺功能亢進(jìn)作用，如可緩解甲狀腺功能亢進(jìn)動(dòng)物體重減輕的癥狀，減慢心率，減少自發(fā)活動(dòng)等。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例11.加減玉女煎抗甲狀腺功能亢進(jìn)作用的實(shí)驗(yàn)研究1.1實(shí)驗(yàn)藥物的制備加減玉女煎組成及成人每日劑量生石膏30g，知母12g，玄參12g，生地黃18g，麥門冬18g。中藥飲片購(gòu)自上海養(yǎng)和堂藥業(yè)有限公司。本實(shí)施例實(shí)驗(yàn)所用藥物為加減玉女煎水煎劑經(jīng)過(guò)濃縮、真空干燥等處理后的顆粒劑，該顆粒劑由上海中醫(yī)藥大學(xué)科技實(shí)驗(yàn)中心制備提供，lg顆粒劑中約含有2.7g生藥。1.2其他藥品他巴唑片，北京太洋藥業(yè)有限公司，批號(hào)060501。左旋甲狀腺素鈉(L-ThyroxineSodiumsalt),美國(guó)sigma公司，批號(hào)WA13381。1.3試劑碘[1251]三碘甲腺原氨酸(T3)放射免疫分析藥盒；碘[1251]甲狀腺素(T4)放射免疫分析藥盒，均購(gòu)于北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。Na^I溶液，上海中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室。促甲狀腺激素(ThyrotropichormonefromBovinePituitary),美國(guó)sigma公司，批號(hào)027K0726。2.實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備ECG-92C心電圖機(jī)，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司。SN-682放射免疫y計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)院上海原子核研究所日環(huán)儀器廠。YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站。小鼠心電感應(yīng)盒，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)教研室提供。CY-3測(cè)氧儀，上海華光儀器儀表廠。3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠，2030克，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK(滬)2007—0005。4.實(shí)驗(yàn)方法4.1動(dòng)物分組取小鼠(雌雄各半)72只，體重2030g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥(他巴唑)組、加減玉女煎低劑量組、加減玉女煎中劑量組和加減玉女煎高劑量組6組，每組12只。4.2造模及給藥方法造模除空白對(duì)照組外，其余各組每日皮下注射甲狀腺素鈉350ug/kg體重?？瞻讓?duì)照組按體重注射同樣劑量的生理鹽水。給藥灌胃給予他巴唑組10mg/kg/d加減玉女煎低2.17g/kg、中4.33g/kg、高8.66g/kg，模型和空白給予等體積的生理鹽水。4.3指標(biāo)測(cè)定及方法4.3.1加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠外觀行為的影響實(shí)驗(yàn)期間全程觀察并記錄小鼠的整體情況，包括小鼠的精神狀態(tài)、毛色變化、行為活動(dòng)等。4.3.2加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠體重的影響實(shí)驗(yàn)前測(cè)量并記錄各組小鼠的體重，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隔日測(cè)量并記錄小鼠體重l次，造模及給藥，連續(xù)12天，于末次造模、給藥后，禁食不禁水12h，測(cè)量并記錄各組小鼠體重，計(jì)算最后一次測(cè)量的體重值與實(shí)驗(yàn)前測(cè)量的體重值之間的差值。4.3.3加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心臟重量指數(shù)的影響造模及給藥，連續(xù)9天，于末次造模、給藥后，禁食不禁水12h，測(cè)量并記錄各組小鼠體重，取其心臟，記錄各組小鼠心臟的重量，計(jì)算心臟指數(shù)。4.3.4加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率的影響造模、給藥，連續(xù)8天，于末次造模、給藥后3h左右，在小鼠清醒狀態(tài)下，將小鼠置于心電感應(yīng)盒中，同時(shí)感應(yīng)盒連接心電圖儀，用心電圖儀描記II導(dǎo)聯(lián)心電圖。4.3.5加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響[1]造模、給藥，連續(xù)8天，于末次給藥、造模后60min，將小鼠置于小動(dòng)物自主活動(dòng)測(cè)定儀中，適應(yīng)5min，記錄此后IOmin內(nèi)小鼠自主活動(dòng)的次數(shù)。4.3.6加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠耗氧量的影響取雌性、雄性小鼠各60只，分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥組、加減玉女煎低、加減玉女煎中和加減玉女煎高6組，每組10只。造模、給藥，連續(xù)12天，于末次造模、給藥后3h左右將小鼠密閉于500ml瓶中，測(cè)定并記錄雌性小鼠30min，雄性小鼠20min后瓶?jī)?nèi)氧含量，比較各組小鼠的耗氧量的關(guān)巳左升o4.3.7加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠血清T3、L的影響造模、給藥，連續(xù)12天，于末次造模、給藥后，禁食不禁水12h，眼球取血，采用RIA法測(cè)定血清中的T3、L含量。4.3.8加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠吸1251率的影響造模、給藥，連續(xù)11天，末次給藥后lh開(kāi)始給所有動(dòng)物腹腔注射Na12510.1uCi/10g體重(雌性小鼠平均體重約30g，故每只注射0.3uCi;雄性小鼠平均體重約40g，故每只注射0.4"Ci)，24h后，處死動(dòng)物，剝離、摘出整個(gè)甲狀腺，用SN-682放射免疫Y計(jì)數(shù)器，測(cè)定其放射性，同時(shí)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)源1251的放射性，計(jì)算得出甲狀腺吸1251率。4.3.9促甲狀腺激素實(shí)驗(yàn)取小鼠(雌雄各半)30只，分為模型組、加減玉女煎高劑量一組、加減玉女煎高劑量二組，每組10只。每日皮下注射甲狀腺素鈉350yg/kg體重，高劑量一組和二組均灌胃加減玉女煎8.66g/kg，模型組給予蒸餾水。按上述方法造模、給藥9日后，于第10日，給加減玉女煎高劑量二組動(dòng)物肌肉注射促甲狀腺激素1IU，另外兩組則分別肌注等容積的生理鹽水。24h后，腹腔注射Na1251，再24h后，處死動(dòng)物，計(jì)算吸碘率。5.統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)采用"均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(^士S)"表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.1加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠外觀行為的影響實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，空白對(duì)照組小鼠精神狀況、活動(dòng)情況、毛色光澤均未見(jiàn)異常。模型組小鼠造模第4天開(kāi)始出現(xiàn)煩躁不安、易激怒，與空白對(duì)照組小鼠比較有明顯毛色枯槁現(xiàn)象。治療組小鼠亦有輕微毛色枯槁現(xiàn)象，但較模型組癥狀輕，而加減玉女煎給藥組較模型組小鼠比較，其表現(xiàn)出一定程度的安靜狀態(tài)，尤其是高劑量組小鼠表現(xiàn)更加明顯。6.2加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠體重的影響治療前(給藥、造模前)，各組小鼠體重比較無(wú)顯著性差異(》0.05)。治療后，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠體重明顯低于空白對(duì)照組，兩者有極其顯著性差異(代0.01);與模型組相比，陽(yáng)性藥他巴唑組和加減玉女煎高劑量組小鼠體重明顯高于模型組，其差異亦有顯著性(代0.05)。治療后一治療前體重進(jìn)行各組間比較。與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠體重增加明顯低于空白對(duì)照組，兩者比較有極其顯著性差異(代0.01);與模型組相比，他巴唑組和加減玉女煎中、高劑量組小鼠體重增加明顯高于模型組，其差異亦有顯著性(代0.05)。(見(jiàn)表2-1)表2—1加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠體重的影響(3f±S)組另'JiJlII治療前(g)治療后(g)~~治療后-治療前(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與空白對(duì)照組相比，抑代0.01;與模型組相比，05，▲▲/<().016.3加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心臟重量指數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠心臟指數(shù)明顯增高，兩者有極其顯著性差異(代O.OOl)。與模型組相比，加減玉女煎中劑量組小鼠心臟指數(shù)明顯降低，兩者有顯著性差異(代O.05);加減玉女煎高劑量組小鼠心臟指數(shù)亦明顯降低，與模型組之間差異性極其顯著(代O.01)。(見(jiàn)表2-2)表2-2加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠心臟重量指數(shù)的影響U±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與空白對(duì)照組相比，tt雜P〈0.001;與模型組相比，AP〈0.05，▲▲<().01，▲▲▲<().0016.4加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠心率明顯加快，兩者有顯著性差異(代0.05)。與模型組相比，加減玉女煎低、中、高劑量組小鼠心率明顯減慢，兩者亦有顯著性差異(代0.05)。(見(jiàn)表2-3)表2-3加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠心率的影響(7土S)組別例數(shù)劑量(g/kg)心率(次/min)空白組10_682,50±116.42血模型組10一794.50±47.84*他巴唑組100.01763.50±40.53低劑量組102.17736.90±66.57A中劑量組104.33742.10±62.32A高劑量組108.66715.80±102.82A注與空白對(duì)照組相比，#P<0.05;與模型組相比，AP〈0.056.5加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠自發(fā)活動(dòng)明顯增多，兩者有顯著性差異(代0.05)。與模型組相比，加減玉女煎中、高劑量組及陽(yáng)性藥他巴唑組小鼠自發(fā)活動(dòng)明顯減少，兩者亦有顯著性差異(代O.05)。(見(jiàn)表2-4)表2-4加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響(3f±S)組別例數(shù)劑量(g/kg)自發(fā)活動(dòng)(10min)空白組10一113.60±73.0"模型組9一180.56±53.04*他巴唑組90.01126.00±45.67A低劑量組102.17142.30±66.29中劑量組104.33123.60±57.47A高劑量組98.66119.11土65.8"注與空白對(duì)照組相比，ttP〈0.05;與模型組相比，AP〈0.056.6加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠耗氧量的影響(1)與空白對(duì)照組比較，雌性小鼠模型組耗氧量明顯增高，兩者有極其顯著性差異(代o.ooi)。與模型組相比，雌性小鼠加減玉女煎中劑量組耗氧量明顯降低，兩者有顯著性差異(代0.05);他巴哇組、加減玉女煎高劑量組耗氧量亦明顯降低，與模型組之間差異性極其顯著(代O.Ol)。(見(jiàn)表2-5-1)(2)與空白對(duì)照組比較，雄性小鼠模型組耗氧量明顯增高，兩者有極其顯著性差異(代O.Ol)。與模型組相比，雄性小鼠加減玉女煎中劑量組耗氧量明顯降低，兩者有顯著性差異(代0.05);他巴唑組、加減玉女煎高劑量組耗氧量亦明顯降低，與模型組之間差異性極其顯著(代O.Ol)。(見(jiàn)表2-5-2)表2-5-1加減玉女煎對(duì)雌性甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠耗氧量的影響(3f±S)組別例數(shù)劑量(g/kg)瓶?jī)?nèi)氧含量(％，30min后)空白組10_14.03±0.88血"模型組10_12.20±0.88鵬他巴唑組100.0113.62±0.90"低劑量組102.1712.28±0.82中劑量組104.3313.35±1.03^高劑量組108.6613.75土0.97"注與空白對(duì)照組相比，,P<0.001;與模型組相比，APU5，▲▲<().01，▲▲▲<().001表2-5-2加減玉女煎對(duì)雄性甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠耗氧量的影響(3f±S)組別例數(shù)劑量(g/kg)瓶?jī)?nèi)氧含量(％，20min)空白組1015.80±0.67"模型組1014.93±0爭(zhēng)49站他巴唑組10().0115.95±0.94"低劑量組102.1715.30±0.54中劑量組84.3315.63±0.70A高劑量組108.6615.65±0.57"注與空白對(duì)照組相比，抑P〈0.01;與模型組相比，AP〈0.05，016.7加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠血清T3、L的影響(1)與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清T3水平明顯增高，兩者有極其顯著性差異(代O.OOl)。與模型組相比，加減玉女煎中、高劑量組及他巴唑組血清T3水平亦明顯降低，兩者有極其顯著性差異(代O.Ol)。(見(jiàn)表2-6-1)(2)與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清T4水平明顯增高，兩者有極其顯著性差異(代O.OOl)。與模型組相比，加減玉女煎中劑量組血清L水平明顯降低，兩者有顯著性差異(代0.05);他巴唑組、加減玉女煎高劑量組血清L水平亦明顯降低，與模型組之間差異性極其顯著(代0.01)。(見(jiàn)表2-6-2)表2-6-1加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠T3的影響(i±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與空白對(duì)照組相比，tt抑P〈0.001;與模型組相比，▲▲<().01,▲▲▲<().001表2-6-2加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠T4的影響(i±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與空白對(duì)照組相比，糊ttP〈0.001;與模型組相比，AP〈0.05，▲▲<().01,▲▲▲<().0016.8加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠吸1251率的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠吸1251率明顯降低，兩者有極其顯著性差異(代O.OOl)。與模型組相比，他巴唑組小鼠吸1251率降低更加明顯，兩者有極其顯著性差異(代O.001);而加減玉女煎各給藥組其吸"51率與模型組比較，亦有一定程度的降低，但它們之間的差異不具有顯著性意義。(見(jiàn)表2-7)表2-7加減玉女煎對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠吸1251率的影響U±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>他巴嘩組100.01l.OO士O.62Ai低劑量組102.173.68±2.35中劑量組104.334.61±1.30高劑量組108.664.07±1.51注與空白對(duì)照組相比，抑ftP〈0.001;與模型組相比，▲▲▲<().00~~6.9促甲狀腺激素實(shí)驗(yàn)高劑量一組與模型對(duì)照組相比，其吸1251率有一定程度的降低，但其差異不具有顯著性(/M).157);高劑量二組與高劑量一組相比，其吸'251率顯著性升高，兩者之間有顯著性差異(代O.Ol)。(見(jiàn)表2-8)表2--8促甲狀腺激素實(shí)驗(yàn)(3f±S)組別例數(shù)促甲狀腺激素劑量(g/kg)加)吸碘率(％)模型對(duì)照組10_—5.05±1.44高劑量一組108.66—4.07±1.51高劑量二組98.6619.17±4.38**注與高劑量一組相比，**P<0.01實(shí)施例2知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究。1.藥品與試劑1.1藥品知母總皂苷，純度>50%，由上海第二軍醫(yī)大學(xué)藥理教研室提供。他巴唑片，北京太洋藥業(yè)有限公司，批號(hào)060501。左旋甲狀腺素鈉(L-ThyroxineSodiumsalt),美國(guó)sigma公司，批號(hào)WA1338L1.2試劑L放射免疫分析藥盒，解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心，批號(hào)20070330。2.實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備ECG-92C心電圖機(jī)，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司。SN-682放射免疫y計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)院上海原子核研究所日環(huán)儀器廠。YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站。小鼠心電感應(yīng)盒，由上海中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)教研室提供。3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠，2030克，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK(滬)2007—0005。4.實(shí)驗(yàn)方法4.1動(dòng)物分組取KM(雌雄各半)60只，體重2030g，分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥(他巴唑)組、知母總皂苷低劑量組、知母總皂苷中劑量組和知母總皂苷高劑量組6組，每組10只。4.2造模及給藥方法造模除空白對(duì)照組外，其余各組每日皮下注射甲狀腺素鈉350ug/kg體重?？瞻讓?duì)照組按體重注射同樣劑量的生理鹽水。給藥灌胃給予他巴唑組按10mg/kg/d，知母皂苷低、中、高劑量組每日分別按50mg/kg/d體重、100mg/kg/d體重、200mg/kg/d，空白對(duì)照組和模型組給予蒸餾水。4.3指標(biāo)測(cè)定及方法4.3.1知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠外觀行為的影響實(shí)驗(yàn)期間全程觀察并記錄小鼠的整體情況，包括小鼠的精神狀態(tài)、毛色變化、行為活動(dòng)等。4.3.2知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠體重的影響實(shí)驗(yàn)前測(cè)量并記錄各組小鼠的體重，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隔日測(cè)量并記錄小鼠體重l次，造模、給藥，每日l(shuí)次，連續(xù)9天，末次造模、給藥后，于次日早晨測(cè)量并記錄各組小鼠體重，然后計(jì)算最后一次測(cè)量的體重值與實(shí)驗(yàn)前測(cè)量的體重值之間的差值。4.3.3知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率的影響造模、給藥，連續(xù)11天，于末次造模、給藥后，在小鼠清醒狀態(tài)，將小鼠置于心電感應(yīng)盒中，同時(shí)感應(yīng)盒連接心電圖儀，用心電圖儀描記II導(dǎo)聯(lián)心電圖，然后通過(guò)心電圖計(jì)算各組小鼠心率。4.3.4知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響[1]造模、給藥，連續(xù)7天，于末次給藥、造模后60min，將各組小鼠置于小動(dòng)物自主活動(dòng)測(cè)定儀中，首先適應(yīng)性放置5min，然后開(kāi)始記錄IOmin內(nèi)小鼠自主活動(dòng)的次數(shù)。4.3.5知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠血清L的影響造模、給藥，連續(xù)11天，于末次造模、給藥后，禁食不禁水12h，眼球取血，3000r/min離心10min，留取血清，采用放射免疫分析(RIA)法測(cè)定血清中的L含量。5.統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)采用"均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(^士S)"表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.1知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠外觀行為的影響實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，空白對(duì)照組小鼠精神狀況、活動(dòng)情況、毛色光澤均未見(jiàn)異常。模型組小鼠造模第4天開(kāi)始出現(xiàn)煩躁不安、易激怒，與空白對(duì)照組小鼠比較毛色枯槁現(xiàn)象明顯，而知母皂苷用藥組與模型組小鼠比較，其煩躁不安等精神活動(dòng)變化明顯減輕。6.2知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠體重的影響與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠體重增加明顯低于空白對(duì)照組，兩者比較有顯著性差異(代0.05)。與模型組相比，陽(yáng)性藥他巴唑組和知母皂苷低、中劑量組小鼠體重增加明顯高于模型組，其差異亦有顯著性(代0.05)。說(shuō)明模型組小鼠體重明顯降低，而他巴唑與知母皂苷低、中劑量能使甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠體重的降低有所緩解。(見(jiàn)表1-1)表l一l知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠體重的影響(3f±S)組別例數(shù)(mg/kg)治療前(g)治療后(g)治療后-治療前(g)空白組10—23.25±2.2725.77±3.022.52±1.12A模型組1023.28±1.7824.76±2.431.48±0.91s他巴唑組10l()23.28±1.8926.00±3.322.72±1.56^低劑量組105022.94±2.0425.75±2.882.81±1.44A中劑量組910023.41±1.7426.42±3.142.81±1.69A高劑量組1020023.44±1.5925.95±2.392.51±1.34注與空白對(duì)照組相比，tt代0.05;與模型組相比，▲,<().056.3知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠心率明顯加快，兩者有顯著性差異(代0.05)。與模型組相比，知母皂苷中劑量組小鼠心率明顯減慢，兩者亦有顯著性差異(代0.05)。提示甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠心率明顯加快，而中劑量知母皂苷可以在一定程度上緩解甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠心率加快的癥狀。(見(jiàn)表1-2)表l一2知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠心率的影響(3f±S)組別例數(shù)劑量t(mg/kg)心率(次/min)空白組10—654.80±125.54A模型組10_752.40±67.42#他巴唑組1010741.90±67.94低劑量組1050717.60±60.82中劑量組10100665.70±82.2"高劑量組10200675.30±117.46注與空白對(duì)照組相比，ttP〈0.05;與模型組相比，AP〈0.056.4知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠自發(fā)活動(dòng)明顯增多，兩者有顯著性差異(代0.05)。與模型組相比，知母皂苷中劑量組小鼠其自發(fā)活動(dòng)明顯減少，兩者亦有顯著性差異(代0.05)。說(shuō)明模型組小鼠其自發(fā)活動(dòng)明顯增加，而中劑量知母皂苷可使其自發(fā)活動(dòng)明顯減少，提示知母皂苷中劑量可能具有改善甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠躁動(dòng)不安等臨床表現(xiàn)的作用。(見(jiàn)表卜3)表l一3知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響(3f±S)組別例數(shù)劑量t(mg/kg)自發(fā)活動(dòng)(10min)空白組10—87.30±28.11A模型組10—125.20±41.17*他巴嘩組101089.10±62.52低劑量組1050100.2±56.49中劑量組910074.67±44.67A高劑量組1020088.40±48.41注與空白對(duì)照組相比，ttP〈0.05;與模型組相比，AP〈0.056.5知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠血清L的影響與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠血清L水平顯著升高，兩者有極其顯著性差異(代O.OOl)。與模型組相比，陽(yáng)性藥他巴唑組和知母皂苷中劑量組小鼠血清T,水平明顯降低，其差異有顯著性(代0.05)。提示甲狀腺功能亢進(jìn)模型小鼠其血清T4水平顯著升高，陽(yáng)性藥他巴唑和中劑量知母皂苷可降低甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠的T4水平。(見(jiàn)表l-4)表1一4知母總皂苷對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)小鼠血清T4的影響(3f土S)組別例數(shù)劑量t(mg/kg)T4(ng/ml)空白組1051.55±13.6""模型組10197.20±32.08,他巴唑組9l()159.68±37.23A低劑量組1050168.69±30.42中劑量組10100150.06±42.18A高劑量組9200195.94±40.58注與空白對(duì)照組相比，###P<0.05;與模型組相比，▲▲▲<().001;AP〈0.0權(quán)利要求1、加減玉女煎在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物中的應(yīng)用。2、加減玉女煎在制備治療與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物中的應(yīng)用。3、知母總皂苷在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物中的應(yīng)用。4、知母總皂苷在制備治療與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了加減玉女煎在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物中的應(yīng)用；本發(fā)明還公開(kāi)了加減玉女煎在制備治療與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物中的應(yīng)用。加減玉女煎在甲狀腺功能亢進(jìn)的治療機(jī)制上可與現(xiàn)有化學(xué)藥物互相補(bǔ)充，在臨床應(yīng)用中可與化學(xué)藥物互相協(xié)同，以減少化學(xué)藥物的用量，同時(shí)對(duì)無(wú)法耐受化學(xué)藥物不良反應(yīng)的患者，亦可能成為有價(jià)值的替代治療手段。本發(fā)明為治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥、與甲狀腺功能亢進(jìn)癥相關(guān)的甲亢性心臟病的中藥新藥開(kāi)發(fā)提供了新的有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。文檔編號(hào)A61K36/8968GK101623432SQ20081004360公開(kāi)日2010年1月13日申請(qǐng)日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日發(fā)明者欣李,娟郭,金若敏,陳長(zhǎng)勛申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)